CN116981441A - 口服脂质体组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种经口服、鼻腔或肺部给予的脂质体组合物，其包含带负电荷的磷脂、任选的两性离子磷脂、甾醇和一种或多种具有生物学意义的两亲性物质，优选亲脂性免疫刺激剂，可用于治疗和/或预防执行单核细胞和/或巨噬细胞激活的任何病理。

Description

口服脂质体组合物

技术领域

本发明涉及一种新的口服脂质体组合物及其用途。

背景技术

所给予的物质的治疗效果通常与该物质进入血液的量和比率直接相关。多种因素影响物质到达全身循环的能力，包括：进入身体的部位、物质的物理形态、产品制剂的设计、活性物质和赋形剂的物理化学特性以及所述活性物质的适当吸收。由于方便和易于给予，治疗物质的口服给予是当今最常见的给予形式。

影响吸收并由此影响经口服给予的物质到达血流的能力的因素与该物质的物理化学特性、胃肠道的生理因素和剂型的特征有关。常规口服剂型由溶液、混悬液、粉末、双组分明胶胶囊、软明胶胶囊、带有包衣或不带包衣的片剂组成。

本发明涉及用于经口服、鼻腔或肺部给予的脂质体组合物，其包含带负电荷的磷脂、两性离子磷脂、甾醇和一种或多种具有生物学意义的两亲性物质，优选亲脂性免疫刺激剂，可用于治疗和/或预防涉及单核细胞和/或巨噬细胞(先天免疫系统)激活的任何病理。

存在刺激患者的免疫系统的、处于脂质体形式的抗癌药物。然而，这些药物最通常以肠胃外形式给予，特别是通过静脉途径给予。

一种此类药物是脂质体米伐木肽(mifamurtide)，也称为脂质体MTP-PE(胞壁酰三肽磷脂酰乙醇胺)，商品名为

这种药物的给予方式对患者而言是非常严格的，因为它以静脉输注的形式给予1小时，每周给予一次或两次。

此外，治疗必须在医疗监督下进行，因此优选在医院进行。该药物适用于非转移性骨肉瘤的治疗。

术语“脂质体”通常是指可负载治疗剂的单层或多层脂质结构，例如，治疗剂被包封在脂质体内，和/或治疗剂可附着在脂质体中或掺入脂质双层中。这些脂质体制剂已被证明具有比游离药物有更高的功效。例如，与游离长春新碱相比，包含长春花生物碱长春新碱的脂质体制剂已显示出对白血病细胞具有更大的功效，并且表现出降低的总体毒性。

除了它们的提高包封的生物活性化合物的治疗功效的能力之外，脂质体还具有重要的优点，例如与使用相同的游离化合物相比，降低了所配制的生物活性物质的有效剂量。

与脂质体的口服给予有关的药物问题是：1)胃pH，2)胆汁盐，和3)消化酶，主要是脂肪酶。

胃的未缓冲pH可为1.5至2.5，并且可引起脂质体膜表面的化学不稳定。

胆汁盐作为清洁剂(detergent)起作用，并通过乳化引起脂质体双层的不稳定。暴露于脂肪酶和其它酶时，磷脂的极性头基或酰基链可被裂解，并由此使脂质体囊泡破裂。

应避免脂质体的降解，这是因为配制为脂质体且经口服给予的药物必须作为完整的、未降解的脂质体被吸收到总血流中，以便保持它们的药理学性质。

脂质体的降解还导致脂质体中所含的活性成分的吸收的可变性。由于口服给予后所吸收的活性成分的比例必须得到控制且可合理地预测，活性成分吸收的这种可变性也是问题。

现有技术已经提出了几种类型的脂质体，其包含含有或不含亲脂性免疫刺激剂的脂质的不同组合。

然而，现有技术尚未公开在胆汁盐存在下和任选地在模拟胃肠道环境的酸和酶介质中足够稳定的脂质体制剂，以确保当经口服给予含有一种或多种具有生物学意义的两亲性物质(优选亲脂性免疫刺激剂)的脂质体制剂时的有效治疗。

例如，文献WO2007014754描述了由在胆固醇存在下的一种或多种具有生物学意义的两亲性物质(优选亲脂性免疫刺激剂)和磷脂的组合组成的组合物，可用于免疫系统的体内激活。该文献具体描述了包含MTP-PE(胞壁酰三肽磷脂酰乙醇胺)的组合物，并且该组合物包含62.5％的棕榈酰-油酰-磷脂酰胆碱(POPC)、26.8％的二(油酰)-磷脂酰丝氨酸(DOPS)和10.7％的胆固醇。该文献描述了由Avicel、聚乙烯吡咯烷酮和脂质体组合物的冻干物组成的片剂的制备，所述脂质体组合物包含合成脂肽、70％的POPC和30％的DOPS。

另一份文献描述了当被包封在磷脂酰胆碱脂质体(POPC-19835A)中并作为免疫调节剂被经口服给予至小鼠时，合成的胞壁酰三肽CGP 19835A的体内生物学活性。脂质体在肠道中被迅速吸收，并在4小时内进入全身循环。单次喂食POPC-19835A后24小时，从小鼠的肺收集的肺泡巨噬细胞对鼠肾癌的靶细胞具有杀瘤作用(S.Tanguay等，CancerRes.1994Nov.15；54(22):5882-8)。

因此，尽管存在几种可以经口服给予的脂质体组合物，但是对于新的脂质体组合物仍然存在需求，该新的脂质体组合物可以经口服给予，含有一种或多种具有生物学意义的两亲性物质，在胆汁盐存在下脂质体组合物的稳定性得到改善。

发明内容

在寻求新的改善的治疗组合物的背景下，本发明的第一目的是提出新的脂质体组合物。本发明的第二个目的是提供用于生产所述脂质体组合物的方法。最后，本发明的另一目的是提供药物组合物及其用途。

具体实施方式

因此，本发明的申请人已经表明，包含带负电荷的磷脂、两性离子磷脂、按重量或摩尔百分比计在一定范围内的甾醇和一种或多种具有生物学意义的两亲性物质(优选亲脂性免疫刺激剂)的脂质体在酸性pH和/或胆汁盐存在下具有改善的稳定性，所述具有生物学意义的两亲性物质可用于免疫系统的激活，特别是单核细胞或巨噬细胞类型的细胞的激活。

因此，本发明更具体地涉及用于口服给予的脂质体组合物，其由以下组分组成或包含以下组分：

a)一种或多种具有生物学意义的两亲性物质，优选亲脂性免疫刺激剂，甚至更优选相对于脂质体组合物的总重量，按重量计0.1％至10％的亲脂性衍生物胞壁酰二肽或胞壁酰三肽(MDP或MTP)；

b)脂质体，所述脂质体由以下组分组成或包含以下组分：

i)相对于所述脂质体的脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计25％至35％的至少一种带负电荷的磷脂；

ii)基于所述脂质体的脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计30％至50％的至少一种两性离子磷脂；

iii)相对于所述脂质体的脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计20％至30％的至少一种甾醇，

条件是所述至少一种两性离子磷脂不是棕榈酰-油酰-磷脂酰-胆碱(palmitoyl-oleoyl-phosphatidyl-choline，POPC)，也不是1,2-二(癸酰)1-sn-甘油-3-磷酸胆碱(1,2-didecanoyl 1-sn-glycero-3-phosphocholine，DDPC)。

根据本发明，所述至少一种两性离子磷脂是其一条或多条碳链为饱和的两性离子磷脂。

根据本发明，组分i)至iii)的摩尔％仅涉及被视为赋形剂的脂质体的脂质，而不将一种或多种具有生物学意义的两亲性物质(例如亲脂性免疫刺激剂)的脂质部分考虑在内。

至少一种带负电荷的磷脂的25％至35％的范围是指至少一种带负电荷的磷脂以按重量或摩尔计优选25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％的浓度存在于脂质体中。

至少一种两性离子磷脂的30％至50％的范围是指至少一种两性离子磷脂以按重量或摩尔计30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％或50％的浓度存在于脂质体中。

至少一种甾醇的20％至30％的范围是指至少一种甾醇以按重量或摩尔计20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％的浓度存在于脂质体中。

根据优选的实施方式，本发明涉及脂质体组合物，其中，相对于脂质体的按重量或总摩尔计的脂质组成，所述脂质体由以下组分组成或包含以下组分：

i)相对于脂质体脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计25％至35％、优选26％至32％、更优选30％的至少一种带负电荷的磷脂；

ii)相对于脂质体的脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计30％至50％、优选30％至40％、更优选40％的至少一种两性离子磷脂；

iii)相对于脂质体的脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计20％至30％、优选22％至28％、更优选25％或30％的至少一种甾醇；

其特征在于，所述脂质体组合物在胆汁盐存在下是稳定的；

条件是所述至少一种两性离子磷脂不是棕榈酰-油酰-磷脂酰-胆碱(POPC)，也不是1,2-二(癸酰)1-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DDPC)。

根据本发明，带负电荷的磷脂必须理解为在生理pH下具有负电荷的磷脂。例如，磷脂酰丝氨酸(PS)含有用磷脂酸(phosphatidic acid)酯化的丝氨酸部分。由于磷酸基团上的单一电荷，PS在生理pH下带负电荷。磷脂酰肌醇(PI)和磷脂酰甘油(PG)分别具有用磷酸酯化的甘油基团或用磷酸酯化的糖；PI和PG在生理pH下带负电荷。

更具体地，根据本发明，至少一种带负电荷的磷脂选自包括以下物质的组：磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酸(phosphaphatic acid，PA)、二磷脂酰甘油(DPG)或心磷脂(CL)，它们的包含一个或多个脂肪酸残基的衍生物，以及它们的混合物。

根据优选的实施方式，至少一种带负电荷的磷脂是磷脂酰丝氨酸(PS)或磷脂酰丝氨酸衍生物，所述磷脂酰丝氨酸衍生物选自包括以下物质的组：棕榈酰油酰-磷脂酰丝氨酸(palmitoyloleoyl-phosphatidylserine，POPS)、棕榈酰-亚油酰磷脂酰丝氨酸(palmitoyl-linoeoyl phosphatidylserine，PLPS)、棕榈酰-花生四烯酰-磷脂酰丝氨酸(palmitoyl-arachidonoyl-phosphatidylserine，PAPS)、棕榈酰二十二碳六烯酰磷脂酰丝氨酸(palmitoyl docosa-hexaenoyl phosphatidylserine，PDPS)、硬脂酰-油酰-磷脂酰丝氨酸(stearoyl-oleoyl-phosphatidylserine，OSPS)、硬脂酰-亚油酰-磷脂酰丝氨酸(stearoyl-linoleoyl-phosphatidylserine，GPPS)、硬脂酰-花生四烯酰-磷脂酰丝氨酸(stearoyl-arachidonoyl-phosphatidylserine，SAPS)、硬脂酰二十二碳六烯酰磷脂酰丝氨酸(stearoyl docosa-hexaenoyl phosphatidylserine，SDPS)、二(癸酰)-磷脂酰丝氨酸(di-capryl-phosphatidylserine，C10PS)、二(月桂酰)-磷脂酰丝氨酸(di-lauroyl-phosphatidylserine，DLPS)、二(肉豆蔻酰)-磷脂酰丝氨酸(di-myristoyl-phosphatidylserine，DMPS)、二(植烷酰)-磷脂酰丝氨酸(di-phytanoyl-phosphatidylserine，DPhPS)、二(十七酰)磷脂酰丝氨酸(di-heptadecanoylphosphatidylserine，PS17:0/17:0)、二(油酰)-磷脂酰丝氨酸(di-oleoyl-phosphatidylserine，DOPS)、二(棕榈酰)-磷脂酰丝氨酸(di-palmitoyl-phosphatidylserine，DPPS)、二(硬脂酰)磷脂酰丝氨酸(di-stearoylphosphatidylserine，DSPS)、二(亚油酰)磷脂酰丝氨酸(di-linoleoylphosphatidylserine，di18:3PS)、二(芥酸酰)磷脂酰丝氨酸(di-erucoylphosphatidylserine)、二(二十二碳六烯酰)-磷脂酰丝氨酸(di-docosahexaenoyl-phosphatidylserine)，以及它们的混合物，优选二(油酰)-磷脂酰丝氨酸(DOPS)。

根据优选的实施方式，至少一种带负电荷的磷脂是磷脂酰甘油或磷脂酰甘油衍生物，所述磷脂酰甘油衍生物选自包括以下物质的组：棕榈酰油酰-磷脂酰甘油(palmitoyloleoyl-phosphatidylglycerol)、棕榈酰-亚油酰磷脂酰甘油(palmitoyl-linoleoyl phosphatidylglycerol)、棕榈酰-花生四烯酰-磷脂酰甘油(palmitoyl-arachidonoyl-phosphatidylglycerol)、棕榈酰-二十二碳六烯酰-磷脂酰甘油(palmitoyl-docosahexaenoyl-phosphatidylglycerol)、硬脂酰-油酰-磷脂酰甘油(stearoyl-oleoyl-phosphatidylglycerol)、硬脂酰-亚油酰-磷脂酰甘油(stearoyl-linoleoyl-phosphatidylglycerol)、硬脂酰-花生四烯酰-磷脂酰甘油(stearoyl-arachidonoyl-phosphatidylglycerol)、硬脂酰-二十二碳六烯酰-磷脂酰甘油(stearoyl-docosahexaenoyl-phosphatidylglycerol)、二(癸酰)磷脂酰甘油(di-caprylphosphatidylglycerol)、二(月桂酰)磷脂酰甘油(di-lauroyl phosphatidylglycerol)、二(十七酰)-磷脂酰甘油(di-heptadecanoyl-phosphatidylglycerol)、二(植烷酰)-磷脂酰甘油(di-phytanoyl-phosphatidylglycerol)、二(肉豆蔻酰)磷脂酰甘油(di-myristoylphosphatidylglycerol)、二(棕榈酰)-磷脂酰甘油(di-palmitoyl-phosphatidylglycerol，DPPG)、二(十八碳烯酰)-磷脂酰甘油(di-elaidoyl-phosphatidylglycerol，DEPG)、二(硬脂酰)-磷脂酰甘油(di-stearoyl-phosphatidylglycerol)、二(油酰)-磷脂酰甘油(di-oleoyl-phosphatidylglycerol)、二(亚油酰)-磷脂酰甘油(di-linoeoyl-phosphatidylglycerol)、二(花生四烯酰)-磷脂酰甘油(di-arachidonoyl-phosphatidylglycerol)，以及它们的混合物，特别是二(油酰)-磷脂酰甘油。

根据本发明，两性离子磷脂必须被理解为在生理pH下是中性磷脂。例如，磷脂酰胆碱(PC)含有酯化至磷脂酸的胆碱部分。在生理pH下，PC同时具有磷酸基团携带的负电荷和胆碱基团携带的正电荷。磷脂酰乙醇胺(PE)含有用磷脂酸酯化的乙醇胺基团。由于PE具有与PC相似的结构，因此在生理pH下PE也是中性磷脂。

更具体地，根据本发明，至少一种两性离子磷脂选自包括以下物质的组：磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺，它们的包含一个或多个脂肪酸残基的衍生物；卵磷脂、溶血卵磷脂(lysolecithin)、溶血磷脂酰-乙醇胺(lysophatidyl-ethanolamine)、磷酸甘油酯；以及它们的混合物。

根据优选的实施方式，至少一种两性离子磷脂是磷脂酰胆碱或磷脂酰胆碱衍生物，所述磷脂酰胆碱衍生物选自包括以下物质的组：二(花生四烯酰)-磷脂酰-胆碱(di-arachidonoyl-phosphatidyl-choline，DAPC)、二(十八碳烯酰)-磷脂酰-胆碱(di-elaidoyl-phosphatidyl-choline，DEPC)、二(月桂酰)-磷脂酰-胆碱(dilauroyl-phosphatidyl-choline，DLaPC)、二(亚油酰)-磷脂酰-胆碱(di-linoleoyl-phosphatidyl-choline，DLPC)、二(亚麻酰)-磷脂酰-胆碱(di-linolenoyl-phosphatidyl-choline，DLnPC)、二(肉豆蔻酰)-磷脂酰-胆碱(di-myristoyl-phosphatidyl-choline，DMPC)、二(肉豆蔻烯酰)磷脂酰胆碱(di-myristoleoyl phosphatidylcholine，DMoPC)、二(油酰)磷脂酰胆碱(dioleoyl phosphatidylcholine，DOPC)、二(棕榈酰)-磷脂酰-胆碱(di-palmitoyl-phosphatidyl-choline，DPPC)、二(十五酰)磷脂酰-胆碱(dipentadecanoylphosphatidyl-choline，DPePC)、二(棕榈油酰)-磷脂酰-胆碱(dipalmitoleoyl-phosphatidyl-choline，DPoPC)、二(植烷酰)磷脂酰-胆碱(diphytanoyl phosphatidyl-choline，DPhPC)、二(岩芹酰)-磷脂酰-胆碱(di-petroselenoyl-phosphatidyl-choline，DPsPC)、二(十三酰)磷脂酰-胆碱(di-tridecanoyl phosphatidyl-choline，DTPC)、l-十六烷基-2-花生四烯酰磷脂酰胆碱(l-hexadecyl-2-arachidonoyl phosphatidylcholine，HAPC)、棕榈酰-花生四烯酰-磷脂酰-胆碱(palmitoyl-arachidonoyl-phosphatidyl-choline，PAPC)、1,2-二(十六酰)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine，DPPC)和1,2-二(硬脂酰)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine，DSPC)，以及它们的混合物，优选1,2-二(硬脂酰)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)，并且甚至更优选二(肉豆蔻酰)-磷脂酰-胆碱(DMPC)。

根据优选的实施方式，至少一种两性离子磷脂是磷脂酰-乙醇胺或磷脂酰-乙醇胺衍生物，所述磷脂酰-乙醇胺衍生物选自包括以下物质的组：棕榈酰-油酰-磷脂酰-乙醇胺、棕榈酰亚油酰-磷脂酰-乙醇胺、棕榈酰-花生四烯酰-磷脂酰-乙醇胺、棕榈酰-二十二碳六烯酰磷脂酰-乙醇胺、硬脂酰-油酰磷脂酰-乙醇胺、硬脂酰-亚油酰-磷脂酰-乙醇胺、硬脂酰-花生四烯酰磷脂酰-乙醇胺、硬脂酰-二十二碳六烯酰-磷脂酰-乙醇胺、二(月桂酰)磷脂酰-乙醇胺、二(肉豆蔻酰)-磷脂酰-乙醇胺、二(植烷酰)磷脂酰-乙醇胺、二(棕榈酰)磷脂酰-乙醇胺、二(十七酰)磷脂酰-乙醇胺、二(硬脂酰)磷脂酰-乙醇胺、二(十八碳烯酰)磷脂酰-乙醇胺、二(花生四烯酰)磷脂酰-乙醇胺、二十二碳六烯酰磷脂酰-乙醇胺，以及它们的混合物。

根据本发明，至少一种甾醇选自于由以下物质组成的组：胆固醇；胆固醇衍生物，所述胆固醇衍生物例如胆固醇-磷酸胆碱、胆固醇聚乙二醇和胆固醇-S04、胆固醇酯；维生素D；植物甾醇，所述植物甾醇例如谷甾醇、菜油甾醇和豆甾醇；以及它们的混合物，优选胆固醇。

根据优选的实施方式，本发明涉及脂质体组合物，其中，相对于脂质体的按重量或总摩尔计的脂质组成，所述脂质体由以下组分组成或包含以下组分：

i)25％至35％，优选25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％的DOPS；

ii)30％至50％，优选30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％或50％的DSPC、DPPC、DMPC或DLPC；

iii)基于脂质体的总重量或总摩尔量，20％至30％，优选20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％的胆固醇。

根据优选的实施方式，本发明涉及用于口服给予的脂质体组合物，其由以下组分组成或包含以下组分：

a)一种或多种具有生物学意义的两亲性物质，优选亲脂性免疫刺激剂，甚至更优选相对于所述脂质体组合物的总重量，按重量计0.1％至10％的亲脂性衍生物胞壁酰二肽或胞壁酰三肽(MDP或MTP)；

b)脂质体，所述脂质体由以下组分组成或包含以下组分：

i)相对于脂质体的脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计25％至35％，优选25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％的至少一种带负电荷的磷脂，所述至少一种带负电荷的磷脂选自包括磷脂酰丝氨酸(PS)或磷脂酰丝氨酸衍生物的组，所述磷脂酰丝氨酸(PS)或磷脂酰丝氨酸衍生物选自于由以下物质组成的组：棕榈酰-油酰-磷脂酰丝氨酸(POPS)、棕榈酰-亚油酰-磷脂酰丝氨酸(PLPS)、棕榈酰-花生四烯酰-磷脂酰丝氨酸(PAPS)、棕榈酰-二十二碳六烯酰-磷脂酰丝氨酸(PDPS)、硬脂酰-油酰-磷脂酰丝氨酸(OSPS)、硬脂酰-亚油酰-磷脂酰丝氨酸(GPPS)、硬脂酰-花生四烯酰-磷脂酰丝氨酸(SAPS)、硬脂酰二十二碳六烯酰磷脂酰丝氨酸(SDPS)、二(癸酰)-磷脂酰丝氨酸(C10PS)、二(月桂酰)-磷脂酰丝氨酸(DLPS)、二(肉豆蔻酰)-磷脂酰丝氨酸(DMPS)、二(植烷酰)-磷脂酰丝氨酸(DPhPS)、二(十七酰)磷脂酰丝氨酸(PS 17:0/17:0)、二(油酰)-磷脂酰丝氨酸(DOPS)、二(棕榈酰)-磷脂酰丝氨酸(DPPS)、二(硬脂酰)磷脂酰丝氨酸(DSPS)、二(亚油酰)磷脂酰丝氨酸(di18:3PS)、二(芥酸酰)磷脂酰丝氨酸、二(二十二碳六烯酰)-磷脂酰丝氨酸，以及它们的混合物，优选二(油酰)-磷脂酰丝氨酸(DOPS)；

ii)基于脂质体脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计30％至50％，优选30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％或50％的至少一种两性离子磷脂；

iii)相对于脂质体的脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计20％至30％，优选20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％的至少一种甾醇，

条件是所述至少一种两性离子磷脂不是棕榈酰-油酰-磷脂酰-胆碱(POPC)，也不是1,2-二(癸酰)1-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DDPC)。

根据优选的实施方式，本发明涉及用于口服给予的脂质体组合物，其由以下组分组成或包含以下组分：

a)一种或多种具有生物学意义的两亲性物质，优选亲脂性免疫刺激剂，甚至更优选相对于脂质体组合物的总重量，按重量计0.1％至10％的亲脂性衍生物胞壁酰二肽或胞壁酰三肽(MDP或MTP)；

b)脂质体，所述脂质体由以下组分组成或包含以下组分：

i)基于脂质体脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计25％至35％，优选25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％的二(油酰)-磷脂酰丝氨酸(DOPS)；

ii)基于脂质体脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计30％至50％，优选30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％或50％的至少一种两性离子磷脂；

iii)相对于脂质体中的脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计20％至30％，优选20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％的至少一种甾醇；

条件是所述至少一种两性离子磷脂不是棕榈酰-油酰-磷脂酰-胆碱(POPC)，也不是1,2-二(癸酰)1-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DDPC)。

根据优选的实施方式，本发明涉及用于口服给予的脂质体组合物，其由以下组分组成或包含以下组分：

a)一种或多种具有生物学意义的两亲性物质，优选亲脂性免疫刺激剂，甚至更优选相对于脂质体组合物的总重量，按重量计0.1％至10％的亲脂性衍生物胞壁酰二肽或胞壁酰三肽(MDP或MTP)；

b)脂质体，所述脂质体由以下组分组成或包含以下组分：

i)基于脂质体脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计25％至35％，优选25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％的二(油酰)-磷脂酰丝氨酸(DOPS)；

ii)基于脂质体脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计30％至50％，优选30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％或50％的至少一种两性离子磷脂；

iii)相对于脂质体脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计20％至30％，优选20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％的胆固醇；

条件是所述至少一种两性离子磷脂不是棕榈酰-油酰-磷脂酰-胆碱(POPC)，也不是1,2-二(癸酰)1-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DDPC)。

根据优选的实施方式，本发明涉及用于口服给予的脂质体组合物，其由以下组分组成或包含以下组分：

a)一种或多种具有生物学意义的两亲性物质，优选亲脂性免疫刺激剂，甚至更优选相对于脂质体组合物的总重量，按重量计0.1％至10％的亲脂性衍生物胞壁酰二肽或胞壁酰三肽(MDP或MTP)；

b)脂质体，所述脂质体由以下组分组成或包含以下组分：

i)基于脂质体脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计25％至35％，优选25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％的二(油酰)-磷脂酰丝氨酸(DOPS)；

ii)相对于脂质体脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计30％至50％，优选30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％或50％的DSPC、DPPC、DMPC或DLPC，优选DSPC，甚至更优选DMPC；

iii)基于脂质体脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计20％至30％，优选20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％的至少一种甾醇。

根据优选的实施方式，本发明涉及用于口服给予的脂质体组合物，其由以下组分组成或包含以下组分：

a)一种或多种具有生物学意义的两亲性物质，优选亲脂性免疫刺激剂，甚至更优选相对于脂质体组合物的总重量，按重量计0.1％至10％的亲脂性衍生物胞壁酰二肽或胞壁酰三肽(MDP或MTP)；

b)脂质体，所述脂质体由以下组分组成或包含以下组分：

i)基于脂质体脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计25％至35％，优选25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％的二(油酰)-磷脂酰丝氨酸(DOPS)；

ii)相对于脂质体脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计30％至50％，优选30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％或50％的DSPC、DPPC、DMPC或DLPC，优选DSPC，甚至更优选DMPC；

iii)基于脂质体脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计20％至30％，优选20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％的胆固醇。

根据另一优选的实施方式，本发明涉及脂质体组合物，其中，相对于脂质体的按重量或总摩尔计的脂质组成，所述脂质体由以下组分组成或包含以下组分：

i)按重量或摩尔计，25％至35％的DOPS；

ii)按重量或摩尔计，30％至50％的DSPC、DPPC、DMPC或DLPC，优选DSPC，甚至更优选DMPC；

iii)按重量或摩尔计，20％至30％的胆固醇。

根据另一优选的实施方式，本发明涉及脂质体组合物，其中，相对于脂质体的按重量或摩尔计的总脂质组成，所述脂质体由以下组分组成或包含以下组分：

i)30％的DOPS；

ii)40％的DSPC、DPPC、DMPC或DLPC，优选DSPC，甚至更优选DMPC；

iii)30％的胆固醇。

根据优选的实施方式，脂质体组合物的脂质体在胆汁盐存在下是稳定的，也就是说脂质体的脂质双层不会被破坏。

根据优选的实施方式，本发明的脂质体组合物的脂质体在胆汁盐存在下稳定至少1小时，优选2小时或3小时。

根据优选的实施方式，本发明的脂质体组合物的脂质体在胆汁盐存在下是稳定的，并且被吸收和转移到血流中。

本领域技术人员会理解的是，经口服给予的本发明的脂质体组合物的治疗功效取决于所述脂质体组合物在含有胆汁盐的介质中的稳定性。

根据优选的实施方式，治疗剂是可用于激活免疫系统的亲脂性免疫刺激剂，用于治疗和/或预防癌症，特别是骨肉瘤。

免疫系统的这种激活是通过以下获得的：由免疫活性细胞吸收脂质体混悬液，然后在免疫刺激性两亲性物质与特定受体结合后，免疫活性细胞被激活。这种激活也可以通过在特定免疫活性细胞培养条件(例如单核细胞、巨噬细胞或树突细胞)下的初始离体激活步骤来获得。

根据优选的实施方式，治疗剂是属于WHO Anatomical,Therapeutic andChemical Classification的治疗亚组ATC L03的亲脂性免疫刺激剂，例如干扰素或干扰素衍生物。

在本发明的有利的实施方式中，根据本发明的具有生物学意义的两亲性物质或至少一种具有生物学意义的两亲性物质是经选择的两亲性免疫刺激剂。

在本发明的有利的实施方式中，将两亲性免疫刺激剂与两亲性肽或与脂肽抗原相组合。

两亲性免疫刺激剂与一种或多种两亲性肽或脂肽抗原的组合被设计为还诱导对两亲性肽或脂肽抗原的特异性免疫应答。

表述“两亲性免疫刺激剂”是指在体外或体内能够通过单核细胞、巨噬细胞、树突细胞、NK细胞或多核细胞的受体(例如TOLL和NOD受体)触发先天免疫应答，并能够通过其脂质部分锚定在脂质体的脂质双层中的所有物质。两亲性免疫刺激剂的实例为：胞壁酰三肽磷脂酰乙醇胺(MTP-PE)、双-(牛磺酸)-L-谷氨酰胺酰-N-棕榈酰-S-[2-(R)-3-二月桂酰氧基丙基]-L-胱氨酸(JBT 3002，bis-(taurine)-L-glutaminyl-N-palmitoyl-S-[2-(R)-3-dilauroyloxypropyl]-L-cystin e)、谷甾醇、脂质A或其它LPS衍生物或富含两亲性CpG基序的核苷酸。本发明不限于上述两亲性免疫刺激剂。

在本发明的特定实施方式中，两亲性免疫刺激剂是胞壁酰三肽磷脂酰乙醇胺(MTP-PE)。

胞壁酰三肽磷脂酰乙醇胺已被描述为用于针对肿瘤抗原或病毒抗原(HIV-1或单纯疱疹病毒)的保护研究的佐剂。MTP-PE对细胞增殖有刺激作用，并能激活单核细胞的细胞毒性能力。

在本发明的另一具体实施方式中，两亲性免疫刺激剂是双-(牛磺酸)-L-谷氨酰胺酰-N-棕榈酰-S-[2-(R)-3-二月桂酰氧基丙基]-L-胱氨酸(JBT 3002)，一种能够激活巨噬细胞并诱导炎症细胞因子(TNF-[α]、IL-1、IL-6)的产生的合成细菌脂肽。

在本发明的另一具体实施方式中，两亲性免疫刺激剂是谷甾醇。这里所说的谷甾醇是指谷甾醇、以及[omicron]eta-谷甾醇、[omicron]eta-谷甾醇葡萄糖苷。6eta-谷甾醇(一种植物甾醇)的免疫刺激能力已在体内和体外得以证明。[epsilon]eta-谷甾醇能够在植物凝集素的存在下增强T细胞增殖，刺激NK细胞活性，诱导淋巴细胞增加IL-2和干扰素γ的分泌。

上述两亲性免疫刺激剂可与两亲性肽或脂肽抗原相结合。所述两亲性肽或脂肽抗原优选由8至16个氨基酸的肽链(被认为是免疫原性肽)通过NH2末端基团连接到5至30个碳、更优选8至18个碳的脂肪族链和脂质链上而形成。所使用的典型免疫原性肽选自于对MHC I类和MHC IL类分子具有高亲和力的野生型或经修饰的肽抗原。所述肽可以选自于由诱导CTL的肽、肿瘤细胞抗原肽d或肝炎抗原肽组成的组。更优选地，所述肽选自于由癌实体瘤细胞抗原(WO0142270、US6,602,510、WO0145728和US 07,976,301)、黑色素瘤抗原(US 5,662,907和US 5,750,395)、乙型或丙型肝炎抗原或诸如5T4乳腺癌抗原(WO03068816)、Her2/neu抗原(US 2004/157780)或p53抗原(WO00141787)的其它肿瘤抗原组成的组。

根据优选的实施方式，治疗剂是来源于脂多糖(LPS)的亲脂性免疫刺激剂。

根据优选的实施方式，治疗剂是几种亲脂性免疫刺激剂的组合。

根据优选的实施方式，治疗剂是亲脂性衍生物胞壁酰二或三肽(MDP或MTP)。

在另一优选的实施方式中，亲脂性衍生物MTP对应于式(I)或式(II)，

其中，R表示-NH₂基团或-NH-CO-R₁基团，其中R₁表示任选具有一个或多个碳-碳双键的直链或支链C₁-C₃₀烷基或C₈-C₂₄脂肪酸残基，优选任选具有一个或多个碳-碳双键的C₈-C₁₈烷基；

在另一优选的实施方式中，R₁选自如下酸的残基：辛酸(8:0)、癸酸(10:0)、月桂酸(12:0)、肉豆蔻酸(14:0)、棕榈酸(16:0)、硬脂酸(18:0)、花生酸(20:0)、山嵛酸(22:0)、木蜡酸(24:0)、蜡酸(26:0)、肉豆蔻脑酸(14:1)、棕榈酸(16:1)、sapienic acid(16:1)、油酸(18:1)、反油酸(18:1)、反式异油酸(18:1)、亚油酸(18:2)、linolelaic acid(18:2)、a-亚麻酸(18:3)、y-亚麻酸(18:3)、双高-y-亚麻酸(20:3，dihomo-y-linolenic acid)、花生四烯酸(20:4)、二十碳五烯酸(20:5)、二十二碳五烯酸(22:5)或二十二碳六烯酸(22:6)；

或

在优选的实施方式中，亲脂性免疫刺激剂是MTP-PE(米伐木肽)。这种胞壁酰三肽包含磷脂残基，它允许分子的疏水部分与脂质环境相结合，而胞壁酰肽部分与水环境相结合。

胞壁酰三肽磷脂酰乙醇胺已被描述为用于针对肿瘤抗原或病毒抗原(HIV-1或单纯疱疹病毒)的保护研究的佐剂。MTP-PE对细胞增殖有刺激作用，并能激活单核细胞的细胞毒性能力。

米伐木肽的商品名为适用于2至30岁的患者，用于治疗高级别非转移性骨肉瘤(一种骨癌)。/>在癌症手术切除后与其它抗癌药物联合使用。

根据的欧洲公共评估报告(EPAR，European Public AssessmentReport)的概要，米伐木肽与其它抗癌药品联合使用增加了患者无疾病复发的生存时间：与未接受/>的患者的61％(340例中的207例)相比，服用/>的患者的68％(338例中的231例)存活且无疾病复发。服用/>的患者的死亡风险也降低了28％。这种治疗通过输注进行注射。所有患者的推荐米伐木肽剂量为2mg/m²体表面积。应如下进行给予：每周两次，间隔至少3天，持续12周；然后每周一次，持续24周；36周共输注48次。

静脉输注后，脂质体被巨噬细胞选择性摄取，在细胞中被吞噬并逐渐降解。

出现的副作用(超过十分之一的患者)为：贫血(红细胞计数低)、食欲不振、头痛、头晕、心动过速(心跳加快)、高血压(血压高)、低血压(血压低)、呼吸困难(难以呼吸)、呼吸急促(快速呼吸)、咳嗽、呕吐、腹泻、便秘、腹痛(胃痛)、恶心、多汗(出汗过多)、肌痛(肌肉痛)、关节痛(关节疼痛)、背痛、四肢痛(胳膊和腿)、发烧、发冷、疲劳、体温过低(低体温)、全身疼痛、不适、衰弱(虚弱)和胸痛。

的抗转移特性在临床研究(Kleinerman等，American Journal ofClinical Oncology 1995,18(2):93-9；Anderson等，Pediatric Blood&Cancer 2014,61(2):238-44)中得以显示。

脂质体组合物含有0.4％(4mg米伐木肽)。脂质体由l-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(POPC)和1,2-二(油酰)-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸(DOPS)按7:3的摩尔比组成。

根据优选的实施方式，本发明涉及脂质体组合物，其中，亲脂性免疫刺激剂由以下组分组成或包含以下组分：浓度为按重量计0.1％至10％的亲脂性衍生物胞壁酰二肽或胞壁酰三肽(MDP或MTP)，优选按重量计0.4％以下的MTP-PE。

根据另一优选的实施方式，本发明涉及脂质体组合物，其由以下组分组成或包含以下组分：

a)按重量计0.1％至1％的亲脂性衍生物胞壁酰二肽或胞壁酰三肽(MDP或MTP)，优选按重量计0.4％以下的MTP-PE；

b)脂质体，相对于脂质体的按重量或摩尔计的总脂质组成，所述脂质体由以下组分组成或包含以下组分：

i)25％至35％，优选26％至32％，更优选30％的磷脂酰丝氨酸，优选DOPS；

ii)30％至50％，优选30％至40％，更优选40％的磷脂酰胆碱，优选DSPC、DPPC、DMPC或DLPC；

iii)20％至30％，优选22％至28％，更优选25％或30％的至少一种甾醇，优选胆固醇。

根据另一优选的实施方式，本发明涉及脂质体组合物，其由以下组分组成或包含以下组分：

a)按重量计0.1％至10％的亲脂性衍生物胞壁酰二肽或胞壁酰三肽(MDP或MTP)，优选按重量计0.4％以下的MTP-PE；

b)脂质体，相对于脂质体的按重量或总摩尔计的脂质组成，所述脂质体由以下组分组成或包含以下组分；

i)30％的DOPS；

ii)40％的DSPC、DPPC、DMPC或DLPC，优选DSPC，甚至更优选DMPC；

iii)30％的胆固醇。

根据另一优选的实施方式，本发明涉及脂质体组合物，其用于旨在口服给予的药物组合物的制备。

口服给予是指通过摄入含有本发明的粉末的片剂、丸剂或胶囊进行给予。

口服给予还指以该粉末在药学上可接受的水性溶剂中的混悬液进行给予，例如以糖浆或口服混悬液的形式。

根据另一优选的实施方式，本发明涉及脂质体组合物，其用于经鼻途径给予的药物组合物的制备。

根据另一优选的实施方式，本发明涉及脂质体组合物，其用于经肺途径给予的药物组合物的制备。

根据另一优选的实施方式，本发明涉及脂质体组合物，其用于在激活先天免疫系统、特别是激活单核细胞或巨噬细胞型细胞的方法中的用途。

本领域技术人员会理解的是，免疫系统的激活、特别是单核细胞或巨噬细胞型细胞的激活使得能够治疗癌症、特别是癌性转移(cancerous metastase)。

根据本发明的具体实施方式，本发明的脂质体组合物用于治疗患有癌症的患者，所述癌症优选骨肉瘤、肾癌或乳腺癌。

根据本发明的具体实施方式，本发明的脂质体组合物用于治疗和/或预防癌性转移，特别是肺转移。

本发明还涉及使用上述脂质体组合物来治疗癌症或预防癌症复发的方法，特别是骨癌、肾癌或乳腺癌以及它们的转移，特别是肺癌。

脂质体的制备

本发明的脂质体是根据本领域技术人员已知的技术制备的。例如，该制备方法基于两个单独的溶解步骤，其中，将脂质溶解在可与水混溶的极性溶剂(叔丁醇，以下也称为t-丁醇)或氯仿和甲醇的混合物(比例为5:1)中(溶液A)中，以及将生物活性剂分散在任选地含有冷冻保护剂的生理相容的水性介质(溶液B)中。

然后，将溶液A和溶液B混合在一起。因此，根据这种方法，具有生物学意义的两亲性物质最初不存在于叔丁醇相中，而只存在于水性介质中。

或者，将脂质和生物活性剂直接在可与水混溶的极性溶剂中混合。

文献WO2007014754描述了特别适用于制备根据本发明的脂质体的另一种方法。

该方法包括将磷脂、胆固醇和一种或多种具有生物学意义的两亲性物质在适当的溶剂混合物中分散的步骤(随后是冻干或雾化/干燥步骤)，使得产生脂质体混悬液。

更具体地，用于制备脂质体混悬液的方法包括：

a)制备亲脂性免疫刺激剂和脂质体的混合物的步骤，相对于脂质体的按重量或总摩尔计的脂质组成，所述脂质体由以下组分组成或包含以下组分：

i)25％至35％的至少一种带负电荷的磷脂；

ii)30％至50％的至少一种两性离子磷脂；

iii)20％至30％的至少一种甾醇；

b)将所述混合物分散在可与水混溶的极性溶剂中的步骤。

根据具体的实施方式，极性溶剂由叔丁醇二水合物和叔丁醇或者氯仿/甲醇的混合物(特别是以5:1的比例)组成。

极性溶剂还可以由60％至100％的叔丁醇二水合物和0至40％的叔丁醇的混合物组成，优选75％至100％(w/w)的叔丁醇二水合物和0至25％(w/w)的叔丁醇的混合物。

本发明还涉及用于制备根据本发明的粉末的方法，所述方法包括将步骤b)中获得的脂质体混悬液雾化/干燥的步骤c)。

根据具体的实施方式，脂质体混悬液含有亲水性赋形剂，优选在雾化/干燥步骤之前添加甘露醇。

根据本发明的另一方面，脂质体混悬液通过多孔装置挤出，然后穿过喷嘴。使用直径足够小的喷嘴限制混悬液在通过多孔装置挤出后的流动。

本领域技术人员通常知晓用于执行本发明方法的这一步骤的有用喷嘴。它们包括，例如，旋转盘式喷嘴、冲击射流喷嘴、毛细管喷嘴、单孔喷嘴、振动或脉动型超声波喷嘴、双流体喷嘴(例如双流体同轴喷嘴)等。在本发明的优选的实施方式中，所述喷嘴为孔喷嘴。在本发明中，优选的喷嘴孔径在约0.05mm至约1mm之间，更优选在约0.1mm至约0.2mm之间。

在本发明的装置中，喷嘴可包括在适于对所获得的脂质体进行脱水的容器中，特别是适于通过雾化或喷雾进行脱水。

混悬液的流速可在约1ml/min至约1000ml/min之间。

更典型地，脂质体通过本发明的方法采用10ml/min至200ml/min的流速、更优选约20ml/min至约100ml/min的流速进行制备。

根据另一实施方式，用于通过多孔装置挤出脂质体混悬液的压力和脂质体混悬液通过喷嘴的穿过压力可以基本相同，特别是在0.5bar至1200bar之间。

更典型地，脂质体可以通过本发明的方法以5bar至600bar、优选约10bar至约500bar、更优选约20bar至约150bar进行制备。

液滴形成后的脂质体的干燥可通过使所述液滴与气流(优选热气流)接触来进行，以获得固体颗粒。优选地，所使用的气流是非活性气体。干燥气体可以优选为含氧量小于0.1vol.％、优选小于0.05vol.％的低氧气体。

非活性气体提高了热干燥系统的安全性。在本发明的优选的实施方式中，使用氮气作为非活性气体。在本发明的另一实施方式中，非活性气体对制剂中所含的活性成分和赋形剂进行保护。优选地，在适于喷雾干燥的装置中进行喷雾干燥。

喷雾干燥可以例如在干燥塔中进行。从气流中将脱水的脂质体分离并收集。

在优选的实施方式中，脂质体混悬液任选地包含亲水性赋形剂。有用的亲水性赋形剂可以是单体、低聚物或聚合物，并且可见于多种化学类别的化合物中。

根据本发明的优选的实施方式之一，亲水性赋形剂是糖类，例如单糖、二糖、低聚糖或多糖，糖醇，氨基酸，肽，蛋白质，水溶性聚合物或它们的组合。

糖类或碳水化合物被定义为主要由碳、氢和氧组成的化合物。有用的糖类包括糖和糖醇、低聚糖、水溶性多糖以及它们的衍生物。根据本发明的优选的糖类包括但不限于：葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、麦芽糖、纤维素二糖、半乳糖、麦芽三糖、麦芽戊糖、棉子糖、糊精、葡聚糖、菊糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、壳聚糖；水溶性纤维素衍生物，例如甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素和羟丙甲纤维素；海藻酸盐、可溶性淀粉或淀粉组分、黄原胶、瓜尔胶、果胶、卡拉胶、半乳甘露聚糖、结冷胶、黄芪胶，包括它们的任何衍生物。特别优选的糖类是葡萄糖和海藻糖。

其它有用的亲水性赋形剂可选自于其它化学类别，例如水溶性氨基酸、多肽或蛋白质。例如，可以使用甘氨酸或其它天然氨基酸。有用的蛋白质包括但不限于明胶、白蛋白、乳清蛋白、大豆蛋白或其它食物或植物蛋白。

有用的亲水性赋形剂的其它实例是诸如水溶性聚合物的聚合物，例如固体聚乙二醇、聚乙烯醇、聚丙烯酸酯或聚乙烯吡咯烷酮。

根据本发明，可以使用多于一种的亲水性赋形剂的混合物。例如，可能需要独立地对诸如pH、溶解度和润湿性的多个参数进行调整。在这种情况下，可以选择第一亲水性赋形剂作为胶体体系的基本载体材料，同时可以掺入一种或多种另外的亲水性赋形剂，以获得一定的pH和/或润湿性。

当然，包含脂质体混悬液的水性介质可以包含其它赋形剂或助剂、亲水性或水溶性物质。这些物质是可溶的或不是可溶的，可以被萃取介质萃取或不可以被萃取介质萃取，这些物质可以包含在干燥颗粒中，或者可以用水和有机溶剂除去。干燥颗粒中包含的物质必须是药学上可接受的。

其它优选的赋形剂包括稳定剂、表面活性剂、润湿剂、膨胀剂、冻干助剂、抗氧化剂、螯合剂、防腐剂、渗透剂、调节pH的酸性或碱性赋形剂等。

根据本发明的优选的赋形剂为稳定剂和抗氧化剂。抗氧化剂可以防止掺入的活性化合物的氧化，也可以防止胶体成分的氧化，特别是如果使用了氧化敏感的脂质。

有用的化合物包括例如脂溶性抗氧化剂，例如α-生育酚、β-生育酚和γ-生育酚、泛醇、番茄红素、α-胡萝卜素和β-胡萝卜素、去甲二氢愈创木酸、丁基羟基茴香醚、丁基羟基甲苯、乙二胺四乙酸、dienta-三胺五乙酸(dienta-etriamine pentaacetic acid)等。特别优选α-生育酚和乙二胺四乙酸，包括它们的药学上可接受的衍生物。另一方面，如果将化学上纯的、半合成的或合成的饱和脂质用于胶体体系的组成，则可以不需要抗氧化剂。

本发明还涉及上述粉末，例如通过包括步骤a)至步骤c)的方法制备的粉末，所述粉末由脂质体组成或包含脂质体，相对于脂质体的按重量或总摩尔计的脂质组成，所述脂质体由以下组分组成或包含以下组分：

i)25％至35％的至少一种带负电荷的磷脂；

ii)30％至50％的至少一种两性离子磷脂；

iii)20％至30％的至少一种甾醇；

iv)按重量计0.1％至10％的亲脂性衍生物胞壁酰二或三肽(MDP或MTP)。

本发明还涉及用于制备具有适于口服给予的尺寸和尺寸分布的脂质体的方法。

优选地，本发明的组合物的脂质体的直径可在100nm至10μm之间，优选1μm至10μm，更优选2μm至5μm。

可以例如通过具有已知孔径的聚碳酸酯过滤器挤出脂质体组合物，来对脂质体的直径进行控制。

控制脂质体的尺寸的方法在本领域是公知的，并在例如Mayhew等(1984)Biochem.Biophys.Acta中进行了描述。

可以对脂质体的平均颗粒尺寸进行测定。

实际上，颗粒尺寸分布由平均值(mean values):平均直径数(NMD)、平均体积直径(VMD)来表征，而尺寸的多分散性通常由VMD/NMD比值(多分散指数，IP)来表征。

值为1.00或接近1.00表示所有颗粒的尺寸相同，偏离1.00越大，尺寸多分散性越高。

颗粒尺寸分布可以通过NANOTRAC技术来确定，该技术基于通过采集与多普勒位移(Doppier shift)相对应的能谱，来分析分散在液体中的颗粒的布朗运动。

配备有780nm激光器的MTUPA 250-NANOTRAC 250装置通过对粒径为0.8nm至6500nm的颗粒进行激光散射来运行。

根据本发明获得的脂质体的特征在于，多分散性为1.00至1.20。

通过本发明的方法获得的脂质体、干燥颗粒或包含它们的粉末可用于制造药物。

如果颗粒满足药物剂型的所有要求，则它们可以原样使用并直接引入合适的容器中。

含有脂质体的粉末可以含有由制备所述粉末的方法产生的、与脂质紧密结合的残余水(0.1％至小于5％)。

或者，含有脂质体的粉末可以与其它活性和/或非活性成分(例如药学上可接受的载体)混合。

根据具体实施方式，所述粉末被微粉化为1微米至5微米之间的平均尺寸，适于通过吸入给予。

对于通过吸入施用，将根据本发明的粉末装入干喷雾装置，以气溶胶的形式递送所述粉末。

所述干喷雾装置使得能够将所述粉末沉积在例如喉咙中、扁桃体上或有利地直接沉积在肺泡中，其中原位形成的脂质体混悬液可以将驻留的巨噬细胞直接激活。

本发明还涉及通过使根据本发明的粉末与水性介质接触而获得的脂质体混悬液，优选多层的脂质体混悬液。

水性介质可以是无菌水，任选地缓冲至pH 7.0-7.5并任选地含有防腐剂或抗氧化剂。

本发明还涉及根据本发明的多层脂质体粉末或混悬液用于体内激活免疫系统的用途。

免疫系统的这种激活是通过以下而获得的：由免疫活性细胞吸收脂质体混悬液，然后在免疫刺激性两亲性物质与特定受体结合后免疫活性细胞被激活。

这种激活也可以通过在特定免疫活性细胞培养条件(例如单核细胞、巨噬细胞或树突细胞)下的初始离体激活步骤来获得。

在优选的实施方式中，根据本发明的药物组合物在单次施用或单位剂量中含有以50mg至2g的范围存在的粉末。

本发明的脂质体在胆汁盐存在下是稳定的。

根据本发明，术语“在胆汁盐存在下的稳定的脂质体”是指分散在水性介质中的脂质体，其脂质双层不会因用胆汁盐处理而被破坏，优选在牛磺胆酸钠、脱氧胆酸钠和水合胆酸钠或它们的混合物的存在下，优选在含有这三种胆汁盐的混合物的存在下。

脂质体稳定性测试在胆汁盐存在下进行，每种胆汁盐的浓度为2mM至10mM，优选4mM。测试在20℃或37℃的环境温度下进行。使脂质体与胆汁盐接触至少1小时，优选2小时或3小时。

脂质体在胆汁盐存在下处理后的稳定性通过目视测试来证明。实际上，处理前的脂质体混悬液看起来稍微不透明，呈白色；当脂质体被胆汁盐变性时，变性的脂质体的混悬液是透明的。光学显微镜下的观察显示有脂质体碎屑(见图6)。

通过以下附图和实施例对本发明进行进一步说明，但不限于此。

附图说明

图1示出了用胆汁盐处理前含有脂质体混悬液的小瓶。

图2示出了脂质体在过滤前(图像A)和5μm过滤后(图像B)的光学显微镜图像，放大倍率为×1030。

图3示出了通过自动图像分析方法获得的脂质体的尺寸分布。

图4示出了形成大于20μm的聚集体的脂质体的光学显微镜图像。

图5示出了用胆汁盐处理后含有脂质体混悬液的小瓶。对小瓶的观察显示，脂质体被变性，并且混悬液变得透明(图像A)。

图6示出了变性的脂质体混悬液的光学显微镜图像。

实施例

实验部分：

实施例1：脂质体MTP-PE混悬液的制备和分析

所使用的试剂如下(括号内注明供应商)：MTP-PE(或米伐木肽，Sigma-Aldrich)、甲醇(VWR Chemicals)、乙醇(Sigma-Aldrich)、氯仿(Sigma-Aldrich)、二氯甲烷(CarloErba)、乙腈(VWR Chemicals)、丙酮(Sigma-Aldrich)、乙酸乙酯(Carlo Erba)、四氢呋喃(VWR Chemicals)、二甲亚砜(Honey Well)、三氟乙酸(VWR Chemicals)、甲酸铵(Fluka)、2-油酰-l-棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱或POPC(Lipoid)、1,2-二(油酰)-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸或DOPS作为钠盐(Avanti Polar Lipids)、胆固醇(Sigma-Aldrich)、1,2-二(癸酰)-sn-甘油-3-磷酸胆碱或DDPC(Lipoid)、1,2-二(月桂酰)-sn-甘油-3-磷酸胆碱或DLPC(Lipoid)、1,2-二(肉豆蔻酰)-sn-甘油-3-磷酸胆碱或DMPC(Lipoid)、1,2-二(棕榈酰)-sn-甘油-3-磷酸胆碱或DPPC(Lipoid)和1,2-二(硬脂酰)-sn-甘油-3-磷酸胆碱或DSPC(Lipoid)。

方法：将脂质和米伐木肽溶解在氯仿和甲醇(5:1)的混合物中，浓度为约30mg/mL，然后通过在旋转蒸发器中干燥进行浓缩(40℃下2小时)，以形成脂质膜。然后，在室温下并在磁力搅拌下，将脂质膜在盐水溶液(0.9％NaCl，5mL)中再水化。然后，使用Avanti PolarMini-Extruder，通过5μm聚碳酸酯膜将获得的混悬液过滤10次，得到脂质体混悬液。

使用多种比例的脂质(以％表示)制备几种类型的含有0.4％的MTP-PE(即对于250mg脂质为1mg米伐木肽)的脂质体。

表1

用三种方式对由此制备的脂质体混悬液进行分析：1)通过对小瓶进行目视观察，2)通过在光学显微镜下对脂质体进行目视观察，3)通过自动图像分析系统对颗粒的尺寸分布(DTP)进行测量。对于此分析，将5μL试样放置在两个显微镜载玻片之间，并对多个视野进行检查以评估颗粒尺寸分布。自动图像分析对每个混悬液约30000个脂质体颗粒的尺寸进行测量。

结果：该制备方法能够获得半透明和稍微不透明的脂质体混悬液，例如图1示出了8号含混悬液的小瓶。

图2示出了8号混悬液脂质体在过滤前(图像A)和5μm过滤后(图像B)的光学显微镜图像。放大倍率为×1030。

在图2中，图像A示出了未经任何过滤而获得的脂质体混悬液。该脂质体不均匀，非圆形形状，尺寸可超过50μm。图像B示出了通过5μm滤膜过滤10次后的脂质体混悬液。在这种情况下，观察到的脂质体在形状和尺寸(小于10μm)方面更加均匀。

图3给出了通过自动图像分析方法得到的颗粒尺寸分布的典型实例。该分析的结果以d10、d50和d90值表征，它们分别表示所分析的每种混悬液的10％、50％和90％的脂质体颗粒达到的最大尺寸(以pm计)。

下表2总结了针对表1中描述的脂质体混悬液的这些分析的结果。

表2

对2号、3号、4号、7号、8号、9号、10号、11号、12号、13号、14号和15号脂质体混悬液小瓶的观察显示，与图1类似的半透明的、稍微不透明的液体。

在显微镜下观察这些混悬液，显示它们与图2-图像B中所示的相似。这些混悬液是通过自动图像分析进行颗粒尺寸分布研究的对象。结果如表2所示。

这些结果显示，在未添加DOPS的情况下，通过5μm过滤器挤出后获得的脂质体颗粒是不稳定的，并自发形成大聚集体。

这些结果还显示，胆固醇的比例不应超过30％，因为较高的比例会妨碍获得均匀的脂质体混悬液。

实施例2：MTP-PE的浓度分析

将试样稀释在溶剂混合物中以便将其注入到色谱仪中后，对每种制剂中的MTP-PE的可溶部分(游离形式或包封在脂质体中)进行定量。通过HPLC测量溶液浓度。HPLC分析条件总结于表3中。

表3

在这些条件下，在6.5分钟处观察到保留峰。对2号、3号、4号、7号和8号混悬液峰的分析显示，浓度为0.08mg/ml，这与其制剂一致。

实施例3：胆汁盐对脂质体MTP-PE混悬液的稳定性的影响

将实施例1中描述的2号、3号、4号、7号、8号、9号、10号、11号、12号、13号、14号和15号脂质体混悬液在37℃下暴露于浓度各自为4mM的胆汁盐混合物(牛磺胆酸钠、脱氧胆酸钠和水合胆酸钠)中3小时。

使用实施例1中列出的方法，在T-0h(暴露于胆汁盐后立即)、然后在T-1h和T-3h(分别暴露于胆汁盐1小时和3小时后)对稳定性进行评估。结果总结于表4中。

表4

图5左侧示出了含有2号混悬液的小瓶的照片(图像A)，右侧示出了含有8号混悬液的小瓶的照片(图像B)。将这两种混悬液与胆汁盐混合。在暴露于胆汁盐几分钟后，2号混悬液变得清澈且透明。通过显微镜观察，不可能发现脂质体。相反，8号混悬液可以耐受胆汁盐的降解。

图6示出了12号混悬液在暴露于胆汁盐1小时后在光学显微镜下拍摄的照片。该图像显示脂质体几乎完全降解，因为只有少数碎屑可见。

综上所述，这些结果显示，含有DSPC、DPPC、DMPC或DLPC以代替POPC，并含有25％-35％ DOPS和20％-30％胆固醇的脂质体制剂在数小时内耐受胆汁盐的降解。

实施例4：酸性pH对脂质体MTP-PE混悬液的稳定性的影响

将2号和8号脂质体混悬液在pH为1的条件下暴露1小时。

在烧瓶中和在显微镜下对混悬液的目视检查未发现任何明显的降解作用。

实施例5：使MTP-PE包含在脂质体中

该方法是根据实施例1中描述的方法并使用8号溶液的脂质比例来进行制备的。添加不同比例的MTP-PE：0.4％、1％、5％和10％。

这些混悬液的小瓶和显微镜观察显示，脂质体混悬液与图1和图2-B相似。因此，MTP-PE的添加比例达到10％不会导致脂质体结构的破坏。

实施例6：处于干粉形式的脂质体MTP-PE的制造

使用称为“喷雾干燥”的雾化干燥方法制备干燥的脂质体颗粒。所使用的装置是Büchi微型喷雾干燥机290。

雾化干燥过程包括四个步骤：产品在喷雾喷嘴中雾化，空气-喷雾接触，喷雾液滴的干燥和固体产品的收集。

该方法按照8号溶液的比例使用。将脂质和米伐木肽溶解在氯仿和甲醇(5:1)的混合物中，直至终浓度为80μM。

使用直径1mm的喷雾喷嘴，以20ml/min的流速注入溶液。干燥室的温度为90℃。将经喷雾干燥的颗粒收集在与旋风分离器相连的罐中，并在表征之前储存在冰箱中。

通过显微镜对获得的颗粒进行测量，其平均直径在1μm至5μm之间。

将由此获得的干粉溶解在盐水溶液(0.9％ NaCl)中。手动地摇动混悬液几分钟。显微镜观察显示，脂质体混悬液由平均尺寸为2μm的颗粒组成，从而证明由此获得的干粉是水分散性的。

实施例7：处于干粉形式的脂质体MTP-PE的制造

使用实施例5中描述的方法，通过向起始溶液中添加甘露醇(35mM)或者不添加任何甘露醇，来制备两种类型的干燥的脂质体颗粒。

通过具有铜源(Philips，XPERT模型)的X射线衍射，对这些用甘露醇和不用甘露醇制备的干燥颗粒的结晶度进行测定。测量在室温下进行，每个样品使用几毫克，扫描速度为每分钟2度。

结果显示，不用甘露醇制备的混悬液的结晶度更大。

实施例8：在小鼠中的脂质体MTP-PE的口服给予的研究

根据实施例1所示的方法，制备1号和10号脂质体MTP-PE混悬液。

此外，这些脂质体是通过加入0.5％的荧光标记N-4-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑磷脂酰乙醇胺来制备的。

将30只BALB/c小鼠随机分为A组和B组两组，每组15只。A组小鼠通过口腔灌胃以20μg MTP-PE的剂量接受1号混悬液的给予；B组小鼠以相同剂量的MTP-PE给予10号混悬液。在口服给予后1小时、4小时和24小时采集血液样本(约100μL)(每个采集时间每组5只小鼠)。对每个血液样本进行涂片测试。用荧光显微镜(蔡司荧光显微镜)对涂片测试进行检查，对每次涂片测试的荧光单核细胞的数量进行计数。荧光单核细胞的数量是脂质体吸收水平(即完整且未破坏的脂质体从肠道管腔转移到血流中)的标志。通过血流后，已被吸收的脂质体被循环单核细胞迅速吞噬。在1、4和24小时的时间时，B组荧光单核细胞的平均数量分别比A组高3倍、7倍和5倍。

实施例9：概念验证的临床前研究-根据本发明制备并经口服给予的脂质体MTP-PE在肾癌模型中的治疗功效

本研究的目的是评估根据本发明制备并经口服给予的脂质体MTP-PE混悬液抑制从肾癌发展为肺转移的能力。

实验模型由以下构成：使用具有免疫能力的BALB/c品系小鼠，并在两个肾脏中的一个肾脏的包膜(capsule)下向小鼠移植以鼠源性肾癌RENCA细胞。该原位移植形成了同基因肾肿瘤。在该模型中，肿瘤细胞在动物体内持续扩散，并在17天后在肺部形成大量转移灶。

材料与方法

根据实施例1所示的方法制备脂质体混悬液。

表5

根据实施例3中描述的方法进行了胆汁盐耐受测试，显示批次A和批次B具有耐受性，而批次C被迅速破坏。RENCA细胞系来源于BALB/c小鼠中作为肾皮质腺癌自发产生的肿瘤，由American Type Culture Collection(USA)提供。肿瘤细胞在37℃的潮湿环境(5％CO₂，95％空气)中以单层培养。培养基为含有2mM L-谷氨酰胺并补充有10％胎牛血清、0.1mM非必需氨基酸和1mM丙酮酸钠的RPMI 1640。肿瘤细胞粘附在塑料小瓶上。对于实验使用，在不含钙或镁的Hanks培养基中，通过用胰蛋白酶-versene处理5分钟，将肿瘤细胞从培养瓶中分离出来，并通过添加完全培养基进行中和。然后，对细胞进行计数，并使用0.25％台盼蓝排除试验对活力进行评估。

40只健康雌性BALB/c小鼠获得自Charles River，接收时6-7周龄。

在麻醉下的40只BALB/c雌性小鼠中，于第0天(D0)通过原位途径诱导RENCA肿瘤。简单地说，在无菌条件下通过中线切口打开动物的腹部。将处于25μL RPMI培养基中的总共500000个RENCA肿瘤细胞缓慢注射到右肾的包膜下间隙。

第2天根据动物的个体体重将动物随机分组。随机分为4组，每组10只(组1、组2、组3、组4)。通过方差分析(ANOVA)测试组间体重的均匀性。

组1动物中的动物未进行处理。组2、组3和组4的动物分别用批次B、批次A、批次C进行处理。在第0、3、5、7、9、11、13、15和17天给予处理。使用灌胃管，通过口腔灌胃给予处理。根据最近的个体体重调整的给予量为5ml/kg。在组3和组4中，MTP-PE剂量为1mg/kg。

第17天，处理后1小时，通过异氟烷气体深度麻醉对所有动物实施安乐死。

通过心内穿刺取血液样本500μL。将血液收集在带有抗凝剂(肝素锂)的收集管中。对管进行离心(2000g，10分钟，4℃)，以获得血浆和细胞沉淀。根据出版物Venkatakrishnan等，British Journal of Clinical Pharmacology 77(6):986-97,2014中描述的方法，将每只动物的血浆进行分样并在-80℃下储存在两个丙烯管中(约125μL/管)，以对脂质体MTP-PE的血浆水平进行评估。将每只动物的细胞沉淀转移并在-80℃下储存在丙烯管中，用于进一步分析。

从所有小鼠取出双肺并称重。肺重量反映肺转移灶的总量。此外，在所有小鼠中，进行每只肺上的肺转移灶的宏观计数。

然后，将肺固定在4％中性缓冲福尔马林中24-48小时，然后包埋在石蜡(Histolab，瑞典)中。将样品储存在室温下，用于进一步的显微镜分析。

结果

表6中总结了肺转移灶计数的结果。

表6

这些结果显示，与组1、组2和组4相比，组3中的肺转移灶的数量显著减少。

表7中总结了肺重量的结果。

表7

这些结果显示，与组1、组2和组4相比，组3中的肺重量显著降低。与组2和组4相比，这种降低具有统计学显著性(p<0.05，学生t检验)。

与组2和组4相比，组3中的脂质体MTP-PE的血浆水平也显著更高。

结论

这些结果证明了，当将MTP-PE配制在根据本发明制备的脂质体中并经口服给予时，MTP-PE具有抑制癌性肿瘤的转移性扩散的能力。这些结果还证明了，根据本发明制备且不添加MTP-PE的脂质体混悬液不具有这种能力。这些结果还显示，配制在脂质体中的MTP-PE在胆汁盐存在下会被破坏，不具有这种能力。

在一项已发表的研究中，小鼠模型也使用了RENCA细胞的(S.Tanguay等，CancerRes.1994Nov.15；54(22):5882-8)，用磷脂酰胆碱脂质体配制并向小鼠经口服给予的MTP-PE的体内抗癌活性显示出中等的抗癌活性。我们的模型中使用的实验条件要严格得多。事实上，在Tanguay的研究中，一次最多向小鼠中静脉注射25000个的量的RENCA细胞。在我们的模型中，将500000个的量的细胞移植到动物的肾脏中，这些细胞在每只动物中构成了肾肿瘤。在Tanguay的研究中，肺转移灶的最大数量为150个，而在我们的模型中，这个数量超过了400个。

因此，在我们的反映了更加严重的转移性癌症疾病的实验条件下，在胆汁盐降解脂质体(组4)中配制的MTP-PE未显示出抗转移活性。

实施例10：概念证明的临床前研究-根据本发明制备且经口服给予的脂质体MTP-PE在骨肉瘤(骨癌)模型中的治疗功效

本研究的目的是评估根据本发明制备并经口服给予的脂质体MTP-PE混悬液抑制从骨癌发展为肺转移的能力。

实验模型由以下构成：使用具有免疫能力的C57BL/6品系小鼠，通过胫骨旁(paratibial)肌内注射向它们移植以鼠源性MOS-J骨肉瘤细胞，从而再现人类疾病。该原位移植形成溶骨性肿瘤。在这种同基因模型中，肿瘤细胞在动物体内持续扩散，并在5周后在肺部形成转移灶。

根据实施例1所示的方法制备脂质体混悬液。

根据实施例3中描述的方法进行了胆汁盐耐受测试，显示批次D2和批次E2具有耐受性，而批次F2被迅速破坏。

MOS-J细胞系来源于小鼠骨肿瘤，由Jackson实验室(USA)提供。肿瘤细胞在37℃的潮湿环境(5％ CO₂，95％空气)中以单层培养。培养基为补充有5％胎牛血清的RPMI 1640。

50只C57B1/6小鼠获得自Charles River，接收时5-6周龄。每只小鼠通过胫骨旁肌内注射3000000个MOS-J细胞来诱导骨肿瘤。

2天后根据动物的个体体重将动物随机分为5组，每组10只(组1、组2、组3、组4、组5)。

组1的动物未进行处理。组2、组3和组4的动物分别用批次E2、批次D2、批次F2进行处理。组5的动物用MTP-PE水溶液进行处理。这些处理每周经口服给予两至三次。在组3、组4和组5中，MTP-PE的剂量为1mg/kg。

5周后对所有动物实施安乐死，并使用双目放大镜对肺转移灶的数量进行计数。

结果显示，组2中的每只小鼠的肺转移灶的数量在0至7个之间，而其它组中的这一数量在6至23个之间。因此，这些结果显示，当将MTP-PE配制成耐胆汁盐的脂质体的形式并经口服给予时，该化合物具有抗转移作用。

实施例11：概念证明的临床前研究-根据本发明制备且经口服给予的脂质体MTP-PE在乳腺癌模型中的治疗功效

本研究的目的是评估根据本发明制备并经口服给予的脂质体MTP-PE混悬液抑制从乳腺癌发展为肺转移的能力。

实验模型由以下构成：使用具有免疫能力的BALB/c品系小鼠，并进行鼠源性乳腺癌4T-1细胞的原位移植。这种原位移植形成再现人类乳腺癌的肿瘤，3周后扩散并在肺部形成转移灶。

根据实施例1所示的方法制备脂质体混悬液。

4T1细胞系来源于小鼠乳腺肿瘤，由ATCC(USA)提供。肿瘤细胞在37℃的潮湿环境(5％ CO₂，95％空气)中以单层培养。培养基为补充有5％胎牛血清的RPMI 1640。

在麻醉下的60只BALB/c雌性小鼠中，在第0天(D0)原位诱导4T1肿瘤。将共300000个4T1肿瘤细胞缓慢注入右胸乳腺组织。

根据第9天的肿瘤尺寸将动物随机分为六组，每组10只动物(组1、组2、组3、组4、组5)。通过方差分析(ANOVA)测试组间肿瘤尺寸的均匀性。

组1、组2和组3的动物分别用批次H3(对照)、批次G3和批次G3进行处理，每周口服2次。此外，组2和组4中的动物每周1次以8mg/kg静脉注射阿霉素进行处理，连续3周。组3和组5中的动物每周2次腹腔注射抗PD-L1单克隆抗体进行处理，连续3周。3周后对所有动物实施安乐死。使用双目放大镜对肺转移灶的数量进行计数。

结果显示，组1、组4和组5中有在10至30个之间的肺转移灶，而组2和组3中的转移灶显著减少。化疗(阿霉素)和免疫治疗(抗PD-L1)治疗在该模型中未显示出显著功效。另一方面，当与将MTP-PE配制成耐胆汁盐的脂质体的形式并经口服给予相组合，使动物接受化疗或免疫治疗的组合时，转移灶的数量大大减少。

Claims (11)

1.一种用于口服给予的脂质体组合物，其由以下组分组成或包含以下组分：

a)一种或多种具有生物学意义的两亲性物质，优选亲脂性免疫刺激剂，甚至更优选相对于所述脂质体组合物的总重量，按重量计0.1％至10％的衍生物亲脂性胞壁酰二肽或胞壁酰三肽(MDP或MTP)；

b)脂质体，所述脂质体由以下组分组成或包含以下组分：

i)基于所述脂质体脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计25％至35％，优选25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％的至少一种带负电荷的磷脂；

ii)基于所述脂质体脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计30％至50％，优选30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％或50％的至少一种两性离子磷脂；

iii)基于所述脂质体脂质的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计20％至30％，优选20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％的至少一种甾醇，

条件是所述至少一种两性离子磷脂不是棕榈酰-油酰-磷脂酰-胆碱(POPC)，也不是1,2-二(癸酰)1-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DDPC)。

2.根据权利要求1所述的脂质体组合物，其特征在于，所述至少一种带负电荷的磷脂选自包括以下物质的组：磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酸(PA)、二磷脂酰甘油(DPG)或心磷脂(CL)，它们的包含一个或多个脂肪酸残基的衍生物，以及它们的混合物。

3.根据权利要求2所述的脂质体组合物，其特征在于，所述至少一种带负电荷的磷脂选自包括磷脂酰丝氨酸(PS)或磷脂酰丝氨酸衍生物的组，所述磷脂酰丝氨酸衍生物选自包括以下物质的组：棕榈酰油酰-磷脂酰丝氨酸(POPS)、棕榈酰-亚油酰磷脂酰丝氨酸(PLPS)、棕榈酰-花生四烯酰-磷脂酰丝氨酸(PAPS)、棕榈酰二十二碳六烯酰磷脂酰丝氨酸(PDPS)、硬脂酰-油酰-磷脂酰丝氨酸(OSPS)、硬脂酰-亚油酰-磷脂酰丝氨酸(GPPS)、硬脂酰-花生四烯酰-磷脂酰丝氨酸(SAPS)、硬脂酰二十二碳六烯酰磷脂酰丝氨酸(SDPS)、二(癸酰)-磷脂酰丝氨酸(C10PS)、二(月桂酰)-磷脂酰丝氨酸(DLPS)、二(肉豆蔻酰)-磷脂酰丝氨酸(DMPS)、二(植烷酰)-磷脂酰丝氨酸(DPhPS)、二(十七酰)磷脂酰丝氨酸(PS17:0/17:0)、二(油酰)-磷脂酰丝氨酸(DOPS)、二(棕榈酰)-磷脂酰丝氨酸(DPPS)、二(硬脂酰)磷脂酰丝氨酸(DSPS)、二(亚油酰)磷脂酰丝氨酸(di18:3PS)、二(芥酸酰)磷脂酰丝氨酸、二(二十二碳六烯酰)-磷脂酰丝氨酸，以及它们的混合物，优选二(油酰)-磷脂酰丝氨酸(DOPS)。

4.根据权利要求1所述的脂质体组合物，其特征在于，所述至少一种两性离子磷脂选自包括以下物质的组：磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺，它们的包含一个或多个脂肪酸残基的衍生物；卵磷脂、溶血卵磷脂、溶血磷脂酰-乙醇胺、磷酸甘油酯；以及它们的混合物，条件是所述至少一种两性离子磷脂不是棕榈酰-油酰-磷脂酰-胆碱(POPC)。

5.根据权利要求4所述的脂质体组合物，其特征在于，所述至少一种两性离子磷脂是磷脂酰胆碱或磷脂酰胆碱衍生物，所述磷脂酰胆碱衍生物选自包括以下物质的组：二(花生四烯酰)-磷脂酰-胆碱(DAPC)、二(十八碳烯酰)-磷脂酰-胆碱(DEPC)、二(月桂酰)-磷脂酰-胆碱(DLaPC)、二(亚油酰)-磷脂酰-胆碱(DLPC)、二(亚麻酰)-磷脂酰-胆碱(DLnPC)、二(肉豆蔻酰)-磷脂酰-胆碱(DMPC)、二(肉豆蔻烯酰)磷脂酰胆碱(DMoPC)、二(油酰)-磷脂酰-胆碱(DOPC)、二(棕榈酰)-磷脂酰-胆碱(DPPC)、二(十五酰)磷脂酰-胆碱(DPePC)、二(棕榈油酰)-磷脂酰-胆碱(DPoPC)、二(植烷酰)-磷脂酰-胆碱(DPhPC)、二(岩芹酰)-磷脂酰-胆碱(DPsPC)、二(十三酰)磷脂酰-胆碱(DTPC)、l-十六烷基-2-花生四烯酰磷脂酰胆碱(HAPC)、棕榈酰-花生四烯酰-磷脂酰-胆碱(PAPC)、1,2-二(十六酰)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DPPC)和1,2-二(硬脂酰)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)以及它们的混合物，优选1,2-二(硬脂酰)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)，并且甚至更优选二(肉豆蔻酰)-磷脂酰-胆碱(DMPC)。

6.根据权利要求1所述的脂质体组合物，其特征在于，所述至少一种甾醇选自于由以下物质组成的组：胆固醇；胆固醇衍生物，所述胆固醇衍生物例如胆固醇-磷酸胆碱、胆固醇-聚乙二醇和胆固醇-S04、胆固醇酯；维生素D；植物甾醇，所述植物甾醇例如谷甾醇、菜油甾醇和豆甾醇；以及它们的混合物，优选胆固醇。

7.根据权利要求1所述的脂质体组合物，其特征在于：

a)所述亲脂性免疫刺激剂为MTP-PE(米伐木肽)，优选处于相对于所述脂质体组合物的重量按重量计0.1％至10％的浓度；

b)脂质体，所述脂质体由以下组分组成或包含以下组分：

i)基于所述脂质体的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计25％至35％，优选25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％或35％的DOPS；

ii)基于所述脂质体的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计30％至50％，优选30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％或50％的DSPC、DPPC、DMPC或DLPC；

iii)基于所述脂质体的总重量或总摩尔量，按重量或摩尔计20％至30％，优选20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％的胆固醇。

8.根据前述权利要求中任一项所述的脂质体组合物，其用于旨在口服给予的药物组合物的制备。

9.根据前述权利要求中任一项所述的脂质体组合物，其特征在于，所述脂质体组合物处于干粉的形式，任选地包含稳定剂或另一种药学上可接受的赋形剂。

10.根据权利要求1-8中任一项所述的脂质体组合物，其用于治疗或预防癌症的用途，所述癌症特别是骨肉瘤、肾癌或乳腺癌。

11.根据权利要求1-8中任一项所述的脂质体组合物，其用于治疗和/或预防癌性转移的用途，所述癌性转移特别是肺转移。