CN116813675B

CN116813675B - 一种化合物晶型及其制备、组合物和用途

Info

Publication number: CN116813675B
Application number: CN202311065293.7A
Authority: CN
Inventors: 舒敏; 饶翔; 董萌; 张晓�; 廖航; 刘宪波
Original assignee: Grand Pharma China Co ltd; Beijing Grand Johamu Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Grand Pharma China Co ltd; Beijing Grand Johamu Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2023-08-23
Filing date: 2023-08-23
Publication date: 2023-11-24
Anticipated expiration: 2043-08-23
Also published as: CN116813675A

Abstract

本发明公开了一种化合物的晶型A，其制备方法，及包含其的原料药或组合物，以及在制备细胞外组蛋白抑制剂中的用途。本申请所述的化合物晶型A结晶度高，重现性好，制备工艺便捷且易放大生产，且固体性状良好，流动性好，多种热力学稳定，不易转晶，适合作为原料药储存以及生产制剂产品。

Description

一种化合物晶型及其制备、组合物和用途

技术领域

本发明涉及医疗领域，具体涉及一种化合物晶型及其制备、组合物和用途。

背景技术

脓毒症是ICU常见危重症，病死率高。在全球范围内，脓毒症还没有公认有效的治疗药物，临床上主要是对症支持治疗为主，脓毒症是临床亟待解决的医疗难题。专利CN201880080079.X公开了一种聚阴离子的硫酸纤维二糖苷化合物显示出对包括脓毒症在内的多种疾病具有良好的治疗效果，并已经进入了临床研究阶段，显示出良好的开发价值。

根据文献（Probst, Katrin C. SYNTHESIS AND CONFORMATIONALINVESTIGATIONS OF SULFATED CARBOHYDRATES[1][J].Cheminform, 2001, 20(7-8):549-560.）以及专利CN201880080079.X和WO2019113646A1记载的方法可得到该化合物的无定型形式，但其存在纯度不高，稳定差、流动性差等缺点，且目前尚未发现其晶型研究的报道。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明提供了解决上述问题的技术方案。

本发明的第一方面提供了一种β-O-甲基-D-纤维二糖七硫酸钠盐的晶型A，其以使用Cu-Ka辐射，以2θ表示的X射线粉末衍射图谱的特征衍射峰包括19.60±0.2°、22.64±0.2°、25.45±0.2°。

本发明第二方面提供了一种原料药，其包含本申请所述的晶型A。

本发明第三方面提供了一种组合物，其包含本申请所述的晶型A以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。

在本发明的第四方面，提供了本申请所述晶型A、所述的原料药、或所述的组合物在制备细胞外组蛋白抑制剂中的应用。

在本发明的第五方面，提供了本申请所述晶型A、所述的原料药、或所述的组合物在制备用于治疗或者预防细胞外组蛋白介导的疾病或病症中的应用。

在本发明的第六方面，提供了本申请所述晶型A、所述的原料药、或所述的组合物在制备用于治疗或预防下述疾病的药物中的应用，所述的疾病选自：炎症、重症肺炎、脓毒症、全身炎症反应综合征、急性胰腺炎、急性肾损伤、急性肺损伤、急性肝损伤、急性呼吸窘迫综合征、缺血再灌注损伤、动脉粥样硬化、深静脉血栓、缺血性损伤、缺血性卒中、多发性硬化症、系统性红斑狼疮、强直性脊柱炎、银屑病关节炎、溃疡性结肠炎、克罗恩病与类风湿关节炎。

本发明第七方面提供了一种化合物β-O-甲基-D-纤维二糖七硫酸钠盐的纯化方法，其可采用如下任一方法：

（1）反溶剂添加纯化法，具体为：第一溶剂为正溶剂，第二溶剂为反溶剂，采用反溶剂添加方法，对化合物β-O-甲基-D-纤维二糖七硫酸钠盐粗品进行纯化，得到化合物精品；

（2）冷却析晶纯化法，具体为：将化合物β-O-甲基-D-纤维二糖七硫酸钠盐加入混合溶剂Y中，高温溶解，后冷却析晶，得到化合物精品；所述混合溶剂Y为所述第一溶剂和所述第二溶剂的混合溶剂；

（3）打浆纯化法，具体为：以混合溶剂X为溶剂，采用打浆纯化方式，对化合物β-O-甲基-D-纤维二糖七硫酸钠盐粗品进行纯化，得到化合物精品；混合溶剂X为第一溶剂和第二溶剂的混合液；

其中，所述第一溶剂为水，所述第二溶剂选自C1~C6醇、丙酮和乙腈中的一种或几种。

本发明的积极进步效果在于：

（1）经过近100个条件筛选出晶型A和晶型B两种晶型，说明本申请晶型A本身不是容易获得的。

（2）相较于无定型和晶型B，本申请的晶型A固体性状良好，不易转晶，是热力学稳定晶型，且具有良好的流动性，作为原料药制备制剂具有良好的优势。

（3）实际生产过程中，无定型需要在低温下存储及运输，晶型A在高温和光照条件下存在稳定性优势，可放宽对原料药储存和运输温度的限制（可在室温下储存），更为便利、经济、节约能源。

（4）相较于晶型B制备时需用到N,N-二甲基甲酰胺，溶剂残留严重，不易去除，无法实现工业放大的缺点；晶型A所用结晶试剂常见，在市场上容易获得且价格低廉，且结晶条件温和，操作简单，工艺稳定，成本低廉，适合工业化放大，商业化可行性高。

（5）在化合物放大化纯化过程中，因为化合物在水中溶解度较高，聚合物诱导析晶在放大过程有时会出现无法析晶等现象，工艺不稳定。采用本申请特定的反溶剂种类，通过反溶剂添加析晶、冷却析晶或打浆纯化可有效对化合物进行纯化，纯度可以达到98%以上，且条件温和，操作简单，工艺稳定，商业化可行性高。具体的方案中，纯化后可直接得到晶型A作为原料药储存及制备制剂。

附图说明

图1 实施例1制备的化合物的H¹NMR图谱

图2 实施例1制备的化合物的X射线粉末衍射图（XPRD）

图3 晶型A的X射线粉末衍射图（XPRD）。

图4 晶型A的热重分析（TGA-DTG）图谱。

图5 晶型A的差示扫描量热（DSC）图谱。

图6 晶型A的H¹NMR图谱。

图7 晶型B的X射线粉末衍射图（XPRD）。

图8 晶型B的热重分析（TGA-DTG）图谱。

图9 晶型B的差示扫描量热（DSC）图谱。

图10 晶型B的H¹NMR图谱。

图11 晶型A的性状图

图12 晶型B的性状图

具体实施方式

在一个具体实施方案中，所述晶型A使用Cu-Ka辐射，以2θ值表示的X射线粉末衍射图谱的特征衍射峰还包括20.69±0.2°、22.32±0.2°、25.74±0.2°、26.99±0.2°、29.70±0.2°中的任意一个或多个。

在一个具体实施方案中，所述晶型A使用Cu-Ka辐射，以2θ值表示的X射线粉末衍射图谱的特征衍射峰进一步包括10.40±0.2°、11.38±0.2°、14.98±0.2°、17.97±0.2°、20.33±0.2°、23.51±0.2°、24.61±0.2°、28.75±0.2°、34.00±0.2°、35.63±0.2°中的任意一个或多个。

具体地，所述晶型A使用Cu-Ka辐射，以2θ值表示的X射线粉末衍射图谱的特征衍射峰更进一步包括7.63±0.2°、12.08±0.2°、13.45±0.2°、14.12±0.2°、16.27±0.2°、16.75±0.2°、17.11±0.2°、27.58±0.2°、28.04±0.2°、29.22±0.2°、31.18±0.2°、31.80±0.2°、32.62±0.2°、33.05±0.2°、33.41±0.2°、35.03±0.2°、37.12±0.2°、38.04±0.2°、38.40±0.2°、38.77±0.2°、39.33±0.2°中的任意一个或多个。

在一个具体的实施方案中，所述的晶型A使用Cu-Ka辐射，以2θ值表示的X射线粉末衍射图如图3所示。

在一个具体实施方式中，晶型A的热重分析图谱在被加热至170±2℃过程中总失重小于10%（具体为9.41%）。具体地，晶型A的DTG曲线在110±2℃到170±2℃区间内有两个峰，TGA总失重为9.41%。

在一个具体实施方式中，晶型A的热重分析图谱如图4所示。

在一个具体实施方案中，晶型A 的差示扫描量热图谱图谱在148.98±2℃处有吸热峰，185.96±2℃处有放热峰（表示晶型A发生降解）。具体地，晶型A 的差示扫描量热图谱图谱在115.65±2℃到163.13±2℃的区间内有吸热峰，峰高在148.98±2℃处。晶型A 的差示扫描量热图谱图谱在166.51±2℃到199.38±2℃的区间内有放热峰，峰高在185.96±2℃处。

在一个具体实施方案中，晶型A的差示扫描量热图图谱如图5所示。

在一个具体实施方案中，本申请所述晶型A为水合物。

如本申请所使用，术语“化合物粗品”指纯度较低、杂质较多，需进一步纯化后才可以作为“原料药”使用的物质。

如本申请所使用，术语“化合物精品”指相较于“化合物粗品”纯度提高的物质。具体地，指纯度较高可以满足作为“原料药”使用的物质。

如本申请所使用，本领域中，术语“反溶剂添加”是将待纯化产品用某一正溶剂溶解，再向其中加入反溶剂析出产品的过程。

如本申请所使用，本领域中，术语“冷却结晶”是指将待纯化产品加入某一溶剂中加热至溶清后再降温析晶的过程。

如本申请所使用，本领域中，术语“打浆纯化”是指将待纯化产品悬浮于某一溶剂中，搅拌打浆，过滤得到固体的步骤。

在一个具体实施方案中，所述化合物β-O-甲基-D-纤维二糖七硫酸钠盐的纯化方法得到的化合物为晶型A。

在一个具体实施方案中，所述C1~C6醇选自甲醇、乙醇和异丙醇中的一种或者多种。

在一个具体实施方案中，所述反溶剂添加纯化法包括如下步骤：将化合物β-O-甲基-D-纤维二糖七硫酸钠盐溶于第一溶剂中，缓慢加入第二溶剂，搅拌，析晶，过滤，得到化合物精品。

在一个具体实施方案中，所述反溶剂添加纯化法中，所述第二溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇和丙酮中的一种或几种。

在一个具体实施方案中，所述反溶剂添加纯化法中，所述第一溶剂和第二溶剂的体积比为体积比为1:1~1:20（例如1:1.5，1:2.5，1:3，1:3.5，1:4，1:4.5，1:5，1:5.5，1:6，1:6.5，1:7，1:7.5，1:8，1:8.5，1:9，1:9.5，1:10，1:10.5，1:11，1:11.5，1:12，1:12.5，1:13，1:13.5，1:14，1:14.5，1:15，1:15.5，1:16，1:16.5，1:17，1:17.5，1:18，1:18.5，1:19，1:19.5，1:20）。

在一个具体实施方案中，所述反溶剂添加纯化法中，还可进一步包括加入晶种的步骤。

在一个具体的实施方案中，所述反溶剂添加纯化法中，所述第二溶剂采用缓慢加入的方式进行（例如：滴加）。

在一个具体实施方案中，所述反溶剂添加纯化法中，还进一步包括，滤饼在第二溶剂中淋洗或打浆的步骤。

在一个具体实施方案中，所述反溶剂添加纯化法中，还进一步包括干燥滤饼的过程。具体的，所述的干燥可为真空干燥或冷冻干燥。

在一个具体实施方案中，所述打浆纯化法包括如下步骤：将化合物β-O-甲基-D-纤维二糖七硫酸钠盐分散到溶剂X中得到混悬液，搅拌，过滤，得到化合物精品；其中，溶剂X为第一溶剂和第二溶剂的混合液。

晶筛过程中的悬浮转晶（室温或50ºC）过程其实就是打浆的操作。

在一个具体实施方案中，所述打浆纯方法中，所述第二溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇和丙酮中的一种或几种。

在一个具体实施方案中，所述打浆纯化法可在10~50℃下进行，进一步可为室温。

在一个具体实施方案中，所述打浆纯化法中，所述第一溶剂和第二溶剂的体积比为1:5~1:12（例如1:5，1:5.5，1:6，1:6.5，1:7，1:7.5，1:8，1:8.5，1:9，1:9.5，1:10，1:10.5，1:11，1:11.5）。

在一个具体实施方案中，所述打浆纯化法中，还进一步包括，滤饼在第二溶剂中淋洗或打浆的步骤。

在一个具体实施方案中，所述打浆纯化法中，还进一步包括干燥滤饼的过程。具体的，所述的干燥可为真空干燥或冷冻干燥。

在一个具体实施方案中，所述冷却析晶纯化法包括如下步骤：将化合物β-O-甲基-D-纤维二糖七硫酸钠盐加入混合溶剂Y中，高温搅拌至溶解，冷却析晶，过滤，得到化合物精品；所述混合溶剂Y为所述第一溶剂和所述第二溶剂的混合溶剂。

在一个具体实施方案中，所述冷却析晶纯化法中，所述第二溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇和丙酮中的一种或几种。

在一个具体实施方案中，所述冷却结晶纯化法中，所述第一溶剂和第二溶剂的体积比为1:1~1:8（例如1:2，1:2.5，1:3，1:3.5，1:4，1:4.5，1:5，1:5.5，1:6，1:6.5，1:7，1:7.5）。

在一个具体实施方案中，所述冷却结晶纯化法中，还进一步包括，滤饼在第二溶剂中淋洗或打浆的步骤。

在一个具体实施方案中，所述冷却结晶纯化法中，还进一步包括干燥滤饼的过程。具体的，所述的干燥可为真空干燥或冷冻干燥。

如本申请所使用，术语“原料药”指用于进一步制备或生产各类制剂的原料药物（尤其是制剂中的有效成份,也称为活性成分）或合成中间体，它是由化学合成或者生物技术等方法制备的用来作为药用的粉末、结晶等形式，但受试者无法直接服用的物质。

在一个具体实施方案中，本申请如上所述的晶型A在所述原料药（β-O-甲基-D-纤维二糖七硫酸钠盐原料药）中的重量百分比为80.0%~100%，进一步可为90.0%~100%，例如，为90.0%，91.0%，92.0%，93.0%，94.0%，95.0%，96.0%，97.0%，98.0%，99.0%，99.1%，99.2%，99.3%，99.4%，99.5%，99.6%，99.7%，99.8%，99.9%或100%。所述原料药中除晶型A外还可能包括化合物的无定型、其他晶型、水、或者质量标准允许范围内其他例如杂质或溶剂残留等物质。

在一个具体实施方案中，本申请所述晶型A在所述组合物中的重量百分比为1%-99.9%，例如，本申请所述化合物的晶型在所述组合物中的重量百分比为0.1%，1%，2%，3%，4%，5%，6%，7%，8%，9%.10%，11%，12%，13%，14%，15%，16%，17%，18%，19%，20%，21%，22%，23%，24%，25%，26%，27%，28%，29%，30%，31%，32%，33%，34%，35%，36%，37%，38%，39%，40%，41%，42%，43%，44%，45%、46%，47%，48%，49%，50%，51%，52%，53%，54%，55%，56%，57%，58%，59%，60%，61%，62%，63%，64%，65%，66%，67%，68%，69%，70%，71%，72%，73%，74%，75%，76%，77%，78%，79%，80%，81%，82%，83%，84%，85%，86%，87%，88%，89%，90%，91%，92%，93%，94%，95%，96%，97%，98%，99%，99.1%，99.2%，99.3%，99.4%，99.5%，99.6%，99.7%，99.2%，99.8%，99.9%。

在一个具体的实施方案中，本申请所述的组合物为稳定的药物组合物。

在一个具体的实施方案中，本申请提供了一种组合物，其包含所述原料药以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。

如本申请所使用的术语“药学上可接受赋形剂”指不对生物体引起显著的刺激并且不妨碍被给予的活性成分（如本申请所述化合物的晶型A或原料药）的生物学活性和特性的赋形剂。具体地，所述药学上可接受赋形剂包括但不限于：稀释剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、润滑剂、pH值调节剂、缓冲剂、着色剂、调味剂、防腐剂或其它常规添加剂。

在一个具体的实施方案中，所述的组合物进一步包括缓冲剂。具体的，所述的缓冲剂包括但不限于：磷酸盐缓冲剂（如：磷酸氢二钠与磷酸二氢钠缓冲体系）、柠檬酸盐缓冲剂缓冲体系（如：柠檬酸钠/柠檬酸缓冲体系）、或醋酸盐缓冲剂（如：醋酸钠/醋酸缓冲体系）。

与本申请所述晶型A以形成药物组合物的药学上可接受赋形剂可取决于给予所述药物组合物的预期方法而定。

本申请所述晶型A（或所述原料药）可具有全身和/或局部的活性。为此，其可以合适的方式给药，例如通过口服、肠胃外、肺部、经鼻、舌下、经舌、口腔、直肠、阴道、皮肤、透皮、结膜、经耳途径给药或作为植入物或支架。对于这些给药途径，本申请所述化合物的晶型可以以合适的给药形式给药。

具体的，对于口服给药，可将本申请所述晶型A（或所述原料药）配制成本领域已知的剂型，其快速和/或以缓和方式递送，所述剂型为例如片剂、口服崩解片剂、薄片、冻干剂、胶囊（例如硬明胶胶囊或软明胶胶囊）、糖衣片剂、颗粒剂、丸剂、粉剂、乳剂、悬浮剂、气溶胶或溶液。

具体的，肠胃外给药可通过避免吸收步骤（例如静脉内、动脉内、心脏内、脊柱内或腰椎内的）或包括吸收步骤（例如肌肉内、皮下、皮内、经皮或腹膜内的）进行。适于肠胃外给药的给药形式尤其是溶液、悬浮剂、乳剂、冻干剂或无菌粉剂形式的注射用和输液用制剂。

在一个具体的实施方案中，所述的组合物可为无菌粉剂。使用时将无菌粉剂配置成可注射溶液以用于临床使用（例如，将所述粉针剂溶解于注射用水、林格氏溶液、等渗盐水、葡萄糖溶液等制备可注射溶液）。具体的，所述的无菌粉剂中可进一步包括缓冲剂（所述缓冲剂可以有效抑制在无菌粉剂在配置成可注射溶液后，所述化合物的酸水解/降解）。

作为本发明一个具体的实施方式，所述的晶型A、所述的原料药、或所述的组合物作为细胞外组蛋白抑制剂在制备或治疗细胞外组蛋白介导的疾病中的用途。

本申请所用的术语“细胞外组蛋白介导的疾病或病症”种类可为专利CN201880080079.X所述的细胞外组蛋白介导的疾病或病症中的任意一种，本申请将专利CN201880080079.X引入作为参考。

正常情况下，组蛋白只存在于细胞核中，与DNA形成核小体。在疾病状态下，组蛋白和核小体从死亡细胞释放到循环中，释放的组蛋白对细胞和内皮有直接的毒性作用，导致内皮功能障碍，细胞死亡，组织损伤，血小板活化，诱导红细胞聚集和裂解，微循环障碍，器官损伤或功能障碍。细胞外组蛋白除了组织细胞裂解后释放的组蛋白，还包括免疫细胞裂解后释放出来的组蛋白（如中性粒细胞诱捕网中的组蛋白）。

术语“细胞外组蛋白介导的疾病或病症”一般指由于组蛋白释放到循环后（细胞外组蛋白）引发的相关疾病或病症，包括但不限于，（1）炎症，包括炎症性疾病，高炎性反应、炎性损伤、肺炎（包括重症肺炎）（2）急性器官损伤或器官功能障碍：包括但不限于急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合征、急性肾损伤、急性肝损伤、急性胰腺炎；（3）全身炎症反应综合征，全身炎症反应可由感染性诱因或者感染性诱因引发，感染性诱因括细菌、病毒、真菌、寄生虫、朊病毒等；非感染诱因包括手术、创伤、出血、烧伤、急性胰腺炎和急性肾损伤；（4）脓毒症（包括脓毒性休克），一般由感染性（细菌、病毒、真菌、寄生虫、朊病毒）引发；（5）止血或血管阻塞（主要由细胞外组蛋白介导的局部凝血导致的止血或血栓性疾病）例如：心血管疾病（例如动脉粥样硬化）、凝血和血栓形成（例如深静脉血栓形成）；（6）缺血性损伤，缺血性卒中；（7）缺血再灌注损伤；（8）自身免疫性疾病状态和炎症性状态（例如在自身免疫性疾病发病期的炎症性状态），包括但不限于多发性硬化症、高炎症性疾病状态、系统性红斑狼疮、脊柱关节炎、强直性脊柱炎、银屑病关节炎、反应性关节炎、肠病性关节炎、溃疡性结肠炎、克罗恩病、肠易激病、类风湿关节炎、青少年类风湿关节炎、抗中性粒细胞胞浆抗体、相关血管炎（例如肉芽肿合并多血管炎、嗜酸性肉芽肿合并多血管炎和镜下性多血管炎），特征为小血管的破坏和发炎、家族性地中海热、肌萎缩性侧索硬化、干燥综合征、早期关节炎、病毒性关节炎、牛皮癣、与年龄有关的器官纤维化、特发性肺纤维化、少年糖尿病（I型）、糖尿病（2型）、抗磷脂综合症；（9）中枢神经系统疾病，例如亨廷顿氏病。

本领域技术人员须知，随着医学发展，疾病诊断标准会相应的发展，且各国家地域疾病的标准也会存在不同。本申请所述疾病或症状在实践中会出现各国不同诊断标准。应当理解为与细胞外组蛋白释放相关的所有的疾病和病症种类都在本申请的范围内。

本申请述及的各实施方案或者不同优选级别的方案，除非另有说明，均可任意组合。

下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例

实施例1 β-O-甲基-D-纤维二糖七硫酸钠盐的制备

重复专利CN201880080079.X示例1的制备方法，制备得到β-O-甲基-D-纤维二糖七硫酸钠盐（即专利中的mCBS.Na，纯度90%），H¹NMR如图1所示，XRPD（图2）无明显特征峰，为无定型。

实施例2 化合物纯化

2.1 反溶剂添加

取实施例1制备得到β-O-甲基-D-纤维二糖七硫酸钠盐粗品，用纯化水溶解，室温下缓慢滴加第二溶剂，继续搅拌（得到混悬液），抽滤得到湿滤饼，室温下真空干燥，得到化合物精品，具体如表1-1所示。

表1-1

注四氢呋喃滴加至1:20的过程底部析出白色粘稠物，离心，鼓风干燥得到固体。

N,N-二甲基甲酰胺滴加过程中溶液澄清，未得到固体。

2.2 冷却析晶：

取实施例1制备得到β-O-甲基-D-纤维二糖七硫酸钠盐粗品，加入表1-2所示的混合溶剂中，高温下搅拌至溶液澄清后进行冷却析出白色固体，抽滤，干燥得到化合物精品，具体如表1-2所示。

表1-2

2.3 打浆纯化

实施例1制备得到β-O-甲基-D-纤维二糖七硫酸钠盐粗品分散到表1-3所示的混合溶剂中得到悬浊液，搅拌，过滤，得到化合物精品，具体如表1-3所示。

表1-3

实施例3 晶型筛选

本实施例中，采用反溶剂添加、气固扩散、气液扩散、缓慢挥发、室温/50 ºC搅拌、缓慢降温、高聚物诱导等方式筛选了近100个条件，得到了晶型A和晶型B。

3.1 反溶剂添加：称取起始样品在玻璃小瓶中，加入相应溶剂，搅拌进行溶解，得到澄清溶液。向上述玻璃瓶中逐步加入相应反溶剂，实验结果如表2-1所示。

表2-1反溶剂添加实验结果

3.2 气固扩散：称取起始样品在玻璃小瓶中。取易挥发溶剂在大玻璃瓶中。将上述小玻璃瓶放置在大玻璃瓶中，放置10天后对固体进行XRPD检测。实验结果表明（表2-2），气固扩散法仅得到无定形。

表2-2 气固扩散实验结果

3.3 气液扩散称取一定质量的起始样品在玻璃小瓶中，加入相应溶剂，室温震荡进行溶解，得到澄清溶液。取反溶剂在大玻璃瓶中。将上述小瓶敞口放置在大玻璃瓶中，盖紧盖子。放置在室温条件下，直至有固体析出。对所得固体进行 XRPD 表征。实验结果表明（表2-3），通过气液扩散法筛选得到的产品均为无定形。

表2-3 气液扩散实验结果

3.4 缓慢挥发称取一定质量起始样品在玻璃小瓶中，加入相应溶剂进行溶解。封口，扎几个针孔，在50℃条件进行挥发。对得到的固体进行 XRPD 检测。实验结果表明（表2-4），通过挥发法筛选得到的产品均为无定形。

表2-4 挥发实验结果

3.5 冷却析晶称量起始物料在小瓶中。加入相应溶剂，高温下搅拌至溶液澄清后进行冷却析晶。对最终得到的固体进行 XRPD 表征，实验结果如表2-5所示。

表2-5 冷却析晶实验结果

3.6 室温悬浮转晶称取一定质量起始样品在小瓶中，加入相应溶剂，室温条件下搅拌得到悬浊液，几天后离心分离固体，进行 XRPD 检测。实验结果见表2-6。

表2-6 室温悬浮转晶实验结果

3.7 50 ºC悬浮转晶称取一定质量起始样品在小瓶中，加入相应溶剂，50 ºC条件下搅拌得到悬浊液。几天后离心分离固体，干燥后进行 XRPD 检测，实验结果见表2-7。

表2-7 50℃悬浮转晶实验结果

3.8 聚合物诱导称取一定质量起始样品在玻璃小瓶中，加入相应溶剂进行溶解。向滤液中加入PVP K30，在室温条件进行挥发。对最终得到的固体进行 XRPD 表征。实验结果表明（表 2-8），通过聚合物诱导得到的大多数为无定形，只有在水溶液中挥发可得到晶型 A。

表2-8 聚合物诱导

实施例4 晶型的鉴定

使用布鲁克 D8 型号 X-射线粉末衍射仪，在环境条件下收集样品的 X-射线粉末衍射数据，X-射线发射器功率为 300 W。步长为 2θ = 0.02°，电压为 30 kV，电流为 10mA。X-射线管采用 Cu 靶 (Kα)，Kα2/Kα1强度比为0.50（1.54439 Å/1.5406 Å）

热重分析（TGA）：使用梅特勒TGA 2热重仪收集样品的热重数据。取几毫克样品放入氧化铝坩埚中，在 N2 保护下从室温加热到目标温度，N2 流速为 50 mL/min，加热速率为10 ºC/min。

差示扫描量热（DSC）：使用梅特勒差式扫描量热仪 DSC 3 收集样品的热数据。称量几毫克样品在 Tzero 铝盘中，用 Tzero 密封盖密封。在 N2 保护下加热，N2 流速为 50mL/min，加热速率为10 ºC/min。

4.1 晶型A

晶型A的XRPD图谱如图3所示，显示其峰型较好，结晶度较高，具体数据如下表3所示。

晶型A的TGA-DTG图谱如图4所示；DSC图谱如图5所示，可以看到DTG曲线在110℃~170℃区间有两个峰，TGA总失重为9.41%，对应的DSC曲线在148.98℃有一个吸热峰， H¹NMR图谱图中未出现甲醇或乙醇溶剂峰（晶型A为甲醇/水或乙醇/水打浆得到），说明晶型 A为水合物。

表3. 晶型A的XRPD衍射峰数据

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4.2 晶型B

晶型B的XRPD图谱如图7所示，具体数据如下表4所示。

晶型B的TGA-DTG图谱如图8所示；DSC图谱如图9所示，显示：DTG曲线在分解前无明显的特征峰，对应的DSC曲线也无吸热峰，说明晶型B为无水物，TGA总失重为7.98%。经H¹NMR表征， H¹NMR图谱与起始化合物一致，图中出现DMF溶剂峰（晶型B为DMF/水打浆得到），说明晶型B中含有DMF溶剂，结合DSC和TGA图谱，TGA失重台阶平缓且DSC中无明显脱溶剂峰，因此晶型 B应是含有游离的DMF溶剂（由于DMF沸点较高，干燥时部分残留在固体中）。

表4. 晶型B的XRPD衍射峰数据

实施例5 晶型A的放大制备

取50g实施例1制备得到无定型β-O-甲基-D-纤维二糖七硫酸钠盐，用纯化水（3~5倍化合物重量）溶解，室温下缓慢滴加甲醇（2~10倍纯化水体积），期间加入晶种，养晶半小时后继续滴加剩下甲醇，继续搅拌，抽滤得到湿滤饼，湿滤饼在甲醇中淋洗或打浆、抽滤、室温下真空干燥，得到白色粉末固体，XPRD检测得到晶型A。多批次放大制备，晶型A结晶度高，性状较好（为白色粉末，图11），且结晶生成晶型A可有效提高化合物纯度，纯度均可达99.8%以上，收率90%以上。

实施例6 晶型B的制备

以N,N-二甲基甲酰胺为反溶剂，采用反溶剂添加、冷却析晶和打浆纯化等方式均无法对β-O-甲基-D-纤维二糖七硫酸钠盐粗品进行有效纯化。

取纯化后的β-O-甲基-D-纤维二糖七硫酸钠盐无定形（99.8%以上）在N,N-二甲基甲酰胺/水中搅拌得到晶型B，性状为蜡状固体（图12），结晶度不高，且制备时需要用到N,N-二甲基甲酰胺，其沸点较高，溶剂残留严重，不易去除，制备过程无法实现工业放大，也无法有效提高原料药纯度。

实施例7 转晶实验（固体悬浮实验）

称取起始样品在小瓶中，按表5加入相应溶剂，在室温下磁力搅拌。 3天后离心分离固体，干燥后进行 XRPD 检测。实验结果表明，晶型 A在不同溶剂中搅拌后仍为晶型 A；晶型B仅在DMF/水中未发生转晶，在甲醇/水和乙醇/水中均转为晶型A。因此，晶型A在多种溶剂中均能稳定存在，重现性好，制备工艺便捷，为热力学最稳定晶型。

表5 转晶实验结果

实施例8 稳定性试验

对晶型样品进行了影响因素试验，实验内容和结果如表6所示，晶型B在40℃条件下10天总杂含量开始有明显的提升，且固体颜色由白色变成灰色。无定型在40℃条件下总杂含量有明显提升，尤其是到30天总杂含量非常高，且外观也变成灰色。而晶型A在40℃和光照（5000勒克斯）条件下至少可以稳定放置30天，外观未发生变化。

表6

实施例9 常温稳定性试验

对晶型A样品进行了常温（25℃）长期稳定性试验，结果（表7）所示，晶型A在常温保存6个月有关物质的总含量基本保持不变，显示出其可以在常温下稳定保存至少6个月。相较于无定型需要在低温下保存，晶型A一定程度上可放宽对原料药储存温度的限制。

表7

实施例10 流动性测试

通过可压性系数对晶型流动性进行研究，分别测定堆密度和振实密度，然后根据下面的公式计算可压性系数：可压性系数(％)＝(振实密度-松密度)/振实密度×100％。结果见表8：

表8 流动性测试结果

结果表明，本发明晶型A的可压性系数为26.00％，晶型B以及无定型的可压性系数分别为42.31％和40.77%，说明本发明晶型A相比晶型B和无定型具有更好的流动性，更加适合制剂的制备。

实施例11 压力稳定性考察

对晶型A和晶型B分别施加50、100、150及200N的压力压片后，通过XRPD观察是否发生晶型变化，结果显示，压片后晶型A的晶型未发生变化，而晶型B中出现了无定型。

实施例 12 片剂制备-直压工艺

按照表9处方组成，采用直压工艺进行片剂制备。

预混：先将原料药、甘露醇、交联羧甲基纤维素钠投入到三维运动混合机中混合10min，

总混：取部分上述颗粒与硬脂酸镁混合过40目筛网，然后投入到三维混合机中混合5min。

压片：将总混颗粒加入压片机料斗中，开启下料挡板，通过视镜观察加料器中颗粒填充足后，按片重范围调节装量使片重符合要求，调节压片控制片平均硬度至目标范围内。

表9

晶型A可采用直压工艺进行片剂制备，压片效果较好，无松片、裂片等问题，片重差异可满足要求，片剂溶出度（pH 6.8）可达到100%，在20min内可全部溶出。

晶型B和无定型的流动性不好，申请人尝试加入胶态二氧化硅（0.5%-3%）改善流动性，并调整辅料种类和用量，但压片效果并不理想，会出现容易裂片，片重容易超过±5%目标片重范围，压片时会粘冲模等问题。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims

1.一种化合物β-O-甲基-D-纤维二糖七硫酸钠盐晶型A，其特征在于，使用Cu-Ka辐射，以2θ表示的X射线粉末衍射图谱的特征衍射峰包括19.60±0.2°、20.69±0.2°、22.32±0.2°、22.64±0.2°、25.45±0.2°、25.74±0.2°、26.99±0.2°、29.70±0.2°。

2.如权利要求1所述的晶型A，其特征在于，使用Cu-Ka辐射，以2θ值表示的X射线粉末衍射图谱的特征衍射峰还包括10.40±0.2°、11.38±0.2°、14.98±0.2°、17.97±0.2°、20.33±0.2°、23.51±0.2°、24.61±0.2°、28.75±0.2°、34.00±0.2°和35.63±0.2°中的任意一个或多个。

3.如权利要求1所述的晶型A，其特征在于，所述的晶型A的差示扫描量热图谱在148.98±2℃处有吸热峰，185.96±2℃处有放热峰；和/或，

所述的晶型A的热重分析图谱在加热至170±2℃过程中总失重小于10%。

4.如权利要求1所述的晶型A，其特征在于，所述的晶型A为水合物晶型。

5.一种原料药，其特征在于，包含权利要求1~4任一项所述的晶型A。

6.如权利要求5所述的原料药，其特征在于，所述的晶型A在所述原料药中的重量百分比为80.0%~100%。

7.一种组合物，其特征在于，包含权利要求1~4任一项所述的晶型A，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。

8.如权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述的组合物为无菌粉剂，和/或，所述药学上可接受的赋形剂为缓冲剂。

9.如权利要求1-4任一项所述的晶型A，权利要求5或6所述的原料药，权利要求7或8所述的组合物在制备用于治疗下述疾病的药物中的应用，所述的疾病选自：脓毒症、急性肾损伤、急性肝损伤、缺血再灌注损伤、深静脉血栓、多发性硬化症。

10.一种化合物β-O-甲基-D-纤维二糖七硫酸钠盐的纯化方法，其特征在于，采用如下任一方法：

（1）反溶剂添加纯化法，具体为：第一溶剂为正溶剂，第二溶剂为反溶剂，采用反溶剂添加方式，对化合物β-O-甲基-D-纤维二糖七硫酸钠盐粗品进行纯化，得到化合物精品；

11.如权利要求10所述的纯化方法，其特征在于，所述化合物精品为权利要求1-4任一项所述的晶型A。

12.如权利要求10所述的纯化方法，其特征在于，所述C1~C6醇选自甲醇、乙醇和异丙醇中的一种或者多种。