CN116970058A - 针对tp53基因r249s突变的肿瘤新抗原多肽及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于肿瘤免疫治疗技术领域，具体涉及针对TP53基因R249S突变的肿瘤新抗原多肽及其应用。本发明要解决的技术问题是提供一种基于MHC‑II类分子的针对肿瘤驱动基因TP53的R249S突变的特异性免疫治疗方案。本发明解决上述技术问题的技术方案是针对肿瘤驱动基因TP53的R249S突变相关的肿瘤新抗原多肽。本发明的抗原多肽能够显著激活人体特异性针对TP53‑R249S突变的T细胞，以增加T细胞对TP53‑R249S突变肿瘤细胞的杀伤能力，能够制备预防和治疗TP53‑R249S突变肿瘤的药物，尤其是用于制备肿瘤细胞疫苗。
Description
技术领域
本发明属于肿瘤免疫治疗技术领域，具体涉及针对TP53基因R249S突变的肿瘤新抗原多肽及其应用。
背景技术
肿瘤免疫治疗是一种新型的肿瘤治疗方法，被认为是继手术、放疗、化疗和小分子靶向治疗之后的下一代治疗手段。相较于传统治疗方法，免疫治疗注重于通过增强患者自身的免疫细胞来治疗肿瘤，而非靠药物直接杀伤肿瘤细胞。这种治疗方式具有许多优势，如治疗精准、副作用小和效果持久等。此外，机体免疫系统还具有免疫记忆的特性，因此免疫治疗可以帮助患者形成记忆型免疫，避免肿瘤的复发和转移。免疫治疗的方法之一是基于肿瘤新抗原肽的疫苗治疗。基于肿瘤新抗原肽的疫苗可提供肿瘤突变肽给MHC分子，从而诱导产生特异性和长期记忆T细胞，以对抗肿瘤，达到治疗肿瘤的目的。肿瘤抗原通常被认为是内源性抗原，与MHC I类分子结合，刺激CD8+细胞毒性反应。此外，还有一小部分较大的多肽与MHC II分子结合，专门刺激CD4 + T辅助细胞。
TP53是体细胞突变最为常见的抑癌基因，它可以编码p53蛋白质，而p53蛋白具有多种生物学功能，包括调控细胞周期、诱导细胞凋亡和抑制血管新生等。在各类肿瘤中，超过一般的肿瘤患者存在TP53基因突变。TP53基因突变可导致p53蛋白功能丧失，使细胞失去对细胞周期的调控和凋亡的诱导能力，从而促使肿瘤的发生和发展。此外，部分突变型p53蛋白还具有增强肿瘤细胞生长、侵袭和转移能力的作用。此外，TP53基因突变与患者的生存预后也存在显著相关性。携带TP53基因突变的肿瘤患者预后往往较差，如肝癌、肺癌、乳腺癌、食管癌、胰腺癌、膀胱癌、肠癌、胃癌、卵巢癌等。
鉴于TP53在多种癌症中存在较高的突变频率，使该基因可以成为肿瘤新抗原治疗的潜在靶点。在此前的研究（Hsiue et.al,Science. 2021 Mar 5;371(6533)）中，研究者针对TP53基因的R175H位点突变设计了肿瘤新抗原多肽（HMTEVVRHC，SEQ ID No.14），并发现该新抗原多肽与 HLA-A*02:01 分子存在很强的亲和力。另一项研究（Malekzadeh et.al,J Clin Invest. 2019 Mar 1;129(3):1109-1114.）中，研究者对R175H，Y220C，G245S，R248Q，R248W等多个体细胞突变进行了肿瘤新抗原的研究，发现部分特定的携带有突变氨基酸的多肽序列可以有效地激活患者体内的T细胞并对肿瘤进行杀伤。而TP53还有另一个高频突变TP53-R249S，目前未见有针对该突变的有效肿瘤新抗原的报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是针对现有技术中的不足，提供一种基于MHC-II类分子的针对肿瘤驱动基因TP53上R249S突变的特异性免疫治疗方案。
本发明解决上述技术问题的技术方案是提供针对TP53基因R249S突变的肿瘤新抗原多肽。
其中，上述肿瘤新抗原多肽的氨基酸序列为MGGMNRSPILTIITL(SEQ ID No.11)或者SSCMGGMNRSPILTI(SEQ ID No.13)所示。或者，为上述各多肽的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加至少一个氨基酸所得的功能相同或者相似的多肽。
其中，上述的相同或相似的功能是指基于氨基酸序列为MGGMNRSPILTIITL(SEQ IDNo.11) 的抗原多肽能激活的HLA分型为HLA-DRB1*07:01且伴随有TP53的 R249S突变的患者产生特异性的针对具有TP53的R249S突变的肿瘤的T细胞；或者，基于氨基酸序列为SSCMGGMNRSPILTI(SEQ ID No.13)的抗原多肽能激活HLA分型为HLA-DQA1*02:01/DQB1*03:01；且伴随有TP53的 R249S突变的患者产生特异性的针对具有TP53的R249S突变的肿瘤的T细胞。
本发明还提供了上述肿瘤新抗原多肽在制备可诱导产生特异性细胞毒性T细胞克隆的免疫活性调节剂中的应用。
本发明还提供了上述肿瘤新抗原多肽在制备存在TP53高频突变的肿瘤风险干预和/或治疗剂中的应用。其中，上述的TP53高频突变为R249S突变。
基于上述方案，本发明还进一步提供了一种DC细胞。该DC细胞为经上述的肿瘤新抗原多肽刺激而得。进一步的，上述的DC细胞中所述的刺激方式为DC细胞与肿瘤新抗原多肽进行共孵育。
其中，上述的DC细胞为成熟的DC细胞。
其中，上述的DC细胞为TP53发生 R249S突变的患者的离体DC细胞。
进一步的，上述的DC细胞为含有人类白细胞的HLA分型为HLA-DRB1*07:01或HLA-DQA1*02:01/DQB1*03:01的患者的离体DC细胞。
本发明也提供了上述肿瘤新抗原多肽和上述的DC细胞在制备伴随TP53突变的肿瘤的免疫治疗药物中的应用。
其中，上述应用中所述的伴随TP53突变的肿瘤为TP53发生R249S突变的肿瘤。
其中，上述应用中所述的肿瘤为肝癌。
其中，上述应用中所述的肿瘤为含有人类白细胞的HLA分型为HLA-DRB1*07:01或HLA-DQA1*02:01/DQB1*03:01的患者所患肿瘤。
此外，本发明也提供了抗上述肿瘤新抗原多肽的抗体。
其中，所述的抗体为多克隆抗体或单克隆抗体。
进一步的，上述的抗体还可与偶联部分形成偶联物。所述偶联部分为选自放射性核素、药物、毒素、细胞因子、酶、荧光素、载体蛋白或生物素中的至少一种。
本发明也提供了编码上述肿瘤新抗原多肽或上述的抗体的基因。
同时，本发明还提供了装载有上述的基因的载体。进一步的，所述载体为表达载体，表达载体可在质粒载体、腺病毒载体、慢病毒载体或腺相关病毒载体等常用载体中选择。当使用腺病毒载体时，一般采用复制缺陷型腺病毒载体。
本发明的有益效果在于：
本发明的抗原肽能够显著激活人体特异性针对TP53突变的T细胞，以增加T细胞对TP53突变的肿瘤细胞的杀伤能力，能够制备预防和治疗TP53突变肿瘤的药物。而经本发明抗原肽刺激的TP53突变肿瘤患者的DC细胞，回输回患者体内后，能够激活特异性针对TP53突变肽的 T 细胞，以增加 T 细胞对存在TP53突变的癌细胞的杀伤能力。本发明的抗原肽弥补了个体化抗原肽在同时具有TP53-R249S体细胞突变和HLA-DRB1*07:01或HLA-DQA1*02:01/DQB1*03:01基因型的肿瘤病人中治疗中的空白。同时，本发明的抗原便于大规模的合成及制备，可用于TP53-R249S突变肿瘤患者标准化、精准化的的免疫治疗之中。
附图说明
图1为MGGMNRSPILTIITL(SEQ ID No.11)多肽的液相色谱检测图谱。
图2为SSCMGGMNRSPILTI(SEQ ID No.13)多肽的液相色谱检测图谱。
图3为酶联免疫吸附试验实验结果。
具体实施方式
本发明基于R249S突变后的TP53基因编码产物的氨基酸序列，结合MHC-II 类分子中的人类白细胞抗原单倍型，使用生物信息预测方法，得到一系列的新抗原肽。并进一步地筛选得到免疫激活能力强的氨基酸序列为MGGMNRSPILTIITL的新抗原肽，命名为M6；以及氨基酸序列为SSCMGGMNRSPILTI的新抗原肽，命名为M7。本发明得到的新抗原肽M6和M7对应的人类白细胞抗原分型分别为HLA-DRB1*07:01和HLA-DQA1*02:01/DQB1*03:01，即能够使具有HLA-DRB1*07:01或HLA-DQA1*02:01/DQB1*03:01分型的R249S突变的病人激活特异性针对TP53突变的DC细胞，以增加T细胞对 TP53突变肿瘤细胞的杀伤能力。
本领域技术人员知晓，在MGGMNRSPILTIITL和SSCMGGMNRSPILTI抗原多肽的氨基酸序列中进行取代和/或缺失和/或添加至少一个氨基酸所得的功能相同或者相似的多肽也是在本发明的保护范围之中。其中，所述的相同或相似的功能是指抗原多肽能激活HLA分型为HLA-DRB1*07:01或HLA-DQA1*02:01/DQB1*03:01且伴随有TP53的 R249S突变的患者产生特异性的针对具有TP53 R249S突变的肿瘤的T细胞。
在本发明中，“各肽段的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加至少一个氨基酸所得的肽段的与上述蛋白的的功能相同或相似的蛋白”的表述包括但并不限于若干个(通常为1-20个，较佳地1-10个，更佳地1-5个，最佳地1-3个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一个或数个(可40个以内，通常为20个以内，较佳地为10个以内，更佳地为5个以内)氨基酸。例如，在所述多肽中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变功能。又比如，在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸通常也不会改变蛋白质或多肽的功能。该术语还包括所述多肽的活性片段和活性衍生物。
“各肽段的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加至少一个氨基酸所得的肽段”的表述还包括但并不限于有至多10个（即一个或几个），较佳地至多8个，更佳地至多5个（5个、4个、3个、2个或1个）氨基酸被性质相似或相近的氨基酸所替换而形成多肽，即保守性变异多肽。进一步的，这些保守性变异多肽可根据表1进行替换而产生。
表1氨基酸替换表
| 最初的残基 | 代表性的取代 | 优选的取代 |
| Ala (A) | Val；Leu；Ile | Val |
| Arg (R) | Lys；Gln；Asn | Lys |
| Asn (N) | Gln；His；Lys；Arg | Gln |
| Asp (D) | Glu | Glu |
| Cys (C) | Ser | Ser |
| Gln (Q) | Asn | Asn |
| Glu (E) | Asp | Asp |
| Gly (G) | Pro；Ala | Ala |
| His (H) | Asn；Gln；Lys；Arg | Arg |
| Ile (I) | Leu；Val；Met；Ala；Phe | Leu |
| Leu (L) | Ile；Val；Met；Ala；Phe | Ile |
| Lys (K) | Arg；Gln；Asn | Arg |
| Met (M) | Leu；Phe；Ile | Leu |
| Phe (F) | Leu；Val；Ile；Ala；Tyr | Leu |
| Pro (P) | Ala | Ala |
| Ser (S) | Thr | Thr |
| Thr (T) | Ser | Ser |
| Trp (W) | Tyr；Phe | Tyr |
| Tyr (Y) | Trp；Phe；Thr；Ser | Phe |
| Val (V) | Ile；Leu；Met；Phe；Ala | Leu |
上述的多肽可以作为活性成分，制备抗肿瘤的药物。一般来说，本领域技术人员可将上述的多肽作为抗原活性成分制备预防和/或治疗TP53突变的肿瘤的疫苗。该疫苗以上述的多肽作为抗原成分，以及药学上可接受的辅料或者辅助性成分。
制备疫苗时，经常会添加免疫佐剂以增强机体对疫苗的免疫响应。其中，所述的免疫佐剂为弗氏不完全佐剂、完全弗氏佐剂、氢氧化铝佐剂、磷酸铝佐剂、乳佐剂、脂质体佐剂、微生物佐剂等。
自然的，本领域在本发明记载的多肽的基础上，容易得到抗上述蛋白的抗体。上述的抗体为多克隆抗体或单克隆抗体；优选为单克隆抗体。上述抗体还可与偶联部分形成偶联物。进一步的，所述偶联部分为选自放射性核素、药物、毒素、细胞因子、酶、荧光素、载体蛋白或生物素中的一种或多种。可特异性结合前述的蛋白的抗体一方面可用于制备预防和/或治疗TP53突变的肿瘤的，另一方面可用于TP53突变的肿瘤的免疫检测。
此外，本发明也包含了上述蛋白的编码基因。上述蛋白的编码基因一方面可以用于表达制备上述的多肽外；另一方面还可以可操作地装载在表达载体中，进而可制备成载体疫苗或载体药物的。表达可在质粒载体、腺病毒载体、慢病毒载体或腺相关病毒载体等常用载体中选择。当使用腺病毒载体时，一般采用复制缺陷型腺病毒载体。
特别的，本发明的肿瘤新抗原多肽，还包括了的长度不超过40个氨基酸，其氨基酸序列包含有SEQ ID No.11和SEQ ID No.13所述序列的，且仍然具有与新抗原肽M6和M7相同或者相似的功能的抗原肽。进一步的，所述的氨基酸序列包含有SEQ ID No.11和SEQ IDNo.13所述序列的肿瘤新抗原多肽，不超过30个氨基酸；其仍然具有与新抗原肽M6和M7相同或者相似的功能。
更进一步的，本发明的肿瘤新抗原多肽在所述SEQ ID No.11和SEQ ID No.13序列的N端连接有1～20个氨基酸和/或在所述SEQ ID No.11和SEQ ID No.13序列的C端连接有不超过且不超过1～20个氨基酸形成的多肽，其仍然具有与新抗原肽M6和M7相同或者相似的功能。
也就是说，本领域可以在上述的SEQ ID No.11和SEQ ID No.13所述序列的肿瘤新抗原多肽M6和M7的任意一侧或者两侧添加一定长度的氨基酸序列，仍然能得到能激活HLA分型为HLA-DRB1*07:01或HLA-DQA1*02:01/DQB1*03:01且伴随有TP53的 R249S突变的患者产生特异性的针对具有TP53 R249S突变的肿瘤的T细胞的抗原多肽。
可以理解的是，上面的在肿瘤新抗原多肽M6和M7的任意一侧或两侧添加的氨基酸序列，可以来源于TP53蛋白中MGGMNRSPILTIITL和SSCMGGMNRSPILTI所对应的位点的两侧。
由于本发明的新抗原肽M6和M7能够显著激活人体特异性针对TP53突变的T细胞，增强T细胞对 TP53突变肿瘤细胞的杀伤能力。在此基础上，本发明自然也提供了上述的一系列的新抗原肽在制备TP53突变的肿瘤的免疫治疗药物中的应用。由于使用上述新抗原肽治疗TP53突变的肿瘤时，目前使用新抗原刺激树突状细胞作为疫苗，将疫苗接种给TP53突变的肿瘤患者后，使T淋巴细胞活化增殖，开始攻击以新抗原肽为识别标靶的癌细胞。在此基础上，本发明也提供了一种DC细胞，是经上述的肿瘤新抗原多肽刺激而得。刺激方式一般为DC细胞与肿瘤新抗原多肽进行共孵育。DC细胞常用为目标个体的离体DC细胞。自然，上述的DC细胞为肿瘤中的TP53发生 R249S突变的患者的离体DC细胞。一般来说，是需要把离体DC细胞培养至成熟之后再进行新抗原的刺激步骤。当然，上述的DC细胞最好为含有人类白细胞的HLA分型为HLA-DRB1*07:01或HLA-DQA1*02:01/DQB1*03:01的患者的离体DC细胞。
本发明也提供了上述肿瘤新抗原多肽和上述的DC细胞在制备伴随TP53突变的肿瘤的免疫治疗药物中的应用。上述应用中所述的伴随TP53突变的肿瘤为TP53发生R249S突变的肿瘤。伴随TP53发生R249S突变的肿瘤通常有黑色素瘤、结直肠癌、甲状腺癌和肺癌等多种肿瘤。当然，主要是适用于含有人类白细胞的HLA分型为HLA-DRB1*07:01或HLA-DQA1*02:01/DQB1*03:01的患有上述肿瘤的患者。
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，但不作为本发明的限定。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
实施例一 新抗原分析和预测
通过临床采样搜集1名肺癌患者的外周血和肺癌肿瘤组织。对外周血进行DNA抽提并通过外显子组测序获得基因组数据，对肿瘤组织同时进行DNA和RNA的抽提，分别进行外显子组测序和转录组测序，以获得肿瘤组织的基因组数据和转录组数据。
将高通量测序的原始数据进行基于参考基因组的比对、重复序列的标记以及短插入缺失的重比对等数据操作，最终获得质控合格的比对基因组数据和比对转录组数据。基于这些数据，使用HLA基因型分型软件获取患者的HLA基因型；使用拷贝数分析软件获得肿瘤组织中基因组拷贝数的变化数据；使用纯度分析软件获得肿瘤组织的纯度及克隆结构；使用体细胞突变分析软件获得肿瘤组织中的体细胞突变；使用突变位点翻译软件获得氨基酸发生改变的突变多肽序列；使用基因表达定量软件分析基因表达水平的数据。
在获得了上述的新抗原相关的数据后，使用 HLA-新抗原结合力预测软件分析上述得到的突变多肽序列是否可以有效地结合 HLA 分子（IC50 值<500nM）。并以此为根据，结合 IC50值、多肽表达情况、是否为肿瘤驱动基因等因素在 1 万多条备选的突变多肽中筛选出 7 条突变多肽作为备选。
排名前7的突变多肽作为备选的肿瘤新抗原（参见表2）。
表2 备选肿瘤新抗原肽的信息
| 编号 | MHC分子基因型 | 肿瘤新抗原肽 | 正常多肽 | 所在基因 | 肿瘤新抗原IC50 | 正常多肽IC50 |
| M1 | HLA-DRB1*07:01 | RLFEMGFAEQLQEIT (SEQID No.1) | RLFEMGFAEQLQEII(SEQID No.2) | DDX54 | 118.52 | 116.45 |
| M2 | HLA-DQA1*02:01/DQB1*03:01 | AQKATGQKAAPALKA(SEQID No.3) | AQKATGQKAAPAPKA(SEQID No.4) | RPL14 | 100.27 | 160.93 |
| M3 | HLA-DPA1*01:03/DPB1*04:02 | KVFFHSASFQRLSDA(SEQID No.5) | KVLFHSASFQRLSDA(SEQID No.6) | SBF2 | 10.2 | 11.84 |
| M4 | HLA-DQA1*02:01/DQB1*03:01 | VINETARDAARVQVA(SEQID No.7) | MINETARDAARVQVA(SEQID No.8) | SLC26A6 | 240.65 | 247.49 |
| M5 | HLA-DQA1*02:01/DQB1*03:01 | GLEVLAVFASTVLAQ(SEQID No.9) | RLEVLAVFASTVLAQ(SEQID No.10) | SLC30A6 | 117.34 | 113.69 |
| M6 | HLA-DRB1*07:01 | MGGMNRSPILTIITL(SEQID No.11) | MGGMNRRPILTIITL(SEQID No.12) | TP53 | 131.77 | 520.15 |
| M7 | HLA-DQA1*02:01/DQB1*03:01 | SSCMGGMNRSPILTI(SEQID No.13) | SSCMGGMNRRPILTI(SEQID No.14) | TP53 | 386.82 | 1197.84 |
。
表1中，作为备选新抗原的IC50值排名前7的突变多肽对应的MHC分子基因型分别有三种：HLA-DRB1*07:01（2条），HLA-DQA1*02:01/DQB1*03:01（4条）， HLA-DPA1*01:03/DPB1*04:02（1条）。
使用化学合成的方式制备得到了上述表2中的7条多肽，制备的得到的多肽保存备用。其中 所得的多肽M6(SEQ ID No.11)、 M7(SEQ ID No.13)的HPLC(C18柱，220nm)检测结果参见图1、图2，纯度分别为97.39%和96.12%。
实施例二 抗原肽通过MHC-II 途径激活树突状细胞的结果
1、外周血 PBMC 的采集及处理
使用单核细胞采集系统对实施例一中的病人进行机采，得到病人外周血中的单核细胞。该病人含有HLA-DRB1*07:01和HLA-DQA1*02:01/DQB1*03:01分型。
a)用生理盐水 1:1 稀释单核细胞，加入人淋巴细胞分离液后离心，小心吸出单核细胞所在的白膜层到另一个洁净的离心管；
b)用生理盐水洗涤两次、用AIM-V细胞培养基洗涤一次后进行细胞计数，并取适量细胞冻存留标本。
2、树突状细胞（DC）培养及与新抗原的共孵育
a)将步骤1中获取的 PBMC 进行细胞培养，培养箱中孵育以使单核细胞贴壁；
b)将贴壁细胞分离出来进行培养，在培养基中加入重组人GM-CSF和重组人 IL-4以诱导单核细胞向DC细胞进行分化；
c)培养6天后，在细胞培养基中加入DC 促成熟因子 LPS、IFN-γ以诱导DC 成熟；
d)加入促成熟因子培养7天后，收获成熟的DC细胞，按照HLA分组将实施例1挑选出的抗原肽进行分组，设置共3组DC细胞，把HLA分组的各组抗原肽加入对应的各组DC细胞中，分别孵育4~6小时后冻存备用。
e)将孵育后的五组DC细胞回输给病人进行临床的治疗。在腋窝和腹股沟淋巴结引流区域进行皮下注射。回输分别在第1、2、4、6、8周进行，完成此5次注射为一个免疫疗程，一个免疫疗程后评估疗效，有效则进行下一个周期的治疗，无效则终止治疗。每次回输细胞量为3×108个细胞。 一个治疗周期后抽取病人的外周血进行效果的鉴定。
3、酶联免疫吸附试验（ELISPOT 法）
a)在上述经回输治疗后的病人外周血中分离得到T细胞，按照抗原肽对应的前述MHC分子基因型进行分组，分别加入不同的抗原肽；
b)孵育20小时后，使用去离子水洗涤细胞；
c)加入生物素标记的IFN-gamma抗体孵育1小时，孵育完成后同样进行细胞的洗涤；
d)加入酶标亲和素孵育1小时，赋予完成进行细胞的洗涤；
e)加入显色液并孵育，待斑点生长到适合的大小后终止显色并用软件进行ELISPOT 板斑点计数。
4、结果分析
通过ELISPOT板斑点计数，系统地分析了挑选的7条肿瘤新抗原多肽对患者T细胞的激活效果（参见图3，每个视野图左下方的阿拉伯数字就是该实验中的小孔中的斑点数），发现其中标号为M6（MGGMNRSPILTIITL）和M7（SSCMGGMNRSPILTI）的多肽具有最好的激活效果（肿瘤新抗原组实验小孔中的斑点数均值分别为250个和802个，而对照的正常多肽的斑点数均值为10和18），分别提高了2500%和4456%。M6和M7多肽为来源于TP53的R249S突变的多肽。
实验结果表明TP53-R249S体细胞突变和HLA-DRB1*07:01或HLA-DQA1* 02:01/DQB1*03:01基因型的肿瘤病人中，M6多肽MGGMNRSPILTIITL和M7多肽SSCMGGMNRSPILTI够显著激活人体特异性针对TP53突变肽的 T 细胞，以增加 T 细胞对存在TP53突变的癌细胞的杀伤能力。
此外，病人为肝癌术后行新抗原肽治疗，在经过一个周期的治疗后，病人整体情况较好，同等基线的肝癌患者肿瘤复发中位时间约为11个月，而使用包括M6多肽和M7多肽肿瘤新抗原肽治疗的本患者目前已超过25个月尚未复发，相应的ELISPOT分析结果也表明M6多肽和M7多肽在患者身上有很好的免疫激活效果。
综上所述，本发明的抗原肽已在人体实验中利用免疫实验验证了其个体化的有效性，从而弥补了新抗原肽在同时具有TP53-R249S体细胞突变和HLA-DRB1*07:01或HLA-DQA1*02:01/DQB1*03:01基因型的肿瘤病人中治疗中的空白；本发明的抗原肽基于MHC-II类分子，能够显著激活人体特异性针对TP53突变肽的 T 细胞，有效增强 T 细胞对存在TP53突变的癌细胞的杀伤能力。同时，本发明抗原肽也利于大规模的合成以便用于标准化个体化的肿瘤免疫治疗之中。
以上所述仅为本发明较佳的实施例，并非因此限制本发明的实施方式及保护范围，对于本领域技术人员而言，应当能够意识到凡运用本发明说明书及图示内容所作出的等同替换和显而易见的变化所得到的方案，均应当包含在本发明的保护范围内。
Claims (17)
1.针对肿瘤驱动基因TP53的R249S突变相关的肿瘤新抗原多肽，其特征在于：所述新抗原多肽的氨基酸序列为MGGMNRSPILTIITL(SEQ ID No.11)或者SSCMGGMNRSPILTI(SEQ IDNo.13)所示；
或者，为上述各多肽的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加至少一个氨基酸所得的功能相同或者相似的多肽。
2.根据权利要求1所述的肿瘤新抗原多肽，其特征在于：所述的功能相同或者相似的多肽是指能激活HLA分型为HLA-DRB1*07:01 或者HLA-DQA1*02:01/ DQB1*03:01且伴随有TP53的 R249S突变的患者产生特异性的针对具有TP53的 R249S突变肿瘤的T细胞的多肽。
3.权利要求1或2所述的肿瘤新抗原多肽在制备存在TP53高频突变的肿瘤风险干预和/或治疗剂中的应用，其特征在于：所述的TP53高频突变为R249S突变。
4.权利要求1或2所述的肿瘤新抗原多肽在制备可诱导产生特异性细胞毒性T细胞克隆的免疫活性调节剂中的应用。
5.一种经权利要求1或2所述的肿瘤新抗原多肽刺激而得的DC细胞，其特征在于：所述的刺激方式为DC细胞与肿瘤新抗原多肽进行共孵育。
6.根据权利要求5所述的DC细胞，其特征在于：所述的DC细胞为成熟的DC细胞。
7.根据权利要求5所述的DC细胞，其特征在于：所述的DC细胞为TP53发生 R249S突变的患者的离体DC细胞。
8.根据权利要求5述的DC细胞，其特征在于：所述的DC细胞为含有人类白细胞的HLA分型为HLA-DQA1*02:01/DQB1*03:01的个体的离体DC细胞。
9.权利要求1或2所述的肿瘤新抗原多肽或权利要求5～8任一项所述的DC细胞在制备伴随TP53发生 R249S突变的肿瘤的免疫治疗药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述的肿瘤为肝癌、肺癌、乳腺癌、食管癌、胰腺癌、膀胱癌、肠癌、胃癌或卵巢癌中的至少一种。
11.根据权利要求9或10所述的应用，其特征在于：所述的肿瘤为含有人类白细胞的HLA分型为HLA-DRB1*07:01 或者HLA-DQA1*02:01/ DQB1*03:01的患者所患肿瘤。
12.权利要求1或2所述的肿瘤新抗原多肽的抗体。
13.根据权利要求12所述的抗体，其特征在于：所述的抗体为多克隆抗体或单克隆抗体。
14.根据权利要求12所述的抗体，其特征在于：所述的抗体还与偶联部分形成偶联物；所述偶联部分为选自放射性核素、药物、毒素、细胞因子、酶、荧光素、载体蛋白或生物素中的至少一种。
15.编码权利要求1或2所述的肿瘤新抗原多肽的基因。
16.装载有权利要求15所述的基因的载体。
17.根据权利要求16所述的载体，其特征在于：所述的载体为质粒载体、腺病毒载体、慢病毒载体或腺相关病毒载体中的至少一种。
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