CN116904617A

CN116904617A - 一种斑疹伤寒核酸检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒

Info

Publication number: CN116904617A
Application number: CN202210533343.9A
Authority: CN
Inventors: 肖利力; 贾欣月; 刘翌; 康洁; 金鑫浩; 蔡亦梅; 张瑜; 高静; 范东雨; 任鲁风
Original assignee: Beijing Linke Biotechnology Co ltd; Beijing Integrated Biosystems Co ltd
Current assignee: Beijing Linke Biotechnology Co ltd; Beijing Integrated Biosystems Co ltd
Priority date: 2022-05-13
Filing date: 2022-05-13
Publication date: 2023-10-20

Abstract

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种斑疹伤寒核酸检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒。采用本发明提供的引物探针组合物检测斑疹伤寒，具有较好的灵敏度和准确度，扩增效率高，且操作简便，快速省时。本发明利用一体化芯片上微流控的方式集成了核酸提取、纯化、扩增和检测，解决病原体快速检测的问题，实现“样本进‑结果出”的POCT检测方案，取样后直接加入设备，纯化加扩增，60分钟内出结果。

Description

一种斑疹伤寒核酸检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种斑疹伤寒核酸检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒。

背景技术

斑疹伤寒(Typhus)，是由立克次体引起的传染病，可分为：流行性斑疹伤寒、丛林斑疹伤寒(恙虫病)与地方性斑疹伤寒(鼠型斑疹伤寒)。症状包括发烧、头痛和皮疹。症状通常在接触病原体后一至两周出现。

斑疹伤寒是一种由螨虫传播的传染病，该病的一个特征是患者表现出非特异性症状，包括发热、头痛、肌痛、咳嗽和腹痛等，这些症状与其他全身感染的症状无法区分。焦痂的存在有助于诊断这种疾病；然而，它仅在某些患者中发现。虽然斑疹伤寒的临床病程通常较轻且具有自限性，但严重时延误治疗可导致肾功能衰竭、心肌炎、脑膜脑炎等并发症，甚至死亡。由于斑疹伤寒是流行地区急性未分化发热性疾病(AUFI)的最常见原因之一，因此早期明确的诊断对于提供适当的治疗和收集准确的流行病学数据至关重要。

斑疹伤寒诊断主要依靠血清学检测，尤其是间接免疫荧光检测(IFA)，通过对血清中抗体滴度增加4倍和/或单个血清样本中IgM滴度阳性来识别疾病。然而，这些血清学检测需要血清样本和良好的技术专业知识，即便如此，它们也经常在疾病的早期阶段返回假阴性。此外，不同斑疹伤寒菌株的再感染在流行地区并不少见，并且再感染的患者有时可能表现出高滴度的IgG和IgM，因此血清学检测无法区分这些患者的急性感染和既往感染。在此背景下，实时荧光定量PCR等分子技术可用于确认血清学结果

对于斑疹伤寒的核酸检测，市场现有检测系统或方法通常需要在检测前进行样品处理，本申请人基于该问题，经过数年研发，与在先申请CN202110057507.0中公开了一种新型现场化快速核酸检测设备CarryOn P1000Q，该设备为“手持全自动封闭式核酸qPCR分析系统”，可在60分钟内完成新冠病毒的现场自动化核酸检测，能够实现“样品进，结果出”的快速检测。本申请即在该技术的基础上，进一步研发出的，能够更好的配合该设备的试剂类发明，即斑疹伤寒检测的微流控芯片试剂盒。

现有的检测试剂盒及方法较操作时间长，且操作步骤繁琐，因此，亟需提供一种灵敏度高、特异性强、覆盖面广、操作简便、省时且节约成本的斑疹伤寒检测试剂盒及其使用方法。

发明内容

为了解决现有技术中的上述问题，本申请提供了一种斑疹伤寒核酸检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒。采用本发明所述的引物探针检测斑疹伤寒，具有较好的灵敏度和准确度，扩增效率高，且操作简便，快速省时。

为了实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：

一方面，本发明提供了一种检测斑疹伤寒的引物探针组合物，所述的引物探针组合物包括检测丛林斑疹伤寒Scrub Typhus的引物探针组合物、检测地方性斑疹伤寒MurineTyphus的引物探针组合物和检测内参的引物探针组合物。

具体地，所述的检测丛林斑疹伤寒Scrub Typhus的引物探针组合物为ScrubTyphus引物探针组合物；

所述的检测地方性斑疹伤寒Murine Typhus的引物探针组合物为Murine Typhus引物探针组合物；

具体地，所述的检测内参的引物探针组合物为IPC引物探针组合物。

进一步具体地，

(1)所述的Scrub Typhus引物探针组合物为：

F(SEQ ID NO:1)：5'-AAGCCATTAGTATTGATTGCTGA-3'；

R(SEQ ID NO:2)：5'-AAGGCACCTGGTTTTGG-3'；

P(SEQ ID NO:3)：5'-ATATCAATGCAGTAAGAGCTTCTCCGTC-3'；

(2)所述的Murine Typhus引物探针组合物为：

F(SEQ ID NO:4)：5'-AATGTCTGAGAGTTATAAAACGCAA-3'；

R(SEQ ID NO:5)：5'-TGATTGAGCATAAAACTGCCC-3'；

P(SEQ ID NO:6)：5'-CTATTATGAGGTGACGTAGCTGGCATACG-3'；

(3)所述的IPC引物探针组合物为：

F(SEQ ID NO:7)：5'-AGTTGCAGTGTAACCGTCATGTA-3'；

R(SEQ ID NO:8)：5'-TCGACGAGACTCTGCTGTTAA-3'；

P(SEQ ID NO:9)：5'-CAGTAATCTGCGTCGCACGTGTGCA-3'。

具体地，所述的Scrub Typhus引物探针组合物用于检测丛林斑疹伤寒ScrubTyphus的eae基因。

具体地，所述的Murine Typhus引物探针组合物用于检测地方性斑疹伤寒MurineTyphus的CRISPR位点基因序列。

具体地，所述探针的5'端标记有荧光报告基团，所述探针的3'端标记有淬灭基团；所述荧光报告基团为CY3、CY5、CY5.5、FAM、HEX、VIC、JOE或ROX中的一种或多种，所述淬灭基团为荧光淬灭基团。

进一步具体地，所述的检测丛林斑疹伤寒Scrub Typhus的探针用FAM标记，所述的检测地方性斑疹伤寒Murine Typhus的探针用HEX标记，所述的检测内参IPC的探针用CY5标记。

另一方面，本发明提供了上述引物探针组合物在制备检测斑疹伤寒产品中的应用。

具体地，所述的产品包括但不限于独立试剂、芯片或试剂盒。

又一方面，本发明提供了一种检测斑疹伤寒的产品，所述的产品包括上述引物探针组合物。

具体地，所述的产品还包括纯化试剂、冻干IPC质控品和冻干试剂。

进一步具体地，所述的纯化试剂包括裂解液、洗脱液和磁珠，所述的裂解液包括盐酸胍、醋酸钠和Triton X-100，所述的洗脱液包括Tris-HCl，所述的裂解液和洗脱液的体积比为1:2-2.5，所述的磁珠为干化磁珠。

进一步具体地，所述的冻干IPC质控品的序列为SEQ ID NO:10。

进一步具体地，所述的冻干IPC质控品是DNA质粒。

进一步具体地，所述的冻干IPC质控品的冻干体系包括甘露醇、海藻糖、2-羟丙基-β-环糊精、牛血清白蛋白、消泡剂、Tris-HCl pH8.0、NaCl、Tween20。

进一步具体地，所述的冻干IPC质控品以冻干球的形式封装在一体化微流控芯片中。

进一步具体地，所述的冻干反应试剂包括脂多糖和羟丙基甲基纤维素。

进一步具体地，所述的冻干反应试剂还包括甘露醇、海藻糖、普鲁兰多糖、2-羟丙基-β-环糊精、脱氧核糖核酸聚合酶、牛血清白蛋白、消泡剂、脱氧核苷三磷酸dNTPs、KCl、Tris-HCl pH9.0、MgCl₂、Tween20。

又一方面，本发明还提供了一种检测斑疹伤寒的微流控芯片试剂盒，所述的试剂盒包括上述引物探针组合物。

进一步具体地，所述的裂解液包括6M盐酸胍、0.4M pH 4.7醋酸钠和2％Triton X-100，所述的洗脱液包括10mM pH8.5 Tris-HCl。

进一步具体地，所述的冻干IPC质控品的序列为SEQ ID NO:10。

进一步具体地，所述的冻干IPC质控品是DNA质粒。

进一步具体地，所述的冻干试剂包括脂多糖和羟丙基甲基纤维素。

进一步具体地，所述的冻干试剂还包括甘露醇、海藻糖、普鲁兰多糖、2-羟丙基-β-环糊精、脱氧核糖核酸聚合酶、牛血清白蛋白、消泡剂、脱氧核苷三磷酸dNTPs、KCl、Tris-HCl pH9.0、MgCl₂、Tween20。

具体地，所述的试剂盒在一体化芯片上完成样本的核酸提取、纯化、扩增和检测。

具体地，所述的微流控芯片试剂盒可用于CarryOn P1000Q快速核酸检测设备。

又一方面，本发明提供了上述引物探针组合物、产品或试剂盒在检测斑疹伤寒中的应用。

又一方面，本发明提供了一种检测斑疹伤寒的方法，所述的方法为非疾病诊断和治疗方法，所述的方法包括利用上述引物探针组合物、产品或试剂盒对待测样本中斑疹伤寒进行检测。

具体地，所述的方法包括以下步骤：

(1)提取样本的DNA并采用上述纯化试剂进行纯化；

(2)利用上述引物探针组合物扩增步骤(1)提取并纯化的样本DNA；

(3)对扩增结果进行分析。

进一步具体地，上述步骤采用CarryOn P1000Q快速核酸检测设备，在微流控一体化芯片上进行。

与现有技术相比，本发明提供的试剂盒具有如下有益效果：

(1)采用本发明提供的引物探针组合物同时检测丛林斑疹伤寒Scrub Typhus、地方性斑疹伤寒Murine Typhus，具有较好的灵敏度和准确度，扩增效率高，且操作简便，快速省时。

(2)利用一体化芯片上微流控的方式解决病原体快速检测的问题，实现“样本进-结果出”的POCT检测方案，取样后直接加入设备，集成核酸的提取、纯化、扩增和检测，60分钟内出结果。

附图说明

图1为灵敏度检测结果图。

图2为试剂盒重复性检测结果图。

图3为特异性检测结果曲线图，其中，A为人基因组检测结果，B为大肠杆菌基因组检测结果，C为炭疽杆菌基因组检测结果。

图4为微流控芯片示意图。

具体实施方式

下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本发明，仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例中未注明具体技术或条件者，均按照本领域内的文献所描述的技术或条件(如参考J.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译的《分子克隆实验指南》，第三版，科学出版社)或者按照产品说明书进行。

1.试剂及仪器

(1)本申请所用的试剂信息详见下表1。

表1试剂及厂家

(2)本申请所用的仪器信息详见下表2。

表2仪器

仪器	厂家	型号
			万分之一天平	梅特勒-托利多公司	AL104
qPCR仪	Thermo Fisher Scientific	ABI 7500
			点动小精灵	杭州米欧仪器有限公司	MIX-28+
手掌型离心机	江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司	LX-100
			冷冻干燥机	四环科仪(天津)科技有限公司	LGJ-20

本申请所用的PCR反应装置详见专利202110057507.0，用于核酸检测的芯片装置详见202110055537.8。

实施例1.一种检测斑疹伤寒的引物探针组合物

所述的引物探针组合物包括检测丛林斑疹伤寒Scrub Typhus的引物探针组合物、检测地方性斑疹伤寒Murine Typhus的引物探针组合物和检测内参的引物探针组合物。

所述的检测丛林斑疹伤寒Scrub Typhus的引物探针组合物为Scrub Typhus引物探针组合物；

所述的检测内参的引物探针组合物为IPC引物探针组合物。

(1)所述的Scrub Typhus引物探针组合物为：

F(SEQ ID NO:1)：5'-AAGCCATTAGTATTGATTGCTGA-3'；

R(SEQ ID NO:2)：5'-AAGGCACCTGGTTTTGG-3'；

P(SEQ ID NO:3)：5'-ATATCAATGCAGTAAGAGCTTCTCCGTC-3'；

(2)所述的Murine Typhus引物探针组合物为：

F(SEQ ID NO:4)：5'-AATGTCTGAGAGTTATAAAACGCAA-3'；

R(SEQ ID NO:5)：5'-TGATTGAGCATAAAACTGCCC-3'；

P(SEQ ID NO:6)：5'-CTATTATGAGGTGACGTAGCTGGCATACG-3'；

(3)所述的IPC引物探针组合物为：

F(SEQ ID NO:7)：5'-AGTTGCAGTGTAACCGTCATGTA-3'；

R(SEQ ID NO:8)：5'-TCGACGAGACTCTGCTGTTAA-3'；

P(SEQ ID NO:9)：5'-CAGTAATCTGCGTCGCACGTGTGCA-3'。

本申请所述的斑疹伤寒的引物探针组合物用于检测斑疹伤寒groEL基因或Glycosyltransferase基因。其中，所述的Scrub Typhus引物探针组合物用于检测斑疹伤寒的groEL基因；所述的Murine Typhus引物探针组合物用于检测斑疹伤寒的Glycosyltransferase基因。

实施例2一种检测斑疹伤寒的微流控芯片试剂盒

(1)包括实施例1所述的引物探针组合物，各引物探针浓度均为0.2μM。

(2)还包括纯化试剂、冻干IPC质控品和冻干试剂。

1)所述的纯化试剂包括裂解液400μL和洗脱液850μL，磁珠15μL，所述的裂解液包括6M盐酸胍、0.4M pH4.7醋酸钠和2％Triton X-100，所述的洗脱液包括10mM pH8.5 Tris-HCl，将纯化试剂加入芯片中的加样层，所述的磁珠干化方法见专利202110222434.6。

2)所述冻干反应试剂体系如下表3所示。

表3冻干试剂体系

将上述表3试剂加入硅胶模具中，按照下表5的冷冻干燥机冻干程序进行冻干。

3)所述冻干IPC质控品包括IPC质粒制备和冻干试剂体系。

委托百力格生物技术有限公司全基因合成IPC序列(SEQ ID NO：10)，连接到pUC18载体上，得到包含IPC序列(SEQ ID NO：10)的质粒。

表4冻干IPC试剂体系

成分
		DNA质粒	100copies/μL
甘露醇Mannitol	10％
		海藻糖Trehalose	10％
2-羟丙基-β-环糊精	0.5％
		牛血清白蛋白BSA	1mg/mL
消泡剂SE-15	0.036％
		三羟甲基氨基甲烷Tris-HCl pH8.0	10mM
氯化钠NaCl	50mM
		吐温20Tween20	0.05％

将上述表4试剂每5μL滴到液氮中制成冻干球，放入西林瓶中按照下表5的冷冻干燥机冻干程序进行冻干。

表5冻干程序

步骤	目标温度(℃)	升温分钟	目标真空(Pa)	恒温小时	恒温分钟
						1	-50	0	0	3	0
2	-40	20	13	1	30
						3	-36	30	13	3	30
4	-30	20	13	3	30
						5	-10	30	13	1	30
6	0	20	13	1	30
						7	5	20	13	1	0
8	10	30	13	1	30
						9	20	20	13	3	30

实施例3斑疹伤寒试剂盒的使用方法

采用CarryOn P1000Q进行本申请所述的斑疹伤寒的检测，具体检测步骤如下表6所示。

表6

实时荧光定量PCR反应程序为：55℃10min；95℃1min；(95℃10s，60℃20s)，45cycles。

实验例1灵敏度检测

委托百力格生物技术有限公司全基因合成丛林斑疹伤寒Scrub Typhus的groEL基因和地方性斑疹伤寒Murine Typhus的Glycosyltransferase基因序列，分别连接到pUC18载体上，分别得到包含丛林斑疹伤寒Scrub Typhus的groEL基因(Genbank:AP008981.1:255583-256082，SEQ ID NO:11)和包含地方性斑疹伤寒Murine Typhus的Glycosyltransferase位点基因序列(Genbank:CP003398.1:415800-416300，SEQ ID NO:12)的质粒，调整其浓度为1×10⁶copies、1×10⁵copies、1×10⁴copies、1×10³copies、1×10²copies，每个反应加入200μL，按照上述实施例1-3的体系和步骤对提取的核酸样品进行检测，其检测结果如下表7所示，检测曲线如图1所示。

表7

由上表7可知，本申请所述的引物组合物及其试剂盒具有较好的灵敏度，可对1×10²copies的样品进行检测。

实验例2准确性检测

委托百力格生物技术有限公司全基因合成丛林斑疹伤寒Scrub Typhus的groEL基因和地方性斑疹伤寒Murine Typhus的Glycosyltransferase基因序列，分别连接到pUC18载体上，分别得到包含丛林斑疹伤寒Scrub Typhus的groEL基因(Genbank:AP008981.1:255583-256082，SEQ ID NO:11)和包含地方性斑疹伤寒Murine Typhus的Glycosyltransferase位点基因序列(Genbank:CP003398.1:415800-416300，SEQ ID NO:12)的质粒，调整其浓度为1×10²copies，每个反应加入200μL，按照上述实施例1-3的体系和步骤对提取的核酸样品进行检测，重复检测六次，检测结果如下表8所示，检测结果图如图2所示。

表8

由表8可知，本申请所述的引物组合物及其试剂盒具有较好的准确性。

实验例3特异性检测

采用核酸提取或核酸纯化装置(详见专利CN202110057697.6)提取人基因组、大肠杆菌基因组、炭疽杆菌基因组等病原体核酸。其中，人基因组、大肠杆菌基因组均是1μg，炭疽杆菌基因组浓度为1×10⁴copies/mL，用于实验。

按照上述实施例1-3的体系和步骤对上述提取的样品进行检测，其检测结果如下表9所示。

表9

其中，人基因组、大肠杆菌基因组、炭疽杆菌基因组检测结果Ct值为内参扩增结果。本申请所述的斑疹伤寒引物探针组合物未扩增到产物。因此，其检测结果为阴性。

其检测结果图如图3所示，由上表9可知，本申请所述的引物组合物及其试剂盒具有较好的特异性。

对比例1

本对比例1与实验例2相比，其区别在于，本对比例1所用的冻干试剂不包含脂多糖和羟丙基甲基纤维素，其余步骤与实验例3相同，对提取的核酸样品进行检测，重复检测六次，检测结果如下表10所示。

表10

由表10可知，冻干试剂不含有脂多糖和羟丙基甲基纤维素时，其准确性明显下降。

以上仅为本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些均属于本发明的保护范围。

序列表

<110> 北京中科生仪科技有限公司

<120> 一种斑疹伤寒核酸检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒

<130> 20220509

<160> 12

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(artificial sequence)

<400> 1

aagccattag tattgattgc tga 23

<210> 2

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列(artificial sequence)

<400> 2

aaggcacctg gttttgg 17

<210> 3

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(artificial sequence)

<400> 3

atatcaatgc agtaagagct tctccgtc 28

<210> 4

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(artificial sequence)

<400> 4

aatgtctgag agttataaaa cgcaa 25

<210> 5

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(artificial sequence)

<400> 5

tgattgagca taaaactgcc c 21

<210> 6

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列(artificial sequence)

<400> 6

ctattatgag gtgacgtagc tggcatacg 29

<210> 7

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(artificial sequence)

<400> 7

agttgcagtg taaccgtcat gta 23

<210> 8

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(artificial sequence)

<400> 8

tcgacgagac tctgctgtta a 21

<210> 9

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(artificial sequence)

<400> 9

cagtaatctg cgtcgcacgt gtgca 25

<210> 10

<211> 100

<212> DNA

<213> 人工序列(artificial sequence)

<400> 10

agttgcagtg taaccgtcat gtaccagtaa tctgcgtcgc acgtgtgcac ctagtctaat 60

cacttatgac tcagataact taacagcaga gtctcgtcga 100

<210> 11

<211> 500

<212> DNA

<213> 人工序列(artificial sequence)

<400> 11

actgttgaag attctaaaaa ttttaacttt gaagttgaag ttgttaaagg aatgagattt 60

gaccgcggat atatatcaca gtactttgca acgaatcgtg aaaagatgat taccgaattt 120

gaaaatcctt atattttgct attggatcag aaggtatcta cagtgcagcc actggttcct 180

gtgcttgaag ctgttgctca cactggcaag ccattagtat tgattgctga tgatgtagac 240

ggagaagctc ttactgcatt gatattaaac aatttaaaag gttctattaa agtagtagct 300

gtgaaggcac ctggttttgg tgatcgaaaa aaagaaatgt tagaagatat tgctatttta 360

acgaacggag aagtaattac tgaacaacta ggaattaaac tagaaaaggt taatgataca 420

tctaagttag gaactgcaaa tagagttatt gttacaaaag atcatactac tatagttcat 480

gataagaata atagtgatat 500

<210> 12

<211> 501

<212> DNA

<213> 人工序列(artificial sequence)

<400> 12

cacgaccttt agccaaaaag ttatcagtgt ctttatttac tcaaatatgg gatccttttg 60

agtggtggct tcgtgctaat aaaattgaca gattgactca aaaaaggctt ttaaaagagt 120

ttgatgcagt aataaaacat agtacttgtt gtgctactgc ttcatgggca atgtctgaga 180

gttataaaac gcaatatgat acacctacta taccattaat cgctggatta tcaaaagaat 240

tagcacgtat gccagctacg tcacctcata atagatatga atatattatt agtatagcag 300

ggcagtttta tgctcaatca gaatggttaa gtcttattaa tgctcttaat caagttaact 360

ggattattgc aggaagaaag attaaagttc gagtaatggg tcaaggtttt caagtattta 420

cacaactaca tgctaatttt gaatatttag gatggcgttc tcaagaagaa actattagat 480

tgcttgctga gtctgacctc c 501

Claims

1.一种检测斑疹伤寒的引物探针组合物其特征在于：所述的引物探针组合物包括检测丛林斑疹伤寒Scrub Typhus的引物探针组合物、检测地方性斑疹伤寒Murine Typhus的引物探针组合物和检测内参的引物探针组合物；

所述的检测内参的引物探针组合物为IPC引物探针组合物；

所述的Scrub Typhus引物探针组合物为：

F：SEQ ID NO:1：5'-AAGCCATTAGTATTGATTGCTGA-3'；

R：SEQ ID NO:2：5'-AAGGCACCTGGTTTTGG-3'；

P：SEQ ID NO:3：5'-ATATCAATGCAGTAAGAGCTTCTCCGTC-3'；

所述的Murine Typhus引物探针组合物为：

F：SEQ ID NO:4：5'-AATGTCTGAGAGTTATAAAACGCAA-3'；

R：SEQ ID NO:5：5'-TGATTGAGCATAAAACTGCCC-3'；

P：SEQ ID NO:6：5'-CTATTATGAGGTGACGTAGCTGGCATACG-3'；

所述的IPC引物探针组合物为：

F：SEQ ID NO:7：5'-AGTTGCAGTGTAACCGTCATGTA-3'；

R：SEQ ID NO:8：5'-TCGACGAGACTCTGCTGTTAA-3'；

P：SEQ ID NO:9：5'-CAGTAATCTGCGTCGCACGTGTGCA-3'。

2.权利要求1所述的引物探针在制备检测斑疹伤寒产品中应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的产品包括独立试剂、芯片或试剂盒。

4.一种检测斑疹伤寒的产品，其特征在于：所述的产品包括权利要求1所述的引物探针组合物。

5.根据权利要4所述的产品，其特征在于：所述的产品还包括纯化试剂、冻干IPC质控品和冻干试剂。

6.根据权利要求5所述的产品，其特征在于：所述的纯化试剂包括裂解液、洗脱液和磁珠，所述的裂解液包括盐酸胍、醋酸钠和Triton X-100，所述的洗脱液包括Tris-HCl，所述的裂解液和洗脱液的体积比为1:2-2.5，所述的磁珠为干化磁珠。

7.根据权利要求5所述的产品，其特征在于：所述的冻干IPC质控品的序列为SEQ IDNO:10；

所述的冻干IPC质控品是DNA质粒；

所述的冻干IPC质控品冻干体系包括甘露醇、海藻糖、2-羟丙基-β-环糊精、牛血清白蛋白、消泡剂、Tris-HCl pH8.0、NaCl、Tween20；

所述的冻干IPC质控品以冻干球的形式封装在一体化微流控芯片中。

8.根据权利要求5所述的产品，其特征在于：所述的冻干试剂包括脂多糖和羟丙基甲基纤维素；

所述的冻干试剂还包括甘露醇、海藻糖、普鲁兰多糖、2-羟丙基-β-环糊精、脱氧核糖核酸聚合酶、牛血清白蛋白、消泡剂、脱氧核苷三磷酸dNTPs、KCl、Tris-HCl pH9.0、MgCl₂、Tween20。

9.一种检测斑疹伤寒核酸的一体化微流控芯片试剂盒，其特征在于：

所述的试剂盒包括权利1要求所述的引物探针；

所述的试剂盒还包括纯化试剂、冻干IPC质控品和冻干试剂；

所述的纯化试剂包括裂解液、洗脱液和磁珠，所述的裂解液包括盐酸胍、醋酸钠和Triton X-100，所述的洗脱液包括Tris-HCl，所述的裂解液和洗脱液的体积比为1:2-2.5，所述的磁珠为干化磁珠；

所述的冻干IPC质控品的序列为SEQ ID NO:10；

所述的冻干IPC质控品是DNA质粒；

所述的冻干IPC质控品的冻干体系包括甘露醇、海藻糖、2-羟丙基-β-环糊精、牛血清白蛋白、消泡剂、Tris-HCl pH8.0、NaCl、Tween20；

所述的冻干试剂包括脂多糖和羟丙基甲基纤维素；

10.一种检测斑疹伤寒的方法，所述的方法为非疾病诊断和治疗方法，其特征在于：所述的方法包括利用权利要求1所述的引物探针、权利要求3-9任一项所述的产品或权利要求10所述的试剂盒对待测样本中斑疹伤寒进行检测。