CN116712421A - 枸杞酰胺a在制备防治糖尿病药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及枸杞酰胺A在制备防治糖尿病药物中的应用，构建了基于α‑葡萄糖苷酶、二肽基肽酶‑Ⅳ（Dipeptidyl peptidase 4,DPP‑4）和过氧化物酶体增殖物激活受体‑γ（peroxisome proliferators‑activated receptor‑γ，PPAR‑γ）三种靶标的降糖活性筛选体系，通过实验研究首次发现枸杞酰胺A具有显著的α‑葡萄糖苷酶抑制活性，其作用强度为阳性药阿卡波糖的13.4倍，并能抑制DPP‑4，激活PPAR‑γ，具有三重靶标的降糖作用，为研制新型多靶点糖尿病预防和治疗药物提供了新的化学结构类型，有广阔的开发应用前景，且可方便制备成多种药物剂型，方便临床使用，经济和社会效益显著。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及枸杞酰胺A在制备防治糖尿病药物中的应用。
背景技术
随着人们饮食结构及生活方式的改变等多因素影响，2型糖尿病(type 2diabetesmellitus,T2DM)的发病率在世界各地急剧上升。目前临床上用于治疗T2DM类药物多为针对单一靶点设计，如磺酰脲类、双胍类、α-葡萄糖苷酶抑制剂和噻唑烷二酮类等，虽具有较好的降糖效果，但长期使用可导致低血糖、脂质聚积和肝肾组织损伤等副作用，部分需要联合用药，患者的治疗成本也相应增加，在一定程度上限制了其临床应用。T2DM的发病机制涉及多种酶、受体等作用靶点，因此，研制高效低毒的多靶点药物是未来糖尿病治疗领域的一个重要研究方向。
枸杞子为茄科枸杞属植物宁夏枸杞(Lycium barbarum L.)的干燥成熟果实，其味甘、性平，归肝、肾经，有滋肝补肾、益精明目之功效，在治疗糖尿病方面具有重要的药用价值，但目前对其降糖活性成分报道仅限于枸杞多糖、枸杞总黄酮类成分。枸杞酰胺A(lyciumamide A，LyA)是从枸杞子中分离得到的新型酚类酰胺生物碱二聚体。研究表明，枸杞酰胺A具有显著的抗氧化和神经保护活性，但并未见有枸杞酰胺A预防或治疗2型糖尿病(T2DM)方面的公开报道。
发明内容
针对现有技术存在的上述空白，本发明开展了枸杞酰胺A的降糖活性评价，构建了基于α-葡萄糖苷酶、二肽基肽酶-Ⅳ(Dipeptidyl peptidase 4,DPP-4)和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferators-activated receptor-γ，PPAR-γ)三种靶标的降糖活性筛选体系。结果显示枸杞酰胺A具有显著的α-葡萄糖苷酶和DPP-4抑制活性，并能激活PPAR-γ受体。故此，本发明首次公开了枸杞酰胺A在在制备预防和/或治疗糖尿病药物中的应用。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种枸杞酰胺A在制备防治糖尿病药物中的应用，所述的枸杞酰胺A的分子结构式为：
制备方法是：将干燥的枸杞子用乙醇冷凝回流提取，过滤，提取液经减压浓缩成浸膏；浸膏经大孔吸附树脂柱，依次用水、乙醇、丙酮洗脱，乙醇部位用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯部位浸膏浸膏；
乙酸乙酯部位浸膏用等量的100～200目硅胶拌样，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱，根据薄层检识情况，合并相同流份，共分离得到11个组分Fr.A～K；其中，组分Fr.H经ODS柱，用甲醇/水梯度洗脱，得到6个亚组分Fr.H1–Fr.H6；亚组分Fr.H2经半制备液相，以47％甲醇洗脱，收集tR 39.2min的洗脱液，浓缩、干燥，得枸杞酰胺A。
所述的药物为含有枸杞酰胺A的药物，包括其药学上可接受的盐、卤代物在预防和/或治疗糖尿病药物；
所述的药物为将枸杞酰胺A和药学上可接受的载体制备成的片剂、胶囊剂、注射剂、粉针剂、颗粒剂、散剂、丸剂、脂肪乳剂、微囊、滴丸、软膏剂、缓释剂或控速释剂型的药物。
本发明公开了枸杞酰胺A在制备防治糖尿病药物中的应用，通过实验研究首次发现枸杞酰胺A具有显著的α-葡萄糖苷酶抑制活性，其作用强度为阳性药阿卡波糖的13.4倍，并能抑制DPP-4，激活PPAR-γ，具有三重靶标的降糖作用，为研制新型多靶点糖尿病预防和治疗药物提供了新的化学结构类型，有广阔的开发应用前景，且可方便制备成多种药物剂型，方便临床使用，经济和社会效益显著。
具体实施方式
以下结合实施例和具体情况对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
实施例1：
本发明所采用的技术方案是：一种枸杞酰胺A，是由宁夏枸杞成熟的果实中制备得到，分子结构式为：
制备方法是：将干燥的枸杞子15kg用体积浓度95％乙醇冷凝回流提取3次，乙醇每次用量为枸杞子重量体积的3-5倍，每次2h，重量体积是指固体以kg计，液体以L计，过滤，合并3次提取液，提取液经减压浓缩至相当于含生药量0.5g/mL；提取浓缩液提取液加于2倍体积的大孔吸附树脂柱上，按4BV/h的流速进行吸附，先用8倍量的蒸馏水、再用4BV、体积浓度95％乙醇，最后用3BV的丙酮洗脱，收集95％乙醇洗脱液，减压浓缩成浸膏；
95％乙醇部位浸膏1kg采用乙酸乙酯萃取，每次2.5L，时间为1h，重复萃取8次，合并萃取液，减压浓缩成浸膏；
乙酸乙酯萃取部位总浸膏(50g)用等量的100～200目硅胶拌样，依次用体积比为100:0、50:1、30:1、20:1、10:1、5:1、1:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱，每一梯度使用溶剂5～10L，流速为10～15mL/min，每500mL为一流份，各流份减压浓缩，根据硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比为2:1的石油醚-乙酸乙酯和体积比为10:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，在紫外灯254nm检测分析，根据薄层斑点合并相同流份，共分收集11个组分Fr.A～K；组分Fr.H经ODS柱，用体积比10:90、30:70、50:50、70:30、90:10的甲醇-水梯度洗脱，每个梯度使用溶剂5L，流速为10～15mL/min，得到5个亚组分Fr.H1–Fr.H5；亚组分Fr.H2经半制备液相，以体积浓度47％甲醇洗脱，流速为7mL/min，收集洗脱时间tR39.2min的洗脱液，浓缩、干燥，得枸杞酰胺A(20.5mg)。
实施例2：
本发明一种枸杞酰胺A，制备方法是：将干燥的枸杞子15kg用体积浓度95％乙醇冷凝回流提取3次，乙醇每次用量为枸杞子重量体积的4倍，每次2h，过滤，合并3次提取液，提取液经减压浓缩至相当于含生药量0.5g/mL；提取浓缩液提取液加于2倍体积的大孔吸附树脂柱上，按4BV/h的流速进行吸附，先用8倍量的蒸馏水、再用4BV、体积浓度95％乙醇，最后用3BV的丙酮洗脱，收集95％乙醇洗脱液，减压浓缩成浸膏；
95％乙醇部位浸膏1kg采用乙酸乙酯萃取，每次2.5L，时间为1h，重复萃取8次，合并萃取液，减压浓缩成浸膏；
乙酸乙酯萃取部位总浸膏用等量的200目硅胶拌样，依次用体积比为100:0、50:1、30:1、20:1、10:1、5:1、1:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱，每一梯度使用溶剂8L，流速为12mL/min，每500mL为一流份，各流份减压浓缩，根据硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比为2:1的石油醚-乙酸乙酯和体积比为10:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，在紫外灯254nm检测分析，根据薄层斑点合并相同流份，共分收集11个组分Fr.A～K；组分Fr.H经ODS柱，用体积比10:90、30:70、50:50、70:30、90:10的甲醇-水梯度洗脱，每个梯度使用溶剂5L，流速为12mL/min，得到5个亚组分Fr.H1–Fr.H5；亚组分Fr.H2经半制备液相，以体积浓度47％甲醇洗脱，流速为7mL/min，收集洗脱时间tR 39.2min的洗脱液，浓缩、干燥，得枸杞酰胺A。
实施例3：
本发明一种枸杞酰胺A，制备方法是：将干燥的枸杞子15kg用体积浓度95％乙醇冷凝回流提取3次，乙醇每次用量为枸杞子重量体积的3倍，每次2h，过滤，合并3次提取液，提取液经减压浓缩至相当于含生药量0.5g/mL；提取浓缩液提取液加于2倍体积的大孔吸附树脂柱上，按4BV/h的流速进行吸附，先用8倍量的蒸馏水、再用4BV、体积浓度95％乙醇，最后用3BV的丙酮洗脱，收集95％乙醇洗脱液，减压浓缩成浸膏；
95％乙醇部位浸膏1kg采用乙酸乙酯萃取，每次2.5L，时间为1h，重复萃取8次，合并萃取液，减压浓缩成浸膏；
乙酸乙酯萃取部位总浸膏用等量的100目硅胶拌样，依次用体积比为100:0、50:1、30:1、20:1、10:1、5:1、1:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱，每一梯度使用溶剂5L，流速为10mL/min，每500mL为一流份，各流份减压浓缩，根据硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比为2:1的石油醚-乙酸乙酯和体积比为10:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，在紫外灯254nm检测分析，根据薄层斑点合并相同流份，共分收集11个组分Fr.A～K；组分Fr.H经ODS柱，用体积比10:90、30:70、50:50、70:30、90:10的甲醇-水梯度洗脱，每个梯度使用溶剂5L，流速为10mL/min，得到5个亚组分Fr.H1–Fr.H5；亚组分Fr.H2经半制备液相，以体积浓度47％甲醇洗脱，流速为7mL/min，收集洗脱时间tR 39.2min的洗脱液，浓缩、干燥，得枸杞酰胺A。
实施例4：
本发明一种枸杞酰胺A，制备方法是：将干燥的枸杞子15kg用体积浓度95％乙醇冷凝回流提取3次，乙醇每次用量为枸杞子重量体积的5倍，每次2h，重量体积是指固体以kg计，液体以L计，过滤，合并3次提取液，提取液经减压浓缩至相当于含生药量0.5g/mL；提取浓缩液提取液加于2倍体积的大孔吸附树脂柱上，按4BV/h的流速进行吸附，先用8倍量的蒸馏水、再用4BV、体积浓度95％乙醇，最后用3BV的丙酮洗脱，收集95％乙醇洗脱液，减压浓缩成浸膏；
95％乙醇部位浸膏1kg采用乙酸乙酯萃取，每次2.5L，时间为1h，重复萃取8次，合并萃取液，减压浓缩成浸膏；
乙酸乙酯萃取部位总浸膏用等量的100～200目硅胶拌样，依次用体积比为100:0、50:1、30:1、20:1、10:1、5:1、1:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱，每一梯度使用溶剂10L，流速为15mL/min，每500mL为一流份，各流份减压浓缩，根据硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比为2:1的石油醚-乙酸乙酯和体积比为10:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，在紫外灯254nm检测分析，根据薄层斑点合并相同流份，共分收集11个组分Fr.A～K；组分Fr.H经ODS柱，用体积比10:90、30:70、50:50、70:30、90:10的甲醇-水梯度洗脱，每个梯度使用溶剂5L，流速为15mL/min，得到5个亚组分Fr.H1–Fr.H5；亚组分Fr.H2经半制备液相，以体积浓度47％甲醇洗脱，流速为7mL/min，收集洗脱时间tR 39.2min的洗脱液，浓缩、干燥，得枸杞酰胺A。
本发明枸杞酰胺A在制备防治糖尿病药物中的应用，所述的药物为含有枸杞酰胺A的药物，包括其药学上可接受的盐、卤代物在预防和/或治疗糖尿病药物；所述的药物为将枸杞酰胺A和药学上可接受的载体制备成的片剂、胶囊剂、注射剂、粉针剂、颗粒剂、散剂、丸剂、脂肪乳剂、微囊、滴丸、软膏剂、缓释剂或控速释剂型的药物。
本发明枸杞酰胺A是从枸杞子中制备得到，具有显著的α-葡萄糖苷酶抑制活性，其作用强度为阳性药阿卡波糖的13.4倍，并能抑制DPP-4，激活PPAR-γ，具有三重靶标的降糖作用，经实验取得了非常好的有益技术效果，有关资料如下(以实施例2为例)：
一、仪器与试药
Bruker AVANCEⅢ500核磁共振仪(TMS内标)(Bruker)，用Nicolet is10Microscope Spectrometer(Thermo Scientific,USA)红外光谱仪，用Bruker maxis HDmass spectrometer高分辨质谱仪，Shimadzu UV-2401PC apparatus紫外光谱仪，WatersAlliance系列2695高效液相系统，配备2998型二极管阵列检测器，Empower3色谱数据工作站，LC50型高压制备液相色谱仪，UV200型紫外检测器[赛谱锐思(北京)科技有限公司]，YMC-Pack ODS-A色谱柱(250×10mm.D.S-5mm,12mm)(YMC有限公司)，其余有N-1100型旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)，A-1000S型水流抽气机(上海爱朗仪器有限公司)，N-1111型冷冻水循环装置(上海爱朗仪器有限公司)，FDU-2110型冷冻干燥机(上海爱朗仪器有限公司)，DFZ-60508型真空干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)，AB204-N万分之一精密分析天平(METTLER TOLEDO)。
柱层析填料Diaion HP-20、MCI Gel CHP-20(日本三菱化学公司)，Toyopearl HW-40(日本TOSOH公司)，Sephadex LH-20(Parmacia Biotech公司)，柱层析所用硅胶H(100-200目、200-300目)，薄层色谱硅胶(GF254)为青岛海洋化工厂生产，所用色谱纯试剂位天津四友精细化学品有限公司生产，所用分析纯试剂为北京化工厂和天津第三化学试剂厂生产。枸杞子采自于宁夏，鉴定为宁夏枸杞(Lycium barbarum L.)的干燥成熟果实。
二、结构鉴定
本发明枸杞酰胺A为白色或淡黄色粉末。
枸杞酰胺A的波谱数据：分子式C36H36N2O8。1H NMR(CD3OD,500MHz)δH 7.06(2H,d,J＝8.4Hz,H-2′,6′),6.61(2H,d,J＝8.4Hz,H-3′,5′),6.85(2H,d,J＝8.3Hz,H-2″′,6″′),6.73(2H,d,J＝8.3Hz,H-3″′,5″′),7.29(1H,d,J＝1.2Hz,H-2),6.73(1H,d,J＝8.0Hz,H-5),7.04(1H,1H,dd,J＝8.0,1.2Hz,H-6),7.23(1H,d,J＝2.0Hz,H-2″),6.72(1H,d,J＝8.0Hz,H-5″),7.01(1H,d,J＝8.0,2.0Hz,H-6″),7.47(1H,d,J＝15.7Hz,H-7″),6.51(1H,d,J＝15.7Hz,H-8″),7.26(1H,s,H-7),3.47(2H,overlap,H-8′),2.76(2H,t,J＝6.8Hz,H-7′),3.47(2H,overlap,H-8″′),2.65(2H,t,J＝6.8Hz,H-7″′),3.66(3H,s,3-OCH3),3.90(3H,s,3″-OCH3)；13C NMR(CD3OD,125MHz)δC 168.7(C-9″),165.5(C-9),156.9(C-4′),156.8(C-4″′),150.4(C-3″),149.6(C-4),148.9(C-3),147.5(C-4″),141.5(C-8),141.1(C-7″),131.9(C-1″),131.2(C-1″′),130.8(C-1′),130.7(C-2′,6′),130.7(C-2″′,6″′),126.3(C-6),125.4(C-1),122.2(C-6″),121.0(C-8″),116.3(C-3′,5′),116.3(C-3″′,5″′),116.3(C-5),115.2(C-5″),113.7(C-2),112.5(C-2″),56.4(3″-OCH3),56.0(3-OCH3),42.5(C-8′),42.2(C-8″′),35.7(C-7′),35.5(C-7″′)，命名为枸杞酰胺A，分子结构式为：
三、活性实验
1、枸杞酰胺A的α-葡萄糖苷酶抑制活性实验
实验方法：
α-葡萄糖苷酶抑制剂活性筛选可通过酶与其底物4-Nitrophenylα-D-glucopyranoside(PNPG，麦芽糖类似物)的体外酶促反应来检测。α-葡萄糖苷酶加入酶反应的底物后，底物被酶催化分解为对硝基苯酚(PNP)和葡萄糖。PNP是一种有色物质，在400nm左右有最大吸收，可通过酶标仪来测定，根据OD值算出样品的抑制活性。将样品(终浓度50μM开始梯度稀释)与酶溶液、缓冲液、底物(终浓度1mM)顺序加入96孔酶标板，充分混匀，设置两孔重复。同时设置不含药物的空白对照和阳性对照药阿卡波糖(Acarbose)。37℃孵育50min，酶标仪测定405nm处的OD值，计算得出α-葡萄糖苷酶活性的抑制率。IC50按Reed&Muench法计算。
实验结果：
表1枸杞酰胺A对α-葡萄糖苷酶酶活性抑制活性结果
| 样品 | IC50 |
| Acarbose | 169.78±7.41μM |
| 枸杞酰胺A | 12.652±0.493μM |
实验结果如表1所示，枸杞酰胺A具有显著的α-葡萄糖苷酶抑制活性，其IC50为12.652±0.493μM，与阳性对照药阿卡波糖(IC50＝169.78±7.41μM)相比，其作用强度为阿卡波糖的13.4倍。
2、枸杞酰胺A的DPP-4抑制活性实验
实验方法：
实验设有全酶组、空白组、阳性对照组及样品组，每组设2个重复孔。在孔中依次加入Assay Buffer、DPP-4酶、样品和底物(Gly-Pro-Aminomethylcoumarin)。全酶组中用溶剂代替样品，空白组中分别用Assay buffer代替DPP4酶和用溶剂代替样品。阳性对照组西他列汀(sitagliptin)筛选浓度从100nM开始2倍稀释，待测样品的筛选浓度从50μM开始2倍稀释。加样结束后，盖上盖子，在37℃孵育30分钟。在激发光波长350-360nm，发射光波长450-465nm处读取荧光值。阳性药为西他列汀(Sitagliptin)。IC50按Reed&Muench法计算。
实验结果：
表2枸杞酰胺A对DPP-4抑制活性结果
| 样品 | IC50 |
| Sitagliptin | 23.12±0.30nM |
| 枸杞酰胺A | 47.13±0.87μM |
实验结果如表2所示，枸杞酰胺A具有显著的DPP-4抑制活性，其IC50为47.13±0.87μM。
3、枸杞酰胺A的PPAR-γ激活活性实验
实验方法：
PPAR-γ的激活在HEK293T细胞中进行。将HEK293T细胞以每孔2×104个细胞的密度接种到96孔板中18小时，并在6小时内用100ng质粒表达的靶基因和10ngβ-半乳糖苷酶报告基因转染，以使用lip2000转染试剂使转染效率正常化。然后，用化合物处理细胞，使用萤光素酶报告基因测定试剂盒测量萤光素酶活性。罗格列酮(rosiglitazone)作为阳性对照。EC50按Reed&Muench法计算。
实验结果：
表3枸杞酰胺A对PPAR-γ激活活性结果
| 样品 | EC50 |
| Rosiglitazone | 0.129±0.05μM |
| 枸杞酰胺A | 10.09±0.93μM |
实验结果如表3所示，枸杞酰胺A具有显著的PPAR-γ激活活性，其EC50为10.09±0.93μM。尽管其作用强度弱于阳性药罗格列酮(EC50＝0.129±0.05μM)，但罗格列酮为PPAR-γ完全激动剂，虽具有较好的降糖效果，但可导致患者成脂性增加和肥胖，而PPAR部分激活剂，目前研究已经证实在保留类似罗格列酮胰岛素增敏作用的同时，可减少肥胖和水肿等诸多罗格列酮药物的副作用。
在上述对实施例2作实验的同时，还对其它实施例也做了相同的实验，均取得了相同或相近似的结果，这里不一一重述。
由上述可以看出，本发明的有益效果：
1、本发明对枸杞酰胺A发掘了新的医疗用途，开拓了枸杞酰胺A一个新的应用领域。提供了枸杞酰胺A在制备预防和/或治疗糖尿病的药物中的应用。
2、本发明的枸杞酰胺A来源丰富，制备工艺简单，并可做成片剂、胶囊、散剂、颗粒、注射剂等，使用方便。
3、通过活性实验研究发现，本发现的产品枸杞酰胺A具有显著的α-葡萄糖苷酶抑制活性，其作用强度为阳性药阿卡波糖的13.4倍，并能抑制DPP-4，激活PPAR-γ，具有三重靶标的降糖作用。本发明为研制新型多靶点糖尿病预防和治疗药物提供了新的结构类型，具有广阔的开发应用前景，经济和社会效益显著。
以上实施实例表明枸杞酰胺A具有α-葡萄糖苷酶/DPP-4/PPAR-γ三重靶标的降糖活性，因而可以用来预防和/或治疗糖尿病。因此，本发明为研制新型多靶点防治糖尿病药物提供了新的化学结构类型，具有很好的开发应用前景。
以上所述仅为本发明最佳的实施例，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种枸杞酰胺A在制备防治糖尿病药物中的应用，所述的枸杞酰胺A是由宁夏枸杞成熟的果实中制备得到，分子结构式为：
制备方法是：将干燥的枸杞子15kg用体积浓度95％乙醇冷凝回流提取3次，乙醇每次用量为枸杞子重量体积的3-5倍，每次2h，重量体积是指固体以kg计，液体以L计，过滤，合并3次提取液，提取液经减压浓缩至相当于含生药量0.5g/mL；提取浓缩液提取液加于2倍体积的大孔吸附树脂柱上，按4BV/h的流速进行吸附，先用8倍量的蒸馏水、再用4BV、体积浓度95％乙醇，最后用3BV的丙酮洗脱，收集95％乙醇洗脱液，减压浓缩成浸膏；
95％乙醇部位浸膏1kg采用乙酸乙酯萃取，每次2.5L，时间为1h，重复萃取8次，合并萃取液，减压浓缩成浸膏；
乙酸乙酯萃取部位总浸膏用等量的100～200目硅胶拌样，依次用体积比为100:0、50:1、30:1、20:1、10:1、5:1、1:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱，每一梯度使用溶剂5～10L，流速为10～15mL/min，每500mL为一流份，各流份减压浓缩，根据硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比为2:1的石油醚-乙酸乙酯和体积比为10:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，在紫外灯254nm检测分析，根据薄层斑点合并相同流份，共分收集11个组分Fr.A～K；组分Fr.H经ODS柱，用体积比10:90、30:70、50:50、70:30、90:10的甲醇-水梯度洗脱，每个梯度使用溶剂5L，流速为10～15mL/min，得到5个亚组分Fr.H1–Fr.H5；亚组分Fr.H2经半制备液相，以体积浓度47％甲醇洗脱，流速为7mL/min，收集洗脱时间tR 39.2min的洗脱液，浓缩、干燥，得枸杞酰胺A。
2.根据权利要求1所述的枸杞酰胺A在制备防治糖尿病药物中的应用，其特征在于，所述的枸杞酰胺A的制备方法是：
将干燥的枸杞子15kg用体积浓度95％乙醇冷凝回流提取3次，乙醇每次用量为枸杞子重量体积的4倍，每次2h，过滤，合并3次提取液，提取液经减压浓缩至相当于含生药量0.5g/mL；提取浓缩液提取液加于2倍体积的大孔吸附树脂柱上，按4BV/h的流速进行吸附，先用8倍量的蒸馏水、再用4BV、体积浓度95％乙醇，最后用3BV的丙酮洗脱，收集95％乙醇洗脱液，减压浓缩成浸膏；
95％乙醇部位浸膏1kg采用乙酸乙酯萃取，每次2.5L，时间为1h，重复萃取8次，合并萃取液，减压浓缩成浸膏；
乙酸乙酯萃取部位总浸膏用等量的200目硅胶拌样，依次用体积比为100:0、50:1、30:1、20:1、10:1、5:1、1:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱，每一梯度使用溶剂8L，流速为12mL/min，每500mL为一流份，各流份减压浓缩，根据硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比为2:1的石油醚-乙酸乙酯和体积比为10:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，在紫外灯254nm检测分析，根据薄层斑点合并相同流份，共分收集11个组分Fr.A～K；组分Fr.H经ODS柱，用体积比10:90、30:70、50:50、70:30、90:10的甲醇-水梯度洗脱，每个梯度使用溶剂5L，流速为12mL/min，得到5个亚组分Fr.H1–Fr.H5；亚组分Fr.H2经半制备液相，以体积浓度47％甲醇洗脱，流速为7mL/min，收集洗脱时间tR 39.2min的洗脱液，浓缩、干燥，得枸杞酰胺A。
3.根据权利要求1所述的枸杞酰胺A在制备防治糖尿病药物中的应用，其特征在于，所述的枸杞酰胺A的制备方法是：
将干燥的枸杞子15kg用体积浓度95％乙醇冷凝回流提取3次，乙醇每次用量为枸杞子重量体积的3倍，每次2h，过滤，合并3次提取液，提取液经减压浓缩至相当于含生药量0.5g/mL；提取浓缩液提取液加于2倍体积的大孔吸附树脂柱上，按4BV/h的流速进行吸附，先用8倍量的蒸馏水、再用4BV、体积浓度95％乙醇，最后用3BV的丙酮洗脱，收集95％乙醇洗脱液，减压浓缩成浸膏；
95％乙醇部位浸膏1kg采用乙酸乙酯萃取，每次2.5L，时间为1h，重复萃取8次，合并萃取液，减压浓缩成浸膏；
乙酸乙酯萃取部位总浸膏用等量的100目硅胶拌样，依次用体积比为100:0、50:1、30:1、20:1、10:1、5:1、1:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱，每一梯度使用溶剂5L，流速为10mL/min，每500mL为一流份，各流份减压浓缩，根据硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比为2:1的石油醚-乙酸乙酯和体积比为10:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，在紫外灯254nm检测分析，根据薄层斑点合并相同流份，共分收集11个组分Fr.A～K；组分Fr.H经ODS柱，用体积比10:90、30:70、50:50、70:30、90:10的甲醇-水梯度洗脱，每个梯度使用溶剂5L，流速为10mL/min，得到5个亚组分Fr.H1–Fr.H5；亚组分Fr.H2经半制备液相，以体积浓度47％甲醇洗脱，流速为7mL/min，收集洗脱时间tR 39.2min的洗脱液，浓缩、干燥，得枸杞酰胺A。
4.根据权利要求1所述的枸杞酰胺A在制备防治糖尿病药物中的应用，其特征在于，所述的枸杞酰胺A的制备方法是：
将干燥的枸杞子15kg用体积浓度95％乙醇冷凝回流提取3次，乙醇每次用量为枸杞子重量体积的5倍，每次2h，重量体积是指固体以kg计，液体以L计，过滤，合并3次提取液，提取液经减压浓缩至相当于含生药量0.5g/mL；提取浓缩液提取液加于2倍体积的大孔吸附树脂柱上，按4BV/h的流速进行吸附，先用8倍量的蒸馏水、再用4BV、体积浓度95％乙醇，最后用3BV的丙酮洗脱，收集95％乙醇洗脱液，减压浓缩成浸膏；
95％乙醇部位浸膏1kg采用乙酸乙酯萃取，每次2.5L，时间为1h，重复萃取8次，合并萃取液，减压浓缩成浸膏；
乙酸乙酯萃取部位总浸膏用等量的100～200目硅胶拌样，依次用体积比为100:0、50:1、30:1、20:1、10:1、5:1、1:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱，每一梯度使用溶剂10L，流速为15mL/min，每500mL为一流份，各流份减压浓缩，根据硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别以体积比为2:1的石油醚-乙酸乙酯和体积比为10:1的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，在紫外灯254nm检测分析，根据薄层斑点合并相同流份，共分收集11个组分Fr.A～K；组分Fr.H经ODS柱，用体积比10:90、30:70、50:50、70:30、90:10的甲醇-水梯度洗脱，每个梯度使用溶剂5L，流速为15mL/min，得到5个亚组分Fr.H1–Fr.H5；亚组分Fr.H2经半制备液相，以体积浓度47％甲醇洗脱，流速为7mL/min，收集洗脱时间tR 39.2min的洗脱液，浓缩、干燥，得枸杞酰胺A。
5.根据权利要求1所述的枸杞酰胺A在制备防治糖尿病药物中的应用，其特征在于，所述的药物为含有枸杞酰胺A的药物，包括其药学上可接受的盐、卤代物在预防和/或治疗糖尿病药物。
6.根据权利要求1所述的枸杞酰胺A在制备防治糖尿病药物中的应用，其特征在于，所述的药物为将枸杞酰胺A和药学上接受的载体制备成的片剂、胶囊剂、注射剂、粉针剂、颗粒剂、散剂、丸剂、脂肪乳剂、微囊、滴丸、软膏剂、缓释剂或控速释剂型的药物。
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Country Status (1)
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2023
- 2023-04-20 CN CN202310425006.2A patent/CN116712421A/zh active Pending
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