CN116802210A - 用于治疗肠癌的组合物和方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及肠癌的治疗。本发明延伸至用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的IL‑25:IL‑25R信号传导途径的抑制剂，其特异性结合IL‑25或IL‑25R。

Description

用于治疗肠癌的组合物和方法
技术领域
本发明涉及肠癌的治疗。本发明延伸至用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂。
发明背景
肠癌是癌症相关死亡的常见原因。例如，结肠直肠癌(CRC)是世界范围内癌症相关死亡的第二大常见原因，并且预期到2030年将进一步增加60％。目标是早期诊断并允许治愈性治疗，通常涉及手术，并且在一些情况下结合辅助和新辅助治疗。对于不耐受手术或具有不可切除病变的患者，目标是最大限度地缩小肿瘤并抑制进一步的肿瘤生长。不幸的是，目前的检查点抑制剂疗法在CRC中无效。大约80％的人CRC在腺瘤性结肠息肉病(APC)肿瘤抑制基因中具有突变，并遵循肠上皮细胞中的APC杂合性(LOH)丢失、Wnt信号传导异常激活和息肉形成的明确定义的途径。
尽管最近在免疫检查点抑制剂疗法方面取得了进展，在各种不同类型的癌症中显示出效力，但CRC患者中的应答很大程度上受限于错配修复缺陷(dMMR)CRC，其仅占全部CRC病例的一小部分(15％)。相比之下，在APC基因突变引发的常规途径之后，绝大多数CRC是非错配修复缺陷(pMMR)的，并且极少响应免疫检查点抑制剂。此外，在过去十年中，开发用于CRC的新免疫疗法(诸如肿瘤疫苗和过继性T细胞转移)的努力几乎没有显示出效力。最近，使用抗PD-L1检查点抑制剂阿特珠单抗治疗CRC患者(>98％具有非错配修复缺陷CRC)的III期临床试验IMblaze370未能达到主要终点。
由此，存在对治疗肠癌的新药物的需求。
白介素-25(IL-25)是由肠中的上皮细胞表达的细胞因子，并且研究已经暗示IL-25可能在结肠肿瘤的生长和发展中起抑制作用。Thelen等人报道了在结肠炎相关结肠癌模型中急性阻断IL-25导致了提高的肿瘤负荷(Thelen,T.,Green,和Ziegler,S.Acuteblockade of IL-25in a colitis associated colon cancer model leads toincreased tumor burden.Sci Rep 6,25643(2016))。
Benatar等人报道了在人肿瘤异种移植模型中注射重组IL-25导致对黑素瘤、肺癌、乳腺癌、结肠癌和胰腺癌的显著抗肿瘤活性(Benatar,T.,Cao,M.Y.,Lee,Y.等人,IL-17E,aproinflammatory cytokine,has antitumor efficacy against several tumortypes in vivo.CancerImmunol Immunother 59,805–817(2010))。
由此，根据这些研究，可以预期IL-25:IL-25R信号传导途径的激动剂可有用于治疗肠癌。
2型固有淋巴细胞(ILC2)是一类免疫细胞，其可以帮助保护宿主免受肠道寄生蠕虫感染，并且与不适当的过敏反应相关。Moral等人报道了ILC2浸润胰腺导管腺癌(PDAC)以激活组织特异性肿瘤免疫，并表明ILC2是PDAC的抗癌免疫细胞(Moral,J.A.,Leung,J.,Rojas,L.A.等人,ILC2s amplify PD-1blockade by activating tissue-specificcancer immunity.Nature 579,130–135(2020))。
由此，根据该研究，可以预期ILC2的激活将有用于治疗癌症。
WO2017/194554公开了涉及IL-25对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞系的作用的实验。作者表明IL-25可能有助于TNBC肿瘤对EGRF抑制剂的抗性。
发明概述
在本发明的一个方面，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂，其中该抑制剂特异性结合IL-25或IL-25R。
癌症可以是结肠直肠癌。癌症可包含腺瘤性结肠息肉病(APC)肿瘤抑制基因中的突变。癌症可包含与相邻正常肠中的2型固有淋巴细胞(ILC2)频率相比ILC2频率提高的肿瘤。
抑制剂可以特异性结合IL-25。抑制剂可以结合选自SEQ ID NO:48的氨基酸残基46-63、SEQ ID NO:48的氨基酸残基66-84和SEQ ID NO:48的氨基酸残基129-135的一个或多个氨基酸序列。
抑制剂可以是或可以包含抗IL-25抗体，或其功能片段或衍生物。由此，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的抗IL-25抗体，或其功能片段或衍生物。
抗IL-25抗体，或其功能片段或衍生物，可以包含：
抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:1、2、12、13、14、15、16、17、18或19中任一种中显示的氨基酸序列的VH CDR1；
含有SEQ ID NO:3中显示的氨基酸序列的VH CDR2；和
含有SEQ ID NO:4、20或21中任一种中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:7中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:8、9、44或79中任一种中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
抗IL-25抗体，或其功能片段或衍生物，可以包含：
抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:12中显示的氨基酸序列的VH CDR1；
含有SEQ ID NO:3中显示的氨基酸序列的VH CDR2；和
含有SEQ ID NO:20中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:7中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
抗IL-25抗体，或其功能片段或衍生物，可以包含：
抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:12中显示的氨基酸序列的VH CDR1；
含有SEQ ID NO:3中显示的氨基酸序列的VH CDR2；和
含有SEQ ID NO:20中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:6中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:7中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:79中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
抗IL-25抗体，或其功能片段或衍生物，可以包含：
含有SEQ ID NO:10、22、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37或38中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，和
含有SEQ ID NO:11、41或47中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域；
其中与所述序列相比，抗体VH结构域和/或抗体VL结构域在不在CDR内的残基中可任选包含1至10个、1至5个、1至3个、一个氨基酸取代，或不包含氨基酸取代。
抗IL-25抗体，或其功能片段或衍生物，可以包含：
含有SEQ ID NO:24中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，和
含有SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:41中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域。
抗IL-25抗体，或其功能片段或衍生物，可以包含：
含有SEQ ID NO:25中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，和
含有SEQ ID NO:41中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域。
抗IL-25抗体，或其功能片段或衍生物，可以包含：
含有SEQ ID NO:26中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，和
含有SEQ ID NO:41中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域。
抗IL-25抗体，或其功能片段或衍生物，可以包含：
含有SEQ ID NO:25中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，和
含有SEQ ID NO:46中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域。
抑制剂可以特异性结合IL-25R。抑制剂可以是或可以包含抗IL-25R抗体，或其功能片段或衍生物。由此，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的抗IL-25R抗体，或其功能片段或衍生物。
抗IL-25R抗体，或其功能片段或衍生物可以包含：
抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:49中显示的氨基酸序列的VH CDR1；
含有SEQ ID NO:50、57、58、59、60、61、62、63或64中任一种中显示的氨基酸序列的VH CDR2；和
含有SEQ ID NO:51中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:52中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:53中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:54或SEQ ID NO:65中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
抗IL-25R抗体，或其功能片段或衍生物可以包含：
抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:49中显示的氨基酸序列的VH CDR1；
含有SEQ ID NO:50或SEQ ID NO:64中显示的氨基酸序列的VH CDR2；和
含有SEQ ID NO:51中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:52中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:53中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:65中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
抗IL-25R抗体，或其功能片段或衍生物可以包含：
含有SEQ ID NO:66、67、68、69、70、80、81、82、83、84、85或86中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，和
含有SEQ ID NO:56、71、72、87、88、89、90或91中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域；
其中与所述序列相比，抗体VH结构域和/或抗体VL结构域在不在CDR内的残基中可任选包含1至10个、1至5个、1至3个、一个氨基酸取代，或不包含氨基酸取代。
抗IL-25R抗体，或其功能片段或衍生物可以包含：
含有SEQ ID NO:55、66、67、68、69或70中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，和
含有SEQ ID NO:56、71或72中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域；
其中与所述序列相比，抗体VH结构域和/或抗体VL结构域在不在CDR内的残基中可任选包含1至10个、1至5个、1至3个、一个氨基酸取代，或不包含氨基酸取代。
抗IL-25R抗体，或其功能片段或衍生物可以包含：
含有SEQ ID NO:68、69或70中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，和含有SEQ ID NO:72中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域。
本文中公开的抗IL-25抗体或抗IL-25R抗体可任选包含至少一个与本文中所述的CDR所述序列相比含有一个、两个或三个氨基酸取代的CDR序列。在另一些实施方案中，本文中公开的抗IL-25抗体或抗IL-25R抗体可任选包含至少两个、三个、四个、五个或六个与本文中所述的CDR所述序列相比含有一个、两个或三个氨基酸取代的CDR序列。
IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以是与本文中公开的任何一种抑制剂竞争结合的药剂。
IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以是抗体模拟物或其功能片段或衍生物。
本文中公开的治疗、预防或改善肠癌的方法可进一步包括施用免疫检查点抑制剂。免疫检查点抑制剂可以是PD-1:PD-L1途径的抑制剂。
发明详述
本发明人在本文中提供了证明IL-25激活的ILC2在肠中的作用的数据，在肠中它们产生容许癌症的微环境。
本发明人显示，在自发性肠肿瘤发生的小鼠模型中，外源性IL-25增加肿瘤，而消除IL-25信号传导降低肿瘤负荷并实际上使预期寿命加倍，同时减少IL-25响应性肿瘤ILC2并将平衡转向细胞毒性CD8T细胞浸润。不受特定理论的束缚，本发明人在本文中提供了证据以显示阻断IL-25:IL25R信号传导因由ILC2介导的作用而具有治疗效果。
由此，在本发明的第一方面，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂，其中抑制剂特异性结合IL-25或IL-25R。
先前关于IL-25:IL-25R信号传导在肠癌中的作用的报道已经得出与本发明人相反的结论。如背景技术部分所述，Thelen等人和Benatar等人表明IL-25具有抗肿瘤作用，并由此表明阻断IL-25活性并非适于治疗结肠肿瘤的治疗策略。发明人相信，由于先前调查的肠癌模型的缺陷，因此先前的研究可能未能发现本发明。例如，若干研究显示，结肠炎相关癌症(CAC)的化学诱导小鼠模型(诸如依赖于通过用氧化偶氮甲烷(AOM)和葡聚糖硫酸钠(DSS)处理诱导癌症的那些)不能准确地反映在散发性人CRC中发现的基因组改变。Thelen等人使用了涉及AOM和DSS的模型。此外，以免疫缺陷小鼠为特征的异种移植模型(诸如Benatar等人使用的那些)可能无法准确地重建肿瘤微环境，特别是在免疫细胞浸润方面。
本发明人利用APC1322T/+肠癌小鼠模型。APC突变小鼠模型中的肠肿瘤由APC肿瘤抑制基因的丧失驱动。具体而言，APC1322T/+模型非常接近地模拟在人癌症中发现的突变(Jackstadt,R.和Sansom,O.J.Mouse models of intestinal cancer.J Pathol 238,141-151,doi:10.1002/path.4645(2016))。
先前的报道表明ILC2是PDAC的抗癌免疫细胞(Moral等人；在背景技术部分中讨论)，并因此在PDAC中起相反作用。本发明人得出结论，上皮源性细胞因子IL-25和IL-33以及ILC2在肿瘤发生中的作用可能是位置依赖性的和器官特异性的。
由此，鉴于先前的研究，本发明特别出乎意料的。
IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以是在施用或应用于患者时能够结合IL-25或IL-25R并阻断IL-25与其受体结合引起的信号传导的任何抑制剂。抑制剂可以抑制IL-25R和IL-25的功能性相互作用。
药剂是否能够抑制IL-25:IL-25R信号传导途径可以通过本领域中已知的任何技术来测量。例如，可以使用体外测定来测量抑制剂是否能够减少或消除IL-13从分离自小鼠肠系膜淋巴结的非B/非T(NB/NT)细胞的释放。在该测定中，将细胞与或不与IL-25以及不同浓度的抑制剂或对照一起温育。IL-25可以是浓度为10ng/ml的重组IL-25。作为读数，可以在刺激后，例如在刺激后三天测量IL-13水平。可以通过ELISA测量IL-13水平。在一些实施方案中，如果药剂能够将IL-13释放减少至与本文中公开的抗IL-25或抗IL-25R抗体相同的程度，则认为该药剂是IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂。在一个实施方案中，如果药剂能够将IL-13释放减少至与本文中公开的抗体2C3或抗体D9.2或其人源化形式相同的程度，则认为该药剂是IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂。人源化形式可包括RH2.5_R71V、RH2.5_S30T、RH2.5或M6(本文中讨论的)。在一些实施方案中，如果药剂或抗体在体外测定中以4μg/ml、2μg/ml、0.5μg/ml、0.25μg/ml或0.1μg/ml的浓度测试时能够消除IL-13产生，则认为该药剂或抗体是IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂。对于与抗体分子量不同的潜在抑制剂，可以相应地调节浓度。
在另一实施方案中，药剂是否是IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂通过确定该药剂是否能够降低暴露于IL-25的IL-25R+细胞中STAT的激活(例如通过测量p-STAT5水平来确定)来测量(Wu等人,J Immunol.2015年5月1日；194(9):4528–4534；通过引用并入本文)。
在另一些实施方案中，药剂是否是IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂通过确定该药剂是否能够降低用所述抑制剂治疗的年轻成年Apc1322T/+小鼠中的肿瘤发病率，但在缺乏IL-25R和/或IL-25的年轻成年Apc1322T/+小鼠中没有效果或具有降低的效果来测量。年轻成年小鼠的治疗可以是从三周龄开始再治疗两周、三周、四周、五周、六周、七周或更多周。在一个特定实施方案中，治疗持续七周。治疗可以是每周一次、两次、三次、四次、五次、六次或七次。在一个特定实施方案中，治疗是每周两次。在另一实施方案中，药剂是否是IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂通过确定该药剂是否能够降低用所述抑制剂治疗的成年Apc1322T/+小鼠中的肿瘤发病率，但在缺乏IL-25R和/或IL-25的成年Apc1322T/+小鼠中没有效果或具有降低的效果来测量。在一个实施方案中，成年Apc1322T/+小鼠在治疗时可已经发展了肿瘤，例如该小鼠可以为七周龄。成年小鼠的治疗可以是从七周龄开始再治疗两天、四天、七天、14天、21天、28天或更多天。在一个特定实施方案中，治疗持续四周。治疗可以是每周一次、两次、三次、四次、五次、六次或七次。在一个特定实施方案中，治疗是每周两次。在本文中的实施例中公开了进一步的信息。
在一些实施方案中，饱和量的IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以将IL-25:IL-25R信号传导减少至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％、至少99.9％、大约100％或100％。在一个特定实施方案中，饱和量的IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂消除了IL-25:IL-25R信号传导。
为免存疑，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂不是整体或一般地起作用的药剂。例如，由于一般细胞毒性作用或由于对细胞信号传导的整体作用而起作用以减少IL-25:IL-25R信号传导的药剂不是IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂。
IL-25可以是人IL-25，且序列可以如下所述。
MYSHWPSCCPSKGQDTSEELLRWSTVPVPPLEPARPNRHPESCRASEDGPLNSRAISPWRYELDRDLNRLPQDLYHARCLCPHCVSLQTGSHMDPRGNSELLYHNQTVFYRRPCHGEKGTHKGYCLERRLYRVSLACVCVRPRVMG(SEQ ID NO:48)。
IL-25R可以是人IL-25R，且序列可以如下所述。该序列是同工型1(标识符Q9NRM6-1)。
MSLVLLSLAALCRSAVPREPTVQCGSETGPSPEWMLQHDLIPGDLRDLRVEPVTTSVATGDYSILMNVSWVLRADASIRLLKATKICVTGKSNFQSYSCVRCNYTEAFQTQTRPSGGKWTFSYIGFPVELNTVYFIGAHNIPNANMNEDGPSMSVNFTSPGCLDHIMKYKKKCVKAGSLWDPNITACKKNEETVEVNFTTTPLGNRYMALIQHSTIIGFSQVFEPHQKKQTRASVVIPVTGDSEGATVQLTPYFPTCGSDCIRHKGTVVLCPQTGVPFPLDNNKSKPGGWLPLLLLSLLVATWVLVAGIYLMWRHERIKKTSFSTTTLLPPIKVLVVYPSEICFHHTICYFTEFLQNHCRSEVILEKWQKKKIAEMGPVQWLATQKKAADKVVFLLSNDVNSVCDGTCGKSEGSPSENSQDLFPLAFNLFCSDLRSQIHLHKYVVVYFREIDTKDDYNALSVCPKYHLMKDATAFCAELLHVKQQVSAGKRSQACHDGCCSL(SEQ ID NO:92)。
在另一实施方案中，IL-25R可以是同工型2(标识符：Q9NRM6-2)，并可具有如下所述的序列。
MSLVLLSLAALCRSAVPREPTVQCGSETGPSPEWMLQHDLIPGDLRDLRVEPVTTSVATGDYSILMNVSWVLRADASIRLLKATKICVTGKSNFQSYSCVRCNYTEAFQTQTRPSGGKWTFSYIGFPVELNTVYFIGAHNIPNANMNEDGPSMSVNFTSPGCLDHIMKYKKKCVKAGSLWDPNITACKKNEETVEVNFTTTPLGNRYMALIQHSTIIGFSQVFEPHQKKQTRASVVIPVTGDSEGATVQVKFSELLWGGKGHRRLFHHSLLLRMSSLLSNALLPADTS(SEQ IDNO:93)。
本公开还涵盖IL-25和IL-25R的等位基因。等位基因是由于一个或多个突变(诸如核苷酸的缺失、添加和/或取代)而改变的内源基因。所得mRNA和蛋白可以但不一定具有改变的结构或功能。可以使用标准技术(诸如杂交、扩增和/或数据库序列比较)鉴定等位基因。
抑制剂可以通过结合IL-25并在空间上阻断、阻止或减少与IL-25R的相互作用来起作用。抑制剂可以通过结合IL-25R并在空间上阻断、阻止或减少与IL-25的相互作用来起作用。例如，抑制剂可以结合IL-25中与IL-25R相互作用的区域，或者抑制剂可以结合IL-25R中与IL-25相互作用的区域。备选地，抑制剂可以在任何位置结合IL-25或IL-25R，并且可以导致阻止或减少IL-25:IL-25R相互作用的构象改变。
抑制剂作用的IL-25和/或IL-25R可以是人IL-25和/或人IL-25R。在一些实施方案中，抑制剂能够作用于食蟹猴IL-25和/或鼠IL-25，以及人IL-25。在一些实施方案中，抑制剂能够作用于食蟹猴IL-25R和/或鼠IL-25R，以及人IL-25R。在另一些实施方案中，抑制剂作用于在待治疗的受试者体内发现的IL-25和/或IL-25R。
IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以结合选自SEQ ID NO:48的氨基酸残基46-63、SEQ ID NO:48的氨基酸残基66-84和SEQ ID NO:48的氨基酸残基129-135的一个或多个氨基酸序列。在特定实施方案中，抑制剂可以结合SEQ ID NO:48的氨基酸残基56-63和SEQ ID NO:48的氨基酸残基66-74。
在一些实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂与本文中公开的任何IL-25或IL-25R结合分子竞争结合。与本文中公开的任何IL-25或IL-25R结合分子相比，抑制剂可以结合相同的表位，或结合重叠的表位。在特定实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂与以下抗体中的任一种竞争结合，结合与所述抗体相同表位或结合重叠表位：2C3、任何人源化2C3、RH2.5_R71V、RH2.5_S30T、RH2.5、M6、D9.2、或任何人源化D9.2。当一个结合分子与靶标的结合能够可检测地降低另一结合分子与相同靶标的结合时，两个结合分子可以被认为“竞争”。
抑制剂可以是或可以包含抗IL-25抗体、其衍生物或功能片段。抑制剂可以是或可以包含抗IL-25R抗体、其衍生物或功能片段。抗IL-25或抗IL-25R抗体是能够特异性结合其靶标的抗体。“特异性结合”可以是指抗体仅由于非特异性相互作用而不结合靶标，并且这种性质可以通过与同种型对照或类似物比较来确定。特异性结合不一定需要——尽管其可以包括——与单个靶标的排它性结合。
由此，在本发明的一个方面，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的抗IL-25抗体、其衍生物或功能片段。
在本发明的另一方面，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的抗IL-25R抗体、其衍生物或功能片段。
抗IL-25抗体或抗IL-25R抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体。抗IL-25抗体或抗IL-25R抗体可以被称为中和抗体或阻断抗体。IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以是以下抗体：人抗体，即具有与人产生的抗体的氨基酸序列相对应的氨基酸序列和/或是使用用于制造人抗体的任何技术制造的；人源化抗体，即来源于使用非人系统产生的亲本抗体并经修饰以含有最小的人序列；或嵌合抗体，即包含来自多于一个物种的区域的融合体。
本文中公开的任何药剂或抗体的功能片段或衍生物可以是所述药剂或抗体的一部分，其保留特异性结合给定靶标的能力，并因此是抗原结合片段。功能性不一定需要——尽管其可以包括——保留相同的结合亲和力。抗体片段可以保留亲本抗体的六个CDR。本文中公开的任何抗体的片段或衍生物可以例如为Fab片段(例如Fab、Fab’或F(ab')2)、Fv片段、Fd片段、单链可变片段(scFv)、微抗体(例如VL-VH-CH3)、双抗体(diabody)(例如(scFv)2或sc(Fv)2)、单结构域抗体(例如VH或VL)、三抗体(triabody)、四抗体(tetrabody)或任何合适的排列或片段。抑制剂还可对另一种抗原具有特异性，并因此设想了双特异性抗体、功能片段和衍生物。术语衍生物涵盖了已经历人源化、进一步人源化、亲和力成熟、与修饰的恒定结构域融合或与不同抗体亚型或不同物种的抗体恒定结构域融合的抗体。由此，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以是或可以包含任何本文中公开的片段，并且可以是本文中公开的抗体的任何衍生物。
本文中描述的抗体、功能片段或衍生物的亲和力是结合表位的程度或强度。亲和力可以表示为解离常数KD。KD可以在标准条件下，例如在Biacore测定中测量。
IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以以小于5×106M、小于1×106M、小于5×107M、小于1×107M、小于5×108M、小于1×108M、小于5×109M、小于1×109M、小于5×1010M、小于1×1010M、小于5×1011M、小于1×1011M、小于5×1012M、或小于1×1012M的平衡解离常数或KD结合其靶标。
结合IL-25的IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂(诸如抗IL-25抗体)可具有与本文中公开的任何抗IL-25抗体(包括2C3、人源化2C3、RH2.5_R71V、RH2.5_S30T、RH2.5或M6)的KD类似的KD。类似的KD可以是相同的数量级，或者可以高或低10％。
结合IL-25的IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂(诸如抗IL-25R抗体)可具有与本文中公开的任何抗IL-25R抗体(包括D9.2和人源化变体)的KD类似的KD。类似的KD可以是相同的数量级，或者可以高或低10％。
可以修饰本文中描述的抗体、功能片段或衍生物，以便更适于本文中公开的目的。例如，可以选择或修饰恒定区以便最小化诸如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性、补体结合或结合抑制性和/或激活性Fc受体之类的效应。可以修饰本文中描述的抗体、功能片段或衍生物，以便在特定组织或环境(诸如肠)中具有改善的半衰期或改善的稳定性。
IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以是任何类别的抗体，诸如：IgA、IgD、IgE、IgG或IgM，或亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1或IgA2。相关恒定区可以与本文中公开的任何VH或VL结构域(包括仅由互补决定区(CDR)限定的VH或VL结构域)结合。
IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以是或可以包含单体拟抗体(monobody)或其功能片段或衍生物，并因此可基于纤连蛋白III型结构域支架。
IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以是或可以包含任何抗体模拟物，或其功能片段或衍生物。抗体模拟物例如可以是Yu等人中描述的任何抗体模拟物，包括adnectins(单体拟抗体)、亲和体、affilin、affimer、affitin、alphabody、anticalin、适体、基于犰狳重复蛋白的支架、atrimer、avimer、darpin、fynomer、knottin、kunitz结构域肽或nanofitin(Yu,Yang,Dikici,Deo,和Daunert；Annu Rev Anal Chem(Palo Alto Calif).2017年6月12日；10(1):293–320,通过引用全文并入本文)。
由此，在本发明的另一方面，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的抗体模拟物，或其功能片段或衍生物，其中该抗体模拟物、其功能片段或衍生物特异性结合IL-25。
由此，在本发明的另一方面，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的抗体模拟物，或其功能片段或衍生物，其中该抗体模拟物、其功能片段或衍生物特异性结合IL-25R。
IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以基于IL-25R本身。例如，能够结合并因此隔绝IL-25的可溶性IL-25R。此类可溶性IL-25R分子可包含Fc结构域。
在一些实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂对IL-25R+癌细胞或IL-25R+癌症干细胞不具有直接细胞毒性作用。例如，在一些实施方案中，抑制剂不是能够在IL-25R+结肠直肠癌干细胞中诱导细胞死亡的抗体-药物缀合物。在一些实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂对Tuft细胞数量的影响微乎其微至无影响。在一些实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂使Tuft细胞数量减少不超过5％、10％、20％、40％或50％。
在一个特定实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂是或包含如WO2008/129263、EP2144934B1、US8,206,717B2或所述专利族的任何成员(各自通过引用全文并入本文)中所定义的抗体“2C3”或任何抗体或结合分子，或其功能片段或衍生物。
IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以是或可以包含含有2C3的CDR的抗体，或其功能片段或衍生物。CDR可以通过任何技术或方法或此类方法的组合来确定。CDR可通过本文中讨论的任何方法来确定。
根据Kabat确定的2C3的CDR如下：
2c3 VH CDR 1：
DYTMN(SEQ ID NO:1)；或
YTMN(SEQ ID NO:2)
2c3 VH CDR 2：
LINPYNGGTSYNQNFKG(SEQ ID NO:3)
2c3 VH CDR 3：
EGYDGYLYFAMDY(SEQ ID NO:4)
2c3 VL CDR 1：
SASQGISNYLNWYQQ(SEQ ID NO:5)；或
SASQGISNYLN(SEQ ID NO:6)
2c3 VL CDR 2：
YTSSLHS(SEQ ID NO:7)
2c3 VL CDR 3：
QQYSKLPYT(SEQ ID NO:8)；或
QQYSKLPYTF(SEQ ID NO:9)
2C3的VH结构域可具有如下序列：
EVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGYSFTDYTMNWVKQSHGKNLEWIGLINPYNGGTSYNQNFKGKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCAREGYDGYLYFAMDYWGQGTSVTVS(SEQ ID NO:10)；或
EVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGYSFTDYTMNWVKQSHGKNLEWIGLINPYNGGTSYNQNFKGKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCAREGYDGYLYFAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:22)
2C3的VL结构域可具有如下序列：
DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCSASQGISNYLNWYQQKADGTVELLIYYTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEPEDIATYYCQQYSKLPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:11)。
由此，在一个实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂能够结合IL-25，并包含：
抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中显示的氨基酸序列的VH CDR1；
含有SEQ ID NO:3中显示的氨基酸序列的VH CDR2；和
含有SEQ ID NO:4中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:7中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
因此，在本发明的一个方面，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的抗IL-25抗体，其中该抗IL-25抗体包含：
抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中显示的氨基酸序列的VH CDR1；
含有SEQ ID NO:3中显示的氨基酸序列的VH CDR2；和
含有SEQ ID NO:4中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:7中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
与所述序列相比，上述CDR可以包含一个、两个或三个氨基酸取代，其可以是保守取代。取代可以使得抑制剂的性质不受影响，或不受不利影响。例如，结合亲和力可以保留或改善。
在一些实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂包含含有SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:22中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，其任选包含至少一个、一至十个、一至五个、一至三个、或一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、或十个氨基酸取代。取代可以在不在CDR内的残基中。在一些实施方案中，所述氨基酸取代是保守氨基酸取代。取代可以使得抑制剂的性质不受影响，或不受不利影响。例如，结合亲和力可以保留或改善。在一个特定实施方案中，结构域包含一至三个保守氨基酸取代。
在一些实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂包含含有SEQ ID NO:11中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域，其任选包含至少一个、一至十个、一至五个、一至三个、或一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、或十个氨基酸取代。取代可以在不在CDR内的残基中。在一些实施方案中，所述氨基酸取代是保守氨基酸取代。取代可以使得抑制剂的性质不受影响，或不受不利影响。例如，结合亲和力可以保留或改善。在一个特定实施方案中，结构域包含一至三个保守氨基酸取代。
在一个特定实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂能够结合IL-25，并包含含有SEQ ID NO:22中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域和含有SEQ ID NO:11中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域。
由此，在本发明的一个特定方面，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的抗IL-25抗体，其中该抗IL-25抗体包含含有SEQ ID NO:22中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域和含有SEQ ID NO:11中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域。
在另一实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以包含结合IL-25的靶标结合部分，并且其包含抗体VH结构域，所述抗体VH结构域包含具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的VH CDR3。在更特别的实施方案中，靶标结合部分是VH结构域，其包含SEQ ID NO:4的VH CDR3以及SEQ ID NO:1的CDR1和SEQ ID NO:3的CDR2。VH结构域可具有人框架区，或SEQ ID NO:22中显示的框架区。VH结构域可以与本发明的VL结构域，例如具有SEQ ID NO:5的CDR1、SEQ ID NO:7的CDR2和SEQ ID NO:8的CDR3的VL结构域配对。这些CDR可以在具有人框架区的VL结构域中，或可以是SEQ ID NO:11的VL结构域。由此，在一个特定实施方案中，靶标结合部分可以结合IL-25并包含2C3VH结构域(SEQ ID NO:22)和/或2C3 VL结构域(SEQID NO:11)。
IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以是或可以包含结合IL-25的抗体、或其片段或衍生物，并且其包含抗体VH结构域或其实质部分，并且其进一步包含VL结构域或其实质部分，所述抗体VH结构域或其实质部分包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的VH CDR1；具有如SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的VH CDR2；和具有如SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的VH CDR3，所述VL结构域或其实质部分包含具有如SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的CDR1；具有如SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列的CDR2；和具有如SEQ IDNO:8中所示的氨基酸序列的CDR3。任选地，VH结构域或其实质部分包含人框架区或如SEQID NO:22中所示的2C3氨基酸序列。任选地，VL结构域包含人框架区或如SEQ ID NO:11中所示的2C3氨基酸序列。2C3抗体在一些实施方案中可包含IgG1或IgG4恒定区。
在另一特定实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂是或包含如WO2010/038155、EP2344538B1、US 8,658,169B2或所述专利族的任何成员(各自通过引用全文并入本文)中所定义的抗体2C3或任何抗体或结合分子的人源化形式，或其功能片段或衍生物。特别地，抑制剂可以是或可以包含抗体RH2.5_R71V、RH2.5_S30T或RH2.5，或其功能片段或衍生物。
IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以是或可以包含抗体或其功能片段或衍生物，其包含如WO2010/038155专利族中定义的人源化2C3的CDR，例如RH2.5_R71V、RH2.5_S30T或RH2.5。CDR可以通过任何技术或方法或此类方法的组合来确定。CDR可通过本文中讨论的任何方法来确定。
根据一种确定方法，人源化2C3的CDR可具有以下序列中的任一种。
人源化2c3 VH CDR 1：
SEQ ID NO:1；
SEQ ID NO:2；
GYTMN(SEQ ID NO:12)；
AYTMN(SEQ ID NO:13)；
SYTMN(SEQ ID NO:14)；
VYTMN(SEQ ID NO:15)；
NYTMN(SEQ ID NO:16)；
KYTMN(SEQ ID NO:17)；
YYTMN(SEQ ID NO:18)；或
MYTMN(SEQ ID NO:19)
人源化2c3 VH CDR 2：
SEQ ID NO:3
人源化2c3 VH CDR 3：
SEQ ID NO:4；
EDYDGYLYFAMDY(SEQ ID NO:20)；或
ENYDGYLYFAMDY(SEQ ID NO:21)
人源化2c3 VL CDR 1：
SEQ ID NO:5；或
SEQ ID NO:6
人源化2c3 VL CDR 2：
SEQ ID NO:7
人源化2c3 VL CDR 3：
SEQ ID NO:8；或
SEQ ID NO:9
人源化2C3或2C3衍生物的VH结构域可具有以下序列中的任一种：
EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFX1X2YTMNWVRQAPGQRLEWX3GLINPYNGGTSYNQNFKGRVTLTX4DTSASTAYLELNSLRSEDTGVYYCAREX5YDGYLYFAMDYWGQGTLVTVSS
其中：
X1是S或T；
X2是G、D、A、S、V、N、K、Y或M；
X3是M或I；
X4是V或R；和
X5是D、N或G(SEQ ID NO:24)；
EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFSGYTMNWVRQAPGQRLEWMGLINPYNGGTSYNQNFKGRVTLTVDTSASTAYLELNSLRSEDTGVYYCAREDYDGYLYFAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:25)；
EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGQRLEWMGLINPYNGGTSYNQNFKGRVTLTRDTSASTAYLELNSLREDTGVYYCAREDYDGYLYFAMDYWGQGTLVVSS(SEQ ID NO:26)；
EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFSGYTMNWVRQAPGQRLEWMGLINPYNGGTSYNQNFKGRVTLTRDTSASTAYLELNSLRSEDTGVYYCAREDYDGYLYFAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:27)；
EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGQRLEWMGLINPYNGGTSYNQNFKGRVTLTVDTSASTAYLELNSLRSEDTGVYYCAREDYDGYLYFAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:28)；
EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFSDYTMNWVRQAPGQRLEWMGLINPYNGGTSYNQNFKGRVTLTVDTSASTAYLELNSLRSEDTGVYYCAREDYDGYLYFAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:29)；
EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYTMNWVRQAPGQRLEWMGLINPYNGGTSYNQNFKGRVTLTRDTSASTAYLELNSLRSEDTGVYYCAREDYDGYLYFAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:30)；
EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYTMNWVRQAPGQRLEWMGLINPYNGGTSYNQNFKGRVTLTVDTSASTAYLELNSLRSEDTGVYYCAREDYDGYLYFAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:31)；
EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFSGYTMNWVRQAPGQRLEWIGLINPYNGGTSYNQNFKGRVTLTVDTSASTAYLELNSLRSEDTGVYYCAREDYDGYLYFAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:32)；
EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGQRLEWIGLINPYNGGTSYNQNFKGRVTLTRDTSASTAYLELNSLRSEDTGVYYCAREDYDGYLYFAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:33)；
EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGQRLEWIGLINPYNGGTSYNQNFKGRVTLTVDTSASTAYLELNSLRSEDTGVYYCAREDYDGYLYFAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:34)；
EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFSDYTMNWVRQAPGQRLEWIGLINPYNGGTSYNQNFKGRVTLTVDTSASTAYLELNSLRSEDTGVYYCAREDYDGYLYFAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:35)；
EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYTMNWVRQAPGQRLEWIGLINPYNGGTSYNQNFKGRVTLTRDTSASTAYLELNSLRSEDTGVYYCAREDYDGYLYFAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:36)；
EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTDYTMNWVRQAPGQRLEWIGLINPYNGGTSYNQNFKGRVTLTVDTSASTAYLELNSLRSEDTGVYYCAREDYDGYLYFAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:37)；或
EVRLVQSGAEVKKPGESLKISCKASGYSFTDYTMNWVRQMPGKGLEWIGLINPYNGGTSYNQNFKGQVTISVDKSINTAYLQWSSLKATDTAMYYCAREGYDGYLYFAMDYWGQGTLVIVSS(SEQ ID NO:38)。
人源化2C3或2C3衍生物的VL结构域可具有以下序列中的任一种：
SEQ ID NO:11
MRVPAQLLGLLLLWLPDTRCDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQGISNYLNWYQQKPGKVPKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQYSKLPYTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:40；包括前导序列)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQGISNYLNWYQQKPGKVPKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQYSKLPYTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:41)
由此，在一个实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂能够结合IL-25，并包含：抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:19中任一种中显示的氨基酸序列的VH CDR1；
含有SEQ ID NO:3中显示的氨基酸序列的VH CDR2；和
含有SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21中任一种中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:7中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
因此，在本发明的一个方面，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的抗IL-25抗体，其中该抗IL-25抗体包含：
抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:19中任一种中显示的氨基酸序列的VH CDR1；
含有SEQ ID NO:3中显示的氨基酸序列的VH CDR2；和
含有SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21中任一种中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:7中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
与所述序列相比，上述CDR可以包含一个、两个或三个氨基酸取代，其可以是保守取代。取代可以使得抑制剂的性质不受影响，或不受不利影响。例如，结合亲和力可以保留或改善。
在另一实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂能够结合IL-25，并包含：
抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:12中显示的氨基酸序列的VH CDR1；
含有SEQ ID NO:3中显示的氨基酸序列的VH CDR2；和
含有SEQ ID NO:20中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:7中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
在另一实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂包含含有SEQ ID NO:10、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37或38中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，其任选包含至少一个、一至十个、一至五个、一至三个、或一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、或十个氨基酸取代。取代可以在不在CDR内的残基中。在一些实施方案中，所述氨基酸取代是保守氨基酸取代。取代可以使得抑制剂的性质不受影响，或不受不利影响。例如，结合亲和力可以保留或改善。在一个特定实施方案中，结构域包含一至三个保守氨基酸取代。
在另一实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂包含含有SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:41中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域，其任选包含至少一个、一至十个、一至五个、一至三个、或一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、或十个氨基酸取代。取代可以在不在CDR内的残基中。在一些实施方案中，所述氨基酸取代是保守氨基酸取代。取代可以使得抑制剂的性质不受影响，或不受不利影响。例如，结合亲和力可以保留或改善。在一个特定实施方案中，结构域包含一至三个保守氨基酸取代。
在一个特定实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂能够结合IL-25，并包含含有SEQ ID NO:24中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域和含有SEQ ID NO:11或SEQID NO:41中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域。
在一个特定实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂能够结合IL-25，并包含含有SEQ ID NO:25中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域和含有SEQ ID NO:41中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域。
在一个特定实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂能够结合IL-25，并包含含有SEQ ID NO:26中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域和含有SEQ ID NO:41中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域。
由此，在本发明的一个特定方面，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的抗IL-25抗体，其中该抗IL-25抗体包含含有SEQ ID NO:24、25或26中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，和含有SEQ ID NO:11或41中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域。
在一个实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以是结合IL-25的靶标结合部分，并包含含有SEQ ID NO:24的抗体VH结构域：
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala SerVal Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Xa1 Xa2 Tyr Thr Met Asn TrpVal Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Xa3 Gly Leu Ile Asn Pro Tyr AsnGly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Xa4 Asp ThrSer Ala Ser Thr Ala Tyr Leu Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Gly ValTyr Tyr Cys Ala Arg Glu Xa5 Tyr Asp Gly Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Asp Tyr TrpGly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
其中：
Xa1是Ser或Thr；
Xa2是Gly、Asp、Ala、Ser、Val、Asn、Lys、Tyr或Met；
Xa3是Met或Ile；
Xa4是Val或Arg；和
Xa5是Asp、Asn或Gly；任选进一步包含
抗体VL结构域，其包含分别如SEQ ID NO:11的残基24-34(SEQ ID NO:6)；50-56(SEQ ID NO:7)和89-97(SEQ ID NO:8)所示的Kabat CDR 1-3。
在一些实施方案中，
(a)Xa2是Gly且Xa5是Asp或Asn；
(b)Xa2是Gly且Xa5是Asp；
(c)Xa1是Ser；
(d)Xa1是Thr；
(e)Xa3是Met；
(f)Xa3是Ile；
(g)Xa4是Val；或
(h)Xa4是Arg。
在一些实施方案中，该残基Xa1-Xa5在以下组合中：
在一些实施方案中，
(a)VL结构域进一步包括与CDR1(SEQ ID NO:6)相邻的SEQ ID NO:11的残基35-38；
(b)靶标结合部分包含SEQ ID NO:11；
(c)VL结构域是人源化的；或
(d)VL结构域是人源化的，并且靶标结合部分的序列包含SEQ ID NO:40的氨基酸21-127。
人源化2C3抗体可以包含恒定区，例如IgG1或IgG4恒定区。
在另一特定实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂是或包含如WO2011/123507、EP2552961B1、US8,785,605B2或所述专利族的任何成员(各自通过引用全文并入本文)中所定义的抗体2C3或任何抗体或结合分子的人源化形式，或其功能片段或衍生物。在一个特定实施方案中，抑制剂是或包含抗体M6，或其功能片段或衍生物。
IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以是或可以包含抗体，或其功能片段或衍生物，其包含如WO2011/123507专利族中所定义的人源化2C3(例如M6)的CDR。CDR可以通过任何技术或方法或此类方法的组合来确定。CDR可通过本文中讨论的任何方法来确定。
根据一种确定方法，M6的CDR可具有以下序列中的任一种：
M6 VH CDR 1：
SEQ ID NO:12
M6 VH CDR 2：
SEQ ID NO:3
M6 VH CDR 3：
SEQ ID NO:20
M6 VL CDR 1：
SEQ ID NO:6
M6 VL CDR 2：
SEQ ID NO:7
M6 VL CDR 3：
QQYLAFPYT(SEQ ID NO:44)；或
QQYLAFPYTF(SEQ ID NO:79)
M6的VH结构域可以下序列：
SEQ ID NO:25
M6的重链可具有以下序列：
EVQLVESGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFSGYTMNWVRQAPGQRLEWMGLINPYNGGTS
YNQNFKGRVTLTVDTSASTAYLELNSLRSEDTGVYYCAREDYDGYLYFAMDYWGQGTLVT
VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS
SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP
SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNS
TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELT
KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:45)
M6的VL结构域可以下序列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQGISNYLNWYQQKPGKVPKLLIYYTSSLHSGVPSRFS GSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQYLAFPYTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:46)
M6的轻链可具有以下序列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQGISNYLNWYQQKPGKVPKLLIYYTSSLHSGVPSRFS
GSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQYLAFPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKS
GTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:47)。
由此，在一个实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂能够结合IL-25，并包含：
抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:12中显示的氨基酸序列的VH CDR1；
含有SEQ ID NO:3中显示的氨基酸序列的VH CDR2；和
含有SEQ ID NO:20中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:6中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:7中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:79中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
因此，在本发明的一个方面，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的抗IL-25抗体，其中该抗IL-25抗体包含：
抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:12中显示的氨基酸序列的VH CDR1；
含有SEQ ID NO:3中显示的氨基酸序列的VH CDR2；和
含有SEQ ID NO:20中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:6中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:7中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:79中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
与所述序列相比，上述CDR可以包含一个、两个或三个氨基酸取代，其可以是保守取代。取代可以使得抑制剂的性质不受影响，或不受不利影响。例如，结合亲和力可以保留或改善。
在另一实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂包含含有SEQ ID NO:25中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，其任选包含至少一个、一至十个、一至五个、一至三个、或一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、或十个氨基酸取代。取代可以在不在CDR内的残基中。在一些实施方案中，所述氨基酸取代是保守氨基酸取代。取代可以使得抑制剂的性质不受影响，或不受不利影响。例如，结合亲和力可以保留或改善。在一个特定实施方案中，结构域包含一至三个保守氨基酸取代。
在另一实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂包含含有SEQ ID NO:46中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域，其任选包含至少一个、一至十个、一至五个、一至三个、或一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、或十个氨基酸取代。取代可以在不在CDR内的残基中。在一些实施方案中，所述氨基酸取代是保守氨基酸取代。取代可以使得抑制剂的性质不受影响，或不受不利影响。例如，结合亲和力可以保留或改善。在一个特定实施方案中，结构域包含一至三个保守氨基酸取代。
在一个特定实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂能够结合IL-25，并包含含有SEQ ID NO:25中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域和含有SEQ ID NO:46中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域。
由此，在本发明的一个特定方面，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的抗IL-25抗体，其中该抗IL-25抗体包含含有SEQ ID NO:25中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域和含有SEQ ID NO:46中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域。
在一个特定实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂能够结合IL-25，并包含含有SEQ ID NO:45中显示的氨基酸序列的多肽和含有SEQ ID NO:47中显示的氨基酸序列的多肽。
在一个实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂是或包含结合IL-25的靶标结合部分，其中该靶标结合部分结合选自SEQ ID NO:48的氨基酸残基46-63、SEQ IDNO:48的氨基酸残基66-84和SEQ ID NO:48的氨基酸残基129-135的一个或多个氨基酸序列。在一个特定实施方案中，本发明的靶标结合部分结合SEQ ID NO:48的氨基酸残基56-63和SEQ ID NO:48的氨基酸残基66-74。在另一实施方案中，靶标结合部分包含抗体VL结构域，所述抗体VL结构域包含具有氨基酸序列QQYLAFPYTF(SEQ ID NO:79)的CDR3。
在另一实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂是或包含结合IL-25的靶标结合部分，其中该靶标结合部分包含：
a)抗体VL结构域，其包含具有氨基酸序列SASQGISNYLN(SEQ ID NO:6)的CDR1、具有氨基酸序列YTSSLHS(SEQ ID NO:7)的CDR2和具有氨基酸序列QQYLAFPYTF(SEQ ID NO:79)的CDR3；和
b)抗体VH结构域，其包含具有氨基酸序列GYTMN(SEQ ID NO:12)的CDR1、具有氨基酸序列LINPYNGGTSYNQNFKG(SEQ ID NO:3)的CDR2和具有氨基酸序列EDYDGYLYFAMDY(SEQID NO:20)的CDR3。
在一个特定实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂是或包含靶标结合部分，所述靶标结合部分包含含有SEQ ID NO:47的VL结构域和含有SEQ ID NO:45的VH结构域。在进一步的实施方案中，靶标结合部分包含整个抗体。
在另一实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂是或包含靶标结合部分，所述靶标结合部分与结合选自SEQ ID NO:48的氨基酸残基46-63、SEQ ID NO:48的氨基酸残基66-84和SEQ ID NO:48的氨基酸残基129-135的一个或多个氨基酸序列的靶标结合部分竞争结合IL-25。在一个特定实施方案中，靶标结合部分具有小于或等于大约50pM的对人IL-25的结合亲和力。
在另一实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂是或包含本发明的靶标结合部分，其包含：
a)抗体VL结构域，其包含相对于SEQ ID NO:47的氨基酸序列具有1至大约20个氨基酸取代的氨基酸序列；
b)抗体VH结构域，其包含相对于SEQ ID NO:45的氨基酸序列具有1至大约20个氨基酸取代的氨基酸序列；或
c)其组合。
在另一实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂是或包含结合IL-25的人源化抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段包含：
a)抗体VL结构域，其包含具有氨基酸序列SASQGISNYLN(SEQ ID NO:6)的CDR1、具有氨基酸序列YTSSLHS(SEQ ID NO:7)的CDR2和具有氨基酸序列QQYLAFPYTF(SEQ IDNO:79)的CDR3；和
b)抗体VH结构域，其包含具有氨基酸序列GYTMN(SEQ ID NO:12)的CDR1、具有氨基酸序列LINPYNGGTSYNQNFKG(SEQ ID NO:3)的CDR2和具有氨基酸序列EDYDGYLYFAMDY(SEQID NO:20)的CDR3，其中
该抗体或其抗原结合片段具有在Biacore测定中确定的小于或等于53pM的对IL-25的结合亲和力。对IL-25的结合亲和力可以小于或等于大约50pM、大约45pM、大约40pM、大约35pM、大约30pM、大约25pM、或大约20pM。人源化抗体或其抗原结合片段可以包含SEQ IDNO:47的抗体轻链的VL结构域。人源化抗体或其抗原结合片段可以包含SEQ ID NO:45的抗体重链的VH结构域。
在一个实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂能够结合IL-25，并包含：
抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:1、2、12、13、14、15、16、17、18或19中任一种中显示的氨基酸序列的VH CDR1；
含有SEQ ID NO:3中显示的氨基酸序列的VH CDR2；和
含有SEQ ID NO:4、20或21中任一种中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:7中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:8、9、44或79中任一种中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
与所述序列相比，上述CDR可以包含一个、两个或三个氨基酸取代，其可以是保守取代。取代可以使得抑制剂的性质不受影响，或不受不利影响。例如，结合亲和力可以保留或改善。
在另一实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂包含含有SEQ ID NO:10、22、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37或38中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，和含有SEQ ID NO:11、41或47中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域。任选地，VH和/或VL结构域包含至少一个、一至十个、一至五个、一至三个、或一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、或十个氨基酸取代。取代可以在不在CDR内的残基中。在一些实施方案中，所述氨基酸取代是保守氨基酸取代。取代可以使得抑制剂的性质不受影响，或不受不利影响。例如，结合亲和力可以保留或改善。在一个特定实施方案中，结构域包含一至三个保守氨基酸取代。
任何2C3抗体、变体或衍生物的VH结构域的前导序列可以是任何合适的序列，例如如下的任何序列：
MVLSLLYLLTALPGILS(SEQ ID NO:23)；或
MGSTAILGLLLAVLQGVCA(SEQ ID NO:39)。
任何2C3抗体、变体或衍生物的VL结构域的前导序列可以是任何合适的序列，例如如下的任何序列：
MRVPAQLLGLLLLWLPDTRC(SEQ ID NO:42)；或
MDMRVPAQLLGLLLLWLPDTRC(SEQ ID NO:43)。
在另一特定实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂是或包含如WO2010/116123、EP2417161B1、US8,586,037B2、US8,852,589或所述专利族的任何成员(各自通过引用全文并入本文)中所定义的抗体“D9.2”或任何抗体或结合分子，或其功能片段或衍生物。
IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以是或可以包含含有D9.2的CDR的抗体、或其片段或衍生物。CDR可以通过任何技术或方法或此类方法的组合来确定。CDR可通过本文中讨论的任何方法来确定。
根据一种确定方法，D9.2的CDR如下：
D9.2 VH CDR 1：
SYWMN(SEQ ID NO:49)
D9.2 VH CDR 2：
RIDPYDSEIQYNQKFKD(SEQ ID NO:50)
D9.2 VH CDR 3：
SGGFDWFAY(SEQ ID NO:51)
D9.2 VL CDR 1：
RASENINSNLA(SEQ ID NO:52)
D9.2 VL CDR 2：
DVTNLAD(SEQ ID NO:53)
D9.2 VL CDR 3：
QHFWRPPYT(SEQ ID NO:54)
D9.2的VH结构域可具有如下序列：
FFLATPTCVHSQVQLQQPGAELVRPGASVKLSCKTSGYTFISYWMNWVKQGGPEQGLEWIGRIDPYDSEIQYNQKFKDKAILTVDKSSSAAYMQLISLTSEDSAVYYCARSGGFDWFAYWGQGTLVTVS(SEQ ID NO:55)。
D9.2的VL结构域可具有如下序列：
MSVLTQVLALLLLWLTDARCDIQMTQSPASLSVSVGETVTITCRASENINSNLAWYQQKKGKSPQLLVYDVTNLADGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQSEDFGSYYCQHFWRPPYTFGGGTNLEIK(SEQ ID NO:56)。
由此，在一个实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂能够结合IL-25R，并包含：
抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:49中显示的氨基酸序列的VH CDR1；
含有SEQ ID NO:50中显示的氨基酸序列的VH CDR2；和
含有SEQ ID NO:51中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:52中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:53中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:54中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
因此，在本发明的一个方面，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的抗IL-25R抗体，其中该抗IL-25R抗体包含：
抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:49中显示的氨基酸序列的VH CDR1；
含有SEQ ID NO:50中显示的氨基酸序列的VH CDR2；和
含有SEQ ID NO:51中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:52中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:53中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:54中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
与所述序列相比，上述CDR可以包含一个、两个或三个氨基酸取代，其可以是保守取代。取代可以使得抑制剂的性质不受影响，或不受不利影响。例如，结合亲和力可以保留或改善。
在一些实施方案中，抗体VH结构域包含SEQ ID NO:55中显示的氨基酸序列，任选包含至少一个、一至十个、一至五个、一至三个、或一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、或十个氨基酸取代。取代可以在不在CDR内的残基中。在一些实施方案中，所述氨基酸取代是保守氨基酸取代。取代可以使得抑制剂的性质不受影响，或不受不利影响。例如，结合亲和力可以保留或改善。在一个特定实施方案中，结构域包含一至三个保守氨基酸取代。
在一些实施方案中，抗体VL结构域包含SEQ ID NO:56中显示的氨基酸序列，任选包含至少一个、一至十个、一至五个、一至三个、或一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、或十个氨基酸取代。取代可以在不在CDR内的残基中。在一些实施方案中，所述氨基酸取代是保守氨基酸取代。取代可以使得抑制剂的性质不受影响，或不受不利影响。例如，结合亲和力可以保留或改善。在一个特定实施方案中，结构域包含一至三个保守氨基酸取代。
在一个实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂能够结合IL-25R，并包含含有SEQ ID NO:55中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域和含有SEQ ID NO:56中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域。
由此，在本发明的一个特定方面，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的抗IL-25R抗体，其中该抗IL-25R抗体包含含有SEQ ID NO:55中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域和含有SEQ ID NO:56中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域。
在一个实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂是或包含抗体分子，其结合IL-25R并且其包含抗体VH结构域，所述抗体VH结构域包含具有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的VH CDR3。
在一个实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂是或包含抗体分子，所述抗体分子包含含有SEQ ID NO:51的VH CDR3以及SEQ ID NO:49的CDR1和SEQ ID NO:50的CDR2的VH结构域。VH结构域可以与VL结构域，例如具有SEQ ID NO:52的CDR1、SEQ ID NO:53的CDR2和SEQ ID NO:54的CDR3的VL结构域配对。在一些实施方案中，VH结构域可以与SEQID NO:55的VL结构域配对。
在一个实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂是或包含抗体分子，所述抗体分子包含含有SEQ ID NO:49的VH CDR1、SEQ ID NO:50的VH CDR2和SEQ ID NO:51的VH CDR3的VH结构域和含有SEQ ID NO:52的VL CDR1、SEQ ID NO:53的VL CDR2和SEQ IDNO:54的VL CDR3的VL结构域。
VH结构域可进一步包含人或非人框架区，例如SEQ ID NO:55中显示的框架区。在一些实施方案中，抗体分子可以包含SEQ ID NO:55的VH结构域。
VL结构域可进一步包含人或非人框架区，例如SEQ ID NO:56中显示的框架区。在一些实施方案中，抗体分子可以包含SEQ ID NO:56的VL结构域。
在一个特定实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂是或包含抗体分子，所述抗体分子包含SEQ ID NO:55的VH结构域和SEQ ID NO:56的VL结构域。
在一个特定实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂是或包含特异性结合小鼠和/或人IL-17BR(也称为IL-25R)的抗体分子，并且所述抗体分子包含：
VH结构域，其包含具有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的CDR1、具有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的CDR3；和
VL结构域，其包含具有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的CDR1、具有SEQ ID NO:53的氨基酸序列的CDR2、和具有SEQ ID NO:54的氨基酸序列的CDR3。
VH结构域可以包含人框架区或SEQ ID NO:55。
抗体可以与人IL-17BR和小鼠IL-17BR二者交叉反应。
VL结构域可以包含人框架区或SEQ ID NO:56。
D9.2抗体可以包含恒定区，例如IgG1或IgG4恒定区。
在另一特定实施方案中，抑制剂是或包含如WO2020/115319(通过引用全文并入本文)中所定义的抗体D9.2或任何抗体或结合分子的人源化形式，或其功能片段或衍生物。
IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以是或可以包含含有人源化D9.2的CDR的抗体，或其片段或衍生物。CDR可以通过任何技术或方法或此类方法的组合来确定。此类方法包括使用Kabat编号体系、Chothia编号体系、IMGT编号体系和/或扩展定义。可以通过建模软件(诸如AbM或WAM)或通过结构或晶体学技术确定接触残基来确定CDR。
根据一种确定方法，人源化D9.2的CDR可具有以下序列中的任一种。
人源化D9.2 VH CDR 1：
SEQ ID NO:49
人源化D9.2 VH CDR 2：
RIDPYDSEIQYX1QKFX2X3(X1是N或A，X2是K或Q，且X3是D或G)(SEQ ID NO:57)；
SEQ ID NO:50；
RIDPYDSEIQYNQKFKG(SEQ ID NO:58)；
RIDPYDSEIQYNQKFQD(SEQ ID NO:59)；
RIDPYDSEIQYNQKFQG(SEQ ID NO:60)；
RIDPYDSEIQYAQKFKD(SEQ ID NO:61)；
RIDPYDSEIQYAQKFKG(SEQ ID NO:62)；
RIDPYDSEIQYAQKFQD(SEQ ID NO:63)；或
RIDPYDSEIQYAQKFQG(SEQ ID NO:64)
人源化D9.2 VH CDR 3：
SEQ ID NO:51
人源化D9.2 VL CDR 1：
SEQ ID NO:52
人源化D9.2 VL CDR 2：
SEQ ID NO:53
人源化D9.2 VL CDR 3：
SEQ ID NO:54；或
QHFWGPPYT(SEQ ID NO:65)。
人源化D9.2的VH结构域可具有如下序列：
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFISYWMNWVRQAPGQGLEWMGRIDPYDSEIQYNQKFKDRVTLTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCATSGGFDWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:66)；
X1VQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKX2SGYTFISYWMNWVRQAPGQGLEWMGRIDPYDSEIQYX3QKFX4X5RVTX6TRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARSGGFDWFAYWGQGTLVTVSS(X1是Q或E，X2是A或T，X3是A或N，X4是Q或K，X5是G或D，且X6是M或L)(SEQ ID NO:67)；
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFISYWMNWVRQAPGQGLEWMGRIDPYDSEIQYNQKFKDRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARSGGFDWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:68)；
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFISYWMNWVRQAPGQGLEWMGRIDPYDSEIQYNQKFKDRVTLTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARSGGFDWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:69)；
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFISYWMNWVRQAPGQGLEWMGRIDPYDSEIQYAQKFQGRVTLTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARSGGFDWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:70)；
QVQLQQPGAELVRPGASVKLSCKTSGYTFISYWMNWVKQGPEQGLEWIGRIDPYDSEIQYNQKFKDKAILTVDKSSSAAYMQLISLTSEDSAVYYCARSGGFDWFAYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:80)；
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFISYWMNWVRQAPGQGLEWIGRIDPYDSEIQYNQKFKDKAILTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARSGGFDWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:81)；
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFISYWMNWVRQAPGQGLEWIGRIDPYDSEIQYNQKFKDRVTLTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCATSGGFDWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:82)；
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFISYWMNWVRQAPGQGLEWMGRIDPYDSEIQYNQKFKDKVTLTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCATSGGFDWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:83)；
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFISYWMNWVRQAPGQGLEWMGRIDPYDSEIQYNQKFKDRATLTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCATSGGFDWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:84)；
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFISYWMNWVRQAPGQGLEWMGRIDPYDSEIQYNQKFKDRVILTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCATSGGFDWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:85)；或
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFISYWMNWVRQAPGQGLEWMGRIDPYDSEIQYNQKFKDRVTLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCATSGGFDWFAYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:86)。
人源化D9.2的VL结构域可具有如下序列：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENINSNLAWYQQKPGKAPKLLLYDVTNLADGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWRPPYTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:71)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENINSNLAWYQQKPGKAPKLLLYDVTNLADGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGPPYTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:72)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENINSNLAWYQQKPGKAPKLLVYDVTNLADGVPSRFSGSGSGTQYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWRPPYTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:88)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENINSNLAWYQQKPGKAPKLLVYDVTNLADGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWRPPYTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:89)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENINSNLAWYQQKPGKAPKLLLYDVTNLADGVPSRFSGSGSGTQYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWRPPYTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:90)；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSENIYSNLAWYQQKPGKAPKLLLYDATNLGDGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQHFWGPPYTFGGGTKVEIK(SEQ ID NO:91)。
人源化D9.2抗体可以包含恒定区，例如IgG1或IgG4恒定区。恒定区可以是根据以下序列的铰链稳定的IgG4恒定区：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLY
SLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPK
PKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVL
TVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTC
LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ ID NO:73)。
人源化D9.2抗体的重链可具有以下序列：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFISYWMNWVRQAPGQGLEWMGRIDPYDSEIQ
YNQKFKDRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARSGGFDWFAYWGQGTLVTVSSA
STKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS
LSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKP
KDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLT
VLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCL
VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ ID NO:74)。
由此，在一个实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂能够结合IL-25R，并包含：
抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:49中显示的氨基酸序列的VH CDR1；
含有SEQ ID NO:50、57、58、59、60、61、62、63或64中任一种中显示的氨基酸序列的VH CDR2；和
含有SEQ ID NO:51中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:52中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:53中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:54或SEQ ID NO:65中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
因此，在本发明的一个方面，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的抗IL-25R抗体，其中该抗IL-25R抗体包含：
抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:49中显示的氨基酸序列的VH CDR1；
含有SEQ ID NO:50、57、58、59、60、61、62、63或64中任一种中显示的氨基酸序列的VH CDR2；和
含有SEQ ID NO:51中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:52中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:53中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:54或SEQ ID NO:65中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
与所述序列相比，上述CDR可以包含一个、两个或三个氨基酸取代，其可以是保守取代。取代可以使得抑制剂的性质不受影响，或不受不利影响。例如，结合亲和力可以保留或改善。
在另一实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂能够结合IL-25R，并包含：抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:49中显示的氨基酸序列的VH CDR1；
含有SEQ ID NO:50或SEQ ID NO:64中显示的氨基酸序列的VH CDR2；和
含有SEQ ID NO:51中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:52中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:53中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:65中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
因此，在本发明的一个方面，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的抗IL-25R抗体，其中该抗IL-25R抗体包含：
抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:49中显示的氨基酸序列的VH CDR1；
含有SEQ ID NO:50或SEQ ID NO:64中显示的氨基酸序列的VH CDR2；和
含有SEQ ID NO:51中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:52中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:53中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:65中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
与所述序列相比，上述CDR可以包含一个、两个或三个氨基酸取代，其可以是保守取代。取代可以使得抑制剂的性质不受影响，或不受不利影响。例如，结合亲和力可以保留或改善。
在另一实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂包含含有SEQ ID NO:66、67、68、69或70中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，其任选包含至少一个、一至十个、一至五个、一至三个、或一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、或十个氨基酸取代。取代可以在不在CDR内的残基中。在一些实施方案中，所述氨基酸取代是保守氨基酸取代。取代可以使得抑制剂的性质不受影响，或不受不利影响。例如，结合亲和力可以保留或改善。在一个特定实施方案中，结构域包含一至三个保守氨基酸取代。
在另一实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂包含含有SEQ ID NO:66、67、68、69、70、80、81、82、83、84、85或86中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，其任选包含至少一个、一至十个、一至五个、一至三个、或一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、或十个氨基酸取代。取代可以在不在CDR内的残基中。在一些实施方案中，所述氨基酸取代是保守氨基酸取代。取代可以使得抑制剂的性质不受影响，或不受不利影响。例如，结合亲和力可以保留或改善。在一个特定实施方案中，结构域包含一至三个保守氨基酸取代。
在另一实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂包含含有SEQ ID NO:71或SEQ ID NO:72中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域，其任选包含至少一个、一至十个、一至五个、一至三个、或一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、或十个氨基酸取代。取代可以在不在CDR内的残基中。在一些实施方案中，所述氨基酸取代是保守氨基酸取代。取代可以使得抑制剂的性质不受影响，或不受不利影响。例如，结合亲和力可以保留或改善。在一个特定实施方案中，结构域包含一至三个保守氨基酸取代。
在另一实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂包含含有SEQ ID NO:71、72、87、88、89、90或91中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域，其任选包含至少一个、一至十个、一至五个、一至三个、或一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、或十个氨基酸取代。取代可以在不在CDR内的残基中。在一些实施方案中，所述氨基酸取代是保守氨基酸取代。取代可以使得抑制剂的性质不受影响，或不受不利影响。例如，结合亲和力可以保留或改善。在一个特定实施方案中，结构域包含一至三个保守氨基酸取代。
在一个特定实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂能够结合IL-25R，并包含含有SEQ ID NO:68、69或70中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，和含有SEQ ID NO:72中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域。
由此，在本发明的一个特定方面，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的抗IL-25R抗体，其中该抗IL-25R抗体包含含有SEQ ID NO:68、69或70中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，和含有SEQ ID NO:72中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域。
在另一实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂是或包含人源化抗体分子，所述人源化抗体分子包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其中a)重链可变结构域(VH)包含SEQ ID NO:49的VHCDR1、SEQ ID NO:57的VHCDR2和SEQ ID NO:51的VHCDR3，并且b)轻链可变结构域(VL结构域)包含SEQ ID NO:52的VLCDR1、SEQ ID NO:53的VLCDR2和SEQID NO:65的VLCDR3。抗体分子可以特异性结合白介素-17受体B(IL17BR)，优选IL17BR的细胞外结构域。任选地，如通过ELISA测量的，抗体可以以鼠抗体D9.2对白介素-17受体B的结合亲和力的至少75％的结合亲和力结合白介素-17受体。抗体的表达水平可以是哺乳动物细胞中鼠抗体D9.2的表达水平的至少40％。
在另一实施方案中，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂是或包含抗体D9.2的人源化形式，其包含SEQ ID NO:67的VH结构域，所述VH结构域任选具有至多四个另外的框架取代。例如，抗体可以包含SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69或SEQ ID NO:70的VH结构域，所述VH结构域任选具有至多四个另外的框架取代。抗体可以包含SEQ ID NO:71的VL结构域，所述VL结构域任选具有至多四个另外的框架取代。在一些实施方案中，抗体分子可以包含SEQID NO:68的VH结构域和SEQ ID NO:72的VL结构域。
抗体D9.2的人源化形式的重链可变结构域(VH结构域)可以包含SEQ ID NO:67，其中X3是N。重链可变结构域(VH结构域)可以包含SEQ ID NO:67，其中X4是K。重链可变结构域(VH结构域)可以包含SEQ ID NO:67，其中X5是D。重链可变结构域(VH结构域)可以包含SEQID NO:67，其中X1是Q。重链可变结构域(VH结构域)可以包含SEQ ID NO:67，其中X2是A。重链可变结构域(VH结构域)可以包含SEQ ID NO:67，其中X6是M。
抗体D9.2的人源化形式的重链可变结构域(VH结构域)可以包含SEQ ID NO:67，其中X1是E。重链可变结构域(VH结构域)可以包含SEQ ID NO:67，其中X2是T。重链可变结构域(VH结构域)可以包含SEQ ID NO:67，其中X6是L。
抗体D9.2的人源化形式的重链可变结构域(VH结构域)可以包含SEQ ID NO:67，其中X3是A。重链可变结构域(VH结构域)可以包含SEQ ID NO:67，其中X4是Q。重链可变结构域(VH结构域)可以包含SEQ ID NO:67，其中X5是G。重链可变结构域(VH结构域)可以包含SEQID NO:67，其中X1是E。重链可变结构域(VH结构域)可以包含SEQ ID NO:67，其中X2是T。重链可变结构域(VH结构域)包含SEQ ID NO:67，其中X6是L。
抗体D9.2的人源化形式的VH结构域可与包含SEQ ID NO:73的抗体恒定区融合。人源化D9.2可以包含含有SEQ ID NO:74的VH结构域和恒定区的氨基酸序列。
人源化D9.2抗体可进一步包含第二重链可变结构域和第二轻链可变结构域，其形成除IL17BR以外的抗原的抗原结合位点。
以下序列涉及人源化D9.2抗体。
SEQ ID NO:66 VH序列HA(CDR加阴影)(Kabat位置1、24、60、64、65、69和94加下划线)
(X1是Q或E，X2是A或T，X3是A或N，X4是Q或K，X5是G或D且X6是M或L)
SEQ ID NO:67在Kabat位置1、24、60、64、65和69处具有修饰的VH序列(CDR加阴影)
SEQ ID NO:68 VH序列HJ(CDR加阴影)
SEQ ID NO:69 VH序列HH(CDR加阴影)
SEQ ID NO:70 VH序列HI(CDR加阴影)
SEQ ID NO:71 VL序列KA(CDR加阴影)(Kabat位置93加下划线)
SEQ ID NO:72 VL序列KE(CDR加阴影)。
下表涉及人源化D9.2抗体。
虚线下划线残基指示反翻译为小鼠残基，而实线下划线残基指示反向突变为人种系
/>
虚线下划线残基指示反翻译为小鼠残基，而实线下划线指示通过分子建模鉴定的残基。
在上表中，D9.2 VH是SEQ ID NO:80，EF178110是SEQ ID NO:94，D9 HA是SEQ IDNO:66，D9 HB是SEQ ID NO:81，D9 HC是SEQ ID NO:82，D9 HD是SEQ ID NO:83，D9 HE是SEQID NO:84，D9 HF是SEQ ID NO:85，D9 HG是SEQ ID NO:86，D9 HH是SEQ ID NO:69，D9 HI是SEQ ID NO:70，D9 HJ是SEQ ID NO:68，D9.2 VK是SEQ ID NO:87，Y14869是SEQ ID NO:95，D9_KA是SEQ ID NO:71，D9_KB是SEQ ID NO:88，D9_KC是SEQ ID NO:89，D9_KD是SEQ ID NO:90，KM是SEQ ID NO:91，以及D9_KE是SEQ ID NO:72。
CDR可以通过技术或方法、或此类方法的组合来确定。此类方法包括使用Kabat编号体系、Chothia编号体系、Kabat和Chothia二者的积累和/或IMGT编号体系。可以通过建模软件(诸如AbM、Accelrys或WAM)或通过结构或晶体学技术确定接触残基来确定CDR。CDR可以通过基于观察到的抗原接触的接触定义来确定，并描述在MacCallum等人(J.Mol.Biol.,262:732-745,1996)中。CDR可以通过构象定义来确定，所述构象定义鉴定对抗原结合做出焓贡献的残基(Makabe等人,Journal of Biological Chemistry,283:1156-1166,2008)。因此，虽然本文给出了CDR的实例，但IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以包含根据任何合适的方法从本文中公开的任何VH或VL序列确定的CDR。
本文中使用的保守取代是用具有与原始残基相似性质的不同类型的氨基酸残基置换氨基酸残基。例如，保守取代可以是不改变原始残基存在于其中的多肽的功能性质的取代。在一个实例中，保守取代可以是以下组中的任何置换：组：G、A、V、L或I；组：S、C、T、M；组：F、Y、W；组：H、K、R；或组：D、E、N、Q。
在本发明的实施方案中，肠癌可以是涉及受试者肠中异常细胞生长的任何癌症。癌症可以是在肠中发生的原发性肿瘤。肠癌可以是从另一组织中的原发性肿瘤扩散的继发性肿瘤。肠癌可以是结肠直肠癌(CRC)。CRC也可以称为肠癌、结肠癌或直肠癌。CRC是由大肠内的细胞异常生长，例如结肠或直肠内的细胞异常生长引起的。CRC可以涵盖：结肠直肠腺癌，诸如粘液腺癌或印戒细胞腺癌；胃肠道类癌肿瘤；原发性结肠直肠淋巴瘤；胃肠道间质瘤；平滑肌肉瘤；和结肠炎相关癌症(CAC)。CRC可以是错配修复缺陷(dMMR)CRC或非错配修复缺陷(pMMR)CRC。CRC可以是共识分子亚型(CMS)1、CMS2、CMS3和/或CMS4。
在一些实施方案中，肠癌不包括CAC。在一些实施方案中，肠癌是pMMR CRC。在一个特定实施方案中，CRC包含在APC肿瘤抑制基因中具有突变的肠上皮细胞。
在一些实施方案中，待治疗的疾病是高IL25 CRC。在一些实施方案中，待治疗的疾病具有高ILC2频率。在一个实施方案中，与相邻正常肠中的ILC2频率相比，肿瘤具有提高的ILC2频率。这可以通过将肿瘤活检与来自相同受试者的非肿瘤肠组织或与非肿瘤肠组织中的预期ILC2频率进行比较来确定。“相邻正常肠”可以是指不包含肿瘤细胞或肿瘤间质的肠组织，并且其取自肿瘤所在的肠的一部分。
在一些实施方案中，在治疗之前测试来自受试者的肿瘤活检。可以测试肿瘤活检以确定肿瘤是否包含APC肿瘤抑制基因中的突变。备选地或此外，可以测试肿瘤活检以确定肿瘤是否为高IL25。备选地或此外，可以测试肿瘤活检以确定肿瘤是否具有高ILC2频率。
本发明人已经注意到，CRC患者中对免疫检查点抑制剂疗法的响应很大程度上限于错配修复缺陷(dMMR)CRC，其仅占总CRC病例的一小部分(15％)。相比之下，在APC基因突变引发的常规途径之后，绝大多数CRC是非错配修复缺陷(pMMR)的，并且极少响应免疫检查点抑制剂。此外，在过去十年中，开发CRC的新免疫疗法(诸如肿瘤疫苗和过继性T细胞转移)的努力几乎没有显示出效力。最近，使用抗PD-L1检查点抑制剂阿特珠单抗治疗CRC患者(>98％具有非错配修复缺陷CRC)的III期临床试验IMblaze370未能达到主要终点。
但是，本发明人在本文中证明，当治疗肠癌时，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂使免疫应答的平衡远离MDSC并转向由抗肿瘤CD8 T细胞浸润的浸润。由此，IL-25:IL-25R信号传导途径的阻断可以提高免疫检查点抑制剂疗法的效力。
由此，在一个实施方案中，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂，其中该方法进一步包含免疫检查点抑制剂疗法。
IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以是本文中公开的任何抑制剂。在一个特定实施方案中，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的抗IL-25抗体、其衍生物或功能片段，其中该方法进一步包括免疫检查点抑制剂疗法。在另一实施方案中，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的抗IL-25R抗体、其衍生物或功能片段，其中该方法进一步包括免疫检查点抑制剂疗法。
肠癌可以是本文中公开的任何肠癌。在一个特定实施方案中，肠癌是pMMR CRC。pMMR CRC可包含在APC肿瘤抑制基因中具有突变的肠上皮细胞。
免疫检查点抑制剂疗法可以在施用IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂之前、同时或之后施用。免疫检查点抑制剂可以与IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂物理分隔或与其组合。
免疫检查点抑制剂疗法可以包括施用PD-1:PD-L1途径的抑制剂。PD-1:PD-L1途径的抑制剂可以特异性结合PD-1或特异性结合PD-L1。例如，PD-1:PD-L1途径的抑制剂可以是抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体。还涵盖了包含此类抗体的功能片段或衍生物的组合物。
免疫检查点抑制剂疗法可包括施用CTLA-4:CD80/CD86途径的抑制剂。CTLA-4:CD80/CD86途径的抑制剂可以特异性结合CTLA-4。例如，CTLA-4:CD80/CD86途径的抑制剂可以是抗CTLA-4抗体。还涵盖了包含此类抗体的功能片段或衍生物的组合物。
免疫检查点抑制剂疗法可以靶向LAG-3、TIM-3、TIGIT、VISTA、B7-H4、BTLA和/或Siglec-15。靶向这些分子中任一种的抑制剂可以特异性结合所述分子，例如抑制剂可以是能够特异性结合所述分子中任一种的抗体、其功能片段或衍生物。
由此，在一个实施方案中，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂，其中该方法进一步包含靶向选自以下的分子的免疫检查点抑制剂疗法：PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG-3、TIM-3、TIGIT、VISTA、B7-H4、BTLA、Siglec-15及其任意组合。在一个特定实施方案中，免疫检查点抑制剂疗法是靶向CTLA-4和PD-1/PD-L1的组合。
在本发明的一个方面，提供了一种试剂盒，其包含免疫检查点抑制剂和IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂。在本发明的另一方面，提供了一种药物组合物，其包含免疫检查点抑制剂和IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂。
在一个实施方案中，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂，其中该方法不包括施用HER抑制剂。在一个实施方案中，提供了用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂，其中该方法不包括施用EGFR(HER1)抑制剂。HER抑制剂或EGFR抑制剂可以是WO2017/194554(通过引用并入本文)中公开的任一种。
在本发明的另一方面，提供了在有需要的受试者中治疗、预防或改善肠癌的方法，其包括施用有效量的IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂。IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以是任何此类抑制剂，包括本文中公开的任何此类抑制剂。肠癌可以是任何肠癌，包括本文中公开的任何肠癌。治疗的受试者可以是任何受试者，包括本文中公开的任何受试者。
还提供了减少肠中的肿瘤中的ILC2、M-MDSC和/或G-MDSC的方法，其包括施用有效量的IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂。IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以是任何此类抑制剂，包括本文中公开的任何此类抑制剂。肠肿瘤可以是任何肠癌的结果，包括本文中公开的任何肠癌。治疗的受试者可以是任何受试者，包括本文中公开的任何受试者。该方法可以导致癌症的治疗、预防或改善。
还提供了改变肠中的肿瘤微环境中的免疫组成的方法，其包括施用有效量的IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂。可以改变免疫微环境以减少ILC2、M-MDSC和/或G-MDSC并增加ILC1和/或CD8 T细胞。IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可以是任何此类抑制剂，包括本文中公开的任何此类抑制剂。肠肿瘤可以是任何肠癌的结果，包括本文中公开的任何肠癌。治疗的受试者可以是任何受试者，包括本文中公开的任何受试者。该方法可以导致癌症的治疗、预防或改善。
在本发明的另一方面，提供了IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂用于制造治疗、预防或改善肠癌的药物的用途。
本文中使用的治疗有效量是足以实现任何一种或多种有益结果或所需结果的量。
本文中使用的改善是指与不施用IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂相比一种或多种症状的减轻或改善。
在一个实施方案中，本文中公开的治疗的受试者是动物受试者，例如有颌脊椎动物、哺乳动物或家养动物。因此，IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂可用于治疗任何哺乳动物，例如家畜(例如马)、宠物，或可用于其它兽医应用中。在一个特定实施方案中，受试者是人。在一些实施方案中，受试者已被诊断患有肠癌。
本文中公开的抑制剂可以作为药物组合物的一部分存在。药物组合物可进一步包含药学上可接受的溶媒、药学上可接受的载体、药学上可接受的赋形剂、药学上可接受的稳定剂或药学上可接受的防腐剂或其任意组合。
为了药学上可接受，物质或物质的组合必须适于配制药物组合物或药物。
在另一方面，本发明的药物组合物可以采用包括使治疗有效量的本文中公开的抑制剂的任一种与药学上可接受的溶媒、药学上可接受的载体、药学上可接受的赋形剂、药学上可接受的稳定剂或药学上可接受的防腐剂或其任意组合接触的过程来制造。
包含本文中公开的抑制剂的任一种的组合物可以采用任何数量的本领域中已知的形式，这取决于其使用方式。例如，以液体、粉末、混悬剂、片剂、胶囊、软膏、乳膏、凝胶、水凝胶、气溶胶、喷雾剂、胶束溶液、透皮贴剂的形式，或用于储存、运输或施用的任何其它合适的形式。
在一些实施方案中，组合物可以是适于储存或运输的形式。例如，作为冻干组合物的一部分，在冻干或储存需要的情况下，该冻干组合物可包含其它组分，诸如稳定剂。备选地，组合物可以是与稀释剂一起的溶液，并可以以适于储存或运输的浓度存在。
在一些实施方案中，组合物可以是适于施用于患者的形式。例如，适于注射的液体形式，或适于在准备步骤后施用的浓缩形式。组合物可以与用于施用的载体联合，并且可以是无菌的。组合物可以是适于注射到患者体内的形式，例如静脉内注射或皮下注射。组合物可以是适于局部施用于肠(intestine)、直肠或肠(bowel)的形式。
在一些实施方案中，组合物可以存在于缓释组合物中。
应当理解，需要的组合物的量由其生物活性和生物利用度决定，生物活性和生物利用度又取决于施用模式、组合物的生理化学性质以及其作为单一疗法还是组合疗法使用。施用频率也将受药剂在待治疗的受试者体内的半衰期影响。待施用的最佳剂量可以由本领域技术人员确定，并且将根据背景而变化。另外的因素可取决于所治疗的具体受试者，疾病、病症或状况的进展，受试者年龄，受试者体重，受试者性别，受试者饮食，以及施用时间。
在一些实例中，组合物可以作为单剂量、每年剂量、每月剂量、每周剂量或每日剂量施用。剂量可以每天施用两次或更多次。在一个实例中，剂量可以是0.001μg至10mg/千克体重、0.01μg至1mg/千克体重、0.05μg至100μg/千克体重、或0.1μg至10μg/千克体重。在一个实例中，剂量可以为0.07μg至700mg、0.7μg至70mg、3.5μg至7mg、或7μg至0.7mg。
应当理解的是，在本文中用语言“包含”描述实施方案的任何地方还提供了以“由...组成”和/或“基本上由...组成”术语描述的其它类似实施方案。
除非另行定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。在冲突的情况下，以本说明书(包括定义)为准。在本说明书和权利要求书通篇中，词语“包含(comprise)”或诸如“包含(comprises)”或“包含(comprising)”的变体将理解为暗示包含所述整数或整数组，但不排除任何其它整数或整数组。除非上下文另行要求，单数术语应包括复数，并且复数术语应包括单数。
本文(包括任何所附权利要求、摘要和附图)中描述的所有特征和/或如此公开的任何方法或过程的所有步骤可以以任意组合与任意上述方面组合，除了其中至少一部分此类特征和/或步骤相互排斥的组合。与本文中描述的那些类似或等同的方法和材料可用于本发明的实践和测试，并在下文中描述了合适的方法和材料。
图1：表达IL-25R的ILC2浸润人和Apc1322T/+小鼠结肠直肠癌模型。a、b，来自TCGAFirehose Legacy微阵列数据集的CRC患者的总体(a)和无疾病(b)生存率，按肿瘤Il25表达分为两组。Il25-高和Il25-低组被定义为分别具有高于和低于总样品平均值的肿瘤Il25表达的CRC患者。c，来自TCGAFirehose Legacy微阵列数据集的CRC患者的总体生存率，按肿瘤Il33表达分为两组。Il33-高和Il33-低组被定义为分别具有高于和低于总样品平均值的肿瘤Il33表达的CRC患者。d，原发性患者CRC样品中人ILC上的门控策略和IL-25R表达。e-f，来自未经选择的CRC患者的成对的CRC和相邻正常组织中的ILC2(e)、CD8和Th1 T细胞(f)的频率。g，显示Apc1322T/+小鼠中表达Il25-tomato的CD45-EpCAM+上皮细胞内的DCLK1+簇细胞频率的代表性FACS图。h，Apc1322T/+小鼠(n＝7)中成对肿瘤、相邻的正常上皮(Adj epi)和相邻的固有层(Adj LP)中ILC2的频率。i，来自Apc1322T/+小鼠肿瘤和Adj LP的小鼠ILC2中的IL-25R和ST2表达。j，IL-25R在来自Apc1322T/+小鼠(n＝5)的成对的肿瘤和Adj LP的ILC2上的百分比表达和表达水平。相对gMFI，相对于同种型对照的几何平均荧光强度。k，来自Apc1322T/+小鼠(n＝5)的成对的肿瘤和Adj epi中ab CD8 T细胞和Th1细胞的频率。e、f，每对点指示单个人CRC患者；n＝11。h、j、k，数据从77-83日龄的雌性小鼠收集；每个点或每对点指示单个小鼠。数据汇集自两个或更多个独立实验且误差条显示平均值±SEM。通过对数秩检验(a-c)、配对双尾t检验(e、f、j、k)、带Tukey事后检验的单因素方差分析(h)确定统计显著性。
图2：IL-25促进肠肿瘤。a，Apc1322T/+小鼠中rIL-25或溶媒治疗的示意图。b，溶媒和rIL-25治疗的Apc1322T/+小鼠(溶媒,n＝7；rIL25,n＝9)中的肿瘤数量。c，溶媒和rIL-25治疗的Apc1322T/+小鼠中的代表性FACS图和肿瘤ILC2频率。d-g，溶媒和rIL-25治疗的Apc1322T/+小鼠(溶媒,n＝7；rIL25,n＝8)中肿瘤浸润Tbet+ILC1(d)、Th1和ab CD8 T细胞(e)、M-MDSC和G-MDSC(f)、以及Th2 T细胞(g)的频率。h、i，Il25+/+和IL25tom/tomApc1322T/+小鼠的肿瘤数量和平均肿瘤大小(Il25+/+,n＝44；Il25tom/tom,n＝37)(h)以及生存率(i)。j-n，来自Il25+/+和Il25tom/tomApc1322T/+小鼠的肿瘤ILC2(Il25+/+,n＝27；Il25tom/tom,n＝15)(j)、ILC1(Il25+/+,n＝8；Il25tom/tom,n＝7)(k)、ab CD8和Th1 T细胞(Il25+/+,n＝20；Il25tom/tom,n＝11)(l)、M-MDSC和G-MDSC(Il25+/+,n＝9；Il25tom/tom,n＝17)(m)、和Th2 T细胞(Il25+/+,n＝20；Il25tom /tom,n＝11)(n)的频率。b-h、j-n，数据从77至83日龄的雌性小鼠收集；每个点指示单个小鼠。数据汇集自两个或更多个独立实验且误差条显示平均值±SEM。通过未配对双尾t检验确定统计显著性，除了在(i)中通过双侧对数秩检验来计算。
图3：ILC2通过抑制抗肿瘤免疫促进肠肿瘤。a、b，ILC2缺陷型(Roraf/fIl7rCre/+)和Cre对照(Rora+/+Il7rCre/+)Apc1322T/+小鼠(Cre对照,n＝9；ILC2缺陷型,n＝32)的肿瘤数量和平均肿瘤大小(a)以及生存率(b)。c、d，ILC2缺陷型和Cre对照Apc1322T/+小鼠中肿瘤ILC1(Cre对照,n＝6；ILC2缺陷型,n＝8)(c)、Th1(Cre对照,n＝6；ILC2缺陷型,n＝8)和ab CD8 T细胞(Cre对照,n＝6；ILC2缺陷型,n＝12)(d)的频率。e，来自ILC2缺陷型和对照(Rora+/+Il7r+/+)Apc1322T/+小鼠(对照,n＝7；ILC2缺陷型,n＝6)的肿瘤γδT细胞中的颗粒酶、穿孔素和IFNγ表达。f、g，ILC2缺陷型和Cre对照Apc1322T/+小鼠中的肿瘤Th2 T细胞(Cre对照,n＝6；ILC2缺陷型,n＝8)(f)以及M-MDSC和G-MDSC(Cre对照,n＝8；ILC2-缺陷型,n＝10)(g)的频率。h，溶媒或rIL-25治疗的ILC2缺陷型(Roraf/fIl7rCre/+)Apc1322T/+小鼠(溶媒,n＝9；rIL25,n＝9)中的肿瘤数量和平均肿瘤大小。i-k，溶媒或rIL-25治疗的ILC2缺陷型Apc1322T /+小鼠(溶媒,n＝7；rIL25,n＝7)中肿瘤ILC1(i)、ab CD8和Th1 T细胞(j)、和Th2T细胞(k)的频率。l、m，IL4RA(l)和IL13RA1(m)在来自Apc1322T/+小鼠(n＝5)的肿瘤和相邻固有层(AdjLP)中的M-MDSC上的代表性FACS图和表达水平(相对gMFI)。相对gMFI，相对于同种型对照的几何平均荧光强度。n，IL4RA在来自Apc1322T/+小鼠(n＝5)的肿瘤和Adj LP的G-MDSC上的代表性FACS图和表达水平(相对gMFI)。a、c-n，数据从77至83日龄的雌性小鼠收集；每个点指示单个小鼠。数据汇集自两个或更多个独立实验且误差条显示平均值±SEM。通过未配对双尾t检验(a、c-k)、双侧对数秩检验(b)和配对双尾t检验(l-n)确定统计显著性。
图4:人CRC中的治疗途径保守性。a，未经选择的人CRC样品中CD8 T细胞和ILC2的相关性。b，未经选择的人CRC样品中Th1 T细胞和ILC2的相关性。c，人CRC和相邻正常肠中G-MDSC的频率。d，人CRC和相邻正常肠中M-MDSC的HLA-DR表达水平(相对gMFI)。相对gMFI，相对于FMO对照的几何平均荧光强度。FMO，荧光减一(full-minus-one)。e，未经选择的人CRC样品中M-MDSC和ILC2的相关性。f，未经选择的人CRC样品中M-MDSC和CD8 T细胞的相关性。g，Apc1322T/+小鼠中抗IL25R或溶媒治疗的示意图。h，抗IL25R或对照IgG1治疗的Apc1322T/+小鼠(对照IgG1,n＝8；抗IL-25R,n＝8)中的肿瘤数量和平均肿瘤大小。i-m，抗IL25R或对照IgG1治疗的Apc1322T/+小鼠(对照IgG1,n＝7；抗IL-25R,n＝7)中的ILC2(i)、M-MDSC和G-MDSC(j)、ILC1(k)、αβCD8 T细胞(l)、和簇细胞(m)的频率。n，来自野生型未携带肿瘤的C57BL/6Apc+/+小鼠(WT)和抗IL25R或对照IgG1治疗的Apc1322T/+小鼠(WT,n＝10；对照IgG1,n＝7；抗IL-25R,n＝6)的肺中总CD11b+Gr1+MDSC的频率。o，抗IL25R或对照IgG1治疗的Apc1322T/+小鼠(对照IgG1,n＝7；抗IL-25R,n＝6)中Th2 T细胞的频率。a-f，每个点或每对点代表单个人CRC患者；(a、b、c、e、f,n＝11；d,n＝9)。h-o，数据从用抗IL25R或对照IgG1治疗的年龄匹配的雌性小鼠收集，并汇集自两个或更多个独立实验；误差条显示平均值±SEM。每个点指示单个小鼠。通过皮尔逊秩相关系数(a,b,e,f)、配对双尾t检验(c,d)、未配对双尾t检验(h-m,o)和带Tukey事后检验的单因素方差分析(n)确定统计显著性。
图5：人CRC肿瘤表征。a，图显示来自Marisa等人2013(Gene ExpressionClassification of Colon Cancer into Molecular 454Subtypes:Characterization,Validation,and Prognostic Value.PLOS Medicine 10,455e1001453,doi:10.1371/journal.pmed.1001453(2013))的大型公众可得RNA数据集，通过R2平台分析，并按肿瘤Il25表达分为两组的CRC患者的无复发生存率。Il25-高和Il25-低组被定义为分别具有高于和低于平均表达的肿瘤Il25表达的CRC患者。通过对数秩检验确定统计显著性。b，人CRC和相邻正常肠中CD8 T细胞和Th1 T细胞的门控策略。SB645，Super Bright 645荧光染料。
图6：小鼠Apc1322T/+肿瘤模型中的IL-25和免疫细胞。a，Il25-tomato构建体和Southern分析的示意图。b，来自Il25tom/+Apc1322T/+小鼠(n＝5)的肿瘤和相邻肠中的EpCAM+细胞中的簇细胞频率(顶部)和Il25-tomato表达(底部)。c，Apc1322T/+小鼠中ILC2的门控策略。d，图显示在来自Apc1322T/+小鼠的肠肿瘤和肺中的总ILC上的ST2(克隆DJ8)表达。e，Apc1322T/+小鼠中γδ、αβCD4和αβCD8 T细胞的门控策略。f，Apc1322T/+小鼠(n＝5)中的肿瘤和相邻上皮(Adj epi)中γδT细胞的频率。g，来自Apc1322T/+小鼠(n＝8)的肿瘤和Adj epi中的ab CD8 T细胞中的颗粒酶、穿孔素和IFNγ表达。h，来自Apc1322T/+小鼠(n＝6)的肿瘤和Adjepi中的γδT细胞中的颗粒酶、穿孔素和IFNγ表达。i、j，来自Apc1322T/+小鼠(n＝7)的肿瘤、Adj epi和相邻固有层(Adj LP)中M-MDSC和G-MDSC的门控策略(i)和频率(j)。b、f-h、j，数据从77至83日龄的雌性小鼠收集；每个点或每对点指示单个小鼠。数据汇集自两个或更多个独立实验且误差条显示平均值±SEM。通过配对双尾t检验(b、f、g、h)和带Tukey事后检验的单因素方差分析(j)确定统计显著性。
图7：IL-25在Apc1322T/+小鼠中促进肿瘤。a-c，溶媒和rIL-25治疗的Apc1322T/+小鼠中的肠长度和相对于长度归一化的肿瘤数量(a)和平均肿瘤大小(b)(溶媒,n＝7；rIL25,n＝9)，和Ki67+EpCAM+肿瘤细胞的频率(c)(溶媒,n＝7；rIL25,n＝8)。d，Apc1322T/+小鼠肿瘤中ILC1的门控策略。e，溶媒和rIL-25治疗的Apc1322T/+小鼠(溶媒,n＝7；rIL25,n＝8)的肠系膜淋巴结(MLN)中ILC2的频率。f，溶媒和rIL-25治疗的Apc1322T/+小鼠(溶媒,n＝7；rIL25,n＝8)的肿瘤中簇细胞的频率。g-i，溶媒和rIL-25治疗的Apc1322T/+小鼠(溶媒,n＝7；rIL25,n＝8)中巨噬细胞和常规树突状细胞(cDC)(g)、浆细胞样树突状细胞(pDC)(h)、以及肥大细胞和嗜碱粒细胞(i)的门控策略和频率。j，溶媒和rIL-25治疗的Apc1322T/+小鼠(溶媒,n＝7；rIL25,n＝8)中肿瘤γδT细胞的频率。k，溶媒和rIL-25治疗的Apc1322T/+小鼠(溶媒,n＝7；rIL25,n＝8)中肿瘤Th1、Th2和Tregs的门控策略和频率。数据从77至83日龄的雌性小鼠收集；每个点指示单个小鼠。数据汇集自两个或更多个独立实验且误差条显示平均值±SEM。通过未配对双尾t检验来确定统计显著性。
图8：IL-25的缺失保护免于肠肿瘤。a，Il25+/+和Il25tom/tomApc1322T/+雄性种畜(breeder)的生存率。b，Il25+/+和Il25tom/tomApc1322T/+小鼠(Il25+/+,n＝10；Il25tom/tom,n＝13)的肠系膜淋巴结(MLN)中ILC2的频率。c-h，Il25+/+和Il25tom/tomApc1322T/+小鼠中肿瘤巨噬细胞(c)和常规树突状细胞(cDC)(d)(Il25+/+,n＝8；Il25tom/tom,n＝9)，浆细胞样树突状细胞(pDC)(e)，以及肥大细胞和嗜碱粒细胞(f)(Il25+/+,n＝15；Il25tom/tom,n＝10)，γδT细胞(g)和Tregs(h)(Il25+/+,n＝20；Il25tom/tom,n＝11)的频率。b-h，数据从77至83日龄的雌性小鼠收集；每个点指示单个小鼠。数据汇集自两个或更多个独立实验且误差条显示平均值±SEM。通过双侧对数秩检验(a)和未配对双尾t检验(b-h)来确定统计显著性。
图9：ILC2的消除保护免于肠肿瘤。a，显示对照ILC2充足型(Rora+/+Il7rCre/+)和ILC2缺陷型(Roraf/fIl7rCre/+)Apc1322T/+小鼠中的ILC2的代表性FACS图。b，ILC2缺陷型和对照Apc1322T/+雄性种畜的生存率。c-g，ILC2缺陷型和对照Apc1322T/+小鼠(Cre对照,n＝6；ILC2缺陷型,n＝12)中肿瘤γδT细胞(c)、巨噬细胞(d)、常规树突状细胞(cDC)(e)、浆细胞样树突状细胞(pDC)(f)、肥大细胞和嗜碱粒细胞(g)的频率。h，ILC2缺陷型和对照Apc1322T/+小鼠(Cre对照,n＝6；ILC2缺陷型,n＝8)中肿瘤Tregs的频率。c-h，数据从77至83日龄的雌性小鼠收集；每个点指示单个小鼠。数据汇集自两个或更多个独立实验且误差条显示平均值±SEM。通过双侧对数秩检验(b)和未配对双尾t检验(c-h)来确定统计显著性。
图10：IL-25在ILC2缺陷型小鼠中不诱导肿瘤。a，溶媒或rIL-25治疗的ILC2缺陷型(Roraf/fIl7rCre/+)Apc1322T/+小鼠(溶媒,n＝9；rIL25,n＝9)中的肠长度。b，显示溶媒和rIL-25治疗的ILC2缺陷型Apc1322T/+小鼠中缺乏ILC2的代表性FACS图。c-j，溶媒和rIL-25治疗的ILC2缺陷型Apc1322T/+小鼠(溶媒,n＝7；rIL25,n＝7)中肿瘤M-MDSC和G-MDSC(c)、巨噬细胞(d)、常规树突状细胞(cDC)(e)、浆细胞样树突状细胞(pDC)(f)、肥大细胞和嗜碱粒细胞(g)、Tregs(h)、γδT细胞(i)和簇细胞(j)的频率。数据从77至83日龄的雌性小鼠收集；每个点指示单个小鼠。数据汇集自两个或更多个独立实验且误差条显示平均值±SEM。通过未配对双尾t检验来确定统计显著性。
图11：MDSC上的受体表达。a，显示来自Apc1322T/+小鼠的G-MDSC上的IL13RA1受体染色的代表性FACS图。b，Apc1322T/+小鼠(n＝7)中的肿瘤和相邻固有层(Adj LP)M-MDSC上的MHC-II表达的频率。相对gMFI，相对于同种型对照的几何平均荧光强度。数据从77至83日龄的雌性小鼠收集；每个点指示单个小鼠。数据汇集自两个或更多个独立实验。通过配对双尾t检验来确定统计显著性。
图12：人CRC样品中MDSC的表征。a，人CRC中M-MDSC和G-MDSC的门控策略。b，显示CD86、PD-L1、HVEM、CD155和CD112在来自人CRC的M-MDSC和G-MDSC上的表达的代表性FACS图。c，显示PD-1、CTLA-4和LAG-3在来自人CRC的CD8 T细胞上的表达的代表性FACS图。d、e，人CDC中的CD8 T细胞上CTLA-4、PD-1、LAG-3(d)和Tbet(e)表达的定量。相对gMFI，相对于同种型对照的几何平均荧光强度。d、e，每对点代表单个人CRC患者；n＝9。通过配对双尾t检验来确定统计显著性。
图13：抗IL25R治疗后肿瘤中免疫细胞的表征。a，抗IL25R或对照IgG1治疗的Apc1322T/+小鼠(对照IgG1,n＝7；抗IL-25R,n＝7)的肠系膜淋巴结(MLN)中ILC2的频率。b，显示野生型未携带肿瘤的Apc+/+小鼠和抗IL25R或溶媒治疗的Apc1322T/+小鼠中总肺MDSC的门控的代表性FACS图。c-i，抗IL25R或对照IgG1治疗的Apc1322T/+小鼠中肿瘤Th1 T细胞(对照IgG1,n＝7；抗IL-25R,n＝7)(c)、巨噬细胞(对照IgG1,n＝7；抗IL-25R,n＝6)(d)、常规树突状细胞(cDC)(对照IgG1,n＝7；抗IL-25R,n＝6)(e)、浆细胞样树突状细胞(pDC)(对照IgG1,n＝7；抗IL-25R,n＝6)(f)、肥大细胞和嗜碱粒细胞(对照IgG1,n＝7；抗IL-25R,n＝6)(g)、γδT细胞(对照IgG1,n＝7；抗IL-25R,n＝7)(h)和Tregs(对照IgG1,n＝7；抗IL-25R,n＝6)(i)的频率。数据从用抗IL25R或对照IgG1治疗的年龄匹配的雌性小鼠收集，并汇集自两个或更多个独立实验；误差条显示平均值±SEM。每个点指示单个小鼠。通过未配对双尾t检验来确定统计显著性。
图14：跨不同CMS亚型的IL25表达的TCGA数据。a，从在线公众可得TCGA数据库分析的，按共识分子亚型(CMS)1、CMS2、CMS3和CMS4分开的CRC肿瘤中的IL25表达。
图15：阻断IL-25-ILC2轴(axis)的治疗性干预促进抗肿瘤1型免疫并降低肿瘤负荷。a，在成年(7周龄)Apc1322T/+小鼠中开始的抗IL25R或溶媒治疗的示意图。b，抗IL25R或对照IgG1治疗的Apc1322T/+小鼠(对照IgG1,n＝7；抗IL-25R,n＝7)中的肿瘤数量和平均肿瘤大小。c、d，抗IL25R或对照IgG1治疗的Apc1322T/+小鼠(对照IgG1,n＝7；抗IL-25R,n＝7)中肿瘤ILC2的频率(c)及其中的IL-4和IL-13表达(d)。e，抗IL25R或对照IgG1治疗的Apc1322T/+小鼠(对照IgG1,n＝7；抗IL-25R,n＝7)中的肿瘤M-MDSC中的Arg1表达。f-h，抗IL25R或对照IgG1治疗的Apc1322T/+小鼠(对照IgG1,n＝7；抗IL-25R,n＝7)中的肿瘤αβCD8 T细胞(f)、γδT细胞(g)和Th1(h)的频率及其中的IFNγ表达。i，抗IL25R或对照IgG1治疗的Apc1322T/+小鼠(对照IgG1,n＝7；抗IL-25R,n＝7)中簇细胞的频率。数据从用抗IL25R或对照IgG1治疗(治疗在7周龄的成年小鼠中开始)的11周龄雌性小鼠收集，并汇集自两个或更多个独立实验；误差条显示平均值±SEM。每个点指示单个小鼠。通过未配对双尾t检验来确定统计显著性。
图16：用抗IL-25抗体中和IL-25抑制IL-25-ILC2-M-MDSC轴并减少肿瘤负荷。a，抗IL-25或对照抗体治疗的Apc1322T/+小鼠(对照,n＝21；抗IL-25,n＝21)中的肿瘤数量和平均肿瘤大小。b、c，抗IL-25或对照抗体治疗的Apc1322T/+小鼠(对照,n＝13；抗IL-25,n＝13)中肿瘤ILC2(b)和G-MDSC(c)的频率。d，抗IL-25或对照抗体治疗的Apc1322T/+小鼠(对照,n＝13；抗IL-25,n＝13)中的肿瘤M-MDSC的频率(左)和其中的Arg1表达(右)。e，抗IL-25或对照抗体治疗的Apc1322T/+小鼠(对照,n＝13；抗IL-25,n＝13)中的肿瘤αβCD4 T细胞和αβCD8 T细胞中的IFNγ表达。数据从自3周龄开始，用抗IL-25或对照抗体治疗8周的11周龄性别匹配的小鼠收集。数据汇集自两个或更多个独立实验；误差条显示平均值±SEM。每个点指示单个小鼠。通过未配对双尾t检验来确定统计显著性。
实施例
实施例1至4的概述
IL-25和ILC2有助于保护宿主免受肠道寄生蠕虫感染，并且与不适当的过敏反应相关。最近，据报道IL-33激活的ILC2增强了保护性组织特异性癌症免疫。在此，本发明人显示了IL-25激活的ILC2在肠中的完全相反的作用，在肠中它们产生容许癌症的微环境。较高的肿瘤IL25基因表达与降低的结肠直肠癌(CRC)患者生存率相关，并且表达IL-25R的ILC2在人CRC肿瘤中升高。在自发性肠肿瘤发生的小鼠模型中，外源性IL-25增加肿瘤，而IL-25信号传导的消除减少了肿瘤负荷并使预期寿命实际上加倍，同时减少了IL-25响应性肿瘤ILC2并将平衡移向细胞毒性CD8 T细胞浸润。遗传上缺乏ILC2的小鼠也对肿瘤发展更具抗性，并且即使在用外源IL-25治疗时也显示出延长的生存。与IL-25缺陷型小鼠一样，ILC2缺陷型小鼠具有较少的肿瘤驻留的免疫抑制髓源性抑制细胞(MDSC)，并显示出改善的抗肿瘤固有免疫和适应性免疫。由此，固有的上皮源性细胞因子IL-25和IL-33以及ILC2在癌症中的作用不能被泛化，并且其可以采取取决于具体组织或器官内的局部微环境信号(cue)的促癌或抗癌表型。值得注意的是，IL-25信号传导阻断减少了ILC2、MDSC和肿瘤发生，这表明在CRC中免疫治疗研究可能是必要的。
实施例1：IL-25与人和小鼠结肠直肠癌相关
ILC2已知在屏障组织内充当哨兵，通过释放效应细胞因子快速响应急性免疫干扰。但是，在慢性的容许癌症的组织龛的情况下，对差异调节固有ILC2介导的免疫的组织特异性微环境信号知之甚少。
结肠直肠癌(CRC)是世界范围内癌症相关死亡的第二大常见原因，并且预期到2030年将进一步增加60％。分析大型公众可得的数据库上的CRC肿瘤基因表达，按IL25-高或IL25-低基因表达分开，鉴定了在IL25-高组中显著降低的总体患者生存率和无疾病患者生存率(图1a、b，图5a)。相反，肿瘤IL33基因表达(另一种潜在的ILC2激活细胞因子)与患者生存率差异无关(图1c)。此外，与正常结肠组织相比，人CRC肿瘤在总ILC群体内富集IL-25受体IL-17BR(IL-25R)阳性Lin-CD127+CRTh2+ILC2(图1d、e)，这类似于最近的报道。相比之下，通常与抗肿瘤活性相关的CD8 T细胞和Th1细胞(T-bet+CD4+T细胞)并不增加，或是减少(图1f、图5b)。
大约80％的人CRC在腺瘤性结肠息肉病(APC)肿瘤抑制基因中具有突变。因此，本发明人研究了Apc1322T/+自发性肠肿瘤发生模型中的IL-25表达，所述模型产生保留一个β连环蛋白结合降解重复的突变APC蛋白——这是密切反映人APC蛋白截短的情景。分析IL25-tomato报告子小鼠(IL25tom/+Apc1322T/+)将EpCAM+DCLK+簇细胞鉴定为小鼠肿瘤中IL25-tomato的主要来源(图1g、图6a)，尽管肿瘤和相邻正常肠之间的簇细胞频率和上皮IL25-tomato表达没有差异(图6b)。据报道，ILC2参与抗寄生虫免疫中与簇细胞的交互回路。肠ILC2表达KLRG1但不表达IL-33受体(ST2)，并且类似于人CRC，来自Apc1322T/+小鼠的肿瘤还携带提高频率的ILC2(图1h、图6c)，其表达更高水平的IL-25R(图1i、j)。相反，肠肿瘤ILC2不表达ST2，这使用两种不同的抗体克隆得到证实(图1i、图6d)。类似于人样品，来自Apc1322T/+小鼠的肿瘤携带比相邻正常上皮更少的CD8，以及有携带更少Th1细胞的趋势(图1k、图6e)。γδT细胞在肿瘤中也减少(图6f)。此外，肿瘤CD8 T细胞和γδT细胞显示出降低的颗粒酶、穿孔素和IFNγ的表达(图6g、h)，这表明抗肿瘤细胞毒性功能受损。相比之下，在Apc1322T/+小鼠中，与相邻正常肠相比，可以抑制抗肿瘤T细胞免疫和效应功能的单核细胞和粒细胞髓源性抑制细胞(M-MDSC和G-MDSC)在肿瘤中显著增加(图6i、j)。
总之，这些结果证明IL-25表达与人和小鼠肠癌二者，以及表达IL-25R的ILC2和免疫抑制性MDSC增加但抗肿瘤相关T细胞更少相关。
实施例2：IL-25促进肠肿瘤发生
为了研究IL-25在肠肿瘤发生中的作用，本发明人用重组IL-25(rIL-25)注射Apc1322T/+小鼠(图2a)并发现其引起肿瘤数量的显著增加(图2b，图7a、b)。这不是由于对肿瘤细胞增殖的直接影响导致的，因为在rIL-25和溶媒治疗的小鼠之间表达Ki67的EpCAM+肿瘤细胞百分比没有差异(图7c)。相反，肿瘤浸润ILC2有显著增加(图2c)，并且T-bet+ILC1(图2d、图7d)、Th1和CD8 T细胞(图2e)——所有已知的减少肠肿瘤的IFNγ的生产者——均减少。ILC2在引流肠系膜淋巴结(MLN)中也以较小程度增加(图7e)。在rIL-25治疗的小鼠中肿瘤簇细胞增加，这表明了正反馈(图7f)。在分析的其它免疫细胞类型(包括MDSC、巨噬细胞、cDC、pDC、肥大细胞、γδT细胞和Tregs)中没有变化(图2f，图7g-k)。值得注意的是，Gata3+CD4 Th2细胞没有改变，这指示IL-25优先作用于肿瘤微环境中的固有ILC2(图2g)。
本发明人接下来生成了IL-25缺陷型(Il25tom/tom)Apc1322T/+小鼠，并将它们的肿瘤发生与IL-25充足型Apc1322T/+小鼠进行了比较。Il25tom/tomApc1322T/+小鼠发展了明显更少和更小的肿瘤(图2h)，并且当与Apc1322T/+小鼠相比时显示出生存率的显著提高，其中雌性和雄性小鼠的中值生存率分别提高90％和81％(图2i，图8a)。这与肿瘤和MLN ILC2的显著减少(图2j，图8b)以及肿瘤ILC1的伴随提高(图2k)相关。
尽管本发明人没有观察到肿瘤Th1或CD8 T细胞频率的变化(图2l)，但肿瘤M-MDSC和G-MDSC在Il25tom/tomApc1322T/+小鼠中显著减少(图2m)。其它免疫细胞不变(图8c-h)。Th2细胞的频率也不受IL-25缺陷的影响(图2n)，再次表明IL-25优先调节肿瘤中的2型固有淋巴细胞而不是适应性淋巴细胞。总之，这些数据显示IL-25通过维持ILC2和抑制性MDSC来促进肠肿瘤发生。
实施例3：ILC2促进具有降低的抗肿瘤免疫的容许肿瘤的微环境为了确定ILC2是否可能是IL-25依赖性肠肿瘤发生的原因，本发明人生成了ILC2缺陷型(Roraf/fIl7rCre/+)Apc1322T/+小鼠(图9a)，并且与Cre对照Apc1322T/+小鼠(Rora+/+Il7rCre/+)(图3b，图9b)相比显示出肿瘤数量与大小的显著降低(图3a)以及预期寿命的显著提高。与这种改善的生存率一致，ILC2缺陷导致肿瘤浸润ILC1、Th1和CD8 T细胞增加(图3c、d)，并恢复了γδT细胞抗肿瘤效应功能，具有提高的颗粒酶、穿孔素和IFNγ表达(图3e、图9c)，而Th2细胞不变(图3f)。这种抗肿瘤环境可能通过肿瘤中免疫抑制性M-MDSC和G-MDSC(已经提出其抑制固有γδ和适应性T细胞的抗肿瘤功能)的减少(图3g)，而包括Tregs的其它免疫细胞类型没有变化(图9d-h)进一步增强。
为了证实外源性IL-25的促肿瘤效果是ILC2依赖性的，本发明人采用与上述相同的方案用rIL-25注射ILC2缺陷型Apc1322T/+小鼠。
极为重要的是，在用rIL-25治疗的ILC2缺陷型小鼠中肿瘤负荷或肿瘤大小没有提高(图3h，图10a)。rIL-25治疗在来自ILC2缺陷型Apc1322T/+小鼠的肿瘤中不诱导ILC2样细胞(图10b)或不影响肿瘤浸润ILC1的频率(图3i)。引人关注的是，本发明人仍观察到CD8 T细胞的降低和Th1细胞的类似趋势(图3j)，这表明外源性rIL-25可以独立于ILC2作用于CD8T细胞。但是，在这种情况下，单独减少CD8 T细胞不会导致在不存在ILC2的情况下的肿瘤发生提高，可能是由于ILC2缺陷型小鼠已经具有更高的CD8 T细胞浸润(图3d)这一事实。类似于ILC2充足型小鼠中的rIL-25治疗，除γδT细胞外，在其它免疫细胞类型(包括Th2细胞)方面没有差异(图3k，图10c-i)。本发明人再次观察到肿瘤中簇细胞频率的提高(图10j)，这在不存在ILC2的情况下不促进肿瘤。
ILC2通过其IL-13的表达来定义，并且若干研究已经显示IL-13以及最近的ILC2可以促进MDSC以抑制小鼠和人癌症二者中的抗肿瘤T细胞。IL-13，以及另一个ILC2细胞因子IL-4，通过STAT6进行信号传导，并且STAT6缺失减少了MDSC和肿瘤，同时恢复了Apcmin/+小鼠中的抗肿瘤CD8免疫。本发明人发现与正常肠中的较少M-MDSC相比，来自Apc1322T/+肠肿瘤的M-MDSC表达并上调受体IL-4RA和IL-13RA1亚基(图3l、m)，而G-MDSC表达IL-4RA但不表达IL-13RA1(图3n，图11a)，这指示MDSC能够响应由ILC2产生的IL-4和IL-13。肿瘤中表达MHC-II的M-MDSC的减少与较低分化和更具抑制性的表型一致(图11b)。MDSC在Apc1322T/+肠肿瘤中富集(图6j)，并在ILC2缺陷型肿瘤中减少(图3g)。总之，数据证明MDSC在IL-25:ILC2轴的下游起作用。
实施例4：人CRC中的治疗途径保守性
本文中呈现的结果证明，固有IL-25:ILC2轴至少部分通过促进MDSC和抑制抗肿瘤T细胞来支持肠肿瘤进展。为了研究这些机制在人中是否保守，本发明人分析了成对的未经选择的人CRC和正常结肠组织样品中的免疫细胞。Th1和CD8 T细胞浸润是跨越所有疾病阶段的人CRC患者生存率的最强积极预后因素之一。值得注意的是，相关性分析显示人CRC中肿瘤CD8 T细胞与ILC2之间(图4a)，以及Th1细胞与ILC2之间(图4b)的显著负相关，这表明具有较高ILC2频率的CRC可能具有受损的抗肿瘤T细胞应答。这与本文中呈现的小鼠数据一致，其中ILC2缺陷型小鼠在肿瘤中具有改善的CD8和Th1细胞浸润(图3d)以及降低的肿瘤负荷(图3a)。
此外，人CRC具有提高的CD11b+CD14-CD15+CD33int G-MDSC(图4c、图12a)，并且与相邻的正常肠相比，CD11b+CD14+CD15-CD33高HLA-DR低/-M-MDSC具有降低的HLA-DR(图4d)，类似于在Apc1322T/+小鼠中的。引人注目的是，肿瘤M-MDSC与CRC患者中的ILC2频率正相关(图4e)。这种关联表明，CRC中的人M-MDSC募集反应了在小鼠肠肿瘤中观察到的对M-MDSC维持的ILC2依赖性需求。值得注意的是，肿瘤浸润CD8 T细胞与人CRC中的M-MDSC负相关(图4f)，这与M-MDSC抑制CD8 T细胞的能力一致。
人CRC和Apc1322T/+小鼠肿瘤中类似的免疫细胞表现表明潜在的机制保守性。考虑到对治疗CRC患者的新药的需求以及最近使用抗PD-L1检查点抑制剂阿特珠单抗来治疗CRC患者(>98％具有非错配修复缺陷的CRC)的III期临床试验IMblaze370令人失望的结果——其未能达到主要终点，本发明人评估了是否可以治疗性靶向中断固有的IL-25:ILC2免疫轴。本发明人证实了几种检查点配体在CRC MDSC上的表达，所述配体包括M-MDSC上的CD86(CTLA-4的配体)、PD-L1(PD-1的配体)、HVEM(BTLA的配体)、CD155和CD112(TIGIT的配体)，以及G-MDSC上的PD-L1和CD112(图12b)。CRC中的CD8 T细胞显示耗尽的表型，其中检查点受体PD-1、CTLA-4和LAG-3的表达增加且T-bet降低(图12c-e)，这与不佳的CD8 T细胞效应功能相关。这表明CRC中的CD8 T细胞具有响应检查点疗法的潜力。但是，检查点抑制剂在癌症治疗中的有限效力与MDSC有关，而本文中呈现的数据提出了阻断IL-25:ILC2响应也将改善“难以治疗”的免疫抑制性MDSC的可能性。
本发明人用中和抗IL25R抗体(克隆D9.2)或对照治疗了年轻成年Apc1322T/+小鼠(图4g)。引人注目的是，抗IL25R治疗的小鼠发展了显著更少和更小的肿瘤(图4h)，具有更少的肿瘤和MLN ILC2(图4i，图13a)，肿瘤M-MDSC和G-MDSC减少(图4j)，并将平衡移向抗肿瘤浸润ILC1(图4k)和CD8 T细胞(图4l)。簇细胞——肠IL-25的主要来源——在抗IL25R治疗的小鼠中也减少(图4m)，这与减少的肿瘤ILC2和中断的ILC2-簇细胞回路一致。携带肿瘤的小鼠和人癌症患者具有MDSC的全身性增加，并且在Apc1322T/+小鼠中的抗IL25R治疗还将远端肺MDSC恢复到与野生型未携带肿瘤的小鼠相等的水平(图4n，图13b)，这表明了全身性改善并反映了降低的肠肿瘤负荷。此外，阻断IL-25信号传导不改变适应性Th2细胞频率(图4o)或在肿瘤中分析的其它细胞(图13c-i)。由此，治疗性抗IL-25R治疗将肠免疫应答从抑制性固有免疫肿瘤微环境移向主动抗肿瘤免疫。
当本发明人用中和抗IL25抗体(RH2.5_R71V——具有表达在小鼠IgG1框架内的可变结构域以使得能够在小鼠中进行体内研究)治疗Apc1322T/+小鼠时，获得类似结果。与同种型对照相比，抗IL-25显著降低了Apc诱导的肠肿瘤发生模型中的肠肿瘤数量和大小(图16a)。抗IL-25mAb还显著降低了ILC2的频率(图16b)，并且这与已知抑制抗癌应答的髓源性抑制细胞(MDSC)的明显减少相关(图16c和d)。实际上，通过抑制IL-25，存在产生IFN-γ的抗癌T细胞的伴随增加(图16e)，这与肿瘤的减少相关。由此，治疗性抗IL-25治疗将肠道免疫应答从抑制性固有免疫肿瘤微环境移向主动抗肿瘤免疫。
讨论——实施例1至4
我们的结果证明了IL-25和ILC2在维持慢性的容许癌症的微环境中的关键作用，所述微环境阻止了肠癌中抗肿瘤免疫的升高。值得注意的是，这种免疫抑制性龛不太可能依赖于适应性Th2细胞，其在肠肿瘤中响应IL-25缺陷、rIL-25治疗或ILC2缺陷而在数值上不改变，但依赖于ILC2。最近的研究报道，组织特异性IL-33可以激活ILC2以便在原位胰腺癌的小鼠模型中诱导抗肿瘤免疫，但不在胰腺癌的皮下移植物中诱导抗肿瘤免疫(Moral,J.A.等人,ILC2s amplify PD-1blockade by activating tissue-specific cancerimmunity.Nature 579,130-135,doi:10.1038/s41586-020-2015-4(2020))。引人注目的是，本文中呈现的数据现在证明，IL-25响应性肠ILC2的组织特化具有完全相反的功能，而导致它们在肠中维持致瘤龛。由此，上皮源性细胞因子IL-25和IL-33以及ILC2在肿瘤发生中的作用可能是位置依赖性和器官特异性的，并且不容易泛化。尽管已经表明一小部分簇细胞可以充当肿瘤干细胞，但ILC2缺陷降低了肿瘤负荷而不降低簇细胞频率，这强调了ILC2在该过程中的关键作用。值得注意的是，血清IL-25在晚期CRC中升高，并且CRC在很大程度上对当前的免疫疗法具有抗性。本文中呈现的结果将IL-25-ILC2-MDSC轴鉴定为新的免疫治疗靶标，并指示等效机制可在人CRC中运行。由于抗IL25R单克隆抗体(克隆D9.2)和抗IL25单克隆抗体(RH2.5_R71V)也抑制人IL-25R信号传导，因此这为未来治疗CRC的人免疫治疗研究提供了可能性。此外，由于抗IL25R和抗IL25使平衡远离MDSC并移向抗肿瘤CD8T细胞浸润，因此可以通过与目前无效的检查点抑制剂的组合疗法来增强该有益效果。
方法——实施例1至4
小鼠
本研究中的所有野生型和Apc1322T/+小鼠(Pollard,P.等人,The Apc 1322T mousedevelops severe polyposis associated with submaximal nuclear beta-cateninexpression.Gastroenterology 136,2204-2213.e2201-473 2213,doi:10.1053/j.gastro.2009.02.058(2009))均在C57BL/6背景下并内部繁殖。小鼠在维持在特定的无病原体条件下的英国医学研究理事会ARES动物设施中。种畜喂食育种饲粮(ENVIGO,2919)，而所有实验动物喂食标准饲粮(SDS,801722)。除非另行说明，本研究中使用的所有小鼠为雌性，并在11至12周龄之间安乐死。对于生存率研究，当显示苍白足、立毛、驼背和体重减轻的临床体征时，将小鼠剔除，并记录年龄。没有使用统计检验来预先确定样本量。进行的所有动物实验均经英国内政部的批准。
生成Il25-tomato基因靶向小鼠
通过重组工程生成IL25-敲除-tomato报告子小鼠(Liu,P.,Jenkins,N.A.和Copeland,N.G.Ahighly efficient recombineering-based method for generatingconditional knockout mutations.Genome Res 13,476-484,doi:10.1101/gr.749203(2003)；Warming,S.,Costantino,N.,Court,D.L.,Jenkins,N.A.和Copeland,N.G.Simpleand highly efficient BAC recombineering using galK selection.Nucleic AcidsRes 33,e36,doi:10.1093/nar/gni035(2005))。
新霉素阴性和Cre重组酶阴性小鼠回交到C57BL/6背景下至少六次。通过使用用于靶向产物(380bp)的PCR引物(正向，GACAGAATTGCAGATGCTATTACTACGACC；SEQ ID NO:75)和(反向，ACCTCCTCGCCCTTGCTCACCAT；SEQ ID NO:76)以及用于野生型产物(200bp)的PCR引物(正向，GGCTAGGCTTCCAGGCTTCCAG；SEQ ID NO:77)和(反向，GGGGTTCTTGCTCTTTGCTGGG；SEQID NO:78)进行基因分型。
重组IL-25治疗和IL-17BR阻断
用PBS中的0.04mg/kg的重组小鼠IL-25(Janssen)对小鼠进行腹膜内注射，每周三次，持续八周，从三周龄断奶开始。对于IL-25R(IL-17BR)阻断，用12.5mg/kg的抗IL25R(克隆D9.2)284或对照mIgG1(LifeArc)对小鼠进行腹膜内注射，每周两次，持续七周，从三周龄开始。在最后一次注射后，将小鼠安乐死并收集样品。
动物程序
将如上所述的性别、背景和年龄匹配的小鼠安乐死并收获组织。将小肠用冷PBS+10mM HEPES(Gibco)冲洗，纵向打开，并在methacarn(60％甲醇，30％氯仿和10％冰醋酸)中固定24小时，并随后用PBS洗涤。计数肿瘤数量，并在光学显微镜下用尺子测量肿瘤大小。对于肿瘤评分，只要可能，小鼠基因型和/或治疗条件对检查者不可见，除了在年龄匹配的时间点仅存在一种基因型的偶尔不可避免的情况下。收集脾脏并立即称重。
人样品
所有肿瘤样品均是在Cambridge University Hospitals NHS Trust进行的手术切除的原发性CRC，并在同一天处理用于分析。所有患者都给出了参与本研究的书面同意书。本研究得到Wales Research Ethics Committee 7(15/WA/0131)的批准。没有使用统计检验来预先确定样本量。
细胞分离
为了获得小鼠肿瘤和相邻正常肠的单细胞悬浮液，分别收集肿瘤和相邻正常肠的2cm碎片，接着在含有10mM HEPES 309(Gibco)和2％胎牛血清(FCS)的RPMI-1640中机械解离。将样品用62.5μg/ml Liberase TL(Roche)和0.125KU/mLDNase I(Sigma)在37℃下在振荡的同时消化30分钟。
随后，使细胞穿过50μm过滤器，并用PBS+2％ FCS洗涤至少两次，然后进行抗体染色用于流式细胞术。在分别分析相邻正常上皮部分和固有层的实验中，移除肿瘤并将剩余的肠切成2cm的碎片，并与在RPMI+2％FCS+10mM HEPES中的1mM二硫苏糖醇(Melford)和5mMEDTA一起在37℃下振荡温育2×20分钟，以收集上皮部分。
随后，样品在RPMI+2％FCS+10mM HEPES中用62.5μg/ml Liberase TL(Roche)和0.125KU/mLDNase I(Sigma)在37℃下摇振消化45分钟，以收集固有层细胞。在消化后，使细胞穿过70μm细胞过滤器，并用PBS+2％FCS洗涤，然后进行抗体染色。肠系膜淋巴结在RPMI中机械解离，经50μm细胞过滤器过滤，并用PBS+2％FCS洗涤，然后进行抗体染色。将新鲜的手术切除的人CRC和相邻正常组织收集在无菌PBS中，并在样品处理之前在冰上运输。将样品机械解离成小块，并在RPMI中用100μg/mL的Liberase TM(Roche)和0.2KU/mL的DNase I(Sigma)消化，并在37℃下温育30分钟。随后，使细胞经70μm细胞过滤器过滤，并用PBS+2％FCS洗涤，然后进行抗体染色用于流式细胞术。
流式细胞术
对于表面染色，PBS+2％ FCS中的小鼠和人样品分别用抗CD16/32抗体(Fc block,克隆2.4G2)和Human TruStain FcX(Biolegend,422302)333封闭单细胞悬浮液，并在冰上在黑暗中与荧光染料缀合或生物素化的抗体一起温育30分钟。如果需要的话，随后将样品与荧光染料缀合的链亲和素一起在冰上再温育30分钟。
对于小鼠样品的细胞内和细胞核染色，将细胞在2％多聚甲醛(ThermoFisher)中在室温下在黑暗中固定45分钟，洗涤并随后在室温下在1×透化缓冲液(eBioscience，00-8333-56)中用荧光染料缀合的抗体染色45分钟。对于用于簇细胞鉴定的细胞内DCLK1染色，将固定的细胞与抗DCLK1一抗(兔多克隆,ab31704)一起在室温下温育45分钟，洗涤，并随后与驴抗兔AF647缀合的二抗(ab150075)一起在1×透化缓冲液中再温育45分钟。对于人样品的细胞内和细胞核染色，根据制造商的方案使用真核转录因子缓冲液套装(Biolegend,424401)固定细胞，并在室温下以及在黑暗中用荧光染料缀合的抗体染色细胞内和细胞核标志物30分钟。
为了分析CD8和γδT细胞的IFNγ、穿孔素和颗粒酶表达，将肿瘤和相邻正常上皮加工成单细胞悬浮液，并如上述用荧光染料缀合的抗体染色。随后，使用iCyt Synergy细胞分选仪(Sony Biotechnology)分选CD8和γδT细胞，并用涂覆抗CD3e(Biolegend,100360)的平板和10ng/mL rm-IL-2(Biolegend,575406)培养16小时。在抗体染色前，在培养的最后4小时添加蛋白转运抑制剂混合物(eBioscience,00-4980-93)。用抗CD16/32封闭细胞，并在PBS+2％FCS中在冰上以及在黑暗中染色表面标志物30分钟。随后，根据制造商的方案使用Foxp3转录因子染色缓冲液套装(eBioscience,00-5523-00)固定细胞，并在室温下以及在黑暗中用荧光染料缀合的抗体染色细胞内标志物30分钟。
细胞内染色后，将样品用指定的1×透化缓冲液和PBS+2％FCS连续洗涤，并重新悬浮在PBS+2％FCS中用于通过BD LSRFortessa流式细胞仪和FlowJo v10.2进行分析。
抗体
对于小鼠试验，用于表面染色的抗体包括NK1.1(PK136,BUV395)、CD45(30-F11,BV510)、IL7Rα(SB/199,生物素)、链亲和素BV605、CD8(53-6.7,BV785)、CD11b(M1/70,FITC)、KLRG1(2F1,PerCP-eFluor 710)、CD3(145-2C11,PE-Cy7)、CD11c(N418,PE-Cy7)、CD19(eBio1D3,PE-Cy7)、Gr1(RB6-8C5,PE-Cy7)、FcεRI(MAR-1,PE-Cy7)、TER119(TER-119,PE-Cy7)、CD4(GK1.5,AF700)、CD3(17A2,eF450)、CD11b(M1/70,eF450)、CD11c(N418,eF450)、CD19(eBio1D3,eF450)、F4/80(BM8,eF450)、Gr1(RB6-8C5,eF450)、FcεRI(MAR-1,eF450)、TCRβ(H57-597,eF450)、TER119(TER-119,eF450)、ST2(RMST2-2,AF488)、链亲和素PE、CD11b(M1/70,BUV395)、EpCAM(G8.8,BV421)、Ly6C(HK1.4,BV711)、Ly6G(1A8-Ly6g,PerCP-eFluor 710)、MHC-II(M5/114.15.2,PE)、TCRγδ(GL3,BV605)、FcεRI(MAR-1,FITC)、CD11c(N418,383PerCP-Cy5.5)、CD317(eBio927,APC)、MHC-II(M5/114.15.2,BV510)、CD19(6D5,BV605)、CD45(30-F11,BV785)、Gr1(RB6-8C5,PerCP-Cy5.5)、Siglec-F(E50-2440,PE)、CD11c(N418,AF700)、CD3(17A2,BV510)、CD8(53-6.7,PE-Cy7)、CD45(30-F11,AF700)、CD4(GK1.5,PerCP-Cy5.5)、TCRγδ(GL3,APC)、IL17BR(D9.2,AF647)、IL13RA1(13MOKA,PE)、IL4RA(mIL4R-M1,PE)、ST2(DJ8,FITC)、Fixable Viability Dye eFluor 780(eBioscience)和适当的同种型对照。谱系包括CD3、CD4、CD8、CD11b、CD11c、CD19、Gr1、FceRI、NK1.1和TER119，并且在一些情况下如所示那样在单独的通道中分析单个谱系标志物。
用于细胞内和细胞核染色的抗体包括GATA3(L50-823,BV711)、FOXP3(FJK-16s,PE-Cy7)、Tbet(eBio4B10,eF660)、Ki67(SolA15,PE-Cy7)、IFNγ(XMG1.2,BV785)、颗粒酶(NGZB,PE)、穿孔素(S16009B,APC)和适当的同种型对照。
对于人样品，用于表面染色的抗体包括IL17BR(D9.2,生物素)、链亲和素BV421、CD56(HCD56,BV650)、CD4(OKT4,BV785)、CD45(HI30,AF488)、CRTH2(BM16,PE)、CD127(A019D5,PE-Cy7)、CD3(OKT3,APC)、FcεRI(AER-37(CRA-1),APC)、CD11b(ICRF44,APC)、CD11c(Bu15,APC)、CD14(HCD14,APC)、CD19(HIB19,APC)、CD8(RPA-T8,APC)、CD123(6H6,APC)、CD14(HCD14,Pacific Blue)、CD86(IT2.2,BV711)、CD15(W6D3,PerCP-Cy5.5)、CD33(WM53,PE)、HLA-DR(L243,PE-Cy7)、CD56(HCD56,APC)、CD45(HI30,AF700)、PD-L1(29E.2A3,BV650)、CD33(WM53,BV785)、CD155(SKII.4,FITC)、CD112(TX31,PE)、HVEM(122,PE-Cy7)、CD8(RPA-T8,BV510)、CD3(OKT3,Super Bright 645)、PD1(EH12.2H7,PerCP-Cy5.5)、LAG3(11C3C65,PE-Cy7)、CD11b(ICRF44,FITC)、Fixable Viability Dye eFluor 780(eBioscience)和适当的同种型对照。谱系包括CD3、CD4、CD8、CD14、CD19、CD11b、CD11c、FcεRI和CD123。用于细胞内和细胞核染色的抗体包括FOXP3(206D,FITC)、Tbet(eBio4B10,eF660)、CTLA4(L3D10,PE)和适当的同种型对照。
人生存率分析
使用在线开放访问的cBioPortal资源(https://www.cbioportal.org/)5,6分析公众可得的TCGA Firehose Legacy结肠腺癌数据集。该分析中包括具有Agilent微阵列mRNA数据的所有患者样品(222)，并且相对于所有样品计算mRNA表达z评分。使用查询“IL25:EXP>0”，基于高于(高IL25)或低于(低IL25)平均IL25表达的肿瘤IL25表达将CRC患者分为两组。比较两组的可用生存率数据，包括总体生存率和无疾病生存率。对肿瘤IL33表达重复相同的方法，并比较高IL33和低IL33组之间的生存率。使用在线开放访问的R2:Genomics Analysis and Visualization Platform(http://r2.amc.nl)分析Marisa,L.等人(Gene Expression Classification of Colon Cancer into Molecular 454Subtypes:Characterization,Validation,and Prognostic Value.PLOS Medicine 10,455e1001453,doi:10.1371/journal.pmed.1001453(2013))的无复发生存率和肿瘤IL25表达数据。所有患者样品(566)包括在分析中，并基于高于(高IL25)和低于(低IL25)所有样品的平均肿瘤IL25表达的肿瘤IL25表达，将其分成两组，并比较无复发存活率。
统计分析
对于TCGA Firehose Legacy(Cerami,E.等人,The cBio Cancer GenomicsPortal:An Open Platform for Exploring Multidimensional Cancer GenomicsData.Cancer Discovery 2,401-404,doi:10.1158/2159-8290.Cd-12-0095(2012)；Gao,J等人,Integrative analysis of complex cancer genomics and clinical profilesusing the cBioPortal.Sci Signal 6,pl1,doi:10.1126/scisignal.2004088(2013))和Marisa等人,2013CRC数据集的分析，分别通过cBioPortal和R2平台上的内置系统自动计算人生存率分析的统计显著性。本研究中的所有其它统计分析使用GraphPad Prism 8软件进行。
实施例5——跨越不同CMS亚型的IL25表达的TCGA数据
将公众可得的CRC患者的TCGA数据分为四种CMS亚型，并分析IL25表达(图14)。y轴显示IL25表达。
<110> United Kingdom Research and Innovation
<120> 用于治疗肠癌的组合物和方法
<130> LARC-023/001WO
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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1 5 10 15
Gly
<210> 4
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2c3 VH CDR 3
<400> 4
Glu Gly Tyr Asp Gly Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 5
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2c3 VL CDR 1
<400> 5
Ser Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln
1 5 10 15
<210> 6
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2c3 VL CDR 1
<400> 6
Ser Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 7
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2c3 VL CDR 2
<400> 7
Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser
1 5
<210> 8
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2c3 VL CDR 3
<400> 8
Gln Gln Tyr Ser Lys Leu Pro Tyr Thr
1 5
<210> 9
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2c3 VL CDR 3
<400> 9
Gln Gln Tyr Ser Lys Leu Pro Tyr Thr Phe
1 5 10
<210> 10
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2C3 VH
<400> 10
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Asp Gly Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser
115 120
<210> 11
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2C3 VL
<400> 11
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Asp Gly Thr Val Glu Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Lys Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 12
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2c3 VH CDR 1
<400> 12
Gly Tyr Thr Met Asn
1 5
<210> 13
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2c3 VH CDR 1
<400> 13
Ala Tyr Thr Met Asn
1 5
<210> 14
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2c3 VH CDR 1
<400> 14
Ser Tyr Thr Met Asn
1 5
<210> 15
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2c3 VH CDR 1
<400> 15
Val Tyr Thr Met Asn
1 5
<210> 16
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2c3 VH CDR 1
<400> 16
Asn Tyr Thr Met Asn
1 5
<210> 17
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2c3 VH CDR 1
<400> 17
Lys Tyr Thr Met Asn
1 5
<210> 18
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2c3 VH CDR 1
<400> 18
Tyr Tyr Thr Met Asn
1 5
<210> 19
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2c3 VH CDR 1
<400> 19
Met Tyr Thr Met Asn
1 5
<210> 20
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2c3 VH CDR 3
<400> 20
Glu Asp Tyr Asp Gly Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 21
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2c3 VH CDR 3
<400> 21
Glu Asn Tyr Asp Gly Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 22
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2C3 VH
<400> 22
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Met Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Asp Gly Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 23
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2C3 VH前导序列.
<400> 23
Met Val Leu Ser Leu Leu Tyr Leu Leu Thr Ala Leu Pro Gly Ile Leu
1 5 10 15
Ser
<210> 24
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2C3 VH共识序列
<220>
<221> SITE
<222> (30)..(30)
<223> Xaa是Ser或Thr
<220>
<221> SITE
<222> (31)..(31)
<223> Xaa是Gly、Asp、Ala、Ser、Val、Asn、Lys、Tyr或Met
<220>
<221> SITE
<222> (48)..(48)
<223> Xaa是Met或Ile
<220>
<221> SITE
<222> (72)..(72)
<223> Xaa是Val或Arg
<220>
<221> SITE
<222> (100)..(100)
<223> Xaa是Asn、Asn或Gly
<400> 24
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Xaa Xaa Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Xaa
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Xaa Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Xaa Tyr Asp Gly Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 25
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2C3 VH
<400> 25
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asp Tyr Asp Gly Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 26
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2C3 VH
<400> 26
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Asn Ser Leu Arg Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Glu Asp Tyr Asp Gly Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Val Ser Ser
115 120
<210> 27
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2C3 VH
<400> 27
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asp Tyr Asp Gly Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 28
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2C3 VH
<400> 28
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asp Tyr Asp Gly Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 29
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2C3 VH
<400> 29
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asp Tyr Asp Gly Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 30
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2C3 VH
<400> 30
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asp Tyr Asp Gly Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 31
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2C3 VH
<400> 31
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asp Tyr Asp Gly Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 32
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2C3 VH
<400> 32
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asp Tyr Asp Gly Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 33
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2C3 VH
<400> 33
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asp Tyr Asp Gly Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 34
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2C3 VH
<400> 34
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asp Tyr Asp Gly Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 35
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2C3 VH
<400> 35
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asp Tyr Asp Gly Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 36
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2C3 VH
<400> 36
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asp Tyr Asp Gly Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 37
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2C3 VH
<400> 37
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asp Tyr Asp Gly Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 38
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2C3 VH, 包括前导序列
<400> 38
Glu Val Arg Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Gln Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Ile Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Thr Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Tyr Asp Gly Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Ile Val Ser Ser
115 120
<210> 39
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2C3 VH前导序列
<400> 39
Met Gly Ser Thr Ala Ile Leu Gly Leu Leu Leu Ala Val Leu Gln Gly
1 5 10 15
Val Cys Ala
<210> 40
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2C3 VL, 包括前导序列
<400> 40
Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1 5 10 15
Asp Thr Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Gly
35 40 45
Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser
100 105 110
Lys Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
115 120 125
<210> 41
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2C3 VL
<400> 41
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Lys Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 42
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化2C3 VL前导序列
<400> 42
Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro
1 5 10 15
Asp Thr Arg Cys
20
<210> 43
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人VL前导序列
<400> 43
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Pro Asp Thr Arg Cys
20
<210> 44
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> M6 VL CDR 3
<400> 44
Gln Gln Tyr Leu Ala Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 45
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> M6 VH
<400> 45
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asp Tyr Asp Gly Tyr Leu Tyr Phe Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 46
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> M6 VL
<400> 46
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Ala Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 47
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> M6轻链
<400> 47
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Ala Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 48
<211> 146
<212> PRT
<213> 智人
<400> 48
Met Tyr Ser His Trp Pro Ser Cys Cys Pro Ser Lys Gly Gln Asp Thr
1 5 10 15
Ser Glu Glu Leu Leu Arg Trp Ser Thr Val Pro Val Pro Pro Leu Glu
20 25 30
Pro Ala Arg Pro Asn Arg His Pro Glu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asp
35 40 45
Gly Pro Leu Asn Ser Arg Ala Ile Ser Pro Trp Arg Tyr Glu Leu Asp
50 55 60
Arg Asp Leu Asn Arg Leu Pro Gln Asp Leu Tyr His Ala Arg Cys Leu
65 70 75 80
Cys Pro His Cys Val Ser Leu Gln Thr Gly Ser His Met Asp Pro Arg
85 90 95
Gly Asn Ser Glu Leu Leu Tyr His Asn Gln Thr Val Phe Tyr Arg Arg
100 105 110
Pro Cys His Gly Glu Lys Gly Thr His Lys Gly Tyr Cys Leu Glu Arg
115 120 125
Arg Leu Tyr Arg Val Ser Leu Ala Cys Val Cys Val Arg Pro Arg Val
130 135 140
Met Gly
145
<210> 49
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> D9.2 VH CDR 1
<400> 49
Ser Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 50
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> D9.2 VH CDR 2
<400> 50
Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Ile Gln Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 51
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> D9.2 VH CDR 3
<400> 51
Ser Gly Gly Phe Asp Trp Phe Ala Tyr
1 5
<210> 52
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> D9.2 VL CDR 1
<400> 52
Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asn Ser Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 53
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> D9.2 VL CDR 2
<400> 53
Asp Val Thr Asn Leu Ala Asp
1 5
<210> 54
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> D9.2 VL CDR 3
<400> 54
Gln His Phe Trp Arg Pro Pro Tyr Thr
1 5
<210> 55
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> D9.2 VH
<400> 55
Phe Phe Leu Ala Thr Pro Thr Cys Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln
1 5 10 15
Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser
20 25 30
Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr Trp Met Asn Trp Val
35 40 45
Lys Gln Gly Gly Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Asp
50 55 60
Pro Tyr Asp Ser Glu Ile Gln Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala
65 70 75 80
Ile Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Ala Ala Tyr Met Gln Leu Ile
85 90 95
Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly
100 105 110
Gly Phe Asp Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
115 120 125
Ser
<210> 56
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> D9.2 VL
<400> 56
Met Ser Val Leu Thr Gln Val Leu Ala Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr
1 5 10 15
Asp Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser
20 25 30
Val Ser Val Gly Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn
35 40 45
Ile Asn Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Lys Gly Lys Ser Pro
50 55 60
Gln Leu Leu Val Tyr Asp Val Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn
85 90 95
Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp
100 105 110
Arg Pro Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Asn Leu Glu Ile Lys
115 120 125
<210> 57
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化D9.2 VH CDR 2
<220>
<221> SITE
<222> (12)..(12)
<223> Xaa是Asn或Ala
<220>
<221> SITE
<222> (16)..(16)
<223> Xaa是Lys或Gln
<220>
<221> SITE
<222> (17)..(17)
<223> Xaa是Asp或Gly
<400> 57
Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Ile Gln Tyr Xaa Gln Lys Phe Xaa
1 5 10 15
Xaa
<210> 58
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化D9.2 VH CDR2
<400> 58
Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Ile Gln Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 59
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化D9.2 VH CDR2
<400> 59
Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Ile Gln Tyr Asn Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Asp
<210> 60
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化D9.2 VH CDR2
<400> 60
Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Ile Gln Tyr Asn Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 61
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化D9.2 VH CDR2
<400> 61
Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Ile Gln Tyr Ala Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 62
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化D9.2 VH CDR2
<400> 62
Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Ile Gln Tyr Ala Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 63
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化D9.2 VH CDR2
<400> 63
Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Ile Gln Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Asp
<210> 64
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化D9.2 VH CDR2
<400> 64
Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Ile Gln Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 65
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化D9.2 VL CDR3
<400> 65
Gln His Phe Trp Gly Pro Pro Tyr Thr
1 5
<210> 66
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化D9.2 VH
<400> 66
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Ile Gln Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Ser Gly Gly Phe Asp Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 67
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化D9.2 VH B
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa是Gln或Glu
<220>
<221> SITE
<222> (24)..(24)
<223> Xaa是Ala或Thr
<220>
<221> SITE
<222> (61)..(61)
<223> Xaa是Ala或Asn
<220>
<221> SITE
<222> (65)..(65)
<223> Xaa是Gln或Lys
<220>
<221> SITE
<222> (66)..(66)
<223> Xaa是Gly或Asp
<220>
<221> SITE
<222> (70)..(70)
<223> Xaa是Met或Leu
<400> 67
Xaa Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Xaa Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Ile Gln Tyr Xaa Gln Lys Phe
50 55 60
Xaa Xaa Arg Val Thr Xaa Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Gly Phe Asp Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 68
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化D9.2 VH C (D9 HJ)
<400> 68
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Ile Gln Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Gly Phe Asp Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 69
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化D9.2 VH D (D9 HH)
<400> 69
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Ile Gln Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Gly Phe Asp Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 70
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化D9.2 VH E (D9 HI)
<400> 70
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Ile Gln Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Gly Phe Asp Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 71
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化D9.2 VL
<400> 71
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asn Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Leu
35 40 45
Tyr Asp Val Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Arg Pro Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 72
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化D9.2 VL (D9 KE)
<400> 72
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asn Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Leu
35 40 45
Tyr Asp Val Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Pro Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 73
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链稳定的IgG4恒定区
<400> 73
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 74
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化D9.2的重链
<400> 74
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Ile Gln Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Gly Phe Asp Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 75
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 75
gacagaattg cagatgctat tactacgacc 30
<210> 76
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 76
acctcctcgc ccttgctcac cat 23
<210> 77
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 77
ggctaggctt ccaggcttcc ag 22
<210> 78
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 78
ggggttcttg ctctttgctg gg 22
<210> 79
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> M6 VL CDR 3
<400> 79
Gln Gln Tyr Leu Ala Phe Pro Tyr Thr Phe
1 5 10
<210> 80
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> D9.2 VH Alt
<400> 80
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Gly Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Ile Gln Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Ile Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Ala Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ile Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Gly Phe Asp Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 81
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> D9.2 VH HB
<400> 81
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Ile Gln Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Ile Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Gly Phe Asp Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 82
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> D9.2 VH HC
<400> 82
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Ile Gln Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Ser Gly Gly Phe Asp Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 83
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> D9.2 VH HD
<400> 83
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Ile Gln Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Ser Gly Gly Phe Asp Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 84
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> D9.2 VH HE
<400> 84
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Ile Gln Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Ser Gly Gly Phe Asp Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 85
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> D9.2 VH HF
<400> 85
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Ile Gln Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Ile Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Ser Gly Gly Phe Asp Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 86
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> D9.2 VH HG
<400> 86
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Ile Gln Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Ser Gly Gly Phe Asp Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 87
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> D9.2 VK Alt
<400> 87
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asn Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Lys Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asp Val Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ser Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Arg Pro Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Asn Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 88
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> D9.2 VL KB
<400> 88
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asn Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asp Val Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Arg Pro Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 89
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> D9.2 VL KC
<400> 89
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asn Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asp Val Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Arg Pro Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 90
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> D9.2 VL KD
<400> 90
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asn Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Leu
35 40 45
Tyr Asp Val Thr Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Arg Pro Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 91
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> D9.2 VL KM
<400> 91
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Leu
35 40 45
Tyr Asp Ala Thr Asn Leu Gly Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Pro Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 92
<211> 502
<212> PRT
<213> 智人
<400> 92
Met Ser Leu Val Leu Leu Ser Leu Ala Ala Leu Cys Arg Ser Ala Val
1 5 10 15
Pro Arg Glu Pro Thr Val Gln Cys Gly Ser Glu Thr Gly Pro Ser Pro
20 25 30
Glu Trp Met Leu Gln His Asp Leu Ile Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu
35 40 45
Arg Val Glu Pro Val Thr Thr Ser Val Ala Thr Gly Asp Tyr Ser Ile
50 55 60
Leu Met Asn Val Ser Trp Val Leu Arg Ala Asp Ala Ser Ile Arg Leu
65 70 75 80
Leu Lys Ala Thr Lys Ile Cys Val Thr Gly Lys Ser Asn Phe Gln Ser
85 90 95
Tyr Ser Cys Val Arg Cys Asn Tyr Thr Glu Ala Phe Gln Thr Gln Thr
100 105 110
Arg Pro Ser Gly Gly Lys Trp Thr Phe Ser Tyr Ile Gly Phe Pro Val
115 120 125
Glu Leu Asn Thr Val Tyr Phe Ile Gly Ala His Asn Ile Pro Asn Ala
130 135 140
Asn Met Asn Glu Asp Gly Pro Ser Met Ser Val Asn Phe Thr Ser Pro
145 150 155 160
Gly Cys Leu Asp His Ile Met Lys Tyr Lys Lys Lys Cys Val Lys Ala
165 170 175
Gly Ser Leu Trp Asp Pro Asn Ile Thr Ala Cys Lys Lys Asn Glu Glu
180 185 190
Thr Val Glu Val Asn Phe Thr Thr Thr Pro Leu Gly Asn Arg Tyr Met
195 200 205
Ala Leu Ile Gln His Ser Thr Ile Ile Gly Phe Ser Gln Val Phe Glu
210 215 220
Pro His Gln Lys Lys Gln Thr Arg Ala Ser Val Val Ile Pro Val Thr
225 230 235 240
Gly Asp Ser Glu Gly Ala Thr Val Gln Leu Thr Pro Tyr Phe Pro Thr
245 250 255
Cys Gly Ser Asp Cys Ile Arg His Lys Gly Thr Val Val Leu Cys Pro
260 265 270
Gln Thr Gly Val Pro Phe Pro Leu Asp Asn Asn Lys Ser Lys Pro Gly
275 280 285
Gly Trp Leu Pro Leu Leu Leu Leu Ser Leu Leu Val Ala Thr Trp Val
290 295 300
Leu Val Ala Gly Ile Tyr Leu Met Trp Arg His Glu Arg Ile Lys Lys
305 310 315 320
Thr Ser Phe Ser Thr Thr Thr Leu Leu Pro Pro Ile Lys Val Leu Val
325 330 335
Val Tyr Pro Ser Glu Ile Cys Phe His His Thr Ile Cys Tyr Phe Thr
340 345 350
Glu Phe Leu Gln Asn His Cys Arg Ser Glu Val Ile Leu Glu Lys Trp
355 360 365
Gln Lys Lys Lys Ile Ala Glu Met Gly Pro Val Gln Trp Leu Ala Thr
370 375 380
Gln Lys Lys Ala Ala Asp Lys Val Val Phe Leu Leu Ser Asn Asp Val
385 390 395 400
Asn Ser Val Cys Asp Gly Thr Cys Gly Lys Ser Glu Gly Ser Pro Ser
405 410 415
Glu Asn Ser Gln Asp Leu Phe Pro Leu Ala Phe Asn Leu Phe Cys Ser
420 425 430
Asp Leu Arg Ser Gln Ile His Leu His Lys Tyr Val Val Val Tyr Phe
435 440 445
Arg Glu Ile Asp Thr Lys Asp Asp Tyr Asn Ala Leu Ser Val Cys Pro
450 455 460
Lys Tyr His Leu Met Lys Asp Ala Thr Ala Phe Cys Ala Glu Leu Leu
465 470 475 480
His Val Lys Gln Gln Val Ser Ala Gly Lys Arg Ser Gln Ala Cys His
485 490 495
Asp Gly Cys Cys Ser Leu
500
<210> 93
<211> 288
<212> PRT
<213> 智人
<400> 93
Met Ser Leu Val Leu Leu Ser Leu Ala Ala Leu Cys Arg Ser Ala Val
1 5 10 15
Pro Arg Glu Pro Thr Val Gln Cys Gly Ser Glu Thr Gly Pro Ser Pro
20 25 30
Glu Trp Met Leu Gln His Asp Leu Ile Pro Gly Asp Leu Arg Asp Leu
35 40 45
Arg Val Glu Pro Val Thr Thr Ser Val Ala Thr Gly Asp Tyr Ser Ile
50 55 60
Leu Met Asn Val Ser Trp Val Leu Arg Ala Asp Ala Ser Ile Arg Leu
65 70 75 80
Leu Lys Ala Thr Lys Ile Cys Val Thr Gly Lys Ser Asn Phe Gln Ser
85 90 95
Tyr Ser Cys Val Arg Cys Asn Tyr Thr Glu Ala Phe Gln Thr Gln Thr
100 105 110
Arg Pro Ser Gly Gly Lys Trp Thr Phe Ser Tyr Ile Gly Phe Pro Val
115 120 125
Glu Leu Asn Thr Val Tyr Phe Ile Gly Ala His Asn Ile Pro Asn Ala
130 135 140
Asn Met Asn Glu Asp Gly Pro Ser Met Ser Val Asn Phe Thr Ser Pro
145 150 155 160
Gly Cys Leu Asp His Ile Met Lys Tyr Lys Lys Lys Cys Val Lys Ala
165 170 175
Gly Ser Leu Trp Asp Pro Asn Ile Thr Ala Cys Lys Lys Asn Glu Glu
180 185 190
Thr Val Glu Val Asn Phe Thr Thr Thr Pro Leu Gly Asn Arg Tyr Met
195 200 205
Ala Leu Ile Gln His Ser Thr Ile Ile Gly Phe Ser Gln Val Phe Glu
210 215 220
Pro His Gln Lys Lys Gln Thr Arg Ala Ser Val Val Ile Pro Val Thr
225 230 235 240
Gly Asp Ser Glu Gly Ala Thr Val Gln Val Lys Phe Ser Glu Leu Leu
245 250 255
Trp Gly Gly Lys Gly His Arg Arg Leu Phe His His Ser Leu Leu Leu
260 265 270
Arg Met Ser Ser Leu Leu Ser Asn Ala Leu Leu Pro Ala Asp Thr Ser
275 280 285
<210> 94
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EF178110
<400> 94
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Lys Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Arg Asn Leu
50 55 60
Arg Asp Arg Val Thr Leu Thr Arg Asp Thr Ser Ile Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Leu Tyr Gly Asp Tyr Arg Pro Ile Gln Asp Ser Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 95
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Y14869
<400> 95
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Ser
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Leu
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105

Claims (27)

1.用于治疗、预防或改善肠癌的方法中的IL-25:IL-25R信号传导途径的抑制剂，其中所述抑制剂特异性结合IL-25或IL-25R。
2.根据权利要求1使用的抑制剂，其中所述癌症是结肠直肠癌。
3.根据权利要求1或权利要求2使用的抑制剂，其中所述癌症包含在腺瘤性结肠息肉病(APC)肿瘤抑制基因中的突变。
4.根据权利要求1至3任一项使用的抑制剂，其中所述癌症包含与相邻正常肠中的2型固有淋巴细胞(ILC2)频率相比ILC2频率提高的肿瘤。
5.根据权利要求1至4任一项使用的抑制剂，其中所述抑制剂特异性结合IL-25。
6.根据权利要求5使用的抑制剂，其中所述抑制剂结合选自SEQ ID NO:48的氨基酸残基46-63、SEQ ID NO:48的氨基酸残基66-84和SEQ ID NO:48的氨基酸残基129-135的一个或多个氨基酸序列。
7.根据权利要求5使用的抑制剂，其中所述抑制剂是或包含抗IL-25抗体，或其功能片段或衍生物。
8.根据权利要求7使用的抑制剂，其中所述抑制剂包含：
抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:1、2、12、13、14、15、16、17、18或19中任一种中显示的氨基酸序列的VHCDR1；
含有SEQ ID NO:3中显示的氨基酸序列的VH CDR2；和
含有SEQ ID NO:4、20或21中任一种中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:7中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:8、9、44或79中任一种中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
9.根据权利要求7使用的抑制剂，其中所述抑制剂包含：
抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:12中显示的氨基酸序列的VH CDR1；
含有SEQ ID NO:3中显示的氨基酸序列的VH CDR2；和
含有SEQ ID NO:20中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:7中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
10.根据权利要求7使用的抑制剂，其中所述抑制剂包含：
抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:12中显示的氨基酸序列的VH CDR1；
含有SEQ ID NO:3中显示的氨基酸序列的VH CDR2；和
含有SEQ ID NO:20中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:6中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:7中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:79中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
11.根据权利要求7使用的抑制剂，其中所述抑制剂包含：
含有SEQ ID NO:10、22、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37或38中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，和
含有SEQ ID NO:11、41或47中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域；
其中与所述序列相比，所述抗体VH结构域和/或抗体VL结构域在不在CDR内的残基中包含1至10个、1至5个、1至3个、一个氨基酸取代，或不包含氨基酸取代。
12.根据权利要求7使用的抑制剂，其中所述抑制剂包含：
含有SEQ ID NO:24中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，和
含有SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:41中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域。
13.根据权利要求7使用的抑制剂，其中所述抑制剂包含：
含有SEQ ID NO:25中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，和
含有SEQ ID NO:41中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域。
14.根据权利要求7使用的抑制剂，其中所述抑制剂包含：
含有SEQ ID NO:26中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，和
含有SEQ ID NO:41中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域。
15.根据权利要求7使用的抑制剂，其中所述抑制剂包含：
含有SEQ ID NO:25中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，和
含有SEQ ID NO:46中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域。
16.根据权利要求1至4任一项使用的抑制剂，其中所述抑制剂特异性结合IL-25R。
17.根据权利要求16使用的抑制剂，其中所述抑制剂是或包含抗IL-25R抗体，或其功能片段或衍生物。
18.根据权利要求17使用的抑制剂，其中所述抑制剂包含：
抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:49中显示的氨基酸序列的VH CDR1；
含有SEQ ID NO:50、57、58、59、60、61、62、63或64中任一种中显示的氨基酸序列的VHCDR2；和
含有SEQ ID NO:51中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:52中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:53中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:54或SEQ ID NO:65中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
19.根据权利要求17使用的抑制剂，其中所述抑制剂包含：
抗体VH结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:49中显示的氨基酸序列的VH CDR1；
含有SEQ ID NO:50或SEQ ID NO:64中显示的氨基酸序列的VH CDR2；和
含有SEQ ID NO:51中显示的氨基酸序列的VH CDR3；以及
抗体VL结构域，或其功能片段或衍生物，其包含：
含有SEQ ID NO:52中显示的氨基酸序列的VL CDR1；
含有SEQ ID NO:53中显示的氨基酸序列的VL CDR2；和
含有SEQ ID NO:65中显示的氨基酸序列的VL CDR3。
20.根据权利要求17使用的抑制剂，其中所述抑制剂包含：
含有SEQ ID NO:66、67、68、69、70、80、81、82、83、84、85或86中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，和
含有SEQ ID NO:56、71、72、87、88、89、90或91中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域；
其中与所述序列相比，所述抗体VH结构域和/或抗体VL结构域在不在CDR内的残基中包含1至10个、1至5个、1至3个、一个氨基酸取代，或不包含氨基酸取代。
21.根据权利要求17使用的抑制剂，其中所述抑制剂包含：
含有SEQ ID NO:55、66、67、68、69或70中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，和
含有SEQ ID NO:56、71或72中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域；
其中与所述序列相比，所述抗体VH结构域和/或抗体VL结构域在不在CDR内的残基中包含1至10个、1至5个、1至3个、一个氨基酸取代，或不包含氨基酸取代。
22.根据权利要求17使用的抑制剂，其中所述抑制剂包含：
含有SEQ ID NO:68、69或70中任一种中显示的氨基酸序列的抗体VH结构域，和含有SEQID NO:72中显示的氨基酸序列的抗体VL结构域。
23.根据权利要求8至15或18至22任一项使用的抑制剂，其中与所述序列相比，至少一个CDR序列包含一个、两个或三个氨基酸取代。
24.根据权利要求1至4任一项使用的抑制剂，其中所述抑制剂与权利要求8至15或18至22的抑制剂中的任一种竞争结合。
25.根据权利要求1至5、16或24任一项使用的抑制剂，其中所述抑制剂是抗体模拟物，或其功能片段或衍生物。
26.根据权利要求1至25任一项使用的抑制剂，其中所述方法进一步包括施用免疫检查点抑制剂。
27.根据权利要求26使用的抑制剂，其中所述免疫检查点抑制剂是PD-1:PD-L1途径的抑制剂。
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