CN116966183A - 一种药物组合物及其在制备抗前列腺癌药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种药物组合物及其在制备抗前列腺癌药物中的应用。所述药物组合物，包括如下物质作为活性成分：盐酸千金藤碱与多西他赛；所述前列腺癌为去势抵抗性前列腺癌。本发明方案首次巧妙的将两者进行组合，促进了多西他赛对去势抵抗性前列腺癌细胞增殖的抑制作用，提高其对药物的敏感性，设计使用盐酸千金藤碱与多西他赛联用可在治疗去势抵抗性前列腺癌中达到抗耐药、增效减毒的作用，证实了盐酸千金藤碱和多西他赛药物联用在体内体外比单药给药更显著抑制肿瘤的作用。本发明还提供了上述药物组合物在制备抗前列腺癌药物中的应用。

Description

一种药物组合物及其在制备抗前列腺癌药物中的应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种药物组合物在制备抗前列腺癌药物中的应用。

背景技术

多西他赛(Docetaxel)属于紫杉醇类化疗药物，目前被适用于先期化疗失败的晚期或转移性乳腺癌的治疗，使用以顺铂为主的化疗失败的晚期或转移性非小细胞肺癌的治疗等。但由于多药耐药性(MDR)，导致许多患者在治疗后期对多西他赛药物产生耐药性。有研究表明多药耐药性的产生与一组ATP结合转运蛋白有关，如P糖蛋白(P-gp)，多药耐药蛋白7(MRP7)，多药耐药蛋白1(MRP1)等。其中p-gp和MRP1的过度表达，表达导致细胞内药物浓度降低，从而降低了广谱抗肿瘤药物的细胞毒性，这可能是导致多西他赛产生MDR的原因。

千金藤碱(Cepharanthine，CEP)是从防己科植物头花千金藤中提出来的单体化合物，属于一类生物碱，其被日本卫生部批准用于临床上治疗放疗导致的白细胞减少症、斑秃和全秃。已有大量研究表明千金藤碱还具有抗病毒、抗炎、抗肿瘤等多种活性，且尚未发现其存在明显的安全问题，副作用报道甚少。一般地，千金藤碱会被制备成粉末，片剂，针剂的形式用于治疗。近年来，越来越多的研究表明千金藤碱能够抑制P-gp转运功能，所以对众多高表达P-gp的MDR细胞的抗药性起到抑制作用，同时，还能通过抑制P-gp的表达，增加18F-脱氧葡萄糖、紫杉醇等药物在细胞内的积聚和逆转MRP7介导的MDR，提高抗癌药物的敏感性并与化疗药物协同治疗肿瘤。

然而，迄今为止，尚未有盐酸千金藤碱与多西他赛联用在抗癌药物中的研究。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种药物组合物，在治疗去势抵抗性前列腺癌中达到抗耐药、增效减毒的作用，在治疗去势抵抗性前列腺癌中具有良好的应用前景。

本发明还提出上述药物组合物在制备治疗抗前列腺癌药物中的应用。

根据本发明的一个方面，提出了一种药物组合物，所述药物组合物的活性成分包括盐酸千金藤碱和多西他赛。

根据本发明第一方面实施例的，至少具有如下有益效果：

1)至今，盐酸千金藤碱与多西他赛联用、联用剂量和药物比例尚未见有报道。本发明方案首次巧妙的将两者进行组合，设计使用盐酸千金藤碱与多西他赛可达到显著治疗去势抵抗性前列腺癌的效果，并且在治疗去势抵抗性前列腺癌中达到抗耐药、增效减毒的作用，克服了多西他赛单用产生耐药性的难题。

2)多西他赛具有加强微管蛋白聚合作用和抑制微管解聚作用，导致形成稳定的非功能性微管束，破坏肿瘤细胞的有丝分裂，因而达到抑制癌细胞生长的作用；盐酸千金藤碱不仅具有较好的诱导癌细胞死亡的作用，且对癌细胞的增殖与转移也有抑制作用，本发明证实了盐酸千金藤碱和多西他赛药物联用在体内体外比单药给药更显著抑制肿瘤的作用。

3)本发明促进了目前所使用的一线化学治疗标准用药——多西他赛对去势抵抗性前列腺癌细胞增殖的抑制作用，提高其对药物的敏感性。本发明发现盐酸千金藤碱与多西他赛联合用药在体内外都具有良好的抑癌效果，提供了更多的治疗去势抵抗性前列腺癌的方案，且两种联用药物来源广，经济有效。

根据本发明的一些实施方式，盐酸千金藤碱和多西他赛的摩尔比为1：(1～15)。如1：2.5、1：5、1：7或1：10。

根据本发明的一些实施方式，盐酸千金藤碱和多西他赛的摩尔比为1：1.5～10。

根据本发明的一些实施方式，盐酸千金藤碱和多西他赛的摩尔比为1：2.5～1.7。

根据本发明的一些实施方式，所述药物组合物在用药时，盐酸千金藤碱的浓度为1～1000μmol/L。如10μmol/L、20μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、500μmol/L等。

根据本发明的一些实施方式，所述药物组合物在用药时，多西他赛的浓度为1～1000μmol/L。

根据本发明的一些实施方式，所述盐酸千金藤碱的剂量为1～1000mg/kg。如约为10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg、500mg/kg等。

根据本发明的一些实施方式，所述多西他赛的剂量为1～1000mg/kg。

根据本发明的一些实施方式，所述剂量按照单位药物在生物体治疗的剂量换算成动物体内剂量。

根据本发明的一些实施方式，所述生物体包括人或其他哺乳动物。

根据本发明的一些实施方式，所述药物组合物在对动物用药时，盐酸千金藤碱与多西他赛的剂量比为1～25：1。如约为1：4、1：10、1：16或1：20。

根据本发明的一些实施方式，所述药物组合物在对动物用药时，盐酸千金藤碱与多西他赛的剂量比为1～10：1。

优选地，所述药物组合物在对动物用药时，盐酸千金藤碱与多西他赛的剂量比约为4：1。

根据本发明的第二个方面，提出了上述药物组合物在制备治疗抗前列腺癌药物中的应用。

根据本发明第二个方面实施例的，至少具有如下有益效果：

本发明中盐酸千金藤碱属于生物碱的半合成衍生物，其单体千金藤碱作为口服药物临床上用于治疗白细胞减少症、斑秃和全秃。本发明具体实施方式的相关结果表明盐酸千金藤碱具有体内体外抗前列腺癌的作用，且与多西他赛联用可促进多西他赛对去势抵抗性前列腺癌细胞增殖的抑制作用，提高其对药物的敏感性，抵抗癌细胞对药物的耐药性。因此，盐酸千金藤碱与多西他赛联合用药在抗前列腺癌药物制备领域具有良好的应用前景。

根据本发明的一些实施方式，所述前列腺癌为去势低抗性前列腺癌。

根据本发明的一些实施方式，所述抗前列腺癌药物的使用方法包括：分别将多西他赛和盐酸千金藤碱溶解稀释后按比例使用。

根据本发明的一些实施方式，所述抗前列腺癌药物的使用方法还包括：多西他赛溶解稀释后单独使用。

根据本发明的一些实施方式，所述抗前列腺癌的药物组合物还包括药用辅料。

根据本发明的一些实施方式，所述药用辅料包含溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、稀释剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂以及释放阻滞剂中的至少一种。

根据本发明的一些实施方式，所述稀释剂选自乳糖、蔗糖、甘露醇、玉米淀粉、马铃薯淀粉、磷酸钙、柠檬酸钙或结晶纤维素中的至少一种。

根据本发明的一些实施方式，所述崩解剂选自玉米淀粉、马铃薯淀粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲纤维素钠、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙或藻酸中的至少一种。

根据本发明的一些实施方式，所述润滑剂选自微粉硅胶、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸、滑石粉或无水硅胶中的至少一种。

根据本发明的一些实施方式，所述粘合剂选自阿拉伯胶、明胶、糊精、羟丙基纤维素、甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮中的至少一种。

根据本发明的一些实施方式，所述矫味剂选自阿斯巴甜、甜菊甙、蔗糖、麦芽糖醇或柠檬酸中的至少一种。

根据本发明的一些实施方式，所述助悬剂选自阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟甲基纤维素或硬脂酸铝凝胶中的至少一种。

根据本发明的一些实施方式，所述表面活性剂选自卵磷脂、山梨糖醇酐单油酸酯或单硬脂酸甘油酯中的至少一种。

根据本发明的一些实施方式，所述防腐剂选自对羟苯甲酸甲酯或对羟苯甲酸丙酯中的至少一种。

根据本发明的一些实施方式，所述药物剂型为固体、半固体或液体的形式。

根据本发明的一些实施方式，所述药物剂型为水溶液、非水溶液、混悬液或膏体。

根据本发明的一些实施方式，所述药物组合物的剂型包括注射液、注射用冻干粉针、干混悬剂、干浸膏剂、植入剂、栓塞剂、胶囊剂、片剂、丸剂和口服液。

根据本发明的一些实施方式，所述药物组合物还可以包括药物载体。

根据本发明的一些实施方式，所述药物载体包括微囊、微球、纳米粒和脂质体。

若无特殊说明，本发明的“约”实际表示的含义是允许误差在±2％的范围内，例如约100实际是100±2％×100。

本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。

附图说明

本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：

图1为本发明实施例中药物组合物中两种活性成分在1：2.5时的浓度-细胞存活率关系曲线拟合图；

图2为本发明实施例中药物组合物中两种活性成分在1：5时的浓度-细胞存活率关系曲线拟合图；

图3为本发明实施例中药物组合物中两种活性成分在1：7时的浓度-细胞存活率关系曲线拟合图；

图4为本发明实施例中药物组合物中两种活性成分在1：10时的浓度-细胞存活率关系曲线拟合图；

图5为本发明对比例1活性成分的浓度-细胞存活率关系曲线拟合图；

图6为本发明对比例2活性成分的浓度-细胞存活率关系曲线拟合图；

图7为本发明实施例中药物组合物中两种活性成分在1：2.5时的联合指数分析图；

图8为本发明实施例中药物组合物中两种活性成分在1：5时的联合指数分析图；

图9为本发明实施例中药物组合物中两种活性成分在1：7时的联合指数分析图；

图10为本发明实施例中药物组合物中两种活性成分在1：10时的联合指数分析图；

图11为本发明实施例和对比例1～2药物成分对小鼠体内抑制肿瘤生长结果图(图中***代表p<0.001)；

图12为剥取的施加本发明实施例和对比例1～2药物成分10天前列腺癌细胞小鼠移植瘤照片(图中同一横排对应的为同组内的三只小鼠的移植瘤)。

具体实施方式

以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到的试剂和材料。

本发明的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示意性实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

本发明实施例和对比例中所使用的多西他赛与盐酸千金碱均为临床上已批准使用的药物。

实施例

本实施例提供了一种药物组合物，该药物组合物的活性成分由多西他赛和盐酸千金藤碱组成。

本实施例还提供了一种药物组合物的制备方法，具体过程为：

用电子天平称取多西他赛，加入到二甲亚砜(DMSO)中溶解，配成浓度为100mM的母液，后用DMSO稀释成不同的浓度。用电子天平称取盐酸千金藤碱粉末，加入到DMSO中溶解，配成浓度为100mM的母液，后用DMSO稀释成不同的浓度。

本实施例还提供了将上述药物组合物作用于前列腺癌22RV1细胞以验证其在体外对前列腺癌的抑制作用。具体过程为：

用胰酶消化前列腺癌22RV1细胞(市购所得)，将细胞以4000个/孔接种到96孔板中，培养过夜贴壁后，去除培养液，以不同浓度的千金藤碱(m＝1～1000μM)和不同浓度的多西他赛(n＝1～1000μM)分别按照摩尔比1：2.5，1:5，1:7，1:10的比例混合(具体参照表1，表1中列举的为不同混合比例药物组合物中两种药物各自的终浓度)，取混合后的溶液100μL加入到96孔板中，培养24h后，用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞的存活率。培养24h后加入10μLMTT，37℃孵育4h后吸去含有MTT的培养液，加入100μLDMSO，在摇床上室温反应10min，在570nm处测定吸光值，后用GraphPad Prism 8绘制药物浓度对应细胞存活率的拟合曲线。

其中，表1n(1:2.5)表示盐酸千金藤碱和多西他赛的摩尔比为1:2.5，其中盐酸千金藤碱的浓度为1.25μM，多西他赛的浓度为3.125μM，以此类推，通过调配体积，最终符合摩尔比。

表1不同混合比例药物组合物中两种药物各自的终浓度

对比例1

本对比例提供了多西他赛在制备治疗前列腺癌药物中的应用，具体过程为：

用电子天平称取多西他赛，加入到DMSO中溶解，配成浓度为100mM的母液，后用DMSO稀释成不同的浓度。

本对比例还提供了将多西他赛作用于前列腺癌22RV1细胞以验证其在体外对前列腺癌的抑制作用。具体过程为：

用四甲基偶氮唑蓝(MTT)的方法检测多西他赛对前列腺癌22RV1细胞24h的毒性，并且计算得到多西他赛对前列腺癌细胞的IC₅₀值。具体方法：将前列腺癌22RV1细胞用胰酶消化后接种到96孔板中，每孔接种细胞4000个，过夜培养待贴壁后，将0-200μM的多西他赛加96孔板中，培养24h后加入10μLMTT，37℃孵育4h后吸去含有MTT的培养液，加入100μLDMSO，在摇床上室温反应10min，在570nm处测定吸光值，后用GraphPad Prism 8绘制药物浓度对应细胞存活率的拟合曲线。

对比例2

本对比例提供了盐酸千金藤碱在制备治疗前列腺癌药物中的应用，具体过程为：

用电子天平称取盐酸千金藤碱粉末，加入到DMSO中溶解，配成浓度为100mM的母液，后用DMSO稀释成不同的浓度。

本对比例还提供了将盐酸千金藤碱作用于前列腺癌22RV1细胞以验证其在体外对前列腺癌的抑制作用。具体过程为：

用四甲基偶氮唑蓝(MTT)的方法检测盐酸千金藤碱对前列腺癌22RV1细胞24h的毒性，并且计算得到盐酸千金藤碱对前列腺癌细胞的IC₅₀值。具体方法：将前列腺癌22RV1细胞用胰酶消化后接种到96孔板中，每孔接种细胞4000个，过夜培养待贴壁后，将100μL0-40μM的盐酸千金藤碱加到96孔板中，培养24h后加入10μLMTT，37℃孵育4h后吸去含有MTT的培养液，加入100μLDMSO，在摇床上室温反应10min，在570nm处测定吸光值，后用GraphPad Prism8绘制药物浓度对应细胞存活率的拟合曲线。

实施例和对比例1～2中绘制得的到的药物浓度与细胞存活率拟合曲线如图1～6所示。从图1～4中可以看出，图5和6的结果显示盐酸千金藤碱和多西他赛对前列腺癌22RV1细胞的毒性具有浓度依赖性。

用CompuSyn软件计算分析实施例中药物组合物中两种活性成分不同比例下的联合指数，结果如图7～10所示。从图7～10可以看出，在一定区间内药物浓度对应细胞存活率的拟合曲线药物联用指数(CI值)小于1，表明千金藤碱与多西他赛联用具有协同抗肿瘤的效果，且在1:2.5、1:5和1:7的摩尔比时细胞的存活被显著抑制，表明两者具有强协同作用。

测试例

进一步地，将上述实施例中药物组合物或对比例1～2中的药物单体作用于动物模型小鼠以验证其在体内对前列腺癌的抑制作用。具体过程为：

在裸鼠肿瘤形成实验中，雄性BALB/c裸鼠(4-6周龄)购自中国北京维通利华公司，置于无特定病原体(SPF)环境中。将悬浮于200μL基质凝胶/PBS(7.8mg/mL)中的前列腺癌22RV1细胞(5×10⁶)皮下注射到小鼠腹股沟部，构建人前列腺癌裸鼠移植瘤模型。当小鼠体内肿瘤体积生长到100mm³时随机分为4组(对照组5只，其余每组3只)。

每组处理方案：①对照组，生理盐水200μL，i.p.，qd；②单用多西他赛组，10mg/kg(溶于200μL生理盐水)，i.g.，每隔三天给药一次；③单用盐酸千金藤碱组，40mg/kg(溶于200μL生理盐水)，i.p.，qd；④联合用药组：多西他赛10mg/kg(溶于200μL生理盐水)，i.g.每隔三天给药一次+盐酸千金藤碱40mg/kg(溶于200μL生理盐水)，i.p.，qd。每两天测量一次小鼠的体重以及肿瘤大小。在第10天时采用颈椎脱臼法处死小鼠收集移植瘤和肝脏，称重后用4％多聚甲醛固定进行免疫组化分析。发现联合用药组在第6天以后的抑制肿瘤的效果比药物单用效果更好。药物组合物方案在第6天以后抑制肿瘤效果比药物单体组有显著提升，如图11～12所示。

根据上述结果可以看出，盐酸千金藤碱和多西他赛单用对去势抵抗性前列腺癌细胞生长均具有一定的影响，通过设计并使用临床治疗常用的多西他赛与盐酸千金藤碱联合用药，证明了药物联用在体外协同抑制去势抵抗性前列腺癌细胞生长，在体内外均具有抑制去势抵抗性前列腺癌的作用，并且两药物联用在体内外抑制肿瘤效果更好，能够显著抑制癌细胞生长，在治疗去势抵抗性前列腺癌中达到抗耐药、增效减毒的作用。

用CompuSyn软件分析两者的联用治疗癌症联合指数，优选盐酸千金藤碱与多西他赛1:2.5、1:5和1:7的摩尔比时在体外抑制癌细胞；根据体外实验的联合指数推算出加药量，以多西他赛每三天给药一次，盐酸千金碱每天给药一次的方式给小鼠联合用药，根据测量小鼠肿瘤大小，体重，各项脏器的异常情况，发现盐酸千金藤碱与多西他赛联合用药的确有比多西他赛单用药物更好的治疗效果，并对重要组织器官无副作用。在体外验证了盐酸千金藤碱与多西他赛联用具有协同抗癌作用后，进一步在裸鼠体内也得到了进一步验证，与此同时，联合用药对动物模型的脏器无副作用，由此表明，本发明方案的药物组合物在制备治疗前列腺癌药物中具有良好的应用前景。

上面结合附图对本发明实施例作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

Claims (10)

1.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的活性成分包括盐酸千金藤碱和多西他赛。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，盐酸千金藤碱和多西他赛的摩尔比为1：(1～15)。

3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于，盐酸千金藤碱和多西他赛的摩尔比为1：(1.5～1.7)。

4.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物在用药时，所述盐酸千金藤碱联合用药的浓度为1～1000μmol/L；优选地，所述药物组合物在用药时，所述多西他赛的浓度为1～1000μmol/L。

5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述盐酸千金藤碱的剂量为1～1000mg/kg；优选地，所述多西他赛的剂量为1～1000mg/kg。

6.根据权利要求4或5所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物在对动物用药时，所述盐酸千金藤碱与多西他赛的剂量比为1～25：1。

7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物在对动物用药时，所述盐酸千金藤碱与多西他赛的剂量比为1～4：1。

8.一种如权利要求1～7任一项所述的药物组合物在制备抗前列腺癌药物中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述前列腺癌为去势低抗性前列腺癌。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述抗前列腺癌药物的使用方法包括：分别将所述多西他赛和盐酸千金藤碱溶解稀释后按比例使用。