CN116685307A - 卷曲乳杆菌菌株和/或包含其的组合物的美容、营养或皮肤病学用途 - Google Patents
卷曲乳杆菌菌株和/或包含其的组合物的美容、营养或皮肤病学用途 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及卷曲乳杆菌菌株和/或包含该菌株的组合物用于维持和/或增加皮肤和/或粘膜的细胞外基质分子的表达,以及特别是用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的生物力学特性,优选健康皮肤和/或健康粘膜的紧致度和/或弹性和/或密度的美容、营养和/或药物、特别是皮肤病学用途。
Description
本发明涉及卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)菌株和/或包含该菌株的组合物用于维持和/或增加皮肤和/或粘膜的细胞外基质分子的表达,以及特别是用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的生物力学特性,优选健康皮肤和/或健康粘膜的紧致度和/或弹性和/或密度,甚至更优选健康皮肤和/或健康粘膜的紧致度和/或弹性的美容、营养和/或药物、特别是皮肤病学用途。
皮肤的结构和性质由于复杂的生物、物理和生物力学过程而发生变化,导致真皮损失弹性、紧致度和密度,特别是由于细胞外基质分子的变化。
称为ECM的皮肤和粘膜的细胞外基质由以下三种类型分子的组合组成:
-纤维:胶原和弹性蛋白,
-糖蛋白:不如纤维丰富,但在细胞粘附中具有更重要的作用,诸如纤连蛋白和层粘连蛋白,
-构成填充基质的凝胶的高度水合的多糖。该基质在维持皮肤的结构和性质,特别是真皮的弹性、紧致度和密度方面起主要作用。
由于这些ECM分子主要由成纤维细胞和角质形成细胞合成,因此所述细胞的更新对于维持皮肤的生物力学特性至关重要。
弹性蛋白是一种通过与其他分子诸如原纤蛋白和MAGP(微原纤维相关糖蛋白)组合而作为弹性纤维组分的蛋白质。
弹性蛋白以可溶性原弹性蛋白的形式合成,其在通过赖氨酰氧化酶(LOX)的分子内和分子间交联及其在微纤维上的沉积之后获得其物理化学性质(不溶性,弹性)。
在皮肤中,功能性弹性纤维由真皮成纤维细胞形成,但是在表皮细胞中也发现了产生弹性纤维所必需的一些组分。
尽管皮肤的总弹性蛋白含量可能会增加,但在成人生活中弹性纤维的周转率非常低。在新生儿中,微纤维并未全部被弹性蛋白完全覆盖,而是在青春期左右变得如此。从40岁开始,纤维上出现包涵体,在女性中更为常见,随后在真皮表皮连接(DEJ)下的弹性纤维碎裂并消失。这种DEJ下的碎裂和/或消失表现为皮肤弹性降低和皱纹形成。在光老化期间中观察到非功能性弹性纤维的合成,但这种增加伴随着DEJ下弹性纤维的加速减少。
胶原是细胞外基质(ECM)的组成蛋白,大量存在于脊椎动物组织中。它是一个包括29种不同类型的大家庭。
在各种类型的胶原中,特别是在许多人体组织诸如肌腱、韧带、角膜和皮肤中的I型胶原,更精确地位于真皮中。I型胶原是皮肤的主要胶原。
纤维状胶原由原胶原纤维形成,然后组装成网络并通过交联稳定。正是胶原赋予组织机械强度,因此有助于保持它们的紧致度。
在皮肤老化期间中,合成胶原的速率总体降低,并且其降解加快,这导致紧致度降低。当皮肤尤其受到UV线照射时,这种现象甚至更加明显。这被称为光生物老化。
因此,细胞外基质的分子是美容领域众多研究和创新的主题,用于开发和改进旨在维持皮肤生物力学特性的美容活性成分。
近年来,先进的基因组测序技术揭示了数以百万计的微生物(细菌、病毒、真菌)生活在皮肤上并构成了皮肤微生物群,也称为皮肤菌群。这些微生物的大多数(这种微生物群)是共生的并且对皮肤有益。它们与皮肤细胞共生并相互作用,一些与皮肤形成共生关系。它们通过合成或刺激皮肤防御分子的合成来参与保护皮肤。它们在损伤和对抗炎症的情况下参与修复皮肤。这些有益的共生微生物分泌参与皮肤稳态和平衡的分子和代谢物。
皮肤微生物群的组成和质量随着年龄的增长而变化。
令人惊讶的是,申请人已经证明,随着年龄的增长,某些细菌在皮肤上的存在和数量会减少。对于卷曲乳杆菌尤其如此。
市场上现有的大多数解决方案都是处理老化的可见后果,而没有考虑到皮肤微生物群,其中一些菌群与皮肤细胞共生并参与其平衡和外观。
本发明具有更完整的优点,因为它通过补充随时间减少的皮肤菌群的细菌来重新平衡老化皮肤的微生物群。这些细菌又通过重新激活随着年龄增长而减弱的生物过程而有助于皮肤恢复活力和长期保护皮肤免受外部攻击。
益生菌及其衍生物已被用于治疗皮肤老化问题,但在大多数情况下,所使用的细菌并非来自皮肤。根据本发明的细菌具有天然存在于年轻皮肤上的优点。
专利申请WO 2009/031106披露了橙皮苷和益生菌的组合用于预防皮肤屏障功能降低或增强皮肤屏障功能的用途。所述申请没有披露卷曲乳杆菌菌株用于维持和/或增加皮肤和/或粘膜细胞外基质分子的表达的用途。
专利申请WO 2019/111189披露了包含乳杆菌属益生菌用于预防UV辐射引起的损伤的用途。所述申请没有披露卷曲乳杆菌菌株用于维持和/或增加皮肤和/或粘膜细胞外基质分子的表达的用途。
因此,据申请人所知,现有技术没有披露或暗示卷曲乳杆菌菌株和/或包含该菌株的组合物用于维持和/或增加皮肤和/或粘膜细胞外基质分子的表达,也没有披露用于维持和/或增加皮肤和/或粘膜的生物力学特性,也没有披露用于维持和/或增加皮肤和/或粘膜胶原和/或皮肤和/或粘膜弹性纤维的表达的美容、营养和/或药物用途,特别是皮肤病学用途。
本发明的第一个主题是卷曲乳杆菌菌株用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的细胞外基质分子的表达的美容和/或营养用途。
本发明的主题还是一种美容护理方法,其特征在于其包括向健康皮肤和/或健康粘膜的至少一个区域局部施用根据本发明的卷曲乳杆菌菌株或包含该菌株的美容组合物,用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的细胞外基质分子的表达,优选用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的胶原和/或健康皮肤和/或健康粘膜的弹性纤维的表达,和/或用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的生物力学特性,特别是紧致度和/或弹性和/或密度,优选紧致度。
本发明的主题还是一种根据本发明的卷曲乳杆菌菌株或包含该菌株的皮肤病学组合物,用于治疗和/或预防皮肤和/或粘膜的病状,该病状涉及皮肤和/或粘膜的细胞外基质分子的量和/或表达的减少,特别是皮肤和/或粘膜胶原和/或皮肤和/或粘膜弹性纤维的量和/或表达的减少,和/或皮肤和/或粘膜的生物力学特性的减弱,特别是皮肤和/或粘膜的紧致度和/或弹性和/或密度的降低。
本发明还涉及一种根据布达佩斯条约于2020年9月9日在巴斯德研究所(巴黎15区鲁克斯医生路28号,邮编F-75024(28rue du Docteur Roux,F-75024Paris cedex 15))保藏的名称为CNCM I-5579的卷曲乳杆菌菌株或包含该菌株的美容组合物,用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的细胞外基质分子的表达,特别是用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的胶原和/或健康皮肤和/或健康粘膜的弹性纤维的表达,和/或用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的生物力学特性,特别是紧致度和/或弹性和/或密度,优选紧致度。
最后,本发明涉及一种根据布达佩斯条约于2020年9月9日在巴斯德研究所(巴黎15区鲁克斯医生路28号,邮编F-75024)保藏的名称为CNCM I-5579的卷曲乳杆菌菌株或包含该菌株的皮肤病学组合物,用于治疗和/或预防涉及皮肤和/或粘膜的细胞外基质分子的量和/或表达的减少,特别是皮肤和/或粘膜胶原和/或弹性纤维的量和/或表达的减少,和/或皮肤和/或粘膜的量和/或生物力学特性的减弱,特别是皮肤和/或粘膜的紧致度的降低,和/或皮肤和/或粘膜的弹性的降低,和/或皮肤和/或粘膜的密度的降低。
出于本发明的目的,术语“美容用途和/或组合物”是指非药物用途和/或组合物,即不旨在用于治疗用途并且应用于身体的“健康”部分、特别是皮肤和/或粘膜的“健康”区域的药物用途和/或组合物。
出于本发明的目的,表述“营养药物用途和/或营养药物组合物”是指用于非药物口服施用的用途和/或组合物,即不需要治疗性治疗的用途和/或组合物。
出于本发明的目的,术语“健康皮肤”或“健康粘膜”是指这样的皮肤或粘膜的区域,该区域施用本发明的菌株,并且被皮肤学家称为“非病理性的”,即没有感染、瘢痕形成、疾病或皮肤病症诸如念珠菌病、脓疱病、银屑病、湿疹、痤疮或皮炎、或伤口或损伤。
根据本发明,“粘膜”是指眼粘膜、鼻粘膜、耳粘膜、泌尿生殖器粘膜和/或口腔粘膜,特别是口腔粘膜、唇粘膜和/或牙龈粘膜,优选眼粘膜和/或口腔粘膜,更优选唇粘膜和/或眼粘膜。
有利地,所述术语不包括阴道粘膜。
出于本发明的目的,术语“维持和/或增加细胞外基质分子的表达”意指相对于在不存在根据本发明的菌株的情况下检测的基因表达和/或蛋白质合成的水平,预防用根据本发明的菌株治疗的健康皮肤和/或健康粘膜的细胞外基质分子的基因表达(即mRNA(信使RNA))和/或蛋白质合成的水平的降低和/或增加。优选地,它是一种维持和/或增加细胞外基质分子的蛋白质表达的物质。
根据本发明,术语“ECM分子”是指构成细胞外基质和/或包含在细胞外基质中并由人或动物来源的细胞合成的有机分子。
这些值得注意地是ECM的组成蛋白,特别是选自:
-ECM胶原的家族,
-ECM弹力纤维的家族:弹性蛋白、原弹性蛋白、弹性蛋白相关蛋白,特别是原纤蛋白1、赖氨酰氧化酶,特别是LOX和LOXL、EBP(弹性蛋白结合蛋白)、纤蛋白(fibullin)3和5、弹性蛋白微纤维界面蛋白(emilin)1和2。
这些特别是ECM的组成性蛋白聚糖,特别是选自基底膜聚糖、多功能蛋白聚糖、富含亮氨酸的蛋白聚糖(SLRP)特别是核心蛋白聚糖、双糖链蛋白聚糖和光蛋白聚糖的分泌性蛋白聚糖。
它还包括ECM的组成糖蛋白,特别是纤连蛋白、层粘连蛋白、SPARC(富含半胱氨酸的分泌蛋白)和腱生蛋白。
它还包括构成ECM的糖胺聚糖(GAG),特别是透明质酸、硫酸乙酰肝素、硫酸皮肤素和硫酸软骨素。
它还包括ECM生长因子,它们是ECM中包含的蛋白质,特别是VEGF、PDGF、HGF和FGF,特别是FGF2和FGF 7。
术语“ECM分子”是指培养基中的ECM或其他隔室,特别是细胞内和细胞外隔室中的分子,可能是前体的形式。
根据本发明,术语“ECM分子前体”是指在构成ECM或包含在ECM中之前由细胞合成的ECM分子的天然和/或中间形式。这些形式在进入ECM中之前会经历成熟现象,因此通常由前缀“前”或“原”来指定。它们是例如前胶原、原胶原、前弹性蛋白和原弹性蛋白。
优选地,细胞外基质分子选自健康皮肤和/或健康粘膜的胶原,和/或健康皮肤和/或健康粘膜的弹性纤维。
出于本发明的目的,术语“维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的胶原和/或健康皮肤和/或健康粘膜的弹性纤维的表达”是指相对于在不存在根据本发明的菌株的情况下测量的基因表达和/或蛋白质合成,预防用根据本发明的菌株治疗的健康皮肤和/或健康粘膜的胶原和/或健康皮肤和/或健康粘膜的弹性纤维的基因表达(即mRNA(信使RNA)的表达)和/或蛋白质合成的降低和/或增加。
具体地,相对于在不存在根据本发明的卷曲乳杆菌菌株的情况下测量的胶原和/或弹性纤维的基因和/或蛋白质表达的水平,胶原和/或弹性纤维的基因表达水平和/或蛋白质合成的水平增加至少20%,优选至少40%,并且甚至更优选至少50%。
在本发明的优选方式中,如例如实施例3中所述,相对于在不存在该菌株的情况下体外培养的真皮成纤维细胞中测量的蛋白质表达的水平,纤蛋白-5和/或弹性蛋白微纤维界面蛋白-1的蛋白质表达水平提高了至少20%,优选至少40%,并且甚至更优选至少50%。
有利地,纤蛋白-5和/或弹性蛋白微纤维界面蛋白-1的蛋白质表达增加的测量通过体外测量进行,优选在通过毛细管电泳分析之后,例如根据实施例3中呈现的方法。
出于本发明的目的,术语“毛细管电泳分析”是指这样的技术,将对所研究的蛋白质、纤连蛋白-5和/或弹性蛋白微纤维界面蛋白-1具有特异性的抗体连接到所述蛋白质,与过氧化物酶和化学发光底物缀合,目的是通过测量化学发光信号来检测蛋白质。
出于本发明的目的,术语“胶原”是指存在于健康皮肤和/或健康粘膜中的I、III、IV、V、VI、VII、XII、XIII、XIV、XVI、XVII、XXIV、XXIX型胶原。根据有利的方式,胶原选自I、III、IV、V和/或XIV型胶原,优选I、IV和/或V型胶原,更优选I型胶原。
出于本发明的目的,术语“I型胶原”是指存在于皮肤、角膜、肌腱、韧带和骨骼中,更优选存在于皮肤中的胶原。因此,在本发明的优选方式中,根据本发明的卷曲乳杆菌菌株因此用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜中I型胶原的蛋白表达。
根据本发明的有利方式,这是相对于在不存在根据本发明的卷曲乳杆菌菌株的情况下体外培养的真皮成纤维细胞中测量的胶原的基因和/或蛋白质表达的水平的增加。
在本发明的优选方式中,如例如实施例2中所述的,相对于在不存在根据本方案的菌株的情况下体外培养的真皮成纤维细胞中测量的蛋白质表达的水平,I型胶原的蛋白质表达的水平增加至少10%,优选至少50%,并且甚至更优选至少20%。
有利地,蛋白质表达增加的测量通过体外测量进行,优选在酶联免疫吸附测定或ELISA之后,例如根据实施例2中所述的方法。
出于本发明的目的,术语“酶免疫测定法”是指这样的技术,将对给定胶原,优选I型胶原具有特异性的抗体固定到所述蛋白质上,目的是通过荧光测量显现。有利地,通过荧光进行显现。
根据另一个有利的方式,通过体外测量,优选在RT-qPCR之后进行基因表达增加的测量。
在一个优选的实施例中,根据本发明的菌株用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的生物力学特性,优选健康皮肤和/或健康粘膜的紧致度和/或弹性和/或密度,更优选健康皮肤和/或粘膜、特别是健康真皮的紧致度和/或健康皮肤和/或粘膜、特别是健康真皮的弹性。
出于本发明的目的,术语“健康皮肤和/或健康粘膜的生物力学特性”是指健康皮肤和/或健康粘膜的紧致度和/或弹性和/或密度和/或抗压缩性和/或抗拉伸性和/或柔韧性和/或可拉伸性和/或承受变形的能力。优选健康皮肤和/或健康粘膜、特别是健康真皮的紧致度和/或弹性和/或密度,甚至更优选健康皮肤和/或健康粘膜、特别是健康真皮的紧致度和/或健康皮肤和/或健康粘膜、特别是健康真皮的弹性。
可以通过本领域技术人员已知的测量技术,特别是通过牵引、扭曲、抽吸、压痕、levatometry、弹性测定法(ballistometry),通过高分辨率超声成像或弹性成像,优先通过压痕或通过高分辨率超声成像来研究健康皮肤和/或健康粘膜的生物力学特性。
出于本发明的目的,术语“维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的生物力学特性”是指相对于在不存在根据本发明的菌株的情况下测量的健康皮肤和/或健康粘膜的生物力学特性,预防用根据本发明的菌株治疗的健康皮肤和/或健康粘膜的生物力学特性,优选健康皮肤和/或健康粘膜、特别是健康真皮的紧致度,和/或健康皮肤和/或健康粘膜、特别是健康真皮的弹性,和/或健康皮肤和/或健康粘膜、特别是健康真皮的密度的降低和/或增加。
优选地,相对于在不存在根据本发明的卷曲乳杆菌菌株的情况下测量的健康皮肤和/或健康粘膜的生物力学特性,用根据本发明的卷曲乳杆菌菌株治疗的健康皮肤和/或健康粘膜的生物力学特性增加至少5%,优选10%。
出于本发明的目的,从美容的观点来看,术语“维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜、特别是健康真皮的紧致度”是指出于美观的目的,预防健康皮肤和/或健康粘膜的紧致度降低和/或增加,特别是由于内在因素而损失紧致度的那些。内在因素可以是皮肤和/或粘膜的组织老化,即时间引起的老化,其可以存在于例如“成熟”皮肤(即40岁以上的人的皮肤)中。它可能是由于细胞应激、非病理性生理变化(诸如饮食变化)或激素变化,特别是在青春期、怀孕、绝经期和/或男性更年期。这种紧致度的降低也可能由于外在因素而发生,例如侵蚀性环境因素,例如污染、烟雾、烟草、毒素或气候和/或机械侵袭因素。
根据优选的方式,紧致度的降低不是UV辐射引起的。
优选地,在存在根据本发明的卷曲乳杆菌菌株的情况下,健康皮肤和/或健康粘膜、特别是健康真皮的紧致度增加至少1%,优选至少3%,更有利地至少5%。在本发明的一个有利的实施例中,增加是体内测量的,优选在人脸部的皮肤上测量的。
出于本发明的目的,从美容的观点来看,术语“维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜、特别是健康真皮的弹性”是指出于美观的目的,预防失去弹性的健康皮肤和/或健康粘膜的弹性的降低和/或增加其弹性,该失去弹性特别是由于内在因素,诸如皮肤和/或粘膜的组织老化(即时间引起的老化,其存在于例如“成熟”皮肤(即40岁以上、特别是50岁以上的人的皮肤)中)、细胞应激、非病理性生理变化(诸如饮食变化)或激素变化,特别是在青春期、怀孕、绝经期和/或男性更年期。这种弹性的降低也可能由于外在因素而发生,例如侵蚀性环境因素,例如污染、烟雾、烟草、毒素或气候和/或机械侵袭因素。
根据优选的方式,弹性的降低不是UV辐射引起的。
此外,术语皮肤和/或粘膜的“弹性增加”是指相对于在不存在根据本发明的菌株的情况下检测的弹性,在存在该菌株的情况下体内测量的弹性增加至少2%,有利地至少4%,更有利地至少6%。在本发明的优选实施例中,该测量是在人的面部皮肤上进行的。在优选的方式中,在存在根据本发明的菌株的情况下治疗至少10天、优选28天、更优选30天并且有利地至少56天后评估这种增加。
更有利地,通过测量其各种弹性分量,特别是净弹性、弹性恢复和/或总弹性来评估弹性,特别是如实例4中所述。
出于本发明的目的,从美容的观点来看,术语“维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜、特别是健康真皮的密度”是指出于美观的目的,预防健康皮肤和/或健康粘膜的密度降低和/或增加,特别是由于内在因素而损失密度的那些。内在因素可以是皮肤和/或粘膜的组织老化,即时间引起的老化,其可以存在于例如“成熟”皮肤(即40岁以上的人的皮肤)中。它可能是由于细胞应激、非病理性生理变化(诸如饮食变化)或激素变化,特别是在青春期、怀孕、绝经期和/或男性更年期。这种密度的降低也可能由于外在因素而发生,例如侵蚀性环境因素,例如污染、烟雾、烟草、毒素或气候和/或机械侵袭因素。
根据优选的方式,密度的降低不是UV辐射引起的。
优选地,在存在根据本发明的卷曲乳杆菌菌株的情况下,健康皮肤和/或健康粘膜、特别是健康真皮的密度增加至少1%,优选至少3%,更有利地至少5%。在本发明的有利实施例中,这是体内测量的增加,优选在人面部皮肤上测量的增加。
紧致度和/或弹性和/或密度的体内测量可以根据本领域技术人员已知的常规方法进行,特别是通过使用皮肤弹性测定仪、TonodermTM、超声扫描仪或与dermaTOP相关联的进行测量。
根据本发明,卷曲乳杆菌菌株可以以完整形式使用,特别是活的和/或失活的,特别是死的,和/或以裂解物的形式使用,和/或以其一种或多种级分的形式使用,和/或以其一种或多种代谢物的形式使用,优选其分泌蛋白质组。
对于其每种形式,根据本发明的菌株可以被分离或与其发酵液和/或培养基组合。
优选地,根据本发明的菌株与其发酵液和/或培养基组合。
出于本发明的目的,术语“分离的”是指在其发酵液和/或生长培养基中不与一种或多种可能与其相关的化合物混合。
出于本发明的目的,术语“完整形式”是指其天然形式,即其中细菌包膜是完整的形式,而不是裂解形式。当以完整形式使用时,卷曲乳杆菌菌株可以是活的和/或失活的和/或死的。
出于本发明的目的,术语“活的”是指能够在培养物中形成菌落的根据本发明的卷曲乳杆菌菌株。
活的完整形式的卷曲乳杆菌菌株的产生可以根据本领域技术人员常规已知的任何方法进行。有利地,它将根据例如在实例1.a或1.f中描述的方案进行。
出于本发明的目的,术语“失活的”是指不再能够在培养物中暂时或确定地形成菌落的根据本发明的卷曲乳杆菌菌株。
卷曲乳杆菌菌株的失活可以通过本领域技术人员常规已知的任何方法进行。它可以值得注意地通过辐射、热处理或在某些条件下通过冷冻干燥、通过高压处理或通过挤出而失活。有利地,它将通过热处理进行,更有利地根据例如在实例1.b中描述的方案进行。
热失活可以通过将卷曲乳杆菌菌株在有利地从约60℃至150℃的温度下孵育给定的时间段,有利地约10秒至90分钟,优选地约15分钟至一小时来进行。优选地,将其在约80℃下孵育约30分钟。
出于本发明的目的,术语“死的”是指不再能够在培养物中确定地形成菌落的根据本发明的卷曲乳杆菌菌株。
出于本发明的目的,术语“裂解物”是指通过被称为细胞裂解的现象破坏或溶解生物细胞后获得的物质,从而导致所考虑的微生物的细胞中天然包含的细胞内生物组分和细胞膜组分的片段的释放。因此,所使用的裂解物是由根据本发明的卷曲乳杆菌菌株的所有细胞内生物成分以及细胞壁和细胞膜的成分形成的。
裂解物可以通过本领域技术人员常规已知的任何方法获得。它可以值得注意地通过渗透冲击、热冲击、通过超声、通过酶裂解、通过结晶或在离心类型的机械应力下,或通过增加压力或这些不同技术的组合来获得。
优选地,裂解物将通过机械作用和压力增加的组合获得。更优选地,裂解物将根据例如实施例1.b中描述的方案获得。
在本发明的一个优选实施例中,裂解物将与细菌培养物和/或发酵液组合。
出于本发明的目的,术语“级分”是指根据本发明的卷曲乳杆菌菌株的片段,其有效地维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的细胞外基质分子的表达,和/或用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的生物力学特性。该级分对应于通过裂解根据本发明的卷曲乳杆菌菌株获得的细胞内生物成分以及细胞壁和膜成分的非全部部分。
根据本发明的特定实施例,这些级分可以是细菌原生质。
在本发明的一个优选实施例中,这些级分将与细菌培养物和/或发酵液组合。
出于本发明的目的,术语“代谢物”是指来源于根据本发明的卷曲乳杆菌菌株的代谢的一种或多种有机和/或无机分子,并且其还有效地维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的细胞外基质分子的表达,和/或维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的生物力学特性。优选地,这是根据本发明的卷曲乳杆菌菌株的分泌蛋白质组。
在本发明的特定实施例中,代谢物将与细菌培养物和/或发酵液组合。
出于本发明的目的,术语“分泌蛋白质组”是指由根据本发明的卷曲乳杆菌菌株分泌的所有有机和/或无机分子,其有效地维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的细胞外基质分子的表达,和/或维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的生物力学特性。
分泌蛋白质组可以通过本领域技术人员常规已知的任何方法获得。有利地,它将根据例如在实例1.d或1e中描述的方案获得。
在本发明的一个优选实施例中,分泌蛋白质组将与细菌培养物和/或发酵液组合。
根据本发明的优选实施例,根据本发明的卷曲乳杆菌菌株将以活的完整形式和/或裂解物形式使用。
根据本发明的卷曲乳杆菌菌株可来源于任何已知的卷曲乳杆菌菌种。优选地,卷曲乳杆菌菌株是根据布达佩斯条约于2020年9月9日在巴斯德研究所(巴黎15区鲁克斯医生路28号,邮编F-75024)保藏的名称为CNCM I-5579的菌种。
这种特殊的卷曲乳杆菌菌株的优点在于它是第一种在健康皮肤上天然发现的卷曲乳杆菌。
根据本发明,根据本发明的卷曲乳杆菌菌株可以以活性成分的形式和/或以美容和/或营养药物和/或药物组合物、特别是皮肤病学组合物单独使用,优选用于局部和/或口服应用,更优选用于局部应用。
当其以根据本发明的活的完整形式使用时,并且当其以活性成分的形式单独使用时,根据本发明的菌株可以呈干燥形式,即呈粉末形式,有利地在麦芽糊精中,优选地相对于该粉末的总重量按该菌株的重量计为10%至80%(w/w),优选地按该菌株的重量计为30%至70%(w/w),更有利地为40%至60%(w/w)的菌株含量。
替代性地,根据本发明的活的完整形式可以在溶剂中溶解和/或稀释使用。优选地,该溶剂含有按体积计小于20%(v/v)的水,更优选地按体积计小于5%(v/v)的水;更优选地,溶剂不含任何水。非常优选地,该溶剂是美容可接受的油。
当其以其完整的失活形式(特别是死的),和/或以裂解物的形式,和/或以其一种或多种级分的形式,和/或以其一种或多种代谢物(特别是其分泌蛋白质组)的形式使用时,并且当其以活性成分的形式单独使用时,根据本发明的菌株可以呈干燥形式,即呈粉末形式,有利地在麦芽糊精中,优选地按该菌株的重量计为5%至80%(w/w),优选地按该菌株的重量计为10%至70%(w/w),非常优选地相对于该粉末的总重量按该菌株的重量计为约20%至50%(w/w),更有利地相对于该粉末的总重量按该菌株的重量计为10%至50%(w/w)的菌株含量。
替代性地,失活的完整形式,特别是死的形式,和/或裂解物,和/或级分,和/或代谢物,特别是根据本发明的分泌蛋白质组,可以在溶剂中溶解和/或稀释使用,该溶剂特别是极性溶剂,诸如水、醇、多元醇、二醇诸如戊二醇和/或己二醇和/或辛甘醇、或它们的混合物,优选水-二醇或水-醇混合物,更优选包含选自己二醇、辛甘醇以及它们的混合物的二醇。
在另一个实施例中,可以将根据本发明的菌株掺入包含至少一种美容可接受的和/或营养药物可接受的赋形剂的美容和/或营养药物组合物中。优选地,将其掺入包含至少一种美容可接受的赋形剂的美容组合物中。
出于本发明的目的,术语“美容可接受的赋形剂”是指局部可接受的化合物和/或溶剂,即在与皮肤(包括人头皮)和/或粘膜接触时不引起过敏反应并且无毒且化学性质稳定的化合物和/或溶剂。
在本发明的优选实施例中,相对于组合物的总体积,根据本发明的菌株以介于1×10-4体积%和10体积%(v/v)之间、优选介于1×10-4体积%和5体积%(v/v)之间、更有利地介于1×10-3体积%和3体积%(v/v)之间、更优选介于0.1体积%和2体积%(v/v)之间的含量存在于美容和/或皮肤病学组合物中,所述组合物还包含至少一种美容可接受的赋形剂。
有利地,相对于组合物的总重量,根据本发明的菌株以1×10-4重量%至10重量%、优选介于1×10-4重量%和5重量%之间、更有利地介于1×10-3重量%和0.5重量%之间的浓度存在于美容和/或皮肤病学组合物中,所述组合物还包含至少一种美容可接受的赋形剂。
以特别有利的方式,当根据本发明的菌株以其一种或多种代谢物、特别是其分泌蛋白质组的形式使用时,相对于组合物的总重量,其以0.05重量%至0.5重量%的浓度、更优选以约0.1重量%的浓度存在于美容和/或皮肤病学组合物中,所述组合物还包含至少一种美容可接受的赋形剂。
特别有利的是,当根据本发明的菌株以活的完整形式使用时,相对于组合物的总重量,其以0.01重量%至0.1重量%的浓度、更优选以约0.025重量%的浓度存在于美容和/或皮肤病学组合物中,所述组合物还包含至少一种美容可接受的赋形剂。
本发明的美容和/或皮肤病学组合物可以选自水性或油性溶液、乳膏或水性凝胶或油性凝胶,特别是沐浴露、洗发水;乳液(milk);乳液(emulsion)、微乳液或纳米乳液,特别是水包油或油包水或多重或硅基乳液;面膜;血清;洗剂;液体皂;润肤洁面皂;软膏;香膏;黄油;摩丝;贴剂;无水产品,其优选是液体、糊剂或固体,例如呈化妆粉、棍或棒的形式,特别是呈唇膏的形式。
它也可以是化妆产品或卸妆产品。
有利地,本发明的卷曲乳杆菌菌株或组合物旨在施用于身体和/或面部和/或头皮的全部或部分,优选腿部、大腿、手臂、腹部、领口、颈部、腋窝或嘴唇,更优选施用于面部的全部或部分,并且优选施用于脸颊、前额、下巴、嘴唇或眼睛轮廓。
有利地,该菌株和/或包含该菌株的组合物旨在施用于表现出下垂和/或塌陷的健康皮肤区域和/或缺乏色调的健康皮肤区域。
因此,有利地,美容组合物旨在局部施用于健康皮肤和/或健康粘膜。
优选地,根据本发明的卷曲乳杆菌菌株特别适于配制用于皮脂腺,特别是包括头皮和/或粘膜的皮肤的中性和温和组合物。
替代性地,根据本发明的卷曲乳杆菌菌株可以是常规用于口服应用的任何呈现形式,特别是营养药物活性成分和/或营养药物组合物的形式。
根据本发明的组合物可以含有任何合适的溶剂和/或任何合适的媒介物和/或任何合适的赋形剂,任选地与其他目的化合物组合。
因此,对于这些组合物,赋形剂含有例如至少一种选自以下的化合物:防腐剂、润肤剂、乳化剂、表面活性剂、保湿剂、增稠剂、调理剂、消光剂、稳定剂、抗氧化剂、纹理剂、光泽剂、成膜剂、增溶剂、颜料、着色剂、香料和防晒剂。这些赋形剂优选地选自由以下组成的组:氨基酸及其衍生物、聚甘油、酯、纤维素聚合物和衍生物、羊毛脂衍生物、磷脂、乳铁蛋白、乳过氧化物酶、基于蔗糖的稳定剂、维生素E及其衍生物、天然和合成蜡、植物油、甘油三酯、不皂化物、植物甾醇、植物酯、硅酮及其衍生物、蛋白质水解物、霍霍巴油及其衍生物、脂溶性/水溶性酯、甜菜碱、胺氧化物、植物提取物、蔗糖酯、二氧化钛、甘氨酸和对羟基苯甲酸酯,并且更优选地选自由以下组成的组:丁二醇、硬脂醇聚醚-2、硬脂醇聚醚-21、乙二醇-15硬脂醇醚、鲸蜡硬脂醇、苯氧基乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、丁二醇、天然生育酚、甘油、二羟基鲸蜡基磷酸钠、异丙基羟基鲸蜡基醚、硬脂酸乙二醇酯、三异壬精、椰油酸辛酯、聚丙烯酰胺、异链烷烃、月桂醇聚醚-7、卡波姆、丙二醇、甘油(glycerol)、没药醇、二甲聚硅氧烷、氢氧化钠、PEG-30-二聚羟基硬脂酸酯、癸酸/辛酸甘油三酯、辛酸鲸蜡硬脂酯、己二酸二丁酯、葡萄籽油、霍霍巴油、硫酸镁、EDTA、环甲硅油、黄原胶、柠檬酸、月桂基硫酸钠、矿物蜡和油、异硬脂基异硬脂酸酯、丙二醇二壬酸酯、丙二醇异硬脂酸酯、PEG 8、蜂蜡、来自氢化棕榈仁油的甘油酯、来自氢化棕榈油的甘油酯、羊毛脂油、芝麻油、乳酸鲸蜡酯、羊毛脂醇、蓖麻油、二氧化钛、乳糖、蔗糖、低密度聚乙烯、等渗盐水溶液以及它们的混合物。
许多美容活性成分是本领域技术人员已知的,用于改善皮肤(包括头皮)和/或粘膜的健康和/或物理外观。本领域技术人员知道如何配制美容、营养或皮肤病学组合物以获得最佳效果。此外,这些化合物在彼此组合时可能具有协同作用。本发明也涵盖这些组合。CTFA Cosmetic Ingredient Handbook[化妆品成分手册],第二版(1992)中描述了在化妆品和制药行业常用的多种化妆品和药物成分,其特别适合于局部使用。这些类别的成分的实例包含但不限于以下化合物:研磨剂、吸收剂、出于美观目的的化合物(诸如香料、颜料、染料、精油)、收敛剂等(例如丁香油、薄荷醇、樟脑、桉树油、丁子香酚、乳酸薄荷酯、金缕梅精华)、祛痘剂、防絮凝剂、消泡剂、抗微生物剂(例如:碘丙基氨基甲酸丁酯)、抗氧化剂、粘合剂、生物学添加剂、缓冲剂、膨胀剂、螯合剂、添加剂、杀灭剂、变性剂、增稠剂、和维生素及其衍生物或等同物、成膜材料、聚合物、遮光剂、pH调节剂、还原剂、脱色剂或增光剂(例如:氢醌、曲酸、抗坏血酸、磷酸抗坏血酸酯镁盐、葡糖胺抗坏血酸)、调节剂(例如:湿润剂)。
该美容组合物还可以包含与根据本发明的卷曲乳杆菌菌株具有相同性质并诱导协同或非协同作用的其他美容和/或营养剂,或具有互补作用的美容剂。
这些可以是例如抗皱成分、刺激成纤维细胞活性或增殖的试剂、刺激细胞外基质分子的试剂。
它们还可以是抗衰老活性成分和/或张力剂,用于与卷曲乳杆菌菌株产生协同作用。有利地,它们是增加胶原的基因和/或蛋白质表达的活性成分或预防胶原降解的活性成分,诸如视黄醇、维生素C、由巴斯夫美容护理解决方案公司(BASF Beauty CareSolutions)以名称CollguardTM出售的本地原生藤(Davilla rugosa)提取物、由申请人以名称LinefactorTM出售的香葵(Hibiscus abelmoschus)种子提取物、以名称DermicanTM出售的肽,或由赛德玛公司(Sederma)以名称MatrixylTM、Matrixyl 3000TM和RegestrilTM或由康缔肤公司(Codif)以名称Neuroguard、或由西莱博公司(Silab)以名称EternalineTM出售的产品。
可用于本发明的张力剂可以选自合成聚合物,诸如聚氨酯胶乳或丙烯酸胶乳、天然来源的聚合物,特别是淀粉形式或角叉菜胶、藻酸盐、琼脂、结冷胶、纤维素基聚合物和果胶形式的多糖苷;植物蛋白质和蛋白质水解产物;混合硅酸盐;蜡微粒;选自例如二氧化硅、二氧化硅-氧化铝复合材料的无机填料的胶体颗粒;以及它们的混合物。
最后,它们可以是美容成分,例如抗微生物剂、自由基清除剂、舒缓剂、镇定剂或松弛剂、作用于微循环以改善面色尤其是面部光泽的药剂、愈合剂或减肥剂。有利地,本发明的美容和/或皮肤病学组合物还含有一种或多种张力剂和/或一种或多种抗微生物剂和/或一种或多种自由基清除剂和/或一种或多种舒缓剂和/或一种或多种减肥剂和/或一种或多种作用于微循环的药剂。
在本发明优选方式中与卷曲乳杆菌菌株组合的抗微生物剂中,可提及2,4,4'-三氯-2'-羟基二苯醚(或三氯生)、3,4,4'-三氯苯胺、苯氧乙醇、苯氧丙醇、苯氧异丙醇、羟乙磺酸己脒定、甲硝唑及其盐、咪康唑及其盐、伊曲康唑、特康唑、益康唑、酮康唑、沙康唑、氟康唑、克霉唑、布康唑、奥昔康唑、磺胺康唑、硫康唑、特比萘芬、十一烯酸及其盐、过氧化苯甲酰、3-羟基苯甲酸、4-羟基苯甲酸、植酸、N-乙酰基-L-半胱氨酸、硫辛酸、壬二酸及其盐、花生四烯酸、间苯二酚、辛氧基甘油、辛酰基甘氨酸、辛甘醇、10-羟基-2-癸酸、法尼醇、植物鞘氨醇以及它们的混合物。
自由基清除剂可以是维生素C及其衍生物,包括抗坏血酸基葡糖苷、酚和多酚,特别是单宁、鞣花酸和单宁酸;表没食子儿茶素和含有它的天然提取物,特别是绿茶提取物;花色素苷;酚酸、二苯乙烯;单环或多环芳族化合物清除剂、单宁诸如鞣花酸和吲哚衍生物和/或重金属清除剂诸如EDTA、自由基清除剂诸如维生素E及其衍生物诸如醋酸生育酚;生物类黄酮;辅酶Q10或泛醌。
作为包含在本发明的组合物中的镇静剂,可使用五环三萜、熊果酸及其盐、齐墩果酸及其盐、桦木酸及其盐、水杨酸盐(并且尤其是水杨酸锌)、没药醇、尿囊素、ω-3不饱和油、可的松、氢化可的松、吲哚美辛和倍他米松、抗炎性活性剂,并且特别是在专利申请FR 2847 267中描述的那些,尤其是由申请人以商品名InhipaseTM销售的葛根(Puerarialobata)根萃取物,以及可可(Theobroma cacao)萃取物。
作用于微循环的活性成分、血管保护剂或血管扩张剂可选自类黄酮、鲁斯可皂苷元、烟酸盐和精油。
减肥活性剂尤其可以选自脂蛋白脂肪酶抑制剂,诸如在专利US 2003/086949(Coletica)中描述的那些,并且特别是猫爪草(绒毛钩藤(Uncaria tomentosa))的提取物;引流活性物,特别是月桂酸橙皮素(FlavagrumTM)或辛酸槲皮素(FlavengerTM);磷酸二酯酶抑制剂、腺苷酸环化酶激活剂、cAMP和/或能够清除精胺和/或亚精胺的活性剂。可以提及毛喉鞘蕊花(Coleus forskohlii)根的提取物、钝叶号角树(Cecropia obtusa)的提取物、石莼(Uva lactuca)、咖啡因、毛喉素、茶碱、可可碱和/或其衍生物、由本申请人出售的名称为SlimexcessTM的水解κ角叉菜胶产品和/或它们的混合物。
本发明的主题还是一种美容护理方法,该美容护理方法包括向健康皮肤和/或健康粘膜的至少一个区域局部施用根据本发明的卷曲乳杆菌菌株或包含该菌株的美容组合物,用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的细胞外基质分子的表达,优选用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的胶原和/或健康皮肤和/或健康粘膜的弹性纤维的表达,和/或用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的生物力学特性,特别是紧致度和/或弹性和/或密度,优选紧致度。
有利地,根据本发明的卷曲乳杆菌菌株,优选以根据本发明的美容组合物的形式,用于常规的局部应用,并且优选每天至少一次,有利地每天两次,持续至少10天,优选持续20天,并且更优选持续至少28天。
有利地,根据本发明的卷曲乳杆菌菌株或包含该菌株的美容组合物的局部施用在身体和/或面部和/或头皮的全部或部分上进行,优选在腿部、大腿、手臂、腹部、领口、颈部、腋窝或嘴唇上进行,更优选在面部的全部或部分上进行,并且优选在脸颊、前额、下巴、嘴唇或眼睛轮廓上进行。
根据本发明的用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的细胞外基质分子的表达,优选用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的胶原和/或健康皮肤和/或健康粘膜的弹性纤维的表达,和/或用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的生物力学特性,特别是紧致度和/或弹性和/或密度,优选紧致度的美容护理方法有利地包括以下步骤:
-在个体上确定需要维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的细胞外基质分子的表达,优选维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的胶原和/或健康皮肤和/或健康粘膜的弹性纤维的表达,和/或维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的生物力学特性,特别是紧致度和/或弹性和/或密度,优选紧致度的健康皮肤和/或健康粘膜的区域,以及
-向健康皮肤和/或健康粘膜的该区域局部施用美容组合物,该美容组合物包含根据本发明的卷曲乳杆菌菌株,其量有效维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的细胞外基质分子的表达,优选用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的胶原和/或健康皮肤和/或健康粘膜的弹性纤维的表达,和/或用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的生物力学特性,特别是紧致度和/或弹性和/或密度,优选紧致度,即以以下卷曲乳杆菌菌株的含量:
-相对于该组合物的总体积,介于1×10-4%和10体积%(v/v)之间、优先介于1×10-4体积%和5体积%(v/v)之间、更有利地介于1×10-3体积%和3体积%(v/v)之间,更优选介于0.1体积%和2体积%(v/v)之间,和/或
-相对于该组合物的总重量,介于1×10-4重量%和10重量%(w/w)之间、优先介于1×10-4重量%和5重量%(w/w)之间、更有利地介于1×10-3重量%和0.5重量%(w/w)之间。
出于本发明的目的,术语“局部途径”是指将根据本发明的卷曲乳杆菌菌株或组合物直接局部施用和/或喷雾到健康皮肤和/或健康粘膜区域的表面上。
出于本发明的目的,术语“局部和/或口服可接受的”是指分别适用于局部和/或口服应用的成分,其对皮肤(包括头皮)无毒、无刺激性,并且不引起过敏反应,并且是化学稳定的。
本发明的主题还是单独的根据本发明的卷曲乳杆菌菌株或包含该菌株的皮肤病学组合物,其有利地通过局部途径在治疗和/或预防皮肤和/或粘膜的病状方面使用,该病状涉及该皮肤和/或粘膜的细胞外基质分子的量和/或表达的减少和/或该皮肤和/或粘膜的胶原和/或弹性纤维的量和/或表达的减少,和/或该皮肤和/或粘膜的量和/或生物力学特性的减弱,特别是该皮肤和/或粘膜的紧致度的降低和/或该皮肤和/或粘膜的弹性的降低,和/或该皮肤和/或粘膜的密度的降低。
出于本发明的目的,从皮肤病学的观点来看,术语“治疗和/或预防涉及皮肤和/或粘膜的紧致度降低的皮肤和/或粘膜病变”是指出于治疗目的,增加由于皮肤和/或粘膜病变(例如红斑痤疮或毛细血管扩张)而损失紧致度的皮肤和/或粘膜的紧致度。
出于本发明的目的,从皮肤病学的观点来看,术语“治疗和/或预防涉及皮肤和/或粘膜弹性降低的皮肤和/或粘膜病变”是指出于治疗目的,增加由于皮肤和/或粘膜病变(例如日光性弹性组织变性和/或皮肤松弛病变)而损失弹性的皮肤和/或粘膜的弹性。
出于本发明的目的,从皮肤病学的观点来看,术语“治疗和/或预防涉及皮肤和/或粘膜密度降低的皮肤和/或粘膜疾病”是指出于治疗的目的,增加由于皮肤和/或粘膜疾病(诸如埃勒斯-当洛斯(Ehlers-Danlos)综合征和/或皮肤疏松)而损失密度的皮肤和/或粘膜的密度。
根据本发明的卷曲乳杆菌菌株可以是包含至少一种药学和/或皮肤病学上可接受的赋形剂的药物组合物、优选皮肤病学组合物的形式。在本发明的一个实施例中,所述组合物局部和/或口服施用,优选局部施用。
有利地,相对于该组合物的总重量,其以1×10-4重量%至10重量%、优选介于1×10-4重量%和5重量%之间、更有利地介于1×10-3重量%和0.5重量%之间的浓度存在于药物组合物、优选皮肤病学组合物中,所述组合物还包含至少一种药学上可接受的赋形剂。
有利地,相对于组合物的总体积,根据本发明的卷曲乳杆菌菌株以1×10-4体积%至10体积%(v/v)、优选1×10-4体积%至5体积%(v/v)、更有利地1×10-3体积%至0.5体积%(v/v)、更优选介于0.1体积%和2体积%(v/v)之间的浓度存在于药物组合物、优选皮肤病学组合物中,所述组合物还包含至少一种药学上可接受的赋形剂。
通过阅读以下附图和实例的描述将更好地理解本发明。
下面呈现了参考本发明的描述的实例。这些实例出于说明性目的给出,并且决不应该限制本发明的范围。每个实例具有一般范围。
实例形成本发明的组成部分,并且任一特征也形成本发明的组成部分,从包括实例在内的说明书整体来看,该任一特征无论怎样都相比于任何现有技术具有新颖性。
而且,在实例中,除非另有说明,否则所有百分必均以重量计,除非另有说明,否则温度以摄氏度表示,并且除非另有说明,否则压力为大气压。
实例1.不同形式的卷曲乳杆菌的制备
实例1.a:活的完整形式的卷曲乳杆菌的制备。
将分离的卷曲乳杆菌(CNCM I-5579)接种在MRS培养基中,在37℃下厌氧孵育。将pH维持在pH=6的值,并将培养基孵育24小时。在孵育结束时,将培养基离心,将细胞浓缩物重悬于发酵液中并在麦芽糖糊精存在下冷冻干燥,最终麦芽糖糊精的量相对于成分的总重量为70重量%(w/w)。
实例1.b:失活的完整形式的卷曲乳杆菌的制备
将分离的卷曲乳杆菌(CNCM I-5579)接种在MRS培养基中,在37℃下厌氧孵育。将pH维持在pH=6的值,并将培养基孵育24小时。在孵育结束时,将培养基离心并通过将其在80℃下加热30分钟使细胞浓缩物失活。然后将细胞浓缩物重悬于甘油中。
实例1.c:卷曲乳杆菌裂解物的制备
将分离的卷曲乳杆菌(CNCM I-5579)接种在MRS培养基中,在37℃下厌氧孵育。将pH维持在pH=6的值,并将培养基孵育24小时。在孵育结束时,将整体在高压匀浆器中处理。然后将裂解物重悬于甘油中。
实例1.d:卷曲乳杆菌分泌蛋白质组的制备
将分离的卷曲乳杆菌(CNCM I-5579)接种在MRS培养基中,在37℃下厌氧孵育。将pH维持在pH=6的值,并将培养基孵育24小时。在孵育结束时,过滤培养基以回收细菌分泌蛋白质组。然后将分泌蛋白质组重悬于甘油中。
实例1.e:粉末状卷曲乳杆菌分泌蛋白质组的制备
将分离的卷曲乳杆菌(CNCM I-5579)接种在MRS培养基中,在37℃下厌氧孵育。将pH维持在pH=6的值,并将培养基孵育24小时。在孵育结束时,过滤培养基以回收细菌分泌蛋白质组。然后用麦芽糖糊精喷洒分泌蛋白质组,使最终麦芽糖糊精的量相对于成分的总重量为90%(w/w)。
实例1.f:活的完整形式的卷曲乳杆菌的制备。
将分离的卷曲乳杆菌(CNCM I-5579)接种在MRS培养基中,在37℃下厌氧孵育。将pH维持在pH=6的值,并将培养基孵育24小时。在孵育结束时,将培养基离心,将细胞浓缩物重悬于发酵液中并在麦芽糖糊精存在下冷冻干燥,最终麦芽糖糊精的量相对于成分的总重量为50重量%(w/w)。
实例2:在存在根据本发明的卷曲乳杆菌的情况下成纤维细胞对I型胶原的表达增加。
将从健康的34岁供体获得的“正常”人成纤维细胞(即无病状)接种在24孔板中,然后在DMEM培养基中培养直至融合。
在存在根据实例1.a的卷曲乳杆菌的情况下继续孵育48小时,接种在培养孔上方的吊舱中的MRS培养基中,用PBS稀释至106CFU/mL的浓度。将没有添加根据本发明的菌株的相同培养基用作对照(Control)。
在孵育结束时,除去细菌并用氢氧化铵缓冲液裂解细胞。然后除去缓冲液,并将孔用PBS/BSA(磷酸盐缓冲盐水/牛血清白蛋白)的混合物饱和。
饱和后,将抗胶原I一抗(Interchim/Acris,France,LH0284/R1038)孵育几分钟,然后孵育铕缀合的二抗(珀金埃尔默公司(Perkin Elmer)),然后使用多标记读板器(珀金埃尔默公司)在(λexc.340nm/λem.615nm)处测量荧光。
将荧光结果相对于在不存在根据本发明的卷曲乳杆菌菌株(对照)的情况下用相同细胞培养基获得的荧光进行归一化,并与在每种条件下获得的DNA的量相关。给出的结果对应于6次测定的平均值(n=6)。
结果
/>
根据实例1.a的卷曲乳杆菌菌株(本发明的产品)显示出体外培养的人皮肤成纤维细胞对胶原I的显著刺激。因此,它可用于增加健康皮肤和/或健康粘膜的紧致度。
实例3:在存在根据本发明的卷曲乳杆菌菌株的情况下,参与成纤维细胞形成弹性纤维的纤蛋白-5和弹性蛋白微纤维界面蛋白-1的蛋白质表达增加。
将从19岁健康供体获得的“正常”人成纤维细胞(即无病状)在FGM(成纤维细胞生长培养基)中培养。培养后,在存在根据实例1.e获得的卷曲乳杆菌分泌蛋白质组的情况下以相对于培养基和分泌蛋白质组的总重量为0.1%(w/w)的浓度继续孵育48小时。将没有添加根据本发明的菌株的相同培养基用作对照(Control)。
在孵育结束时,除去培养基并用裂解缓冲液裂解细胞。
通过基于毛细管电泳的蛋白质分析系统鉴定并定量纤蛋白-5和弹性蛋白微纤维界面蛋白-1。将从细胞裂解物中获得的一定量的蛋白质,即0.2mg/mL的纤蛋白-5的裂解物和0.2mg/mL的弹性蛋白微纤维界面蛋白-1的裂解物上清液沉积在毛细管中,向其中添加第一抗纤蛋白-5或抗弹性蛋白微纤维界面蛋白-1抗体,随后添加与辣根过氧化物酶缀合的第二抗体和化学发光底物。将整体孵育30分钟,然后使用合适的软件通过毛细管电泳定量检测纤蛋白-5蛋白质产生的化学发光信号。
结果是相对于归一化为100%的未处理对照的所进行测定的平均值±标准偏差,以百分比表示。使用单向ANOVA测试相对于未处理的对照进行结果的统计分析。显著性水平设定为5%。
结果
根据本发明的实例1.e的卷曲乳杆菌菌株的分泌蛋白质组显示体外培养的人皮肤成纤维细胞的纤蛋白-5蛋白质表达显著增加50%。因此,卷曲乳杆菌菌株,并且特别是其分泌蛋白质组可用于增加健康皮肤和/或健康粘膜的弹性。
根据本发明的实例1.e的卷曲乳杆菌菌株的分泌蛋白质组显示体外培养的人皮肤成纤维细胞的弹性蛋白微纤维界面蛋白-1的蛋白质表达显著增加53%。因此,卷曲乳杆菌菌株,并且特别是其分泌蛋白质组可用于增加健康皮肤和/或健康粘膜的弹性。
实例4:在存在根据本发明的卷曲乳杆菌菌株的情况下皮肤弹性增加的体内测量。
表现出皮肤弹性降低的40至50岁的30名女性群体,半边脸施用了如实例7b)中所述的乳液形式的乳膏,该乳膏包含相对于乳膏总重量为1%(w/w)的根据实例1.e的卷曲乳杆菌菌株的分泌蛋白质组的最终重量浓度,或其中所述分泌蛋白质组被水替代的相同“安慰剂”乳液形式的乳膏,每天施用两次,持续2个月。
使用进行皮肤生物力学特性的评估。该临床评估设备能够测量三个不同的参数,即皮肤的总体弹性、即时弹性和弹性恢复,它们都反映了皮肤的弹性。从这些测量中,推导出反映皮肤弹性状态的不同参数。
在研究开始时(D0)、施用一个月后(D28)和最后施用2个月后(D56),用测量皮肤的总体和即时弹性以及弹性恢复。
将根据实例1.e的卷曲乳杆菌菌株的分泌蛋白质组的功效与用安慰剂乳液获得的功效进行比较。
结果
/>
使用2个月后,含有根据实例1.e的卷曲乳杆菌菌株的分泌蛋白质组的制剂引起所有弹性参数的显著增加。这种增加相对于在D0时的研究开始是显著的,但也相对于安慰剂是显著的。
这些结果显示配制的卷曲乳杆菌菌株、特别是其分泌蛋白质组用于在体内维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的生物力学特性,特别是健康皮肤和/或健康粘膜的弹性的有益效果。
实例5:在存在根据本发明的卷曲乳杆菌菌株的情况下皮肤密度增加的体内测量。
表现出前额皱纹和面部皮肤生物力学特性降低的45至65岁的31名女性群体,半边脸施用了如实例7.c中呈现的制剂中所述的乳液形式的乳膏,该乳膏包含相对于乳膏总重量为0.05%(w/w)的根据实例1.f获得的卷曲乳杆菌菌株的最终重量浓度,或其中所述菌株被水替代的相同“安慰剂”乳液形式的乳膏,每天施用两次,持续2个月。
使用配备有超声探头的扫描仪进行皮肤密度的评估。扫描仪允许可视化皮肤密度,它是细胞外基质化合物合成的反映。
在研究开始时(D0)、施用一个月后(D28)和最后施用2个月后(D56)测量皮肤密度和厚度的改善。
将根据实例1.f的卷曲乳杆菌菌株的功效与安慰剂乳液的功效进行比较。
结果
使用2个月后,根据实例1.f的卷曲乳杆菌菌株的制剂引起皮肤密度的显著增加。这种增加相对于在D0时的研究开始是显著的,但也相对于安慰剂是显著的。
这些结果显示配制的卷曲乳杆菌菌株的有益效果,用于在体内维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的生物力学特性,特别是健康皮肤和/或健康粘膜的密度。
实例6:包含根据本发明的卷曲乳杆菌菌株的美容成分的实例
根据实例1.c的卷曲乳杆菌提取物 | 0.2% |
甘油 | 80% |
水 | 适量至100 |
实例7:包含根据本发明的卷曲乳杆菌菌株的美容组合物的实例实例7.a:包含根据实例1.c的卷曲乳杆菌菌株的美容组合物的实例
使用本领域技术人员已知的方法将以下各相A、B、C和D混合在一起,以制备根据本发明的组合物。比例表示为百分比,并且大写字母的名称对应于成分的INCI名称。
A相
B相
C相
卡波姆 0.15
水 10
D相
根据实例1c)获得的卷曲乳杆菌提取物 1.00
实例7.b:包含根据实例1.e的卷曲乳杆菌菌株的美容组合物的实例
比例表示为百分比,并且大写字母的名称对应于成分的INCI名称。
A相
丙三醇(GLYCERIN) 5.00
丁二醇 10.00
黄原胶 2.00
B相
水 58.95
苯甲酸钠 0.25
丙三醇、水、乙酰丙酸钠、茴香酸钠 1.00
C相
D相
柠檬酸0.30
E相
根据实例1e获得的卷曲乳杆菌提取物 1.00
水 4.00
使用本领域技术人员已知的方法,通过在搅拌下将B添加到A中,然后将C添加到AB中,在室温下将各相A、B和C混合在一起。用D将pH调节至4.9。然后添加相E。最后,用Ultra-Turrax搅拌器进行均化以制备根据本发明的组合物。
实例7.c:包含根据实例1.f的卷曲乳杆菌菌株的美容组合物的实例
根据实例1.f获得的卷曲乳杆菌菌株在施用至皮肤前以如下根据表8定义的制剂形式添加,最终浓度为相对于制剂总重量的0.05%(w/w)。
实例8:皮肤病学组合物的实例
实例8a):含有根据本发明的活的完整卷曲乳杆菌菌株的软膏。
根据本领域技术人员已知的方法制备以下组合物,特别是关于将不同相混合在一起。
指示的量是相对于组合物的总重量的重量百分比。
*根据前述实例1a)制备成分。将根据本发明的成分灭菌,然后干燥,然后掺入软膏形式的组合物中。
实例8b):含有根据实例1c)的卷曲乳杆菌菌株的乳膏。
将相A和B加热至75℃,然后在搅拌下混合。一旦混合物回到室温,便在搅拌下添加相C和相D。
Claims (16)
1.卷曲乳杆菌菌株用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的细胞外基质分子的表达的美容和/或营养用途,该卷曲乳杆菌菌株优选地是以名称CNCM I-5579保藏的菌种。
2.如权利要求1所述的用途,其中健康皮肤和/或健康粘膜的这些细胞外基质分子选自健康皮肤和/或健康粘膜的胶原纤维、和/或健康皮肤和/或健康粘膜的弹性纤维。
3.如权利要求1或2所述的用途,用于维持和/或增加I、III、IV、V、VI、VII、XII、XIII、XIV、XVI、XVII、XXIV和/或XXIX型胶原,优选I、III、IV、V和/或XIV型,优选I、IV和/或V型胶原纤维,更优选I型胶原纤维的表达。
4.如权利要求1-3中任一项所述的用途,用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的生物力学特性,优选健康皮肤和/或健康粘膜的紧致度和/或弹性和/或密度,更优选健康皮肤和/或健康粘膜的紧致度和/或弹性。
5.如前述权利要求中任一项所述的用途,其中该菌株以完整形式使用,特别是活的和/或失活的,特别是死的,和/或以裂解物的形式使用,和/或以其一种或多种级分的形式使用,和/或以其一种或多种代谢物的形式使用,优选其分泌蛋白质组。
6.如前述权利要求中任一项所述的用途,其中该菌株以活的完整形式和/或裂解物形式使用,和/或其中使用的该菌株是以名称CNCM I-5579保藏的卷曲乳杆菌菌株。
7.如前述权利要求中任一项所述的用途,其中将该卷曲乳杆菌菌株与其发酵液和/或培养基组合。
8.如前述权利要求中任一项所述的用途,其中将该卷曲乳杆菌菌株局部施用于健康皮肤和/或健康粘膜。
9.如前述权利要求中任一项所述的用途,使得相对于美容组合物的总重量,该卷曲乳杆菌菌株以1×10-4重量%至10重量%、优选介于1×10-4重量%和5重量%之间、并且更有利地介于1×10-3重量%和0.5重量%之间的浓度存在于该组合物中,所述组合物还包含至少一种美容可接受的赋形剂。
10.一种美容护理方法,其特征在于其包括向健康皮肤和/或健康粘膜的至少一个区域局部施用如权利要求5、6或7中任一项所述的卷曲乳杆菌菌株或如权利要求9所述的美容组合物,用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的细胞外基质分子的表达,优选用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的胶原和/或健康皮肤和/或健康粘膜的弹性纤维的表达,和/或用于维持和/或增加健康皮肤和/或健康粘膜的生物力学特性,特别是紧致度和/或弹性和/或密度,优选紧致度。
11.如权利要求10所述的美容护理方法,其中如权利要求5、6或7中任一项所述的卷曲乳杆菌菌株或如权利要求9所述的美容组合物的局部施用在身体和/或面部和/或头皮的全部或部分上进行,优选在腿部、大腿、手臂、腹部、领口、颈部、腋窝或嘴唇上进行,更优选在面部的全部或部分上进行,并且优选在脸颊、前额、下巴、嘴唇或眼睛轮廓上进行。
12.如权利要求10和11中任一项所述的美容护理方法,其中该美容组合物包含如权利要求5、6或7中任一项所述的卷曲乳杆菌菌株,该卷曲乳杆菌菌株的浓度相对于该组合物的总重量为1×10-4重量%至10重量%,优选介于1×10-4重量%和5重量%之间,更有利地介于1×10-3重量%和0.5重量%之间,所述组合物还包含至少一种美容可接受的赋形剂。
13.一种卷曲乳杆菌菌株或包含该菌株的皮肤病学组合物,其有利地通过局部途径用于在治疗和/或预防皮肤和/或粘膜的病状方面使用,该病状涉及该皮肤和/或粘膜的细胞外基质分子的量和/或表达的减少和/或该皮肤和/或粘膜的胶原和/或弹性纤维的量和/或表达的减少,和/或该皮肤和/或粘膜的生物力学特性的减弱,特别是该皮肤和/或粘膜的紧致度的降低和/或该皮肤和/或粘膜的弹性的降低,和/或该皮肤和/或粘膜的密度的降低,
该菌株以完整形式使用,特别是活的和/或失活的,特别是死的,和/或以裂解物的形式使用,和/或以其一种或多种级分的形式使用,和/或以其一种或多种代谢物的形式使用,优选其分泌蛋白质组,
和/或该菌株与其发酵液和/或培养基组合。
14.如权利要求13所述使用的卷曲乳杆菌菌株,其特征在于其为包含至少一种皮肤病学可接受的赋形剂的皮肤病学组合物的形式。
15.如权利要求13和14中任一项所述使用的卷曲乳杆菌菌株,其特征在于相对于组合物的总重量,其以1×10-4重量%至10重量%、优选介于1×10-4重量%和5重量%之间、更有利地介于1×10-3重量%和0.5重量%之间的浓度存在于药物组合物、优选皮肤病学组合物中,所述组合物还包含至少一种药学上可接受的赋形剂。
16.如权利要求13至15中任一项所述使用的卷曲乳杆菌菌株,其特征在于该菌株如权利要求5、6或7中任一项所定义。
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