CN117015379A - 用于治疗癫痫发作病症的联合疗法 - Google Patents

用于治疗癫痫发作病症的联合疗法 Download PDF

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Abstract

在某些实施方案中，本公开涉及用于治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法和用途，其中这些方法和用途包括以联合施用时的治疗有效量向该人联合施用N‑[4‑(6‑氟‑3,4‑二氢‑1H‑异喹啉‑2‑基)‑2,6‑二甲基苯基]‑3,3‑二甲基丁酰胺(化合物A)和抗癫痫药物(ASM)。本公开进一步涉及化合物A的各种改善的疗法和施用方法。

Description

用于治疗癫痫发作病症的联合疗法
1.背景技术
癫痫是一种常见的神经病症，全世界估计患病率为人群的0.7％(即约5000万人)(参见Hirtz,D.等人，Neurology，2007年，第68卷：第326-337页)。其特征在于脑中异常电活动导致癫痫发作。出于流行病学的目的，该定义要求任何类型的无端癫痫发作不止一次。
与普通人群相比，癫痫患者的死亡风险增加，这主要是由于疾病的病因学。然而，在患有不受控制的癫痫的患者中，癫痫发作相关的最大死亡风险是由于癫痫的突然意外死亡(SUDEP)(参见，Hitiris,N.等人，Epilepsy and Behavior，2007年，第10卷：第363-376页)。参与研究性抗癫痫药物(ASM)临床试验的患者通常患有癫痫超过10年，并且多次ASM治疗失败。
大多数形式的癫痫的病理生理学仍然知之甚少，但是已知癫痫发作是由一组神经元的过度同步和持续的激发引起的。神经元兴奋性的持续增加是所有癫痫综合征的共有情况。治疗癫痫的治疗策略涉及通过各种机械途径降低神经元兴奋性。在过去的二十年中，开发了几种新的ASM并上市，以通过靶向不同的作用机制来扩展治疗谱，并改善风险/收益状况。目前可用的ASM被认为是通过抑制突触小泡糖蛋白、增强抑制性GABA能神经传递、减少谷氨酸介导的兴奋性神经传递或抑制电压门控钠或钙通道来发挥作用。尽管如此，仍有高达30％的患者对常规治疗是难治性的，并且继续具有不受控制的癫痫发作(参见Brown,D.A.等人，Nature，1980年，第283卷：第673-676页，以及Elger,C.E.等人，EpilepsyBehav.，2008年，第12卷：第501-539页)。难治性患者的生活质量差；他们不能驾驶汽车，并且他们难以独立工作或生活。另外，许多患者有行为、神经和/或智力障碍，这是他们癫痫发作病症的后遗症。目前的试剂对神经元钾门控通道的作用很小，甚至没有作用，尽管这些通道在控制神经元兴奋性方面发挥着重要作用。因此，需要具有新型作用机制的药物，或改善已经上市的ASM的药物，以解决患有治疗抗性癫痫的患者对癫痫发作控制的显著未满足的临床需求。
电压门控钾通道Kv7.2和Kv7.3(Kv7.2/Kv7.3)在控制神经元兴奋性中很重要。Kv7.2/Kv7.3是神经元“M-电流”的基础，根据其最初的特征命名为对毒蕈碱/胆碱能激动剂响应减少的神经元电流(参见Brown,D.A.等人，Nature，1980年，第283卷：第673-676页)。M-电流是已知作为神经元过度兴奋的制动器的非失活的超极化电流。因此，Kv7.2介导的M-电流的降低，例如通过遗传功能丧失，可导致神经元去极化以及膜和神经元兴奋性的增加，这可导致表现为癫痫发作的动作电位爆发。相反，Kv7.2介导的M-电流的增加可使细胞膜超极化，从而降低神经元兴奋性并防止动作电位爆发的起始和传播以及由此引起的癫痫发作。增强神经元中Kv7.2/Kv7.3通道的开放状态有利于超极化静息状态，这降低了快速动作电位尖峰(即，爆发放电)。这种增强可对可兴奋、特别是过度兴奋的神经元提供稳定作用，因此可用于治疗某些癫痫发作病症。这种增强在临床上已被证明可有效治疗癫痫发作病症，诸如用瑞替加滨(ezogabine，一种已知的Kv7.2/Kv7.3开放剂)治疗患有癫痫的成人的部分发作性癫痫发作。
尽管在该领域中，特别是在如下定义的化合物A及其在治疗癫痫发作病症中的用途方面已经取得了显著的进展，但仍非常需要为患者提供治疗癫痫发作病症的进一步选择。
2.发明内容
本公开描述了小分子N-[4-(6-氟-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基)-2,6-二甲基苯基]-3,3-二甲基丁酰胺(本文称为“化合物A”)的某些方法和用途。
在一个实施方案中，本公开涉及治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法，该方法包括以当联合施用时治疗有效的量向人联合施用化合物A和ASM。同样，在一些实施方案中，本公开涉及化合物A和ASM以当联合施用时是治疗有效的量在治疗有需要的人的癫痫发作病症中的用途。
在另一个实施方案中，本公开涉及减少ASM在患有癫痫发作病症的人中发挥疗效所需的量的方法，该方法包括联合ASM一起向人施用当与ASM一起施用时有效实现这种减少的量的化合物A。同样，在一些实施方案中，本公开涉及化合物A在减少ASM在患有癫痫发作病症的人中发挥疗效所需的量中的用途，诸如通过联合ASM一起向人施用当与ASM一起施用时有效实现这种减少的量的化合物A。在这些实施方案的某些情况下，ASM是丙戊酸、左乙拉西坦、苯妥英、拉科酰胺、苯巴那酯或它们的组合，特别是丙戊酸。
在一个实施方案中，本公开涉及减少化合物A在患有癫痫发作病症的人中发挥疗效所需的量的方法，该方法包括联合化合物A一起向人施用当与化合物A一起施用时有效实现这种减少的量的ASM。同样，在一些实施方案中，本公开涉及ASM在减少化合物A在患有癫痫发作病症的人中发挥疗效所需的量中的用途，诸如通过联合化合物A一起向人施用当与化合物A一起施用时有效实现这种减少的量的ASM。在这些实施方案的某些情况下，ASM是丙戊酸、左乙拉西坦、苯妥英、拉科酰胺、苯巴那酯或它们的组合，特别是苯妥英。
在一些方面，本文描述的在有效治疗癫痫发作病症的同时治疗有需要的人的癫痫发作病症、减少发挥疗效所需的ASM的量、减少发挥疗效所需的化合物A的量或减少施用量的化合物A在人血浆或脑中吸收的方法和用途包括增强人体中的Kv7钾通道开放。
在一个实施方案中，本公开涉及增强人Kv7钾通道开放的方法，该方法包括当联合施用时以治疗有效的量将化合物A和ASM联合施用于人，诸如其中该人患有癫痫发作病症。同样，在一些实施方案中，本公开涉及化合物A和ASM当联合施用时以治疗有效的量在增强例如人体中的Kv7钾通道开放中的用途，其中该人患有癫痫发作病症。
在一些方面，Kv7钾通道是Kv7.2、Kv7.3、Kv7.4或Kv7.5中的一种或多种。在某些情况下，Kv7.2、Kv7.3、Kv7.4或Kv7.5钾通道中的一种或多种的开放或增强的开放相对于Kv7.1是选择性的。在其他情况下，该方法包括Kv7.2/Kv7.3(KCNQ2/3)钾通道的开放或增强开放。
在本发明方法和用途的一些方面，ASM是苯二氮卓、卡马西平、苯巴那酯、非尔氨酯、加巴喷丁、拉科酰胺、拉莫三嗪、左乙拉西坦、奥卡西平、苯巴比妥、苯妥英、普瑞巴林、卢非酰胺、噻加宾、托吡酯、丙戊酸、氨己烯酸、唑尼沙胺或它们的组合。在特定的方面，抗癫痫药物是丙戊酸、左乙拉西坦、苯妥英、拉科酰胺、苯巴那酯或它们的组合。在某些情况下，抗癫痫药物不能增强Kv7钾通道在人中的开放。
在一些实施方案中，ASM通过阻断人体中的钠通道来降低神经元兴奋，通过阻断人体中的钙通道来降低神经元兴奋，通过结合人体中的突触小泡糖蛋白2A(SV2A)来降低神经元兴奋，或增加人体中的神经元抑制。
在一些方面，ASM是谷氨酸能试剂。在其他方面，ASM是GABA能试剂。
在一些情况下，用本发明的方法治疗或与本发明的方法相关联的癫痫发作病症与Kv7钾通道功能障碍有关。在其他情况下，癫痫发作病症是局灶性发作癫痫。
在本发明的方法和用途的一些实施方案中，将化合物A口服施用于人。在本发明的方法和用途的某些实施方案中，将ASM口服施用于人。在本发明的方法和用途的其他实施方案中，将化合物A和ASM两者均口服施用于人。
在本发明的方法和用途的一些方面，化合物A与ASM联合施用，例如口服施用，以化合物A的剂量为1mg至200mg施用于人，以化合物A的剂量为2mg至100mg施用于人，以化合物A的剂量为5mg至50mg施用于人，以化合物A的剂量为5mg、10mg、15mg、20mg或25mg施用于人，或以化合物A的剂量为20mg施用于人。在其他方面，化合物A与ASM联合施用，例如口服施用，以化合物A的剂量为至少10mg施用于人，以化合物A的剂量为至少20mg施用于人，或以化合物A的剂量为至少50mg施用于人。在其他方面，化合物A与ASM联合施用，例如口服施用，以化合物A的剂量为每天5mg至1000mg施用于人，以化合物A的剂量为每天5mg至500mg施用于人，以化合物A的剂量为每天5mg至250mg施用于人，以化合物A的剂量为每天20mg至150mg施用于人，或以化合物A的剂量为每天100mg施用于人。在其他情况下，化合物A与ASM联合施用，例如口服施用，以化合物A的剂量为0.01mg/kg至2.0mg/kg施用于人，以化合物A的剂量为0.03mg/kg至1.0mg/kg施用于人，或以化合物A的剂量为0.05mg/kg至0.5mg/kg施用于人。
在本发明的方法和用途的一些实施方案中，将化合物A在用餐之前约30分钟至用餐之后约2小时之间口服施用于人，例如，可将化合物A在用餐期间或在用餐之后15分钟内口服施用于人。
在本发明的方法和用途的另一个实施方案中，ASM是丙戊酸。在一些方面，丙戊酸与化合物A联合施用，以丙戊酸的剂量为2mg/kg至16mg/kg施用于人，例如，丙戊酸可以4mg/kg至12mg/kg的剂量施用于人。
在本发明的方法和用途的另一个实施方案中，ASM是苯妥英。在一些方面，苯妥英与化合物A联合施用，以苯妥英的剂量为0.05mg/kg至5mg/kg施用于人，例如，苯妥英可以0.1mg/kg至1mg/kg的剂量施用于人。
在本发明的方法和用途的另一个实施方案中，ASM是拉科酰胺。在一些方面，拉科酰胺与化合物A联合施用，以拉科酰胺的剂量为0.1mg/kg至5mg/kg施用于人，例如，拉科酰胺以0.5mg/kg至1mg/kg的剂量施用于人。
在本发明的方法和用途的另一个实施方案中，ASM是苯巴那酯。在一些方面，苯巴那酯与化合物A联合施用，以苯巴那酯的剂量为0.05mg/kg至5mg/kg施用于人，例如，苯巴那酯以0.1mg/kg至1mg/kg的剂量施用于人。
在本发明的方法和用途的某些实施方案中，相对于单独个体化施用化合物A或ASM，联合施用化合物A和ASM(例如，丙戊酸、苯妥英、左乙拉西坦、拉科酰胺、苯巴那酯或它们的组合)提供了改善的功效(例如，增加了人癫痫发作次数的减少或癫痫发作的严重程度的降低)。在某些此类实施方案中，联合施用提供了累加效应，其中累加效应是指施用化合物A和ASM的个体效应的总和。在一些实施方案中，联合施用提供协同效应，其中协同效应是指大于施用化合物A和ASM的单独效应的总和的效应。
在其他实施方案中，本公开提供了药物组合物，该药物组合物包含化合物A、抗癫痫药物(ASM)和药学上可接受的载体。在药物组合物的一些方面，ASM是苯二氮卓、卡马西平、苯巴那酯、非尔氨酯、加巴喷丁、拉科酰胺、拉莫三嗪、左乙拉西坦、奥卡西平、苯巴比妥、苯妥英、普瑞巴林、卢非酰胺、噻加宾、托吡酯、丙戊酸、氨己烯酸、唑尼沙胺或它们的组合。
化合物A是目前开发用于治疗癫痫发作病症的小分子，并且其作为钾通道调节剂的用途公开于美国专利号8,293,911和8,993,593以及美国申请系列号16/409,684和16/410,851中，这些专利的公开内容全文以引用方式并入本文。
参考以下详细描述，本公开的这些和其他方面将是显而易见的。为此，本文中阐述了更详细地描述某些背景信息和程序的各种参考文献，并且每个参考文献全文都以引用方式并入本文。
3.附图说明
图1示出了在CF-1小鼠(每组n＝7)中在测定之前2小时以1mg/kg、2mg/kg、4mg/kg、8mg/kg PO施用化合物A或者溶媒的结果。上图：MES测试期间示出后肢强直性伸肌成分的小鼠比例。每个条表示平均响应±S.E.M.。下图：免于强直性癫痫发作的小鼠百分比。在该图和所有其他图中的单个星号表示0.01＜p＜0.05。所引用的“Mpk”是这一数字，并且所有其他数字是mg/kg。
图2示出了在CF-1小鼠(每个剂量组，n＝7，单独的溶媒，n＝5)中在测定之前0.5小时以1mg/kg、2mg/kg、4mg/kg、8mg/kg PO施用化合物A或者溶媒的结果。上图：在强直性癫痫发作期间，每只动物存在或不存在后肢强直性伸肌成分。下图：免于的小鼠百分比。
图3示出了化合物A在小鼠MES测定中的药代动力学(PK)和药效学(PD)性质。水平误差条表示血浆或脑浓度的S.E.M.。当不可见时，这是因为它们小于表示平均值的符号。穿过给药之后2小时收集的每组数据的实线曲线是浓度-响应曲线的最佳拟合。基于脑和血浆浓度的IC50分别为275nM和154nM。在给药之后0.5小时测量的功效与在给药之后2小时测定的PK-PD关系一致。
图4示出了CF-1小鼠中在测定之前2小时以1mg/kg PO施用化合物A和在测定之前0.5小时以30mg/kg、56mg/kg或100mg/kg IP施用丙戊酸的结果(单剂量组：n＝15，1mg/kg的化合物A，n＝15，100mg/kg的丙戊酸，n＝7，30mg/kg和56mg/kg的丙戊酸；组合剂量组：n＝15，化合物A+丙戊酸100mg/kg，n＝8，化合物A+丙戊酸30mg/kg和56mg/kg；n＝15，溶媒)。上图：在强直性癫痫发作期间，每只动物存在或不存在后肢强直性伸肌成分。下图：化合物A和丙戊酸的单剂量或组合剂量的比较。四个星号表示p＜0.0001。
图5示出了在小鼠MES测定中含有和不含有1mg/kg化合物A的丙戊酸的PK/PD。实线曲线表示，对于含有和不含有1mg/kg化合物A的丙戊酸，其浓度-响应曲线最佳拟合。该曲线拟合了单独的丙戊酸的最大100％癫痫发作和1mg/kg化合物A的最大73.3％癫痫发作，以反映该剂量下单独化合物A的功效。与化合物A共给药的作用是将丙戊酸的IC50从1440μM降低到608μM。
图6示出了在小鼠中在测定之前2小时以1mg/kg或1.5mg/kg PO施用化合物A和在试验之前2小时以120mg/kg或150mg/kg IP施用左乙拉西坦的结果。上图：在强直性癫痫发作期间，每只动物存在或不存在后肢强直性伸肌成分。下图：化合物A和左乙拉西坦的单剂量或组合剂量的比较。
图7示出了在测定之前2小时以0.25mg/kg、0.75mg/kg、1mg/kg、1.5mg/kg或2.5mg/kg PO施用化合物A和在试验之前2小时以2mg/kg IP施用苯妥英的结果。单剂量：化合物A，n＝8/剂量，苯妥英，2mg/kg，n＝24；组合剂量：n＝8/组，n＝24，溶媒。上图：在强直性癫痫发作期间，每只动物存在或不存在后肢强直性伸肌成分。下图：化合物A和苯妥英的单剂量或组合剂量的比较。两个星号表示0.001＜p＜0.01。
图8示出了在小鼠MES测定中含有和不含有2mg/kg苯妥英的化合物A的PK/PD。实线曲线表示与含有和不含有2mg/kg苯妥英的化合物A的浓度-响应曲线的最佳拟合。该曲线拟合了单独的化合物A的最大94.1％癫痫发作和2mg/kg苯妥英的最大75％癫痫发作，以反映2mg/kg时单独苯妥英的功效。这些顶部值由水平虚线表示。苯妥英与化合物A共给药的作用是将化合物A的IC50从147nM降低到39.7nM。
图9示出了小鼠癫痫发作相对于各种剂量的化合物A的比例，并且化合物A在小鼠AC-MES测定中提供了剂量-依赖性功效(A、B和C)。在CF-1小鼠中在测定之前0.5小时以1mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、7.5mg/kg和10mg/kg PO施用化合物A(组：n＝8，1mg/kg的化合物A，n＝8，3mg/kg的化合物A，n＝16，5mg/kg的化合物A，n＝7，7.5mg/kg的化合物A，n＝17，10mg/kg的化合物A；n＝24，溶媒)。结果表示为在任何给定剂量组中动物癫痫发作的比例。在所有三项研究中，化合物A治疗组中动物癫痫发作的比例与溶媒治疗组显著不同(相应p值示于图9A至图9C中)。基于Hill Langmuir方程的化合物A的血浆(D)和脑组织(E)浓度-响应曲线表明功效是浓度-依赖性的。化合物A的浓度响应曲线分析示出，血浆的EC50为0.30μM，并且脑组织的EC50为0.47μM。在化合物A给药之后0.5小时获得终末血浆和脑样本。D和E中的每个数据点代表每个剂量组在平均浓度水平下动物癫痫发作的比例。
图10示出了拉科酰胺在小鼠AC-MES测定中提供剂量-依赖性功效(A、B、C和D)。在CF-1小鼠中在测定之前2小时以6mg/kg、8mg/kg、10mg/kg和20mg/kg PO施用拉科酰胺(组：n＝16，6mg/kg的拉科酰胺；n＝8，8mg/kg的拉科酰胺；n＝16，10mg/kg的拉科酰胺；n＝8，20mg/kg的拉科酰胺；n＝32，溶媒)。结果表示为在任何给定剂量组中动物癫痫发作的比例(n＝8)。在研究2D中，在20mg/kg拉科酰胺治疗组中动物癫痫发作的比例与溶媒治疗组显著不同(p值示于图10A中)。基于Hill Langmuir方程的拉科酰胺的血浆(E)和脑组织(F)浓度-响应曲线表明功效是浓度-依赖性的。拉科酰胺的浓度响应曲线分析示出血浆的EC50为21.6μM并且脑组织的EC50为22.2μM。在拉科酰胺给药之后2小时获得终末血浆和脑样本。E和F中的每个数据点代表在每个剂量组(n＝8)的平均浓度水平下动物癫痫发作的比例。
图11示出了在小鼠AC-MES测定(A)中化合物A和拉科酰胺的组合的结果。在CF-1小鼠中在测定之前0.5小时以3mg/kg PO施用化合物A；在测定之前2小时以10mg/kg PO施用拉科酰胺(单剂量组：n＝8，3mg/kg的化合物A，n＝8，10mg/kg的拉科酰胺；组合剂量组：n＝8，3mg/kg的化合物A+10mg/kg的拉科酰胺；n＝8，溶媒)。结果表示为在任何给定剂量组中动物癫痫发作的比例(n＝8)。拉科酰胺治疗组和组合组之间的差异是统计学上显著的(p值示于图11A中)。B和C示出了在小鼠AC-MES测定中，化合物A含有和不含有10mg/kg拉科酰胺时的药代动力学-药效学关系(PK/PD)和拉科酰胺含有和不含有3mg/kg化合物A时的药代动力学-药效学关系(PK/PD)。B和C中的每个数据点代表从单个动物获得的个体浓度以及在动物中是否观察到强直性癫痫发作。在化合物A PO给药之后0.5小时和拉科酰胺PO给药之后2小时获得终末血浆和脑样本。
图12示出了化合物A在单次口服给药之后1小时的小鼠6Hz精神运动性测定中的剂量响应。癫痫发作测定前1小时PO给药化合物A示出剂量-依赖性功效(A)，其中在8mg/kg剂量时达到显著作用(**p＝0.0081相对于溶媒)。基于Langmuir Hill方程的剂量响应曲线(B)预计，在Hill系数n＝-3.09时ED50为6.48mg/kg，并且ED20为4.13mg/kg。
图13示出了化合物A在单次口服给药之后1小时的小鼠6Hz精神运动性测定中的浓度响应。在化合物A的单次PO剂量后1小时，单独的动物血浆(A)和脑(B)暴露证明了化合物A组织浓度和6Hz癫痫发作测定中的功效之间的明确关系。经历震颤并且触摸起来冰冷的动物具有最高的暴露，并且用圆圈标记。基于Hill Langmuir方程的血浆(C)和脑(D)浓度响应曲线预计，在Hill系数n＝-1.95时血浆EC50为0.35μM，并且在Hill系数n＝-2.17时脑EC50为0.54μM。
图14示出了在给药后1小时的6Hz精神运动性癫痫发作测定中单独和组合的化合物A和左乙拉西坦的功效。(A)在两项研究中的每一者中，单独的化合物A(口服给药)和左乙拉西坦(腹膜内给药)都证明了不同水平的功效(在研究3B中没有保护，并且在研究3C中达到25％的保护)。在各项研究中，化合物A和左乙拉西坦的组合与单独的任一化合物相比，以及与溶媒相比，对癫痫发作的保护显著增加(*p＝0.034；**p＜0.01；***p＝0.0002)。(B)当两项研究组合时，左乙拉西坦在14/16癫痫发作时达到了单独用任一化合物的最大功效，而两种化合物的组合导致5/15动物癫痫发作。因此，化合物A和左乙拉西坦的组合使66.7％的动物免于癫痫发作，这显著不同于溶媒(****p＜0.0001)，以及单独的任一化合物(***p＜0.001)。
图15示出了在CD-1小鼠中单独和组合的化合物A和左乙拉西坦在给药后1小时的药代动力学。(A)在所有实验组中化合物A(口服给药)和左乙拉西坦(腹膜内给药)的血浆浓度的比较揭示了，在研究3C中，在给药后1小时，与研究3B相比，达到了12倍高的化合物A的血浆浓度。左乙拉西坦的血浆浓度在两项研究之间是相当的。化合物A和左乙拉西坦的组合施用(Combo)没有显著改变任一化合物的暴露。研究3C的组合组中的一只动物在血浆中没有可测量的左乙拉西坦浓度，并且被排除在外(未示出)。(B)在所有实验组中化合物A(口服给药)和左乙拉西坦(腹膜内给药)的脑浓度的比较揭示了，在研究3C中，在给药后1小时，与研究3B相比，达到了11倍高的化合物A的脑浓度。左乙拉西坦的脑浓度在两项研究之间是相当的。化合物A和左乙拉西坦的组合施用(Combo)没有显著改变任一化合物的暴露。研究3C的组合组中的一只动物在脑中没有可测量的左乙拉西坦浓度，并且被排除在外(未示出)。
图16示出了在组合给药之后化合物A和左乙拉西坦的功效的药代动力学-药效学转变。LEV：左乙拉西坦。当化合物A(口服给药)与左乙拉西坦(腹膜内给药；空心圆圈)组合施用时，与单独施用的化合物A(实心圆圈)相比，动物癫痫发作的比例降低，尽管两组在血浆(A)和脑(B)方面具有类似的化合物A浓度。同样，与单独施用左乙拉西坦(实心正方形)相比，组合剂量组(空心正方形)中动物癫痫发作的比例降低，尽管两组在血浆(C)和脑(D)中具有类似的左乙拉西坦浓度。
图17示出了在小鼠AC-MES测定中单个口服剂量后化合物A的剂量和浓度响应。化合物A和溶媒组数据示于所示的研究中。化合物A在小鼠AC-MES测定中示出剂量-依赖性功效(A、B、C和D)。在CF-1小鼠中在测定之前0.5小时以1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、5mg/kg、7.5mg/kg和10mg/kg PO施用化合物A(组：n＝8，1mg/kg的化合物A，n＝8，2mg/kg的化合物A，n＝8，3mg/kg的化合物A，n＝16，5mg/kg的化合物A，n＝7，7.5mg/kg的化合物A，n＝17，10mg/kg的化合物A；n＝24，溶媒)。结果表示为在任何给定剂量组中动物癫痫发作的比例。在3/4研究中，化合物A治疗组中动物癫痫发作的比例与溶媒治疗组显著不同(示出了相应p值)。基于Hill Langmuir方程的化合物A的血浆(E)和脑组织(F)浓度-响应曲线表明功效是浓度-依赖性的。化合物A的浓度响应曲线分析示出，血浆的EC50为0.296μM，并且脑组织的EC50为0.471μM。在化合物A给药之后0.5小时获得终末血浆和脑样本。E和F中的每个数据点代表每个剂量组在平均浓度水平下动物癫痫发作的比例。
图18示出了在小鼠AC-MES测定中单个口服剂量后苯巴那酯的剂量和浓度响应。苯巴那酯和溶媒组数据示于所示的研究中。苯巴那酯在小鼠AC-MES测定中示出剂量-依赖性功效(A、B和C)。在CF-1小鼠中在测定前2小时以3mg/kg、5mg/kg、7.5mg/kg、10mg/kg和30mg/kg PO施用苯巴那酯(组：n＝15，3mg/kg的苯巴那酯；n＝15，5mg/kg的苯巴那酯；n＝8，7.5mg/kg的苯巴那酯；n＝8，10mg/kg的苯巴那酯；n＝8，30mg/kg的苯巴那酯；n＝24，溶媒)。结果表示为在任何给定剂量组中动物癫痫发作的比例。在2/3研究中，在苯巴那酯治疗组中动物癫痫发作的比例与溶媒治疗组显著不同(示出了p值)。基于Hill Langmuir方程的苯巴那酯的血浆(D)和脑组织(E)浓度-响应曲线表明功效是浓度-依赖性的。苯巴那酯的浓度响应曲线分析示出血浆的EC50为70.5μM并且脑组织的EC50为25.2μM。在苯巴那酯给药之后2小时获得终末血浆和脑样本。D和E中的每个数据点代表每个剂量组在平均浓度水平下动物癫痫发作的比例。
图19示出了在小鼠AC-MES测定中化合物A和苯巴那酯组合的抗痉挛作用。在小鼠AC-MES测定中化合物A和苯巴那酯的组合(A和B)。在CF-1小鼠中在测定之前0.5小时以0.5mg/kg、1mg/kg和2mg/kg PO施用化合物A；在测定之前2小时以5mg/kg PO施用苯巴那酯(单剂量组：n＝8，2mg/kg的化合物A，n＝8，5mg/kg的苯巴那酯；组合剂量组：n＝8，2mg/kg的化合物A+5mg/kg的苯巴那酯；n＝8，1mg/kg的化合物A+5mg/kg的苯巴那酯；n＝8，0.5mg/kg的化合物A+5mg/kg的苯巴那酯；n＝8，溶媒)。结果表示为在任何给定剂量组中动物癫痫发作的比例。在研究4F中，在苯巴那酯治疗组和组合组之间的差异是统计学显著的，而在化合物A治疗组和组合组之间的差异不是统计学显著的。在研究4G中，溶媒组和组合组之间的差异是统计学显著的。示出了P值。化合物A含有和不含有苯巴那酯时，其血浆和脑浓度的药代动力学-药效学关系(PK/PD)示于C和D中。C和D中的每个数据点代表在每个剂量组的平均浓度水平下动物癫痫发作的比例。在化合物APO给药之后0.5小时和苯巴那酯PO给药之后2小时获得终末血浆和脑样本。
4.具体实施方式
本公开尤其涉及用于治疗有需要的人的癫痫发作病症的新型且改善的方法和用途，包括向人联合施用化合物A和抗癫痫药物(ASM)，包括通过口服施用。
在以下公开中，阐述了某些具体细节以便提供对各种实施方案的透彻理解。然而，本领域技术人员将理解，可在没有这些细节的情况下实践本文描述的方法和用途。在其他情况下，没有详细示出或描述公知的结构，以避免不必要地使实施方案的描述模糊。除非上下文另有要求，否则贯穿本说明书和所附权利要求书，词语“包括”及其变型形式诸如“包含”和“含有”应被解释为开放的、包括性的含义，即“包括但不限于”。此外，本文提供的标题仅是为了方便，并不是解释要求保护的发明的范围或含义。
贯穿本说明书，对“一个实施方案”或“实施方案”的引用意指结合该实施方案描述的特定特征、结构或特性被包括在至少一个实施方案中。因此，贯穿本说明书，各个地方出现的短语“在一个实施方案中”或“在实施方案中”不一定全部是指同一实施方案。此外，特定特征、结构或特性可以任何合适的方式组合在一个或多个实施方案中。而且，除非上下文明确地另外指明，否则本说明书和所附权利要求书中所用的单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指代物。还应当注意，除非上下文明确地另外指明，否则术语“或”通常以其包括“和/或”的意义采用。
4.1.定义
如在本说明书和所附权利要求中所用，除非有相反的说明，反正以下术语和缩写具有所指明的含义：
“化合物A”是指具有下式的化合物：
并且化学名称为N-[4-(6-氟-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基)-2,6-二甲基苯基]-3,3-二甲基丁酰胺。化合物A的制备及其作为Kv7.2/Kv7.3(KCNQ2/3)开放剂的用途公开于美国专利号8,293,911和8,993,593以及美国申请序列号16/409,684和16/410,851中。化合物A与大多数已知的抗癫痫药物的不同之处在于，它加强和增强电压门控钾通道Kv7.2和Kv7.3(Kv7.2/Kv7.3)的开放，这在控制神经元兴奋性中很重要。化合物A用于本文描述的方法和用途。应当理解，任何涉及本公开中提及的化合物A或任何ASM的文献也包括其药学上可接受的盐(例如，丙戊酸也可以是丙戊酸钠或丙戊酸半钠形式)。
“联合施用”在本文中是指两种或更多种不同治疗化合物的任何施用形式，使得第二次施用的治疗化合物在第一次施用的治疗化合物在体内仍然有效时施用(例如，两种化合物在患者中同时有效，这可包括两种化合物的累加或协同效应)。例如，本文公开的化合物A和抗癫痫药物可在同一制剂中或在分开的制剂中同时或顺序地施用。在某些实施方案中，本文公开的化合物A和抗癫痫药物可在彼此的一个小时、12小时、24小时、36小时、48小时、72小时或一周内施用。因此，接受这种治疗的个体可受益于不同治疗化合物的组合作用。
如本文所用，“神经元兴奋降低”或“神经元兴奋性降低”是指神经元细胞活性水平在某种程度上向在患者中不存在癫痫发作病症时观察到的正常生理状态减弱。降低神经元兴奋性的特定试剂包括作用于神经元细胞上表达的通道和受体以直接降低神经元的兴奋性水平的试剂。相反，该试剂可通过启动细胞事件级联间接地起作用以降低神经元的兴奋性水平，其下游效应导致降低的神经元兴奋性。本文描述了降低神经元兴奋性以恢复神经元活性的生理水平的某些抗癫痫药物。
如本文所用，“增加的神经元抑制”是指神经元抑制水平在某种程度上向在患者中不存在癫痫发作病症时观察到的正常生理状态增加。本文描述了某些抗癫痫药物，诸如GABA能试剂，其增加了神经抑制以恢复神经元活性的生理水平。
“癫痫发作病症”是指与癫痫发作相关联的癫痫发作和病症，诸如部分发作(局灶性)癫痫发作、光敏性癫痫、自身诱导的晕厥、顽固性癫痫、Angelman综合征、良性rolandic癫痫、CDKL5病症、儿童和青少年失神癫痫、Dravet综合征、额叶癫痫、Glut1缺陷综合征、下丘脑错构瘤、婴儿痉挛/West综合征、青少年肌阵挛性癫痫、Landau-Kleffner综合征、Lennox-Gastaut综合征(LGS)、肌阵挛失神癫痫、Ohtahara综合征、Panayiotopoulos综合征、PCDH19癫痫、进行性肌阵挛癫痫、Rasmussen综合征、环染色体20综合征、反射性癫痫、颞叶癫痫、Lafora进行性肌阵挛癫痫、神经皮肤综合征、结节性硬化综合征、早期婴儿癫痫脑病、早期发作性癫痫脑病、全面性癫痫伴热性惊厥附加症、Rett综合征、多发性硬化症、阿尔茨海默病、孤独症、共济失调、张力减退和阵发性运动障碍。在某些实施方案中，术语“癫痫发作病症”是指局灶性发作癫痫，也称为部分发作(局灶性)癫痫。
如本文所用，“治疗有效量”是指足以治疗人受试者的所述疾病、病症或病状，或对疾病、病症或病状或者疾病、病症或病状的一种或多种潜在机制具有期望的所述作用的化合物A的量、ASM的量、或化合物A的量和ASM的量二者。在某些实施方案中，当化合物A与ASM联合施用用于治疗癫痫发作病症时，治疗有效量是指化合物A的量和ASM的量在联合施用于人后治疗或改善人的癫痫发作病症，或在患有癫痫发作病症的人中显示可检测的治疗作用。该作用可通过例如癫痫发作次数的减少或通过癫痫发作的严重程度的降低来检测。
如本文所用，“治疗”是指与联合施用化合物A和ASM相关联的治疗应用，这些治疗应用改善了所示疾病、病症或病状或者所述疾病、病症或病状的一种或多种潜在机制，包括减缓或中止人受试者的疾病、病症或病状或一种或多种潜在机制的进展。在某些实施方案中，当联合施用化合物A和ASM用于治疗癫痫发作病症时，治疗是指减缓或中止癫痫发作病症的进展和/或逆转癫痫发作病症的治疗应用。癫痫发作病症的逆转与减缓或中止癫痫发作病症的治疗应用的不同之处在于，采用逆转方法，不仅癫痫发作病症的进展中止，而且细胞行为在某种程度上向不存在癫痫发作病症时观察到的正常状态移动。在一些实施方案中，包括联合施用化合物A与ASM的癫痫发作病症的治疗伴随一种或多种Kv7钾通道(例如Kv7.2、Kv7.3、Kv7.4和/或Kv7.5，特别是Kv7.2和/或Kv7.3，任选地相对于Kv7.1)的细胞活性向不存在癫痫发作病症时观察到的正常水平改变。
“在进食条件下”是指在口服施用有效量(例如，治疗有效剂量范围内)的化合物A之前约4小时至施用化合物A之后约4小时之间的时间期间进食的条件。食物可以是固体、液体或固体和液体食物的混合物，具有足够的体积和脂肪含量，不会在胃中快速溶解和吸收。在一些情况下，食物是膳食，诸如早餐、午餐、晚餐，或另选地，婴儿食物(例如，配方或母乳)。治疗有效量的化合物A可口服施用于受试者，例如，在用餐之前约30分钟至用餐之后约2小时之间，最有利的是，化合物A的剂量单位在用餐期间或在用餐之后15分钟内口服施用。
“在禁食条件下”是指在口服施用治疗有效量的化合物A之前至少4小时至施用化合物A之后约4小时之间的时间期间没有进食的条件。
4.2.实施方案
在一些实施方案中，本公开涉及治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法，该方法包括以当联合施用时治疗有效的量向人联合施用(例如，口服)化合物A和抗癫痫药物(ASM)。同样，在一些实施方案中，本公开涉及化合物A和ASM以当联合施用时是治疗有效的量在治疗有需要的人的癫痫发作病症中的用途。联合施用考虑了化合物A可在ASM施用的同时、之前或之后施用。在某些情况下，包括联合施用化合物A和ASM的所治疗的癫痫发作病症是局灶性发作癫痫。
在其他实施方案中，当在本文治疗癫痫发作病症时，癫痫发作病症选自局灶性发作癫痫、光敏性癫痫、自身诱导的晕厥、顽固性癫痫、Angelman综合征、良性rolandic癫痫、CDKL5病症、儿童和青少年失神癫痫、Dravet综合征、额叶癫痫、Glut1缺陷综合征、下丘脑错构瘤、婴儿痉挛/West综合征、青少年肌阵挛性癫痫、Landau-Kleffner综合征、Lennox-Gastaut综合征(LGS)、肌阵挛失神癫痫、Ohtahara综合征、Panayiotopoulos综合征、PCDH19癫痫、进行性肌阵挛癫痫、Rasmussen综合征、环染色体20综合征、反射性癫痫、颞叶癫痫、Lafora进行性肌阵挛癫痫、神经皮肤综合征、结节性硬化综合征、早期婴儿癫痫脑病、早期发作性癫痫脑病、全面性癫痫伴热性惊厥附加症、Rett综合征、多发性硬化症、阿尔茨海默病、孤独症、共济失调、张力减退和阵发性运动障碍。在某些实施方案中，癫痫发作病症是局灶性发作癫痫，也称为部分发作(局灶性)癫痫。
在一些实施方案中，本公开涉及减少ASM在患有癫痫发作病症的人中发挥疗效所需的量的方法，该方法包括联合ASM一起向人施用(例如，口服)当与ASM一起施用时有效实现这种减少的量的化合物A。同样，在一些实施方案中，本公开涉及化合物A在减少ASM在患有癫痫发作病症的人中发挥疗效所需的量中的用途，诸如通过联合ASM一起向人施用当与ASM一起施用时有效实现这种减少的量的化合物A。例如，在一些实施方案中，本公开提供了治疗有需要的受试者(例如，人)的癫痫发作病症的方法，该方法包括联合施用(例如，口服)化合物A和ASM，其中所施用的ASM的量小于在不存在施用化合物A时实现相同或类似的癫痫发作次数的减少或癫痫发作的严重程度的降低所需的ASM的量。在一些实施方案中，ASM是丙戊酸、左乙拉西坦、苯妥英、拉科酰胺、苯巴那酯或它们的组合，特别是丙戊酸。
在一些实施方案中，本公开涉及降低在患有癫痫发作病症的人中发挥疗效所需的化合物A的量的方法，该方法包括联合化合物A一起向人施用(例如，口服)当与化合物A一起施用时有效实现这种减少的量的ASM。同样，在一些实施方案中，本公开涉及ASM在降低在患有癫痫发作病症的人中发挥疗效所需的化合物A的量中的用途，诸如通过联合化合物A一起向人施用当与化合物A一起施用时有效实现这种减少的量的ASM。例如，在一些实施方案中，本公开提供了治疗有需要的受试者(例如，人)的癫痫发作病症的方法，该方法包括联合施用(例如，口服)化合物A和ASM，其中所施用的化合物A的量小于在不存在施用ASM时实现相同或类似的癫痫发作次数的减少或癫痫发作的严重程度的降低所需的化合物A的量。在一些实施方案中，ASM是丙戊酸、左乙拉西坦、苯妥英、拉科酰胺、苯巴那酯或它们的组合，特别是苯妥英。
在一些实施方案中，本文描述的治疗有需要的人的癫痫发作、减少发挥疗效所需的ASM的量或减少发挥疗效所需的化合物A的量包括增强人体中的Kv7钾通道开放。
在某些实施方案中，本公开提供了包括通过联合ASM一起施用有效量的化合物A在有需要的人中开放或增强Kv7钾通道(诸如Kv7.2、Kv7.3、Kv7.4和/或Kv7.5钾通道，特别是Kv7.2/Kv7.3(KCNQ2/3)钾通道)的开放的方法或用途。在一些此类实施方案中，人患有癫痫发作病症，诸如本文描述的那些。
在某些情况下，本文描述的方法或用途包括相对于Kv7.1选择性地开放或增强Kv7钾通道(诸如Kv7.2、Kv7.3、Kv7.4或Kv7.5中的一种或多种)的开放。在一些实施方案中，该方法或用途相对于Kv7.1对于Kv7.2具有选择性。在其他实施方案中，该方法或用途相对于Kv7.1对于Kv7.3具有选择性。在其他实施方案中，该方法或用途相对于Kv7.1对于Kv7.4具有选择性。在其他实施方案中，该方法或用途相对于Kv7.1对于Kv7.5具有选择性。在某些实施方案中，该方法或用途相对于Kv7.1对于Kv7.2和Kv7.3具有选择性。在某些实施方案中，该方法或用途相对于其他Kv7钾通道对于Kv7.2和Kv7.3具有选择性。在某些实施方案中，该方法或用途相对于Kv7.4和Kv7.5对于Kv7.2和Kv7.3具有选择性。
在一个实施方案中，本文描述的方法和用途，诸如治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法或用途，通过联合ASM一起施用(例如，口服)一定量的化合物A(诸如约0.01mg/kg至约2.0mg/kg的化合物A)来实现。化合物A的更具体的代表性量包括0.05mg/kg、0.10mg/kg、0.20mg/kg、0.30mg/kg、0.40mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.80mg/kg、0.90mg/kg、1.0mg/kg、1.1mg/kg、1.2mg/kg、1.3mg/kg、1.4mg/kg、1.5mg/kg、1.6mg/kg、1.7mg/kg、1.8mg/kg、1.9mg/kg和2.0mg/kg，或者通过使用上述量中的两个量作为终点而产生的任何量的范围。在一些方面，该方法或用途包括联合所公开量的ASM一起施用(例如，口服)0.03mg/kg至1.0mg/kg的化合物A。在一些方面，该方法包括联合所公开量的ASM一起施用(例如，口服)0.05mg/kg至0.5mg/kg的化合物A。
在一些实施方案中，本文描述的方法和用途，诸如治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法或用途，通过联合ASM一起施用(例如，口服)一定量的化合物A，诸如单剂量或分剂量的2mg至200mg的化合物A来实现。例如，该方法可包括以单剂量或分剂量施用(例如，口服)化合物A，2mg、约3mg、约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约11mg、约12mg、约13mg、约14mg、约15mg、约16mg、约17mg、约18mg、约19mg、约20mg、约21mg、约22mg、约23mg、约24mg、约25mg、约26mg、约27mg、约29mg、约30mg、约31mg、约32mg、约33mg、约34mg、约35mg、约36mg、约37mg、约38mg、约39mg、约40mg、约41mg、约42mg、约43mg、约44mg、约45mg、约46mg、约47mg、约48mg、约49mg、约50mg、约51mg、约52mg、约53mg、约54mg、约55mg、约56mg、约57mg、约58mg、约59mg、约60mg、约61mg、约62mg、约63mg、约64mg、约65mg、约66mg、约67mg、约68mg、约69mg、约70mg、约71mg、约72mg、约73mg、约74mg、约75mg、约76mg、约77mg、约78mg、约79mg、约80mg、约81mg、约82mg、约83mg、约84mg、约85mg、约86mg、约87mg、约88mg、约89mg、约90mg、约91mg、约92mg、约93mg、约94mg、约95mg、约96mg、约97mg、约98mg、约99mg、约100mg、约101mg、约102mg、约103mg、约104mg、约105mg、约106mg、约107mg、约108mg、约109mg、约110mg、约111mg、约112mg、约113mg、约114mg、约115mg、约116mg、约117mg、约118mg、约119mg、约120mg、约121mg、约122mg、约123mg、约124mg、约125mg、约126mg、约127mg、约129mg、约130mg、约131mg、约132mg、约133mg、约134mg、约135mg、约136mg、约137mg、约138mg、约139mg、约140mg、约141mg、约142mg、约143mg、约144mg、约145mg、约146mg、约147mg、约148mg、约149mg、约150mg、约151mg、约152mg、约153mg、约154mg、约155mg、约156mg、约157mg、约158mg、约159mg、约160mg、约161mg、约162mg、约163mg、约164mg、约165mg、约166mg、约167mg、约168mg、约169mg、约170mg、约171mg、约172mg、约173mg、约174mg、约175mg、约176mg、约177mg、约178mg、约179mg、约180mg、约181mg、约182mg、约183mg、约184mg、约185mg、约186mg、约187mg、约188mg、约189mg、约190mg、约191mg、约192mg、约193mg、约194mg、约195mg、约196mg、约197mg、约198mg、约199mg或约200mg，或施用(例如，口服)通过使用上述量中的两个量作为终点而产生的任何量的范围。在一些方面，该方法或用途包括联合所公开量的ASM以单剂量或分剂量一起口服施用2mg至100mg或5mg至50mg的化合物A。在一些方面，方法或用途包括联合所公开量的ASM一起口服施用单剂量或分剂量的5mg、10mg、15mg、20mg或25mg的化合物A。在一些方面，该方法或用途包括联合所公开量的ASM以单剂量或分剂量一起口服施用20mg的化合物A。
在一些方面，本文描述的方法和用途，诸如治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法或用途，通过联合所公开量的ASM一起施用(例如，口服)至少10mg的化合物A，诸如至少20mg、30mg、40mg、50mg、75mg或100mg的化合物A来实现。在一些实施方案中，本文描述的方法和用途，诸如治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法或用途，通过联合所公开量的ASM一起施用(例如，口服)至少50mg的化合物A，诸如至少75mg、100mg、125mg、150mg、175mg或200mg的化合物A来实现。
在一些实施方案中，本文描述的方法和用途，诸如治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法或用途，通过与ASM联合一起每天施用(例如，口服)一定量的化合物A，诸如每天5mg至1000mg的化合物A，诸如每天5mg至500mg或5mg至250mg的化合物A来实现。例如，该方法或用途可包括每天施用(例如，口服)约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg、约100mg、约105mg、约110mg、约115mg、约120mg、约125mg、约130mg、约135mg、约140mg、约145mg、约150mg、约155mg、约160mg、约165mg、约170mg、约175mg、约180mg、约185mg、约190mg、约195mg、约200mg、约205mg、约210mg、约215mg、约220mg、约225mg、约230mg、约235mg、约240mg、约245mg、约250mg、约255mg、约260mg、约265mg、约270mg、约275mg、约280mg、约285mg、约290mg、约295mg、约300mg、约305mg、约310mg、约315mg、约320mg、约325mg、约330mg、约335mg、约340mg、约345mg、约350mg、约355mg、约360mg、约365mg、约370mg、约375mg、约380mg、约385mg、约390mg、约395mg、约400mg、约405mg、约410mg、约415mg、约420mg、约425mg、约430mg、约435mg、约440mg、约445mg、约450mg、约455mg、约460mg、约465mg、约470mg、约475mg、约480mg、约485mg、约490mg、约495mg、约500mg或约1000mg的化合物A，或每天施用(例如，口服)通过使用上述量中的两个量作为终点而产生的量的范围。在一些方面，该方法或用途包括联合所公开量的ASM一起每天口服施用5mg至250mg化合物A，诸如每天10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg或40mg至75mg、100mg、125mg、150mg、175mg或200mg的化合物A，包括每天20mg至150mg。在一些方面，口服施用包括联合所公开量的ASM每天50mg、75mg、100mg或125mg的化合物A，诸如每天100mg。
在某些情况下，化合物A的上述日剂量作为每天多个剂量施用(例如，口服)，诸如每天两个、三个、四个或五个剂量。例如，100mg的日剂量，可在一天中以五个20mg、四个25mg、三个33.3mg或两个50mg剂量联合所公开量的ASM一起施用。
在一些实施方案中，化合物A的上述日剂量作为化合物A的单剂量或作为化合物A的单剂量与ASM的单剂量联合施用(例如，口服)。例如，每天约5mg、10mg、15mg、20mg、25mg或30mg至约50mg、65mg、75mg、100mg、125mg或150mg的化合物A可以单剂量口服施用，包括每天单剂量10mg至25mg、10mg至30mg和10mg至40mg，诸如每天单剂量10mg至25mg。相关地，在前面段落中讨论的化合物A的任何剂量都可包括在单位剂型中。
在一些实施方案中，化合物A的上述剂量作为每周多个剂量施用(例如，口服)，诸如每周两个、三个、四个、五个、十个、十五个或二十个剂量。例如，100mg的每周剂量，可在一周中以五个20mg、四个25mg或两个50mg的剂量联合所公开量的ASM一起施用。
在一些实施方案中，当使用本文公开的日剂量时，本文描述的方法和用途在6天至9天内，诸如在约1周内达到化合物A的稳态。
在一些实施方案中，本文描述的方法和用途，诸如治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法或用途，通过联合化合物A一起施用(例如，口服)一定量的ASM，诸如约0.01mg/kg至约2.0mg/kg的ASM来实现。ASM的更具体的代表性量包括0.05mg/kg、0.10mg/kg、0.20mg/kg、0.30mg/kg、0.40mg/kg、0.5mg/kg、0.6mg/kg、0.7mg/kg、0.80mg/kg、0.90mg/kg、1.0mg/kg、1.1mg/kg、1.2mg/kg、1.3mg/kg、1.4mg/kg、1.5mg/kg、1.6mg/kg、1.7mg/kg、1.8mg/kg、1.9mg/kg和2.0mg/kg，或通过使用上述量中的两个量作为终点而产生的任何量的范围。在一些方面，该方法或用途包括联合化合物A一起施用(例如，口服)0.03mg/kg至1.0mg/kg的ASM。在一些方面，该方法包括联合化合物A一起施用(例如，口服)0.05mg/kg至0.5mg/kg的ASM。
在一些实施方案中，本文描述的方法和用途，诸如治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法或用途，通过联合化合物A一起施用(例如，口服)一定量的ASM，诸如单剂量或分剂量的2mg至200mg的ASM来实现。例如，该方法可包括以单剂量或分剂量施用(例如，口服)ASM，2mg、约3mg、约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约11mg、约12mg、约13mg、约14mg、约15mg、约16mg、约17mg、约18mg、约19mg、约20mg、约21mg、约22mg、约23mg、约24mg、约25mg、约26mg、约27mg、约29mg、约30mg、约31mg、约32mg、约33mg、约34mg、约35mg、约36mg、约37mg、约38mg、约39mg、约40mg、约41mg、约42mg、约43mg、约44mg、约45mg、约46mg、约47mg、约48mg、约49mg、约50mg、约51mg、约52mg、约53mg、约54mg、约55mg、约56mg、约57mg、约58mg、约59mg、约60mg、约61mg、约62mg、约63mg、约64mg、约65mg、约66mg、约67mg、约68mg、约69mg、约70mg、约71mg、约72mg、约73mg、约74mg、约75mg、约76mg、约77mg、约78mg、约79mg、约80mg、约81mg、约82mg、约83mg、约84mg、约85mg、约86mg、约87mg、约88mg、约89mg、约90mg、约91mg、约92mg、约93mg、约94mg、约95mg、约96mg、约97mg、约98mg、约99mg、约100mg、约101mg、约102mg、约103mg、约104mg、约105mg、约106mg、约107mg、约108mg、约109mg、约110mg、约111mg、约112mg、约113mg、约114mg、约115mg、约116mg、约117mg、约118mg、约119mg、约120mg、约121mg、约122mg、约123mg、约124mg、约125mg、约126mg、约127mg、约129mg、约130mg、约131mg、约132mg、约133mg、约134mg、约135mg、约136mg、约137mg、约138mg、约139mg、约140mg、约141mg、约142mg、约143mg、约144mg、约145mg、约146mg、约147mg、约148mg、约149mg、约150mg、约151mg、约152mg、约153mg、约154mg、约155mg、约156mg、约157mg、约158mg、约159mg、约160mg、约161mg、约162mg、约163mg、约164mg、约165mg、约166mg、约167mg、约168mg、约169mg、约170mg、约171mg、约172mg、约173mg、约174mg、约175mg、约176mg、约177mg、约178mg、约179mg、约180mg、约181mg、约182mg、约183mg、约184mg、约185mg、约186mg、约187mg、约188mg、约189mg、约190mg、约191mg、约192mg、约193mg、约194mg、约195mg、约196mg、约197mg、约198mg、约199mg或约200mg，或施用(例如，口服)通过使用上述量中的两个量作为终点而产生的任何量的范围。在一些方面，该方法或用途包括联合化合物A一起口服施用单剂量或分剂量的2mg至100mg或5mg至50mg的ASM。在一些方面，该方法或用途包括联合化合物A一起口服施用单剂量或分剂量的5mg、10mg、15mg、20mg或25mg的ASM。在一些方面，该方法或用途包括联合所公开量的化合物A一起口服施用单剂量或分剂量的20mg的ASM。
在一些方面，本文描述的方法和用途，诸如治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法或用途，通过联合化合物A一起施用(例如，口服)至少10mg的ASM，诸如至少20mg、30mg、40mg、50mg、75mg或100mg的ASM来实现。在一些实施方案中，本文描述的方法和用途，诸如治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法或用途，通过联合化合物A一起施用(例如，口服)至少50mg的ASM，诸如至少75mg、100mg、125mg、150mg、175mg或200mg的ASM来实现。
在一些实施方案中，本文描述的方法和用途，诸如治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法或用途，通过联合化合物A一起每天施用(例如，口服)一定量的ASM，诸如每天5mg至1000mg的ASM，诸如每天5mg至500mg或5mg至250mg的ASM来实现。例如，该方法或用途可包括每天施用(例如，口服)约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg、约100mg、约105mg、约110mg、约115mg、约120mg、约125mg、约130mg、约135mg、约140mg、约145mg、约150mg、约155mg、约160mg、约165mg、约170mg、约175mg、约180mg、约185mg、约190mg、约195mg、约200mg、约205mg、约210mg、约215mg、约220mg、约225mg、约230mg、约235mg、约240mg、约245mg、约250mg、约255mg、约260mg、约265mg、约270mg、约275mg、约280mg、约285mg、约290mg、约295mg、约300mg、约305mg、约310mg、约315mg、约320mg、约325mg、约330mg、约335mg、约340mg、约345mg、约350mg、约355mg、约360mg、约365mg、约370mg、约375mg、约380mg、约385mg、约390mg、约395mg、约400mg、约405mg、约410mg、约415mg、约420mg、约425mg、约430mg、约435mg、约440mg、约445mg、约450mg、约455mg、约460mg、约465mg、约470mg、约475mg、约480mg、约485mg、约490mg、约495mg、约500mg或约1000mg的ASM，或每天施用(例如，口服)通过使用上述量中的两个量作为终点而产生的量的范围。在一些方面，该方法或用途包括联合化合物A一起每天口服施用5mg至250mg的ASM，诸如每天10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg或40mg至75mg、100mg、125mg、150mg、175mg或200mg的ASM，包括每天20mg至150mg。在一些方面，口服施用包括联合化合物A一起每天50mg、75mg、100mg或125mg的ASM，诸如每天100mg。
在某些情况下，ASM的上述日剂量作为每天多个剂量施用(例如，口服)，诸如每天两个、三个、四个或五个剂量。例如，100mg的日剂量，可在一天中以五个20mg、四个25mg、三个33.3mg或两个50mg剂量联合化合物A一起施用。
在一些实施方案中，上述日剂量的ASM作为单剂量联合化合物A一起施用(例如，口服)。例如，每天约5mg、10mg、15mg、20mg、25mg或30mg至约50mg、65mg、75mg、100mg、125mg或150mg的ASM可以单剂量联合化合物A一起口服施用，包括每天单剂量的10mg至25mg、10mg至30mg和10mg至40mg，诸如每天单剂量的10mg至25mg的ASM。相关地，在前面段落中讨论的ASM的任何剂量都可包括在单位剂型中。
在本文描述的本发明的方法和用途的一些实施方案中，将ASM与化合物A联合施用，ASM是一种或多种苯二氮卓(例如，二钾氯氮卓、氯巴占、氯硝西泮、地西泮、劳拉西泮、硝西泮等)、卡马西平、苯巴那酯、非尔氨酯、加巴喷丁、拉科酰胺、拉莫三嗪、左乙拉西坦、奥卡西平、苯巴比妥、苯妥英、普瑞巴林、卢非那胺、噻加宾、托吡酯、丙戊酸、氨己烯酸或唑尼沙胺。在一些实施方案中，与化合物A联合施用的ASM是丙戊酸、左乙拉西坦、苯妥英、拉科酰胺、苯巴那酯或它们的组合。
在本文描述的本发明的方法和用途的一些实施方案中，ASM通过不增强人体中的Kv7钾通道开放来治疗患者的癫痫发作病症(例如，通过不同于化合物A的机制来治疗患者的癫痫发作病症)。在一些实施方案中，ASM通过阻断人的钠通道来降低神经元兴奋。已知作为钠通道阻滞剂的ASM包括，例如，卡马西平、拉科酰胺、拉莫三嗪、奥卡西平、苯妥英、卢非那胺、托吡酯和唑尼沙胺。在一些实施方案中，钠通道阻滞剂通过促进失活和减少对轴突初始段(AIS)以及轴突自身的电活性的贡献来抑制神经元动作电位激发和传递。
在一些实施方案中，本公开涉及治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法，该方法包括以当联合施用时治疗有效的量向人联合施用(例如，口服)化合物A和卡马西平。
在一些实施方案中，本公开涉及治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法，该方法包括以当联合施用时治疗有效的量向人联合施用(例如，口服)化合物A和拉科酰胺。
在一些实施方案中，本公开涉及治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法，该方法包括以当联合施用时治疗有效的量向人联合施用(例如，口服)化合物A和拉莫三嗪。
在一些实施方案中，本公开涉及治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法，该方法包括以当联合施用时治疗有效的量向人联合施用(例如，口服)化合物A和奥卡西平。
在一些实施方案中，本公开涉及治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法，该方法包括以当联合施用时治疗有效的量向人联合施用(例如，口服)化合物A和苯妥英。
在一些实施方案中，本公开涉及治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法，该方法包括以当联合施用时治疗有效的量向人联合施用(例如，口服)化合物A和卢非酰胺。
在一些实施方案中，本公开涉及治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法，该方法包括以当联合施用时治疗有效的量向人联合施用(例如，口服)化合物A和托吡酯。
在一些实施方案中，本公开涉及治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法，该方法包括以当联合施用时治疗有效的量向人联合施用(例如，口服)化合物A和唑尼沙胺。
在本文描述的本发明的方法和用途的一些实施方案中，ASM通过阻断人的钙通道来降低神经元兴奋。已知作为钙通道阻滞剂的ASM包括，例如，加巴喷丁、苯巴比妥、普瑞巴林和唑尼沙胺。在一些实施方案中，钙通道阻滞剂通过减少突触前神经递质释放而减少兴奋性传递，突触前神经递质释放是一种钙依赖性过程。
在一些实施方案中，本公开涉及治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法，该方法包括以当联合施用时治疗有效的量向人联合施用(例如，口服)化合物A和加巴喷丁。
在一些实施方案中，本公开涉及治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法，该方法包括以当联合施用时治疗有效的量向人联合施用(例如，口服)化合物A和苯巴比妥。
在一些实施方案中，本公开涉及治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法，该方法包括以当联合施用时治疗有效的量向人联合施用(例如，口服)化合物A和普瑞巴林。
在一些实施方案中，本公开涉及治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法，该方法包括以当联合施用时治疗有效的量向人联合施用(例如，口服)化合物A和加巴喷丁。
在本文描述的本发明的方法和用途的一些实施方案中，ASM通过结合人的突触小泡糖蛋白2A(SV2A)来降低神经元兴奋。已知结合SV2A的ASM包括，例如，左乙拉西坦。在一些实施方案中，SV2A结合剂通过减少突触前神经递质释放而减少兴奋性传递。
在一些实施方案中，本公开涉及治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法，该方法包括以当联合施用时治疗有效的量向人联合施用(例如，口服)化合物A和左乙拉西坦。
在本文描述的本发明的方法和用途的一些实施方案中，ASM增加了人的神经元抑制。已知增加神经元抑制的ASM包括，例如，苯二氮卓(例如，二钾氯氮卓、氯巴占、氯硝西泮、地西泮、劳拉西泮、硝西泮等)、非尔氨酯、苯巴比妥、噻加宾、托吡酯、丙戊酸和氨己烯酸。在一些实施方案中，ASM是谷氨酸能试剂。在一些方面，谷氨酸能试剂降低了该神经递质对突触后膜上的AMPA或NMDA受体的作用。在一些实施方案中，谷氨酸能试剂是卡马西平、非尔氨酯、拉莫三嗪、普瑞巴林、苯妥英、普瑞巴林、噻加宾或托吡酯。在其他实施方案中，ASM是GABA能试剂。在一些方面，GABA能试剂是苯二氮卓(例如，二钾氯氮卓、氯巴占、氯硝西泮、地西泮、劳拉西泮、硝西泮等)、非尔氨酯、苯巴比妥、噻加宾、托吡酯、丙戊酸或氨己烯酸。在一些情况下，GABA能试剂可通过GABA受体活性的直接正变构调节来影响GABA受体(例如，苯二氮卓)。在其他情况下，GABA能试剂可经由抑制GABA转氨酶(例如，氨己烯酸)或GABA转运蛋白-1(GAT1，例如，噻加宾)间接增加GABA水平来影响GABA受体。
在一些实施方案中，本公开涉及治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法，该方法包括以当联合施用时治疗有效的量向人联合施用(例如，口服)化合物A和苯二氮卓(例如，二钾氯氮卓、氯巴占、氯硝西泮、地西泮、劳拉西泮、硝西泮等)。
在一些实施方案中，本公开涉及治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法，该方法包括以当联合施用时治疗有效的量向人联合施用(例如，口服化合物A和非尔氨酯。
在一些实施方案中，本公开涉及治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法，该方法包括以当联合施用时治疗有效的量向人联合施用(例如，口服)化合物A和苯巴比妥。
在一些实施方案中，本公开涉及治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法，该方法包括以当联合施用时治疗有效的量向人联合施用(例如，口服)化合物A和噻加宾。
在一些实施方案中，本公开涉及治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法，该方法包括以当联合施用时治疗有效的量向人联合施用(例如，口服)化合物A和托吡酯。
在一些实施方案中，本公开涉及治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法，该方法包括以当联合施用时治疗有效的量向人联合施用(例如，口服)化合物A和丙戊酸。
在一些实施方案中，本公开涉及治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法，该方法包括以当联合施用时治疗有效的量向人联合施用(例如，口服)化合物A和氨己烯酸。
在本发明的方法和用途的一些实施方案中，与化合物A联合施用的ASM是丙戊酸。在一些方面，丙戊酸与化合物A以上文段落中讨论的ASM的任何剂量联合施用。在一些实施方案中，丙戊酸与化合物A联合施用，以剂量为2mg/kg至16mg/kg施用于人，例如，丙戊酸可以4mg/kg至12mg/kg的剂量施用于人。
在本发明的方法和用途的一些实施方案中，与化合物A联合施用的ASM是苯妥英。在一些方面，苯妥英与化合物A以上文段落中讨论的ASM的任何剂量联合施用。在一些实施方案中，苯妥英与化合物A联合施用，以剂量为0.05mg/kg至5mg/kg施用于人，例如，苯妥英可以0.1mg/kg至1mg/kg的剂量施用(例如，口服)给人。
在本发明的方法和用途的一些实施方案中，与化合物A联合施用的ASM是拉科酰胺。在一些方面，拉科酰胺与化合物A以上文段落中讨论的ASM的任何剂量联合施用。在一些实施方案中，拉科酰胺与化合物A联合施用，以剂量为0.1mg/kg至5mg/kg施用于人，例如，拉科酰胺以0.5mg/kg至1mg/kg的剂量施用(例如，口服)给人。
在本发明的方法和用途的另一个实施方案中，与化合物A联合施用的ASM是苯巴那酯。在一些方面，苯巴那酯与化合物A以上文段落中讨论的ASM的任何剂量联合施用。在一些实施方案中，苯巴那酯与化合物A联合施用，以剂量为0.05mg/kg至5mg/kg施用于人，例如，苯巴那酯以0.1mg/kg至1mg/kg的剂量施用(例如，口服)给人。
在本发明的方法和用途的某些实施方案中，相对于单独个体化施用化合物A或ASM，联合施用化合物A和ASM(例如，丙戊酸、苯妥英、左乙拉西坦、拉科酰胺或苯巴那酯)提供了改善的功效(例如，增加了人癫痫发作次数的减少或癫痫发作的严重程度的降低)。在某些此类实施方案中，联合施用提供了累加效应，其中累加效应是指施用化合物A和施用一种或多种ASM的个体效应的总和。在一些实施方案中，联合施用提供协同效应，其中协同效应是指大于施用化合物A和施用一种或多种ASM的单独效应的总和的效应。
在另外的实施方案中，上述通过施用(例如，口服)化合物A治疗癫痫发作病症的方法和用途包括在进食条件下将化合物A施用于人。在一些实施方案中，与在禁食条件下(即无食物或时间上不接近于食物摄取)将化合物A口服施用于人相比，在进食条件下(即有食物或时间上接近食物摄取)将化合物A口服施用于人显著增强了化合物A的生物利用度和暴露。在一些实施方案中，与在禁食条件下将相同量的化合物A口服施用于人相比，在进食条件下将化合物A口服施用于人增加了化合物A的一种或多种药代动力学参数(例如Cmax、AUCinf、Tmax、t1/2λz等)。
在某些实施方案中，本文描述的方法和用途以药学上可接受的口服组合物的形式施用化合物A、ASM或化合物A和ASM两者，该组合物视情况而定包含化合物A、ASM或化合物A和ASM两者，以及一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。包含在这些组合物中的化合物A、ASM或化合物A和ASM两者的量可对应于本文描述的量中的一种或多种。在一些实施方案中，这些组合物是单位剂量。
包含化合物A、ASM或化合物A和ASM两者的药学上可接受的口服组合物的示例包括固体制剂(诸如片剂、胶囊剂、锭剂、糖锭剂、颗粒剂、粉剂、散剂、糯米纸囊剂、多颗粒剂和膜剂)、液体制剂(诸如水溶液、酏剂、酊剂、滋补剂、膏剂、混悬剂和分散剂)和雾化制剂(诸如喷雾剂和喷洒剂)。在一个实施方案中，化合物A的药学上可接受的口服组合物包括儿科混悬剂或颗粒剂。化合物A、ASM或化合物A和ASM两者的所有上述量可包含在此类制剂中，例如，包含5mg、10mg、15mg、10mg、25mg、30mg或35mg的化合物A的胶囊剂，包含5mg、10mg、15mg、10mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、75mg、85mg、90mg、95mg或100mg的ASM的胶囊剂，或包含5mg、10mg、15mg、10mg、25mg、30mg或35mg的化合物A和5mg、10mg、15mg、10mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、75mg、85mg、90mg、95mg或100mg的ASM的胶囊剂。
根据本文描述的方法和用途，适于化合物A、ASM或化合物A和ASM两者的施用的其他施用途径包括舌下和颊(例如，用在口中舌下或在脸颊内侧溶解的膜或其他组合物)、眼(例如，滴眼剂)、耳(例如，通过滴耳剂)、经口或经鼻吸入(例如，通过吹入或雾化)、皮肤或局部(例如，通过乳膏剂或洗剂)或经皮(例如，通过皮肤贴剂)。除了口服施用，化合物A、ASM或化合物A和ASM两者的其他肠内施用途径也可使用，包括阴道和直肠施用(例如，通过软膏剂、栓剂、灌肠剂)。
适于化合物A、ASM或化合物A和ASM两者的肠胃外施用的组合物的示例包括无菌可注射溶液、混悬剂或分散剂，包括水性或油性制剂，特别是水性制剂。在一些实施方案中，化合物A、ASM或化合物A和ASM两者根据本文描述的方法或用途以可注射的无菌水性制剂施用，该制剂包括肠胃外可接受的稀释剂或溶剂，诸如水、林格氏溶液、等渗氯化钠溶液、缓冲的水性溶液和含有可混溶的醇诸如1,3-丁二醇的水性溶液。用于化合物A、ASM或化合物A和ASM两者的肠胃外制剂的另外的合适的赋形剂包括，甘油单酯或甘油二酯；脂肪酸，诸如油酸及其甘油酯衍生物；天然的药学上可接受的油，诸如橄榄油或蓖麻油，包括它们的聚氧乙烯化形式；长链醇稀释剂或分散剂，诸如烷基纤维素，包括羧甲基纤维素；和表面活性剂，诸如吐温、司盘和其他乳化剂或生物利用度增强剂。
在另一个实施方案中，提供了联合口服施用化合物A和ASM以治疗口服施用后的抑郁病症的试剂盒。此类试剂盒除了化合物A和ASM联合口服施用的说明书之外，还包括化合物A、ASM或化合物A和ASM两者的多个口服剂量单位形式。
本文描述了本公开的另外的实施方案和实施例。这些实施方案和实施例是说明性的，并且不应被解释为限制所要求保护的发明的范围。
4.3.编号的实施方案
实施方案1.一种治疗有需要的人的癫痫发作病症的方法，所述方法包括以联合施用时的治疗有效量向所述人联合施用化合物A和抗癫痫药物(ASM)；其中化合物A是N-[4-(6-氟-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基)-2,6-二甲基苯基]-3,3-二甲基丁酰胺。
实施方案2.一种减少在患有癫痫发作病症的人中发挥疗效所需的抗癫痫药物(ASM)的量的方法，所述方法包括与所述ASM一起向所述人施用当与所述ASM一起施用时有效实现这种减少的一定量的化合物A；其中化合物A是N-[4-(6-氟-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基)-2,6-二甲基苯基]-3,3-二甲基丁酰胺。
实施方案3.一种减少在患有癫痫发作病症的人中发挥疗效所需的化合物A的量的方法，所述方法包括联合所述化合物A一起向所述人施用当与所述化合物A一起施用时有效实现这种减少的一定量的抗癫痫药物(ASM)；其中化合物A是N-[4-(6-氟-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基)-2,6-二甲基苯基]-3,3-二甲基丁酰胺。
实施方案4.根据实施方案1至3中任一项所述的方法，其中所述方法包括增强所述人体中的Kv7钾通道的开放。
实施方案5.一种增强人Kv7钾通道的开放的方法，所述方法包括以当联合施用时治疗有效的量向所述人联合施用化合物A和抗癫痫药物(ASM)；其中化合物A是N-[4-(6-氟-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基)-2,6-二甲基苯基]-3,3-二甲基丁酰胺；并且其中所述人患有癫痫发作病症。
实施方案6.根据实施方案4或实施方案5所述的方法，其中所述Kv7钾通道是Kv7.2、Kv7.3、Kv7.4或Kv7.5中的一种或多种。
实施方案7.根据实施方案6所述的方法，其中所述方法对于相对于Kv7.1增强Kv7.2、Kv7.3、Kv7.4或Kv7.5中的一种或多种的开放是选择性的。
实施方案8.根据实施方案4或5所述的方法，其中所述方法包括开放Kv7.2/Kv7.3(KCNQ2/3)钾通道。
实施方案9.根据实施方案1至8中任一项所述的方法，其中所述ASM是苯二氮卓、卡马西平、苯巴那酯、非尔氨酯、加巴喷丁、拉科酰胺、拉莫三嗪、左乙拉西坦、奥卡西平、苯巴比妥、苯妥英、普瑞巴林、卢非酰胺、噻加宾、托吡酯、丙戊酸、氨己烯酸、唑尼沙胺或其组合。
实施方案10.根据实施方案1至9中任一项所述的方法，其中所述ASM是丙戊酸、左乙拉西坦、苯妥英、拉科酰胺或苯巴那酯。
实施方案11.根据实施方案1至10中任一项所述的方法，其中所述ASM不增强所述人体中的Kv7钾通道的开放。
实施方案12.根据实施方案1至11中任一项所述的方法，其中所述ASM降低人体中的神经元兴奋。
实施方案13.根据实施方案12所述的方法，其中所述ASM通过阻断所述人体中的钠通道来降低神经元兴奋。
实施方案14.根据实施方案12所述的方法，其中所述ASM通过阻断所述人体中的钙通道来降低神经元兴奋。
实施方案15.根据实施方案12所述的方法，其中所述ASM通过结合所述人体中的突触小泡糖蛋白2A(SV2A)来降低神经元兴奋。
实施方案16.根据实施方案1至11中任一项所述的方法，其中所述ASM增加所述人体中的神经元抑制。
实施方案17.根据实施方案1至11中任一项所述的方法，其中所述ASM是谷氨酸能试剂。
实施方案18.根据实施方案1至11中任一项所述的方法，其中所述ASM是GABA能试剂。
实施方案19.根据实施方案1至18中任一项所述的方法，其中所述癫痫发作病症与Kv7钾通道功能障碍相关。
实施方案20.根据实施方案1至19中任一项所述的方法，其中所述癫痫发作病症是局灶性发作癫痫。
实施方案21.根据实施方案1至20中任一项所述的方法，其中化合物A口服施用于人。
实施方案22.根据实施方案1至21中任一项所述的方法，其中所述ASM口服施用于人。
实施方案23.根据实施方案1至22中任一项所述的方法，其中化合物A以1mg至200mg的剂量施用于人。
实施方案24.根据实施方案1至23中任一项所述的方法，其中化合物A以2mg至100mg的剂量施用于人。
实施方案25.根据实施方案1至24中任一项所述的方法，其中化合物A以5mg至50mg的剂量施用于人。
实施方案26.根据实施方案1至25中任一项所述的方法，其中化合物A以5mg、10mg、15mg、20mg或25mg的剂量施用于人。
实施方案27.根据实施方案1至26中任一项所述的方法，其中化合物A以20mg的剂量施用于人。
实施方案28.根据实施方案1至22中任一项所述的方法，其中化合物A以至少10mg的剂量施用于人。
实施方案29.根据实施方案28所述的方法，其中化合物A以至少20mg的剂量施用于人。
实施方案30.根据实施方案28所述的方法，其中化合物A以至少50mg的剂量施用于人。
实施方案31.根据实施方案1至22中任一项所述的方法，其中化合物A以每天5mg至1000mg的剂量施用于人。
实施方案32.根据实施方案31所述的方法，其中化合物A以每天5mg至500mg的剂量施用于人。
实施方案33.根据实施方案31所述的方法，其中化合物A以每天5mg至250mg的剂量施用于人。
实施方案34.根据实施方案31所述的方法，其中化合物A以每天20mg至150mg的剂量施用于人。
实施方案35.根据实施方案31所述的方法，其中化合物A以每天100mg的剂量施用于人。
实施方案36.根据实施方案1至22中任一项所述的方法，其中将化合物A以0.01mg/kg至2.0mg/kg的剂量施用于人。
实施方案37.根据实施方案36所述的方法，其中化合物A以0.03mg/kg至1.0mg/kg的剂量施用于人。
实施方案38.根据实施方案36所述的方法，其中化合物A以0.05mg/kg至0.5mg/kg的剂量施用于人。
实施方案39.根据实施方案1至38中任一项所述的方法，其中化合物A在用餐之前约30分钟至用餐之后约2小时之间口服施用于人。
实施方案40.根据实施方案39所述的方法，其中化合物A在用餐期间或在用餐之后15分钟内口服施用于人。
实施方案41.根据实施方案1至40中任一项所述的方法，其中所述ASM是丙戊酸。
实施方案42.根据实施方案41所述的方法，其中所述丙戊酸以2mg/kg至16mg/kg的剂量施用于人。
实施方案43.根据实施方案41所述的方法，其中所述丙戊酸以4mg/kg至12mg/kg的剂量施用于人。
实施方案44.根据实施方案1至40中任一项所述的方法，其中所述ASM是苯妥英。
实施方案45.根据实施方案44所述的方法，其中所述苯妥英以0.05mg/kg至5mg/kg的剂量施用于人。
实施方案46.根据实施方案44所述的方法，其中所述苯妥英以0.1mg/kg至1mg/kg的剂量施用于人。
实施方案47.根据实施方案1至40中任一项所述的方法，其中所述ASM是拉科酰胺。
实施方案48.根据实施方案47所述的方法，其中所述拉科酰胺以0.1mg/kg至5mg/kg的剂量施用于人。
实施方案49.根据实施方案47所述的方法，其中所述拉科酰胺以0.5mg/kg至1mg/kg的剂量施用于人。
实施方案50.根据实施方案1至40中任一项所述的方法，其中所述ASM是苯巴那酯。
实施方案51.根据实施方案50所述的方法，其中所述苯巴那酯以0.05mg/kg至5mg/kg的剂量施用于人。
实施方案52.根据实施方案50所述的方法，其中所述苯巴那酯以0.1mg/kg至1mg/kg的剂量施用于人。
实施方案53.根据实施方案1至52中任一项所述的方法，其中相对于单独施用化合物A或ASM，化合物A和ASM的联合施用提供了改善的功效。
5.实施例
进行研究以确定化合物A与其他ASM的作用。
5.1.实施例1.化合物A单独和与普通ASM组合的抗痉挛作用
在口服给药之后，在小鼠最大电休克(MES)测定中评价化合物A与其他ASM的相互作用，以确定某些组合是有利的还是不利的。通过计算角膜刺激后强直性后肢癫痫发作的动物比例来定量功效。
5.1.1化合物A
当单独给药时，化合物A(1mg/kg、2mg/kg、4mg/kg或8mg/kg)在口服给药之后0.5小时和2小时的MES测定中减少了强直性癫痫发作的发生。将浓度响应关系拟合到结合等温线，其中血浆浓度的IC50为154nM，并且脑浓度的IC50为275nM(每个时间点每个剂量，n＝7)。
化合物制备：化合物A最初溶解在DMSO中。然后将该溶液加入到0.5％甲基纤维素溶液中以产生更均匀和更少聚集的化合物混悬液。从具有最高浓度的化合物A的管中制备系列稀释液，并且在动物给药之前进一步涡旋化合物混悬液。DMSO的最终浓度为5％，该量在MES测定中没有明显毒性或神经保护作用。将苯妥英和丙戊酸溶解在100％盐水(0.9％)中。将左乙拉西坦溶解在含0.5％甲基纤维素和0.2％吐温80的去离子水溶液中。
动物：使用购自Harlan-Envigo的成年雄性CF-1白化小鼠(25g至35g)。在整个实验中，每笼饲养四只小鼠，并且它们可自由获取过滤水和饲料。
MES测定：除非另有说明，否则化合物在测试之前通过管饲法口服施用。在MES测试期间，通过角膜电极将60Hz交流电(50mA)递送至小鼠0.2秒。在电流递送之前，将一滴0.5％的爱尔凯因(Alcaine)溶液置于眼睛上。随后将电极轻轻地置于动物的眼睛上，并通过用脚踏板激励器触发来启动电击。用手约束动物，并在电击和癫痫发作开始时轻轻释放。监测动物的后肢强直性伸展作为该测试的终点。
统计分析：所有统计数据使用Prism第7版软件(Graphpad软件)计算。用于每个实验的方法在结果章节中指出。浓度-响应曲线被计算为对该方程的最佳拟合
Y＝底部+(顶部-底部)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))
其中X是血浆浓度的对数。除非另有说明，否则底部被限制为0。顶部被限制为通过溶媒控制测量实验确定的值。
化合物A的剂量响应：在2个不同的时间点，在小鼠MES测定中评价口服施用1mg/kg、2mg/kg、4mg/kg或8mg/kg化合物A后的剂量响应：在口服给药之后0.5小时和2小时(图1和图2)。将动物随机分配至溶媒(2小时，n＝7，0.5小时，n＝5)或不同剂量组(每个时间点每个剂量，n＝7)，并由对治疗条件不知情的实验者进行MES测定。
在2小时时间点时，化合物A示出通过后肢伸展评估的强直性癫痫发作次数的剂量-依赖性减少。与溶媒治疗的小鼠相比，8mg/kg的剂量提供了显著的保护(具有强直性癫痫发作的小鼠数目/测试的总数：1mg/kg：5/7(p＝0.939)，2mg/kg：4/7(p＝0.598)，4mg/kg：2/7(p＝0.085)，8mg/kg：1/7(p＝0.023)，溶媒：6/7。-p值使用Dunnett多重比较检验通过单因素方差分析计算)。使用同一数据计算免于后肢强直性伸展的小鼠百分比(1mg/kg：28.6％(p＞0.999)，2mg/kg：42.9％(p＞0.999)，4mg/kg：71.4％(p＝0.103)，8mg/kg：85.7％(p＝0.029)，溶媒：14.3％；p值通过Fisher精确检验计算)。在功效测试之后立即从小鼠收集脑和血浆样本，并使用UHPLC-ESI-MS/MS分析(表1)。
表1.化合物A的血浆和脑浓度
1mg/kg的总脑和血浆浓度：分别为0.19μM(70.2ng/g)和0.1μM(35.8ng/mL)，2mg/kg：分别为0.21μM(75.8ng/g)和0.13μM(46.7ng/mL)，4mg/kg：分别为0.36μM(131.3ng/g)和0.23μM(83ng/mL)，8mg/kg：0.56μM(207.7ng/g)及0.43μM(157.8ng/mL)。
在0.5小时时间点时，1mg/kg、2mg/kg和4mg/kg的剂量示出强直性癫痫发作伴后肢伸展的次数的剂量依赖性减少，其中4mg/kg与溶媒治疗的小鼠相比提供了显著的保护(1mg/kg：4/7(p＝0.449)，2mg/kg：2/7(p＝0.088)，4mg/kg：1/7(p＝0.032)，8mg/kg：3/7(p＝0.215)，溶媒：5/5；单因素方差分析使用Dunnett多重比较检验计算。在8mg/kg时，1/7动物在刺激之后具有两次强直性癫痫发作伴后肢伸展，这种情况在其他剂量组或溶媒治疗的小鼠中没有另外看到。对于免于强直性癫痫发作的后肢强直性伸肌成分的小鼠，观察到类似的剂量依赖性功效(1mg/kg：42.9％(p＞0.205)，2mg/kg：71.4％(p＝0.028)，4mg/kg：85.7％(p＝0.015)，8mg/kg：71.4％(p＝0.028)，溶媒：0％；使用Fisher精确检验计算)。在功效测试之后立即从小鼠收集脑和血浆样本，并使用UHPLC-ESI-MS/MS分析(表2)。
表2.化合物A的血浆和脑浓度
每个剂量组的平均总脑和血浆浓度为：1mg/kg：分别为0.27μM(97.9ng/g)和0.13μM(48.9ng/mL)，2mg/kg：分别为0.36μM(132ng/g)和0.22μM(80.7ng/mL)，4mg/kg：分别为0.64μM(234.7ng/g)和0.42μM(154.4ng/mL)，8mg/kg：分别为1.09μM(402ng/g)和0.71μM(261.3ng/mL)。
图3示出了浓度-响应关系，其总结了MES测定中化合物A的所有PK-PD数据。上图示出强直性癫痫发作的抑制作为血浆浓度的函数，并且下图示出了抑制作为脑浓度的函数。尽管在0.5小时观察到与2小时预治疗时间相比更高的脑和血浆暴露，但在每个暴露水平观察到的功效反映了脑或血浆浓度，而与给药之后的时间无关(图3)。由于化合物A预治疗2小时后剂量响应明确，因此选择该时间点用于进一步研究。将给药之后2小时收集的数据拟合到浓度-响应曲线，其中仅IC50和Hill系数变化以进行最佳拟合。水平虚线表示在溶媒中强直性癫痫发作的发生率：94.1±0.03％(平均值±S.E.M.，n＝85)。该值取作曲线的顶部，并且底部限制为0(完全抑制)。基于脑和血浆浓度的IC50估算分别为275nM和154nM。
5.1.2化合物A和丙戊酸的组合
对于初始组合研究，选择预治疗2小时的化合物A的剂量为1mg/kg PO，以及预治疗0.5小时的丙戊酸的剂量为100mg/kg IP。进行第二个实验以重复第一次研究的发现，并测试丙戊酸的另外的剂量(30mg/kg和56mg/kg IP)，以便定量化合物A(1mg/kg PO)产生的另外功效的程度。下文讨论了这两个实验的组合结果。
在功效测试之前2小时，随机分配动物并口服给药化合物A或溶媒，随后在功效测试之前0.5小时IP给药丙戊酸或溶媒。基于该实验设计，单剂量对照组或溶媒对照组中的动物也接受两个剂量，每个剂量为：(化合物A+溶媒，溶媒+丙戊酸，化合物A+丙戊酸，或溶媒+溶媒)。
当与化合物A单剂量治疗的小鼠相比时，以100mg/kg共给药化合物A和丙戊酸导致在没有强直性癫痫发作且后肢伸展的小鼠数目的显著增加(化合物A+100mg/kg的丙戊酸：10/15相对于1mg/kg的化合物A+溶媒：4/15(p＝0.021)，和相对于溶媒+100mg/kg的丙戊酸：5/15(p＝0.059)；p值通过双因素方差分析随后通过Dunnett多重比较检验计算。在化合物A和56mg/kg的丙戊酸的组合给药中，注意到对强直性癫痫发作的保护作用增加的趋势，而在化合物A和30mg/kg的丙戊酸的组合施用中，没有注意到差异：化合物A+56mg/kg的丙戊酸：4/8相对于1mg/kg的化合物A+溶媒：4/15(p＝0.396)和相对于溶媒+56mg/kg的丙戊酸：1/7(p＝0.226)；化合物A+30mg/kg的丙戊酸：2/8相对于1mg/kg的化合物A+溶媒：4/15(p＝0.995)和相对于溶媒+56mg/kg的丙戊酸：0/8(p＝0.463)(图4)。
与溶媒治疗的动物相比，化合物A(1mg/kg)+丙戊酸在56mg/kg和100mg/kg的两个组合剂量组都产生了显著的保护作用：化合物A+100mg/kg的丙戊酸：10/15(p＝0.0001)和化合物A+56mg/kg的丙戊酸：4/8(p＝0.0381)相对于溶媒+溶媒：0/15；p值通过单因素方差分析随后通过Dunnett多重比较检验计算。
在功效测试之后立即从小鼠收集血浆和脑样本，并使用UHPLC-ESI-MS/MS分析(表3)。
表3.化合物A和丙戊酸的血浆和脑浓度
当单独给药或与丙戊酸共给药时，化合物A的血浆或脑浓度没有显著差异。1mg/kg的化合物A的平均总血浆和脑浓度当单独给药时为：0.066μM(24ng/mL)和0.16μM(59ng/g)，当与丙戊酸(30mg/kg)一起给药时为：0.038μM(14ng/mL)和0.075μM(28ng/g)，当与丙戊酸(56mg/kg)一起给药时为：0.050μM(18ng/mL)和0.117μM(43ng/g)，并且当与丙戊酸(100mg/kg)一起给药时为：0.042μM(15ng/mL)和0.097μM(36ng/g)。同样，当与化合物A组合时，3个测试剂量的丙戊酸的血浆或脑浓度没有显著变化。
还分析了化合物A和VA的共给药实验作为化合物A对VA的浓度-响应关系的作用，以定量对于VA对强直性癫痫发作的抑制对IC50的作用(图5)。
5.1.3化合物A和左乙拉西坦的组合
据报道，左乙拉西坦在MES测定中无活性(ED50＞500mg/kg)，但在6Hz、32mAmp测定中有活性，其中ED50＝19.4mg/kg(Barton等人，Epilepsy Res.，2001年，第47卷：第217-227页)。选择已知具有生物活性的高剂量的左乙拉西坦。
通过120mg/kg和150mg/kg的IP给药，在MES测定中评价左乙拉西坦。这些剂量分别产生1001μM(170.3μg/mL)和1154μM(196.4μg/mL)的血浆浓度，以及583μM(99.2μg/g)和540μM(91.9μg/g)的脑浓度(表4)。
表4.化合物A和左乙拉西坦的血浆和脑浓度
/>
与溶媒治疗的小鼠相比，两种剂量都没有显著增加没有强直性癫痫发作的小鼠比例：120mg/kg：0/6(p＝0.98)，150mg/kg：2/8(p＝0.93)，溶媒：2/18；p值通过单因素方差分析通过Dunnett多重比较测试计算(图6)。
与1mg/kg或1.5mg/kg化合物A的共给药对左乙拉西坦的血浆或脑水平没有作用：957μM(163μg/mL)血浆和554μM(943μg/g)脑(LEV 120mg/kg+1mg/kg化合物A)；1235μM(210μg/mL)血浆和531μM(90.4μg/g)脑(LEV 150mg/kg+1.5mg/kg化合物A)。单独使用1mg/kg的化合物A或与120mg/kg的左乙拉西坦共给药的化合物A的暴露值分别为血浆中0.03μM(11.1ng/mL)和0.03μM(11.1ng/mL)，以及脑中0.06μM(20.9ng/g)和0.05μM(20.0ng/g)。单独使用1.5mg/kg的化合物A或与150mg/kg的左乙拉西坦共给药的化合物A的暴露值分别为血浆中0.04μM(15ng/mL)和0.07μM(25ng/mL)，以及脑中0.08μM(31ng/g)和0.14μM(52ng/g)。
在任一剂量组合下没有强直性癫痫发作的小鼠比例的增加没有显著大于单独化合物A的作用：1mg/kg的化合物A：2/11相对于化合物A(1mg/kg)+LEV(120mg/kg)：2/5，p＝0.578；和1.5mg/kg的化合物A：3/8相对于化合物A(1.5mg/kg)+LEV(150mg/kg)：4/8，p＝0.805；p值通过双因素方差分析通过Dunnett多重比较测试计算(图6)。
5.1.4化合物A和苯妥英的组合
KV7通道与NaV1.6和NaV1.2通道共定位在轴突初始段中。由于化合物A激活KV7通道，并且苯妥英抑制电压门控钠通道，因此预期有利的相互作用，但大小未知。
在MES测定中，在存在或不存在预先确定的恒定剂量的苯妥英(2mg/kg，IP，2小时预治疗)的情况下，测试PO施用2小时预治疗时间的化合物A(0.25mg/kg、0.75mg/kg、1mg/kg、1.5mg/kg和2.5mg/kg)的剂量响应。
与溶媒治疗的动物相比，化合物A的单剂量导致没有强直性癫痫发作的动物比例的剂量依赖性增加：0.25mg/kg的化合物A：0/8(p＝0.999)，0.75mg/kg：2/8(p＝0.948)，1mg/kg：2/8(p＝0.948)，1.5mg/kg：2/8(p＝0.948)，2.5mg/kg：4/8(p＝0.12)；2mg/kg的苯妥英：6/24(p＝0.72)；溶媒2/24。当与苯妥英共给药时，与溶媒治疗的动物相比，0.75mg/kg、1mg/kg、1.5mg/kg和2.5mg/kg剂量的化合物A导致没有强直性癫痫发作的动物比例显著增加：化合物A0.25mg/kg+苯妥英2mg/kg：3/8(p＝0.48)，化合物A 0.75mg/kg+苯妥英2mg/kg：5/8(p＝0.018)，化合物A1mg/kg+苯妥英2mg/kg：6/8(p＝0.002)，化合物A1.5mg/kg+苯妥英2mg/kg：6/8(p＝0.002)，化合物A 2.5mg/kg+苯妥英2mg/kg：7/8(p＝0.0001)；p值通过单因素方差分析、Dunnett多重比较测试计算(图7)。
将施用单剂量的化合物A的动物与共给药化合物A和苯妥英的组进行比较，结果示出在剂量为1mg/kg和1.5mg/kg的共给药组中，没有强直性癫痫发作的动物比例显著增加。当将单剂量的苯妥英与共给药组进行比较时，观察到类似的趋势，其中在1mg/kg、1.5mg/kg和2.5mg/kg的化合物A时观察到显著的癫痫发作自由度：化合物A 0.25+苯妥英2mg/kg组合：3/8相对于单剂量化合物A(0.25mg/kg)：0/8(p＝0.165)和6/24苯妥英(2mg/kg；p＝0.715)，化合物A 0.75mg/kg+苯妥英2mg/kg的组合：5/8相对于单剂量化合物A(0.75mg/kg)：2/8(p＝0.165)和6/24苯妥英(2mg/kg；p＝0.074)，化合物A1mg/kg+苯妥英2mg/kg的组合：6/8相对于单剂量化合物A(1mg/kg)：2/8(p＝0.048)和6/24苯妥英(2mg/kg；p＝0.012)，化合物A1.5mg/kg+苯妥英2mg/kg的组合：6/8相对于单剂量化合物A(1.5mg/kg)：2/8(p＝0.048)和6/24(2mg/kg的苯妥英；p＝0.012)，化合物A 2.5mg/kg+苯妥英2mg/kg的组合：7/8相对于单剂量化合物A(2.5mg/kg)：4/8(p＝0.165)和6/24苯妥英(2mg/kg；p＝0.001)；p值通过双因素方差分析随后通过Dunnett多重比较检验计算(图7)。
当与化合物A一起或不一起给药时，苯妥英的血浆或脑浓度没有显著变化(表4)。
表4.化合物A和苯妥英的血浆和脑浓度
苯妥英2mg/kg单剂量的血浆和脑暴露分别为：4.1μM(1019ng/mL)和4.2μM(1052ng/g)，与0.25mg/kg的化合物A组合：4.0μM(1014ng/mL)和4.2μM(1055ng/g)，与0.75mg/kg的化合物A组合：4.1μM(1025ng/mL)和2.9μM(1070ng/g)，与1mg/kg的化合物A组合：3.9μM(989ng/mL)和5.0μM(1263ng/g)，与1.5mg/kg的化合物A组合：4.8μM(1210ng/mL)和4.8μM(1196ng/g)，并且与2.5mg/kg的化合物A组合：3.9μM(971ng/mL)和2.9μM(1051ng/g)。
类似地，当单独给药或与苯妥英组合时，化合物A的血浆和脑浓度没有显著变化(表5)。
表5.化合物A和苯妥英的血浆和脑浓度
0.25mg/kg的化合物A单剂量，其血浆和脑浓度相对于与苯妥英(2mg/kg)组合分别为：0.01μM(4.3ng/mL)和0.04μM(14.8ng/g)相对于0.02μM(5.6ng/mL)和0.05μM(18.4ng/g)，0.75mg/kg单剂量相对于组合：0.03μM(11.7ng/mL)和0.12μM(43.8ng/g)相对于0.04μM(16.0ng/mL)和0.15μM(56.7ng/g)，1mg/kg单剂量相对于组合：0.05μM(17.0ng/mL)和0.10μM(35.0ng/g)相对于0.05μM(19.0ng/mL)和0.10μM(37.0ng/g)，1.5mg/kg单剂量相对于组合：0.05μM(19.5ng/mL)和0.08μM(30.8ng/g)相对于0.06μM(23.4ng/mL)和0.11μM(42ng/g)，2.5mg/kg单剂量相对于组合：0.12μM(45.1ng/mL)和0.39μM(144.1ng/g)相对于0.16μM(58.4ng/mL)和0.51μM(186.5ng/g)。
还分析了化合物A和苯妥英的共给药实验作为苯妥英对化合物A的浓度-响应关系的作用，以定量对于化合物A对强直性癫痫发作的抑制对IC50的作用(图8)。
5.1.5结论
化合物A在小鼠MES测定中证明了剂量-依赖性功效，其与血浆和脑暴露值良好相关。化合物A与100mg/kg的丙戊酸或2mg/kg的苯妥英的组合导致在MES测定中观察到的功效高于单独使用任一化合物所观察到的功效。当与单独的化合物A相比时，化合物A与左乙拉西坦的共给药在MES测定中没有提供显著的功效改善。
丙戊酸(30mg/kg、56mg/kg或100mg/kg IP，在MES之前0.5小时给药)：将化合物A(1mg/kg PO，MES之前2小时)与以100mg/kg给药的丙戊酸(VA)组合产生的抑制作用大于当单独施用化合物A时产生的抑制作用(1mg/kg的化合物A+100mg/kg的丙戊酸：10/15相对于1mg/kg的化合物A+溶媒：4/15(p＝0.021))(单剂量组：n＝15，1mg/kg的化合物A，n＝15，100mg/kg的丙戊酸，n＝7，30mg/kg和56mg/kg的丙戊酸；组合剂量组：n＝15，1mg/kg的化合物A+100mg/kg的丙戊酸，n＝8，化合物A+30mg/kg和56mg/kg的丙戊酸；n＝15，溶媒)。在MES测定中，以1mg/kg给药的化合物A降低了防止强直性癫痫发作所需的丙戊酸的血浆水平。单独的丙戊酸的IC50为1440μM。当与1mg/kg化合物A组合时，丙戊酸的IC50为608μM，下降至1/2.37。1mg/kg的化合物A的平均总血浆浓度当单独给药时为：0.07μM(24.2ng/mL)，并且当与丙戊酸(30mg/kg)一起给药时为：0.04μM(14.0ng/mL)，当与丙戊酸(56mg/kg)一起给药时为：0.03μM(12.0ng/mL)，并且当与丙戊酸(100mg/kg)一起给药时为：0.04μM(15.0ng/mL)。
左乙拉西坦(120mg/kg和150mg/kg IP，在MES之前2小时给药)：1mg/kg剂量的化合物A产生66±14nM的血浆浓度(平均值±SEM，n＝15)并使强直性癫痫发作的比例减少26.7％。当与单独的化合物A相比时，化合物A与左乙拉西坦(LEV)的共给药在防止强直性癫痫发作的保护方面没有提供改善：1mg/kg的化合物A：2/11相对于化合物A(1mg/kg)+LEV(120mg/kg)：2/5，p＝0.578；和1.5mg/kg的化合物A：3/8相对于化合物A(1.5mg/kg)+LEV(150mg/kg)：4/8，p＝0.805。单独1mg/kg的化合物A或与120mg/kg的LEV共给药的化合物A的血浆浓度分别为0.03μM(11.1ng/mL)和0.03μM(11.1ng/mL)，单独1.5mg/kg的化合物A或与150mg/kg的LEV共给药的血浆浓度分别为0.041μM(15ng/mL)和0.068μM(25ng/mL)。
苯妥英(2mg/kg IP，在MES之前2小时给药)：化合物A与以2mg/kg给药的苯妥英组合产生了比单独给药化合物A时更大的抑制作用。当在MES之前2小时与苯妥英共给药时，与溶媒治疗的动物相比，0.75mg/kg、1mg/kg、1.5mg/kg和2.5mg/kg口服剂量的化合物A导致没有强直性癫痫发作的小鼠比例显著增加：化合物A 0.25mg/kg+苯妥英2mg/kg：3/8(p＝0.48)，化合物A0.75mg/kg+苯妥英2mg/kg：5/8(p＝0.013)，化合物A1mg/kg+苯妥英2mg/kg：6/8(p＝0.002)，化合物A1.5mg/kg+苯妥英2mg/kg：6/8(p＝0.002)，化合物A 2.5mg/kg+苯妥英2mg/kg：7/8(p＝0.0001)。单独的化合物A的IC50为147nM。当与2mg/kg苯妥英组合时，化合物A的IC50为39.7nM。当单独给药或与苯妥英组合时，化合物A的血浆浓度没有显著变化：0.25mg/kg单剂量的化合物A相对于与苯妥英(2mg/kg)组合：0.01μM(4.3ng/mL)相对于0.02μM(5.6ng/mL)，0.75mg/kg单剂量相对于组合：0.03μM(11.7ng/mL)相对于0.04μM(16ng/mL)，1mg/kg单剂量相对于组合：0.05μM(17ng/mL)相对于0.05μM(19ng/mL)，1.5mg/kg单剂量相对于组合：0.05μM(19.5ng/mL)相对于0.06μM(23.4ng/mL)，2.5mg/kg单剂量相对于组合：0.12μM(45.1ng/mL)相对于0.16μM(58.4ng/mL)。
5.2.实施例2.化合物A单独和与拉科酰胺组合的抗痉挛作用
在口服给药之后，在小鼠最大电休克癫痫发作(AC-MES)测定中评价化合物A的功效及其与拉科酰胺的药理学相互作用。
这些研究的目的是在这些化合物单次口服施用之后在小鼠中在AC-MES测定中表征化合物A的剂量依赖性抗痉挛活性及其与拉科酰胺的药理学相互作用。AC-MES测定通常对非选择性钠通道阻滞剂和钾通道开放剂有响应，并且已经用作部分发作癫痫发作的转化动物模型。MES测定已广泛用于筛选和表征新型抗癫痫发作化合物(等人，EpilepsyRes.，1991年，第8卷第2期：第79-94页；Piredda等人，J Pharmacol Exp Ther.，1985年，第232卷第3期：第741-745页；以及White等人，Ital J Neurol Sci.，1995年，第16卷第1-2期：第73-77页)。在足够高的电流下电休克刺激后，小鼠和大鼠表现出强直性伸展，随后是后肢阵挛。如果测试化合物能够防止强直性伸展，则认为它是保护性的。
在单PO剂量后，在雄性CF-1小鼠中在AC-MES测定中测试化合物A和拉科酰胺的抗痉挛功效，以及化合物A和拉科酰胺组合的作用。获得血浆和脑样本以了解药物浓度和功效之间的关系。
5.2.1材料和方法
测试化合物——化合物A
标识： 化合物A
批号： 批次12
物理描述： 固体白色粉末
纯度： 98.8％
供应商： Xenon Pharmaceuticals Inc.
测试化合物——拉科酰胺
标识： 拉科酰胺
批号： 批次03
物理描述： 白色粉末
纯度： ＞95％
供应商： Toronto Research Chemicals
溶媒F1：去离子(DI)水中的0.5％甲基纤维素和0.2％吐温-80。将0.8L的DI水加热至70℃至80℃。称量五克的甲基纤维素，并将其以小份缓慢加入到加热的DI水中。搅拌混合物直至其形成均匀的乳状混悬液。将混悬液移至冷室中并搅拌过夜以得到澄清溶液。将两mL的吐温-80加入到澄清溶液中，并用DI水稀释至1L。将溶媒溶液储存在2℃至8℃下。
溶媒F2：5％二甲基亚砜(DMSO)和F1。将5％ DMSO加入到F1溶媒中。
剂量制剂：将化合物A和拉科酰胺称量到分开的小瓶中。化合物A在F2溶媒中配制，并且拉科酰胺在F1溶媒中配制。将适量的溶媒加入到化合物A和拉科酰胺粉末中，然后在IKA T-18Ultra-Turrax匀浆器上混合，以产生所需浓度的均匀混悬液。然后将小瓶包裹在铝箔中以避光，并放置在搅拌板上直至给药。
测试系统
实验设计：将动物分配至表6、表7、表8和表9所示的治疗组。
用化合物A进行了三项研究，并且用拉科酰胺进行了四项研究。它们的相应研究日期示于表6至表9中。
表6.实验组——研究2A
PO：经口，口服。
表7.实验组——研究2B
PO：经口，口服。
表8.实验组——研究2C
PO：经口，口服。
表9.实验组——研究2D
PO：经口，口服。
盲法和随机化：施用化合物的实验者将各动物随机分配到治疗组。使对治疗组分配不知情的不同实验者进行该测试。另外，化合物给药和MES测试在不同的房间进行，以确保进行测试的实验者完全不知情治疗。在给定实验中测试的所有动物具有相等的机会分配到任何治疗组。
临床观察：在化合物A和拉科酰胺给药之后10分钟内，由对动物给药的实验者观察所有动物的异常行为，并且在刺激时由测试动物的实验者再次观察。记录任何正常行为的定性变化。
AC-MES测定：MES测试已广泛用于寻找抗痉挛物质(Piredda等人、等人和White等人)。MES测试被认为是全身强直性阵挛(GTC)癫痫发作的模型，并且提供了化合物防止癫痫发作扩散的能力的指示。在AC-MES模型中，通过角膜电极(HSE-HA啮齿类动物电击器，Harvard Apparatus，型号：73-0105)将交流电(60Hz，40mA)电击0.2秒。在电休克测定之前0.5小时，对CF-1小鼠PO给药(根据标准操作程序(SOP)TECH-006)溶媒或化合物A。在电休克刺激之前，立即局部施用0.5％爱尔凯因溶液(盐酸丙美卡因，每只眼睛一滴)麻醉动物的眼睛。然后约束小鼠，应用角膜电极，并施用电击。在幼稚动物中，癫痫发作的特征在于具有后肢强直性伸肌成分的初始全身强直性癫痫发作。当癫痫发作的后肢强直性伸肌成分消失后，认为动物免于MES诱导的癫痫发作，然后评分为“0”。如果小鼠显示强直性后肢伸展，则评分为“1”。在电休克后对血浆和脑收集的初始癫痫发作评分评估之后立即对小鼠实施安乐死。
样本收集和制备：通过使吸入异氟烷(根据SOP TECH-018)麻醉小鼠，直至它们到达手术麻醉平面。然后将注射器(1mL注射器，带有22号针头)插入到心脏的胸骨下(根据SOPTECH-031)。收集大约0.5mL血液，沉积到K2EDTA管中，并储存在冰上。然后通过颈椎脱位对动物实施安乐死。取出脑，放入预先称量的小瓶中，并在干冰上快速冷冻。在样本收集结束时，将血液在4℃下以4000rpm离心10分钟，并将血浆移液至标记管中。所有样本都储存在-80℃冰箱中，直至生物分析时。
血浆样本：通过使用乙腈的蛋白质沉淀进行血浆样本的提取。将稀释的血浆样本(50μL)与50μL内标物(IS)在1:1的乙腈:水(v:v)中的溶液混合，随后加入200μL乙腈。将样本涡旋30秒，以13,000rpm离心20分钟，倾析到96孔板中，并进一步在4000rpm下离心20分钟。通过超高效液相色谱电喷雾电离串联质谱法(UHPLC-ESI-MS/MS)分析样本，如下文生物分析程序中所述。
脑样本：在提取之前，使用IKA T18 Ultra-Turrax匀浆器，设置4分钟，将预先称量的全脑在1:1的乙腈:水(v:v)(每只小鼠脑2mL)中匀浆约1分钟。将匀浆以13,000rpm离心20分钟，并将50μL上清液完全如上文血浆样本所述进行处理。
生物分析程序：所有样本，包括血浆和脑匀浆提取物(包括在K2EDTA小鼠血浆中制备的校准标准品和质量控制(QC)样本)，通过蛋白质沉淀提取。向每份50μL样本的等分试样中加入50μL的IS溶液(2500ng/mL拉科酰胺的水:乙腈(1:1))和50μL的6％(v:v)磷酸的水溶液，然后加入200μL乙腈。涡旋混合1.7mL管中的样本，然后以13,000rpm离心20分钟。五十微升的上清液与150μL的水:乙腈(1:1)在96孔板中混合，将其混合后以4000rpm离心20分钟。然后将样本准备用于UHPLC-MS/MS分析。
通过研究级UHPLC-MS/MS方法，使用下文列出的条件，分析样本中的化合物A。
仪器：Sciex TQ-5500
基质：小鼠血浆(K2EDTA)
小鼠脑匀浆
分析物：化合物A
内标物(S)-5-氯-4-((1-(5-氯-2-氟苯基)乙基)氨基)-2-氟-N-(吡嗪-2-基)苯磺酰胺
(IS)：
MS条件：ESI：正极
化合物A：[M+H]+m/z 369.2/247.2
(S)-5-氯-4-((1-(5-氯-2-氟苯基)乙基)氨基)-2-氟-N-(吡嗪-2-基)苯磺酰胺(IS)：[M+H]+m/z 458.793/157
UHPLC条件：
流动相A：0.1％甲酸水溶液
流动相B：0.1％甲酸的乙腈溶液
校准标准品标准品制备为2.34ng/mL、4.69ng/mL、9.38ng/mL、18.8ng/mL、37.5ng/mL、75.0ng/mL、150ng/mL、300ng/mL、600ng/mL、1200ng/mL、2400ng/mL和4800ng/mL
QC样本QC样本以14.0ng/mL、225ng/mL和3600ng/mL制备，一式三份分析。
通过研究级UHPLC-MS/MS方法，使用下文列出的条件，分析样本中的拉科酰胺。
仪器：Sciex TQ-5500
基质：小鼠血浆(K2EDTA)
小鼠脑匀浆
分析物：拉科酰胺
内标物(IS)：(S)-5-((1-苄基吡咯烷-3-基)(甲基)氨基)-6-甲基-N-(噻唑-4-基)吡啶-2-磺酰胺
MS条件：ESI：正极
拉科酰胺：[M+H]+m/z 251.168/91
(S)-5-((1-苄基吡咯烷-3-基)(甲基)氨基)-6-甲基-N-(噻唑-4-基)吡啶-2-磺酰胺(IS)：[M+H]+m/z 551.1/214.0
UHPLC条件：
A：0.1％甲酸水溶液
B：0.1％甲酸的乙腈溶液
校准标准品标准品制备为2.34ng/mL、4.69ng/mL、9.38ng/mL、18.8ng/mL、
37.5ng/mL、75.0ng/mL、150ng/mL、300ng/mL、600ng/mL、
1200ng/mL、2400ng/mL和4800ng/mL。
QC样本QC样本以14.0ng/mL、225ng/mL和3600ng/mL制备，一式三份分析。
样本浓度使用最佳拟合模型确定，线性或二次校准函数，加权1/x，通过标准样本中分析物与IS峰面积比与其相应浓度的回归生成。分析运行的验收标准要求标准品和QC样本的反-计算值在它们标称值的±20％内，验收标准为±25％的最低标准或定量下限(LLOQ)除外。十二个标准物中的至少六者必须示出在它们标称浓度的±20％内的反向计算值，以便接受校准。至少三个QC样本，每种浓度一个，必须示出其标称浓度±20％以内的反计算值，才能使整个样本批次有效。
数据处理和分析：所有统计数据使用GraphPad Prism第8版软件计算。使用HillLangmuir方程生成浓度响应曲线：
方程1
Y＝B+(T-B)×xn/(IC50 n+xn)，
其中：
·B＝底部，设为0。
·T＝顶部，设为1。
·n＝Hill系数，其被限制为小于零。
·IC50＝50％体外抑制所需的化合物浓度。
所有组数据表示为平均值。使用Kruskal-Wallis，随后使用Dunn多重比较测试分析组间差异。统计学显著性达到p＜0.05的值。
生物分析：所有系统适应性测试(SST)、QC、基质和溶剂空白均满足SOP MTD-066中所述的验收标准。对于研究2C，化合物A和拉科酰胺的LLOQ为2.34ng/mL，在研究2D和2A中，两种化合物的LLOQ为4.69ng/mL，并且在研究2B中，拉科酰胺和化合物A的LLOQ分别为2.34ng/mL和4.69ng/mL。在所有研究中，两种化合物的定量上限(ULOQ)为4800ng/mL。
AC-MES测定的功效：AC-MES诱导的小鼠癫痫发作研究的结果示于表10、表11、表12和表13，以及图9、图10和图11中。
化合物A的剂量和浓度响应：化合物A的剂量和浓度响应示于图9中。在所有三个功效研究(2A、2B和2C)中，100％的溶媒治疗的CF-1小鼠示出强直性癫痫发作伴后肢的伸展。在研究2A中，示出对AC-MES刺激有响应的强直性癫痫发作的给药化合物A的动物比例从1mg/kg的8/8降至5mg/kg的7/8，降至10mg/kg的3/8，这表明功效的剂量依赖性增加。在研究2B中，5mg/kg和10mg/kg剂量示出更大的功效，与研究2A相比，分别有0/8和1/9动物癫痫发作，这可能是由于研究2B中达到的血浆浓度(平均血浆浓度：5mg/kg时为0.470μM，并且10mg/kg时为0.553μM)高于研究2A(平均血浆浓度：5mg/kg时为0.276μM，并且10mg/kg时为0.366μM)。另外，研究2A和2B彼此间隔一周进行，这也可解释功效的差异。在研究2C中，3mg/kg剂量的化合物A示出在0.284μM的平均血浆浓度下2/8动物癫痫发作。在所有三项研究(2A、2B和2C)中，化合物A治疗组和溶媒给药组之间的差异达到统计学显著性(p值示于图9中)。
在研究2A中来自10mg/kg组的一只小鼠和在研究2B中的三只小鼠(来自10mg/kg组的两只小鼠和来自7.5mg/kg组的一只小鼠)示出行为体征(颤抖、降低的活动和伸展的后肢)(血浆浓度：2A：0.391μM；2B：10mg/kg：0.608μM和0.516μM，7.5mg/kg：0.746μM)。化合物A在脑组织和血浆中达到的浓度是剂量线性的(图9)。
来自三项研究的化合物A的复合浓度响应曲线示出，血浆的EC50为0.300μM，并且脑组织的EC50为0.471μM(图9)。
5.2.2结果
在AC-MES模型中测试化合物A与拉科酰胺组合之前，在单独的研究(2D)中测试不同剂量的拉科酰胺，并在以上化合物A总结的研究中，将小鼠分成两组，以建立完全的剂量-响应。来自这4项研究的拉科酰胺的复合剂量-响应和浓度-响应示于图10中。拉科酰胺对AC-MES诱导的强直性癫痫发作表现出剂量-依赖性和浓度-依赖性作用，其中在3/8动物癫痫发作时在20mg/kg时作用最大(平均血浆浓度为23.9μM)。在20mg/kg拉科酰胺治疗组中动物癫痫发作的比例与溶媒治疗组显著不同(p值＝0.0052)。拉科酰胺的浓度-响应曲线分析示出血浆的EC50为21.6μM并且脑组织的EC50为22.2μM。对于化合物A+拉科酰胺的组合研究，研究2C，选择10mg/kg拉科酰胺和3mg/kg化合物A的剂量，当在AC-MES模型中单独给药时，这两者都示出最小的功效。
将化合物A(在AC-MES之前0.5小时3mg/kg PO施用)与拉科酰胺(在AC-MES之前2小时10mg/kg PO施用)组合消除了强直性癫痫发作(表12)。拉科酰胺治疗组(单独10mg/kg的拉科酰胺，其中6/8动物癫痫发作)和组合组(化合物A+拉科酰胺，其中0/8动物癫痫发作)之间的差异是统计学显著的(p值＝0.0189)，而化合物A治疗组(3mg/kg的化合物A，其中2/8动物癫痫发作)和组合组之间的差异不是统计学显著的。无论单独给药还是组合给药，化合物A(以3mg/kg施用)和拉科酰胺(以10mg/kg施用)的血浆浓度是类似的，这表明在组合组中观察到的更大功效不是更高程度地暴露任一化合物的结果。获得的平均血浆浓度为：当以3mg/kg单独施用时，对于化合物A为0.284μM；当以3mg/kg与拉科酰胺组合施用时，对于化合物A为0.279μM；当以10mg/kg单独施用时，对于拉科酰胺为17.1μM；以及当以10mg/kg与化合物A组合施用时，对于拉科酰胺为15.5μM。
表10.研究2A：化合物A和拉科酰胺在单口服剂量后的小鼠AC-MES中的抗痉挛作用的总结
B/P：脑与血浆比；n/a：不适用。
表11.研究2B：化合物A和拉科酰胺在单口服剂量后的小鼠AC-MES中的抗痉挛作用的总结
B/P：脑与血浆比；n/a：不适用。
表12.研究2C：化合物A和拉科酰胺组合在单口服剂量后的小鼠AC-MES中的抗痉挛作用的总结
B/P：脑与血浆比；n/a：不适用。
表13.研究2D：拉科酰胺在单口服剂量后的小鼠AC-MES中的抗痉挛作用的总结
B/P：脑与血浆比；n/a：不适用。
5.2.1结论
化合物A和拉科酰胺在CF-1小鼠AC-MES测定中显示浓度-依赖性功效。从浓度-响应曲线分析投射的血浆和脑化合物A EC50值分别为0.30μM和0.47μM。与在小鼠AC-MES测定中单独施用化合物A或拉科酰胺时的部分抑制相比，3mg/kg的化合物A和10mg/kg的拉科酰胺的组合导致强直性癫痫发作的完全抑制。
在AC-MES模型中各测试五个口服(PO)剂量的化合物A。在经由口服管饲法向雄性CF-1小鼠(体重28.2g至43.8g)施用1mg/kg(n＝8)、3mg/kg(n＝8)、5mg/kg(n＝16)、7.5mg/kg(n＝7)和10mg/kg(n＝17)的化合物A之后三十分钟，使小鼠经受60Hz的角膜电刺激(0.2秒持续时间，40mA)。这种刺激在所有溶媒给药的动物中引起强直性后肢伸展。任何没有示出对电刺激有响应的后肢伸展的动物都被认为是受保护的。在测试时还进行了观察性神经学评估(定性测试)作为耐受性筛选。从所有动物收集最终血浆和脑样本，以获得化合物A浓度的水平，并理解功效和药物浓度之间的关系。
在单口服剂量之后，化合物A示出对AC-MES诱导的强直性癫痫发作的浓度-依赖性作用，其中在0.47μM的血浆浓度下，最大作用为0/8动物癫痫发作(来自研究2B，5mg/kg)。在研究2A(1mg/kg，n＝8；5mg/kg，n＝8；和10mg/kg，n＝8；研究日期2019年3月28日)中，在用化合物A预治疗30分钟后，示出对AC-MES刺激有响应的强直性癫痫发作的动物比例从8/8(平均血浆浓度为0.0815μM；1mg/kg)降至7/8(平均血浆浓度为0.28μM；5mg/kg)，并且降至3/8(平均血浆浓度为0.37μM；10mg/kg)。在研究2B(5mg/kg，n＝8；7.5mg/kg，n＝7；和10mg/kg，n＝9；研究日期2019年6月5日)中，5mg/kg(平均血浆浓度为0.47μM)和10mg/kg(平均血浆浓度为0.55μM)剂量的化合物A示出强功效(分别为0/8和1/9动物癫痫发作)。在研究2C(3mg/kg，n＝8；研究日期2019年6月11日)中，3mg/kg剂量的化合物A示出在0.28μM的血浆浓度下2/8动物癫痫发作。在所有三项功效研究(2A、2B和2C)中，化合物A治疗组和溶媒给药组之间的差异达到统计学显著性。将所有3项研究的数据组合用于化合物A单独给药时的浓度-响应曲线分析。化合物A的浓度-响应曲线示出，血浆的半数最大有效浓度(EC50)为0.30μM，并且脑组织的EC50为0.47μM。
在研究2A中来自10mg/kg组的一只小鼠和在研究2B中的三只小鼠(来自10mg/kg组的两只小鼠和来自7.5mg/kg组的一只小鼠)示出行为体征(颤抖、降低的活动和伸展的后肢)(血浆浓度：2A：0.39μM；2B：10mg/kg：0.61μM和0.52μM，7.5mg/kg：0.75μM)。
在AC-MES模型(研究2C)中测试化合物A与拉科酰胺组合之前，拉科酰胺以不同的剂量单独测试以建立完全的剂量-响应。在AC-MES模型中分别测试四个PO剂量的拉科酰胺(研究2D：6mg/kg和20mg/kg，每组n＝8，研究日期2019年3月14日；研究2A：6mg/kg和8mg/kg，每组n＝8，研究日期2019年5月28日；研究2B：10mg/kg，n＝8，研究日期2019年6月5日；以及研究2C：10mg/kg，n＝8，研究日期2019年6月11日)，并且作为了研究的一部分。在经由口服管饲法向雄性CF-1小鼠(体重28.2g至43.8g)施用6mg/kg(n＝16)、8mg/kg(n＝8)、10mg/kg(n＝16)和20mg/kg(n＝8)的拉科酰胺之后两小时，使小鼠经受AC-MES刺激。拉科酰胺对AC-MES诱导的强直性癫痫发作表现出剂量-依赖性和浓度-依赖性作用，其中在3/8动物癫痫发作时在20mg/kg时作用最大(平均血浆浓度为23.9μM)，并且在6mg/kg、8mg/kg和10mg/kg的较低剂量具有最小作用。将所有4项研究(2A、2B、2C和2D)的数据组合用于拉科酰胺单独给药时的浓度响应曲线分析。拉科酰胺的浓度响应曲线示出血浆的EC50为21.6μM并且脑组织的EC50为22.2μM。在AC-MES模型中，基于剂量-响应研究，选择10mg/kg拉科酰胺和3mg/kg化合物A的剂量，当单独给药用于组合研究时，其示出最小的功效。
与单独给药化合物A或拉科酰胺时的部分抑制相比，在雄性CF-1小鼠中将化合物A(3mg/kg PO，AC-MES之前0.5小时)与拉科酰胺(10mg/kg PO，AC-MES之前2小时)组合完全抑制了强直性癫痫发作(单独3mg/kg的化合物A：2/8动物癫痫发作；单独10mg/kg的拉科酰胺：6/8动物癫痫发作；化合物A+拉科酰胺：0/8动物癫痫发作；溶媒：8/8动物癫痫发作)。无论单独给药还是组合给药，化合物A(3mg/kg)和拉科酰胺(10mg/kg)的血浆浓度是类似的，这表明在组合组中观察到的最大功效不是更高程度地暴露任一化合物的结果。获得的平均总血浆浓度为：化合物A当以3mg/kg单独给药时：0.283μM；化合物A当以3mg/kg组合给药时：0.279μM；拉科酰胺当以10mg/kg单独给药时：17.1μM；拉科酰胺当以10mg/kg组合给药时：15.5μM。
5.3.实施例3.在6Hz精神运动性癫痫发作测定中化合物A单独和与左乙拉西坦组合
本研究的目的是评价化合物A与左乙拉西坦在对每种化合物敏感的癫痫发作小鼠模型中(6Hz精神运动性癫痫发作测定)的相互作用(Barton等人，Epilepsy Res.，2001年，第47卷第3期：第217-227页)。通过单独和组合给药化合物A和左乙拉西坦，各自以其自身产生次最大功效的剂量给药，评价两种化合物的组合对功效是有利的还是不利的。化合物A和左乙拉西坦各自以在6Hz测定中产生次最大功效的剂量单独施用，以允许当这些化合物组合时在任一方向上检测功效的变化。分析血浆和脑样本以了解化合物A和左乙拉西坦的组合可如何影响药代动力学和药效学。
5.3.1材料和方法
测试化合物——化合物A
参考化合物——左乙拉西坦
溶媒：化合物A制剂F2：去离子(DI)水中的5％二甲基亚砜(DMSO)、0.5％甲基纤维素。左乙拉西坦制剂F1：DI水中的0.5％w:w甲基纤维素、0.2％v:v吐温80。
剂量制剂：称量适当量的化合物A(没有纯度校正)并以20x的预期最终浓度溶解在DMSO中。将化合物A的20x DMSO储备溶液用DI水中的0.5％甲基纤维素稀释20倍以达到最终所需浓度。搅拌或涡旋混合所得化合物A混悬液以产生均匀混悬液。将制剂保持在室温下，并在每次口服施用之前连续搅拌或涡旋-混合。
对于左乙拉西坦，将DI水(0.8L)加热至70℃至80℃。称量五克的甲基纤维素，并将其以小份缓慢加入到加热的DI水中。搅拌混合物直至其形成均匀的乳状混悬液。将混悬液移至冷室中并搅拌过夜以获得澄清溶液。将两mL的吐温80加入到澄清溶液中，并用DI水稀释至1L。将溶媒溶液储存在2℃至8℃下。
将左乙拉西坦粉末称量到小瓶中。将适量的溶媒加入到粉末中，然后在IKA-T18ULTRATURRAX匀浆器上混合，以产生所需浓度的均匀混悬液。然后将小瓶包裹在铝箔中以使它们避光，并放置在搅拌板上直至给药。
测试系统
种/品系：CF-1小鼠
编号和性别：104只雄性
来源：Charles River Laboratories
给药开始时的年龄和体重：
研究ID 年龄(天数) 重量范围(g)
3A 60 32.7至46.0
3B 46 29.0至37.3
3C 48 31.0至40.0
饲养：根据适用的动物福利法律和法规(CCAC)，将动物在笼中分组饲养(每笼4只)。温度在18℃至25℃之间，并且相对湿度在45％至65％之间。
驯化：在到达时，在进行研究之前检查动物以确保其令人满意的健康状态并适应设施至少5天。
食物/水：动物自由获取经检定的啮齿类动物饲料(Teklad Rodent Chow#2014)。
可自由获取自来水。
实验设计：将动物分配至表14所示的治疗组。在癫痫发作诱导之前1小时，经由PO管饲法(标准操作程序(SOP)TECH-006)给所有小鼠给药溶媒或化合物A，并通过IP注射(TECH-004)给所有小鼠给药溶媒或左乙拉西坦。选择ED20(4mg/kg)的化合物A用于组合实验(基于剂量响应实验，研究3A)。基于先前的实验选择300mg/kg左乙拉西坦的剂量，在该剂量下平均产生35％的功效。
表14.实验组概述
Admin：施用；Conc.：浓度；Cpmd.：化合物；IP：腹膜内；Lev：左乙拉西坦；n/a：不适用；PO：经口，口服。
随机化和盲法：施用化合物的实验者将各动物随机分配到治疗组。使对治疗组分配不知情的不同实验者进行该测试。在给定实验中测试的所有动物具有相等的机会分配到任何治疗组。
临床体征的观察：在对动物给药的实验者给药之后10分钟观察所有给药化合物的动物的异常行为，并且在刺激时由测试动物的实验者再次观察。记录任何正常行为的定性变化。
6Hz精神运动性癫痫发作测定：在电刺激之前至少1小时，将所有动物放入实验室。在测定之前，立即将一滴爱尔凯因(盐酸丙美卡因，0.5％)施加到小鼠的每只眼睛上。然后将动物安全地束缚，并将一对电极施加到眼睛(Electro Convulsive Therapy Unit57800，Ugo Basile)。用脚踏板在34毫安、6Hz和0.2毫秒脉冲宽度下引发3秒刺激。在刺激结束之后，立即将动物置于Plexiglas圆筒中，并记录癫痫发作行为(颌阵挛、前肢阵挛和管状尾)(根据TECH-036)。如果动物在对照动物中没有表现出由该刺激方案诱导的三种典型的精神运动性癫痫发作行为(颌阵挛、前肢阵挛、管状尾)，则认为该动物免于癫痫发作。
样本收集和制备：通过使吸入异氟烷(TECH-018)麻醉小鼠，直至它们到达手术麻醉平面。然后将注射器(1mL注射器，带有22号针头)插入到心脏的胸骨下(TECH-031)。收集大约0.5mL血液，沉积到K2EDTA管中，并储存在冰上。然后通过颈椎脱位对动物实施安乐死(TECH-018)。取出脑，放入预先称量的小瓶中，并在干冰上快速冷冻。在样本收集结束时，将血液在4℃下以4000rpm离心10分钟，并将血浆移液至标记管中。所有样本都储存在-80℃冰箱中直至生物分析(在用于研究3A和3B的样本收集之后8天；在用于研究3C的样本收集之后20天)。
血浆和组织样本分析：将含有称量的脑组织的珠磨聚丙烯管在室温下解冻，并加入3mL匀浆溶剂(水:乙腈(1:1，v:v))。将管置于珠磨机匀浆器(Bead Ruptor Elite Model，Omni International)中，并且以3.70m/s的速度摇动，持续30秒。将匀浆的管以4000rpm离心20分钟，将上清液转移至1.5mL Eppendorf管中，并在-80℃下冷冻保存直至分析。所有样本，包括血浆和脑匀浆提取物(包括在K2EDTA大鼠血浆中制备的校准和质量控制(QC)样本)，通过蛋白质沉淀提取。向每份50μL样本的等分试样中加入50μL的内标物溶液(化合物A和左乙拉西坦分别在水/乙腈(1:1)中的2500ng/mL的(S)-5-氯-4-((1-(5-氯-2-氟苯基)乙基)氨基)-2-氟-N-(吡嗪-2-基)苯磺酰胺和4-((2-((7-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基)甲基)-6-氟苄基)氨基)-2,6-二氟-N-(异噻唑-3-基)苯磺酰胺、50μL的6％(v/v)磷酸的水溶液，然后加入200μL乙腈。涡旋混合1.5mL管中的样本，然后以13,000rpm离心20分钟。五十微升的上清液与150μL的水:乙腈(1:1)在96孔板中混合，将其混合后以4000rpm离心20分钟，然后准备用于液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析。
通过研究级LC-MS/MS方法如下分析样本：
仪器：Sciex TQ-5500
基质：小鼠血浆(K2EDTA)
小鼠脑匀浆
分析物：化合物A
内标物(S)-5-氯-4-((1-(5-氯-2-氟苯基)乙基)氨基)-2-氟-N-(吡嗪-2-基)苯磺酰胺
(IS)：
MS条件：ESI(电喷雾电离)：正极
化合物A：[M+H]+m/z 369.2/247.2
(S)-5-氯-4-((1-(5-氯-2-氟苯基)乙基)氨基)-2-氟-N-(吡嗪-2-基)苯磺酰胺(IS)：[M+H]+m/z 458.793/157
超高效液相色谱（UHPLC）条件：
A：0.1％甲酸水溶液
B：0.1％甲酸的乙腈溶液
校准标准品对于研究3A和3B，标准品制备为2.34ng/mL、4.69ng/mL、9.38ng/mL、18.8ng/mL、37.5ng/mL、75ng/mL、150ng/mL、300ng/mL、600ng/mL、1200ng/mL、2400ng/mL和4800ng/mL。
对于研究3C，标准品制备为0.586ng/mL、1.17ng/mL、2.34ng/mL、4.69ng/mL、9.38ng/mL、18.8ng/mL、36.5ng/mL、75.0ng/mL、150ng/mL、300ng/mL、600ng/mL和1200ng/mL。
分析物：左乙拉西坦
内标物4-((2-((7-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基)甲基)-6-氟苄基)氨基)-2,6-二氟-N-(异噻唑-
(IS)：3-基)苯磺酰胺
MS条件：ESI：正极
左乙拉西坦：[M+H]+m/z 171/126
4-((2-((7-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基)甲基)-6-氟苄基)氨基)-2,6-二氟-N-(异噻唑-3-基)苯磺酰胺(IS)：[M+H]+m/z 509/218
UHPLC条件：
A：0.1％甲酸水溶液
B：0.1％甲酸的乙腈溶液
校准标准品标准品制备为4.69ng/mL、9.38ng/mL、18.8ng/mL、37.5ng/mL、75ng/mL、150ng/mL、300ng/mL、600ng/mL、1200ng/mL、2400ng/mL、4800ng/mL和9600ng/mL。
数据处理和分析：统计数据分析使用GraphPad Prism(版本8.2.1)进行。使用Kruskal-Wallis检验随后进行Dunn多重比较来分析剂量-响应数据。p-值＜0.05被认为是显著的。使用Hill Langmuir方程生成剂量-响应和浓度-响应曲线：
方程1
Y＝B+(T–B)×xn/(IC50 n+xn)，
其中：
·B＝底部，设为0。
·T＝顶部，设为1。
·n＝Hill系数，其被限制为小于零。
·IC50＝50％体外抑制所需的化合物浓度。
除非另有说明，否则所有数据都报告为三个有效数字，并且所有组数据都报告为平均值±SD。
5.3.2结果
生物分析：所有系统适应性测试、QC样本、基质和溶剂空白均满足验收标准。分析参数列于表15中。对每种浓度的QC样本进行一式三份的分析。
表15.生物分析参数
Lev：左乙拉西坦；LLOQ：定量下限；n/a：不适用；ULOQ：定量上限。
临床观察：施用8mg/kg化合物A(血浆：1.16μM；脑：1.65μM)一只动物示出震颤，并且在测试时触摸起来很冷。
化合物A在6Hz精神运动性癫痫发作测定中的剂量响应(研究3A)：在角膜刺激之前1小时PO给药的化合物A示出剂量-依赖性功效，其中在1mg/kg和3mg/kg时8/8动物癫痫发作，在5mg/kg时5/8动物癫痫发作，并且在8mg/kg时3/8动物癫痫发作。在8mg/kg化合物A时，癫痫发作保护与溶媒显著不同(p＝0.0081；图12A)。剂量响应曲线预计，在Hill系数n＝-3.09时ED50为6.48mg/kg，并且ED20为4.13mg/kg(图12B)。
图12A和图12B分别示出了个体动物血浆和脑药代动力学-药效学关系。按组的结果和暴露列于表16中。化合物A的功效是浓度-依赖性的，其中在Hill系数分别为n＝-1.95和n＝-2.17时，血浆EC50为0.35μM，并且脑EC50为0.54μM(图12C和图12D)。
表16.化合物A在对CF-1小鼠以不同剂量进行单次PO施用后的功效和暴露(研究3A)
/>
n/a：不适用。
化合物A和左乙拉西坦在6Hz精神运动性癫痫发作测定中的组合(研究3B和3C)：为了评估化合物A和左乙拉西坦的组合在6Hz精神运动性癫痫发作测定中对功效是有利的还是不利的，对每种化合物选择次最大剂量。在上述剂量-响应实验中，化合物A的ED20测定为4mg/kg。在先前的研究中，在300mg/kg左乙拉西坦时获得平均35％的功效，在研究中具有相当大的可变性。在两个同样设计的实验中(研究3B和3C，参见上述和表14)，4mg/kg化合物A和300mg/kg左乙拉西坦的组合在6Hz精神运动性癫痫发作测定中比单独的任一化合物都显著更有效(表16)。
研究3B：在研究3B中，单独给药的化合物A或左乙拉西坦没有导致对癫痫发作的保护(化合物A的血浆和脑浓度远低于预期)，但两种化合物组合使3/8动物免于癫痫发作(图14A，表12)。与溶媒和与单独给药的任一化合物相比，组合给药的益处是显著的(p＝0.034)。化合物A和左乙拉西坦在血浆中达到的浓度(化合物A：0.014±0.009μM；左乙拉西坦：1500±320μM)和脑(化合物A：0.03±0.02μM；左乙拉西坦：861±120μM)在单剂量组和组合剂量组之间是相当的(图14，表17)。因此，化合物A和左乙拉西坦的组合的有益作用不能通过增加任一化合物的暴露来解释(图15)。
研究3C：在研究3C中，重复研究3B的设计。此时，相同剂量的4mg/kg化合物A在血浆(0.17±0.09μM相对于0.01±0.01μM)和脑(0.41±0.23μM相对于0.03±0.02μM)中产生的化合物A浓度比研究3B中高10倍以上(图15，表17)。左乙拉西坦的浓度也稍高于研究3B(脑：1130±130μM相对于861±120μM，血浆：1770±287μM相对于1500±320μM；图15，表17)。与研究3B相比，增加的暴露量转化为单独给药的任一化合物的增加的功效：4mg/kg的化合物A使1/7动物并且300mg/kg的左乙拉西坦使2/8动物免于癫痫发作(图14A，表17)。化合物A和左乙拉西坦的组合保护了本研究中测试的所有动物(图14A，表17；n＝7；排除一只动物，因为它在血浆或脑中没有可测量的左乙拉西坦水平)。在化合物A和左乙拉西坦的组合施用后达到完全的功效，对功效的作用不仅与溶媒(p＝0.0002)显著不同，而且与单独给药的任一化合物(p＜0.01)都显著不同。与研究3B类似，在单剂量和组合剂量组之间，化合物A和左乙拉西坦在血浆和脑中达到的浓度是相当的(图15，表17)。因此，化合物A和左乙拉西坦的组合的有益作用不能通过增加任一化合物的暴露来解释(图16)。
研究3B和3C组合：当两项实验的剂量-响应组合时，左乙拉西坦在14/16癫痫发作时达到了单独给药的化合物A或左乙拉西坦的最大功效，而两种化合物的组合导致5/15动物癫痫发作。因此，化合物A和左乙拉西坦的组合使66.7％的动物免于癫痫发作，这显著不同于溶媒(p＜0.0001)，以及单独的任一化合物(p＜0.001，图14B，表17)。
5..3.3结论
化合物A在ED50为6.48mg/kg的小鼠6Hz精神运动性测定中显示剂量-依赖性功效。功效与化合物A的血浆和脑浓度以及0.35μM的血浆EC50和0.54μM的脑EC50密切相关。
在该测定中，4mg/kg的化合物A和300mg/kg的左乙拉西坦的组合导致显著高于在两个独立的相同设计的实验中单独使用任一化合物所观察到的功效(研究3B：p＝0.034；研究3C：p＜0.01)。组合给药没有显著影响任一化合物的血浆或脑暴露。在相当的左乙拉西坦脑浓度(1130±130μM相对于1100±265μM；研究3C)下，将化合物A加入到左乙拉西坦中使功效从25％(单独的左乙拉西坦)提高到了100％(化合物A+左乙拉西坦)。
首先，在6Hz精神运动性测定中进行化合物A的剂量-响应研究(3A)，以确定20％的动物免于癫痫发作的剂量(ED20)。在经由34毫安(6赫兹；0.2毫秒脉冲宽度)的3秒角膜刺激诱导精神运动性癫痫发作之前1小时，通过口服管饲法将化合物A以1mg/kg、3mg/kg、5mg/kg和8mg/kg施用于雄性CF-1小鼠(体重：32.7g至46.0g)，每组8只动物。通过计算每组8只动物中在6Hz刺激后免于癫痫发作行为(颌阵挛、前肢阵挛或管状尾)的动物比例来定量该测定中的功效。分析血浆和脑样本以评估浓度-响应关系。
虽然1mg/kg和3mg/kg的化合物A没有产生癫痫发作的保护作用，但在给药5mg/kg的动物中，动物癫痫发作的比例降至5/8，并且在8mg/kg组中降至3/8。在8mg/kg时(血浆：0.47±0.29μM；脑：0.70±0.41μM；平均值±SD)，与溶媒组相比，化合物A示出显著的保护作用(p＝0.0081)(8/8癫痫发作)。化合物A的剂量和浓度响应曲线预计，使50％的动物免于癫痫发作的剂量为6.48mg/kg(ED50)、使50％的动物免于癫痫发作的血浆浓度为0.35μM(EC50)并且脑EC50为0.54μM。在该测定中化合物A的ED20计算为4.13mg/kg。
一只给药8mg/kg化合物A的动物示出震颤，并且触摸起来很冷。在1.16μM血浆和1.65μM脑浓度时，该动物在该实验的所有动物中具有化合物A的最高暴露。
在两个独立的相同设计的实验(研究3B和3C)中评价产生次最大功效的剂量的化合物A和左乙拉西坦的组合。先前的实验已经确定，在刺激之前1小时腹膜内(IP)注射300mg/kg左乙拉西坦在34毫安6Hz刺激下产生35％的功效。当在刺激之前1小时口服给药(PO)化合物A时，化合物A的剂量-响应实验(研究3A)预计ED20为4mg/kg。然后在两个相同设计的实验的每一个实验中评价以下实验组(n＝8)：1.溶媒对照(PO和IP)；2.4mg/kg PO的化合物A和IP溶媒；3.300mg/kg IP的左乙拉西坦和PO溶媒；4.4mg/kg PO的化合物A和300mg/kg IP的左乙拉西坦。在化合物施用后1小时，以34毫安(6Hz，0.2毫秒脉冲宽度)施用3秒角膜刺激。基于免于癫痫发作行为的动物比例(颌阵挛、前肢阵挛或管状尾)评价功效。
在研究3B中，将任一化合物单独给药至雄性CF-1小鼠(体重：29.0g至37.3g)没有导致免于癫痫发作，但是两种化合物的组合使3/8动物免于癫痫发作(p＝0.034)。化合物A和左乙拉西坦在血浆中达到的浓度(化合物A：0.014±0.009μM；左乙拉西坦：1500±320μM)和脑(化合物A：0.03±0.02μM；左乙拉西坦：861±120μM)在单剂量和组合剂量组之间是相当的，但总体上比4mg/kg剂量的预期低得多。
在研究3C中，在雄性CF-1小鼠中进行(体重：31.0g至40.0g)，4mg/kg化合物A导致在血浆(0.167±0.0897μM相对于0.014±0.009μM)和脑(0.41±0.23μM相对于0.03±0.02μM)中化合物A的浓度比在研究3B中高10倍以上。左乙拉西坦的浓度也稍高于3B(脑：1130±130μM相对于861±120μM；血浆：1770±287μM相对于1500±320μM)。增加的暴露量转化为单独给药的任一化合物的增加的功效：4mg/kg的化合物A使1/7动物并且300mg/kg的左乙拉西坦使2/8动物免于癫痫发作。与单独的任一化合物相比，化合物A和左乙拉西坦的组合保护了该组中所有测试的动物(7/7保护；p＜0.01)。在相当的左乙拉西坦脑浓度(1130±130μM相对于1100±265μM，研究3C)下，将化合物A加入到左乙拉西坦中使功效从25％(单独的左乙拉西坦)提高到了100％(化合物A+左乙拉西坦)。
5.4.实施例4.在CF-1小鼠的AC-MES测定中，单独的化合物A和与苯巴那酯组合的抗痉挛作用
在口服给药之后，在小鼠交流最大电休克癫痫发作(AC-MES)测定中评价化合物A的功效及其与苯巴那酯的药理学相互作用(参见实施例2)。
该研究的目的是在这些化合物单次口服施用之后在小鼠中在AC-MES测定中表征化合物A的剂量依赖性抗痉挛活性及其与苯巴那酯的药理学相互作用。在单PO剂量后，在雄性CF-1小鼠中在AC-MES测定中测试化合物A和苯巴那酯的抗痉挛功效，以及化合物A和苯巴那酯组合的作用。获得血浆和脑样本以了解药物浓度和功效之间的关系。
5.4.1材料和方法
实施例4中使用的化合物A、溶媒、剂量制剂和测试系统与实施例2中用苯巴那酯代替拉科酰胺使用的相同。
测试化合物——苯巴那酯
标识： 苯巴那酯
批号： 批次01
物理描述： 白色粉末
纯度： 99.5％
供应商： 不可用
实验设计：将动物分配至表18至表19所示的治疗组。用化合物A和苯巴那酯各进行四项研究。它们的相应研究日期示于表18至表19中。
表18.实验组——研究4A
PO：经口，口服。
表19.实验组——研究4B
PO：经口，口服。
表20.实验组——研究4C
PO：经口，口服。
表21.实验组——研究4F
PO：经口，口服。
表22.实验组——研究4D
PO：经口，口服。
表23.实验组——研究4E
PO：经口，口服。
表24.实验组——研究4G
PO：经口，口服。
实施例4中的盲法和随机化、临床观察、AC-MES测定、样本收集和制备、血浆和脑样本分析以及生物分析程序与实施例2中使用的程序相同。
通过研究级UHPLC-MS/MS方法，使用下文列出的条件，分析样本中的化合物A。
仪器： Sciex TQ-5500
基质： 小鼠血浆(K2EDTA)
小鼠脑匀浆
分析物：化合物A
内标物(S)-5-氯-4-((1-(5-氯-2-氟苯基)乙基)氨基)-2-氟-N-(吡嗪-2-基)苯磺酰胺
(IS)：
MS条件：ESI：正极
化合物A：[M+H]+m/z 369.2/247.2
(S)-5-氯-4-((1-(5-氯-2-氟苯基)乙基)氨基)-2-氟-N-(吡嗪-2-基)苯磺酰胺(IS)：
[M+H]+m/z 458.793/157
UHPLC条件：
流动相A：0.1％甲酸水溶液
流动相B：0.1％甲酸的乙腈溶液校准标准品对于4A、4B和4C，标准品制备为2.34ng/mL、4.69ng/mL、9.38ng/mL、
18.8ng/mL、37.5ng/mL、75.0ng/mL、150ng/mL、300ng/mL、600ng/mL、
1200ng/mL、2400ng/mL和4800ng/mL。
对于4F，标准品制备为0.586ng/mL、1.17ng/mL、2.34ng/mL、4.69ng/mL、
9.38ng/mL、18.8ng/mL、37.5ng/mL、75.0ng/mL、150ng/mL、300ng/mL、
600ng/mL和1200ng/mL。
对于4G，标准品制备为0.293ng/mL、0.586ng/mL、1.17ng/mL、2.34ng/mL、
4.69ng/mL、9.38ng/mL、18.8ng/mL、37.5ng/mL、75.0ng/mL、150ng/mL、
300ng/mL、600ng/mL。
QC样本对于4A、4B和4C，QC样本以14.0ng/mL、225ng/mL和3600ng/mL制备，一式三份分析。
对于4F，QC样本以3.5ng/mL、56.3ng/mL和900ng/mL制备，一式三份分析。
对于4G，QC样本以1.75ng/mL、28.1ng/mL和450ng/mL制备，一式三份分析。
通过研究级UHPLC-MS/MS方法，使用下文列出的条件，分析样本中的苯巴那酯。
仪器： Sciex TQ-5500
基质： 小鼠血浆(K2EDTA)
小鼠脑匀浆分析物： 苯巴那酯内标物(IS)： (2S,5R)-5-(4-((2-氟苄基)氧基)苯基)吡咯烷-2-甲酰胺
(4F，4G)；(2-(氮杂环丁烷-1-基甲基)苄基)(3,5-二氟-4-(N-(噻唑-4-
基)氨磺酰基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(4D，4E)
MS条件：ESI：正极
苯巴那酯：[M+H]+m/z 267.8/155.1
(2S,5R)-5-(4-((2-氟苄基)氧基)苯基)吡咯烷-2-甲酰胺
(IS)：[M+H]+m/z 315.1/108.9
(2-(氮杂环丁烷-1-基甲基)苄基)(3,5-二氟-4-(N-(噻唑-4-基)氨磺酰基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(IS)：[M+H]+m/z 551.1/214
UHPLC条件：
A：0.1％甲酸水溶液
B：0.1％甲酸的乙腈溶液
校准标准品对于4F、4D、4E和4G，标准品制备为2.34ng/mL、4.69ng/mL、9.38ng/mL、18.8ng/mL、37.5ng/mL、75.0ng/mL、150ng/mL、300ng/mL、600ng/mL、1200ng/mL、2400ng/mL和4800ng/mL。
QC样本对于4F、4D、4E、4G，QC样本以14.0ng/mL、225ng/mL和3600ng/mL制备，一式三份分析。
实施例4中的样本浓度测定以及数据处理和分析与实施例2相同。
5.4.2结果
生物分析：所有系统适应性测试(SST)、QC、基质和溶剂空白均满足SOP MTD-066中所述的验收标准。化合物A和苯巴那酯的定量下限(LLOQ)和定量上限(ULOQ)示于表25中。
表25.化合物A和苯巴那酯的LLOQ和ULOQ
研究 化合物 LLOQ ULOQ
4A 化合物A 4.68 4800
4B 化合物A 4.68 4800
4C 化合物A 2.34 4800
4F 化合物A 0.586 1200
4F 苯巴那酯 2.34 4800
4D 苯巴那酯 4.68 4800
4E 苯巴那酯 2.34 4800
4G 化合物A 0.293 600
4G 苯巴那酯 2.34 4800
LLOQ：定量下限。ULOQ：定量上限
AC-MES测定的功效：AC-MES诱导的小鼠癫痫发作研究的结果示于表26至表32，以及图17、图18和图19中。
单独的化合物A：化合物A的剂量和浓度响应数据总结于图17、表26、表27和表28中。在所有三个功效研究(4A、4B、4C和4F)中，100％的溶媒治疗的CF-1小鼠示出强直性癫痫发作伴后肢的伸展。在研究4A(1mg/kg，n＝8；5mg/kg，n＝8；和10mg/kg，n＝8)中，在用化合物A预治疗30分钟后，示出对AC-MES刺激有响应的强直性癫痫发作的动物比例从8/8(平均血浆浓度为0.08μM；1mg/kg)降至7/8(平均血浆浓度为0.28μM；5mg/kg)，并且降至3/8(平均血浆浓度为0.37μM；10mg/kg)。在研究4B(5mg/kg，n＝8；7.5mg/kg，n＝7；和10mg/kg，n＝9)中，5mg/kg(平均血浆浓度为0.47μM)和10mg/kg(平均血浆浓度为0.55μM)剂量的化合物A示出强功效(分别为0/8和1/9动物癫痫发作)。在研究4C(3mg/kg，n＝8)中，3mg/kg剂量的化合物A示出在0.28μM的血浆浓度下2/8动物癫痫发作。在研究4F(2mg/kg，n＝8)中，2mg/kg剂量示出在0.11μM的血浆浓度下5/8动物癫痫发作。在所有功效研究除4F中，化合物A治疗组和溶媒给药组之间的差异达到统计学显著性(p值示于图17中)。
在研究4A中来自10mg/kg组的一只小鼠和在研究4B中的三只小鼠(来自10mg/kg组的两只小鼠和来自7.5mg/kg组的一只小鼠)示出行为体征(颤抖、降低的活动和伸展的后肢)(血浆浓度：4A：0.39μM；4B：10mg/kg：0.61μM和0.52μM，7.5mg/kg：0.75μM)。
来自三项研究的化合物A的复合浓度响应曲线示出，血浆的EC50为0.30μM，并且脑组织的EC50为0.47μM(图17)。化合物A在脑组织和血浆中达到的浓度是剂量线性的(图17)。
单独的苯巴那酯：在AC-MES模型(研究4F和4G)中测试化合物A与苯巴那酯组合之前，我们测试了不同剂量的单独的苯巴那酯以建立完全的剂量-响应。苯巴那酯的剂量和浓度响应的数据总结在图18、表29和表30中。在AC-MES模型中分别测试七个PO剂量的苯巴那酯(研究4D：3mg/kg、10mg/kg和30mg/kg，每组n＝8；研究4E：3mg/kg、5mg/kg和7.5mg/kg，n＝8；以及研究4F：5mg/kg，n＝8)中，并且作为了研究的一部分。在经由口服管饲法向雄性CF-1小鼠施用3mg/kg(n＝15)、5mg/kg(n＝7)、7.5mg/kg(n＝7)、10mg/kg(n＝8)和30mg/kg(n＝8)的苯巴那酯之后两小时，使小鼠经受AC-MES刺激。苯巴那酯示出对AC-MES诱导的强直性癫痫发作的剂量-依赖性和浓度-依赖性作用，其中在7.5mg/kg时3/7动物癫痫发作(平均血浆浓度为78.1μM)，在10mg/kg时1/8动物癫痫发作(平均血浆浓度为87μM)，在30mg/kg时0/8动物癫痫发作(平均血浆浓度为24μM)，并且在3mg/kg和5mg/kg的较低剂量下作用最小。将所有3项研究(4D、4E和4F)的数据组合用于苯巴那酯单独给药时的浓度响应曲线分析(图18)。苯巴那酯的浓度响应曲线示出血浆的EC50为70.5μM并且脑组织的EC50为25.2μM。
化合物A和苯巴那酯的组合：在AC-MES模型中，基于剂量-响应研究，选择5mg/kg苯巴那酯的剂量和0.5mg/kg、1mg/kg和2mg/kg化合物A的剂量，当单独给药用于组合研究时，其示出最小功效。
来自组合研究的数据总结在图19、表31和表32中。我们进行了两项组合研究，4F(2mg/kg的化合物A与5mg/kg的苯巴那酯的组合)和4G(0.5mg/kg和1mg/kg的化合物A与5mg/kg的苯巴那酯的组合)。在雄性CF-1小鼠中将化合物A(0.5mg/kg、1mg/kg和2mg/kg PO，AC-MES之前0.5小时)与苯巴那酯(5mg/kg PO，AC-MES之前2小时)组合示出2/8动物在0.5mg/kg化合物A时癫痫发作，1/8动物在1mg/kg化合物A时癫痫发作，并且0/8动物在2mg/kg化合物A时癫痫发作，这与当化合物A(当化合物A以2mg/kg单独给药时5/8动物癫痫发作)或苯巴那酯(当苯巴那酯以5mg/kg单独给药时8/8动物癫痫发作)单独给药时的部分或无作用形成对比。在研究4F中，化合物A的血浆浓度(2mg/kg时的平均血浆浓度：当单独给药时为0.11μM，并且当组合给药时为0.29)和苯巴那酯的血浆浓度(5mg/kg时的平均血浆浓度：当单独给药时为31.3μM，并且当组合给药时为38.9μM)当组合施用时比单独给药时略高。在研究4G中，获得的平均总血浆浓度为：化合物A以0.5mg/kg组合给药：0.03μM；化合物A以1mg/kg组合给药：0.11μM；苯巴那酯以5mg/kg(+0.5mg/kg化合物A)组合给药：41.1μM；苯巴那酯以5mg/kg(+1mg/kg化合物A)组合给药：39.7μM。组合给药的化合物A和苯巴那酯的浓度响应曲线示出，对于化合物A，血浆的外推的EC50为0.01μM，并且脑组织为0.03μM。
表26.研究4A：化合物A在单口服剂量后的小鼠AC-MES中的抗痉挛作用的总结
B/P：脑与血浆比；n/a：不适用。
表27.研究4B：化合物A在单口服剂量后的小鼠AC-MES中的抗痉挛作用的总结
B/P：脑与血浆比；n/a：不适用。
表28.研究4C：化合物A在单口服剂量后的小鼠AC-MES中的抗痉挛作用的总结
B/P：脑与血浆比；n/a：不适用。
表29.研究4D：苯巴那酯在单口服剂量后的小鼠AC-MES中的抗痉挛作用的总结
B/P：脑与血浆比；n/a：不适用。
表30.研究4E：苯巴那酯在单口服剂量后的小鼠AC-MES中的抗痉挛作用的总结
B/P：脑与血浆比；n/a：不适用。
表31.研究4F：化合物A与苯巴那酯组合在单口服剂量后的小鼠AC-MES中的抗痉挛作用的总结
B/P：脑与血浆比；n/a：不适用。
表32.研究4G：化合物A与苯巴那酯组合在单口服剂量后的小鼠AC-MES中的抗痉挛作用的总结
5.4.3结论
化合物A和苯巴那酯在CF-1小鼠AC-MES测定中显示浓度-依赖性功效。从浓度-响应曲线分析投射的血浆和脑化合物A EC50值分别为0.30μM和0.47μM。化合物A和苯巴那酯组合给药的复合浓度响应曲线预计，对于化合物A，血浆的EC50为0.01μM，并且脑组织的为0.03μM。结果预计，当与苯巴那酯组合给药时，化合物A对血浆和脑组织的效力分别增加33.3倍和14.2倍。
在AC-MES测定中各测试六个口服(PO)剂量的化合物A。在经由口服管饲法向雄性CF-1小鼠施用1mg/kg(n＝8)、2mg/kg(n＝8)、3mg/kg(n＝8)、5mg/kg(n＝16)、7.5mg/kg(n＝7)和10mg/kg(n＝17)的化合物A之后三十分钟，使小鼠经受60Hz的角膜电刺激(0.2秒持续时间，40mA)。这种刺激在所有溶媒给药的动物中引起强直性后肢伸展。任何没有示出对电刺激有响应的后肢伸展的动物都被认为是受保护的。在测试时还进行了观察性神经学评估(定性测试)作为耐受性筛选。从所有动物收集最终血浆和脑样本，以获得化合物A和苯巴那酯浓度的水平，并理解功效和药物浓度之间的关系。
在单口服剂量之后，化合物A示出对AC-MES诱导的强直性癫痫发作的浓度-依赖性作用，其中在0.470μM的血浆浓度下，最大作用为0/8动物癫痫发作(来自研究4B，5mg/kg)。在研究4A(1mg/kg，n＝8；5mg/kg，n＝8；和10mg/kg，n＝8)中，在用化合物A预治疗30分钟后，示出对AC-MES刺激有响应的强直性癫痫发作的动物比例从8/8(平均血浆浓度为0.08μM；1mg/kg)降至7/8(平均血浆浓度为0.28μM；5mg/kg)，并且降至3/8(平均血浆浓度为0.37μM；10mg/kg)。在研究4B(5mg/kg，n＝8；7.5mg/kg，n＝7；和10mg/kg，n＝9)中，5mg/kg(平均血浆浓度为0.47μM)和10mg/kg(平均血浆浓度为0.55μM)剂量的化合物A示出强功效(分别为0/8和1/9动物癫痫发作)。在研究4C(3mg/kg，n＝8)中，3mg/kg剂量的化合物A示出在0.28μM的血浆浓度下2/8动物癫痫发作。在研究4F(2mg/kg，n＝8)中，2mg/kg剂量示出在0.11μM的血浆浓度下5/8动物癫痫发作。在所有功效研究除4F中，化合物A治疗组和溶媒给药组之间的差异达到统计学显著性(p值示于图17中)。将所有四项研究的数据组合用于化合物A单独给药时的浓度-响应曲线分析。化合物A的浓度-响应曲线示出，血浆的半数最大有效浓度(EC50)为0.30μM，并且脑组织的EC50为0.47μM。
在研究4A中来自10mg/kg组的一只小鼠和在研究4B中的三只小鼠(来自10mg/kg组的两只小鼠和来自7.5mg/kg组的一只小鼠)示出行为体征(颤抖、降低的活动和伸展的后肢)(血浆浓度：4A：0.39μM；4B：10mg/kg：0.61μM和0.52μM，7.5mg/kg：0.75μM)。
在AC-MES模型中测试化合物A与苯巴那酯组合之前，苯巴那酯以不同的剂量单独测试以建立完全的剂量-响应。在AC-MES模型中分别测试七个PO剂量的苯巴那酯(研究4D：3mg/kg、10mg/kg和30mg/kg，每组n＝8；研究4E：3mg/kg、5mg/kg和7.5mg/kg，n＝8；以及研究4F：5mg/kg，n＝8)中，并且作为了研究的一部分。在经由口服管饲法向雄性CF-1小鼠施用3mg/kg(n＝15)、5mg/kg(n＝7)、7.5mg/kg(n＝7)、10mg/kg(n＝8)和30mg/kg(n＝8)的苯巴那酯之后两小时，使小鼠经受AC-MES刺激。苯巴那酯示出对AC-MES诱导的强直性癫痫发作的剂量-依赖性和浓度-依赖性功效，其中在7.5mg/kg时3/7动物癫痫发作(平均血浆浓度为78.1μM)，在10mg/kg时1/8动物癫痫发作(平均血浆浓度为87μM)，在30mg/kg时0/8动物癫痫发作(平均血浆浓度为237μM)。较低的3mg/kg和5mg/kg剂量对7/8动物癫痫发作具有最小的作用。在2/3研究中，在苯巴那酯治疗组中动物癫痫发作的比例与溶媒治疗组显著不同(p值示于图18中)。将所有3项研究(4D、4E和4F)的数据组合用于苯巴那酯单独给药时的浓度响应曲线分析。苯巴那酯的浓度响应曲线示出血浆的EC50为70.5μM并且脑组织的EC50为25.2μM。
在AC-MES模型中，基于剂量-响应研究，选择5mg/kg苯巴那酯的剂量和0.5mg/kg、1mg/kg和2mg/kg化合物A的剂量，当单独给药用于组合研究时，其示出最小功效。
进行了两项组合研究，4F(2mg/kg的化合物A与5mg/kg的苯巴那酯的组合)和4G(0.5mg/kg和1mg/kg的化合物A与5mg/kg的苯巴那酯的组合)。在雄性CF-1小鼠中将化合物A(0.5mg/kg、1mg/kg和2mg/kg PO，AC-MES之前0.5小时)与苯巴那酯(5mg/kg PO，AC-MES之前2小时)组合示出2/8动物在0.5mg/kg化合物A时癫痫发作，1/8动物在1mg/kg化合物A时癫痫发作，并且0/8动物在2mg/kg化合物A时癫痫发作，这与当化合物A以2mg/kg单独给药时5/8动物癫痫发作或当苯巴那酯以5mg/kg单独给药时8/8动物癫痫发作形成对比。在研究4F中，在苯巴那酯治疗组和组合组之间的差异是统计学显著的，而在化合物A治疗组和组合组之间的差异不是统计学显著的。在研究4G中，溶媒组和组合组之间的差异是统计学显著的(注意：在该研究中没有使用化合物A和苯巴那酯的溶媒对照组和单剂量对照组；p值示于图19中)。在研究4F中，化合物A的血浆浓度(2mg/kg时的平均血浆浓度：当单独给药时为0.11μM，并且当组合给药时为0.29)和苯巴那酯的血浆浓度(5mg/kg时的平均血浆浓度：当单独给药时为31.3μM，并且当组合给药时为38.9μM)当组合施用时比单独给药时略高。在研究4G中，获得的平均总血浆浓度为：化合物A当以0.5mg/kg组合给药时：0.03μM；化合物A当以1mg/kg组合给药时：0.11μM；苯巴那酯当以5mg/kg(0.5mg/kg化合物A)组合给药时：41.1μM；苯巴那酯当以5mg/kg(1mg/kg化合物A)组合给药时：39.7μM。
组合给药的化合物A和苯巴那酯的复合浓度响应曲线示出，化合物A的血浆的外推的EC50为0.01μM，并且脑组织为0.03μM。结果示出，当与苯巴那酯组合给药时，化合物A对血浆和脑组织的效力分别增加33.3倍和14.2倍。
本说明书中提及的所有美国专利、美国专利申请公开、美国专利申请、外国专利申请和非专利公开，包括2021年2月9日提交的美国非临时申请号63/147,736，在此全文以引入方式并入本文。
尽管为了便于理解，已经相当详细地描述了上述组合物、方法和用途，但是显然在所附权利要求的范围内可进行某些改变和修改。因此，所描述的实施方案应被认为是说明性的而非限制性的，并且所要求保护的发明不限于本文给出的细节，但是可在所附权利要求的范围和等同物内进行修改。

Claims (61)

1.化合物A，用于治疗有需要的人的癫痫发作病症，包括以联合施用时的治疗有效量向所述人联合施用化合物A和抗癫痫药物(ASM)；
其中化合物A是N-[4-(6-氟-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基)-2,6-二甲基苯基]-3,3-二甲基丁酰胺。
2.化合物A，用于减少患有癫痫发作病症的人的疗效所需的抗癫痫药物(ASM)的量，包括与所述ASM一起向所述人施用当与所述ASM一起施用时有效实现这种减少的一定量的化合物A；
其中化合物A是N-[4-(6-氟-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基)-2,6-二甲基苯基]-3,3-二甲基丁酰胺。
3.化合物A，用于减少患有癫痫发作病症的人的疗效所需的化合物A的量，包括与化合物A一起向所述人施用当与化合物A一起施用时有效实现这种减少的一定量的抗癫痫药物(ASM)；
其中化合物A是N-[4-(6-氟-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基)-2,6-二甲基苯基]-3,3-二甲基丁酰胺。
4.根据权利要求1至3中任一项所述使用的化合物A，其包括增强所述人体中的Kv7钾通道的开放。
5.化合物A，用于增强人体中的Kv7钾通道的开放，其包括以联合施用时的治疗有效量向所述人联合施用化合物A和抗癫痫药物(ASM)；
其中化合物A是N-[4-(6-氟-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基)-2,6-二甲基苯基]-3,3-二甲基丁酰胺；并且
其中所述人患有癫痫发作病症。
6.根据权利要求4或权利要求5所述使用的化合物A，其特征在于，所述Kv7钾通道是Kv7.2、Kv7.3、Kv7.4或Kv7.5中的一种或多种。
7.根据权利要求6所述使用的化合物A，其相对于Kv7.1增强Kv7.2、Kv7.3、Kv7.4或Kv7.5中的一种或多种的开放是选择性的。
8.根据权利要求4或权利要求5所述使用的化合物A，其包括开放Kv7.2/Kv7.3(KCNQ2/3)钾通道。
9.根据权利要求1至8中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，所述ASM是苯二氮卓、卡马西平、苯巴那酯、非尔氨酯、加巴喷丁、拉科酰胺、拉莫三嗪、左乙拉西坦、奥卡西平、苯巴比妥、苯妥英、普瑞巴林、卢非酰胺、噻加宾、托吡酯、丙戊酸、氨己烯酸、唑尼沙胺或其组合。
10.根据权利要求1至9中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，所述ASM是丙戊酸、左乙拉西坦、苯妥英、拉科酰胺或苯巴那酯。
11.根据权利要求1至10中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，所述ASM不增强所述人体中的Kv7钾通道的开放。
12.根据权利要求1至11中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，所述ASM降低所述人体中的神经元兴奋。
13.根据权利要求12所述使用的化合物A，其特征在于，所述ASM通过阻断所述人体中的钠通道来降低神经元兴奋。
14.根据权利要求12所述使用的化合物A，其特征在于，所述ASM通过阻断所述人体中的钙通道来降低神经元兴奋。
15.根据权利要求12所述使用的化合物A，其特征在于，所述ASM通过结合所述人体中的突触小泡糖蛋白2A(SV2A)来降低神经元兴奋。
16.根据权利要求1至11中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，所述ASM增加所述人体中的神经元抑制。
17.根据权利要求1至11中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，所述ASM是谷氨酸能试剂。
18.根据权利要求1至11中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，所述ASM是GABA能试剂。
19.根据权利要求1至18中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，所述癫痫发作病症与Kv7钾通道功能障碍相关。
20.根据权利要求1至19中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，所述癫痫发作病症是局灶性发作癫痫。
21.根据权利要求1至20中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，化合物A口服施用于人。
22.根据权利要求1至21中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，所述ASM口服施用于人。
23.根据权利要求1至22中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，化合物A以1mg至200mg的剂量施用于人。
24.根据权利要求1至23中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，化合物A以2mg至100mg的剂量施用于人。
25.根据权利要求1至24中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，化合物A以5mg至50mg的剂量施用于人。
26.根据权利要求1至25中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，化合物A以5mg、10mg、15mg、20mg或25mg的剂量施用于人。
27.根据权利要求1至26中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，化合物A以20mg的剂量施用于人。
28.根据权利要求1至22中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，化合物A以至少10mg的剂量施用于人。
29.根据权利要求28所述使用的化合物A，其特征在于，化合物A以至少20mg的剂量施用于人。
30.根据权利要求28所述使用的化合物A，其特征在于，化合物A以至少50mg的剂量施用于人。
31.根据权利要求1至22中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，化合物A以每天5mg至1000mg的剂量施用于人。
32.根据权利要求31所述使用的化合物A，其特征在于，化合物A以每天5mg至500mg的剂量施用于人。
33.根据权利要求31所述使用的化合物A，其特征在于，化合物A以每天5mg至250mg的剂量施用于人。
34.根据权利要求31所述使用的化合物A，其特征在于，化合物A以每天20mg至150mg的剂量施用于人。
35.根据权利要求31所述使用的化合物A，其特征在于，化合物A以每天100mg的剂量施用于人。
36.根据权利要求1至22中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，化合物A以0.01mg/kg至2.0mg/kg的剂量施用于人。
37.根据权利要求36所述使用的化合物A，其特征在于，化合物A以0.03mg/kg至1.0mg/kg的剂量施用于人。
38.根据权利要求36所述使用的化合物A，其特征在于，化合物A以0.05mg/kg至0.5mg/kg的剂量施用于人。
39.根据权利要求1至38中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，将化合物A在用餐之前约30分钟至用餐之后约2小时之间口服施用于人。
40.根据权利要求39所述使用的化合物A，其特征在于，化合物A在用餐期间或在用餐之后15分钟内口服施用于人。
41.根据权利要求1至40中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，所述ASM是丙戊酸。
42.根据权利要求41所述使用的化合物A，其特征在于，所述丙戊酸以2mg/kg至16mg/kg的剂量施用于人。
43.根据权利要求41所述使用的化合物A，其特征在于，所述丙戊酸以4mg/kg至12mg/kg的剂量施用于人。
44.根据权利要求1至40中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，所述ASM是苯妥英。
45.根据权利要求44所述使用的化合物A，其特征在于，所述苯妥英以0.05mg/kg至5mg/kg的剂量施用于人。
46.根据权利要求44所述使用的化合物A，其特征在于，所述苯妥英以0.1mg/kg至1mg/kg的剂量施用于人。
47.根据权利要求1至40中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，所述ASM是拉科酰胺。
48.根据权利要求47所述使用的化合物A，其特征在于，所述拉科酰胺以0.1mg/kg至5mg/kg的剂量施用于人。
49.根据权利要求47所述使用的化合物A，其特征在于，所述拉科酰胺以0.5mg/kg至1mg/kg的剂量施用于人。
50.根据权利要求1至40中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，所述ASM是苯巴那酯。
51.根据权利要求50所述使用的化合物A，其特征在于，所述苯巴那酯以0.05mg/kg至5mg/kg的剂量施用于人。
52.根据权利要求50所述使用的化合物A，其特征在于，所述苯巴那酯以0.1mg/kg至1mg/kg的剂量施用于人。
53.根据权利要求1至52中任一项所述使用的化合物A，其特征在于，相对于单独施用化合物A或ASM，化合物A和ASM的联合施用提供了改善的功效。
54.一种药物组合物，所述药物组合物包含化合物A、抗癫痫药物(ASM)和药学上可接受的载体；
其中化合物A是N-[4-(6-氟-3,4-二氢-1H-异喹啉-2-基)-2,6-二甲基苯基]-3,3-二甲基丁酰胺。
55.根据权利要求54所述的药物组合物，其特征在于，所述ASM是苯二氮卓、卡马西平、苯巴那酯、非尔氨酯、加巴喷丁、拉科酰胺、拉莫三嗪、左乙拉西坦、奥卡西平、苯巴比妥、苯妥英、普瑞巴林、卢非酰胺、噻加宾、托吡酯、丙戊酸、氨己烯酸、唑尼沙胺或其组合。
56.根据权利要求55所述的药物组合物，其特征在于，所述ASM是丙戊酸、苯妥英、左乙拉西坦、拉科酰胺或苯巴那酯。
57.根据权利要求56所述的药物组合物，其特征在于，所述ASM是丙戊酸。
58.根据权利要求56所述的药物组合物，其特征在于，所述ASM是苯妥英。
59.根据权利要求56所述的药物组合物，其特征在于，所述ASM是左乙拉西坦。
60.根据权利要求56所述的药物组合物，其特征在于，所述ASM是拉科酰胺。
61.根据权利要求56所述的药物组合物，其特征在于，所述ASM是苯巴那酯。
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