CN116973432A - Icp-ms检测血浆、血清、尿液样本21种金属含量方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种ICP‑MS检测血浆、血清、尿液样本21种金属含量方法，包括以下步骤：(1)21种金属和4种内标元素的检测参数设置；(2)选择21种金属使用的内标元素；(3)工作液配制；(4)标准质控样本重构和使用；(5)血浆、血清、尿液样本处理；(6)质量控制。采用本发明的检测方法具有以下优点，(1)方法精密度高：21种金属日内、日间精密度(变异度)优于15％；(2)方法适用范围广：可同时适用于检测血浆、血清、尿液等生物样本；(3)样本基体匹配度佳：4种内标元素Sc.Y,Rh,Tb的内标回收率较稳定；(4)基体干扰小：21种元素的加标回收率均在80％～120％，基体干扰小。
Description
技术领域
本发明属于种金属含量检测技术领域，具体涉及ICP-MS检测血浆、血清、尿液样本21种金属含量方法。
背景技术
人体内元素含量与健康息息相关，血液中元素浓度是临床监测和评价金属中毒的重要依据，人体血液中金属元素含量的准确测定极为重要。目前，血液中金属检测技术常见的有原子吸收光谱法、原子荧光光谱法、电化学法(如溶出伏安法)等。其中，溶出伏安法在血铅测定过程中，不需要对血液样品消解可以直接测定，方法简便，但血液中生物大分子对电极造成污染严重，影响测定结果；石墨炉原子吸收光谱法，只能进行单元素检测，且仪器贵重、操作复杂，只能在专业实验室使用，不适合现场快速检测。
发明内容
本发明通过提供一种ICP-MS检测血浆、血清、尿液样本21种金属含量方法，以解决现有技术存在的问题。
为实现上述目的，本发明的技术解决方案是：
一种ICP-MS检测血浆、血清、尿液样本21种金属含量方法，包括以下步骤：
(1)21种金属和4种内标元素的检测参数设置；
(2)选择21种金属使用的内标元素；
(3)工作液配制；
(4)标准质控样本重构和使用；
(5)血浆、血清、尿液样本处理；
(6)质量控制。
进一步地，步骤(2)中21种金属使用的内标元素如下：
Ti49,V51,Cr52,Mn55,Fe57,Co59,Ni60.使用Sc45作为内标；
Cu63,Zn66,As75,Se78,Rb85,Sr88,Mo98.使用Y89作为内标；
Cd111,Sn118,Sb121,Ba138,W184.使用Rh103作为内标；
Tl205,Pb208.使用Tb159作为内标。
进一步地，步骤(3)中工作液配制方法，包括以下步骤：
检测血浆和血清样本的工作液中含有0.5％正丁醇、0.01％TritonX-100，该工作液为基质1％HNO3和多元素内标工作液；检测尿液的工作液中无正丁醇和TritonX-100，尿液的工作液为基质1％HNO3和多元素内标工作液，该方法包括基质1％HNO3配制、多元素内标工作液配制、多元素标准曲线工作液配制。
进一步地，所述基质1％HNO3配制方法，包括以下步骤：
基质1％HNO3在样本金属含量检测中作为清洗液、基础稀释液和标准曲线工作液中的空白(Blank)使用。使用经65％HNO3浸泡过并用去离子水清洗干净的2.5L玻璃试剂瓶盛装1％HNO3；使用去离子水润洗数次1L量筒后，量取相应量的去离子水，配制方法如下：
①2L1％HNO3(内含0.5％正丁醇、0.01％TritonX-100，检测血浆、血清样本)：1970mL去离子水+20mL65％HNO3+10mL正丁醇+0.2mLTritonX-100；
②2L1％HNO3(检测尿液样本)：1980mL去离子水+20mL65％HNO3。
进一步地，所述多元素内标工作液配制方法，包括以下步骤：
使用去离子水清洗干净的1L容量瓶盛装多元素内标工作液，使用美国PerkinElmer股份有限公司的InternalStandardMix和国家有色金属及电子材料分析测试中心的ICP分析用多元素标准溶液配制本研究的多元素内标工作液，二者所含内标元素的浓度分别为10000μg/L和100000μg/L，配制方法如下：
①1L50ppb多元素内标工作液：980mL去离子水+10mL65％HNO3+5mLPerkinElmerInternalStandardMix+5mL正丁醇+0.5mLICP分析用多元素标准溶液+0.1mLTritonX-100；
②1L50ppb多元素内标工作液：985mL去离子水+10mL65％HNO3+5mLPerkinElmerInternalStandardMix+0.5mLICP分析用多元素标准溶液；
进一步地，多元素标准曲线工作液配制方法，包括以下步骤：
购自美国InorganicVentures公司的43元素标准应用液和6元素标准应用液均为多元素标样混液，内含的各元素浓度均为10μg/mL，运用倍比稀释法，配制标准曲线工作液，配制完成后超声30min以充分混匀。
进一步地，步骤(5)中血浆、血清、尿液样本处理方法，包括：
1)血浆和血清
检测前一天早上8点将样本从-80℃拿出放至-20℃12hr，晚上20点将样本从-20℃放至4℃12hr，第二天早上8点将样本从4℃拿出室温平衡半小时，使用涡旋振荡器充分混匀样本后，取100μL样本至15mL离心管中，使用移液器精确加入1.9mL 1％HNO3至该离心管中，超声30min后，于室温平衡，上机检测；
2)尿液
检测前一天晚上，使用涡旋振荡器充分混匀样本后，取1mL样本至15mL离心管中，使用移液器精确加入40μL 65％HNO3至该离心管中，并放至4℃冰箱中酸化过夜。第二天早上将酸化后的尿样拿出，加入4.0mL 1％HNO3将样本稀释5倍，超声30min后，于室温平衡，上机检测。
进一步地，步骤(6)中质量控制，包括：加标回收率、内标回收率、精密度、检出限检测。
本发明的与现有技术相比，具有以下几个方面的优势：
1.方法准确性高：根据血浆、血清、尿液质控标准品(水平2)及SRM1640a微量元素天然水元素质控共4种质控标准品的说明书中所提供的对本发明中所包含金属元素的指导，本发明使用的方法均能通过其95％CI，确保了检测方法的准确度；
2.方法精密度高：21种金属日内、日间精密度(变异度)优于15％；
3.方法适用范围广：本发明中的方法可同时适用于检测血浆、血清、尿液等生物样本；
4.样本基体匹配度佳：4种内标元素Sc.Y,Rh,Tb的内标回收率较稳定(70％～130％)，说明方法基体与样本基体较匹配；
5.基体干扰小：21种元素的加标回收率均在80％～120％之间，表明本方法的基体干扰小，适合被测样本血浆、血清、尿液；
6.标准曲线相关系数强：21种金属的标准曲线相关系数(R2)均在0.999以上，保证了数据的准确性；
7.检测时间短：检测单个样本21种金属含量及清洗管路时间仅花费3.5min。
说明书附图
图1为21种元素标准曲线图；
图2为检测血浆样本内标回收率情况图；
图3为检测血清样本内标回收率情况图；
图4为检测尿液样本内标回收率情况图。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一、主要仪器、试剂和耗材
(一)主要仪器
美国PerkinElmer(珀金埃尔默)350X型号电感耦合等离子体质谱(InductivelyCoupledPlasma-MassSpectrometry,ICP-MS)、德国Brand公司瓶口分液器、美国ScientificIndustries公司涡旋振荡器、美国MerckMillipore公司Milli-Q超纯水仪、超声仪、日本AtagoPAL10S尿比重计等。
(二)主要试剂
表1主要试剂
(三)主要耗材
表2主要耗材
二、ICP-MS检测血浆、血清、尿液样本21种金属含量方法
(一)21种金属和4种内标元素的检测参数设置
21种金属和4种内标元素的检测参数设置如表3所示。
表3 21种金属和4种内标元素的检测参数设置
(二)21种金属(按照质量数从小到大排序)及其所使用的内标元素：
1.Ti49,V51,Cr52,Mn55,Fe57,Co59,Ni60.使用Sc45作为内标。
2.Cu63,Zn66,As75,Se78,Rb85,Sr88,Mo98.使用Y89作为内标。
3.Cd111,Sn118,Sb121,Ba138,W184.使用Rh103作为内标。
4.Tl205,Pb208.使用Tb159作为内标。
(三)工作液配制方法
检测血浆和血清样本的工作液(基质1％HNO3和多元素内标工作液)中含有0.5％正丁醇、0.01％TritonX-100；检测尿液的工作液(基质1％HNO3和多元素内标工作液)中无正丁醇和TritonX-100。
1.基质1％HNO3配制方法
基质1％HNO3在样本金属含量检测中作为清洗液、基础稀释液和标准曲线工作液中的空白(Blank)使用。使用经65％HNO3浸泡过并用去离子水清洗干净的2.5L玻璃试剂瓶盛装1％HNO3；使用去离子水润洗数次1L量筒后，量取相应量的去离子水。配制方法如下：
①2L1％HNO3(内含0.5％正丁醇、0.01％TritonX-100，检测血浆、血清样本)：1970mL去离子水+20mL65％HNO3+10mL正丁醇+0.2mLTritonX-100。
②2L1％HNO3(检测尿液样本)：1980mL去离子水+20mL65％HNO3。
2.多元素内标工作液配制方法
使用去离子水清洗干净的1L容量瓶盛装多元素内标工作液。使用美国PerkinElmer股份有限公司的InternalStandardMix和国家有色金属及电子材料分析测试中心的ICP分析用多元素标准溶液配制本研究的多元素内标工作液，二者所含内标元素的浓度分别为10000μg/L(即ppb)和100000ppb。配制方法如下：
①1L50ppb多元素内标工作液(内含0.5％正丁醇、0.01％TritonX-100，检测血浆、血清样本)：980mL去离子水+10mL65％HNO3+5mLPerkinElmerInternalStandardMix+5mL正丁醇+0.5mLICP分析用多元素标准溶液+0.1mLTritonX-100。
②1L50ppb多元素内标工作液(检测尿液样本)：985mL去离子水+10mL65％HNO3+5mLPerkinElmerInternalStandardMix+0.5mLICP分析用多元素标准溶液。
3.多元素标准曲线工作液配制方法
购自美国InorganicVentures公司的43元素标准应用液(后简称“43元素”)和6元素标准应用液(后简称“6元素”)均为多元素标样混液，内含的各元素浓度均为10μg/mL(＝10000μg/L＝10000ppb)。运用倍比稀释法(逐级稀释法)，按照表4的方法配制标准曲线工作液，配制完成后超声30min以充分混匀。
表4多元素标准曲线工作液配制方法
(四)标准质控样本重构和使用方法
1.美国NationalInstituteofStandardsandTechnology(NIST)SRM1640a微量元素天然水元素质控：该质控为液体，保存于4℃，分装至离心管中取用，使用基质1％HNO3稀释20倍，超声30min后上机检测，并比对说明书所提供的元素浓度范围。检测血浆、血清和尿液样本均使用NIST1640a进行质控(稀释液不同)。
2.挪威SeroTM公司SeronormTMTraceElementsUrineL-1&L-2RUO：简称尿质控(UCT)，该质控为瓶装冻干粉末，按照说明书，于4℃保存。使用时，拿出至室温平衡30min，加入5mL去离子水后，使用涡旋振荡器混匀，分装至15mL离心管中(一般习惯分装1mL，管身上写好相应信息，如“UCTL1-1LOT1403080TCQ202201131mL”)，冻存于-20℃备用，使用时拿出至室温融化，使用1％HNO3稀释相应倍数(一般尿质控习惯稀释10倍使用)，超声30min后上机检测，并比对说明书所提供的元素浓度95％CI。
3.德国RECIPE公司PlasmaControlLevelI&LevelⅡ：简称血浆质控(PCT)，该质控为瓶装冻干粉末，按照说明书，于4℃保存。使用时，拿出至室温平衡30min，加入3mL去离子水后，使用涡旋振荡器混匀，分装至15mL离心管中(一般习惯分装0.3mL，管身上写好相应信息，如“PCTL1-1LOT1518TCQ202201130.3mL”)，冻存于-20℃备用，使用时拿出至室温融化，使用1％HNO3(内含0.5％正丁醇、0.01％TritonX-100)稀释相应倍数(一般血浆质控习惯稀释20倍使用)，超声30min后上机检测，并比对说明书所提供的元素浓度95％CI。
4.德国RECIPE公司SerumControlLevelI&LevelⅡ：简称血清质控(SCT)，该质控为瓶装冻干粉末，按照说明书，于4℃保存。使用时，拿出至室温平衡30min，加入3mL去离子水后，使用涡旋振荡器混匀，分装至15mL离心管中(一般习惯分装0.3mL，管身上写好相应信息，如“SCTL2-3LOT1497TCQ202201130.3mL”)，冻存于-20℃备用，使用时拿出至室温融化，使用1％HNO3(内含0.5％正丁醇、0.01％TritonX-100)稀释相应倍数(一般血清质控习惯稀释20倍使用)，超声30min后上机检测，并比对说明书所提供的元素浓度95％CI。
(五)血浆、血清、尿液样本处理方法
1.血浆和血清
检测前一天早上8点将样本从-80℃拿出放至-20℃12hr，晚上20点将样本从-20℃放至4℃12hr，第二天早上8点将样本从4℃拿出室温平衡半小时(梯度温度融化样本)，使用涡旋振荡器充分混匀样本后，取100μL样本至15mL离心管中，使用移液器精确加入1.9mL1％HNO3(内含0.5％正丁醇、0.01％TritonX-100)至该离心管中(具体的稀释倍数和原样本所需量，应根据预实验决定)，超声30min后，于室温平衡，上机检测。
2.尿液
检测前一天晚上，使用涡旋振荡器充分混匀样本后，取1mL样本至15mL离心管中，使用移液器精确加入40μL65％HNO3至该离心管中，并放至4℃冰箱中酸化过夜。第二天早上将酸化后的尿样拿出，加入4.0mL1％HNO3将样本稀释5倍(具体的稀释倍数和原样本所需量，应根据预实验决定)，超声30min后，于室温平衡，上机检测。
(六)质量控制
1.预实验
由于不同地区、不同类型的人群，以及不同的生物样本中所含有的金属元素浓度范围差异较大，同样的标准曲线线性范围对于不同人群的不同金属元素并不适用，因此在检测样本金属含量前，需要进行预实验，对该人群的金属含量进行初步估计，以确定样本的稀释倍数、标准曲线的线性范围，以及进行加标回收率实验、精密度实验等。通常随机取样本总数(n)的10％～20％样本例数进行预实验，按照上述样本处理方法，每个样本取一定量至离心管中，组成混合样本(pooledsample)，每个样本所取用的量，根据所做预实验所需的总量进行推算。
2.标准曲线的相关系数
每一次建立标准曲线时，所有元素标准曲线的相关系数(R2)均≥0.999后方可用于分析，否则查找原因，重新配制标准曲线工作液、重新调谐仪器、清洗仪器或重新测定，直至符合要求。图1为应用本发明建立标准曲线的一次实例的标准曲线图，21种元素的R2均≥0.999，保证了检测数据的可靠性和准确性。
3.标准质控样本
每一次建立标准曲线后以及每检测完20个样本后，检测一次NISTSRM1640a微量元素天然水元素质控、相应样本的质控水平1和水平2(如：检测血浆样本时，检测PCTL1&PCTL2；检测血清样本时，检测SCTL1&SCTL2；检测尿液样本时，检测UCTL1&UCTL2)，比对说明书中提供的每个元素的95％CI，为便于分析，当＞90％的元素与提供的参考浓度一致，便假定为质控合格；否则将查找原因，重新调试仪器、建立标准曲线、再次检测质控至合格。
①NISTSRM1640a微量元素天然水元素质控：该质控提供了本课题组方法中所检测的V,Cr,Mn,Fe,Co,Ni,Cu,Zn,As,Se,Sr,Mo,Cd,Sb,Ba,Tl,Pb等17种元素的质控范围，不包含方法中其他4种元素Ti,Rb,Sn,W。本课题组所建立的检测方法，仪器在正常运行的情况下，上述17种元素均通过NISTSRM1640a质控。
②挪威SeroTM公司SeronormTMTraceElementsUrineL-1&L-2RUO：该质控的L1提供了本课题组方法中所检测的V,Cr,Mn,Fe,Co,Ni,Cu,Zn,As,Se,Mo,Cd,Sn,Sb,Tl等15种元素的质控范围，不包含方法中其他6种元素Ti,Rb,Sr,Ba,W,Pb；L2提供了V,Cr,Mn,Co,Ni,Cu,Zn,As,Se,Cd,Sn,Sb,Tl等13种元素的质控范围，不包括方法中其他8种元素Ti,Fe,Rb,Sr,Mo,Ba,W,Pb。本课题组前期建立方法时，主要根据L2质控的结果进行方法调整，故仪器在正常运行的情况下，L2的13种元素均通过质控。
③德国RECIPE公司PlasmaControlLevelI&LevelⅡ：该质控的L1和L2提供了本课题组方法中所检测的Ti,V,Cr,Mn,Fe,Co,Ni,Cu,Zn,As,Se,Mo,Cd,Sn,Sb,Ba,Tl等17种元素的质控范围，不包括方法中其他4种元素Rb,Sr,W,Pb。本课题组前期建立方法时，主要根据L2质控的结果进行方法调整，故仪器在正常运行的情况下，L2的17种元素均通过质控。
④德国RECIPE公司SerumControlLevelI&LevelⅡ：该质控的L1和L2提供了本课题组方法中所检测的Ti,V,Cr,Mn,Fe,Co,Ni,Cu,Zn,As,Se,Mo,Cd,Sn,Sb,Ba,Tl等17种元素的质控范围，不包括方法中其他4种元素Rb,Sr,W,Pb。本课题组前期建立方法时，主要根据L2质控的结果进行方法调整，故仪器在正常运行的情况下，L2的17种元素均通过质控。
对于各质控中所没有包含的元素，使用加标回收率实验进行质量控制。
4.加标回收率
加标回收率实验主要用于判断样本基体是否稳定，以及对各质控中所没有包含的元素进行质量控制，其计算公式为：加标回收率＝(加标样本测定浓度－未加标样本测定浓度)/加标浓度*100％。使用预实验中的pooledsample进行加标回收率实验，取用pooledsample前使用涡旋振荡器充分混匀样本，每个加标样本做1个平行样。在预实验中，确定了样本稀释倍数、各元素标曲范围后，检测加标回收率样本，再开始检测样本。通常，加标回收率的范围以80％～120％为优。表5为本课题组以往进行血浆和血清样本的加标回收率实验方法，表6为本课题组以往进行尿液样本的加标回收率实验方法(具体样本稀释倍数根据预实验确定)，3种样本各元素加标回收率均在80％～120％之间，加标回收率结果见表7。
表5血浆/血清样本加标回收率实验方法
表6尿液样本加标回收率实验方法
表7血清样本加标回收率
由表7可知：21种元素的低、高浓度加标回收率均在80％～120％之间，表明实验人员操作准确，本方法能确保基体稳定，样本基体与试剂基体匹配度好。
5.内标回收率
内标回收率主要用于判断样本的基体与标准曲线的基体是否匹配及稳定，根据工程师指导以及检测经验判断，内标回收率保持在70％～130％之间均可。检测血浆、血清、尿液样本过程中的内标回收率情况见图2-4，可观察到：检测3种生物样本时，Sc、Y、Rh、Tb这4种内标元素的内标回收率均比较稳定，在70％～130％之间浮动，表明本方法能确保基体稳定。
6.精密度
每次建立完标准曲线以及每检测完20个样本后均检测NISTSRM1640a、各样本质控(UCTL1&L2/PCTL1&L2/SCTL1&L2)，故使用质控样本(UCT/PCT/SCT)作为计算日间、日内精密度(变异度)的样本，计算公式为精密度＝STDEVA/AVERAGE，以＜10％为优。
7.检出限
以基体1％HNO3替代样本作为试剂空白，连续检测11次，3*试剂空白浓度的标准偏差即为检出限。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书所作的等效变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (8)
1.一种ICP-MS检测血浆、血清、尿液样本21种金属含量方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)21种金属和4种内标元素的检测参数设置；
(2)选择21种金属使用的内标元素；
(3)工作液配制；
(4)标准质控样本重构和使用；
(5)血浆、血清、尿液样本处理；
(6)质量控制。
2.根据权利要求1所述的ICP-MS检测血浆、血清、尿液样本21种金属含量方法，其特征在于，步骤(2)中21种金属使用的内标元素如下：
Ti49,V51,Cr52,Mn55,Fe57,Co59,Ni60.使用Sc45作为内标；
Cu63,Zn66,As75,Se78,Rb85,Sr88,Mo98.使用Y89作为内标；
Cd111,Sn118,Sb121,Ba138,W184.使用Rh103作为内标；
Tl205,Pb208.使用Tb159作为内标。
3.根据权利要求1所述的ICP-MS检测血浆、血清、尿液样本21种金属含量方法，其特征在于，步骤(3)中工作液配制方法，包括以下步骤：
检测血浆和血清样本的工作液中含有0.5％正丁醇、0.01％TritonX-100，该工作液为基质1％HNO3和多元素内标工作液；检测尿液的工作液中无正丁醇和TritonX-100，尿液的工作液为基质1％HNO3和多元素内标工作液，该方法包括基质1％HNO3配制、多元素内标工作液配制、多元素标准曲线工作液配制。
4.根据权利要求3所述的ICP-MS检测血浆、血清、尿液样本21种金属含量方法，其特征在于，所述基质1％HNO3配制方法，包括以下步骤：
基质1％HNO3在样本金属含量检测中作为清洗液、基础稀释液和标准曲线工作液中的空白(Blank)使用。使用经65％HNO3浸泡过并用去离子水清洗干净的2.5L玻璃试剂瓶盛装1％HNO3；使用去离子水润洗数次1L量筒后，量取相应量的去离子水，配制方法如下：
①2L1％HNO3(内含0.5％正丁醇、0.01％TritonX-100，检测血浆、血清样本)：1970mL去离子水+20mL65％HNO3+10mL正丁醇+0.2mLTritonX-100；
②2L1％HNO3(检测尿液样本)：1980mL去离子水+20mL65％HNO3。
5.根据权利要求3所述的ICP-MS检测血浆、血清、尿液样本21种金属含量方法，其特征在于，所述多元素内标工作液配制方法，包括以下步骤：
使用去离子水清洗干净的1L容量瓶盛装多元素内标工作液，使用美国PerkinElmer股份有限公司的InternalStandardMix和国家有色金属及电子材料分析测试中心的ICP分析用多元素标准溶液配制本研究的多元素内标工作液，二者所含内标元素的浓度分别为10000μg/L和100000μg/L，配制方法如下：
①1L50ppb多元素内标工作液：980mL去离子水+10mL65％HNO3+5mLPerkinElmerInternalStandardMix+5mL正丁醇+0.5mLICP分析用多元素标准溶液+0.1mLTritonX-100；
②1L50ppb多元素内标工作液：985mL去离子水+10mL65％HNO3+5mLPerkinElmerInternalStandardMix+0.5mLICP分析用多元素标准溶液。
6.根据权利要求3所述的ICP-MS检测血浆、血清、尿液样本21种金属含量方法，其特征在于，多元素标准曲线工作液配制方法，包括以下步骤：
购自美国InorganicVentures公司的43元素标准应用液和6元素标准应用液均为多元素标样混液，内含的各元素浓度均为10μg/mL，运用倍比稀释法，配制标准曲线工作液，配制完成后超声30min以充分混匀。
7.根据权利要求1所述的ICP-MS检测血浆、血清、尿液样本21种金属含量方法，其特征在于，步骤(5)中血浆、血清、尿液样本处理方法，包括：
1)血浆和血清
检测前一天早上8点将样本从-80℃拿出放至-20℃12hr，晚上20点将样本从-20℃放至4℃12hr，第二天早上8点将样本从4℃拿出室温平衡半小时，使用涡旋振荡器充分混匀样本后，取100μL样本至15mL离心管中，使用移液器精确加入1.9mL 1％HNO3至该离心管中，超声30min后，于室温平衡，上机检测；
2)尿液
检测前一天晚上，使用涡旋振荡器充分混匀样本后，取1mL样本至15mL离心管中，使用移液器精确加入40μL 65％HNO3至该离心管中，并放至4℃冰箱中酸化过夜。第二天早上将酸化后的尿样拿出，加入4.0mL 1％HNO3将样本稀释5倍，超声30min后，于室温平衡，上机检测。
8.根据权利要求1所述的ICP-MS检测血浆、血清、尿液样本21种金属含量方法，其特征在于，步骤(6)中质量控制，包括：加标回收率、内标回收率、精密度、检出限检测。
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