CN116735866A - 一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条及其制备方法 - Google Patents

一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN116735866A
CN116735866A CN202310050066.0A CN202310050066A CN116735866A CN 116735866 A CN116735866 A CN 116735866A CN 202310050066 A CN202310050066 A CN 202310050066A CN 116735866 A CN116735866 A CN 116735866A
Authority
CN
China
Prior art keywords
feline
monoclonal antibody
herpesvirus
test strip
calicivirus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202310050066.0A
Other languages
English (en)
Inventor
翟文康
张影
李智椋
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shenzhen Renying Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Shenzhen Renying Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shenzhen Renying Biotechnology Co ltd filed Critical Shenzhen Renying Biotechnology Co ltd
Priority to CN202310050066.0A priority Critical patent/CN116735866A/zh
Publication of CN116735866A publication Critical patent/CN116735866A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/01—Arrangements or apparatus for facilitating the optical investigation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6486—Measuring fluorescence of biological material, e.g. DNA, RNA, cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • G01N33/54386—Analytical elements
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • G01N33/56994—Herpetoviridae, e.g. cytomegalovirus, Epstein-Barr virus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/085—Picornaviridae, e.g. coxsackie virus, echovirus, enterovirus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/145—Rhabdoviridae, e.g. rabies virus, Duvenhage virus, Mokola virus or vesicular stomatitis virus
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明属于生物检测技术领域，本发明提供了一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条及其制备方法。本发明提供的试纸条包括PVC底板，所述PVC底板上从左到右依次搭接样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸。本发明试纸条可同时检测猫泛白细胞减少症病毒抗原、猫疱疹病毒抗原和猫杯状病毒抗原，操作简单，检测更加全面，可应用在宠物医院、家庭等场所，可有效控制病毒传播。

Description

一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原 三联检测试纸条及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条及其制备方法。
背景技术
猫瘟也称为猫泛白细胞减少症病毒，这是一种对猫咪伤害极大的传染病，未成年幼猫群体抵抗能力比较差更容易感染上猫瘟。患上猫瘟的猫咪可能会伴随着发高烧，精神萎靡，不吃东西，呕吐等症状，同时还可能出现口腔溃疡、黄疸等。
猫疱疹病毒感染也称为病毒性鼻支气管炎，广泛存在于全世界，并且只有一种血清型被确认，但其毒力在各病毒株之间各有不同。猫的疱疹病毒会在结膜及上呼道上皮细胞内复制增殖，也会在神经元细胞内复制增殖，神经原的感染会导致终身潜伏感染。
慢性潜伏感染是猫疱疹病毒急性感染后的典型结果，并且间歇性地再活化，使得排放病毒于口鼻分泌物及结膜分泌物。除非是猫舍饲养的状况下，否则环境的污染并非是传染的主要来源，传染的主要来源是急性感染期的猫咪及慢性潜伏感染并且再活化排毒的猫咪。经胎盘感染的可能性尚未确认，但慢性潜伏感染的母猫在分娩及泌乳时候都算是一种紧迫状态，所以会导致病毒再活化且开始排放病毒，因此幼猫可能在非常早期就接触到病毒。但其感染的结果需视母亲移行抗体的量而定，当有足够的移行抗体时，幼猫会被移行抗体所保护，因此会形成无症状感染而形成潜伏感染状态，如果移行抗体不足时，就可能会产生临床症状。
猫杯状病毒感染也称为猫传染性鼻-结膜炎，是由猫杯状病毒引起猫的一种多发性口腔和呼吸道传染病。猫杯病毒是一种高度传染性的病毒，会导致猫的轻度至重度呼吸道感染和口腔疾病。它在收容所和繁殖地特别常见，经常感染小猫。大多数猫在感染了杯状病毒后能完全康复，但罕见的病毒株尤其致命，这种病毒对人类没有威胁。
发明内容
本发明的目的在于提供一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条及其制备方法。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条，所述试纸条包括PVC底板，所述PVC底板上从左到右依次搭接样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述结合垫上包被有微球标记的猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体1、猫疱疹病毒单克隆抗体1、猫杯状病毒单克隆抗体1、鸡IgY的复合物，所述硝酸纤维素膜上按层析方向依次包括检测线T1、检测线T2、检测线T3和质控线C线，所述检测线T1包被有猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体2，所述检测线T2包被有猫疱疹病毒单克隆抗体2，所述检测线T3包被有猫杯状病毒单克隆抗体2，所述质控线C线包被有羊抗鸡IgY。
优选的，所述复合物中微球标记的猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体1、猫疱疹病毒单克隆抗体1、猫杯状病毒单克隆抗体1和鸡IgY的质量比为2～4:2～4:2～4:1～2。
优选的，所述猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体1、猫疱疹病毒单克隆抗体1、猫杯状病毒单克隆抗体1的浓度独立为160～210μg/mL，所述鸡IgY的浓度为50～70μg/mL。
优选的，所述检测线T1包被的猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体2的浓度为0.8～1.2mg/mL，包被量为0.8～1.2μL/cm；
所述检测线T2包被的猫疱疹病毒单克隆抗体2的浓度为0.8～1.2mg/mL，包被量为0.8～1.2μL/cm；
所述检测线T3包被的猫杯状病毒单克隆抗体2的浓度为0.8～1.2mg/mL，包被量为0.8～1.2μL/cm；
所述质控线C线包被的羊抗鸡IgY的浓度为0.9～1.3mg/mL，包被量为0.8～1.2μL/cm。
优选的，所述结合垫上微球的标记浓度为0.3～0.6mg/mL，所述微球包括荧光微球或彩色乳胶微球，所述荧光微球包括无机/有机荧光微球、无机/无机荧光微球或有机/有机荧光微球，所述彩色乳胶微球包括聚苯乙烯或共聚苯乙烯。
优选的，所述样品垫一端压住结合垫一端的覆盖长度为1～1.2mm，结合垫另一端压住硝酸纤维素膜一端的覆盖长度为0.8～1mm，吸水纸的一端压住硝酸纤维素膜另一端的覆盖长度为1～1.5mm。
本发明还提供了上述一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条的制备方法，包括如下步骤：
S1、结合垫的制备：配置处理液：含0.1～0.3％BSA、0.05～0.1％Tween-20、0.01～0.05％防腐剂、2～5％蔗糖、pH为8的Tris-HCl缓冲液，将所述处理液涂布于结合垫上，处理后在结合垫上包被微球标记的猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒、猫杯状病毒单克隆抗体1及鸡IgY，随后在37～40℃、＜30％RH的环境下烘干12～24h即得所述结合垫；
S2、硝酸纤维素膜的制备：在硝酸纤维素膜上分别包被有猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体2作为T1检测线、猫疱疹病毒单克隆抗体2作为T2检测线、猫杯状病毒单克隆抗体2作为T3检测线以及羊抗鸡IgY作为质控线C线，随后在37～40℃、＜30％RH的环境下烘干12～24h即得所述硝酸纤维素膜；
S3、样品垫的制备：配制处理液：含0.8～1％PVP、0.05～0.1％Tween-20、0.01～0.05％防腐剂、2～5％蔗糖、pH为8的Tris-HCl缓冲液，将所述处理液涂布于玻璃纤维上，随后在37～40℃、＜30％RH的环境下烘干12～24h即得所述样品垫；
S4、试纸条的制备：在PVC底板上从左到右依次搭接步骤S3中的样品垫、步骤S1中的结合垫、步骤S2中的硝酸纤维素膜和吸水纸，裁切成所需宽度即得猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条。
本发明还提供了上述猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条在猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原检测中的应用。
本发明还提供了一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试剂盒，所述试剂盒包括上述猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条。
优选的，所述试剂盒还包括取样拭子和样品稀释液。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
1、本发明可同时检测猫泛白细胞减少症病毒抗原、猫疱疹病毒抗原和猫杯状病毒抗原，操作简单，检测更加全面，可应用在宠物医院、家庭等场所，可有效控制病毒传播。
2、本发明应用荧光微球或彩色乳胶微球作为标记物，可对常见的致猫患病的三种病毒进行定性或者定量分析，从而大大提高检测的灵敏度，同时也可评估三种传染病患病的时期，从而对相应的治疗方式提供一定的帮助。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1为本发明猫泛白减少症病毒抗原、猫疱疹病毒抗原和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条结构示意图；
图2为本发明试纸条判定结果为阴性时示意图；
图3为本发明试纸条判定结果为阳性时示意图；
图4为本发明试纸条判定结果为无效时示意图。
具体实施方式
本发明提供了一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条，所述试纸条包括PVC底板，所述PVC底板上从左到右依次搭接样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述结合垫上包被有微球标记的猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体1、猫疱疹病毒单克隆抗体1、猫杯状病毒单克隆抗体1、鸡IgY的复合物，所述硝酸纤维素膜上按层析方向依次包括检测线T1、检测线T2、检测线T3和质控线C线，所述检测线T1包被有猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体2，所述检测线T2包被有猫疱疹病毒单克隆抗体2，所述检测线T3包被有猫杯状病毒单克隆抗体2，所述质控线C线包被有羊抗鸡IgY。
在本发明中，所述复合物中微球标记的猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体1、猫疱疹病毒单克隆抗体1、猫杯状病毒单克隆抗体1和鸡IgY的质量比优选为2～4:2～4:2～4:1～2，进一步优选为3:3:3:1。
在本发明中，所述猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体1、猫疱疹病毒单克隆抗体1、猫杯状病毒单克隆抗体1的浓度独立优选为160～210μg/mL，进一步优选为200μg/mL；所述鸡IgY的浓度优选为50～70μg/mL，进一步优选为60μg/mL。
在本发明中，所述检测线T1包被的猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体2的浓度优选为0.8～1.2mg/mL，进一步优选为1mg/mL；包被量优选为0.8～1.2μL/cm，进一步优选为1μL/cm；
所述检测线T2包被的猫疱疹病毒单克隆抗体2的浓度优选为0.8～1.2mg/mL，进一步优选为1mg/mL；包被量优选为0.8～1.2μL/cm，进一步优选为1μL/cm；
所述检测线T3包被的猫杯状病毒单克隆抗体2的浓度优选为0.8～1.2mg/mL，进一步优选为1mg/mL；包被量优选为0.8～1.2μL/cm，进一步优选为1μL/cm；
所述质控线C线包被的羊抗鸡IgY的浓度优选为0.9～1.3mg/mL，进一步优选为1mg/mL；包被量优选为0.8～1.2μL/cm，进一步优选为1μL/cm。
在本发明中，所述结合垫上微球的标记浓度优选为0.3～0.6mg/mL，进一步优选为0.5mg/mL；所述微球优选包括荧光微球或彩色乳胶微球，所述荧光微球优选包括无机/有机荧光微球、无机/无机荧光微球或有机/有机荧光微球，所述彩色乳胶微球优选包括聚苯乙烯或共聚苯乙烯。
在本发明中，所述微球标记的猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体1、猫疱疹病毒单克隆抗体1、猫杯状病毒单克隆抗体1、鸡IgY的复合物的制备方法为：先用10mg/mL的EDC和NHS将微球进行活化，随后在微球中按50μg/mL比例分别缓慢加入猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体1、猫疱疹病毒单克隆抗体1、猫杯状病毒单克隆抗体1和鸡IgY进行标记，充分反应后混合得到微球复合物，将微球复合物以10000rpm的离心速度离心20分钟，弃掉上清液，浓缩5倍，混匀后超声5min，制得微球标记的猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体1、猫疱疹病毒单克隆抗体1、猫杯状病毒单克隆抗体1、鸡IgY的复合物，将该复合物喷涂到结合垫上，所述喷涂过程为：将该复合物吸入到喷金划膜仪中，喷金滑膜仪设置喷涂量为2.5μL/cm，喷涂速度为100mm/s，喷涂后置于40℃电热鼓风干燥箱中干燥，干燥时间为12h。
在本发明中，所述样品垫一端压住结合垫一端的覆盖长度优选为1～1.2mm，进一步优选为1.1mm；结合垫另一端压住硝酸纤维素膜一端的覆盖长度优选为0.8～1mm，进一步优选为0.9mm；吸水纸的一端压住硝酸纤维素膜另一端的覆盖长度优选为1～1.5mm，进一步优选为1.3mm。
本发明还提供了上述一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条的制备方法，包括如下步骤：
S1、结合垫的制备：配置处理液：含0.1～0.3％BSA、0.05～0.1％Tween-20、0.01～0.05％防腐剂、2～5％蔗糖、pH为8的Tris-HCl缓冲液，将所述处理液涂布于结合垫上，处理后在结合垫上包被微球标记的猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒、猫杯状病毒单克隆抗体1及鸡IgY，随后在37～40℃、＜30％RH的环境下烘干12～24h即得所述结合垫；
S2、硝酸纤维素膜的制备：在硝酸纤维素膜上分别包被有猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体2作为T1检测线、猫疱疹病毒单克隆抗体2作为T2检测线、猫杯状病毒单克隆抗体2作为T3检测线以及羊抗鸡IgY作为质控线C线，随后在37～40℃、＜30％RH的环境下烘干12～24h即得所述硝酸纤维素膜；
S3、样品垫的制备：配制处理液：含0.8～1％PVP、0.05～0.1％Tween-20、0.01～0.05％防腐剂、2～5％蔗糖、pH为8的Tris-HCl缓冲液，将所述处理液涂布于玻璃纤维上，随后在37～40℃、＜30％RH的环境下烘干12～24h即得所述样品垫；
S4、试纸条的制备：在PVC底板上从左到右依次搭接步骤S3中的样品垫、步骤S1中的结合垫、步骤S2中的硝酸纤维素膜和吸水纸，裁切成所需宽度即得猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条。
在本发明中，步骤S1中所述配置处理液：含0.1～0.3％BSA、0.05～0.1％Tween-20、0.01～0.05％防腐剂、2～5％蔗糖、pH为8的Tris-HCl缓冲液，将所述处理液涂布于结合垫上，处理后在结合垫上包被微球标记的猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒、猫杯状病毒单克隆抗体1及鸡IgY，随后在37～40℃、＜30％RH的环境下烘干12～24h即得所述结合垫，进一步优选为配置处理液：含0.2％BSA、0.1％Tween-20、0.05％防腐剂、5％蔗糖、pH为8的Tris-HCl缓冲液，将所述处理液涂布于结合垫上，处理后在结合垫上包被微球标记的猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒、猫杯状病毒单克隆抗体1及鸡IgY，随后在40℃、25％RH的环境下烘干12h即得所述结合垫。
在本发明中，步骤S2中所述在硝酸纤维素膜上分别包被有猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体2作为T1检测线、猫疱疹病毒单克隆抗体2作为T2检测线、猫杯状病毒单克隆抗体2作为T3检测线以及羊抗鸡IgY作为质控线C线，随后在37～40℃、＜30％RH的环境下烘干12～24h即得所述硝酸纤维素膜，进一步优选为在硝酸纤维素膜上分别包被有猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体2作为T1检测线、猫疱疹病毒单克隆抗体2作为T2检测线、猫杯状病毒单克隆抗体2作为T3检测线以及羊抗鸡IgY作为质控线C线，随后在40℃、25％RH的环境下烘干12h即得所述硝酸纤维素膜。
在本发明中，步骤S3中所述配制处理液：含0.8～1％PVP、0.05～0.1％Tween-20、0.01～0.05％防腐剂、2～5％蔗糖、pH为8的Tris-HCl缓冲液，将所述处理液涂布于玻璃纤维上，随后在37～40℃、＜30％RH的环境下烘干12～24h即得所述样品垫，进一步优选为配制处理液：含1％PVP、0.05％Tween-20、0.05％防腐剂、2％蔗糖、pH为8的Tris-HCl缓冲液，将所述处理液涂布于玻璃纤维上，随后在40℃、25％RH的环境下烘干12h即得所述样品垫。
本发明还提供了上述猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条在猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原检测中的应用。
本发明还提供了一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试剂盒，所述试剂盒包括上述猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条。
在本发明中，所述试剂盒还优选包括取样拭子和样品稀释液，所述样品稀释液优选为含NaCl、Tween-20以及防腐剂的50mmol/L的Tris-HCl缓冲液。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
一、一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条的制备方法，步骤如下：
所述试纸条包括PVC底板(1)，所述PVC底板上从左到右依次搭接样品垫(2)、结合垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水纸(5)，如图1所示。所述结合垫上包被有微球标记的猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体1、猫疱疹病毒单克隆抗体1、猫杯状病毒单克隆抗体1、鸡IgY的复合物，所述硝酸纤维素膜上按层析方向依次包括检测线T1(41)、检测线T2(42)、检测线T3(43)和质控线C线(44)，所述检测线T1包被有猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体2，所述检测线T2包被有猫疱疹病毒单克隆抗体2，所述检测线T3包被有猫杯状病毒单克隆抗体2，所述质控线C线包被有羊抗鸡IgY。
S1、微球标记的猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体1、猫疱疹病毒单克隆抗体1、猫杯状病毒单克隆抗体1、鸡IgY的复合物的制备：
先用10mg/mL的EDC和NHS将乳胶微球进行活化，随后在乳胶微球中按50μg/mL比例分别缓慢加入猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体1、猫疱疹病毒单克隆抗体1、猫杯状病毒单克隆抗体1和鸡IgY进行标记，充分反应后混合得到微球复合物，将微球复合物以10000rpm的离心速度离心20分钟，弃掉上清液，浓缩5倍，混匀后超声5min，制得微球标记的猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体1、猫疱疹病毒单克隆抗体1、猫杯状病毒单克隆抗体1、鸡IgY的复合物。
S2、结合垫的制备：
配置处理液：含0.2％BSA、0.1％Tween-20、0.05％防腐剂、5％蔗糖、pH为8的Tris-HCl缓冲液，将所述处理液涂布于结合垫上，处理后在结合垫上喷涂微球标记的猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体1、猫疱疹病毒单克隆抗体1、猫杯状病毒单克隆抗体1、鸡IgY的复合物，所述喷涂过程为：将该复合物吸入到喷金划膜仪中，喷金滑膜仪设置喷涂量为2.5μL/cm，喷涂速度为100mm/s，喷涂后在40℃、25％RH的环境下烘干12h即得所述结合垫。
S3、硝酸纤维素膜的制备：
用pH7.4、含1％BSA及2％蔗糖的10mM PBS缓冲液，将猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体2、猫疱疹病毒单克隆抗体2、猫杯状病毒单克隆抗体2稀释至1mg/mL，将羊抗鸡IgY稀释至1mg/mL，用喷金划膜仪按1.0μL/cm包被于硝酸纤维素膜上，随后在40℃、25％RH的环境下烘干12h即得所述硝酸纤维素膜，其中猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体2作为T1检测线，猫疱疹病毒单克隆抗体2作为T2检测线，猫杯状病毒单克隆抗体2作为T3检测线，羊抗鸡IgY作为质控线C线。
S4、样品垫的制备：
配制处理液：含1％PVP、0.05％Tween-20、0.05％防腐剂、2％蔗糖、pH为8的Tris-HCl缓冲液，将所述处理液涂布于玻璃纤维上，随后在40℃、25％RH的环境下烘干12h即得所述样品垫。
S5、试纸条的制备：
在PVC底板上如图1所示从左到右依次搭接步骤S4中的样品垫、步骤S2中的结合垫、步骤S3中的硝酸纤维素膜和吸水纸，裁切成所需宽度即得猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条。
二、利用上述试纸条进行猫泛白细胞减少症病毒抗原、猫疱疹病毒抗原和猫杯状病毒抗原的检测，步骤如下：
S1、采集粪便样品，采集量不宜过多，覆盖拭子2/3，将采集粪便后的拭子插入提取管溶液内，提取管内预先装有1mL样品稀释液，紧靠试管内壁旋转10次，充分混匀后静置1min，沿提取管内壁挤压拭子的签头，使液体尽可能留在管内，取出并弃去拭子，取上清液为检测液样本；
S2、将检测液样本滴加3滴到试剂盒的样本孔中，静置10min之内判读结果，静置时间大于15min后的结果判定无效。
结果判定的具体标准如下：
阴性，如图2所示：仅质控线44处出现一条红色条带，在猫泛白细胞减少症病毒抗原、猫疱疹病毒抗原和猫杯状病毒抗原试纸条的检测线T1、T2、T3处均无红色条带出现，表明猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒、猫杯状病毒抗原为阴性结果，样本中不含猫泛白细胞减少症病毒抗原、猫疱疹病毒抗原和猫杯状病毒抗原；
阳性，如图3所示：
1、四条红色条带出现。三条红色条带分别出现于T1检测线、T2检测线、T3检测线处，另一条红色条带出现于质控线44处。阳性结果表明：样本中同时含有猫泛白细胞减少症病毒抗原、猫疱疹病毒抗原和猫杯状病毒抗原；
2、三条红色条带出现。T1检测线或T2检测线或T3检测线无显色，其余三条显色带均显色。阳性结果表明：样本中含有猫疱疹病毒抗原、猫杯状病毒抗原或猫泛白细胞减少症病毒抗原、猫杯状病毒抗原或猫泛白细胞减少症病毒抗原、猫疱疹病毒抗原；
3、两条红色条带出现。一条红色条带出现于T1检测线或T2检测线或T3检测线处，另一条红色条带出现于质控线44处。阳性结果表明：样本中含有猫泛白细胞减少症病毒抗原或猫疱疹病毒抗原或猫杯状病毒抗原；
无效，如图4所示：质控线44处未出现红色条带，表明操作失误或试剂失效。判定结果为无效时，需进行重复试验。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条，其特征在于，所述试纸条包括PVC底板，所述PVC底板上从左到右依次搭接样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述结合垫上包被有微球标记的猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体1、猫疱疹病毒单克隆抗体1、猫杯状病毒单克隆抗体1、鸡IgY的复合物，所述硝酸纤维素膜上按层析方向依次包括检测线T1、检测线T2、检测线T3和质控线C线，所述检测线T1包被有猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体2，所述检测线T2包被有猫疱疹病毒单克隆抗体2，所述检测线T3包被有猫杯状病毒单克隆抗体2，所述质控线C线包被有羊抗鸡IgY。
2.根据权利要求1所述的一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条，其特征在于，所述复合物中微球标记的猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体1、猫疱疹病毒单克隆抗体1、猫杯状病毒单克隆抗体1和鸡IgY的质量比为2～4:2～4:2～4:1～2。
3.根据权利要求1所述的一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条，其特征在于，所述猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体1、猫疱疹病毒单克隆抗体1、猫杯状病毒单克隆抗体1的浓度独立为160～210μg/mL，所述鸡IgY的浓度为50～70μg/mL。
4.根据权利要求1所述的一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条，其特征在于，所述检测线T1包被的猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体2的浓度为0.8～1.2mg/mL，包被量为0.8～1.2μL/cm；
所述检测线T2包被的猫疱疹病毒单克隆抗体2的浓度为0.8～1.2mg/mL，包被量为0.8～1.2μL/cm；
所述检测线T3包被的猫杯状病毒单克隆抗体2的浓度为0.8～1.2mg/mL，包被量为0.8～1.2μL/cm；
所述质控线C线包被的羊抗鸡IgY的浓度为0.9～1.3mg/mL，包被量为0.8～1.2μL/cm。
5.根据权利要求1所述的一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条，其特征在于，所述结合垫上微球的标记浓度为0.3～0.6mg/mL，所述微球包括荧光微球或彩色乳胶微球，所述荧光微球包括无机/有机荧光微球、无机/无机荧光微球或有机/有机荧光微球，所述彩色乳胶微球包括聚苯乙烯或共聚苯乙烯。
6.根据权利要求1所述的一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条，其特征在于，所述样品垫一端压住结合垫一端的覆盖长度为1～1.2mm，结合垫另一端压住硝酸纤维素膜一端的覆盖长度为0.8～1mm，吸水纸的一端压住硝酸纤维素膜另一端的覆盖长度为1～1.5mm。
7.权利要求1～6任一项所述的一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、结合垫的制备：配置处理液：含0.1～0.3％BSA、0.05～0.1％Tween-20、0.01～0.05％防腐剂、2～5％蔗糖、pH为8的Tris-HCl缓冲液，将所述处理液涂布于结合垫上，处理后在结合垫上包被微球标记的猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒、猫杯状病毒单克隆抗体1及鸡IgY，随后在37～40℃、＜30％RH的环境下烘干12～24h即得所述结合垫；
S2、硝酸纤维素膜的制备：在硝酸纤维素膜上分别包被有猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体2作为T1检测线、猫疱疹病毒单克隆抗体2作为T2检测线、猫杯状病毒单克隆抗体2作为T3检测线以及羊抗鸡IgY作为质控线C线，随后在37～40℃、＜30％RH的环境下烘干12～24h即得所述硝酸纤维素膜；
S3、样品垫的制备：配制处理液：含0.8～1％PVP、0.05～0.1％Tween-20、0.01～0.05％防腐剂、2～5％蔗糖、pH为8的Tris-HCl缓冲液，将所述处理液涂布于玻璃纤维上，随后在37～40℃、＜30％RH的环境下烘干12～24h即得所述样品垫；
S4、试纸条的制备：在PVC底板上从左到右依次搭接步骤S3中的样品垫、步骤S1中的结合垫、步骤S2中的硝酸纤维素膜和吸水纸，裁切成所需宽度即得猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条。
8.权利要求1～6任一项所述的猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条、权利要求7所述制备方法制备得到的猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条在猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原检测中的应用。
9.一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1～6任一项所述的猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条或权利要求7所述制备方法制备得到的猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条。
10.根据权利要求9所述的一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括取样拭子和样品稀释液。
CN202310050066.0A 2023-02-01 2023-02-01 一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条及其制备方法 Pending CN116735866A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310050066.0A CN116735866A (zh) 2023-02-01 2023-02-01 一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310050066.0A CN116735866A (zh) 2023-02-01 2023-02-01 一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116735866A true CN116735866A (zh) 2023-09-12

Family

ID=87913907

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310050066.0A Pending CN116735866A (zh) 2023-02-01 2023-02-01 一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116735866A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117700535A (zh) * 2024-02-05 2024-03-15 北京纳百生物科技有限公司 一种猫泛白细胞减少症病毒vp2蛋白单克隆抗体及其应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060057159A1 (en) * 2004-09-13 2006-03-16 Wyeth Hemorrhagic feline calicivirus, calicivirus vaccine and method for preventing calicivirus infection or disease
CN109991414A (zh) * 2017-12-31 2019-07-09 江苏雷森生物科技有限公司 一种快速确诊猫泛白细胞减少症的检测方法及其试纸条的制备
WO2021174806A1 (zh) * 2020-03-05 2021-09-10 广州万孚生物技术股份有限公司 2019-nCoV新型冠状病毒快速检测免疫层析试纸条
CN114252600A (zh) * 2021-11-08 2022-03-29 广州万德康科技有限公司 一种猫三联抗体检测试纸条及其制备方法与应用
CN114839378A (zh) * 2022-07-04 2022-08-02 山东康华生物医疗科技股份有限公司 一种猫疱疹和猫杯状病毒联合检测试剂盒

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060057159A1 (en) * 2004-09-13 2006-03-16 Wyeth Hemorrhagic feline calicivirus, calicivirus vaccine and method for preventing calicivirus infection or disease
CN109991414A (zh) * 2017-12-31 2019-07-09 江苏雷森生物科技有限公司 一种快速确诊猫泛白细胞减少症的检测方法及其试纸条的制备
WO2021174806A1 (zh) * 2020-03-05 2021-09-10 广州万孚生物技术股份有限公司 2019-nCoV新型冠状病毒快速检测免疫层析试纸条
CN114252600A (zh) * 2021-11-08 2022-03-29 广州万德康科技有限公司 一种猫三联抗体检测试纸条及其制备方法与应用
CN114839378A (zh) * 2022-07-04 2022-08-02 山东康华生物医疗科技股份有限公司 一种猫疱疹和猫杯状病毒联合检测试剂盒

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117700535A (zh) * 2024-02-05 2024-03-15 北京纳百生物科技有限公司 一种猫泛白细胞减少症病毒vp2蛋白单克隆抗体及其应用
CN117700535B (zh) * 2024-02-05 2024-04-26 北京纳百生物科技有限公司 一种猫泛白细胞减少症病毒vp2蛋白单克隆抗体及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111474354B (zh) 2019-nCoV新型冠状病毒检测层析试纸条、检测卡和试剂盒
CN107144693B (zh) 检测血液中cd4+t细胞数量的侧向层析试剂盒及其制备方法
CN107765002B (zh) 一种胶体金免疫层析试纸条及其制备方法和应用
US20060246429A1 (en) Dot-elisa for the detection of animal viruses
CN116735866A (zh) 一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗原三联检测试纸条及其制备方法
CN114252600B (zh) 一种猫三联抗体检测试纸条及其制备方法与应用
CN111537746A (zh) 一种用于covid-19抗原抗体联合检测的试纸条及其应用
CN111273003A (zh) 2019-nCoV新型冠状病毒快速检测免疫层析试纸条
CN108802381A (zh) 牛病毒性腹泻病毒鉴别检测试纸条及其制备方法
CN103267844A (zh) 一种腺病毒IgM、IgG抗体的胶体金法检测试纸条、试剂盒及其制备方法
CN101650365B (zh) 一种快速检测结核杆菌的方法和试剂盒
CN112415202A (zh) 一种检测猫冠状病毒的试纸条及其制备方法、试剂盒、检测方法
CN219201611U (zh) 一种多靶标试纸条及多靶标检测卡
Simm et al. Storage conditions for serum for estimating prostate-specific antigen
CN106290880B (zh) 一种用于犬冠状病毒的免疫层析用试剂组合物及检测方法
CN218824309U (zh) 一种甲、乙型流感病毒和新型冠状病毒双通道唾液检测卡
CN106290863A (zh) 一种人类丙肝病毒（hcv）唾液/尿液抗体胶体金检测试剂盒及其制备方法
CN101614740B (zh) 甲型肝炎病毒抗原唾液快速检测试纸条
CN114034858A (zh) 一种检测新冠疫苗注射后体内中和抗体的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法
CN102288768A (zh) 弓形虫IgG抗体免疫印迹试剂盒及其制备方法
Lohr Diagnosis of infectious bronchitis (IB) by examination of tracheal mucus for IB-precipitating antigens
CN112305216A (zh) 一种碳纳米免疫标记层析试纸条及动物毛发中抗生素的检测方法
CN202256349U (zh) 一种检测马脑炎病毒抗体的金标免疫层析系统
CN104820095A (zh) 一种鸡新城疫病毒强毒株胶体金检测试纸卡及其制备方法
US20180196042A1 (en) Homogeneous competitive lateral flow assay

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination