CN117007756A - 一种筛选抗阿霉素心肌毒性活性物质的方法 - Google Patents
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本发明涉及药物筛选与评价方法技术领域，具体地说，涉及一种筛选抗阿霉素心肌毒性活性物质的方法；包括以下步骤：S1、建立患有DIC的斑马鱼模型，并获取该模型的心脏跳动图像；S2、根据心脏跳动图像分析该斑马鱼模型的心功能参数；S3、将化合物作用于上述斑马鱼模型中，筛选阳性化合物；S4、通过进行是否影响阿霉素抗癌性的验证来对阳性化合物进一步地筛选；整个筛选和评价方法不仅具有快速、经济、高通量、高内涵的特点，而且筛选和评价结果更为全面严谨，筛选得到的阳性化合物可以有效地减弱Dox诱导的心脏细胞损伤，同时不影响Dox的抗肿瘤活性。
Description
技术领域
本发明涉及药物筛选与评价方法技术领域，具体地说，涉及一种筛选抗阿霉素心肌毒性活性物质的方法。
背景技术
阿霉素又称Dox，是一种抗生素，在包括白血病、乳腺癌和许多其他类型的实体肿瘤在内的广泛癌症中显示出良好的治疗效果，但是阿霉素对于心脏具有毒性，包括不可逆的退行性心肌病和充血性心力衰竭，严重限制了其临床应用。因此，阐明Dox诱导的心肌病(DIC)的潜在机制，在不影响Dox抗肿瘤作用的前提下开发Dox治疗患者的心脏保护疗法具有重要的临床意义。
近年来，基于斑马鱼的表型检测越来越受欢迎，因为与经典的体外或体内检测相比，斑马鱼表型检测更真实地反映了疾病发病的内源性过程。斑马鱼模型由于其繁殖能力强、养殖成本低，可以满足现代药物筛选的高通量需求。此外，斑马鱼胚胎只有几毫米长，可以放置在多孔板中，并通过荧光显微镜快速批量成像，但是现有技术中，大多都是采用斑马鱼评价抗心律失常药物的疗效以及药物对心率或心律的影响，对于如何通过斑马鱼来筛选抗阿霉素心肌毒性活性物质并没有提及。
现有技术CN106492232B公开了一种用斑马鱼评价心肌损伤诱导剂毒性与治疗剂功效的方法，用斑马鱼评价心肌损伤诱导剂毒性的方法具体包括以下步骤：(1)确定斑马鱼的发育阶段；(2)设置正常对照组和不同给药浓度的诱导剂处理组，并在相同温度下恒温培养；(3)通过心输出量减少率和血流速度减少率来评价诱导剂毒性，将实验组的斑马鱼置于心跳血流分析系统，统计、分析斑马鱼心输出量和血流速度，再计算心输出量减少率和血流速度减少率，再与正常对照组比较后进行毒性程度的评价。用斑马鱼评价心肌损伤诱导剂治疗剂功效的方法具体包括以下步骤：(1)确定斑马鱼的发育阶段；(2)设置正常对照组和不同给药浓度的诱导剂处理组，并在相同温度下恒温培养；(3)通过将实验组的斑马鱼置于心跳血流分析系统，分析斑马鱼心输出量和血流速度，判断并确定诱导剂的最佳给药浓度；(4)再通过心输出量增加率和血流速度增加率来评价治疗剂功效。但是上述两种方法中都是通过检测斑马鱼的心输出量和血流速度变化率来对心肌损伤诱导剂毒性或治疗功效进行分析、评价，上述方法中对于如何通过斑马鱼来筛选抗阿霉素心肌毒性且不影响阿霉素抗癌作用的活性物质并没有提及。
现有技术CN103969233A公开了一种双色荧光标记筛选抗阿霉素心肌毒性活性物质的方法，包括：取心肌细胞，加入待筛选物质进行预保护；预保护完成后，加入阿霉素进行损伤；向损伤后的心肌细胞中同时加入具有不同激发和发射波长的细胞膜完整性荧光探针与细胞核荧光探针，进行荧光标记；染色完成后采集、分析细胞荧光图像，分别计算待筛选物质对心肌细胞细胞膜和细胞核的保护率；从待筛选物质中筛选出对心肌细胞的细胞膜和细胞核的保护率均大于15％的活性物质，上述方法中对于如何通过斑马鱼来筛选阿霉素心肌毒性活性物质也并没有提及。
因此，亟需提供一种筛选抗阿霉素心肌毒性活性物质的方法，相对于现有技术，通过对斑马鱼进行活体成像的方法来对抗阿霉素心肌毒性活性物质进行更加全面的筛选。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供一种筛选抗阿霉素心肌毒性活性物质的方法。
为达到上述目的，本发明的技术方案如下：
一种筛选抗阿霉素心肌毒性活性物质的方法，包括以下步骤：
S1、建立患有DIC的斑马鱼模型，并获取该模型的心脏跳动图像；
S2、根据心脏跳动图像分析该斑马鱼模型的心功能参数，所述心功能参数具体包括心包水肿率、心率、舒张末期心室面积、收缩末期心室面积、心室面积变化率、短轴缩短率和每搏心输出量；
S3、将化合物作用于上述斑马鱼模型中，筛选阳性化合物；
S4、通过进行是否影响阿霉素抗癌性的验证来对阳性化合物进一步地筛选。
进一步地，S3具体包括以下步骤：
S301、根据斑马鱼模型设置多组实验组，将用于筛选的化合物分别作用到不同的实验组内；
S302、获取所有实验组内斑马鱼的心脏跳动图像；
S303、根据斑马鱼心脏跳动图像获取每组斑马鱼的多项心功能参数；
S304、分别对多个实验组内的多项心功能参数进行处理，计算出每个化合物的疗效评分；
S305、将每个化合物的疗效评分与阳性命中的阈值进行比较，如果大于阈值，则为阳性化合物，反之，则不是阳性化合物。
更进一步地，S304中通过下述公式获取化合物的疗效评分：
上式中，Efficacy Score表示疗效评分，∑Rescue Index表示每项心功能参数的治疗指数之和，Number of parameters表示心功能参数的个数。
更进一步地，每项心功能参数的治疗指数通过下述公式得出：
上式中，Rescue Index表示治疗指数，Xdrug表示给药组中该项参数的数值，Xmodel表示模型组中该项参数的数值，Xctrl表示对照组中该项参数的数值。
进一步地，S4具体包括以下步骤：
S401、通过原癌基因过度激活的斑马鱼进行自然产卵获得斑马鱼胚胎；
S402、将上述斑马鱼胚胎分为多组，分别用阿霉素、DMSO溶剂或阿霉素+化合物处理24h；
S403、在S402过程中，通过计数主动脉-性腺-中肾造血区的cmyb+细胞数量来判断化合物是否对阿霉素的抗癌性存在影响，并将对阿霉素抗癌效果产生影响的化合物排除。
进一步地，S1中患有DIC的斑马鱼模型的获取方法具体为：通过自然产卵获得斑马鱼胚胎，将斑马鱼胚胎排列在孔板中，每个孔位设置5条斑马鱼胚胎，每个孔位内都放置阿霉素和FeCl3，在阿霉素和FeCl3共存的条件下对斑马鱼胚胎处理一段时间，然后再用新鲜E3缓冲液替换胚培养基，继续培养获得患有DIC的斑马鱼模型。
更进一步地，斑马鱼产卵后，将受精后30h的斑马鱼胚胎排列在孔板中。
进一步地，S2中，通过人工方法，或，通过基于ZVSegNet网络和HRNet网络的深度学习方法对心脏跳动图像进行分析。
2"-O-galloylhyperin、氯化矢车菊素在作为抗阿霉素心肌毒性活性物质的应用。
所述的应用可以是用于制备抗阿霉素心肌毒性的药物，具体地，可以是与阿霉素联合应用于抗肿瘤治疗以降低阿霉素的心肌毒性。
本发明同时提供了一种抗肿瘤药物，所述药物中包括阿霉素和2"-O-galloylhyperin，或，包括阿霉素和氯化矢车菊素。
在实际应用中，所述的药物中2"-O-galloylhyperin和阿霉素的摩尔比范围或氯化矢车菊素和阿霉素的摩尔比范围可以是高于20：1，优选为20-400：1。事实上所述2"-O-galloylhyperin和阿霉素的摩尔比或氯化矢车菊素和阿霉素的摩尔比可以根据人体具体的症状进行调整。
所述的药物中，阿霉素起到的作用为抗肿瘤，2"-O-galloylhyperin或氯化矢车菊素用于缓解阿霉素的副作用，具体指阿霉素带来的心肌毒性的副作用。
所述的药物中还可以包括其他药学上可接受的载体或辅料。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明通过将化合物放置在患有DIC的斑马鱼模型中，再通过对斑马鱼模型中斑马鱼胚胎心功能参数的分析计算，得出所有化合物的疗效评分，将疗效评分与设定的阈值进行比较，即可筛选出阳性化合物，即抗阿霉素心肌毒性的活性物质，整个筛选和评价方法不仅具有快速、经济、高通量、高内涵的特点，而且筛选和评价结果更为全面严谨，筛选得到的阳性化合物可以有效地减弱Dox诱导的心脏细胞损伤，同时不影响Dox的抗肿瘤活性。
附图说明
图1为本发明方法流程图。
图2为本发明通过人工方法(Manual)和计算机网络方法(Network)计算对照组和模型组中斑马鱼心功能参数的对比图。
图3为本发明正常斑马鱼和Dox诱导发生心包水肿的斑马鱼的对比图。
图4为本发明化合物对斑马鱼模型的疗效评分分布图。
图5为本发明斑马鱼使用Dox诱导前后cmyb+细胞数量对比图。
图6为本发明2"-O-GH对斑马鱼模型中Dox抗癌活性的影响的示意图。
图7为本发明2"-O-GH对大鼠心肌细胞中细胞存活率的作用示意图。
图8为本发明2"-O-GH对大鼠心肌细胞中细胞ATP水平的作用示意图。
图9为本发明氯化矢车菊素对大鼠心肌细胞中细胞存活率的作用示意图。
图10为本发明氯化矢车菊对HeLa、A549、AU565肿瘤细胞生存率影响的示意图。
图11为本发明氯化矢车菊素改善DIC小鼠心功能的超声心动示意图。
图12为本发明氯化矢车菊素改善DIC小鼠的心功能参数：左室射血分数(EF)和左室短轴缩短率(FS)的示意图。
图13为本发明氯化矢车菊素改善DIC小鼠心肌血管周围炎症细胞浸润和铁沉积的示意图。
图14为本发明氯化矢车菊素改善DIC小鼠心肌组织线粒体损伤的示意图。
图15为本发明氯化矢车菊素可显著抑制Erastin诱导的细胞铁死亡的示意图。
具体实施方式
下面将结合附图说明对本发明的技术方案进行清楚的描述，显然，所描述的实施例并不是本发明的全部实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。
本发明提供一种筛选抗阿霉素心肌毒性活性物质的方法，如图1所示，具体包括以下步骤：
S1、建立患有DIC的斑马鱼模型，并获取该模型的心脏跳动图像；
通过自然产卵获得斑马鱼胚胎，将30hpf(受精30h)的斑马鱼胚胎排列在24孔板中，每个孔位优选设置5条斑马鱼，每个孔位内都放置65μM的阿霉素(Dox)和10μM的FeCl3，在Dox和FeCl3共存的条件下对斑马鱼处理30h，30h后再用新鲜E3缓冲液替换胚培养基，继续培养40h，其中，E3缓冲液内不含有Dox，在100hpf时，使用Leica DMI 3000B倒置荧光显微镜系统(Leica Microsystems Inc.，美国)获取荧光心脏跳动图像。同时设置正常对照组，培养液中不含Dox和FeCl3。
S2、分别通过人工方法和深度学习方法分析斑马鱼的心功能参数；
S201、设置30组对照组和30组实验组斑马鱼，对照组为未患有DIC的斑马鱼组，实验组采用S1建立的斑马鱼模型，对这60组内的斑马鱼采用S1步骤中的方法进行心脏跳动图像的拍摄；
S202、在S201步骤获得的心脏跳动图像的静止帧上通过人工方法和深度学习方法分别获得斑马鱼的多项心功能参数；
具体地说，需要测量的斑马鱼的心功能参数包括心率、舒张末期心室面积(EDA)、收缩末期心室面积(ESA)等，需要计算的参数包括心室面积变化率(FAC)、短轴缩短率(FS)和每搏心输出量(SV)，在获取斑马鱼的多项心功能参数的过程中，为了提高心功能分析的准确度和效率，通过使用前期构建的ZVSegNet和HRNet网络进行斑马鱼心室分割和心率计算，且经结果显示，两种方法的分析结果无明显差异，选择其中任一种方法进行都可行。
更具体地说，100hpf时麻醉斑马鱼，将斑马鱼移入96孔板，每孔一条鱼。调整斑马鱼体位使其右心室在上，每孔用徕卡倒置显微镜相机以50帧/秒的速度自动拍摄2s。拍摄后，计算每条斑马鱼的心率，以心内膜为界定义心脏，通过Image Pro Plus6.0软件测量心包水肿率、心收缩末期(End systole，ES)和舒张末期(End diastolic，ED)心室的面积大小和长短轴长度，并通过下述公式计算心室面积变化率(Fractional area change，FAC)、短轴缩短率(Fractional shortening，FS)、每搏心输出量(Stroke volume，SV)：
FAC＝(EDA-ESA)/EDA×100％
上式中EDA表示舒张末期心室面积，ESA表示收缩末期心室面积；
FS＝(EDb-ESb)/EDb×100％
上式中EDb表示舒张末期心室短轴，ESb表示收缩末期心室短轴；
SV＝EDV-ESV
上式中EDV表示为舒张末期心室容积，ESV表示收缩末期心室容积；
上式中V表示心室体积，a为心室长轴；b为心室短轴。
心包水肿的发生通过眼睛观察判断(正常则为1，不正常则为0)。
S203、如图2所示，将对照组和实验组获得的心功能参数进行对比，实验组相比于对照组的斑马鱼而言，胚胎心脏扭曲成更细长的形状，心脏收缩功能严重受损，心率下降，心包水肿，同时，实验组内的胚胎中观察到心脏外周血流量减少，可能是心脏泵血能力受损的结果。
S3、基于S2中实验组进行抗阿霉素心肌毒性活性物质表型筛选；
S301、将构建的DIC斑马鱼模型应用于抗DIC药物筛选，具体地说将用于筛选的化合物作用到实验组内，保证每个化合物至少作用于5个斑马鱼胚胎上，且化合物的浓度为100μM；
化合物采用天然化合物药板，其中含347个天然化合物，包括113个萜类(32.56％)、78个黄酮类(22.48％)、47个苯丙类(13.54％)、40个生物碱(11.53％)、38个酚类(10.95％)、23个类固醇(6.63％)和8个其他类化合物(2.31％)，平均分子量为470.59。
S302、获取S301中斑马鱼胚胎的荧光标记的心脏跳动图像，再基于ZVSegNet和HRNet网络的深度学习方法分析获得心功能参数，也可根据人工方法进行分析，具体获得多组EDA、ESA、FAC、FS、SV、心率和心包水肿率7个关键心功能参数，每组参数为一种化合物所作用的每孔5条斑马鱼的心功能参数，心包水肿的发生通过眼睛观察判断(正常则为1，不正常则为0)(如图3所示)；
S303、对S302中得到的心功能参数采用疗效评分法评价各化合物的抗DIC活性，将所得到每一组EDA、ESA、FAC、FS、FV、心率和心包水肿率分别带入下式中
上式中Rescue Index表示治疗指数，Xdrug表示给药组中该项参数的数值，Xmodel表示模型组中该项参数的数值，Xctrl表示对照组中该项参数的数值；
求出该组中每个心功能参数的治疗指数，再将7项心功能参数求出的治疗指数相加带入下式中
上式中，Efficacy Score表示疗效评分，∑Rescue Index表示每项心功能参数的治疗指数之和，Number of parameters表示心功能参数的个数；
计算出所对应化合物的疗效评分，所求出的疗效评分大于阳性命中的阈值，则对应的化合物为阳性化合物，阳性命中的阈值设为0.7，具体如图4所示，通过实验结果所知，38个得分高于0.7的化合物被确认为阳性化合物。
S4、通过进行是否影响阿霉素抗癌性的验证来对S3中所得的阳性化合物进行进一步地筛选；
S401、构建患有白血病的斑马鱼模型，通过原癌基因c-Myb过度激活的斑马鱼进行自然产卵获得斑马鱼胚胎；
S402、再将受精30h后的斑马鱼胚胎排列于24孔板中，每孔内设置5个斑马鱼胚胎，设为三组，分别用DMSO(对照组)、Dox(模型组)或Dox+化合物(给药组)处理24h；
S403、在S402操作过程中，通过人工计数获得主动脉-性腺-中肾造血区cmyb+细胞数量(number of cmyb+cells in CHT)，如图5所示，使用了Dox的斑马鱼中cmyb+细胞数量有所减少，测试结果显示有22个化合物对Dox的抗癌性无显著影响，在这22个候选化合物中，迷迭香酸、氯化矢车菊素(CyCl)、芒果苷和2"-O-galloylhyperin(2"-O-GH)是疗效最高的化合物，如图6所示，2"-O-GH对Dox的抗白血病活性无显著拮抗作用。
S5、进一步验证2"-O-GH对DOX损伤心肌细胞存活率的影响，
S501、用高糖DMEM培养液培养大鼠心肌细胞(H9c2)，培养液中含有10％胎牛血清和1％抗生素(100U/ml青霉素和100μg/ml的链霉素)，并在37℃和含5％CO2的培养箱中培养；
S502、设置对照组、模型组和给药组，将步骤S501中培养的大鼠心肌细胞接种到96孔板中，每个孔位设置3000个细胞，细胞贴壁后，在模型组和给药组中加入Dox(0.5μM)和FeCl3(0.1μM)损伤48h，在对照组内加入DMSO溶剂(0.1％)，给药组中同时加入不同浓度的2"-O-GH进行保护，浓度分别设置为10μM、50μM、100μM、200μM。如图7、图8所示，2"-O-GH可显著提高Dox损伤大鼠心肌细胞的存活率(图7)、增加ATP水平(图8)，ATP水平通过试剂盒CellTiter-Glo Luminescent Kit(Promega)(货号：G7573)完成，且呈浓度依赖性。
S6、进一步验证氯化矢车菊素对DOX诱导心肌损伤的影响；
S601、用高糖DMEM培养液培养大鼠心肌细胞(H9c2)，培养液中含有10％胎牛血清和1％抗生素(100U/ml青霉素和100μg/ml的链霉素)，并在37℃和含5％CO2的培养箱中培养；；
S602、设置对照组、模型组和给药组，将步骤S601中培养的大鼠心肌细胞接种到96孔板中，每个孔位设置3000个细胞，细胞贴壁后，在模型组和给药组中加入Dox(0.5μM)和FeCl3(0.1μM)损伤48h，在对照组内加入DMSO溶剂(0.1％)，给药组中同时加入不同浓度的氯化矢车菊素(10μM，50μM，100μM，200μM)进行保护，结果如图9所示，氯化矢车菊素可显著提高Dox损伤H9c2心肌细胞的存活率。根据图10所示，氯化矢车菊素对HeLa、A549、AU565等多种肿瘤细胞的活力也无明显影响，说明氯化矢车菊素可以在不影响Dox化疗活性的前提下抗Dox诱导的心肌损伤。
S603、进一步在Dox诱导的小鼠心肌损伤模型中研究氯化矢车菊素的心脏保护作用。单剂量注射Dox(15mg/kg)诱导小鼠急性心肌病，并连续8天灌胃给予氯化矢车菊素(100mg/kg/d或200mg/kg/d)。超声心动图(图11)显示Dox诱导小鼠心功能障碍，左室射血分数(EF)和短轴缩短率(FS)降低(如图12所示)，氯化矢车菊素治疗效果显著，与阳性药Dexrazoxane(DXZ)治疗程度相似。组织学染色检测到DIC小鼠心肌血管周围炎症细胞浸润和铁沉积(如图13所示)。透射电镜结果显示Dox诱导小鼠心肌组织超微结构严重缺陷，包括肌节破坏和线粒体肿胀，嵴缺失和广泛的空泡化(如图14所示)，最后得出结论：氯化矢车菊素治疗可有效缓解上述Dox诱导的小鼠心脏损伤。
S604、验证氯化矢车菊素是否为一种有效的铁死亡抑制剂，阳性药DXZ是美国食品和药物管理局(FDA)批准用于预防癌症患者Dox诱导的心脏毒性的唯一药物，被认为是通过螯合细胞内铁和阻断铁辅助的氧化自由基产生来起作用。Erastin是一种作用于线粒体VDAC的铁死亡激活剂，在体外诱导细胞铁死亡；Fer-1是一种有效的、选择性的铁死亡抑制剂。进一步研究氯化矢车菊素在Erastin诱导铁死亡中的作用，H9c2细胞种板贴壁后，模型组和给药组用Erastin(5μM)处理48h，DMSO(0.1％)作为空白对照，给药组中同时加入不同浓度的氯化矢车菊素(100μM，200μM，400μM)进行保护，Fer-1作为阳性药。氯化矢车菊素以剂量依赖的方式有效地抑制了Erastin诱导的细胞死亡(图15)，证明了其作为一种有效的铁死亡抑制剂的作用。
以上具体实施方式仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照实例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (10)
1.一种筛选抗阿霉素心肌毒性活性物质的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、建立患有DIC的斑马鱼模型，并获取该模型的心脏跳动图像；
S2、根据心脏跳动图像分析该斑马鱼模型的心功能参数，所述心功能参数具体包括心包水肿率、心率、舒张末期心室面积、收缩末期心室面积、心室面积变化率、短轴缩短率和每搏心输出量；
S3、将化合物作用于上述斑马鱼模型中，筛选阳性化合物；
S4、通过进行是否影响阿霉素抗癌性的验证来对阳性化合物进一步地筛选。
2.根据权利要求1所述的一种筛选抗阿霉素心肌毒性活性物质的方法，其特征在于，S3具体包括以下步骤：
S301、根据斑马鱼模型设置多组实验组，将用于筛选的化合物分别作用到不同的实验组内；
S302、获取所有实验组内斑马鱼的心脏跳动图像；
S303、根据斑马鱼心脏跳动图像获取每组斑马鱼的多项心功能参数；
S304、分别对多个实验组内的多项心功能参数进行处理，计算出每个化合物的疗效评分；
S305、将每个化合物的疗效评分与阳性命中的阈值进行比较，如果大于阈值，则为阳性化合物，反之，则不是阳性化合物。
3.根据权利要求2所述的一种筛选抗阿霉素心肌毒性活性物质的方法，其特征在于，S304中通过下述公式，获取化合物的疗效评分：
上式中，Efficacy Score表示疗效评分，∑RescueIndex表示每项心功能参数的治疗指数之和，Number of parameters表示心功能参数的个数。
4.根据权利要求3所述的一种筛选抗阿霉素心肌毒性活性物质的方法，其特征在于，每项心功能参数的治疗指数通过下述公式得出：
上式中，RescueIndex表示治疗指数，Xdrug表示给药组中该项参数的数值，Xmodel表示模型组中该项参数的数值，Xctrl表示对照组中该项参数的数值。
5.根据权利要求1所述的一种筛选抗阿霉素心肌毒性活性物质的方法，其特征在于，S4具体包括以下步骤：
S401、通过原癌基因过度激活的斑马鱼进行自然产卵获得斑马鱼胚胎；
S402、将上述斑马鱼胚胎分为多组，分别用阿霉素、DMSO溶剂或阿霉素+化合物处理24h；
S403、在S402过程中，通过计数主动脉-性腺-中肾造血区的cmyb+细胞数量来判断化合物是否对阿霉素的抗癌性存在影响，并将对阿霉素抗癌效果产生影响的化合物排除。
6.根据权利要求1所述的一种筛选抗阿霉素心肌毒性活性物质的方法，其特征在于，S1中患有DIC的斑马鱼模型的获取方法具体为：通过自然产卵获得斑马鱼胚胎，将斑马鱼胚胎排列在孔板中，每个孔位设置5条斑马鱼胚胎，每个孔位内都放置阿霉素和FeCl3，在阿霉素和FeCl3共存的条件下对斑马鱼胚胎处理一段时间，然后再用新鲜E3缓冲液替换胚培养基，继续培养获得患有DIC的斑马鱼模型。
7.根据权利要求6所述的一种筛选抗阿霉素心肌毒性活性物质的方法，其特征在于，斑马鱼产卵后，将受精后30h的斑马鱼胚胎排列在孔板中。
8.根据权利要求1所述的一种筛选抗阿霉素心肌毒性活性物质的方法，其特征在于，S2中，通过人工方法，或，通过基于ZVSegNet网络和HRNet网络的深度学习方法对心脏跳动图像进行分析。
9.2"-O-galloylhyperin、氯化矢车菊素作为抗阿霉素心肌毒性活性物质的应用。
10.一种抗肿瘤药物，其特征在于：所述药物中包括阿霉素和2"-O-galloylhyperin，或，包括阿霉素和氯化矢车菊素。
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| YAN LIU等: "Visnagin protects against doxorubicin-induced cardiomyopathy through modulation of mitochondrial malate dehydrogenase", 《SCI TRANSL MED》, vol. 6, no. 266, 10 December 2014 (2014-12-10), pages 1 - 12 * |
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