CN116813631A - 一种喜树碱类化合物及其偶联物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种新型结构的喜树碱类化合物，其为结构式I所示的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药：

Description

一种喜树碱类化合物及其偶联物
相关申请的交叉引用
本专利申请要求于2021年12月16日提交的申请号为CN202111544686.7的中国发明专利申请的优先权权益，在此将其全部内容引入作为参考。
技术领域
本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明涉及一种新型结构的喜树碱类似物及其在制备药物、特别是抗体药物偶联物中的应用。
背景技术
DNA拓扑异构酶是广泛存在于生物体内的一类必需酶，是催化DNA拓扑学异构体相互转变的酶的总称，主要分为拓扑异构酶I(Topoisomerase I，Topo I)与拓扑异构酶II(Topoisomerase II，Topo II)这两类。其中，拓扑异构酶I在多种肿瘤细胞如结肠癌、宫颈癌、卵巢癌中有高表达，含量大大高于正常组织或细胞的含量，并且在S期肿瘤细胞中活性大幅提高，因此针对拓扑异构酶I的活性抑制剂可选择性抑制增殖期肿瘤细胞DNA复制。
研究表明，拓扑异构酶I是喜树碱(Camptothecin，CPT)及其类似物的主要靶点。喜树碱是一种细胞毒性喹啉类生物碱，可使正常解离的拓扑异构酶I和DNA链的共价化合物保持稳定，形成三元复合物。随着三元复合物的形成，CPT抑制了最初由拓扑异构酶I介导的DNA裂解和重新链接反应，从而抑制DNA的合成，导致细胞死亡，发挥抗癌作用。
鉴于上述性质，喜树碱及其类似物已经成为一类重要的抗肿瘤药物；并且作为小分子药物用于抗体药物偶联物中。抗体药物偶联物(Antibody-drug conjugate，ADC)是由抗体或抗体类配体、小分子药物以及将该配体与药物偶联起来的连接子共同组成的一种新型肿瘤治疗药物，其结合了小分子药物的抗肿瘤活性和抗体或抗体类配体的高选择性、稳定性和良好的药代动力学特征，已经成为目前肿瘤治疗领域的关注热点。
迄今，国内外使用喜树碱(CPT)类化合物制备的ADC药物主要有：
1.Sacituzumab govitecan(IMMU-132)，其是将拓扑异构酶I抑制剂SN38通过CL2A-SN38含药连接子与靶向Trop-2的SAC抗体偶联，制备得到DAR＝8的靶向Trop-2ADC药物。
2.第一三共的Enhertu(DS-0821)，其是将Exatecan通过MC-GGFG-Dxd含药连接子与靶向HER2抗体Trastuzumab偶联，制得DAR＝8的ADC药物。
3.第一三共在研的DS-1062，其是将Exatecan通过MC-GGFG-Dxd含药连接子通过随机偶联方式与靶向Trop-2的hTINA1抗体偶联，制备得到DAR＝4的ADC药物；DS-7300，其是将MC-GGFG-Dxd含药连接子通过随机偶联方式与靶向B7H3的hM30抗体偶联，制备得到DAR＝4的靶向B7H3 ADC药物。
以上ADC药物均显示出了一定的治疗效果，但也存在一定的问题。例如，由于IMMU-132中碳酸酯键的化学不稳定性，IMMU-132在血浆中半衰期仅为约12h，可能导致副作用增加等问题，患者会出现包括腹泻、疲劳、恶心、发热性中性粒细胞减少和白细胞减少等的不同程度毒性反应(US2014/0170063A1)。而DS-1062和DS-7300采用随机偶联的方式会造成ADC产物具有较大的异质性。
目前，含喜树碱类化合物的ADC的可选择种类仍比较少，而且存在目标人群范围比较窄、单药治疗效果不佳、毒副作用强等不利之处。因此，仍需要开发新的喜树碱类化合物以及相应的ADC，以满足治疗需求。
发明内容
鉴于上述问题，本发明的目的是提供一种新结构的化合物以及采用其制备的抗体药物偶联物，该新结构的化合物为喜树碱类化合物本身，或者为喜树碱或喜树碱类化合物与连接子连接形成的化合物。
在本发明的上下文中，卤素是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)。
在本发明的上下文中，“接头”与“连接子”可互换使用。
在本发明的上下文中，术语“含药连接子”是指药物(例如小分子药物，诸如喜树碱类化合物)与连接子直接或间接以共价键键合得到的化合物。
在本发明的上下文中，当基团被取代时，其可以由一个或多个取代基取代，取代基的数目取决于基团所含的氢原子数目，全部氢原子均可被取代。
本发明的技术方案如下。
第一方面，本发明提供喜树碱类化合物。
在本发明的第一方面，所述喜树碱类化合物为结构式I所示的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药：
在结构式I中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，R1、R2、R3、R4独立地为氢、卤素、羟基、C1-6烷氧基、氨基或取代氨基、C1-7烷基或取代的C1-7烷基，或者R1、R2、R3、R4中的任意两个连同它们所连接的碳原子构成C3-6环状烷基。当R1、R2、R3、R4独立地为C1-6烷氧基时，所述C1-6烷氧基包括直链或支链的C1-6烷氧基，优选地为直链或支链的C1-3烷氧基，更优选甲氧基。当R1、R2、R3、R4独立地为取代氨基时，所述取代氨基为由选自甲基和乙基的一个或多个取代基取代的氨基。当R1、R2、R3、R4独立地为C1-7烷基或取代的C1-7烷基时，所述C1-7烷基或取代的C1-7烷基包括直链或支链的C1-7烷基或取代的C1-7烷基，并且，取代的C1-7烷基为由选自环丙基和环丁基的一个或多个取代基取代的C1-7烷基；或者，所述直链或支链的C1-7烷基或取代的C1-7烷基优选为C1-3烷基或取代的C1-3烷基，例如甲基、卤代甲基(优选三氟甲基)。
在结构式I中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，G为氢、卤素、甲基或甲氧基。优选地，G为氢、氟或氯。
在结构式I中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，Y为氧、硫、砜、亚砜、亚甲基或取代亚甲基。取代亚甲基可以是亚甲基的一个氢被取代，也可以是两个氢同时被取代，取代基可以为苄基或烷基；当取代基为烷基时，所述烷基与R3和/或R4以及连同它们所连接的碳原子可以构成C3-6元并环或螺环的结构。当Y为取代亚甲基时，取代亚甲基的取代基优选为烷基，更优选为直链或支链的C1-4烷基。优选地，Y为氧、硫、砜或亚砜；或者，优选地，Y为氧、硫或亚甲基。
在结构式I中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，X为氧或硫。
在结构式I中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，n＝0或1。
结构式I中，在R1、R2、R3、R4同时为氢、X为氧、n＝0的情况下，当Y为亚甲基时，G不可为氢或氟；而当Y为氧或硫时，G不可为氢。
优选地，R1、R2、R3、R4独立地为氢、卤素(例如氟)、C1-7烷基或取代的C1-7烷基，或者R1、R2、R3、R4中的任意两个连同它们所连接的碳原子构成C3-6环状烷基(例如C3-5环状烷基)。进一步地，R1、R2可以是相同的；和/或，R3、R4可以是相同的。
优选地，Y为由烷基取代的亚甲基，所述烷基与R3和/或R4以及连同它们所连接的碳原子可以构成C3-6元并环或螺环的结构。
优选地，X可以为氧。
优选地，X为氧，G为氢、卤素(例如氟或氯)、甲基或甲氧基，Y和R1、R2、R3、R4如上文所定义。
优选地，X为氧，G为氢，Y为亚甲基或取代亚甲基、氧或硫，R1、R2、R3、R4如上文所定义。
优选地，X为氧，G为氟，Y为亚甲基或取代亚甲基、氧或硫，R1、R2、R3、R4如上文所定义。
优选地，X为氧，G为氯，Y为亚甲基或取代亚甲基、氧或硫，R1、R2、R3、R4如上文所定义。
优选地，X为氧，G为甲基，Y为亚甲基或取代亚甲基、氧或硫，R1、R2、R3、R4如上文所定义。
优选地，X为氧，G为甲氧基，Y为亚甲基或取代亚甲基、氧或硫，R1、R2、R3、R4如上文所定义。
优选地，X为氧，G为氢，Y为氧、砜或亚砜，R1、R2、R3、R4如上文所定义。
优选地，X为氧，G为氢，Y为砜或亚砜，R1、R2、R3、R4如上文所定义。
优选地，本发明提供的结构式I所示的化合物进一步为结构式IA所示的化合物：
结构式IA中，基团R1、R2、R3、R4与上文结构式I中基团R1、R2、R3、R4的定义相同，但是R1、R2、R3、R4不同时为氢。
或者，在本发明的第一方面，所述喜树碱类化合物为结构式II所示的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药：
在结构式II中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，R5为C1-5烷基或由一个或多个取代基取代的C1-5烷基、C3-6环状烷基或由一个或多个取代基取代的C3-6环状烷基、苯基或取代苯基。当R5为C1-5烷基或取代的C1-5烷基时，所述C1-5烷基包括直链或支链的C1-5烷基。进一步地，R5为C1-4直链烷基。当R5为取代的C1-5烷基或取代的C3-6环状烷基时，取代基选自卤素、羟基、甲氧基、三氟甲基、氨基或取代氨基、甲磺酰基和C3-6环状烷基；并且其中，取代氨基为由选自甲基和乙基的一个或多个取代基取代的氨基。当R5为取代苯基时，取代基选自烷基(例如C1-6烷基、优选C1-3)或卤素。
在结构式II中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，G为氢、卤素(例如氟)、甲基或甲氧基。优选地，G为氢、氟或氯。
结构式II中，X为氧或硫。
结构式II中，n＝0或1。
结构式II中，当X为氧、G为氢、n＝0时，R5不可为正丁基。
优选地，本发明提供的结构式II所示的化合物进一步为结构式IIA所示的化合物：
结构式IIA中，基团R5与上文结构式II中基团R5的定义相同，但是R5不可为正丁基。
根据本发明的具体实施方式，在本发明的第一方面，所述化合物具有如下结构：
第二方面，本发明提供具有通式“L-A-CPT”所示结构的含药连接子，其中L表示用于抗体药物偶联物(ADC)的连接子，A表示一个或多个氨基酸，CPT为喜树碱类化合物。
在本发明的第二方面，所述具有通式L-A-CPT所示结构的含药连接子为结构式III所示的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药。
在结构式III中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，E选自如下基团，其中，表示与M的连接位点：
E-1：E-2：/>E-3：/>E-4：/>E-5：和E-6：/>
在结构式III中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，M为亚苯基或由一个或多个取代基取代的亚苯基，或化学键；在取代的亚苯基中，所述取代基选自烷基(例如C1-C6烷基、优选C1-C4烷基)、卤代烷基(例如卤代C1-C6烷基、优选卤代C1-C4烷基，例如三氟甲基)、烷氧基(例如C1-C6烷氧基、优选C1-C4烷氧基，优选甲氧基)、卤素、酯基、酰胺基和氰基；优选地，M为卤素取代的亚苯基。
在结构式III中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，SP1选自C1-8亚烷基、C1-8亚环烷基或C1-21(优选C1-16、更优选C1-11)直链亚杂烷基，所述C1-21直链亚杂烷基包含1-11个(优选1-6个)选自N、O或S的杂原子，其中所述C1-8亚烷基、C1-8亚环烷基和C1-21直链亚杂烷基各自独立地任选被选自羟基、氨基、磺酸基和氰基的一个或多个取代基取代。
在结构式III中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，SP2选自-NH(CH2CH2O)aCH2CH2CO-、-NH(CH2CH2O)aCH2CO-、-S(CH2)aCO-或化学键，其中a为1-20的整数，优选1-10的整数，更优选1-6的整数。
在结构式III中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，A表示2-4个氨基酸。其中，A表示2个氨基酸时，可以为NH-Phe-Lys-CO、NH-Val-Ala-CO、NH-Val-Lys-CO、NH-Ala-Lys-CO、NH-Val-Cit-CO、NH-Phe-Cit-CO、NH-Leu-Cit-CO、NH-Phe-Arg-CO或NH-Gly-Val-CO，优选为NH-Phe-Lys-CO、NH-Val-Ala-CO或NH-Val-Cit-CO；A表示3个氨基酸时，可以为NH-Glu-Val-Ala-CO、NH-Glu-Val-Cit-CO或NH-Ala-Ala-Ala-CO，优选为NH-Glu-Val-Ala-CO或NH-Ala-Ala-Ala-CO；A表示4个氨基酸时，可以为NH-Gly-Gly-Phe-Gly-CO或NH-Gly-Phe-Gly-Gly-CO，优选为NH-Gly-Gly-Phe-Gly-CO。优选地，A为NH-Val-Ala-CO、NH-Gly-Gly-Phe-Gly-CO或NH-Ala-Ala-Ala-CO。
在结构式III中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，CPT为喜树碱类化合物。
其中，当基团E为E1时，本发明提供的结构式III进一步为结构式IIIA：
在结构式IIIA中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，R6、R7独立地为氢、卤素或Ar’S，Ar’为苯基或由一个或多个取代基取代的苯基，在取代的苯基中，所述取代基选自烷基(例如C1-C6烷基、优选C1-C4烷基)、烷氧基(例如C1-C6烷氧基、优选C1-C4烷氧基，优选甲氧基)、卤素、酯基、酰胺基和氰基。优选地，Ar’为苯基、4-甲基甲酰基取代苯基或4-甲酰基吗啉取代苯基
例如，在结构式III和结构式IIIA中，CPT为本发明上文第一方面中提供的结构式I或结构式IA所示的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药，以及对应的具体化合物。
当CPT为本发明上文第一方面中提供的结构式I所示的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药时：
结构式I中，基团G、X、Y、R1、R2、R3、R4、n与上文第一方面中结构式I中基团G、X、Y、R1、R2、R3、R4、n的定义相同。
当CPT为本发明上文第一方面中提供的结构式IA所示的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药时：
结构式IA中，基团R1、R2、R3、R4与上文第一方面中结构式IA中基团R1、R2、R3、R4的定义相同，但是R1、R2、R3、R4可以同时为氢。
特别地，当结构式IIIA所示化合物中的“CPT”为结构式IA所示化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药时，R6和R7可以同时为氢，或不同时为氢。同样地，结构式IA中的R1、R2、R3、R4可以同时为氢，或不同时为氢。根据本发明的具体实施方式，当R6和R7同时为氢时，结构式IA中的R1、R2、R3、R4不同时为氢；当R6和R7不同时为氢时，结构式IA中的R1、R2、R3、R4可以同时为氢，或不同时为氢。
在结构式III和结构式IIIA中，结构式I或结构式IA所示的化合物经由其氨基(分别参见结构式I或结构式IA)与A的羧基通过酰胺键相连，即在结构式I或结构式IA所示化合物的氨基与结构式III或IIIA中A的羧基形成了酰胺键。
又如，在结构式III和结构式IIIA中，CPT为本发明上文第一方面中提供的结构式II或结构式IIA所示的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药，以及对应的具体化合物。
当CPT为本发明上文第一方面中提供的结构式II所示的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药时：
结构式II中，基团G、R5、X、n与上文第一方面中结构式II中基团G、R5、X、n的定义相同。
当CPT为本发明上文第一方面中提供的结构式IIA所示的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药时：
结构式IIA中，基团R5与上文第一方面中结构式IIA中基团R5的定义相同，但是可以为正丁基。
在结构式III和结构式IIIA中，结构式II或结构式IIA所示的化合物经由其氨基(分别参见结构式II或结构式IIA)与A的羧基通过酰胺键连接，即结构式II或结构式IIA所示化合物的氨基与结构式III或IIIA中A的羧基形成酰胺键。
上文提出的化合物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、14-P、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药均可用作结构式III中的“CPT”，并通过其氨基与结构式III或IIIA中A的羧基通过酰胺键连接。
又如，在结构式III和结构式IIIA中，CPT可以为结构式IV所示的依喜替康(exteacan)衍生物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药：
在结构式IV中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，R8为氢、三氟甲基、C1-5烷基或由一个或多个取代基取代的C1-5烷基、C3-6环状烷基或由一个或多个取代基取代的C3-6环状烷基、或卤素。
当R8为取代的C1-5烷基或取代的C3-6环状烷基时，所述取代基选自卤素、羟基、甲氧基、三氟甲基、氨基或取代氨基、甲磺酰基和C3-6环状烷基；并且其中，取代氨基为由选自甲基和乙基的一个或多个取代基取代的氨基。
特别地，当结构式IIIA所示化合物中的“CPT”为结构式IV所示化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药时，R6和R7可以同时为氢，或不同时为氢。同样地，结构式IV中的R8可以为氢，或不为氢。根据本发明的具体实施方式，在R6和R7同时为氢时，R8可以为氢或不为氢。
在结构式III和结构式IIIA中，结构式IV所示的化合物经由其与R8连接于同一个碳的羟基(参见结构式IV)与A的羧基通过自释放结构相连，该自释放结构例如 实线表示与结构式III或结构式IIIA中A的羧基连接的位点，波浪线表示与结构式IV中羟基连接的位点。
特别地，对于结构式IIIA所示的化合物，当R6、R7为Ar’S时，M优选为亚苯基或取代的亚苯基，同时SP1为C1-21(优选C1-16、更优选C1-11)直链亚杂烷基，所述直链亚杂烷基包含1-11个(优选1-6个)选自N、O或S的杂原子。
优选地，本发明提供的结构式III和结构式IIIA所示的化合物进一步为结构式V所示的化合物。
结构式V中，R6、R7独立地为Ar’S，Ar’为苯基或由一个或多个取代基取代的苯基，在取代的苯基中，取代基选自烷基(例如C1-C6烷基、优选C1-C4烷基)、烷氧基(例如C1-C6烷氧基、优选C1-C4烷氧基，优选甲氧基)、卤素、酯基、酰胺基和氰基。优选地，Ar’为苯基、4-甲基甲酰基取代苯基或4-甲酰基吗啉取代苯基/>
结构式V中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，Xh和Yh独立地为氢、卤素、卤代烷基(例如卤代C1-C6烷基、优选卤代C1-C4烷基，例如三氟甲基)或烷氧基(例如C1-C6烷氧基、优选C1-C4烷氧基，例如甲氧基)。
结构式V中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，m为1～10、优选1～5、更优选3-5中任一整数。
结构式V中，A表示2-4个氨基酸，如上文所定义。
结构式V中，CPT的定义及其在结构式V中的连接关系与结构式III和结构式IIIA中CPT相同，如上文所定义。
优选地，本发明提供的结构式V所示的化合物进一步为结构式V-A所示的化合物：
结构式V-A中，基团A、G、Y、R1、R2、R3、R4、X、n与上文结构式III或结构式IIIA中基团A、G、Y、R1、R2、R3、R4、X、n的定义相同。
优选地，结构式V-A中，G为氢、氟或氯。
优选地，结构式V-A中，Y为亚甲基、硫或氧。
结构式V-A中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，“-A-NH-”表示所示氨基与A中的羧基形成酰胺键。
优选地，本发明提供的结构式V-A所示的化合物进一步为结构式V-A-1所示的化合物：
或者，本发明提供的结构式V所示的化合物进一步为结构式V-B所示的化合物：
结构式V-B中，基团A、G、R5、X、n与上文结构式III或结构式IIIA中基团A、G、R5、X、n的定义相同。
结构式V-B中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，“-A-NH-”表示所示氨基与A中的羧基形成酰胺键。
优选地，本发明提供的结构式V-B所示的化合物进一步为结构式V-B-1所示的化合物：
或者，本发明提供的结构式V所示的化合物进一步为结构式V-C所示的化合物：
结构式V-C中，基团A、R8与上文结构式III或结构式IIIV中基团A、R8的定义相同。
结构式V-C中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，“-A-NH-”表示所示氨基与A中的羧基形成酰胺键。
结构式V-C中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，‘
结构式VI中，A表示2-4个氨基酸，如上文所定义。
结构式VI中，CPT为喜树碱类化合物。CPT的定义及其在结构式VI中的连接关系与结构式III和结构式IIIA中CPT相同，如上文所定义。
优选地，本发明提供的结构式VI所示的化合物进一步为结构式VI-A所示的化合物：
结构式VI-A中，基团A、G、Y、R1、R2、R3、R4、X、n与上文结构式III或结构式IIIA中基团A、G、Y、R1、R2、R3、R4、X、n的定义相同。
优选地，结构式VI-A中，G为氢、氟或氯。
优选地，结构式VI-A中，Y为亚甲基、硫或氧。
结构式VI-A中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，“-A-NH-”表示所示氨基与A中的羧基形成酰胺键。
优选地，本发明提供的结构式VI-A所示的化合物进一步为结构式VI-A-1所示的化合物：
或者，结构式VI所示的化合物进一步为结构式VI-B所示的化合物：
结构式VI-B中，基团A、G、R5、X、n与上文结构式III或结构式IIIA中基团A、G、R5、X、n的定义相同。
结构式VI-B中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，“-A-NH-”表示所示CPT中的氨基与A中的羧基形成酰胺键。
更优选地，结构式VI-B所示化合物进一步为结构式VI-B-1所示的化合物：
或者，本发明提供的结构式VI所示的化合物进一步为结构式VI-C所示的化合物：
结构式VI-C中，基团A、R8的定义与上文结构式III或结构式IIIA中基团A、R8的定义相同。
结构式VI-C中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，“-A-NH-”表示所示氨基与A中的羧基形成酰胺键。
当结构式V-C中自释放结构为时，结构式V-C可进一步如结构式VI-C所示结构。
根据本发明的具体实施方式，在本发明的第二方面，所述化合物具有如下结构：
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第三方面，本发明提供由如上结构式I、I-A、II、II-A、III、III-A、V、V-A、V-A-1、V-B、V-B-1、V-C、VI、VI-A、VI-A-1、VI-B、VI-B-1、VI-C所示化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药与抗体或抗体片段制得的抗体药物偶联物。
在本发明的第三方面，所述抗体或抗体片段靶向肿瘤相关抗原，所述肿瘤相关抗原例如HER2、B7H3、HER3、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD37、CD45、CD56、CD66e、CD70、CD74、CD73、CD79b、CD138、CD147、CD223、EpCAM、粘蛋白1(Mucin 1)、STEAP1、GPNMB、FGF2、FOLR1、EGFR、EGFRvIII、组织因子(Tissuefactor)、c-MET、FGFR、Nectin 4、AGS-16、鸟苷酸环化酶C(Guanylyl cyclase C)、间皮素(Mesothelin)、SLC44A4、PSMA、EphA2、AGS-5、GPC-3、c-KIT、RoR1、PD-L1、CD27L、5T4、Mucin16、NaPi2b、STEAP、SLITRK6、ETBR、BCMA、Trop-2、CEACAM5、SC-16、SLC39A6、Delta-like protein3、Claudin 18.2。
优选地，所述抗体药物偶联物具有通式所示结构，其中mAb表示抗体或抗体片段，基团M、SP1、SP2、A及CPT与上文结构式III或结构式IIIA中基团M、SP1、SP2、A及CPT的定义相同。N为1～10、优选1～8(例如1～5)、更优选3～8。
其中，EL选自如下基团，其中，表示与mAb中半胱氨酸相连，/>表示与M相连：
EL-1a和/或EL-1b：EL-2：/>EL-3：EL-4：/>EL-5：/>EL-6：
在所述通式结构中，mAb可以是靶向上述任何肿瘤相关抗原的IgG型抗体或其片段，优选为的IgG1亚型抗体或其片段。
优选地，当结构式VI所示的化合物与抗体或抗体片段偶联时，所述抗体药物偶联物具有如下通式VII或通式VIII所示的结构：
其中N为1～10、优选1～8(例如1～5)、更优选3-8。
其中，Ab对应上文通式中的mAb。
通式VII和VIII中，基团A、CPT与上文第二方面中提供的结构式III或结构式IIIA中基团A、CPT的定义相同。
本发明在第三方面中提供的通式VII和VIII所示的抗体药物偶联物在细胞(例如肿瘤细胞)内可生成前药代谢产物。
第四方面，本发明提供结构式IX所示的化合物：
结构式IX中，基团A、CPT与上文第二方面中提供的结构式III或结构式IIIA中基团A、CPT的定义相同。
具体地，使用式VI-A化合物制备得到的抗体药物偶联物的前药代谢产物为结构式IX-A所示的化合物：
结构式IX-A中，基团A、G、Y、R1、R2、R3、R4、X、n与上文第二方面中提供的结构式III或结构式IIIA中基团A、G、Y、R1、R2、R3、R4、X、n的定义相同。
结构式IX-A中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，“-A-NH-”表示所示氨基与A中的羧基形成酰胺键。
优选地，本发明提供的结构式IX-A所示的化合物进一步为结构式IX-A-1所示的化合物：
使用式VI-B化合物制备得到的抗体药物偶联物的前药代谢产物为结构式IX-B所示的化合物：
结构式IX-B中，基团A、G、R5、X、n与上文第二方面中提供的结构式III或结构式IIIA中基团A、G、R5、X、n的定义相同。
结构式IX-B中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，“-A-NH-”表示所示氨基与A中的羧基形成酰胺键。
当使用式VI-C化合物制备得到的抗体药物偶联物的前药代谢产物为结构式IX-C所示的化合物：
结构式IX-C中，基团A、R8与上文第二方面中提供的结构式III或结构式IIIA中基团A、R8的定义相同。
结构式IX-C中，并且在本发明的上下文中如无其他说明，“-A-NH-”表示所示氨基与A中的羧基形成酰胺键。
第五方面，本发明提供根据本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药或抗体药物偶联物在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。
优选地，所述肿瘤为癌症。优选地，所述肿瘤与肿瘤相关抗原例如HER2、B7H3、HER3、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD37、CD45、CD56、CD66e、CD70、CD74、CD73、CD79b、CD138、CD147、CD223、EpCAM、粘蛋白1(Mucin 1)、STEAP1、GPNMB、FGF2、FOLR1、EGFR、EGFRvIII、组织因子(Tissuefactor)、c-MET、FGFR、Nectin 4、AGS-16、鸟苷酸环化酶C(Guanylyl cyclase C)、间皮素(Mesothelin)、SLC44A4、PSMA、EphA2、AGS-5、GPC-3、c-KIT、RoR1、PD-L1、CD27L、5T4、Mucin16、NaPi2b、STEAP、SLITRK6、ETBR、BCMA、Trop-2、CEACAM5、SC-16、SLC39A6、Delta-like protein3、Claudin 18.2阳性或高表达相关。
优选地，所述肿瘤为结肠直肠癌、膀胱癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌、卵巢癌、子宫内膜癌、输卵管癌、胃癌、前列腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、食道鳞状细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、黑色素瘤、白血病、淋巴瘤、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤。
第六方面，本发明提供采用根据本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药或抗体药物偶联物治疗肿瘤的方法，所述方法包括给有此需要的受试者施用所述化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药或抗体药物偶联物。
优选地，所述肿瘤为癌症。优选地，所述肿瘤与肿瘤相关抗原例如HER2、B7H3、HER3、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD37、CD45、CD56、CD66e、CD70、CD74、CD73、CD79b、CD138、CD147、CD223、EpCAM、粘蛋白1(Mucin 1)、STEAP1、GPNMB、FGF2、FOLR1、EGFR、EGFRvIII、组织因子(Tissuefactor)、c-MET、FGFR、Nectin 4、AGS-16、鸟苷酸环化酶C(Guanylyl cyclase C)、间皮素(Mesothelin)、SLC44A4、PSMA、EphA2、AGS-5、GPC-3、c-KIT、RoR1、PD-L1、CD27L、5T4、Mucin16、NaPi2b、STEAP、SLITRK6、ETBR、BCMA、Trop-2、CEACAM5、SC-16、SLC39A6、Delta-like protein3、Claudin 18.2阳性或高表达相关。
优选地，所述肿瘤为结肠直肠癌、膀胱癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌、卵巢癌、子宫内膜癌、输卵管癌、胃癌、前列腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、食道鳞状细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、黑色素瘤、白血病、淋巴瘤、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤。
优选地，所述受试者为哺乳动物，优选灵长类动物，更优选为人。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1：本发明的抗体药物偶联物HIC分析结果。
图2：本发明的抗体药物偶联物在胰腺癌小鼠模型中的药效结果。
图3：本发明的抗体药物偶联物在膀胱癌小鼠模型中的药效结果。
图4：本发明的抗体药物偶联物在肺癌小鼠模型中的药效结果。
图5：本发明的抗体药物偶联物的旁观者效应研究结果(均数±SD，n＝2)。
图6：本发明的抗体药物偶联物和抗体的细胞内吞时效曲线(均数±SD，n＝3)。
图7：本发明的抗体药物偶联物诱导肿瘤细胞凋亡的研究结果。
图8：本发明的抗体药物偶联物和抗体与肿瘤细胞结合的量效曲线。
具体实施方式
以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。
实施例组1喜树碱类化合物的合成
喜树碱类化合物合成通法：
本发明的喜树碱类化合物可以由式A所示化合物与CDE三环化合物经Friedlander反应得到，反应通式如下：
其中，CDE三环化合物购买自MCE：
HCDE三环化合物按照Bioorganic and Medicinal Chemistry,2010,vol.18,#9,p.3140–3146方法制备得到：
实施例组1.1式A所示化合物的合成
实施例1.1.1化合物A1的合成
方法一、按照专利公布文件WO2020200880A1方法，合成化合物A1，合成路线如下：
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方法二、锌试剂钯催化偶联法合成化合物A1，合成路线如下：
(1)乙酰化
在500mL烧瓶中加入3-溴-4-硝基苯胺(25.00g，0.12mol)和200mL醋酸，缓慢滴加50mL乙酸酐，室温下反应16小时。TLC检测原料反应完全后，将反应液过滤，反应液减压浓缩除去醋酸，合并滤饼用200mL MTBE打浆，过滤干燥的黄色固体(A1-a)27.6g。收率92％。LC-MS(ESI):m/z 259(M+H)+。
(2)4-乙氧基-4-氧代丁基溴化锌的制备
在一个250mL三口烧瓶中(温度计，回流冷凝管，橡胶塞)加入活化过的锌粉(19.0g,0.29mol，2.00eq)，置换氮气后加入无水DMF(145mL)，再次置换氮气，室温下加入碘单质(1.86g,0.015mol，0.1eq)，可观察到溶液由无色变为棕红色，再逐渐变为淡黄色最后恢复无色(2-3min)，然后加入4-溴丁酸乙酯(28.6g,0.15mol，1.00eq)，升温至80℃(内温)反应4～5小时，TLC检测反应完全后，将反应液静置，冷却至室温待用，上清液呈淡黄色，浓度为1mol/L。
(3)锌试剂偶联
500mL反应瓶中加入无水DMF(120mL)和中间体A1-a(25.0g,1.00eq)，置换氮气后加入醋酸钯(433mg,0.02eq)，置换氮气室温下搅拌10min后加入S-PHOS(1.6g,0.04eq)，再次置换氮气，搅拌20min后室温(25-30℃)滴加上述步骤中制备的4-乙氧基-4-氧代丁基溴化锌(145mL,1.50eq)，加完后保持25-30℃反应16小时。TLC检测(DCM:EA＝5:1)原料反应完全后，将反应液冷却至室温，向反应液中加入氯化铵溶液(15mL)淬灭反应。将反应液倒入1L水中，加入400mL乙酸乙酯，分液，布氏漏斗过滤，水相用乙酸乙酯(400mL*2)萃取，有机相用水(500mL)洗涤两遍，饱和氯化钠溶液(500mL)洗涤一遍，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得红棕色油状液体(A1-b)37.0g，收率130％。粗产品不用进一步纯化，直接用于下一步反应。LC-MS(ESI)：[M+1]+＝295。
(4)中间体A1-c的合成
3L三口反应瓶中加入中间体A1-b(37.0g,1.0eq)和乙醇(1.5L)，原料完全溶解。反应体系冷却至5℃，加入5％Pd/C(5.7g,1.0eq)，氢气氛围下(常压)升温至25℃反应16小时。TLC检测(DCM:EA＝5:1)反应完毕，反应体系在硅藻土下过滤，有机相浓缩得粗产品(A1-c)33.0g,收率130％。粗产品不用进一步纯化，直接用于下一步反应。LC-MS(ESI)：[M+1]+＝265。
(5)中间体A1-d的合成
在1L烧瓶中加入中间体A1-c(33.0g，1.00eq)和260mL醋酸，缓慢滴加46mL乙酸酐，室温下反应2小时。TLC检测(DCM:MeOH＝10:1)原料反应完全后，将反应液过滤，反应液减压浓缩除去醋酸，加入250mL水，水相用乙酸乙酯(400mL*2)萃取，有机相用水(500mL)洗涤两遍，饱和氯化钠溶液(500mL)洗涤一遍，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得粗产品32g。粗产品用400mL MTBE打浆，过滤干燥的淡黄色固体(A1-d)27.0g，收率91％。四步反应总收率为83.7％。
LC-MS(ESI)：[M+1]+＝307。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.87(s,1H),9.19(s,1H),7.41(s,1H),7.37(d,J＝8.7Hz,1H),7.20(d,J＝8.5Hz,1H),4.06(q,J＝7.0Hz,2H),2.52(d,J＝8.5Hz,2H),2.29(t,J＝7.3Hz,2H),2.02(s,6H),1.79–1.64(m,2H),1.18(t,J＝7.1Hz,3H).
(6)中间体A1-e的合成
500mL三口反应瓶中加入中间体A1-d(27.0g,88mmol，1.0eq)，水(100mL)和四氢呋喃(200mL)，原料完全溶解。室温条件下加入一水合氢氧化锂(18.5g,441mmol，5.0eq)，反应体系维持室温继续反应3小时。TLC检测反应完毕，减压蒸出大部分四氢呋喃，残留物加入300mL水，水相用EA萃取(2×100mL)，弃去有机相。水相在冰浴下用6N盐酸调pH至4，有固体析出，过滤得白色固体(中间体A1-e)，19.1g，收率78％。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.09(s,1H),9.86(s,1H),9.18(s,1H),7.38(d,J＝15.5Hz,2H),7.23(d,J＝8.5Hz,1H),2.51(d,J＝8.1Hz,2H),2.23(t,J＝7.1Hz,2H),2.02(s,6H),1.76–1.61(m,2H)
(7)化合物A1的合成
250mL反应瓶中加入多聚磷酸40ml，加热至90℃，分批加入中间体A1-5(5.0g，17.97mmol)，内温保持95-100℃反应5小时。TLC检测反应完毕，撤去加热，体系降温至50-60℃，向反应体系中滴加15mL 4M HCl(aq)(温度会升至100℃)淬灭反应，滴毕，冰浴下滴加600mL 4M NaOH水溶剂调pH到10。水相用乙酸乙酯(50mL*3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤一遍，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得黄色固体(中间体A1-f)3.75g，收率80.5％。不经纯化直接下一步反应。LC-MS(ESI)：[M+1]+＝261。
250mL三口反应瓶中将原料中间体A1-f(3.75g)悬浮于19％盐酸(30mL)中。反应体系加热至90℃(内温)反应3小时。TLC检测原料反应完毕，冰盐浴降温至5℃以下，滴加4MNaOH溶液(45mL,30eq)调pH到10，水相用乙酸乙酯(80mL*5)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤一遍，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得粗产品2.45g。粗产品柱层析纯化，洗脱剂为DCM，得黄色固体(化合物A1)，1.93g，收率76％。两步反应总收率61.2％。
LC-MS(ESI)：[M+1]+＝177。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ6.76(d,J＝8.7Hz,1H),6.68(s,2H),6.42(d,J＝8.7Hz,1H),4.17(s,2H),2.55(t,J＝5.9Hz,2H),2.46(t,J＝6.2Hz,2H),2.00–1.80(m,2H)
方法三、内酰胺水解法制备化合物A1，合成路线如下：
根据专利公布文件CN106349233A方法制备得到氨基内酰胺化合物。
于500ml三口烧瓶中，将氨基内酰胺化合物(17.6g，0.1moml)，乙醇(250ml)，98％硫酸(5ml)混合，加热回流反应24小时。取样检测，待反应完全后，将反应液减压浓缩至干。残留物加入二氯甲烷(200ml)和水(100ml)，冰浴降温至10℃以下，用1N氢氧化钠水溶液调节pH7～8，搅拌分液，水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，减压蒸馏，蒸除有机溶剂，得到二氨基乙酯中间体粗品，25g，直接下一步反应。
二氨基乙酯中间体溶于二氯甲烷(200ml)中，加入三乙胺(20.2g，0.2mol，2eq)，冰浴降温至10℃以下，滴加乙酸酐(25.5g，0.25mol，2.5eq)。滴毕，保温反应1小时，取样检测，待反应完全后，将反应液倒入冰的1N盐酸中，搅拌15分钟，分液，水相二氯甲烷(50ml*3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，减压蒸馏，蒸除有机溶剂，粗产品用400mL MTBE打浆，过滤干燥得中间体A1-e为淡黄色固体，26.9g。两步反应总收率87.8％。LC-MS(ESI):m/z307(M+H)+。
再根据方法2，从中间体A1-e制备得到化合物A1。
实施例1.1.2化合物A2的合成
按照专利公布文件WO2021148501方法，合成化合物A2，合成路线如下：
/>
实施例1.1.3化合物A3的合成
按照专利公布文件US2004266803A方法，合成化合物A3。
实施例1.1.4化合物A4的合成
按照与文献Journal of Medicinal chemistry,1998,41(13),2308-2318类似的方法合成化合物A4，合成路线如下：
步骤1：
A4-2中间体由A4-1化合物按照文献方法制备得到。
步骤2：
于-5～5℃下，将A4-2中间体(3.4g)溶于二氯甲烷中，加入三乙胺(3.0g)，继续慢慢滴加AllocCl(2.8g)，滴加完毕搅拌反应1～2小时；加水淬灭，水洗一次，饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，浓缩干得A4-3中间体粗品5.5g。LC-MS(ESI)：[M+1]+＝255.7。
步骤3：
常温下，将A4-3中间体(5.5g)混于TBAF(55ml)和丙烯酸(110ml)中，加热至50～55℃搅拌反应24小时；反应也直接浓缩干，柱层析，石油醚洗脱至甲醇:二氯甲烷＝1：50得A4-4中间体粗品约5.2g。LC-MS(ESI)：[M+1]+＝327.4。
步骤4：
常温下，将A4-4中间体(5.0g)混于乙醇：水＝3：1的100ml混合溶液中，加入氯化铵(5.5g)和铁粉(5.5g)，加热至回流反应1～2小时；反应也冷却至室温，过滤，固体用乙醇洗涤，浓缩干，得A4-5中间体粗品约3.8g，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝297.4。
步骤5：
20～30℃，将A4-5中间体(3.8g)混于三氟乙酸(38ml)中，加入三氟乙酸酐(38ml)，搅拌反应18～24小时；后处理：直接浓缩干，柱层析，石油醚洗脱至乙酸乙酯：石油醚＝1：4得A4-6中间体：1.0g；LC-MS(ESI)：[M+1]+＝375.3。
步骤6：
常温下，将A4-6中间体(1.0g)混于甲醇(20ml)中，加入碳酸钾(2.0g)和水(5ml)搅拌反应1～2小时；加水稀释反应液，乙酸乙酯萃取，有机相饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩干得粗品，柱层析石油醚洗脱至乙酸乙酯：石油醚＝1：2得A4-7中间体：0.65g，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝279.3。
步骤7：
常温下，将A4-7中间体(500mg)溶于四氢呋喃(20ml)中，氮气保护下，加入吡咯(120mg)和四三苯基膦钯(160mg)，完毕搅拌反应1～2小时；将反应液直接浓缩干，柱层析二氯甲烷：甲醇＝30：1纯化，得到A4为棕色固体，30mg；LC-MS(ESI)：[M+1]+＝195.4。
实施例1.1.5化合物A5的合成
按照与文献Journal of Medicinal chemistry,1998,41(13),2308-2318类似的方法合成化合物A5，合成路线如下：
步骤1：
20～30℃，将A5-1化合物(25g)混于乙酸(100ml)中，慢慢加入乙酸酐(24.9g)，加料完毕，搅拌3～4小时；将反应液慢慢转入冰水中，搅拌析出固体，过滤，收集固体，水洗，真空干燥得A5-2中间体为黄色固体，31.0g，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝197.2。
步骤2：
20～30℃，将A5-2中间体(29g)、碳酸钾(40g)、碘化钾(5g)和溴丙醇(25g)混于DMF(300ml)中，加热至100～110℃，搅拌3～4小时；反应液冷却至室温，加入冰水中淬灭，用乙酸乙酯2L萃取三次，合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩干用石油醚打浆得固体，真空干燥得A5-3中间体，为黄色固体：33.0g，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝255.3。
步骤3：
20～25℃，将A5-3中间体(23g)溶于乙腈(1L)中，依次加入磷酸二氢钠溶液(0.67mol，pH 6.7，900ml)、TEMPO(5g)和亚氯酸钠溶液(52.0g溶于60ml水中)和次氯酸钠溶液(38ml混合38ml水)，加料完毕，反应液呈现深棕色，搅拌30分钟；将反应液冷却至室温，用2N的盐酸调节pH至2～3，乙酸乙酯萃取(1000ml×3)，乙酸乙酯层合并，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩干，石油醚打浆得A5-4中间体粗品24.0g，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝269.2。
步骤4：
常温下，将A5-4中间体(25g)和5％钯炭(5g)混于甲醇(500ml)中，加压氢化反应3～4小时；过滤掉钯炭，固体用甲醇洗涤，滤液浓缩，残留物石油醚打浆得粗品，真空干燥得A5-5中间体，为黄色固体：18.0g，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝239.5。
按照化合物A4合成中步骤5，步骤6类似的方法，从A5-5中间体出发合成A5-7中间体，最后用6N盐酸脱除乙酰基保护，制备得到化合物A5，为黄色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝179.2。
实施例1.1.6化合物A6的合成
按照文献Journal of Medicinal chemistry,1998,41(13),2308-2318方法合成化合物A6，合成路线如下：
化合物A6为黄色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝248.9。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO):δ12.289(1H，s)，8.666-8.648(1H，d)，8.198-8.1(1H，d)，3.138-3.108(2H，t)，2.768-2.734(2H，t)，2.219(3H，s)，2.050-1.991(2H，m)
步骤1：
于250ml三口烧瓶中，氮气保护下，将A1-4化合物(1.25g，5mmol，1eq)溶于150ml四氢呋喃中，降温到-60℃，加入LDA(2M in THF，7.6ml，15.2mmol，3.04eq)，加毕后于-60℃下搅拌反应30分钟。加入MeI(1.45g，10.21mmol，2.04eq)，加毕，撤除干冰浴，自然升温，室温反应过夜。加入50ml氯化铵水溶液淬灭反应，用乙酸乙酯(150ml*3)萃取，合并有机相，用水洗涤一次，有机相浓缩至干得粗品。粗品经柱层析纯化，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝1：0～5：1，得A6-1化合物，黄色固体，350mg，收率28％。
1H NMR(CDCl3):δ12.49(1H，s)，8.77(1H，d)，8.03(1H，d)，3.21(2H，m)，2.22(3H，s)，1.90(2H，t)，1.20(6H，s)
步骤2：
于100ml单口烧瓶中，将A6-1化合物(280mg)与20ml6 N盐酸混合，加热回流搅拌反应2小时；停止加热，待反应液冷却至室温后，用碳酸氢钠将反应液pH调到7～8，用二氯甲烷(30ml*3)萃取，合并有机相，浓缩干，得A6-2化合物，棕灰色固体，275mg。粗品不经纯化，直接下一步反应。
步骤3：
于50ml三口烧瓶中，将A6-2化合物(220mg)溶于乙酸(25ml)中，加入1.3克铁粉，加毕，于80～85℃搅拌1-2小时；待反应完全后，减压蒸馏蒸除乙酸，残留物加入水(30ml)，用碳酸氢钠将pH调到7～8，用二氯甲烷(30ml*3)萃取，浓缩干得粗品，粗品经柱层析纯化，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝1：0～2：1，得A6化合物，棕色固体，122mg，两步反应收率75％。LC-MS(ESI)：[M+1]+＝205.0
实施例1.1.7化合物A7的合成
合成路线如下：
于250ml三口烧瓶中，将A1化合物(2.18g,124mmol，1eq)溶于四氢呋喃(100ml)中，加入Boc酸酐(8.2g，376mmol，3eq)，于40～45℃搅拌反应5小时；将反应液直接浓缩干，经柱层析纯化，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝1：0～1：3，得A7-1化合物，黄色固体3.0g，收率90％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.25(s,1H),6.41(t,J＝10.2Hz,3H),5.90(s,1H),2.73(t,J＝6.2Hz,2H),2.61–2.47(m,2H),2.02–1.86(m,3H),1.49–1.36(m,9H)
于250ml三口烧瓶中，将A7-1化合物(3.0g，10.8mmol，1eq)和DIPEA(3.5g，27.1mmol，1.5eq)混于二氯甲烷(125ml)中，用冰盐浴将反应液冷却至-5～0℃，滴加乙酰氯(1.3g，16.5mmol，2eq)，滴毕，撤除冰盐浴，自然升温，于室温下搅拌反应4小时；将反应液浓缩干，残留物经柱层析纯化，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝1：0～1：3，得A7-2化合物，淡黄色固体，3.48g，收率100％。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.01(s,1H),8.55(d,J＝9.1Hz,1H),7.57(t,J＝36.2Hz,1H),6.09(s,1H),2.80(t,J＝6.2Hz,2H),2.65–2.58(m,2H),2.15(s,3H),2.07–1.98(m,2H),1.44(s,9H)
于500ml三口烧瓶中，氮气保护下，将A7-2化合物(2.45g，7.7mmol，1eq)溶于四氢呋喃(200ml)中，用干冰-丙酮浴将反应液冷却至-70～-60℃，慢慢滴加KHMDS(1M，31ml，31.0mmol，4eq)，滴毕，于-70～-60℃搅拌10分钟；滴加NFSI的四氢呋喃溶液(将NFSI(7.35g，23mmol，3eq)溶于四氢呋喃(70ml))，滴毕，于-70～-60℃搅拌10分钟，自然升温至20～30℃并搅3小时；加入饱和氯化铵水溶液(80ml)淬灭反应，反应液用乙酸乙酯(150ml*3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，浓缩干得粗品，经柱层析纯化，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝1：0-1：3，得A7-3化合物，黄色固体，0.85g，收率31.2％。LC-MS(ESI)：[M+1]+＝355.8
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.49(s,1H),8.64(d,J＝9.2Hz,1H),7.74(d,J＝8.5Hz,1H),6.06(s,1H),3.01(t,J＝6.4Hz,2H),2.55–2.39(m,2H),2.19(s,3H),1.44(s,9H)
于100ml单口烧瓶中，将A7-3化合物(0.85g，2.4mmol)，与6N盐酸(30ml)混合，加热回流反应4小时。停止加热，待反应液冷却至室温后，用碳酸氢钠调节pH至7～8，用二氯甲烷(30ml*3)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，浓缩干得粗品，经柱层析纯化，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝1：0～1：3，得A7化合物，棕色固体0.25g，收率49.1％。LC-MS(ESI)：[M+1]+＝213.9
实施例1.1.8化合物A8的合成
合成路线如下：
按照文献Journal of Medicinal Chemistry,1989,vol.32,#6,p.1217-1230方法合成A8-1化合物。LC-MS：(ESI)：[M+1]+＝146.3。
A8-1化合物(1.8g)、DIEA(4.8g)加入DCM(50ml)中。冷至0℃。加入三氟乙酸酐(4.8g)，升温至室温，反应1小时。加入水(20ml)，分层有机层，旋干。过柱纯化(EA:PE＝0-30％)得A8-2中间体为白色固体，2.7g。LC-MS：(ESI)：[M+1]+＝242.2。
Zn(Et)2(33.6ml)加入DCM(70ml)中，冷至0℃。加入TFA(3.8g)、CH2I2(9.0g).反应15分钟。滴加A8-2化合物(2.7g)的DCM(30ml)溶液。滴毕，室温搅拌过夜。加入水(30ml)，分层有机层，干燥，旋干得A8-3中间体为灰白色固体，2.7g。LC-MS(ESI)：[M+1]+＝256.1。
A8-3中间体(1.5g)加入DCM(100ml)及乙酸酐(30ml)中，冷至0℃，加入65％硝酸(2.8g)，室温反应过夜。加入水(50ml)、DCM(100ml)。分层有机层，旋干。油泵拉干得A8-4中间体粗品，1.6g，直接用于下一步。LC-MS(ESI)：[M+1]+＝301.2。
A8-4中间体(1.6g粗品)、铁粉(3.2g)、氯化铵(6.4g)加入无水乙醇(100ml)中，升温回流过夜。冷却，过滤，旋干，过柱纯化(EA:PE＝0-50％)得A8-5中间体为棕色油状物，0.25g。LC-MS(ESI)：[M+1]+＝271.3。
A8-5中间体(250mg)、DIEA(400mg)加入DCM(10ml)中，冷至0℃，加入三氟乙酸酐(320mg)，室温反应1小时。加入水(5ml)洗涤。分出有机层，干燥，过滤，旋干得A8-6中间体为黄色固体，340mg。LC-MS(ESI)：[M+1]+＝367.3。
A8-6中间体(150mg)、CrO3(400mg)加入乙酸(8ml)及乙酸酐(4ml)中，30-40℃反应3小时。旋干溶剂。加入水(5ml)，用DCM(20ml)萃取。分出有机层，干燥，过滤，旋干得A8-7中间体粗品160mg，直接用于下一步。LC-MS(ESI)：[M+1]+＝381.3。
A8-7中间体经6N盐酸脱出双三氟乙酰基保护，经柱层析纯化得到化合物A8。LC-MS(ESI)：[M+1]+＝189.3。
根据上述类似的方法可以合成如下化合物
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实施例组1.2喜树碱类化合物合成(Friedlander反应)
对照喜树碱类化合物MWC-1的合成：
常温下，将化合物A1(176mg，1eq)和CDE环化合物(315mg，1.2eq)、PPTS(301mg，1.2eq)混于甲苯(50ml)中，回流分水反应3～4小时；将反应液直接浓缩干，柱层析纯化，洗脱剂为石油醚洗脱至甲醇/二氯甲烷＝1：20，得MWC-1，为黄色固体，260mg，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝404。
实施例1.2.1喜树碱类化合物1的合成
合成路线如下：
于50ml单口反应瓶中，氮气保护下，将化合物A6(120mg，0.59mmol，1eq)、CDE三环化合物(180mg，0.68mmol，1.2eq)和PPTS(35mg,0.14mmol，0.25eq)混合于15ml中，加热回流反应3～4小时；减压蒸馏，蒸除大部分乙酸，残留物经柱层析粗分离，洗脱剂为二氯甲烷：甲醇＝15:1，得到粗品80mg，再经制备液相分离纯化，得喜树碱类化合物1为黄色固体，3mg。
LC-MS(ESI)：[M+1]+＝432.4。
实施例1.2.2喜树碱类化合物2(2A和2B)的合成
合成路线如下：
按照实施例1.2.1类似的方法，用A9代替A6合成得到，经制备液相分离纯化，得化合物2A(保留时间早)，为黄色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝418.3；化合物2B(保留时间晚)，为黄色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝418.4。
实施例1.2.3喜树碱类化合物3的合成
合成路线如下：
按照实施例1.2.1类似方法合成，用A7代替A6，用甲苯代替乙酸作溶剂，制备得喜树碱类化合物3为土黄色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝440.8
1H NMR(400MHz,Acetone)δ7.89(d,J＝9.1Hz,1H),7.48(d,J＝9.1Hz,1H),7.37(s,1H),7.31(d,J＝8.9Hz,0H),5.59–5.26(m,5H),3.11–3.05(m,4H),2.73–2.59(m,3H),1.98(dt,J＝14.0,7.0Hz,1H),1.05–0.98(m,3H)
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.87(d,J＝9.1Hz,0H),7.41(d,J＝9.1Hz,0H),7.21(s,0H),6.50(s,0H),6.15(s,1H),5.36(d,J＝46.6Hz,1H),2.93(t,J＝6.5Hz,1H),2.66–2.54(m,1H),1.97–1.68(m,3H),1.24(s,1H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)
实施例1.2.4喜树碱类化合物4(4A和4B)的合成
按照实施例1.2.1类似的合成方法，用A10代替A6制备得到，经制备液相分离纯化，得化合物4A(保留时间早)，为土黄色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝422.3；化合物4B(保留时间晚)，为土黄色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝422.3。
实施例1.2.5喜树碱类化合物5的合成
合成路线如下：
按照实施例1.2.1类似方法，用A12代替A6制备得到喜树碱类化合物5为黄色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝444.3。
实施例1.2.6喜树碱类化合物6的合成
合成路线如下：
按照实施例1.2.1类似方法，用A11代替A6合成得到，喜树碱类化合物6为黄色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝430.5。
实施例1.2.7喜树碱类化合物7的合成
合成路线如下：
按照实施例1.2.1类似的合成方法，用A8代替A6合成，得化合物7为黄色固体，0.7mg。LC-MS(ESI)：[M+1]+＝416.3。
实施例1.2.8喜树碱类化合物9的合成
合成路线如下：
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按照实施例1.2.1类似的合成方法，用A3代替A6合成，得到喜树碱类化合物9，为棕红色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝420.3。
实施例1.2.9喜树碱类化合物12的合成
按照与文献Journal of Medicinal chemistry,1998,41(13),2308-2318类似的方法合成化合物12，合成路线如下：
按照实施例1.2.1类似的合成方法，用A4代替A6，用甲苯代替乙酸作溶剂，合成得化合物12为棕色固体，30mg；LC-MS(ESI)：[M+1]+＝422.5。
实施例1.2.10喜树碱类化合物13的合成
合成路线如下：
按照实施例1.2.1类似方法的合成方法，用A15代替A6，用甲苯作溶剂合成得到化合物13，为棕色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝458.4。
实施例1.2.11喜树碱类化合物14的合成
合成路线如下：
按照实施例1.2.1类似方法的合成方法，用A5代替A6，用甲苯作溶剂，制备得到化合物14，为黄色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝406.1。
实施例1.2.12喜树碱类化合物14-P的合成
常温下，将化合物12(200mg)溶于乙酸(24ml)、水(3ml)混合溶剂中，氮气保护下，降温到5℃，加入30％H2O2(580mg)，搅拌反应2小时，反应液浓缩干，用HPLC制备液相分离得到化合物14-P1和14-P2。冻干得到化合物14-P1棕色固体42mg、化合物14-P2棕色固体25mg；LC-MS(ESI)：[M+1]+＝438.5。
实施例1.2.13喜树碱类化合物15的合成
常温下，将化合物12(100mg)溶于乙酸(24ml)、水(3ml)混合溶剂中，氮气保护下，降温到5℃，加入30％H2O2(750mg)，搅拌反应2小时，回到室温25℃搅拌反应过夜，LCMS分析反应完全，将反应液浓缩干，用HPLC制备液相分离，收集，冻干得到化合物15为棕色固体8mg。LC-MS(ESI)：[M+1]+＝454.4。
实施例1.2.14喜树碱类化合物16的合成
按照WO2020200880A1专利方法合成中间体16a，然后按照文献(J.Med.Chem.2008,51,3040-3044)的方法，制备16a-硫代喜树碱结构中间体16c，最后脱除乙酰基保护，经制备得到化合物16，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝420.3。
实施例1.2.15喜树碱类化合物17的合成
合成路线如下：
按照实施例1.2.1类似方法的合成方法，用A1代替A6，用HCDE代替CDE，用甲苯作溶剂合成，得到高喜树碱化合物17(S,R混合物)，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝418.5。
实施例1.2.16喜树碱类化合物18的合成
合成路线如下：
按照实施例1.2.1类似方法的合成方法，用A16代替A6，用甲苯作溶剂合成化合物18，为淡黄色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝424.2。
实施例1.2.17喜树碱类化合物19的合成
合成路线如下：
按照实施例1.2.1类似方法的合成方法，用A17代替A6，用甲苯作溶剂合成化合物19，为黄色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝460.5。
实施例1.2.18喜树碱类化合物20的合成
合成路线如下：
按照实施例1.2.1类似方法的合成方法，用A13代替A6，用甲苯作溶剂合成化合物20，为黄色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝458.2。
实施例1.2.19喜树碱类化合物21的合成
合成路线如下：
按照实施例1.2.1类似方法的合成方法，用A24代替A6，用甲苯作溶剂，得到化合物21，为棕红色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝418.4。
实施例1.2.20喜树碱类化合物22的合成
合成路线如下：
按照实施例1.2.1类似方法的合成方法，用A25代替A6，用甲苯作溶剂，得到化合物22，为棕红色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝434.4。
实施例1.2.21喜树碱类化合物23的合成
合成路线如下：
按照实施例1.2.1类似方法的合成方法，用A21代替A6，用甲苯作溶剂，得到化合物23，为棕红色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝432.4。
实施例1.2.22喜树碱类化合物24的合成
合成路线如下：
按照实施例1.2.1类似方法的合成方法，用A20代替A6，用甲苯作溶剂，得到化合物24(一对异构体)，为棕红色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝418.4。
实施例1.2.23喜树碱类化合物25的合成
合成路线如下：
按照实施例1.2.1类似方法的合成方法，用A32代替A6，用甲苯作溶剂，得到化合物25，为棕红色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝432.4。
实施例1.2.24喜树碱类化合物26的合成
按照实施例1.2.1类似方法的合成方法，用A18代替A6，用甲苯作溶剂合成，得到化合物26，为棕红色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝440.4。
实施例1.2.25喜树碱类化合物27的合成
按照实施例1.2.1类似方法的合成方法，用A19代替A6，用甲苯作溶剂，得到化合物27，为棕红色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝476.4。
实施例1.2.26喜树碱类化合物31的合成
按照实施例1.2.1类似方法的合成方法，用A14代替A6，用甲苯作溶剂得到化合物31，为黄色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝442.4。
实施例1.2.27喜树碱类化合物32的合成
按照实施例1.2.1类似方法的合成方法，用A2代替A6，用HCDE代替CDE，用甲苯作溶剂合成得到化合物32，为黄色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝436.4。
实施例1.2.28喜树碱类化合物33的合成
合成路线如下：
按照实施例1.2.1类似方法的合成方法，用A23代替A6，用甲苯作溶剂，化合物33为黄色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝458.5。
实施例1.2.29喜树碱类化合物34的合成
合成路线如下：
按照实施例1.2.1类似方法的合成方法，用A22代替A6，用甲苯作溶剂，合成化合物34为黄色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝458.5。
实施例1.2.30喜树碱类化合物35和化合物38的合成
合成路线如下：
按照实施例1.2.1类似方法的合成方法，用A26代替A6，用甲苯作溶剂，合成化合物35，为棕红色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝438.7。
按照实施例1.2.1类似方法的合成方法，用A27代替A6，用甲苯作溶剂，合成，得到化合物38，为棕红色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝474.7。
实施例1.2.31喜树碱类化合物36和化合物39的合成
合成路线如下：
按照实施例1.2.1类似方法的合成方法，用A30代替A6，用甲苯作溶剂，合成化合物36，为棕红色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝456.7。
按照实施例1.2.1类似方法的合成方法，用A31代替A6，用甲苯作溶剂，合成类得到化合物39，为棕红色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝492.7
实施例1.2.32喜树碱类化合物37和化合物40的合成
合成路线如下：
按照实施例1.2.1类似方法的合成方法，用A28代替A6，用甲苯作溶剂，合成化合物37，为棕红色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝440.8。
按照实施例1.2.1类似方法的合成方法，用A29代替A6，用甲苯作溶剂，合成得到化合物40，为棕红色固体，LC-MS(ESI)：[M+1]+＝476.7。
实施例组2含药连接子的合成
实施例2.1含药连接子MWD-L1的合成
合成路线如下：
GGFG-Dxd按照专利公开文件(US20190151328A1)中所述方法合成：
GGFG-Dxd为淡黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝841；
BL接头化合物按照专利公布文件WO2018/095422A1中所述方法合成：
BL接头化合物为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝858
BL接头化合物(857mg，1mmol)，GGFG-Dxd(840mg，1mmol，1eq)，DIPEA(323mg，2.5mmol，2.5eq)，HATU(570mg，1.5mmol，1.5eq)，溶于30ml DCM中，搅拌反应2h。将反应液冷却至5～10℃，加入1N盐酸(20ml)，搅拌0.5h。分液，水相用DCM(30ml*2)萃取，合并有机相。有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干。柱层析纯化，洗脱剂：DCM：MeOH＝50：1～10：1，得含药接头MWD-L1为黄色固体，500mg，收率29.8％，LC-MS(ESI):M+1＝1681，(M+1)/2＝840.9。
实施例2.2含药连接子MWC-L2的合成
/>
步骤1
Boc-Val-Ala-OH(288mg，1mmol)，A1化合物(176mg，1mmol，1eq)，DIPEA(322mg，2.5mmol，2.5eq)，HATU(456mg，1.2mmol，1.2eq)溶于30ml DCM中，搅拌反应2h。反应液旋干，柱层析纯化，洗脱剂：PE：EA＝10：1～5：1，定量地得到中间体2-1为灰绿色固体450mg。
步骤2
中间体2-1(450mg，1mmol)，CDE三环化合物(263mg，1mmol，1eq)，对甲苯磺酸吡啶盐(PPTS)(251mg，1mmol，1eq)悬浮于30ml甲苯中，加热回流反应2小时。停止加热，待反应液冷却后，收集固体沉淀物即为中间体2-2粗品，棕色固体750mg。LC-MS(ESI):M+1＝574。不经纯化直接下一步反应。
步骤3
BL接头化合物(857mg，1mmol)，HoSu(138mg，1.2mmol，1.2eq)，DCC(310mg，1.5mmol，1.5eq)溶于30ml DCM中，室温搅拌3h，反应液抽滤，滤液即为A-Osu的DCM溶液。将滤液加入到中间体2-2粗品、DIPEA(323mg，2.5mmol，2.5eq)、DCM(30ml)的混合溶液中，搅拌反应3h。将反应液冷却至10℃下，加入1N盐酸(20ml)，搅拌0.5h。分液，水相用DCM(30ml*2)萃取，合并有机相。有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干。柱层析纯化，洗脱剂：DCM：MeOH＝50：1～10：1，得连接子MWC-L2为橘红色固体，325mg，收率23.0％，LC-MS(ESI):M+1＝1414，(M+1)/2＝707
实施例2.3含药连接子MWC-L3的合成
步骤1
Boc-Gly-OH(175mg，1mmol)，A1化合物(176mg，1mmol，1eq)，DIPEA(322mg，2.5mmol，2.5eq)，HATU(456mg，1.2mmol，1.2eq)溶于30ml DCM中，搅拌反应2h。反应液旋干，柱层析纯化，洗脱剂：PE：EA＝10：1～5：1，定量地得到中间体3-1为淡绿色固体335mg。
步骤2
中间体3-1(335mg，1mmol)，CDE三环化合物(263mg，1mmol，1eq)，PPTS(251mg，1mmol，1eq)悬浮于30ml甲苯中，加热回流反应2小时。停止加热，待反应液冷却后，收集固体沉淀物即为中间体3-2粗品，棕色固体560mg。LC-MS(ESI):M+1＝461。不经纯化直接下一步反应。
步骤3
Fmoc-Gly-Gly-Phe-OH(501mg，1mmol)，中间体3-2粗品(560mg)，DIPEA(322mg，2.5mmol，2.5eq)，HATU(456mg，1.2mmol，1.2eq)，溶于20ml DMF中，搅拌反应3h。加入1N盐酸(30ml)，搅拌0.5h。用DCM(30ml*2)萃取，合并有机相。有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干。柱层析纯化，洗脱剂：DCM：MeOH＝50：1～10：1，得中间体3-3为棕色固体，350mg，LC-MS(ESI):M+1＝945
步骤4
中间体3-3(350mg，0.37mmol)溶于甲醇(20ml)中，加入二乙胺(2ml)，搅拌反应3h。旋干反应液，得中间体3-4粗品为棕色粘稠物，LC-M(ESI):M+1＝722，粗品不经纯化直接下一步。
步骤5
BL接头化合物(318mg，0.37mmol)，HoSu(51mg，0.44mmol，1.2eq)，DCC(114mg，0.56mmol，1.5eq)溶于30ml DCM中，室温搅拌3h，反应液抽滤。将滤液加入到中间体3-4粗品、DIPEA(120mg，0.93mmol，2.5eq)、DCM(30ml)的混合溶液中，搅拌反应3h。将反应液冷却至10℃下，加入1N盐酸(20ml)，搅拌0.5h。分液，水相用DCM(30ml*2)萃取，合并有机相。有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干。柱层析纯化，洗脱剂：DCM：MeOH＝50：1～10：1，得连接子MWC-L3为橘红色固体120mg，收率20.8％，LC-MS(ESI):M+1＝1562，(M+1)/2＝781
实施例2.4含药连接MWE-L4的合成
根据实施例2.2的方法用A3代替A1合成得到MWE-L4，为橘红色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1430
实施例2.5含药连接子MWG-L5的合成
根据实施例2.2的方法用A6代替A1合成得到MWG-L5，为橘红色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1442
实施例2.6含药连接子MWF-L6的合成
根据实施例2.2的方法用A7代替A1合成得到MWF-L6，为橘红色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1450
实施例2.7含药连接子MWF-L7的合成
根据实施例2.2的方法用A7代替A1，用Alloc-Ala-Ala-Ala-OH代替Alloc-Val-Ala-OH合成得到MWF-L7，为橘红色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1493.5
实施例2.8含药连接子MWF-L8的合成
根据实施例2.3的方法用A7代替A1合成得到MWF-L8，为橘红色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1598.4。
实施例2.9含药连接子MWF-L9的合成
根据实施例2.2的方法用A5代替A1合成得到MWF-L9，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1416.4。
实施例2.10含药连接子MWF-L10的合成
根据实施例2.2的方法用A13代替A1合成得到MWF-L10，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1468.4。
实施例2.11含药连接子MWF-L11的合成
根据实施例2.2的方法用A18代替A1合成得到MWF-L11，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1450.4。
实施例2.12含药连接子MWF-L12的合成
根据实施例2.2的方法用A16代替A1合成得到MWF-L12，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1434.4。
实施例2.13含药连接子MWF-L13的合成
根据实施例2.2的方法用A19代替A1合成得到MWF-L13，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1486.4。
实施例2.14含药连接子MWF-L14的合成
根据实施例2.2的方法用A17代替A1合成得到MWF-L14，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1470.4。
实施例2.15含药连接子MWF-L15的合成
根据实施例2.2的方法用A2代替A1合成得到MWF-L15，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1432.4。
实施例2.16含药连接子MWD-L7的合成
合成路线如下：
步骤1
Fmoc-Val-Cit-PAB-PNP(153mg，0.2mmol)，甲磺酸依沙替康(106mg，0.2mmol，1eq)，DIPEA(65mg，0.5mmol，2.5eq)，溶于30ml DCM中，搅拌反应2h。反应液旋干，柱层析纯化，洗脱剂：DCM：MeOH＝50：1～10：1，得到中间体5-1为淡黄色固体180mg。LC-MS(ESI):M+1＝1064。
步骤2
中间体5-1(180mg，0.17mmol)溶于甲醇(20ml)中，加入二乙胺(2ml)，搅拌反应3h。旋干反应液，得中间体5-2粗品为淡黄色粘稠物，LC-M(ESI):M+1＝842，粗品不经纯化直接下一步。
步骤3
BL接头化合物(146mg，0.17mmol)，HoSu(25mg，0.21mmol，1.2eq)，DCC(54mg，0.26mmol，1.5eq)溶于20ml DCM中，室温搅拌3h，反应液抽滤。将滤液加入到中间体5-1粗品、DIPEA(56mg，0.43mmol，2.5eq)、DCM(20ml)的混合溶液中，搅拌反应3h。将反应液冷却至5～10℃，加入1N盐酸(20ml)，搅拌0.5h。分液，水相用DCM(30ml*2)萃取，合并有机相。有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，旋干。柱层析纯化，洗脱剂：DCM：MeOH＝50：1～10：1，得含药连接子MWD-L7为黄色固体67mg，收率23.1％，LC-MS(ESI):M+1＝1682，(M+1)/2＝841。
实施例2.17含药连接子MWD-L8的合成
根据实施例2.1类似合成方法，用代替BL化合物合成得到MWD-L8为淡黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1645.7。
实施例2.18含药连接子MWD-L9的合成
/>
根据实施例2.1类似合成方法，用代替BL化合物合成得到MWD-L9为淡黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1713.7。
实施例2.19含药连接子L-D的合成
根据实施例2.5类似合成方法，用MC-OSU代替BL-OSU化合物合成得到L-D为淡黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝795.9。
实施例2.20含药连接子L-E的合成
根据实施例2.2类似合成方法，用MC-OSU代替BL-OSU化合物合成得到L-E为淡黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝803.8。
实施例2.21含药连接子L-F的合成
根据实施例2.2类似的方法，用A7代替A1，用MaL-PEG8-COOH代替BL化合物制备得到L-F，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1185。
实施例2.22含药连接子L-G的合成
根据实施例2.3，用MC-OSu化合物代替BL-OSu化合物，制备得到L-G，为黄色固体，MS(ESI):M+1＝965.98。
实施例2.23含药连接子L-H的合成
根据实施例2.4类似合成方法，用MaL-PEG8-COOH代替BL化合物合成得到L-H为淡黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1165.3。
实施例2.24含药连接子L-I的合成
用实施例2.2类似的方法，用A13代替A1，制备得到L-I，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1203.4。
实施例2.25含药连接子L-J的合成
用实施例2.2类似的方法，用A18代替A1，制备得到L-J，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1185.4。
实施例2.26含药连接子L-K的合成
/>
用实施例2.2类似的方法，用A16代替A1，制备得到L-K，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1169.3。
实施例2.27含药连接子L-L的合成
用实施例2.2类似的方法，用A19代替A1，制备得到L-L，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1221.4。
实施例2.28含药连接子L-M的合成
用实施例2.2的方法，用A17代替A1，制备得到L-M，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1205.4。
实施例2.29含药连接子L-N的合成
按照实施例2.2类似的方法合成，用HCDE中间体代替CDE中间体；用MaL-PEG8-COOH代替BL化合物制备得到L-N，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1163.2(一对非对映异构体混合物)。
实施例2.30含药连接子MWS-L1的合成
按照实施例2.2类似的方法用A13代替A1，用
代替BL接头化合物制备得到MWS-L1，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1236.3。/>
实施例2.31含药连接子MWS-L2的合成
用实施例2.2类似的方法，用A18代替A1，制备得到MWS-L2，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1218.4。
实施例2.32含药连接子MWS-L3的合成
用实施例2.2类似的方法，用A16代替A1，制备得到MWS-L3，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1202.4。
实施例2.33含药连接子MWS-L4的合成
用实施例2.2类似的方法，用A19代替A1，制备得到MWS-L4，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1254.4。
实施例2.34含药连接子MWS-L5的合成
根据实施例2.2的方法，用A17代替A1，制备得到MWS-L5，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1238.4。
实施例2.35含药连接子MWS-L6的合成
按照实施例2.11类似的方法用
代替Mal-PEG8-COOH制备得到MWS-L6，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1302.4
实施例2.36含药连接子MWS-L7的合成
用实施例2.2类似的方法，用A18代替A1，制备得到MWS-L7，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1284.4。
实施例2.37含药连接子MWS-L8的合成
用实施例2.2类似的方法，用A16代替A1，制备得到MWS-L8，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1268.4。
实施例2.38含药连接子MWS-L9的合成
用实施例2.2类似的方法，用A19代替A1，制备得到MWS-L9，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1320.4。
实施例2.39含药连接子MWS-L10的合成
用实施例2.2类似的方法，用A17代替A1，制备得到MWS-L10，为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1304.4。
实施例组3对比含药连接子的合成
实施例3.1含药连接子L-A、L-B和L-C的合成
3.1.1随机偶联含药连接子的合成
含药连接子MC-GGFG-Dxd按照专利公开文件(US20190151328A1)所述方法合成，得到MC-GGFG-Dxd为淡黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1034，1H NMR(CDCl3)。
含药连接子L-A和L-B，按照专利公开文件(WO2020200880)所述方法合成，得到L-A为黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝767；L-B为棕色粘稠物，LC-MS(ESI):M+1＝1149。
3.2.2其他环桥连含药连接子L-C的合成
合成路线如下：
按照含药连接子L-1类似的方法合成连接子L-C，L-C为淡黄色固体，LC-MS(ESI):M+1＝1982，(M+1)/2＝991。
实施例组4抗体药物偶联物的制备与理化表征
抗体药物偶联物制备工艺
a.定点偶联制备工艺
抗体经还原打开二硫键，再与连接子进行偶联形成桥接抗体药物偶联物，再经水解打开马来酰亚胺环，最后经纯化得到DAR＝4的抗体-药物偶联物。
b.随机偶联制备工艺
抗体经还原打开二硫键，再与连接子进行偶联形成桥接抗体药物偶联物。
示例性地，采用了以下实验方法：
4.1抗体药物偶联物的通用制备方法
a.定点偶联的通用制备方法
抗体的还原：将120mg的抗体样品使用Sephadex G25载体的NAP-25色谱柱、置换至pH值7.0含有50mM的氯化钠、50mM的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲溶液中，并将抗体浓度稀释至10mg/ml。取10ml共计100mg的抗体样品，以抗体-TCEP摩尔比1比10当量添加10mg/ml的TCEP(Sigma-Aldrich)的水溶液，加入TCEP水溶液的体积为2.1ml。孵育2小时后，使用Sephadex G25色谱柱反应溶液进行置换，置换至pH 6.5含有50mM氯化钠，50mM磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲的缓冲溶液中。
抗体与含药连接子的偶联及水解：将上述还原后的抗体稀释至5mg/mL，依次加入反应总体积2％的0.38ml N,N-二甲基乙酰胺(DMA)0.38ml作为预溶剂，以抗体-小分子药物摩尔比1比5.5倍当量添加0.67ml含10mg/mL含药连接子的DMA-含药连接子混合溶液作为反应液。室温搅拌30分钟。使用Sephadex G25载体的NAP-25色谱柱将反应液置换至pH8.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液，除去过量的含药连接子，37℃水浴加热3小时。
抗体药物偶联物的纯化：将上述样品进行使用AMICOM超滤离心管进行浓缩，将样品浓缩至15mg/mL左右。添加50mM磷酸氢二钠-磷酸二氢钠+3M磷酸铵缓冲溶液至电导率为100ms/cm。上样至TOYOPEAL Butyl-650M填料(购自TOSOH)疏水柱，A相为50mm磷酸氢二钠-磷酸二氢钠+0.6M硫酸铵，B相为50mm磷酸氢二钠-磷酸二氢钠的缓冲溶液。B相0-100％梯度8倍柱体积洗脱，对主峰进行收集。
使用AMICOM超滤离心管将最终样品置换至pH值7.4的50mM的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲盐中，并使用0.22um的滤膜进行过滤(Sartorius stedim Ministart)。
b.随机偶联的通用制备方法
按照CN 105849126 A专利公开的制备方法制备得到。
4.2抗体药物偶联物的通用分析方法
a.紫外分光光度法测定药物抗体偶联比(UV-DAR法)与浓度
抗体药物偶联物浓度可通过测定在280nm及小分子特征吸收波长下的UV吸光度，然后进行下述计算而得到。
a1.抗体药物偶联物的药物抗体偶联比(DAR)测定
根据文献[Clin Cancer Res.2004Oct 15；10(20):7063-70]可知DAR 其中，/>为抗体在280nm下摩尔吸收系数，A280为抗体药物偶联物在280nm下紫外吸收值，Az为抗体药物偶联物在含药连接子特征吸收波长Z nm下紫外吸收值，/>为抗体在含药连接子特征吸收波长Z nm下摩尔吸收系数，/>为含药连接子在其特征吸收波长Z nm下摩尔吸收系数，/>为含药连接子在280nm下摩尔吸收系数。
其中：
a2.药物浓度测定
由于某一波长下的总吸光度等于存在于体系内的所有吸收化学物质种类的吸光度的和(吸光度的加成性)，所以假设在抗体与含药连接子偶联前后，抗体及含药连接子的摩尔吸光系数不发生变化时，抗体药物偶联物浓度有如下关系：
/>
因此，抗体药物偶联物摩尔浓度(mol/L)由此得到抗体药物偶联物浓度(g/L)/> 将DAR值代入式中即得蛋白浓度。
其中，MWADC为抗体药物偶联物分子量，MWAb为抗体分子量，MWD为含药连接子分子量。
b.疏水层析法
b1.抗体药物偶联物疏水色谱HIC-HPLC测定DAR值
样品制备：样品用流动相B稀释至2.0mg/ml后，12000rpm离心10min，取上清用于HPLC分析；
色谱柱：Sepax Proteomix HIC Butyl-NP5，5μm，4.6mm*35mm；
流动相A：1.5M(NH4)2SO4+25mM PB，pH 7.0
流动相B：25mM PB+20％IPA，pH 7.0；
流速：0.6mL/min；
检测波长：280nm；
柱温：30℃；
上样量：10μL；
HIC色谱梯度
时间 ％A ％B
0 100 0
10 80 20
20 40 60
25 0 100
25.1 100 0
35 100 0
DAR计算公式：
DAR＝∑(加权峰面积)/100，即DAR＝(D0峰面积比*0+D1峰面积比*1+D2峰面积比*2+D3峰面积比*3+D4峰面积比*4+D5峰面积比*5+D6峰面积比*6+D7峰面积比*7+D8峰面积比*8)/100。
b2.抗体药物偶联物疏水色谱HIC-HPLC测定DAR值
样品制备：样品用流动相B稀释至2.0mg/ml后，12000rpm离心10min，取上清用于HPLC分析；
色谱柱：TSKgel Butyl-NPR，2.5μm，4.6mm*100mm；
流动相A：1.2M(NH4)2SO4+25mM PB，pH 7.0；
流动相B：25mM PB+20％IPA，pH 7.0；
流速：0.6mL/min；
检测波长：280nm；
柱温：30℃；
上样量：10μL；
HIC色谱梯度
时间 ％A ％B
0 100 0
1 100 0
20 0 100
20.1 100 0
30 100 0
DAR计算公式：同b1。
b3.抗体药物偶联物疏水色谱HIC-HPLC测定DAR值
样品制备：样品用流动相B稀释至2.0mg/ml后，12000rpm离心10min，取上清用于HPLC分析；
色谱柱：Sepax Proteomix HIC Butyl-NP5，5μm，4.6mm*35mm；
流动相A：2.5M(NH4)2SO4+125mM PB，pH 7.0
流动相B：125mM PB，pH 7.0
流速：0.5mL/min；
检测波长：280nm；
柱温：30℃；
上样量：10μL；
HIC色谱梯度
DAR计算公式：同b1。
c.质谱法LC-MS测定DAR值
样品处理：取适量样品于超滤管中，采用50mM NH4HCO3置换缓冲液(pH7.1)进行置换，补加缓冲液，超滤离心(13000g*5min)。加入8μl的PNGase F酶至置换后的样品中，37℃孵育5h进行脱糖处理，孵育结束后，12000rpm离心5min，取上清液于进样小瓶中作为供试样品待用。
色谱柱：PolyHYDROXYETHYLA Column,/>5um,2.1mm×200mm；
流动相：50mM乙酸铵，pH 7.0；
运行时间：10min；
流速：0.1mL/min；
进样体积：2μL；
柱温：25℃；
检测波长：280nm；
离子化方式：ESI positive
干燥气体温度：325℃
干燥气体流速：8L/min
雾化器压力：20psig
鞘气温度：325℃；
鞘气流量：12L/min；
扫描设置：900-8000m/z。
d.分子排阻色谱SEC-HPLC测定分子大小异质性
样品处理：样品用流动相稀释至约1.0mg/ml后，12000rpm离心10min，取上清进样分析。
色谱柱：TOSOH，TSKgel G3000SWXL，5μm，7.8mm*300mm；
流动相：100mM PB+200mM盐酸精氨酸，5％异丙醇(pH 6.8)；
流速：0.6mL/min；
检测波长：280nm；
柱温：30℃；
上样量：20uL；
洗脱时间：20min；
洗脱梯度：等度洗脱。
e.非还原毛细管电泳NR-CE-SDS测定纯度
根据《中国药典四部》通则3127单抗分子大小变异体测定法测定。
f.反向作用色谱(RP-HPLC)法测定抗体药物偶联物小分子/抗体偶联比(DAR值)
按照专利公开文件(US 10227417 B2)所述方法分析。
根据公式计算DAR值：DAR＝2×(∑轻链加权峰面积+∑重链加权峰面积)/100。即：DAR＝2×(L0峰面积比×0+L1峰面积比×1+H0峰面积比×0+H1峰面积比×1+H2峰面积比×2+H3峰面积比×3)/100。
g.反向作用色谱(RP-HPLC)法测定抗体药物偶联物小分子/抗体偶联比(DAR值)
样品前处理：按照专利公开文件(US 10227417 B2)所述方法处理样品。
HPLC仪器：Waters Acquity Arc
流动相A：0.1％TFA+ACN
流动相B：0.1％TFA+H2O
分析柱：Waters；BioResolve；2.1*100mm；2.7μm；PN 0024168
进样体积：5μL
流速：0.25mL/min
柱温：80℃
检测器：PDA检测器
检测波长：280nm
梯度：
时间(min) 流动相A 流动相B
0 25 75
12.5 36 64
20 45 55
25 45 55
25.1 25 75
35 25 75
实施例4.1靶向Trop-2的抗体药物偶联物的制备与表征
根据本实施例组4的偶联方法，将靶向Trop-2抗体hTINA1(根据WHO DrugInformation中Datopotamab的序列进行制备)、h23-12各100mg，分别与含药连接子MWD-L1、MWC-L2、MWC-L3、MWF-L6、MWD-L7、MWD-L8、MWD-L9及MWF-L8制备ADC。得到桥连ADC药物1a、1b、1c、1d、1j、1k、1l、1m、1n、1o和1p；收集1d未进行疏水层析的中间样品，作为中间样品1j保存。
根据专利CN105849126B方法，将靶向Trop-2抗体hTINA1、h23-12各100mg，分别与MC-GGFG-Dxd、L-A、L-B、L-J、MWS-L7、L-I及MWS-L6制备ADC，得到随机偶联ADC1e、1f、1g、1h、1i、1q、1r、1s、1t和1u。
使用本实施例组4中紫外分光光度法4.2a、疏水层析法4.2b以及分子排阻色谱法4.2d分别对桥连ADC(1a-1d、1j、1k-1p)的DAR值、浓度及纯度进行测定。
使用本实施例组4中反向作用色谱法4.2f对含MC-GGFG-Dxd含药连接子的ADC样品(1e、1h、1q、1r、1s、1t及1u)DAR值进行测定、反向色谱法4.2g对含L-A或L-B含药连接子的ADC样品(1f、1g、1i)DAR值进行测定；使用实施例组4中4.2a紫外分光光度法以及4.2d分子排阻色谱法分别对非桥连ADC药物(1e-1i)的浓度及纯度进行测定。
结果见表1。
表1.靶向Trop-2的抗体药物偶联物的表征结果
(本发明中，h23-12为具有如下序列的单克隆抗体：
重链可变区：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWMGEITPSDNYGSYNQKFKGRVTITRDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGHGNYVSFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:7)
重链CDR1：SYWMH(SEQ ID NO:1)
重链CDR2：EITPSDNYGSYNQKFKG(SEQ ID NO:2)
重链CDR3：GHGNYVSFDY(SEQ ID NO:3)
轻链可变区：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQQGYTLPPYTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:8)
轻链CDR1氨基酸：RASQDISNYLN(SEQ ID NO:4)
轻链CDR2氨基酸：YTSRLES(SEQ ID NO:5)
轻链CDR3氨基酸：QQGYTLPPYT(SEQ ID NO:6)
重链恒定区：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:9)
轻链恒定区：
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:10)
实施例4.2靶向Her2抗体药物偶联物的制备
根据本实施例组4的偶联方法，将靶向HER-2抗体曲妥珠单抗(CAS:180288-69-1，购自上海罗氏制药有限公司)各100mg，分别与含药连接子MWD-L1、MWD-L2、MWE-L4、MWF-L6、MWD-L8、MWD-L9、L-C，MWC-L3进行制备桥连ADC 2a、2b、2c、2h、2i、2d，2l。
分别根据专利CN105829346B方法，将靶向HER-2抗体曲妥珠单抗各100mg分别与MC-GGFG-DXD、L-A、L-B制备随机偶联ADC 2e，2f，2g，2k，2m。
使用本实施例组4中紫外分光光度法4.2a、疏水层析法4.2b以及分子排阻色谱法4.2d分别对桥连ADC(2a-2d，2h-2j，2l)的DAR值、浓度及纯度进行测定。
使用实施例组4中反向色谱法4.2f对含MC-GGFG-Dxd含药连接子的ADC样品(2g)DAR值进行测定、反向色谱法4.2g对含L-A或L-B含药连接子的ADC样品(2e、2b)DAR值进行测定；使用紫外分光光度法4.2a以及分子排阻色谱法4.2d分别对非桥连ADC药物(2e-2g，2k，2m)的DAR值、浓度及纯度进行测定。
结果见表2。
表2.靶向HER-2的抗体药物偶联物的表征结果
序号 名称 抗体 含药连接子 DAR 浓度mg/ml SEC
2a Her2-ADC-1 曲妥珠单抗 MWC-L1 3.9 4.6 98.0％
2b Her2-ADC-2 曲妥珠单抗 MWC-L2 4.0 3.8 99.2％
2c Her2-ADC-3 曲妥珠单抗 MWE-L4 4.0 3.7 97.5％
2d Her2-ADC-4 曲妥珠单抗 L-C 3.9 3.8 97.72
2e Her2-ADC-5 曲妥珠单抗 L-A 4.3 4.8 99.0％
2f Her2-ADC-6 曲妥珠单抗 L-B 4.1 6.2 98.6％
2g Her2-ADC-7 曲妥珠单抗 MC-GGFG-Dxd 4.0 6.6 99.8％
2h Her2-ADC-8 曲妥珠单抗 MWD-L8 4.0 7.5 98.9％
2i Her2-ADC-9 曲妥珠单抗 MWD-L9 4.0 7.8 99.5％
2j Her2-ADC-10 曲妥珠单抗 MWF-L6 4.0 7.2 98.7％
2k Her2-ADC-11 曲妥珠单抗 MC-GGFG-Dxd 8.0 5.3 99.2％
2l Her2-ADC-12 曲妥珠单抗 MWC-L3 3.5 16.7 99.5％
2m Her2-ADC-13 曲妥珠单抗 L-B 8.0 1.8 95.0％
实施例4.3化合物的结构表征
对实施例1和实施例2制备的Trop2样品(1a、1h、1j)以及Her2样品(2b、2e)如下分别使用本实施例组4中4.2b进行疏水层析分析，以比较不同连接技术产生的ADC的药物异质性。
结果见表3。
表3.抗体药物偶联物的表征结果
序号 名称 抗体 含药连接子 HIC层析方法
1d Trop2-ADC-4 hTINA1 MWC-L1 4.2.b3
1h Trop2-ADC-8 hTINA1 MC-GGFG-Dxd 4.2.b2
1j Trop2-ADC-4’ hTINA1 MWC-L1 4.2.b3
2b Her2-ADC-2 曲妥珠单抗 MWC-L2 4.2.b3
2e Her2-ADC-5 曲妥珠单抗 L-A 4.2.b2
比较Trop2-ADC-4’、Trop2-ADC-4以及Trop2-ADC-8可知，使用含药连接子MWD-L1制备的ADC药物Trop2-ADC-4和Trop2-ADC-4’与使用MC-GGFG-Dxd制备的已知ADC药物(Trop2-ADC-8)相比，具有更优异的药物均一性。结果见图1。
比较Her2-ADC-2以及Her2-ADC-5可知，使用含药连接子MWC-L2制备的ADC药物Her2-ADC-2比使用已知连接子L-A制备的Her2-ADC-5的均一性更佳。
实施例组5测活评价
实施例5.1喜树碱类化合物活性对比研究
口腔上皮癌细胞KB(购自：ATCC)使用DMEM培养基添加10％FBS培养；人胃癌细胞NCI-N87(购自：ATCC)使用RPMI1640培养基添加10％FBS培养；人结肠癌细胞HT29(购自：ATCC)使用RPMI1640培养基添加10％FBS培养；人胰腺腺癌细胞BxPC-3(购自：ATCC)使用RPMI1640培养基添加10％FBS培养。
使用上述相应培养基将KB细胞调整细胞密度至2×104个/mL；将NCI-N87细胞调整细胞密度至5×104个/mL；将HT29细胞调整细胞密度至5×104个/mL，100μL/孔铺于96孔透明平底板中，过夜培养；将BxPC-3细胞调整细胞密度至5×104个/mL。
使用培养基稀释待测样品至20μM，然后5倍稀释，设置9个梯度(设置不加样品孔即细胞最大生长孔和不加细胞孔即培养基本底)。按100μL/孔加入细胞培养板中，二氧化碳培养箱孵育96小时。孵育完毕后，按照20μL/孔加入配置好的CCK-8(购自：同仁化学)，二氧化碳培养箱孵育3小时后，酶标仪读取OD450值。
数据采用prism7软件进行4参数拟合曲线，最大杀伤计算公式为：1-(最大杀伤孔的OD450值-培养基本底OD450值)/(细胞最大生长孔OD450值-培养基本底OD450值)*100％。结果见表4。
表4喜树碱类化合物活性对比研究结果
/>
/>
以下对具有不同含药连接子的抗体药物偶联物进行活性对比研究。
实施例5.2不同含药连接子情况下的靶向Her2 ADC的活性对比研究
将Her2高表达的细胞系N87(购自：ATCC)从液氮中取出，复苏后用完全培养基将细胞密度调到5×104个/ml之后，100μl/孔加入细胞培养板中，过夜培养；使用96孔细胞培养板，对细胞板A排、H排、1列和12列以200μl/孔加入无菌PBS或者无菌纯化水来包边。
使用完全培养基稀释上文制备的靶向Her2的ADC样品，依次稀释到50ug/ml，之后再4倍梯度稀释，共9个梯度加零点，所有样品均设3个复孔。第11列应设阴性对照(细胞+培养基)和空白对照(无细胞，纯培养基)，然后置于细胞培养箱中孵育120h或168小时(详细见表)。取出细胞培养板，40μl/孔加入MTS后，37℃培养箱反应2-4h；取出细胞板，在490nm处读取OD值。
结果见表5。
表5.靶向Her2 ADC的体外细胞杀伤效果
上述结果表明，使用MWD-L1含药连接子的ADC药物的药效优于使用现有MC-GGFG-Dxd、L-A连接子的ADC；而使用自制的桥连含药连接子L-C相较MWD-L1以及MC-GGFG-Dxd要差。
进一步地，参照上文所述，对使用MWC-L2含药连接子的ADC与使用L-B、MC-GGFG-Dxd的ADC做进一步比较。结果见表6。
表6.靶向Her2 ADC的体外细胞杀伤效果
上述结果表明，MWC-L2含药连接子相较已知含药连接子L-B、MC-GGFG-Dxd而言，同样具有一定的体外杀伤优势。
进一步地，参照上文所述，对MWD-L1含药连接子与MWD-L8、MWD-L9含药连接子进行比较。结果见表7。
表7.靶向Her2 ADC的体外细胞杀伤效果
上述结果表明，含有苯基取代的含药连接子MWD-L1的ADC相较含苯基无取代的含药连接子MWD-L8以及苯基三氟甲基取代的含药连接子MWD-L9的ADC而言，药效更为显著。
实施例5.3不同含药连接子情况下的靶向Trop2 ADC的活性对比研究
将Trop2高表达的细胞系BxPC3(购自：ATCC)从液氮中取出，复苏后用完全培养基将细胞密度调到5×104个/ml之后，100μl/孔加入细胞培养板中，过夜培养；使用96孔细胞培养板，对细胞板A排、H排、1列和12列使用200μl/孔加入无菌PBS或者无菌纯化水来包边。
使用完全培养基稀释上文制备的靶向Trop2的ADC样品，依次稀释到50ug/ml，之后再4倍梯度稀释，共9个梯度加零点，所有样品均设3个复孔。第11列应设阴性对照(细胞+培养基)和空白对照(无细胞，纯培养基)，然后置于细胞培养箱中孵育120h。取出细胞培养板，40μl/孔加入MTS后，37℃培养箱反应2-4h；取出细胞板，在490nm处读取OD值。
结果见表8。
表8.靶向Trop2 ADC的体外细胞杀伤效果
上述结果表明，使用MWD-L1、MWC-L2含药连接子制备的ADC药物药效相当，且使用本发明实施例的含药连接子制备的ADC药物药效均优于使用现有L-B、L-A以及MC-GGFG-Dxd连接子的ADC。
进一步地，参照上文所述，对Trop2-ADC-1与Trop2-ADC-10以及Trop2-ADC-6做进一步比较。结果见表9。
表9.靶向Trop2 ADC的体外细胞杀伤效果
通过比较上述实施结果可知，含有不同释药结构的含药连接子的ADC药物存在显著的活性差异，其中使用MWD-L1时的药效最佳。
进一步地，参照上文所述，Trop2-ADC-1与Trop2-ADC-9、Trop2-ADC-8做进一步比较。结果见表10。
表10.靶向Trop2的ADC体外细胞杀伤效果
上述结果表明，本发明提供的新型ADC药物Trop2-ADC-1，相较于Trop2-ADC-8、Trop2-ADC-9具有一定的活性优势。
实施例5.4不同ADC毒素对于低丰度肿瘤和肿瘤细胞附近低抗原表达细胞的体外药效研究
由于晚期肿瘤的异质性，肿瘤组织的抗原表达不一。低丰度肿瘤，以及肿瘤附近低表达细胞造成的旁观者效应往往影响到晚期肿瘤患者的预后，是药物评估的重要指标。因此对低丰度肿瘤，以及肿瘤细胞附近低表达细胞进行了分别评估。
(1)不同ADC毒素对于低丰度肿瘤地的体外药效研究
细胞HS-746T购自ATCC；细胞用含10％胎牛血清(FBS)的RPMI 1640/IMEM(1：1)培养液培养，培养液中同时添加青、链霉素，于37℃、含5％CO2空气的培养箱中培养。
细胞接种后，细胞经0.1μg/mL和1μg/mL的Trop2-ADC-1、Trop2-ADC-2、Trop2-ADC-5、Trop2-ADC-10、Trop2-ADC-14分别处理168小时后，收集细胞，计数；之后将细胞与Dylight 488NHS Ester标记的上述Trop2-ADC在4℃避光孵育1小时，离心去上清后以磷酸盐缓冲液(PBS,pH7.4)重悬，用PBS(pH7.4)洗三次，以流式细胞仪BD ACCURI C6 PLUS检测计算Hs746t细胞数。
表11.靶向Trop2的ADC对于低丰度肿瘤HS-746T体外细胞杀伤效果
通过上述研究可知，对于低丰度肿瘤细胞HS-746T而言。使用含药连接子MWD-L1，MWC-L2及MWF-L6的小分子均表现出一定的杀伤作用。GGFG-DXD、MWD-L7这两种连接形式的ADC对低丰度肿瘤的杀伤作用几乎没有。此外，含有化合物3的含药连接子，相较MWC-1的小分子具有更好的杀伤作用。可能与化合物3本身更良好的细胞膜穿透性有关。
(2)不同ADC毒素对于肿瘤细胞附近低抗原表达细胞的体外药效研究
KPL-4细胞、MDA-MB-468细胞购自ATCC，细胞用含10％胎牛血清(FBS)的RPMI1640/IMEM(1：1)培养液培养，培养液中同时添加青、链霉素，于37℃、含5％CO2空气的培养箱中培养。
HER2阳性的KPL-4细胞和HER2阴性的MDA-MB-468细胞共同接种，或HER2阴性的MDA-MB-468细胞单独接种，经药物处理168小时后，收集细胞，将细胞与Dylight488NHSEster标记的抗HER2抗体在4℃避光孵育1小时，离心去上清后以PBS(pH 7.4)重悬，用PBS洗三次，以流式细胞仪BD ACCURI C6 PLUS检测计算KPL-4和MDA-MB-468细胞比例，并计算各自细胞数。
表12.靶向HER2的ADC在HER2阳性的KPL-4细胞和HER2阴性的MDA-MB-468的旁观者效应研究
通过上述研究可知，在高浓度组(1μg/mL)的条件下，各ADC组对阴性细胞均具有较好的肿瘤抑制作用。然而，各浓度组阳性细胞数与阴性细胞数的比对可知。MWF-L6及MWC-L2旁观者杀伤作用优于对照组GGFG-DXD以及L-B。
实施例5.5不同含药连接子体内杀伤作用研究
使用人胰腺癌BxPc-3细胞，其购自中国科学院细胞库。BxPc-3细胞用10-cm培养皿贴壁培养，培养条件为RPMI 1640培养液中加10％胎牛血清以及青、链霉素，于37℃，含5％CO2培养箱中培养。一周2-3次传代，当细胞呈指数生长期时，胰酶消化、收集细胞，计数，接种。
使用不同含药连接子的抗体药物偶联物Trop2-ADC-1、Trop2-ADC-2、Trop2-ADC-3、Trop2-ADC-5进行不同剂量组条件下分组比较研究(表13)。分别对小鼠静脉注射(IV)给药，给药体积10mL/kg；溶剂组给予相同体积的溶剂(生理盐水)；具体给药剂量和给药方案见表13。每周测2次肿瘤体积，称小鼠体重，记录数据。
实验结束、达到实验终点或肿瘤体积达到2000mm3，CO2麻醉处死动物，随后解剖取瘤并拍照。结果见表13和图2。
表13.Trop2-ADC-1、Trop2-ADC-2、Trop2-ADC-3、Trop2-ADC-5对人胰腺癌BxPc-3裸小鼠皮下移植瘤的疗效(根据肿瘤体积计算TGI％)。
上述结果表明，定点含药连接子MWD-L1、MWC-L2及MWC-L3体内活性均优于对照分子GGFG-DXD。与此同时，尽管MWC-L2与MWC-L3分别采用了VA的二肽结构以及GGFG的四肽释放结构，但体内药效处于一个相当的水平。
实施例5.6靶向TROP2的抗体药物偶联物体内药效研究
使用人膀胱癌HT1376细胞，其购自中国科学院细胞库。HT1376细胞用10-cm培养皿贴壁培养，培养条件为RPMI 1640培养液中加10％胎牛血清以及青、链霉素，于37℃，含5％CO2培养箱中培养。一周2-3次传代，当细胞呈指数生长期时，胰酶消化、收集细胞，计数，接种。
本实施例以抗体药物偶联物Trop2-ADC-14为例，在不同剂量组条件下对Trop2-ADC-14进行分组比较研究(表14)。分别对小鼠静脉注射(IV)给药，给药体积10mL/kg；溶剂组给予相同体积的溶剂(生理盐水)；具体给药剂量和给药方案见表14。每周测2次肿瘤体积，称小鼠体重，记录数据。
实验结束、达到实验终点或肿瘤体积达到2000mm3，CO2麻醉处死动物，随后解剖取瘤并拍照。结果见表14和图3，示出了各组小鼠肿瘤体积的生长变化情况。
表14.Trop2-ADC-14对人膀胱癌HT1376裸小鼠皮下移植瘤的疗效(根据肿瘤体积计算TGI％)。
注：P值为与溶剂组相比；DS-1062a参照专利公布文件CN105849126A制备
上述结果表明，在HT1376人膀胱癌移植瘤模型中，与溶剂组相比，Trop2-ADC-14具有显著肿瘤抑制活性；另一方面，同剂量下，Trop2-ADC-14对肿瘤抑制活性显著优于DS-1062及Trodelvy。
实施例5.7靶向TROP2的抗体药物偶联物体内药效研究
使用肺癌细胞Calu-3，其购自中国科学院细胞库。Calu-3细胞用10-cm培养皿贴壁培养，培养条件为RPMI 1640培养液中加10％胎牛血清以及青、链霉素，于37℃，含5％CO2培养箱中培养。一周2-3次传代，当细胞呈指数生长期时，胰酶消化、收集细胞，计数，接种。
本实施例以抗体药物偶联物Trop2-ADC-14为例，在不同剂量组条件下对Trop2-ADC-14进行分组比较研究(表15)。分别对小鼠静脉注射(IV)给药，给药体积10mL/kg；溶剂组给予相同体积的溶剂(生理盐水)；具体给药剂量和给药方案见表15。每周测2次肿瘤体积，称小鼠体重，记录数据。
实验结束、达到实验终点或肿瘤体积达到2000mm3，CO2麻醉处死动物，随后解剖取瘤并拍照。结果见表15和图4，示出了各组小鼠肿瘤体积的生长变化情况。
表15.Trop2-ADC-14对人肺癌Calu-3裸小鼠皮下移植瘤的疗效(根据肿瘤体积计算TGI％)。
注：P值为与溶剂组相比
上述结果表明，在Calu-3人肺癌移植瘤模型中，与溶剂组相比，Trop2-ADC-14具有显著肿瘤抑制活性；与此同时，同剂量下，Trop2-ADC-14对肿瘤抑制活性优于DS-1062及TrodelvyTM。
实施例5.8靶向TROP2的抗体药物偶联物旁观者效应的研究
TROP2阳性的BxPC-3细胞(购自ATCC)和TROP2阴性的HT-29细胞(购自ATCC)共同接种或TROP2阴性的HT-29细胞单独接种于6孔板中。经Trop2-ADC-14(10、30、100ng/mL)或者DS-1062a(100、300ng/mL)处理144小时后，收集细胞，计数。之后将细胞与Dylight 488NHSEster标记的Trop2-ADC-14在冰上避光孵育1小时，离心去上清后以PBS重悬，用PBS洗三次，以流式细胞仪BD ACCURI C6 PLUS检测计算BxPC-3和HT-29细胞比例，并计算各自细胞数。结果见图5。
通过上述研究可知，Trop2-ADC-14具有很强的旁观者效应，在杀伤TROP2阳性细胞的同时，杀伤TROP2阴性细胞；Trop2-ADC-14在30ng/mL时旁观者杀伤效应与参比药物DS-1062a在300ng/mL时效果相当(图5中的5A)，结果提示Trop2-ADC-14旁观者效应整体上强于参比药物DS-1062。Trop2-ADC-14、DS-1062a均对单独培养、TROP2阴性的HT-29细胞增殖没有明显影响(图5中的5B)。
实施例5.9靶向TROP2的抗体药物偶联物及喜树碱类化合物对不同肿瘤细胞增值抑制的研究
贴壁生长细胞应用SRB法检测抗体药物偶联物或喜树碱类化合物对体外培养肿瘤细胞增殖的影响。接种一定数量的对数生长期细胞于96孔培养板，贴壁生长过夜后，加入不同浓度的抗体、抗体药物偶联物或喜树碱类化合物。144小时后，用三氯乙酸固定。用SRB(以1％冰醋酸配制，浓度为4mg/mL)溶液染色后，每孔加入10mM Tris溶液溶解。用酶标仪在510nm波长下读OD值。
抑制率(％)＝(OD值对照孔－OD值给药孔)/OD值对照孔×100％
悬浮生长细胞应用MTT法检测抗体药物偶联物或喜树碱类化合物对体外培养肿瘤细胞增殖的影响。接种一定数量的对数生长期细胞于96孔培养板，贴壁生长过夜后，加入不同浓度的抗体药物偶联物或喜树碱类化合物。144小时后，每孔加入MTT，继续于37℃5％CO2饱和湿度培养箱中培养4小时。每孔加入100μL三联液，酶标仪上570nm和690nm波长下测定OD值。
根据各浓度抑制率，以Graphpad Prism 8.0软件计算半数抑制浓度IC50。实验单独重复1次，数据表示为均值±SD。结果见表16。
表16.靶向TROP2的ADC及喜树碱类化合物对不同肿瘤细胞增值抑制结果
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实施例5.10靶向TROP2的抗体药物偶联物内吞功能的研究
将BxPC-3细胞(购自：ATCC)接种于6孔板中，分别加入荧光标记的1μg/mL Trop2-ADC-14、Trop2-ADC-14mAb(即抗体h23-12)，于37℃分别孵育3、6、12、18、24和48小时。胰酶消化，洗去未内吞药物，然后用流式细胞仪(BD ACCURI C6 PLUS)检测荧光强度。实验单独重复1次。结果见图6。
通过上述研究可知，荧光标记的Trop2-ADC-14、h23-12与TROP2阳性细胞BxPC-3温育后，被细胞内吞；內吞具有时间依赖性，随着时间延长內吞药物逐渐增加；Trop2-ADC-14在24小时时的内吞药物大于抗体h23-12。
实施例5.11靶向TROP2的抗体药物偶联物及喜树碱类化合物诱导细胞凋亡的研究BxPC-3细胞(购自ATCC)接种于6孔板中，经Trop2-ADC-14(0.020、0.196、1.963nM)、DS-1062(0.020、0.196、1.963nM)、Trop2-ADC-14mAb(即抗体h23-12)(6.728nM)和化合物3(0.1、1、10nM)处理120小时后，收集细胞，加入Annexin-V-FITC和PI，室温避光染色15分钟，最后加入300μl 1x结合缓冲液重悬，用流式细胞仪(BD AccuriTMC6 Plus flow cytometer)检测凋亡，每组样品门中为1×104个细胞。实验数据用BD CSamplerTMPlus C6 Plus软件分析。结果见图7。
通过上述研究可知，Trop2-ADC-14 0.196nM即明显诱导细胞凋亡标志性蛋白pro-PARP降解，诱导pro-caspase 3水解成活性蛋白caspase 3(cleaved-caspase 3)，细胞凋亡诱导作用具有浓度依赖性；Trop2-ADC-14细胞凋亡诱导作用明显强于相同浓度的DS-1062a，后者在0.196nM时凋亡诱导作用并不明显；小分子毒素化合物3同样浓度依赖地诱导BxPC-3细胞凋亡；抗体h23-12对BxPC-3细胞没有明显的凋亡作用。
实施例5.12靶向TROP2的抗体药物偶联物与TROP2阳性细胞结合活性的研究
不同浓度(1、3、10、30、100、300、1000、3000、10000、30000、100000ng/mL)荧光标记的Trop2-ADC-14、Trop2-ADC-14mAb(即抗体h23-12)与BxPC-3细胞(购自ATCC)冰上避光孵育1小时，离心去上清后以PBS清洗、重悬，以流式细胞仪(BD ACCURI C6 PLUS)检测与细胞结合的药物荧光强度。实验单独重复1次。结果见表17和图8。
表17.Trop2-ADC-14、h23-12与BxPC-3细胞结合EC50(均数±SD，n＝2)
通过上述研究可知，Trop2-ADC-14、抗体h23-12均浓度依赖地与TROP2阳性肿瘤细胞BxPC-3结合，结合EC50分别为1296.0±155.6ng/mL、1137.5±128.0ng/mL，提示二者与TROP2阳性细胞结合能力相当；作为对照，Trop2-ADC-14、抗体h23-12与TROP2阴性细胞HT-29均没有明显结合。结果提示，Trop2-ADC-14、抗体h23-12与肿瘤细胞结合依赖于TROP2的表达水平。
以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。

Claims (19)

1.结构式I所示的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药：
结构式I中，R1、R2、R3、R4独立地为氢、卤素、羟基、C1-6烷氧基、氨基或取代氨基、C1-7烷基或取代的C1-7烷基，或者R1、R2、R3、R4中的任意两个连同它们所连接的碳原子构成C3-6环状烷基；
G为氢、卤素、甲基或甲氧基；
Y为氧、硫、砜、亚砜、亚甲基或取代亚甲基；
X为氧或硫；
n＝0或1。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药，其特征在于，所述化合物为结构式IA所示的化合物：
结构式IA中，R1、R2、R3、R4不同时为氢。
3.结构式II所示的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药：
结构式II中，R5为C1-5烷基或由一个或多个取代基取代的C1-5烷基、C3-6环状烷基或由一个或多个取代基取代的C3-6环状烷基、苯基或取代苯基；
G为氢、卤素、甲基或甲氧基；
X为氧或硫；
n＝0或1；
当X为氧、G为氢、n＝0时，R5不可为正丁基。
4.根据权利要求3所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药，其特征在于，所述化合物为结构式IIA所示的化合物：
结构式IIA中，R5不可为正丁基。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药，其特征在于，所述化合物具有如下结构：
。
6.结构式III所示的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药：
结构式III中，E选自如下基团，其中，表示与M的连接位点：
M为亚苯基或由一个或多个取代基取代的亚苯基，或化学键；在取代的亚苯基中，所述取代基选自烷基、卤代烷基、烷氧基、卤素、酯基、酰胺基和氰基；优选地，M为卤素取代的亚苯基；
SP1选自C1-8亚烷基、C1-8亚环烷基或C1-21直链亚杂烷基，所述C1-21直链亚杂烷基包含1-11个选自N、O或S的杂原子，其中所述C1-8亚烷基、C1-8亚环烷基和C1-21直链亚杂烷基各自独立地任选被选自羟基、氨基、磺酸基和氰基的一个或多个取代基取代；
SP2选自-NH(CH2CH2O)aCH2CH2CO-、-NH(CH2CH2O)aCH2CO-、-S(CH2)aCO-或化学键，其中a为1-20的整数，优选1-10的整数，更优选1-6的整数；
A表示2-4个氨基酸；
A表示2-4个氨基酸；
CPT为喜树碱类化合物。
7.根据权利要求6所述的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药，其特征在于，所述化合物为结构式IIIA所示的化合物：
结构式IIIA中，R6、R7独立地为氢、卤素或Ar’S，Ar’为苯基或由一个或多个取代基取代的苯基，在取代的苯基中，所述取代基选自烷基、烷氧基、卤素、酯基、酰胺基和氰基；
优选地，Ar’为苯基、4-甲基甲酰基取代苯基或4-甲酰基吗啉取代苯基。
8.根据权利要求6或7所述的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药，其特征在于，结构式III或结构式IIIA中，CPT为结构式I所示的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药：
结构式I中，基团G、X、Y、R1、R2、R3、R4、n与权利要求1中基团G、X、Y、R1、R2、R3、R4、n的定义相同；
优选地，CPT为结构式IA所示的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药：
结构式IA中，基团R1、R2、R3、R4与权利要求2中基团R1、R2、R3、R4的定义相同，但是R1、R2、R3、R4可以同时为氢；
在结构式III或结构式IIIA中，结构式I或结构式IA所示的化合物经由其氨基与A的羧基通过酰胺键相连。
9.根据权利要求6或7所述的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药，其特征在于，结构式III或结构式IIIA中，CPT为结构式II所示的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药：
结构式II中，基团G、R5、X、n与权利要求3中基团G、R5、X、n的定义相同；
优选地，CPT为结构式IIA所示的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药：
结构式IIA中，基团R5与权利要求4中R5基团的定义相同，但是可以为正丁基。
10.根据权利要求6或7所述的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药，其特征在于，结构式III或结构式IIIA中，CPT为结构式IV所示的依喜替康(exteacan)衍生物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药：
结构式IV中，R8为氢、三氟甲基、C1-5烷基或由一个或多个取代基取代的C1-5烷基、C3-6环状烷基、或由一个或多个取代基取代的C3-6环状烷基、或卤素；
在结构式III或结构式IIIA中，结构式IV所示的化合物经由其与R8连接于同一个碳的羟基与A的羧基通过自释放结构相连。
11.根据权利要求6至10中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药，其特征在于，结构式III或结构式IIIA所示的化合物进一步为结构式V所示的化合物：
结构式V中，R6、R7独立地为Ar’S，Ar’为苯基或由一个或多个取代基取代的苯基；
Xh和Yh独立地为氢、卤素、卤代烷基或烷氧基。
12.根据权利要求11所述的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药，其特征在于，结构式V所示的化合物进一步为结构式V-A所示的化合物：
优选地，结构式V-A所示的化合物进一步为结构式V-A-1所示的化合物：
或者，结构式V所示的化合物进一步为结构式V-B所示的化合物：
优选地，结构式V-B所示的化合物进一步为结构式V-B-1所示的化合物：
或者，结构式V所示的化合物进一步为结构式V-C所示的化合物：
。
13.根据权利要求6至12中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药，其特征在于，所述化合物为结构式VI所示的化合物：
优选地，结构式VI所示的化合物进一步为结构式VI-A所示的化合物：
优选地，结构式VI-A所示的化合物进一步为结构式VI-A-1所示的化合物：
或者，结构式VI所示的化合物进一步为结构式VI-B所示的化合物：
优选地，结构式VI-B所示化合物进一步为结构式VI-B-1所示的化合物：
或者，结构式VI所示的化合物进一步为结构式VI-C所示的化合物：
。
14.根据权利要求6至13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药，其特征在于，所述化合物具有如下结构：
/>
/>
/>
/>
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/>
。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药与抗体或抗体片段制得的抗体药物偶联物；
优选地，所述抗体药物偶联物具有通式所示结构，其中mAb表示抗体或抗体片段，基团M、SP1、SP2、A及CPT与权利要求6至14中任一项中基团M、SP1、SP2、A及CPT的定义相同；N为1～10、优选1～8、更优选3～8；
其中，EL选自如下基团，其中表示与mAb中半胱氨酸相连，/>表示与M相连：
EL-1a和/或EL-1b：和/或/>/>
16.根据权利要求15所述的抗体药物偶联物，其特征在于，所述抗体药物偶联物具有通式VII或通式VIII所示的结构：
和/或
其中N为1～10、优选1～8、更优选3～8。
17.权利要求15或16的抗体药物偶联物的前药代谢产物，所述前药代谢产物为结构式IX所示的化合物：
结构式IX中，基团A、CPT与权利要求6至14中任一项中基团A、CPT的定义相同。
18.根据权利要求17所述的前药代谢产物，其特征在于，所述化合物为结构式IX-A所示的化合物：
结构式IX-A中，基团A、G、Y、R1、R2、R3、R4、X、n与权利要求6至14中任一项中基团A、G、Y、R1、R2、R3、R4、X、n的定义相同；
优选地，结构式IX-A所示的化合物进一步为结构式IX-A-1所示的化合物：
或者，所述化合物为结构式IX-B所示的化合物：
结构式IX-B中，基团A、G、R5、X、n与权利要求6至14中任一项中基团A、G、R5、X、n的定义相同；
或者，所述化合物为结构式IX-C所示的化合物：
结构式IX-C中，基团A、R8与权利要求6至14中任一项中基团A、R8的定义相同。
19.权利要求1至18中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或前药、抗体药物偶联物或前药代谢产物在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。
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