CN116731913B - 植物乳植杆菌在制备抗幽门螺杆菌产品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种植物乳植杆菌在制备抗幽门螺杆菌产品中的应用。本发明的植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)HCS03‑001,其发酵上清液和/或菌悬体可抑制幽门螺杆菌的生长,同时,该植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)HCS03‑001可与副干酪乳酪杆菌和罗伊氏粘液乳杆菌发生协同作用,更有效地抑制幽门螺杆菌的生长。
Description
技术领域
本发明属于益生菌技术领域,具体涉及植物乳植杆菌HCS03-001在制备抗幽门螺杆菌产品中的应用。
背景技术
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是一种螺旋形、微厌氧、对生长条件要求十分苛刻的革兰氏阴性杆菌,是目前所知能够在人胃中生存的唯一微生物种类。幽门螺杆菌主要通过口腔途径进入人体胃内而定植于上皮细胞表面,定植后机体很难自发清除,并几乎均可导致胃粘膜活动性炎症,在活动性炎症的基础上还可发生慢性胃炎、慢性萎缩性胃炎、消化性溃疡和胃癌等一系列常见疾病,严重地危害人们的健康。
对于幽门螺杆菌的治疗,现有的医学方法采用大剂量多种抗生素同时服用杀灭幽门螺杆菌,但是此种方法在杀灭幽门螺杆菌的同时也会杀灭大量有益菌,导致疾病反复发作,而且,大剂量多种抗生素的服用,增加了幽门螺杆菌的抗药性,细菌产生耐药性使原本有效的抗生素的治疗效果降低或丧失,增加了患者疾病的治疗难度和医疗成本。
因此,如何提供一种可以抑制幽门螺杆菌的产品,既不会增加幽门螺杆菌耐药性,同时,在治疗过程中不会导致患者产生不良反应,提高幽门螺杆菌临床治疗的效果,已成为亟待解决的问题。近年来,人们在研究替代抗生素治疗幽门螺杆菌感染方面做了大量的工作,发现了多种具有抗幽门螺杆菌的活性物质,包括益生菌以及植物提取物等。
如CN113980878A公开了一种抗幽门螺杆菌感染的植物乳杆菌,所述抗幽门螺杆菌感染的植物乳杆菌命名为植物乳杆菌Lactobacillus plantarum Lp05,保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCCNo.23547,保藏日期为2021年10月9日。CN110628660A公开了一种用于抑制胃幽门螺旋杆菌引发的胃炎的医药组合物及食品产品,用于抑制胃幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)引发之胃炎的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)GMNL-185,其保藏编号为CCTCCNO:M2017764。
乔宏萍等在药食两用植物对幽门螺杆菌的抑菌活性测定(首都食品与医药[J],2016年3月下半刊,第74页)中选药食两用植物蒲公英、甘草、菊花、薄荷、乌梅、山楂等,采用水提法提取其有效成分,通过打孔法、平稀释法等不同方法测定植物水提物对幽门螺杆菌的抑菌效果及最小抑菌浓度(MIC)。发现,除了山楂没有抑菌效果外,其它的5种植物都出现了不同的抑菌圈,抑菌圈最大的为乌梅3.2cm,乌梅对幽门螺杆菌的最小抑菌浓度为10mg/mL,甘草的MIC最大为50mg/mL。CN112316123A公开了一种抗幽门螺杆菌感染的中药组合物,包括原材料:按重量份计,溶菌酶15-30份,益生菌10-20份,丁香叶8-15份,藿香5-10份,佩兰5-15份,吴茱萸8-16份,黄连7-15份,所述益生菌包括质量比为1:3-5:2-5:4-6的罗伊氏乳杆菌菌粉、植物乳杆菌菌粉、唾液乳杆菌菌粉和鼠李糖乳杆菌菌粉。该发明的中药组合物由益生菌、溶酶菌和中药组合而成,三者协同组合,可有效抑制幽门螺旋杆菌,直至清除人体内幽门螺杆菌,减少胃癌的发生。
乳酸菌是日前益生菌中研究得比较深入的一类菌,是少数能在胃酸环境下生存的细菌之一,国内外研究表明,益生菌通过代谢抗菌物质(乳酸、过氧化氢、细菌素等)、分泌幽门螺杆菌竞争性粘附受体、刺激粘蛋白的表达和稳定胃粘膜作用来增强胃肠道抑制幽门螺杆菌定植。同时,益生菌可以通过粘附上皮细胞调节宿主的免疫反应,并可以通过调节抗炎因子的分泌从而降低胃的活动和发炎。另外益生菌还能刺激机体产生免疫球蛋白A(IgA),对幽门螺旋杆菌具有免疫清除作用,因此,筛选具有抗幽门螺杆菌感染的乳酸菌仍然是一个重要的课题。
植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)HCS03-001是一株抑口腔致病菌能力强、具有通便和抗腹泻功效的益生菌,该菌株具有较强的耐胃液、耐肠液的能力,可通过胃肠道的逆环境有效定植于肠道内,对缓解便秘和防治腹泻有双重功效,尤其是对于那些由于胃肠道正常菌群紊乱引起的便秘和腹泻。目前尚未发现利用该菌株进行抗幽门螺杆菌产品研发的报道。
发明内容
有鉴于此,本发明提供了一种植物乳植杆菌HCS03-001在制备抗幽门螺杆菌产品中的应用,该植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)HCS03-001的发酵上清液和/或菌悬体可以有效抑制幽门螺杆菌的生长。
为了实现上述目的,本发明采用以下技术方案:
本发明提供了一种植物乳植杆菌HCS03-001在制备抗幽门螺杆菌产品中的应用。
所述植物乳植杆菌(Lactobacillus plantarum)HCS03-001,该菌株已于2018年08月14日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”,保藏号为CGMCCNo.16258。
该植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)HCS03-001的发酵上清液和/或菌悬体可以有效抑制幽门螺杆菌的生长。
本发明还提供了一种抗幽门螺杆菌的乳杆菌组合物,包括植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)HCS03-001菌体、其发酵液或其发酵上清液。
在一些优选的实施例中,所述乳杆菌组合物还包括副干酪乳酪杆菌和罗伊氏粘液乳杆菌。
具体地,所述副干酪乳酪杆菌为副干酪乳酪杆菌HCS17-040;所述罗伊氏粘液乳杆菌为罗伊氏粘液乳杆菌HCS02-001。
所述副干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillus paracasei)HCS17-040,该菌株已于2020年04月27日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”,保藏号为CGMCCNo.19747。
所述罗伊氏粘液乳杆菌(Limosilactobacillus reuteri)HCS02-001,该菌株已于2020年04月27日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”,保藏号为CGMCCNo.19746。
本发明的副干酪乳酪杆菌HCS17-040和罗伊氏粘液乳杆菌HCS02-001可以与植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)HCS03-001发生协同作用,更有效地抑制幽门螺杆菌的生长。
在一些优选的实施例中,所述乳杆菌组合物中植物乳植杆菌HCS03-001、副干酪乳酪杆菌和罗伊氏粘液乳杆菌的活菌数比为5-9:1-5:1;优选为6-8:2-4:1;最优选为7:3:1。
在一些优选的实施例中,所述乳杆菌组合物中的活菌数≥1×108CFU/mL。
本发明还提供了上述乳杆菌组合物的制备方法,所述的制备方法为:将配方量的植物乳植杆菌和辅助乳杆菌混合均匀,即得所述乳杆菌的组合物。
本发明还提供了上述乳杆菌组合物在制备抗幽门螺杆菌的产品中的应用。
应用本发明的产品可抑制口腔病菌生长,使幽门螺杆菌在口腔中失去生存的环境,不会破坏口腔中的环境,从根本上预防胃病的发生。
基于此,本发明提供了一种抗幽门螺杆菌的产品,包含上述植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)HCS03-001菌体、其发酵液或其发酵上清液。
本发明还提供了一种抗幽门螺杆菌的产品,包含上述乳杆菌组合物。
本发明的有益效果为:
(1)本发明的植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)HCS03-001,其发酵上清液和/或菌悬体可以抑制幽门螺杆菌的生长,同时,该植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)HCS03-001可与副干酪乳酪杆菌HCS17-040、罗伊氏粘液乳杆菌HCS02-001发生协同作用,更有效地抑制幽门螺杆菌的生长。
(2)应用本发明的功效产品可抑制口腔病菌生长,使幽门螺杆菌在口腔中失去生存的环境,不会破坏口腔中的环境,从根本上预防胃病的发生。
附图说明
图1为植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)HCS03-001的发酵上清液和菌悬液的抑菌效果结果,其中左上是MRS空白培养基,右上是甲硝唑阳性对照,左下是发酵上清液,右下是菌悬液。
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式,本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用,本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用,在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
在进一步描述本发明具体实施方式之前,应理解,本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案;还应当理解,本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案,而不是为了限制本发明的保护范围。
当实施例给出数值范围时,应理解,除非本发明另有说明,每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义,本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同意义。
本发明并不对原料的来源进行限定,如无如特殊说明,所采用的原料均为普通市售产品。
实施例1植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)HCS03-001发酵上清液与菌悬液的制备
将植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)HCS03-001活化后,按2%(v/v)的接种量接种于100mLMRS改良液体培养基中,37℃静置培养17h,得到发酵液,8000r/min,15min,4℃离心,分别收集上清液和菌体沉淀。上清液采用0.22μm的滤膜过滤两次除菌,菌体沉淀用无菌PBS洗涤两次并重悬,使菌体活菌数达到1×108CFU/mL;
所述的改良MRS培养基:蛋白胨10g/L,牛肉粉3g/L,酵母粉4g/L,磷酸氢二钾2g/L,柠檬酸2g/L,乙酸钠5g/L,葡萄糖20g/L,七水合硫酸镁0.58g/L,四水合硫酸锰0.25g/L,吐温-80 0.6g/L,调pH至6.5;115℃,30min灭菌。
实施例2副干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillus paracasei)HCS17-040发酵液制备
将副干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillus paracasei)HCS17-040活化后,将活化液按2%(v/v)的接种量接种于100mLMRS改良液体培养基中,37℃静置培养24h,得到发酵液。
所述的改良MRS培养基:蛋白胨10g/L,牛肉粉3g/L,酵母粉4g/L,磷酸氢二钾2g/L,柠檬酸2g/L,乙酸钠5g/L,葡萄糖20g/L,七水合硫酸镁0.58g/L,四水合硫酸锰0.25g/L,吐温-80 0.6g/L,调pH至5.5;115℃,30min灭菌。
实施例3罗伊氏粘液乳杆菌(Limosilactobacillus reuteri)HCS02-001发酵液制备
将罗伊氏粘液乳杆菌(Limosilactobacillus reuteri)HCS02-001活化后,将活化液按2%(v/v)的接种量接种于100mLMRS改良液体培养基中,37℃静置培养24h,得到发酵液。
所述的改良MRS培养基:蛋白胨10g/L,牛肉粉3g/L,酵母粉4g/L,磷酸氢二钾2g/L,柠檬酸2g/L,乙酸钠5g/L,葡萄糖20g/L,七水合硫酸镁0.58g/L,四水合硫酸锰0.25g/L,吐温-80 0.6g/L,调pH至5.5;115℃,30min灭菌。
实施例4幽门螺旋杆菌的制备
取100μL幽门螺旋杆菌菌液涂布于哥伦比亚血琼脂培养基中,微需氧环境中37℃培养48h,挑取纯化后的单菌落接入幽门螺旋杆菌液体培养基中培养。
实施例5对幽门螺旋杆菌抑菌率的测定
采用琼脂扩散法,分别用植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)HCS03-001发酵上清液、植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)HCS03-001菌悬液来测量菌株对幽门螺旋杆菌的抑菌活性,以浓度为0.05mg/mL的甲硝唑溶液为阳性对照,MRS改性液体培养基作为空白对照。取100μL幽门螺旋杆菌的菌悬液均匀涂布于含抗生素的哥伦比亚血琼脂平板上,每孔加入待测液体100μL(植物乳植杆菌HCS03-001的发酵上清液、植物乳植杆菌HCS03-001的菌悬液、阳性对照和空白对照)。将接好发酵液的平板置于37℃、微需氧环境下培养48h,培养结束后,用游标卡尺测量抑菌圈直径。
幽门螺旋杆菌抑菌率的计算公式为:幽门螺旋杆菌抑制率(%)=(Rx/Ry)×100%。
式中:Rx表示待测液体对幽门螺旋杆菌的抑菌圈直径(mm);Ry表示阳性对照对幽门螺旋杆菌的抑菌圈直径(mm)。
结果如图1和表1所示。
表1
由上可知,本发明的植物乳植杆菌HCS03-001的发酵上清液和菌悬液均能有效抑制幽门螺旋杆菌的生长,抑制率达到69.55-78.78%。
实施例6乳杆菌组合物
所述乳杆菌组合物中植物乳植杆菌HCS03-001、副干酪乳酪杆菌HCS17-040和罗伊氏粘液乳杆菌HCS02-001的活菌数比为5:1:1;
将植物乳植杆菌HCS03-001、副干酪乳酪杆菌HCS17-040和罗伊氏粘液乳杆菌HCS02-001的发酵液混合均匀,即得所述乳杆菌组合物。
实施例7乳杆菌组合物
所述乳杆菌组合物中植物乳植杆菌HCS03-001、副干酪乳酪杆菌HCS17-040和罗伊氏粘液乳杆菌HCS02-001的活菌数比为6:2:1;
制备方法同实施例6。
实施例8乳杆菌组合物
所述乳杆菌组合物中植物乳植杆菌HCS03-001、副干酪乳酪杆菌HCS17-040和罗伊氏粘液乳杆菌HCS02-001的活菌数比为7:3:1;
制备方法同实施例6。
实施例9乳杆菌组合物
所述乳杆菌组合物中植物乳植杆菌HCS03-001、副干酪乳酪杆菌HCS17-040和罗伊氏粘液乳杆菌HCS02-001的活菌数比为8:4:1;
制备方法同实施例6。
实施例10乳杆菌组合物
所述乳杆菌组合物中植物乳植杆菌HCS03-001、副干酪乳酪杆菌HCS17-040和罗伊氏粘液乳杆菌HCS02-001的活菌数比为9:5:1;
制备方法同实施例6。
对比例1乳杆菌组合物
本对比例与实施例8的区别在于,所述乳杆菌组合物仅含植物乳植杆菌HCS03-001的发酵液。
对比例2乳杆菌组合物
本对比例与实施例8的区别在于,所述乳杆菌组合物仅含副干酪乳酪杆菌HCS17-040的发酵液。
对比例3乳杆菌组合物
本对比例与实施例8的区别在于,所述乳杆菌组合物仅含罗伊氏粘液乳杆菌HCS02-001的发酵液。
对比例4乳杆菌组合物
本对比例与实施例8的区别在于,乳杆菌的配比不同。
具体为:所述乳杆菌组合物中植物乳植杆菌HCS03-001、副干酪乳酪杆菌HCS17-040和罗伊氏粘液乳杆菌HCS02-001的活菌数比为7:1:3;
上述乳杆菌组合物中活菌总量均为1×108CFU/mL;参照实施例4测定不同乳杆菌组合物对幽门螺旋杆菌的抑菌效果。
结果如表2所示。
表2
由上可知,本发明的乳杆菌组合物对幽门螺旋杆菌的生长具有明显的抑制作用,且通过对比可知,实施例7-9利用植物乳植杆菌和副干酪乳酪杆菌HCS17-040、罗伊氏粘液乳杆菌HCS02-001配合使用,相比单一的植物乳植杆菌、副干酪乳酪杆菌HCS17-040或罗伊氏粘液乳杆菌HCS02-001具有更佳的抑制幽门螺旋杆菌生长的效果,产生了协同增效作用。
Claims (5)
1.一种抗幽门螺杆菌的乳杆菌组合物,其特征在于,由植物乳植杆菌HCS03-001、副干酪乳酪杆菌和罗伊氏粘液乳杆菌组成,所述植物乳植杆菌HCS03-001、副干酪乳酪杆菌和罗伊氏粘液乳杆菌的活菌数比为6-8:2-4:1;
植物乳植杆菌HCS03-001为植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)HCS03-001,保藏号为CGMCC No.16258;
所述副干酪乳酪杆菌为副干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillus paracasei)HCS17-040,保藏号为CGMCC No.19747;所述罗伊氏粘液乳杆菌为罗伊氏粘液乳杆菌(Limosilactobacillus reuteri)HCS02-001,保藏号为CGMCC No.19746;
所述乳杆菌组合物中的活菌数≥1×108CFU/mL。
2.根据权利要求1所述的乳杆菌组合物,其特征在于,所述植物乳植杆菌HCS03-001、副干酪乳酪杆菌和罗伊氏粘液乳杆菌的活菌数比为7:3:1。
3.权利要求1-2任一项所述的乳杆菌组合物的制备方法,其特征在于,将配方量的植物乳植杆菌、副干酪乳酪杆菌和罗伊氏粘液乳杆菌混合均匀,即得所述的乳杆菌组合物。
4.权利要求1-2任一项所述的乳杆菌组合物在制备抗幽门螺杆菌产品中的应用。
5.一种抗幽门螺杆菌的产品,其特征在于,包含权利要求1-2任一项所述的乳杆菌组合物。
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