CN116847861A - 口腔组合物 - Google Patents

Abstract

本文描述的是口腔组合物，例如牙胶或牙膏，其包含唾液链球菌(Streptococcus salivarius)、黏度调节剂、缓冲剂和非水性载剂。有利地，所述口腔组合物可提供期望的性质，包括益生菌的延迟释放谱、改善的在受试者口腔中的定殖、改善的稳定性和/或改善的脱水收缩。

Description

口腔组合物

技术领域

本发明总体上涉及包含活益生菌的口腔组合物。本发明总体上还涉及制备口腔组合物的方法以及使用该组合物改善口腔健康的方法。

背景技术

由于多重技术挑战，含有活益生菌的牙膏和牙胶并不常见。这些挑战包括难以在牙膏配制物中保持益生菌的活性，同时提供益生菌的持续释放，并促进受试者口腔的定殖。此外，每种益生菌在组合物中的反应不同。传统的牙膏和牙胶组合物通常包含水、多种树胶和纤维素衍生物、糖和糖醇以及缓冲剂，所有这些都充当益生菌的优良生长培养基。这种过度生长导致营养物质的过度使用，随后导致死亡阶段，进而导致细胞活力降低，从而导致产品无效。此外，由于其水性性质和成分，水性牙膏和牙胶需要添加防腐剂以防止病原体生长。这些防腐剂通常是非选择性的，会导致益生菌细胞死亡，因此在短时间内失去功效。典型发泡牙膏中强表面活性剂的存在也会影响口腔中原位益生菌细胞的活力，从而使益生菌失效。因此，含有水性媒剂的组合物作为针对益生菌的口腔卫生配制物既没有临床效果，也没有商业可行性。

由于缺乏水分，非水性的基于油或脂质的益生菌配制物可提供更好的保质期稳定性，但也带来了其他挑战，包括益生菌释放速率的问题。分散在油和黏度调节剂的黏性基质中的益生菌可能被截留在基质内，导致益生菌从基质的释放不显著或不充分。这反过来导致益生菌的没有可用性或可用性低以及体内定殖效率低。相反，在没有油或水性配制物和油配制物的情况下，益生菌可以立即从释放介质释放。这将不允许益生菌有足够的时间保留在口腔中以实现定殖。

制备非水性油或脂质配制物时可能遇到的另一个挑战是脱水收缩。脱水收缩是由于储存时凝胶的收缩导致油从基质中渗漏。为了克服脱水收缩，通常需要加入高比例的胶凝剂(例如氢化脂质、蜡)以防止脱水收缩。然而，添加高比例的胶凝剂可能会导致难以分配为牙膏的高黏度系统，或者不允许益生菌释放。

应当理解，液体悬浮液组合物不适合牙膏应用。然而，高黏度的组合物也不适合。

一些配制物需要加热步骤以便混合益生菌，而配制物在室温下固化。通常使用长时间高剪切均质化以获得均匀混合来解决固化问题。这些条件存在杀死益生菌或产生较弱益生菌细胞的风险，这可能会影响配制物的长期稳定性和功效。

WO2017/195074 A1(OraHealth Corp.)描述了一种用于口腔涂覆的基于脂质的混合物，其可以含有益生菌。该组合物可以是凝胶，但WO2017/195074 A1没有描述糊剂。WO2012/097429 A1(Viva Pharmaceutical Inc)描述了一种含有益生菌的软胶囊。WO2010/054439 A1(Unistraw Patent Holdings Limited)描述了嵌入基质内的益生菌，该基质可以是非水性的基于油的基质。

Seok等人"Formulating a probiotic toothpaste for vitamin B6 deliverysystem",Journal of International Research in Medical and PharmaceuticalSciences,2018(13)描述了一种将维生素B6递送到口腔的益生菌牙膏配制物。益生菌成分是TheraBreath Oral Care Probiotics Citrus，其中含有唾液链球菌(Streptococcussalivarius)菌株K12和M18(BLIS K12和M18)细胞。Seok等人专注于维生素B6在口腔中的跨黏膜递送。该组合物包含与益生菌不相容的多种成分，包括甘油、过氧化氢和水。

CN111558033描述了口腔清洁组合物，其包含至少一种蛋白水解酶、非蛋白水解酶、BLIS K12和M18、以及至少一种乳杆菌属物种(Lactobacillus spp.)。这些组合物还包含与益生菌不相容的甘油和水。

虽然这些文献考虑了含有益生菌的口腔凝胶，但发明人不知道任何基于这些专利申请正在开发的商业口腔组合物表现出与益生菌活力平衡的足够的释放谱，或者含有唾液链球菌。

WO2001027143(BLIS Technologies Limited)描述了唾液链球菌菌株K12和K30，保藏于德国布伦瑞克的德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismenund Zellkulturen GmbH)，保藏号分别为DSM 13084和DSM 13085。还描述了这些益生菌菌株用于预防或治疗包括口腔在内的上呼吸道感染的用途。需要治疗的病症包括链球菌喉咙痛和龋齿。WO2005007178(BLIS Technologies Limited)进一步描述了唾液链球菌K12和K30用于治疗口臭的用途。

WO2003070919(BLIS Technologies Limited)描述了唾液链球菌菌株Mia(也称为M18)，保藏于德国布伦瑞克的德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH)，保藏号为DSM 14685。还描述了该益生菌菌株的抗变异链球菌(MS)活性的用途，特别是其针对变异链球菌(S.mutans)和远缘链球菌(S.sobrinus)的活性，以及龋齿的治疗。虽然WO2001027143、WO2003070919和WO2005007178中提到了口服配制物例如食物、饮料、糖浆、漱口剂、牙膏、锭剂和口腔喷雾剂，但迄今为止，尚未开发出含有这些唾液链球菌的商业牙膏或凝胶配制物。商业产品的缺乏反映了生产具有理想的益生菌释放特性同时保持益生菌活力的益生菌牙膏或凝胶组合物的困难。

持续需要稳定且提供所需释放和定殖特性的益生菌口服组合物。本发明的一个目的是采取某种方式来满足这种需要；和/或至少为公众提供可用的选择。

本发明的其他目的可通过仅通过示例给出的以下描述而变得显而易见。

已经包括在本说明书中的文件、行为、材料、装置、文章等的任何讨论仅是出于提供本发明的背景的目的。不应将其视为承认任何或所有这些事项构成现有技术基础的一部分或者是与本发明相关的领域中的公知常识，如其在优先权日期之前就已存在那样。

发明内容

在第一方面，本发明提供了一种口腔组合物，其包含唾液链球菌(Streptococcussalivarius)、黏度调节剂、缓冲剂和非水性载剂，其中唾液链球菌在施用于口腔后15分钟从组合物的释放在约35％至约95％的范围内。

在第二方面，本发明提供了牙膏组合物，其包含唾液链球菌、缓冲剂、黏度调节剂、乳化剂和非水性载剂，其中缓冲剂为碳酸钙，并且黏度调节剂为疏水性二氧化硅。

在第三方面，本发明提供了牙膏组合物，其包含唾液链球菌、碳酸钙、疏水性二氧化硅、乳化剂和非水性载剂，其中唾液链球菌在施用于口腔后15分钟从组合物的释放在约35％至约95％的范围内。

在第四方面，本发明提供了制造根据第一方面、第二方面或第三方面的组合物的方法，该方法包括以下步骤：

a)将非水性载剂和乳化剂混合，

b)将唾液链球菌和缓冲剂分散在来自步骤a)的混合物中，

c)将黏度调节剂添加至来自步骤b)的混合物中，以及

d)将来自步骤c)的混合物均质化以提供组合物。

在第五方面，本发明提供了制造根据第一方面、第二方面或第三方面的组合物的方法，该方法包括以下步骤：

a)加热非水性载剂，

b)将黏度调节剂添加至加热的非水性载剂中，

c)使来自步骤b)的混合物部分冷却并向该混合物添加乳化剂，

d)使来自步骤c)的混合物进一步冷却并向该混合物添加唾液链球菌，以及

e)将来自步骤d)的混合物均质化以提供组合物。

在第六方面，本发明提供了改善受试者口腔健康的方法，该方法包括将根据第一方面、第二方面或第三方面的组合物施加至受试者的口腔。

在第七方面，本发明提供了将益生菌递送至受试者的口腔的方法，该方法包括向受试者的口腔施用根据第一方面、第二方面或第三方面的口腔组合物。

以下实施方案和优选项可单独或以任何两个或更多个的任意组合涉及上述方面中的任何一个。

在一些实施方案中，唾液链球菌在施用于口腔后30分钟从组合物的释放在约50％至约98％的范围内。

优选地，唾液链球菌是唾液链球菌M18、唾液链球菌K12或其组合。

优选地，组合物包含约1×10⁵至约1×10¹²cfu/g的量的唾液链球菌。更优选地，组合物包含约1×10⁷至约1×10¹⁰cfu/g的量的唾液链球菌。

在一些实施方案中，组合物包含约1％至约15％w/w的量的黏度调节剂。

在一些实施方案中，黏度调节剂选自由以下组成的组：疏水性二氧化硅、蜡、乙基纤维素、硬脂酸、木薯淀粉、黄原胶、卡波普974p(卡波姆)及其任意两种或更多种的组合。优选地，黏度调节剂是疏水性二氧化硅、乙基纤维素、蜡、或其两种或更多种的组合。

优选地，蜡选自由以下组成的组：白蜂蜡、黄蜂蜡、石蜡、霍霍巴蜡、微晶蜡、乳木果油、可可脂及其任意两种或更多种的组合。

在一些实施方案中，组合物包含约1％w/w至约30％w/w的量的缓冲剂。在一些实施方案中，组合物包含约10％至约20％w/w的量的缓冲剂。在一些实施方案中，组合物包含约15％w/w的量的缓冲剂。

在一些实施方案中，缓冲剂选自由以下组成的组：碳酸钙、碳酸氢钠、氯化钠、磷酸钠盐或磷酸钾盐、碳酸镁、水合氧化铝、膨润土、高岭土、及其任意两种或更多种的组合。在一些实施方案中，磷酸钠盐或磷酸钾盐选自磷酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、及其任意两种或更多种的组合。

在一些实施方案中，非水性载剂选自由以下组成的组：中链甘油三酯、三醋精、油酸乙酯、甘油、丙二醇、植物油及其任意两种或更多种的组合。在一些实施方案中，非水性载剂选自由以下组成的组：中链甘油三酯、三醋精、油酸乙酯、丙二醇、植物油及其任意两种或更多种的组合。优选地，中链甘油三酯是辛酸/癸酸甘油三酯。优选地，所述植物油选自由以下组成的组：葵花籽油、菜籽油、大豆油、橄榄油、及其任意两种或更多种的组合。

在一些实施方案中，组合物进一步包含乳化剂、抗菌剂、甜味剂、调味剂、氟化物源、另外的益生菌、发泡剂、着色剂、研磨剂、增白剂、牙齿敏感剂、抗氧化剂、再矿化剂、或其任意两种或更多种的组合。

在一些实施方案中，乳化剂选自由以下组成的组：聚山梨醇酯80、山梨聚糖油酸酯、蛋卵磷脂、大豆卵磷脂、聚氧乙烯35蓖麻油(polyoxyl35castor oil)及其任意两种或更多种的组合。

在一些实施方案中，抗菌剂选自由以下组成的组：木糖醇、赤藓糖醇、麦卢卡蜂蜜、卡玛希蜂蜜、蜂胶、茶树油及其任意两种或更多种的组合。

在一些实施方案中，甜味剂选自由以下组成的组：罗汉果苷甜味剂、三氯蔗糖、甜叶菊、阿斯巴甜、糖精、索马甜蛋白、山梨糖醇、麦芽糊精、异麦芽酮糖醇、蔗糖、蜂蜜及其任意两种或更多种的组合。

在一些实施方案中，氟化物源选自由以下组成的组：单氟磷酸钠、氟化钠、氟化亚锡及其任意两种或更多种的组合。

在一些实施方案中，另外的益生菌选自由以下组成的组：乳杆菌属物种(Lactobacillus spp.)、双歧杆菌属物种(Bifidobacterium spp.)、链球菌属物种(Streptococcus spp.)、酵母属物种(Saccharomyces spp.)及其任意两种或更多种的组合。在一些实施方案中，另外的益生菌选自由以下组成的组：乳杆菌属物种、双歧杆菌属物种、链球菌属物种、酵母属物种、粘液乳杆菌属物种(Limosilactobacillus spp.)、乳酪杆菌属物种(Lacticaseibacillus spp.)、联合乳杆菌属物种(Ligilactobacillus spp.)及其任意两种或更多种的组合。

在一些实施方案中，研磨剂选自由以下组成的组：二氧化硅、碳酸钙、碳酸氢钠、氟化物、氯化钠、磷酸盐、碳酸镁、水合氧化铝、黏土、活性炭(activated charcoal)、焦磷酸四钠、焦磷酸二钠及其任意两种或更多种的组合。在一些实施方案中，研磨剂选自由以下组成的组：二氧化硅、碳酸钙、碳酸氢钠、氯化钠、磷酸盐、碳酸镁、水合氧化铝、黏土、活性炭、焦磷酸四钠、焦磷酸二钠及其任意两种或更多种的组合。

在一些实施方案中，组合物在25℃/60％ RH下具有至少2个月的保质期。在一些实施方案中，组合物在25℃/60％ RH下具有至少6个月的保质期。在一些实施方案中，组合物在25℃/60％ RH下具有至少30个月的保质期。

在一些实施方案中，组合物在25℃具有大于1,900,000cp的黏度。在一些实施方案中，组合物在25℃具有约20,000至约2,000,000cp的黏度。在一些实施方案中，组合物在25℃具有约20,000至约500,000cp的黏度。

在一些实施方案中，组合物是糊剂或凝胶。在一些实施方案中，组合物是凝胶并且在25℃具有约35,000至约65,000cp的黏度。在一些实施方案中，组合物是牙膏。优选地，糊剂在25℃具有约70,000至约100,000cp的黏度。

在一些实施方案中，在25℃以13,000rpm离心5分钟后，组合物具有约10％至约40％的脱水收缩率。在一些实施方案中，在25℃以13,000rpm离心5分钟后，组合物具有约20％至约40％的脱水收缩率。在一些实施方案中，在25℃以13,000rpm离心5分钟后，组合物具有约10％至约20％、或约13％至约18％的脱水收缩率。

在一些实施方案中，组合物包含：约1×10⁵至约1×10¹⁰cfu/g的唾液链球菌M18、约1％至约30％w/w的碳酸钙、约1％至约15％w/w的疏水性二氧化硅、以及约0.1％至约5％w/w的乳化剂。

在一些实施方案中，组合物包含：约1×10⁶至约1×10¹⁰cfu/g的唾液链球菌M18、约10％至约20％w/w的碳酸钙、约3％至约8％w/w的疏水性二氧化硅、以及约1％至约2％w/w的乳化剂。

在一些实施方案中，组合物包含：约1×10⁸至约1×10⁹cfu/g的唾液链球菌M18、约15％w/w的碳酸钙、约4％至约6％w/w的疏水性二氧化硅和约1％w/w的乳化剂。

在一些实施方案中，组合物包含：约1×10⁸至约1×10⁹cfu/g的唾液链球菌M18、约20％w/w的碳酸钙、约6％至约10％w/w的疏水性二氧化硅和约2.5％w/w的乳化剂。

在一些实施方案中，组合物包含：约1×10⁸至约1×10⁹cfu/g的唾液链球菌M18、约18％至约22％w/w的碳酸钙、约6％至约10％w/w的疏水性二氧化硅、以及约2.5％w/w的乳化剂。

在一些实施方案中，基于组合物的总重量，组合物包含：

·约1×10⁸至约1×10⁹cfu/g的唾液链球菌M18，

·约20％w/w的缓冲剂，

·约1％至约10％w/w的每种黏度调节剂，

·约2.5％w/w的乳化剂，

·约0.76％w/w的氟化物源，

·约2％w/w至约8％w/w的抗菌剂，

·约0.01％至约5％的每种调味剂，以及

约3％w/w甜味剂。

在一些实施方案中，组合物基于组合物的总重量包含：

·约1×10⁸至约1×10⁹cfu/g的唾液链球菌M18，

·约20％w/w的碳酸钙，

·约4至约8％w/w的疏水性二氧化硅，

·约2％至约8％的黄原胶，

·约2.5％w/w的聚山梨醇酯80，

·约0.76％w/w的氟化物源，

·约2％至约8％w/w的木糖醇，

·约2％至约3％w/w的留兰香调味油，

·约2％至约3％w/w的薄荷调味油，

·约0.3％w/w的Smoothenol Flavor 30712(包含麦芽糖糊精、阿拉伯树胶和三醋精)，以及

·约3％w/w的Synergy粉末甜味剂PF 7513(包含麦芽糖糊精和天然香料)。

在一些实施方案中，唾液链球菌在施用于口腔后15分钟从组合物的释放在约35％至约95％的范围内。

在一些实施方案中，该方法用于减少受试者的龋齿、去除和/或预防受试者牙齿上的污渍和/或牙菌斑、强化受试者牙齿上的牙釉质、治疗和/或预防牙龈炎、辅助牙龈愈合，和/或预防口臭。

在一些实施方案中，益生菌至少部分定殖于口腔。优选地，益生菌是唾液链球菌，例如M18、K12或其组合。

本发明也可以被广泛地认为存在于本申请的说明书中单独或共同提及或指出的部分、要素和特征中，存在于两个或多个所述部分、要素或特征的任何或所有组合中，并且在此提及的特定整体在本发明所涉及的领域中具有已知的等同物的情况下，这种已知的等同物被认为包含在此，如同被单独阐述一样。

旨在对本文公开的数字范围(例如，1至10)的提及也包括对该范围内的所有有理数(例如，1、1.1、2、3、3.9、4、5、6、6.5、7、8、9和10)以及该范围内的任何有理数范围(例如，2到8、1.5到5.5和3.1到4.7)的提及，因此，本文明确公开的所有范围的所有子范围特此明确公开。这些仅是具体意图的示例，并且所列举的最低值和最高值之间的数值的所有可能的组合将被认为是在本申请中以类似的方式明确陈述的。

在本说明书中，参考了专利说明书、其他外部文件或其他信息源，这通常是为了提供用于讨论本发明的特征的背景。除非另有明确说明，否则对这种外部文件的引用不应被解释为承认这种文件或这种信息源在任何管辖范围内是现有技术，或者构成本领域公知常识的一部分。

对于本发明相关领域的技术人员来说，在不脱离所附权利要求中限定的本发明的范围的情况下，本发明的结构上的许多变化以及广泛不同的实施方案和应用将是明显的。本文的公开内容和描述纯粹是说明性的并且不旨在进行任何意义上的限制。

虽然本发明如上文所宽泛地定义，但是本领域技术人员将理解本发明不限于此，并且本发明还包括以下描述给出示例的实施方案。

附图说明

将参考附图描述本发明，其中：

图1示出了比较性配制物(从左到右)C-1、C-2和C-3的样品。

图2示出了冷藏储存后的配制物C-1的样品。

图3是示出了配制物A-4、C-1和C-2的加速脱水收缩的图。

图3B是示出了配制物A-4、C-1、C-2、B-6和B-7的加速脱水收缩的图。

图4是示出使用配制物A-1的释放研究结果的图。

图5是示出使用配制物A-2的释放研究结果的图。

图6是示出使用配制物A-3的释放研究结果的图。

图7是示出使用BLIS M18锭剂和配制物A-1至A-4、A-7和C-1至C-3的释放研究结果的图。

图7B是示出使用BLIS M18锭剂、和配制物A-1至A-4、A-7、C-1至C-3、CN111558033的配制物以及配制物B-6和B-7的释放研究结果的图。

图8是示出施用含有M18和K12的锭剂后M18在受试者中定殖的柱形图。

图9是示出用牙膏A-4刷牙后M18在受试者中定殖的柱形图。

图10是示出使用Seok等人的配制物进行稳定性研究的结果的图。

图11是示出CN111558033的配制物的稳定性研究结果的图。

图12是示出配制物A-4、A-6、B-8、B-9、B-10、B-11、B-3、B-6和C-2的稳定性数据的图。

图13是示出BLIS M18在原料成分中与在牙膏配制物中相比的抑制活性的图。

具体实施方式

本文描述的是口腔组合物，例如牙胶或牙膏，其包含唾液链球菌、黏度调节剂、缓冲剂和非水性载剂。有利地，该口腔组合物被精心配制以提供受控释放特性，从而导致益生菌具有延迟释放谱，并仍然允许在受试者口腔中定殖。组合物还表现出长期稳定性和/或有限的脱水收缩。长期稳定性是指组合物在标准储存和湿度条件下确保益生菌有效存活数量的能力。脱水收缩是指伴随液体分离的凝胶收缩。

定义

本说明书和权利要求书中使用的术语“包含”意思是“至少部分地由...组成”。当解释本说明书和权利要求书中包括术语“包含”的每个陈述时，也可以存在不同于以该术语开头的一个或多个特征的特征。诸如“包括”、“包含”和“含有”等相关术语将以相同的方式解释。

如本文所用，术语“和/或”意指“和”或“或”或两者。

如本文所用，名词后面的“(s)”表示名词的复数和/或单数形式。使用的一般化学和生物学术语，例如，本文中的分子式具有其通常的含义。

本文所用的术语“凝胶”是指至少两种成分的固体或半固体系统，由液体(例如非水性载剂)包围并相互渗透的凝聚体组成。

如本文所用，术语“糊剂”是指半固体剂型，其含有精细分散到合适载剂中的大比例固体(例如按重量计约20％-50％)。

本文使用的术语“受试者”是指哺乳动物，包括人、狗、猫、马、羊、牛和其他家畜和农场动物。

单位“cfu/g”是指菌落形成单位/克。

益生菌

唾液链球菌是革兰氏阳性细菌，其主要定殖于人类口腔，特别是舌头，是主要的共生物种。它们被广泛研究用作益生菌。BLIS Technologies已将多种唾液链球菌物种商业化，商品名为BLIS M18和BLIS K12，用于口腔和牙齿健康。

适用于本发明的一系列唾液链球菌菌株是本领域已知的。唾液链球菌K12于1999年10月8日保藏于德国微生物菌种保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismenund Zellkulturen GmbH,Mascheroder Weg 1b,D-38124,Braunschweig,Germany)，并指定保藏号DSM 13084。唾液链球菌K12描述于上文WO2001027143中，其通过引用并入本文。唾液链球菌M18于2001年12月12日保藏于德国微生物菌种保藏中心(Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH,Mascheroder Weg 1b,D-38124,Braunschweig,Germany)，并指定保藏号DSM 14685。唾液链球菌M18描述于上文WO2003070919中，其通过引用并入本文。

在一些实施方案中，唾液链球菌是活益生菌。在一些实施方案中，唾液链球菌菌株是M18、K12或其组合。

在一些实施方案中，组合物包含约1×10⁵至约1×10¹²cfu/g的唾液链球菌。在一些实施方案中，组合物包含约1×10⁶至约1×10¹⁰cfu/g、约1×10⁷至约1×10⁹cfu/g、约1×10⁷至约1×10¹⁰cfu/g、约1×10⁸至约1×10¹⁰cfu/g、或约1×10⁸至约1×10⁹cfu/g的唾液链球菌。在一些实施方案中，组合物包含约1×10⁹cfu/g的唾液链球菌。在一些实施方案中，组合物包含约2×10⁹cfu/g的唾液链球菌。

在一些实施方案中，在存在多个唾液链球菌菌株的情况下，组合物包含约1×10⁵至约1×10¹²cfu/g的每个唾液链球菌菌株。在一些实施方案中，组合物包含约1×10⁶至约1×10¹⁰cfu/g、约1×10⁷至约1×10⁹cfu/g、约1×10⁷至约1×10¹⁰cfu/g、约1×10⁸至约1×10¹⁰cfu/g、或约1×10⁸至约1×10⁹cfu/g的每个唾液链球菌菌株。在一些实施方案中，组合物包含约1×10⁹cfu/g的每个唾液链球菌菌株。在一些实施方案中，组合物包含约2×10⁹cfu/g的每个唾液链球菌菌株。

在一些实施方案中，组合物包含约1×10⁵至约1×10¹²cfu/g的唾液链球菌M18。在一些实施方案中，组合物包含约1×10⁶至约1×10¹⁰cfu/g、约1×10⁷至约1×10⁹cfu/g、约1×10⁷至约1×10¹⁰cfu/g、约1×10⁸至约1×10¹⁰cfu/g、或约1×10⁸至约1×10⁹cfu/g的唾液链球菌M18。在一些实施方案中，组合物包含约1×10⁹cfu/g的唾液链球菌M18。在一些实施方案中，组合物包含约2×10⁹cfu/g的唾液链球菌M18。

在一些实施方案中，组合物包含约1×10⁵至约1×10¹²cfu/g的唾液链球菌K12。在一些实施方案中，组合物包含约1×10⁶至约1×10¹⁰cfu/g、约1×10⁷至约1×10⁹cfu/g、约1×10⁷至约1×10¹⁰cfu/g、约1×10⁸至约1×10¹⁰cfu/g、或约1×10⁸至约1×10⁹cfu/g的唾液链球菌K12。在一些实施方案中，组合物包含约1×10⁹cfu/g的唾液链球菌K12。在一些实施方案中，组合物包含约2×10⁹cfu/g的唾液链球菌K12。

在一些实施方案中，组合物包含约1×10⁵至约1×10¹²cfu/g的唾液链球菌M18以及约1×10⁵至约1×10¹²cfu/g的唾液链球菌K12。在一些实施方案中，组合物包含约1×10⁶至约1×10¹⁰cfu/g、约1×10⁷至约1×10⁹cfu/g、约1×10⁷至约1×10¹⁰cfu/g、约1×10⁸至约1×10¹⁰cfu/g、或约1×10⁸至约1×10⁹cfu/g的唾液链球菌M18和约1×10⁶至约1×10¹⁰cfu/g、约1×10⁷至约1×10⁹cfu/g、约1×10⁷至约1×10¹⁰cfu/g、约1×10⁸至约1×10¹⁰cfu/g、或约1×10⁸至约1×10⁹cfu/g的唾液链球菌K12。

在一些实施方案中，组合物进一步包含另外的益生菌。合适的益生菌包括但不限于乳杆菌属物种(Lactobacillus spp.)(例如嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)、罗伊氏乳杆菌(L.reuteri)、鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus)、或唾液乳杆菌(L.salivarius))、双歧杆菌属物种(Bifidobacterium spp.)(例如两岐双岐杆菌(B.bifidum)、长双歧杆菌(B.longum)、或乳双歧杆菌(B.lactis)BB12)、链球菌属物种(Streptococcus spp.)(例如口腔链球菌(S.oralis)、乳房链球菌(S.uberis)或唾液链球菌(Streptococcus salivarius)K12)和酵母菌属物种(Saccharomyces spp.)(例如布拉酵母菌(S.boulardii)或酿酒酵母(S.cerevisiae))。注罗伊氏乳杆菌现称为罗伊氏黏液乳杆菌(Limosilactobacillusreuteri)，鼠李糖乳杆菌现称为鼠李糖乳酪杆菌(Lacticaseibacillus rhamnosus)，并且唾液乳杆菌现在被称为唾液联合乳杆菌(Ligilactobacillus salivarius)。因此，合适的益生菌包括但不限于乳杆菌属物种(例如嗜酸乳杆菌)、双歧杆菌属物种(例如两岐双岐杆菌、长双歧杆菌、或乳双歧杆菌BB12)、链球菌属物种(例如口腔链球菌、乳房链球菌或唾液链球菌K12)、酵母菌属物种(例如布拉酵母菌或酿酒酵母)、黏液乳杆菌属物种(例如罗伊氏黏液乳杆菌)、乳酪杆菌属物种(例如鼠李糖乳酪杆菌)、或联合乳杆菌属物种(例如唾液联合乳杆菌)。

黏度调节剂

口腔组合物包含黏度调节剂。有利地，例如当施用到口腔环境中时，黏度调节剂可用于控制组合物的稳定性和/或调节益生菌的释放谱。

合适的黏度调节剂包括但不限于疏水性二氧化硅、蜡(例如白蜂蜡、黄蜂蜡、石蜡、霍霍巴蜡、微晶蜡)、乳木果油、可可脂、乙基纤维素、硬脂酸、木薯淀粉、黄原胶、卡波普974p(卡波姆)、花生酱、或其任意两种或更多种的组合。在一些实施方案中，黏度调节剂是乙基纤维素。在一些实施方案中，黏度调节剂是乙基纤维素和蜡(例如蜂蜡)的组合。优选地，黏度调节剂是疏水性二氧化硅(例如Aerosil )。

在一些实施方案中，口腔组合物包含基于组合物总重量约1％w/w至约15％w/w的量的黏度调节剂。例如，组合物可以包含基于组合物的总重量约4％至约15％、或约4％至约10％、或约3％至约8％、或约4％至约6％、或约4％至约8％w/w的量的黏度调节剂。在多个实施方案中，组合物可包含基于组合物总重量约6％至约10％、或约7％至约9％w/w的量的黏度调节剂。例如，组合物可包含基于组合物的总重量约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％或约15％w/w的量的黏度调节剂。在一些实施方案中，组合物包含基于组合物总重量约6％w/w的量的黏度调节剂(例如疏水性二氧化硅)。在一些实施方案中，组合物包含基于组合物总重量约7％w/w的量的黏度调节剂(例如疏水性二氧化硅)。在一些实施方案中，组合物包含基于组合物总重量约8％w/w的量的黏度调节剂(例如疏水性二氧化硅)。在一些实施方案中，组合物包含基于组合物总重量约5％w/w的量的黏度调节剂(例如黄原胶)。在一些实施方案中，组合物包含基于组合物总重量约2％w/w的量的黏度调节剂(例如黄原胶)。

在一些实施方案中，当存在多种黏度调节剂时，口腔组合物包含基于组合物总重量约1％至约15％w/w的量的每种黏度调节剂。例如，组合物可以包含基于组合物总重量约1％至约10％、约1％至约15％、约1％至约8％、约2％至约15％、约2％至约10％、约2％至约15％、约2％至约8％、约4％至约15％、或约4％至约10％、或约3％至约8％、或约4％至约6％、或约4％至约8％w/w的量的每种黏度调节剂。在多个实施方案中，组合物可包含基于组合物总重量约6％至约10％、或约7％至约9％w/w的量的每种黏度调节剂。例如，组合物可包含基于组合物的总重量约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％或约15％w/w的量的每种黏度调节剂。在一些实施方案中，黏度调节剂是疏水性二氧化硅和黄原胶。

缓冲剂

口腔组合物可包含缓冲剂。有利地，缓冲剂可以促进口腔组合物中益生菌的生长、调节组合物的脱水收缩和/或充当研磨剂。

合适的缓冲剂包括但不限于碳酸钙、碳酸氢钠、氯化钠、磷酸钠盐或磷酸钾盐(例如磷酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾和磷酸二氢钾)、碳酸镁、水合氧化铝、膨润土、高岭土、尿素(urea)、或其任意两种或更多种的组合。优选地，缓冲剂是碳酸钙。对于长期稳定性，申请人出人意料地发现不溶性(非沉淀的)碳酸钙表现出至少6个月的良好微生物稳定性。不希望受理论束缚，发明人相信沉淀的或微溶于水的碳酸钙可能更吸湿，从而影响稳定性。在多个实施方案中，碳酸钙是不溶性碳酸钙。不溶性碳酸钙可来自Pure Nature或Sigma。

在一些实施方案中，口腔组合物包含基于组合物总重量约1％w/w至约30％w/w的量的缓冲剂。例如，组合物可包含基于组合物总重量约5％至约25％、或约10％至约20％w/w的量的缓冲剂。在多个实施方案中，组合物可包含基于组合物总重量约15％至约25％、或约18％至约22％w/w的量的缓冲剂。在多个实施方案中，组合物包含基于组合物总重量约12％w/w至约18％w/w的量的缓冲剂。在一些实施方案中，组合物包含基于组合物总重量约5％、约10％、约15％、约20％、约25％或约30％w/w的量的缓冲剂。在一些实施方案中，缓冲剂(例如碳酸钙)为基于组合物总重量的约15％w/w。在一些实施方案中，组合物包含基于组合物总重量约20％w/w的量的缓冲剂(例如碳酸钙)。

非水性载剂

口腔组合物包含非水性载剂。合适的非水性载剂包括但不限于中链甘油三酯、三醋精、油酸乙酯、甘油、丙二醇、植物油、聚乙二醇或其任意两种或更多种的组合。在多个实施方案中，非水性载剂选自中链甘油三酯、三醋精、油酸乙酯、丙二醇、植物油、聚乙二醇、或其任意两种或更多种的组合。优选地，中链甘油三酯是辛酸/癸酸甘油三酯，例如Miglyol812N(饱和椰子/棕榈仁油衍生的辛酸和癸酸脂肪酸与植物衍生的甘油的甘油三酯)。在一些实施方案中，植物油选自由以下组成的组：葵花籽油、菜籽油、大豆油、橄榄油、及其任意两种或更多种的组合。

在一些实施方案中，口腔组合物包含足量(q.s.)的非水性载剂，即使组合物的总w/w％达到100％的量。在一些实施方案中，口腔组合物包含基于组合物总重量约30％至约95％w/w的量的非水性载剂。在一些实施方案中，口腔组合物包含基于组合物总重量约55％至约95％w/w的量的非水性载剂。例如，组合物可包含基于组合物的总重量约60％至约95％、或约60％至约90％、或约65％至约90％、或约65％至约90％w/w。在多个实施方案中，组合物包含基于组合物的总重量约30至约95％、或约30至约90％、或约35至约95％、或约35至约90％、或约40至约95％、或约40至约90％、或约45至约95％、或约45至约90％、或约50至约90％、或约50至约90％w/w的量的非水性载剂。

在一些实施方案中，口腔组合物是非水性的。在一些实施方案中，组合物基本上无水。在一些实施方案中，组合物包含基于组合物的总重量小于7％的水、小于5％的水、小于3％的水、小于2％的水、小于1％的水、小于0.5％的水、小于0.1％的水，或少于0.01％的水。在本发明的组合物中，水包括从环境中吸收的水分。

乳化剂

口腔组合物可进一步包含乳化剂。有利地，乳化剂可以促进固体颗粒在组合物中的分散。例如，乳化剂可以促进益生菌在组合物中的分散。乳化剂可以是非离子表面活性剂或两性表面活性剂。非离子表面活性剂的实例包括但不限于聚山梨醇酯80(Tween 80)、山梨聚糖油酸酯(Span 80)和聚氧乙烯35蓖麻油(Cremaphor EL)。两性表面活性剂的实例包括但不限于卵磷脂，例如蛋卵磷脂和大豆卵磷脂，以及磷脂酰胆碱。

在一些实施方案中，口腔组合物包含基于组合物总重量约0.1％w/w至约5％w/w的量的乳化剂。例如，组合物可包含基于组合物总重量约0.5％至约4％、约0.5％至约3％、或约0.5％至约2％w/w的量的乳化剂。在多个实施方案中，组合物可包含基于组合物总重量约1.5％至约3.5％或约2％至约3％w/w的量的乳化剂。在一些实施方案中，组合物包含基于组合物总重量约1％w/w的量的乳化剂(例如Tween 80、聚山梨醇酯80)。在一些实施方案中，组合物包含基于组合物总重量约2.5％w/w的量的乳化剂(例如Tween 80、聚山梨醇酯80)。

研磨剂

口腔组合物可包含研磨剂以改善组合物的清洁性能，例如用于从牙齿上去除污渍和/或牙菌斑和/或抛光牙齿。合适的研磨剂包括但不限于二氧化硅、碳酸钙、碳酸氢钠、氯化钠、钠盐、磷酸盐、碳酸镁、水合氧化铝、黏土(例如膨润土和高岭土)、活性炭、焦磷酸四钠、焦磷酸二钠，或其任意两种或更多种的组合。

本领域技术人员将理解，可以选择研磨剂的量以实现期望的清洁性能。增加研磨剂的量改善了组合物的清洁性能。然而，当组合物用于口腔清洁时，包含过多的研磨剂可能导致组合物损伤牙齿，例如牙齿的釉质。例如，组合物可包含基于组合物的总重量约1至约40％、约1至约30％、约1至约25％、约1至约20％、约5至约40％、约5至约30％、约5至约25％、约5至约15％、约10至约35％、约15至约30％、约6至约14％、约7至约13％、约8至约12％、约9至约11％、或约10％w/w的量的研磨剂。在一些实施方案中，组合物包含基于组合物的总重量约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、或约15％、约16％、约17％、约18％、约19％、约20％、约21％、约22％、约23％、约24％、约25％、约26％、约27％、约28％、约29％、或约30％w/w的量的研磨剂。

在一些实施方案中，研磨剂还可以影响组合物的黏度，例如碳酸钙、碳酸氢钠、碳酸镁、水合氧化铝、黏土(例如膨润土和高岭土)以及活性炭。

本领域技术人员将理解，在一些实施方案中，组合物的其他组分例如缓冲剂也可以充当研磨剂，例如碳酸钙、氯化钠、磷酸盐和钠盐。

抗菌剂

抗菌剂的实例包括但不限于木糖醇、赤藓糖醇、抗菌蜂蜜(例如麦卢卡蜂蜜和卡玛希蜂蜜)、蜂胶和茶树油。优选地，抗菌剂是木糖醇。本领域技术人员将理解，一些抗菌剂可能损害益生菌。因此，应当避免此类抗菌剂或以足够低的量使用以避免显著降低口腔组合物中益生菌的量或功效。

组合物可包含基于组合物的总重量约1％至约20％、约2％至约15％、约3％至约10％、约4％至约6％、或约5％w/w的量的抗菌剂。组合物可以包含基于组合物的总重量约2％至约10％、或约2％至约8％w/w的量的抗菌剂。在一些实施方案中，组合物包含基于组合物的总重量约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％或约20％w/w的量的抗菌剂。在一些实施方案中，组合物包含基于组合物总重量约5％w/w的量的抗菌剂(例如木糖醇)。在一些实施方案中，组合物包含基于组合物总重量约2％w/w的量的抗菌剂(例如木糖醇)。

氟化物源

口腔组合物可包含氟化物源，例如，以改善组合物的治疗性质。有利地，当施用于口腔时，包含氟化物源的口腔组合物可以增强牙釉质和/或减少龋齿。氟化物源可以是氟化物盐。例如，氟化物源可以是单氟磷酸钠、氟化钠、氟化亚锡、或其任意两种或更多种的组合。

氟化物源的量可以取决于商业和/或监管因素，例如，遵守医疗指南或监管要求。在一些实施方案中，组合物包含基于组合物总重量约0.38％至约3.8％、或约0.76％w/w的量的氟化物源。在一些实施方案中，组合物包含基于组合物的总重量约0.3％至约4％、或约0.4％至约3％、或约0.5％至约2％、或约0.6％至约1％、或约0.7％w/w的量的氟化物源。在一些实施方案中，组合物包含基于组合物总重量的约0.5％至约1.5％、或约0.6％至约1.2％w/w的量的氟化物源。

甜味剂

口腔组合物可以包含甜味剂。合适的甜味剂包括但不限于罗汉果苷甜味剂(罗汉果提取物)、三氯蔗糖、甜叶菊、阿斯巴甜、糖精、索马甜蛋白、山梨糖醇、麦芽糖糊精、异麦芽酮糖醇、蔗糖、蜂蜜、Synergy粉末甜味剂PF 7513或其任意两种或更多种的组合。Synergy粉末甜味剂PF 7513含有79％麦芽糖糊精和21％天然调味物质。

在一些实施方案中，组合物包含基于组合物总重量约0.05％至约5％、约0.1％至约4％、约0.2％至约3％、约0.3％至约2％、约0.4％至约1％、或约0.5％w/w的量的甜味剂。在一些实施方案中，组合物包含基于组合物总重量约0.5％w/w的量的甜味剂(例如Synergy粉末甜味剂)。在一些实施方案中，组合物包含基于组合物总重量约3％w/w的量的甜味剂(例如Synergy粉末甜味剂PF 7513)。

调味剂

组合物可包含本领域已知的常规调味剂。调味剂的实例包括但不限于留兰香油、薄荷油、橙子香料、茴芹籽香料、香草香料、丁香油、酸橙香料、Smoothenol Flavour 30712、以及其任意两种或更多种的组合。Smoothenol Flavour 30712可包含麦芽糖糊精、阿拉伯树胶和三醋精，并且已知可与舌头受体结合以掩盖苦味或金属余味。本领域技术人员将理解，所选择的调味剂必须与益生菌活力相容。

该组合物可以包含一种或多种调味剂，每种调味剂的量例如是基于组合物的总重量的约0.01％至约10％、约0.01％至约9％、约0.01％至约8％、约0.01％至约7％、约0.01％至约6％、约0.01％至约5％、约0.5％至约4.5％、约1％至约4％、约1.5％至约3.5％、约2％至约3％、或约2.5％w/w。在一些实施方案中，组合物包含基于组合物的总重量约0.1％、约0.5％、约1％、约1.5％、约2％、约2.5％、约3％、约3.5％、约4％、约4.5％，或约5％w/w的量的调味剂。在一些实施方案中，组合物包含基于组合物总重量约2.5％w/w的量的调味剂(例如留兰香调味油)。在一些实施方案中，组合物包含基于组合物总重量约2.75％w/w的量的调味剂(例如薄荷调味油)。在一些实施方案中，组合物包含基于组合物总重量约0.3％w/w的量的调味剂(例如Smoothenol Flavour 30712)。

在多个实施方案中，组合物包含至少一种调味剂。在一些实施方案中，当使用多种调味剂时，组合物包含约0.1％至约4％w/w的每种调味剂，例如约0.5％至约4％、或约1％至约4％、或约1.5％至约4％、或约2％至约4％、约0.5％至约3％、或约1％至约3％、或约1.5％至约3％、或约2％至约3％w/w的每种调味剂。在一些实施方案中，组合物包含2.5％w/w留兰香调味油、2.75％w/w薄荷调味油和0.3％w/w Smoothenol Flavour 30712。

另外的添加剂

本领域技术人员将理解，口腔组合物可以包含口腔组合物中常规使用的其他添加剂，例如牙胶或牙膏。本领域技术人员将进一步理解，添加剂需要与益生菌活力和功效相容。此类添加剂可以提供或改善组合物的治疗、美容、稳定性、外观和/或感官性质。合适的添加剂的实例包括但不限于着色剂(例如食品级染料，例如亮蓝或食品绿、二氧化钛或白色着色剂)、发泡剂(例如聚山梨醇酯80)、增白剂(例如过氧化脲或过氧化氢)、牙齿敏感剂(例如硝酸钾、精氨酸或氟化亚锡)、抗氧化剂(例如维生素C或维生素E)、其他防龋剂(例如木糖醇、氟化物、麦卢卡蜂蜜或单宁)，再矿化剂(例如羟基磷灰石或磷酸钙)、益生元(例如半乳糖或棉子糖)、和/或天然提取物(例如印度醋栗(余甘子(Phyllanthus emblica))、印度楝(印度苦楝树(Azadirachta indica))、丁香(丁子香(Syzygium aromaticum))、圣罗勒(Ocimum tenuiflorum)或姜黄(Curcuma longa))。此类添加剂可以以口腔配制物的典型量包含在本发明的口腔组合物中。适合口服施用活菌或冻干细菌的多种药学上可接受的添加剂是本领域公知的(参见，例如，Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版,Gennaro,ed.,1990,Mack Publishing Co.,Easton,Pa.，或Remington's PharmaceuticalSciences,第23版,Adejare,ed.,2021,Academic Press Inc.，通过引用并入本文)。

申请人出人意料地发现许多常见的发泡剂杀死或抑制M18和K12。不可能将BLISM18和/或K12添加到商业配制物中，因为标准牙膏成分(例如甘油、发泡剂和/或水)会杀死微生物。

口腔组合物的形式

口腔组合物可以是凝胶或糊剂的形式，例如牙膏。组合物的黏度可以为在25℃大于1,900,000cp。组合物的黏度可为在25℃约20,000至约2,000,000cp。组合物的黏度可为在25℃约20,000至约500,000cp，例如在25℃约30,000至约400,000、或约40,000至约100,000、或约40,000至约70,000cp。当组合物为凝胶形式时，在一些实施方案中，组合物的黏度为在25℃约35,000至约65,000cp。当组合物为糊剂形式时，在一些实施方案中，组合物的黏度为在25℃约70,000至100,000cp。

黏度可以使用Brookfield LVDVIPrime在25℃使用Brookfield Helipath主轴(S96)在0.3RPM下测量。技术人员将理解可用于测量黏度的其他方法。

除了化学稳定性和释放特性之外，组合物在“脱水收缩”方面的物理稳定性是基于油的配制物通常遇到的另一个挑战。脱水收缩是由于储存时凝胶网络的收缩而导致油从组合物中渗漏。为了克服脱水收缩，可以增加黏度调节剂和/或缓冲剂的量以减少脱水收缩。然而，添加过多的这些组分可能会导致高黏度系统(半固体)。如果组合物的黏度太高，则可能难以作为牙膏分配，或者难以阻止或抑制益生菌的释放。优选地，凝胶网络足够强以在储存时保持物理稳定性，但又足够弱以允许益生菌通过搅动例如刷牙或在口腔内散布而释放。优选地，凝胶网络足够坚韧以应对储存时的温度和湿度以及物理应力以维持凝胶结构，但是足够软以在搅动例如刷牙时或由于唾液流动而破裂。可以使用质构分析仪来测量凝胶特性，例如凝胶强度、勃鲁姆强度(bloom strength)、生物粘附性和稠度。

可以使用加速脱水收缩或实时脱水收缩来测量脱水收缩。加速脱水收缩可以使用Journal of Dairy Science,第100卷,第2期,第901-907页中描述的离心加速测试来测量。简而言之，在单独的1.5mL Eppendorf管中称重1g配制物，并在室温下以13000rpm离心(Eppendorf离心机5415D，Lab supply NZ)1、5和10分钟。将每个时间点渗出的液体体积(上清液)转移到另一个Eppendorf管中并称重。计算渗出液体的累积百分比并比较脱水收缩。使用相同的程序测量实时脱水收缩，不同之处在于样品不经历离心加速，而是收集并测量储存时由于配制物收缩而产生的任何自发渗出。

在一些实施方案中，在25℃以13,000rpm离心5分钟后，组合物具有约10％至约40％的脱水收缩率。在一些实施方案中，在25℃以13,000rpm离心5分钟后，口腔组合物具有约20％至约40％的脱水收缩率。在一些实施方案中，在25℃以13,000rpm离心5分钟后，口腔组合物具有约30％的脱水收缩率。在一些实施方案中，在25℃以13,000rpm离心10分钟后，口腔组合物具有约20％至约40％的脱水收缩率。在一些实施方案中，在25℃以13,000rpm离心5分钟后，组合物具有约10％至约20％、或约13％至约18％的脱水收缩率。在一些实施方案中，在25℃以13,000rpm离心10分钟后，口腔组合物具有约30％的脱水收缩率。在多个实施方案中，脱水收缩可以在22℃测量。

为了在口腔环境中发挥功效，需要仔细配制本发明的组合物以提供随时间推移有利于所治疗受试者口腔定殖的量的唾液链球菌。有利地，组合物需要被配制为避免所有唾液链球菌益生菌的立即释放，而是提供唾液链球菌随时间推移的持续释放。

唾液链球菌从组合物的释放通过组合物中总唾液链球菌的累积百分比释放来描述，例如组合物中总唾液链球菌的35％。

在一些实施方案中，唾液链球菌在施用于口腔后15分钟从组合物的释放在约35％至约95％的范围内。在一些实施方案中，唾液链球菌在施用于口腔后15分钟从组合物的释放在约40％至约95％的范围内。在一些实施方案中，唾液链球菌在施用于口腔后15分钟从组合物的释放在约35％至约90％的范围内。在一些实施方案中，唾液链球菌在施用于口腔后15分钟从组合物的释放在约40％至约90％的范围内。在一些实施方案中，唾液链球菌在施用至口腔后15分钟时从组合物的释放在约40％至约85％、或约40％至约80％、或约40％至约75％的范围内。

在一些实施方案中，唾液链球菌在施用于口腔后30分钟从组合物的释放在约50％至约98％的范围内。在一些实施方案中，唾液链球菌在施用于口腔后30分钟从组合物的释放在约50％至约95％的范围内。在一些实施方案中，唾液链球菌在施用于口腔后30分钟从组合物的释放在约55％至约98％的范围内。在一些实施方案中，唾液链球菌在施用于口腔后30分钟从组合物的释放在约55％至约95％的范围内。在一些实施方案中，唾液链球菌在施用至口腔后30分钟时从组合物的释放在约60％至约98％、或约60％至约95％、或约60％至约93％的范围内。

在一些实施方案中，组合物在施用于口腔后约15分钟时释放约40％的唾液链球菌。在一些实施方案中，组合物在施用于口腔后约30分钟时释放约60％的唾液链球菌。

在一些实施方案中，唾液链球菌在施用于口腔后60分钟从组合物的释放在约60％至约100％的范围内。在一些实施方案中，唾液链球菌在施用于口腔后60分钟从组合物的释放在约65％至约100％的范围内。

不希望受理论束缚，认为益生菌从配制物的释放表明益生菌在其定殖能力方面可能成功。如果从配制物释放太快，则其可能具有定殖成功谱。大多数益生菌会随着唾液而被迅速吞入喉咙。相反，如果从配制物的释放太慢，则益生菌可能无法达到足够高的水平以允许在口腔中定殖。因此，需要精细调整释放谱，以允许发生适当的释放和定殖。

制备口腔组合物的方法

本文所述的口腔组合物可通过首先混合非水性载剂和乳化剂以提供混合物来制备。添加唾液链球菌、缓冲剂和任选的其他固体组分，并使用简单混合将其分散在整个混合物中。然后将黏度调节剂添加到混合物中，并将混合物均质化例如约3至约5分钟以提供口腔组合物。在一些实施方案中，用高剪切均质器或顶置搅拌器均质化混合物。

可替选地，口腔组合物可以通过包括将非水性载剂，例如葵花籽油，加热至约140℃至约150℃的温度的方法来制备。接下来，将黏度调节剂添加至加热的非水性载剂中，并例如以约600至约700rpm的速率搅拌混合物。在一些实施方案中，搅拌混合物直至黏度调节剂例如乙基纤维素溶解以提供澄清混合物。然后使混合物部分冷却，例如冷却至约80℃至约90℃的温度，随后向混合物中添加乳化剂。使混合物进一步冷却，例如冷却至约25℃至约35℃，然后添加唾液链球菌。然后将混合物均质化以提供口腔组合物。在一些实施方案中，用高剪切均质器或顶置搅拌器均质化混合物。

改善口腔健康的方法

该组合物可用于改善受试者的口腔健康。例如，通过预防或治疗WO2001027143、WO2002070719和WO2005007178(上文)中确定的任何病症，并且全部通过引用整体并入本文。还已知唾液链球菌M18有助于减少牙菌斑、支持口腔健康和口腔菌群、减少龋齿、预防龋齿、治疗和预防牙龈炎以及治疗和预防牙周炎(Burton,J.P.等人,2013J.Med.Microbiol.62,875–884；Burton,J.P.等人,2013,PLoS ONE 8.；Di Pierro等人2015.Clin Cosmet Investig Dent.7:107-13；L Scariya,D.V,N.,M Varghese,2015.Int.J.Pharma Bio Sci.6,242–250)。

因此，本文公开了一种改善受试者口腔健康的方法，该方法包括向受试者的口腔施用本文所述的口腔组合物。在一些实施方案中，该方法用于减少受试者的龋齿。在一些实施方案中，该方法用于去除和/或防止受试者牙齿上的污渍和/或牙菌斑。在一些实施方案中，该方法用于强化受试者牙齿上的牙釉质。在一些实施方案中，该方法用于治疗和/或预防牙龈炎。在一些实施方案中，该方法用于辅助牙龈愈合。在一些实施方案中，该方法用于预防口臭。

本文还公开了将益生菌递送至受试者的口腔的方法，该方法包括将本文所述的口腔组合物施用至受试者的口腔。有利地，益生菌可以至少部分定殖于口腔。优选地，益生菌是唾液链球菌，例如M18、K12或其组合。

在一些实施方案中，将口腔组合物施用至受试者的口腔包括将组合物施用至受试者的牙齿、牙龈、舌头、颊腔和/或牙周袋。例如，可以通过在受试者的牙齿、牙龈、舌头和/或颊腔上刷牙、点涂、涂覆、按摩，或通过填充受试者的牙周袋来将组合物施用于口腔。可替选地，改善受试者口腔健康的方法可包括将本文所述的口腔组合物施用于义齿或防护牙托。组合物可以施用于义齿或防护牙托，其中义齿或防护牙托位于受试者的口腔内或口腔外。组合物可用于但不限于用于出齿前儿童(pre-dentate children)或口干症患者。

在一些实施方案中，组合物在施用至口腔后被唾出，例如，组合物可在施用至口腔后立即被唾出。在一些实施方案中，组合物在口腔中保留至少约1分钟、约2分钟、约3分钟、约4分钟、约5分钟、约6分钟、约7分钟、约8分钟、约9分钟、约10分钟、约15分钟、约20分钟、约25分钟或约30分钟。在一些实施方案中，组合物在施用至口腔后不被唾出。

在一些实施方案中，受试者是人类。在一些其他实施方案中，受试者是动物，例如狗、猫、马、羊、牛或其他家畜或农场动物。

提供以下非限制性实施例来说明本发明并且决不限制其范围。

实施例

制备牙膏的方法(配制物A4、A5、A6和A-7，表1)

将非水性载剂和乳化剂(Tween 80)在烧杯中轻轻混合，直至液体变得混浊。将唾液链球菌M18、唾液链球菌K12(对于A-7)、碳酸钙和木糖醇添加到烧杯中并轻轻混合以将固体分散在液体介质中。然后添加疏水性二氧化硅，并使用高剪切均质器(Ultra Turrax)或顶置空气搅拌器将混合物均质化3至5分钟(间歇地以避免热量积聚)。

制备二氧化硅牙胶的方法(配制物A3，表1)

将非水性载剂(橄榄油)和乳化剂(Tween 80)在烧杯中轻轻混合，直至液体变得混浊。将唾液链球菌M18添加到烧杯中并轻轻混合以将固体分散在液体介质中。然后添加疏水性二氧化硅，并使用高剪切均质器(Ultra Turrax)或顶置空气搅拌器将混合物均质化3-5分钟(间歇地以避免热量积聚)。

制备乙基纤维素牙胶的方法(配制物A1和A2，表1)

将非水性载剂(葵花籽油)在磁力搅拌器加热板上加热至140℃至160℃的温度。在使用磁力搅拌棒连续搅拌(600-700rpm)下将乙基纤维素缓慢添加到热油中。用于实现乙基纤维素良好溶解的rpm为600至700rpm。更高的速度可能会形成气泡，而更低的速度可能不足以完全溶解乙基纤维素。优选缓慢添加和连续搅拌以避免形成乙基纤维素块。一旦乙基纤维素完全溶解以提供澄清溶液(约40分钟)，停止加热，并将烧杯移至未加热的搅拌板。在搅拌下使混合物缓慢冷却。一旦混合物的温度达到80℃至90℃，添加乳化剂(Tween 80或Span 80)，然后添加蜂蜡，持续搅拌直至获得均匀的混合物。使混合物冷却至室温(约25℃至35℃)。在持续搅拌下添加唾液链球菌M18以及木糖醇和甜味剂等其他固体。在某些情况下，可以使用高剪切均质器或顶置空气混合器来改善混合物的均匀性。

实施例1：示例性配制物

根据上述方法制备的牙胶(A-1至A-3)和牙膏(A-4至A-7)配制物的实例示于表1中。表1中还示出了比较性配制物C-1至C-3。C-1根据WO2017195074A1中的实施例1制备。C-2根据WO2012097429A1中的实施例3制备。C-3根据WO2010054439A1中的实施例7制备，不同之处在于没有应用于珠。所有量均显示为基于配制物总重量的％w/w。

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表2：供应商

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配制物的外观和可接受性

通过评估配制物的视觉、嗅觉和味觉感官特性来评估配制物的适口性。

A-4具有不透明至白色的外观，具有理想的糊状稠度和流动特性。

配制物C-1至C-3如图1所示。C-1在制造时与A-4类似，但在储存后变成外观令人不快的脆片(见图2)。由于组合物的石片状形式，C-1不适合用作牙膏或凝胶。C-2具有光滑的蜡状、淡黄色外观，但在5℃保存时会变成固体岩石状物。C-3是黏稠的悬浮液，流动性差。这种形式不适合用作牙膏。

稳定性测试

通过测量储存后仍然存活的益生菌的量来评估配制物的稳定性。

将配制物包装到水蒸气传输率非常低的塑料管或玻璃瓶中。然后将配制物放入25℃和60％相对湿度(RH)或5℃的培养箱中。在指定时间点通过标准计数方法测量益生菌活力。

6个月后，在25℃/60％ RH和5℃两种情况下，配制物A-4和A-6在玻璃瓶和牙膏管二者中总体表现出良好的稳定性。A-4和A-6在两种温度下都保持恒定的益生菌活细胞计数。

在25℃/60％ RH，A-1至A-3在玻璃瓶中表现出良好的稳定性，持续至少30个月。

脱水收缩

测量配制物A-4和C-1至C-3中的脱水收缩。测量了两种形式的脱水收缩：加速脱水收缩和实时脱水收缩。

加速脱水收缩研究包括将配制物以13,000rpm离心1、5和10分钟。然后测量每种配制物中的脱水收缩量。

加速脱水收缩研究的结果如图3所示。A-4在1分钟和5分钟时表现出脱水收缩，并在10分钟后达到稳定状态，脱水收缩的增加最小。在所测试的配制物中，C-1表现出最小的脱水收缩。至离心10分钟时，C-1不显示出任何脱水收缩。不希望受理论束缚，低脱水收缩可表明凝胶网络太强。强凝胶网络可以防止益生菌从凝胶基质释放。与A-4相比，C-2表现出较少的脱水收缩。与C-1一样，低脱水收缩可能有利于物理稳定性，但可能会阻止益生菌从凝胶网络释放。在1分钟时，C-3显示出油(上清液)立即与益生菌粉末(沉淀物)分离，并且效果随测试时间推移而增强。由于C-3不是凝胶，因此这种效果不是脱水收缩，而是液相和固相的分离。

在实时脱水收缩研究中，将配制物保持在25℃和60％ RH，并观察脱水收缩。

对于A-1、C-1或C-2，没有观察到脱水收缩。正如加速脱水收缩研究所观察到的，C-3在1个月的时间点后显示出油(上清液)与益生菌粉末(沉积物)的分离。由于C-3不是凝胶，因此该效果不是脱水收缩，而是液相和固相的分离(图1)。

释放谱

评估了配制物A-1至A-4、A-7和C-1至C-3的释放谱。BLIS M18锭剂用作对照。将配制物放入释放介质中，即用于收集逃离配制物的细菌的储液器。释放介质设置为37℃和pH6.7以模拟唾液/口腔的pH值。使用磁力搅拌棒以约200rpm搅拌释放介质以模拟唾液流动。将0.895gBLIS M18锭剂或0.5g益生菌配制物(约1.5×10⁹cfu/剂量)添加到释放介质中。在T＝0、1、5、10、15、30、60、120或180分钟时，通过收集100μL等份释放介质取出样品，将其在PBS(900μL)中稀释并储存在–20℃直至计数。将100μL 37℃的新鲜释放介质添加到烧杯中以维持释放介质体积。分析时，将锭剂或糊剂实验的样品解冻至室温，将100μL溶液连续稀释至10^-6，然后在每个稀释度使用3×10μL点涂在CAB K12琼脂板上。然后将板置于37℃和5％ CO₂的培养箱中18至20小时，然后手动或使用自动菌落计数器进行计数。

释放谱实验的结果如图4至图7所示。在此模型中，锭剂的BLIS M18在10分钟内达到100％。配制物A-1和A-3显示出延迟释放，30分钟内释放约85％。A-2在15分钟内释放了95％。A-4的益生菌在前15分钟内累积释放了约45％，此后持续释放。这些结果表明益生菌从糊剂或凝胶平台的释放可被调节。

C-1和C-2在120分钟内未有效释放益生菌(<5％)。C-3在15分钟内将其益生菌释放至100％。由于配制物的液体性质，预计M18将在5分钟内瞬时完成(100％)释放。

定殖

进行了研究以调查在施用含有唾液链球菌M18的BLIS锭剂或牙膏后，益生菌配制物在口腔中定殖和增加可测量水平的益生菌的能力。

在健康成人志愿者中进行了比较试验，其中每天施用含有唾液链球菌M18和唾液链球菌K12的BLIS锭剂两次，持续7天。分析首次给药后8小时和最后一次给药后24小时收集的唾液样品的唾液链球菌M18样菌落。

8小时之时，锭剂显示唾液中的可检测益生菌有所增加(见图8)。

使用类似方案来研究A-4配制物的定殖特性。健康人类志愿者每天用配制物A-4刷牙两次，持续7天。在首次给药后8小时和最后一次给药后24小时收集唾液样品。

数据显示，与含有唾液链球菌M18的锭剂相比，牙膏配制物在8小时后可实现类似的定殖，并且在24小时后效果更好(见图9)。这是出人意料的，因为尽管牙膏在口腔中的时间较短，但其在定殖方面具有与锭剂配制物相当的功效。

实施例2：感官试验

根据上述方法制备的牙膏(B-1至B-13)配制物的实例示于表3中。所有量均显示为基于配制物总重量的％w/w。

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表4：另外的供应商

薄荷油	Pure Nature,新西兰
		黄原胶	Lotus,新西兰
Smoothenol	Sensient,新西兰
		白色素	Colour mill,新西兰

感官试验通过以下方式进行：让5至10名参与者每天使用每种牙膏两次，持续3天，并与普通牙膏进行比较。参与者对许多参数进行了评分，包括：

·整体好感度

·泡沫量

·口腔清新度

·清洁能力

·稠度

·喜欢的口感

·喜欢的口味

·口味强度

·苦/金属后味

·延长的后味

·味道宜人。

与B1和B2相比，B3更加优选。与B5和B4相比，B6更加优选。B6和B7是最优选的配制物。

与普通牙膏相比，B3和B7总体上更受欢迎，特别是在口腔清新度和清洁能力方面。

使用实施例1中描述的程序进行稳定性测试。样品B3、B6、B8、B9和B10均在25℃/60％ RH下稳定至少6个月(图12)。

实施例3：与Seok等人的比较研究。

根据Seok,Y.,&Lee,J.(2018)(配制用于维生素B6递送系统的益生菌牙膏。Journal of International Research in Medical and Pharmaceutical Sciences,13(2),53-67)制备配制物。

表5：根据Seok等人的组合物。

替代品

*碳酸钙(Pure nature，NZ)

**10ml橄榄油+15ml Tween 80+22.5g乳化蜡

未使用氮酮

根据实施例1进行稳定性测试。Seok的配制物中的细胞计数立即下降了6log。储存24小时后，没有检测到活的BLIS M18或K12细胞(图10)。预计由于存在作为媒剂的水和抗菌成分十二烷基硫酸钠、甘油、氮酮和过氧化氢，细胞无法存活。

实施例4：与CN111558033的比较研究

根据CN111558033制备配制物。

表6：根据CN111558033的组合物

成分	％w/w	100g批次
			BLIS K12	7	7g
BLIS M18	7	7g
			碳酸钙	45	45g
甘油	30	30ml
			苯甲酸钠	0.1	0.1g
二氧化硅	1	1g
			月桂酰两性二乙酸钠*	1	1ml
糖精钠	0.1	0.1g
			精制水	8.8	8.8ml

替代品

*Tween 80

根据实施例1进行稳定性测试。CN111558033配制物的细胞计数在60天内稳步下降。

使用实施例1中描述的方法评估释放谱测试。发现CN111558033的配制物在1分钟内释放组合物中98％的唾液链球菌，即瞬时释放。预期唾液链球菌被瞬时释放，因为益生菌悬浮在水媒剂中，因此瞬时分散在释放介质中。

实施例5：发泡剂比较

进行本实施例以证明不同发泡剂对BLIS M18活力的影响。

通过以下制备样品：

1.将1.1g BLIS M18与9.9g磷酸盐缓冲盐水(PBS)混合5分钟，并用PBS按1:10稀释，

2.添加至CABK12和BaCa琼脂板，

3.将10μL发泡剂点样到板上并在37℃ 5％ CO₂下孵育24小时，

4.测定抑制作用。

表7：M18和K12的抑制

实施例6：向标准牙膏的添加

进行本实施例以证明BLIS M18和K12在标准牙膏配制物中的活力。

还将BLIS M18和K12与标准品牙膏混合。M18样品中的BLIS M18瞬时下降3log，并且7天后没有检测到活细菌。

将高露洁牙膏铺展在M18菌苔上也显示出抑制作用。

BLIS K12结果相似。

实施例7：牙膏配制物中M18的抑制

进行本实施例以比较作为原料成分和在牙膏配制物中的M18对其他细菌种类的抑制作用。

原料成分提供为在海藻糖、麦芽糖糊精和乳糖醇的冻干保护剂混合物中的悬浮与PBS中的唾液链球菌M18细胞的冻干细胞形式。

使用的牙膏配制物是如实施例2中所述的B-11。

唾液链球菌M18原料产物(M18粉末加海藻糖/乳糖醇/麦芽糖糊精)；-来自新西兰BLIS Technologies Ltd)；变异链球菌(S.mutans)10449(ATCC 25175)–可从美国典型培养物保藏中心(ATCC)获得；酿脓链球菌(S.pyogenes)71-698；酿脓链球菌FF22；酿脓链球菌W-1；黏性放线菌(A.viscosus)T14；变异链球菌31c–可通过要求从BLIS Technologies Ltd获得。酿脓链球菌71-679–Lewis Wannamaker赠送的标准品。

将BLIS牙膏中M18的抑制能力与M18原料成分进行比较。配制物的M18计数为1×10⁹。将配制物在注射器中称量至0.1g，并分配到板上划生产者线。用PBS稀释原料成分(对照)，移液(100μl)，M18计数也为1×10⁹。

使用延迟拮抗试验评估细菌素的产生(Tagg和Bannister 1979；MedMicrobiology 12:397.)。简而言之，测试菌株将一种或多种细菌素分泌到琼脂培养基中，然后将多种细菌素敏感(指示剂)菌株施加到含细菌素的琼脂上。如果细菌素抑制指示菌株，则其在细菌素琼脂(即抑制区)上相应地不生长。在这项研究中，对唾液链球菌M18进行了延迟拮抗测试，以评估其对多种口腔细菌的体外抑制活性，特别是变异链球菌和酿脓链球菌。

发现一些M18牙膏配制物似乎特别有效地抑制口腔病原体(图13)。该实验表明，与PBS对照相比，牙膏配制物中的M18具有相似或更好的BLIS活性。

无意将本发明的范围仅限于上述实施例。如本领域技术人员将理解的，在不脱离如所附权利要求中阐述的本发明的范围的情况下，许多变化是可能的。

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Claims (41)

1.一种口腔组合物，其包含唾液链球菌(Streptococcus salivarius)、黏度调节剂、缓冲剂和非水性载剂，其中所述唾液链球菌在施用于口腔后15分钟从所述组合物的释放在约35％至约95％的范围内。

2.如权利要求1所述的口腔组合物，其中所述唾液链球菌在施用于口腔后30分钟从所述组合物的释放在约50％至约98％的范围内。

3.如权利要求1或2所述的口腔组合物，其中所述唾液链球菌是唾液链球菌M18、唾液链球菌K12或其组合。

4.如权利要求1至3中任一项所述的口腔组合物，其中所述组合物包含约1×10⁵cfu/g至约1×10¹²cfu/g的量的所述唾液链球菌。

5.如权利要求1至4中任一项所述的口腔组合物，其中所述组合物包含约1％w/w至约15％w/w的量的黏度调节剂。

6.如权利要求1至5中任一项所述的口腔组合物，其中所述黏度调节剂选自由以下组成的组：疏水性二氧化硅、蜡、乙基纤维素、硬脂酸、木薯淀粉、黄原胶、卡波普974p及其任意两种或更多种的组合。

7.如权利要求6所述的口腔组合物，其中所述蜡选自由以下组成的组：白蜂蜡、黄蜂蜡、石蜡、霍霍巴蜡、微晶蜡、乳木果油、可可脂及其任意两种或更多种的组合。

8.如权利要求1至7中任一项所述的口腔组合物，其中所述组合物包含约1％w/w至约30％w/w的量的缓冲剂。

9.如权利要求1至8中任一项所述的口腔组合物，其中所述缓冲剂选自由以下组成的组：碳酸钙、碳酸氢钠、氯化钠、磷酸钠盐或磷酸钾盐、碳酸镁、水合氧化铝、膨润土、高岭土及其任意两种或更多种的组合。

10.如权利要求9所述的口腔组合物，其中所述磷酸钠盐或磷酸钾盐选自磷酸氢钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾及其任意两种或更多种的组合。

11.如权利要求1至10中任一项所述的口腔组合物，其中所述非水性载剂选自由以下组成的组：中链甘油三酯、三醋精、油酸乙酯、甘油、丙二醇、植物油及其任意两种或更多种的组合。

12.如权利要求1至11中任一项所述的口腔组合物，其中所述非水性载剂选自由以下组成的组：中链甘油三酯、三醋精、油酸乙酯、丙二醇、植物油及其任意两种或更多种的组合。

13.如权利要求11或12所述的口腔组合物，其中所述中链甘油三酯是辛酸/癸酸甘油三酯。

14.如权利要求11或12所述的口腔组合物，其中所述植物油选自由以下组成的组：葵花籽油、菜籽油、大豆油、橄榄油及其任意两种或更多种的组合。

15.如权利要求1至14中任一项所述的口腔组合物，其进一步包含乳化剂、抗菌剂、甜味剂、调味剂、氟化物源、另外的益生菌、发泡剂、着色剂、研磨剂、增白剂、牙齿敏感剂、抗氧化剂、再矿化剂或其任意两种或更多种的组合。

16.如权利要求15所述的口腔组合物，其中所述乳化剂选自由以下组成的组：聚山梨醇酯80、山梨聚糖油酸酯、蛋卵磷脂、大豆卵磷脂、聚氧乙烯35蓖麻油及其任意两种或更多种的组合。

17.如权利要求15所述的口腔组合物，其中所述抗菌剂选自由以下组成的组：木糖醇、赤藓糖醇、麦卢卡蜂蜜、卡玛希蜂蜜、蜂胶、茶树油及其任意两种或更多种的组合。

18.如权利要求15所述的口腔组合物，其中所述甜味剂选自由以下组成的组：罗汉果苷甜味剂、三氯蔗糖、甜叶菊、阿斯巴甜、糖精、索马甜蛋白、山梨糖醇、麦芽糊精、异麦芽酮糖醇、蔗糖、蜂蜜及其任意两种或更多种的组合。

19.如权利要求15所述的口腔组合物，其中所述氟化物源选自由以下组成的组：单氟磷酸钠、氟化钠、氟化亚锡及其任意两种或更多种的组合。

20.如权利要求15所述的口腔组合物，其中所述另外的益生菌选自由以下组成的组：乳杆菌属物种(Lactobacillus spp.)、双歧杆菌属物种(Bifidobacterium spp.)、链球菌属物种(Streptococcus spp.)、酵母属物种(Saccharomyces spp.)、粘液乳杆菌属物种(Limosilactobacillus spp.)、乳酪杆菌属物种(Lacticaseibacillus spp.)、联合乳杆菌属物种(Ligilactobacillus spp.)及其任意两种或更多种的组合。

21.如权利要求15所述的口腔组合物，其中所述研磨剂选自由以下组成的组：二氧化硅、碳酸钙、碳酸氢钠、氯化钠、磷酸盐、碳酸镁、水合氧化铝、黏土、活性炭、焦磷酸四钠、焦磷酸二钠及其任意两种或更多种的组合。

22.如权利要求1至21中任一项所述的口腔组合物，其中所述组合物在25℃的保质期为至少2个月。

23.如权利要求1至22中任一项所述的口腔组合物，其中所述组合物是糊剂或凝胶。

24.如权利要求23所述的口腔组合物，其中所述组合物是凝胶并且在25℃具有约35,000cp至约65,000cp的黏度。

25.如权利要求1至23中任一项所述的口腔组合物，其中所述组合物是牙膏。

26.如权利要求25所述的口腔组合物，其中所述组合物在25℃具有约70,000cp至约2,000,000cp的黏度。

27.如权利要求1至26中任一项所述的口腔组合物，其中所述组合物在25℃具有约20,000cp至约500,000cp的黏度。

28.如权利要求1至27中任一项所述的口腔组合物，其中在25℃以13,000rpm离心5分钟后，所述组合物具有约10％至约40％的脱水收缩率。

29.一种牙膏组合物，其包含唾液链球菌、缓冲剂、黏度调节剂、乳化剂和非水性载剂，其中所述缓冲剂为碳酸钙，并且所述黏度调节剂为疏水性二氧化硅。

30.如权利要求29所述的牙膏组合物，其中所述组合物包含：

约1×10⁵cfu/g至约1×10¹⁰cfu/g的唾液链球菌M18，

约1％w/w至约30％w/w的碳酸钙，

约1％w/w至约15％w/w的疏水性二氧化硅，以及

约0.1％w/w至约5％w/w的所述乳化剂。

31.如权利要求29所述的牙膏组合物，其中所述组合物包含：

约1×10⁶cfu/g至约1×10¹⁰cfu/g的唾液链球菌M18，

约10％w/w至约20％w/w的碳酸钙，

约3％w/w至约8％w/w的疏水性二氧化硅，以及

约1％w/w至约2％w/w的所述乳化剂。

32.如权利要求29所述的牙膏组合物，其中所述组合物包含：

约1×10⁸cfu/g至约1×10⁹cfu/g的唾液链球菌M18，

约15％w/w的碳酸钙，

约4％w/w至约6％w/w的疏水性二氧化硅，以及

约1％w/w的所述乳化剂。

33.如权利要求29所述的牙膏组合物，其中所述组合物包含：

约1×10⁸cfu/g至约1×10⁹cfu/g的唾液链球菌M18，

约18％w/w至约22％w/w的碳酸钙，

约6％w/w至约10％w/w的疏水性二氧化硅，以及

约2.5％w/w的所述乳化剂。

34.如权利要求29所述的牙膏组合物，其中基于所述组合物的总重量，所述组合物包含：

约1×10⁸cfu/g至约1×10⁹cfu/g的唾液链球菌M18，

约20％w/w的缓冲剂，

约1％w/w至约10％w/w的所述黏度调节剂，

约2.5％w/w的所述乳化剂，

约0.76％w/w的所述氟化物源，

约2％w/w至约8％w/w的所述抗菌剂，

约0.01％至约5％的每种调味剂，以及

约3％w/w的甜味剂。

35.如权利要求29所述的牙膏组合物，其中基于所述组合物的总重量，所述组合物包含：

约1×10⁸cfu/g至约1×10⁹cfu/g的唾液链球菌M18，

约20％w/w的碳酸钙，

约4％w/w至约8％w/w的疏水性二氧化硅，

约2％至约8％的黄原胶，

约2.5％w/w聚山梨醇酯80，

约0.76％w/w的所述氟化物源，

约2％w/w至约8％w/w的木糖醇，

约2％w/w至约3％w/w的留兰香调味油，

约2％w/w至约3％w/w的薄荷调味油，

约0.3％w/w的Smoothenol Flavour 30712(包含麦芽糖糊精、阿拉伯树胶和三醋精)，以及

约3％w/w的Synergy粉末甜味剂PF 7513(包含麦芽糖糊精和天然香料)。

36.如权利要求29至35中任一项所述的牙膏组合物，其中所述唾液链球菌在施用于口腔后15分钟从所述组合物的释放在约35％至约95％的范围内。

37.一种牙膏组合物，其包含唾液链球菌、碳酸钙、疏水性二氧化硅、乳化剂和非水性载剂，其中所述唾液链球菌在施用于口腔后15分钟从所述组合物的释放在约35％至约95％的范围内。

38.一种制备根据权利要求1至37中任一项所述的组合物的方法，所述方法包括以下步骤：

a)将非水性载剂和乳化剂混合，

b)将唾液链球菌和缓冲剂分散在来自步骤a)的混合物中，

c)将黏度调节剂添加至来自步骤b)的混合物中，以及

d)将来自步骤c)的混合物均质化以提供所述组合物。

39.一种制备根据权利要求1至37中任一项所述的组合物的方法，所述方法包括以下步骤：

a)加热非水性载剂，

b)将黏度调节剂添加到加热的非水性载剂中，

c)使来自步骤b)的混合物部分冷却并向所述混合物添加乳化剂，

d)使来自步骤c)的混合物进一步冷却并向所述混合物添加唾液链球菌，以及

e)将来自步骤d)的混合物均质化以提供所述组合物。

40.一种改善受试者口腔健康的方法，所述方法包括将根据权利要求1至37中任一项所述的组合物施用于所述受试者的口腔。

41.一种将益生菌递送至受试者口腔的方法，所述方法包括将根据权利要求1至37中任一项所述的组合物施用于所述受试者的口腔。