KR20230115997A - 락토바실러스 크리스파투스 균주 및/또는 이를 포함하는 조성물의 화장품, 기능식품 또는 피부과 용도 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 피부 및/또는 점막의 세포외 기질 분자의 발현을 유지 및/또는 증가시키기 위한, 특히 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 생체역학적 특성, 우선적으로는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 견고성 및/또는 탄력성 및/또는 밀도를 유지 및/또는 증가시키기 위한 락토바실러스 크리스파투스(Lactobacillus crispatus) 균주 및/또는 이를 포함하는 조성물의 화장품, 기능식품 및/또는 약제학적, 특히 피부과 용도에 관한 것이다.
Description
본 발명은 피부 및/또는 점막의 세포외 기질 분자의 발현을 유지 및/또는 증가시키기 위한, 특히 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 생체역학적 특성, 우선적으로는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 견고성 및/또는 탄력성 및/또는 밀도, 훨씬 더 우선적으로는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 견고성 및/또는 탄력성을 유지 및/또는 증가시키기 위한 락토바실러스 크리스파투스(Lactobacillus crispatus) 균주 및/또는 이를 포함하는 조성물의 화장품, 기능식품 및/또는 약제학적, 특히 피부과 용도에 관한 것이다.
피부의 구조와 특성은 복잡한 생물학적, 물리적, 및 생체역학적 과정의 결과로 변화하며, 이는 특히 세포외 기질 분자의 변화로 인해 진피의 탄력성, 견고성 및 밀도의 손실을 야기한다.
ECM으로 알려진 피부 및 점막의 세포외 기질은 세 가지 유형의 분자의 조합으로 구성된다:
- 섬유: 콜라겐과 엘라스틴,
- 당단백질: 섬유질보다 덜 풍부하지만 피브로넥틴 및 라미닌과 같이 세포 부착에 더 중요한 역할을 함,
- 기질을 채우는 겔을 구성하는 고도로 수화된 다당류. 이 기질은 피부의 구조와 특성, 특히 진피의 탄력성, 견고성 및 밀도를 유지하는 데 주도적인 역할을 한다.
이들 ECM 분자는 특히 섬유아세포 및 각질세포에 의해 합성되기 때문에, 상기 세포의 재생은 피부의 생체역학적 특성을 유지하는 데 필수적이다.
엘라스틴은 피브릴린 및 MAGP(마이크로피브릴 연관 당단백질(Microfibrillar Associated Glycoprotein))와 같은 다른 분자와 결합하여 탄성 섬유의 구성요소가 되는 단백질이다.
엘라스틴은 리실 옥시다제(LOX)에 의한 분자내 및 분자간 가교결합 및 마이크로피브릴에의 침착 후에 물리화학적 특성(불용성, 탄력성)을 획득하는 가용성 트로포엘라스틴 형태로 합성된다.
피부에서, 기능성 탄성 섬유는 진피 섬유아세포에 의해 형성되지만, 탄성 섬유를 생성하는 데 필요한 일부 구성요소는 또한 표피 세포에서도 발견된다.
피부의 전체 엘라스틴 함량은 증가할 수 있지만, 탄성 섬유의 전환율은 성인기에 매우 낮다. 신생아에서, 마이크로피브릴은 모두 엘라스틴으로 완전히 덮이지는 않지만, 사춘기 무렵의 나이가 되면 그렇게 된다. 40세부터는 내포물이 섬유에 나타나고, 이는 여성에서 더 자주 발생하며, 이어서 탄성 섬유가 단편화되어 진피 표피 경계(DEJ) 아래에서 소실된다. DEJ 아래의 이러한 단편화 및/또는 소실은 피부 탄력성 감소 및 주름 형성으로 반영된다. 비기능성 탄성 섬유의 합성은 광노화 동안 관찰되지만, 이러한 증가는 DEJ 하에서 탄성 섬유의 가속화된 감소를 동반한다.
콜라겐은 척추동물 조직에 대량으로 존재하는, 세포외 기질(ECM)의 구성 단백질이다. 콜라겐은 29가지 상이한 유형을 포함하는 거대 패밀리이다.
다양한 유형의 콜라겐 중에는, 구체적으로 힘줄, 인대, 각막 및 피부와 같은 많은 인간 조직, 보다 정확하게는 진피에 위치한 유형 I 콜라겐이 있다. 유형 I 콜라겐은 피부의 주요 콜라겐이다.
원섬유성 콜라겐은 프로콜라겐 섬유로부터 형성된 다음, 네트워크로 조립되고 가교결합에 의해 안정화된다. 조직에 기계적 강도를 부여하고 결과적으로 견고함을 유지하는 데 도움이 되는 것이 콜라겐이다.
피부의 노화 동안, 전체적으로 콜라겐 합성률이 감소하고 분해가 증가하여, 견고성의 감소로 이어진다. 이러한 현상은 피부가 특히 자외선에 노출될 때 훨씬 더 두드러진다. 이는 광생물학적 노화로 지칭된다.
따라서 세포외 기질의 분자는 피부의 생체역학적 특성을 유지하기 위한 화장품 활성 성분의 개발 및 개선을 위한 화장품 분야의 수많은 연구 및 혁신의 대상이다.
최근 몇 년 동안, 고급 게놈 시퀀싱 기법을 통해 수백만 가지의 미생물(박테리아, 바이러스, 진균)이 피부에 살고 있으며 피부 세균총으로도 알려진 피부 미생물총을 구성하고 있음이 밝혀졌다. 이러한 미생물(이러한 미생물총)의 대부분은 편리공생하며(commensal) 피부에 유익하다. 이들은 피부 세포와 동거하고 상호 작용하며 일부는 피부와의 상리공생(symbiosis)을 발달시켰다. 이들은 피부 방어 분자를 합성하거나 이러한 분자의 합성을 자극함으로써 피부 방어에 관여한다. 이들은 부상의 경우 피부 복구에 참여하고 염증과 싸운다. 이러한 유익한 편리공생 미생물은 항상성과 피부 균형에 참여하는 분자와 대사산물을 분비한다.
피부 미생물총의 조성과 질은 노화에 따라 변한다.
놀랍게도, 본 출원인은 나이가 들면서, 특정 박테리아가 피부에 덜 존재하고 덜 풍부하다는 것을 입증하였다. 이는 특히 박테리아 락토바실러스 크리스파투스의 경우에 그러하다.
시장에 존재하는 대부분의 해결책은 노화의 눈에 보이는 결과를 다루고 피부 미생물총을 고려하지 않으며, 이러한 미생물총의 일부 종은 피부 세포와 상리공생하고 피부의 균형과 외관에 참여한다.
본 발명은 시간 경과에 따라 감소하는 피부 세균총의 박테리아를 보충함으로써 노화된 피부의 미생물총을 재균형화한다는 점에서 보다 완전하다는 이점을 갖는다. 이 박테리아는 결국 나이가 들면서 감소하는 생물학적 과정을 재활성화함으로써 외부 공격으로부터 피부를 젊어지게 하고 오래 지속되는 보호에 기여한다.
프로바이오틱 박테리아 및 이의 파생물은 이미 피부 노화 문제를 치료하는 데 사용되지만, 대부분의 경우 사용되는 박테리아는 피부에서 유래하지 않는다. 본 발명에 따른 박테리아는 어린 피부에 자연적으로 존재한다는 장점이 있다.
특허 출원 WO 2009/031106은 피부 장벽 기능의 감소를 방지하거나 피부 장벽 기능을 강화하기 위해 헤스페리딘과 프로바이오틱의 조합을 사용하는 것을 개시한다. 상기 출원은 피부 및/또는 점막 세포외 기질 분자의 발현을 유지 및/또는 증가시키기 위한 락토바실러스 크리스파투스 균주의 용도를 개시하지 않는다.
특허 출원 WO 2019/111189는 UV 방사선-유도 손상을 방지하기 위한 락토바실러스 속의 프로바이오틱을 포함하는 용도를 개시한다. 상기 출원은 피부 및/또는 점막 세포외 기질 분자의 발현을 유지 및/또는 증가시키기 위한 락토바실러스 크리스파투스 균주의 용도를 개시하지 않는다.
따라서, 본 출원인이 아는 한, 피부 및/또는 점막 세포외 기질 분자의 발현을 유지 및/또는 증가시키거나, 피부 및/또는 점막의 생체역학적 특성을 유지 및/또는 증가시키거나, 피부 및/또는 점막 콜라겐 및/또는 피부 및/또는 점막 탄성 섬유의 발현을 유지 및/또는 증가시키기 위한 락토바실러스 크리스파투스 균주 및/또는 이를 포함하는 조성물의 화장품, 기능식품 및/또는 약제학적 용도, 특히 피부과 용도를 개시하거나 시사하는 선행 기술은 없다.
본 발명의 첫 번째 주제는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 세포외 기질 분자의 발현을 유지 및/또는 증가시키기 위한 락토바실러스 크리스파투스 균주의 화장품 및/또는 기능식품 용도이다.
본 발명의 주제는 또한, 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 세포외 기질 분자의 발현을 유지 및/또는 증가시키기 위해, 바람직하게는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 콜라겐 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 탄성 섬유의 발현을 유지 및/또는 증가시키기 위해, 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 생체역학적 특성, 특히 견고성 및/또는 탄력성 및/또는 밀도, 바람직하게는 견고성을 유지 및/또는 증가시키기 위해, 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주 또는 이를 포함하는 화장료 조성물을 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 적어도 하나의 부위에 국소 적용하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 미용 관리 방법이다.
본 발명의 주제는 또한, 피부 및/또는 점막의 세포외 기질 분자의 양 및/또는 발현의 감소, 특히 피부 및/또는 점막의 콜라겐 및/또는 피부 및/또는 점막의 탄성 섬유의 양 및/또는 발현의 감소, 및/또는 피부 및/또는 점막의 생체역학적 특성의 감소, 특히 피부 및/또는 점막의 견고성 및/또는 탄력성 및/또는 밀도의 감소를 수반하는 피부 및/또는 점막의 병리를 치료 및/또는 예방하기 위한, 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스의 균주, 또는 이를 포함하는 피부과 조성물이다.
본 발명은 또한, 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 세포외 기질 분자의 발현을 유지 및/또는 증가시키기 위한, 특히 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 콜라겐 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 탄성 섬유의 발현을 유지 및/또는 증가시키기 위한, 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 생체역학적 특성, 특히 견고성 및/또는 탄력성 및/또는 밀도, 우선적으로는 견고성을 유지 및/또는 증가시키기 위한, 명칭 CNCM I-5579로 2020년 9월 9일에 파스퇴르 연구소(28 rue du Docteur Roux, F-75024 Paris cedex 15)에 부다페스트 조약 하에 기탁된 락토바실러스 크리스파투스 균주 또는 이를 포함하는 화장품 조성물에 관한 것이다.
마지막으로, 본 발명은 피부 및/또는 점막의 세포외 기질 분자의 양 및/또는 발현의 감소, 특히 피부 및/또는 점막의 콜라겐 및/또는 탄성 섬유의 양 및/또는 발현의 감소, 및/또는 피부 및/또는 점막의 양 및/또는 생체역학적 특성의 감소, 특히 피부 및/또는 점막의 견고성의 감소, 및/또는 피부 및/또는 점막의 탄력성의 감소, 및/또는 피부 및/또는 점막의 밀도의 감소를 수반하는 피부 및/또는 점막의 병리를 치료 및/또는 예방하기 위한, 명칭 CNCM I-5579로 2020년 9월 9일에 파스퇴르 연구소(28 rue du Docteur Roux, F-75024 Paris cedex 15)에 부다페스트 조약 하에 기탁된 락토바실러스 크리스파투스 균주 또는 이를 포함하는 피부과 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 목적상, 용어 "화장품 용도 및/또는 조성물"은 비-제약학적 용도 및/또는 조성물, 즉 치료용으로 의도되지 않고 신체의 "건강한" 부분에, 구체적으로 피부 및/또는 점막의 "건강한" 부위에 적용되는 비-제약학적 용도 및/또는 조성물을 의미한다.
본 발명의 목적상, 표현 "기능식품 용도 및/또는 기능식품 조성물"은 비-제약학적 경구 투여를 위한 용도 및/또는 조성물, 즉 치료적 처치가 필요하지 않은 용도 및/또는 조성물을 의미한다.
본 발명의 목적상, 용어 "건강한 피부" 또는 "건강한 점막"은 본 발명에 따른 균주가 적용되고 피부과 전문의에 의해 "비- 병리학적"인, 즉 칸디다증, 농가진, 건선, 습진, 여드름 또는 피부염과 같은 감염, 흉터, 질환 또는 피부 장애, 또는 상처 또는 상해가 없는 것으로 언급되는 피부 또는 점막의 부위를 의미한다.
본 발명에 따르면, "점막(들)"은 안구 점막, 코 점막, 귀 점막, 비뇨생식기 점막 및/또는 구강 점막, 특히 구강, 입술 및/또는 치은 점막, 우선적으로는 안구 및/또는 구강 점막, 더 우선적으로는 입술 및/또는 안구 점막을 의미한다. 유리하게는, 상기 용어는 질 점막을 포함하지 않는다.
본 발명의 목적상, 용어 "세포외 기질 분자의 발현의 유지 및/또는 증가시키는"은 본 발명에 따른 균주의 부재 하에 검출된 유전자 발현 및/또는 단백질 합성의 수준에 비해, 본 발명에 따른 균주로 처리된, 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 세포외 기질 분자의 유전자 발현, 즉 mRNA(메신저 RNA), 및/또는 단백질 합성의 수준의 감소를 방지하는 것 및/또는 상기 수준을 증가시키는 것을 의미한다. 우선적으로는, 세포외 기질 분자의 단백질 발현을 유지 및/또는 증가시키는 사안이다.
본 발명에 따르면, 용어 "ECM 분자"는 세포외 기질을 구성하고/하거나 이에 포함되고, 인간 또는 동물 기원의 세포에 의해 합성되는 유기 분자를 의미한다.
이들은 특히 ECM의 구성 단백질이며, 구체적으로 다음으로부터 선택된다:
- ECM 콜라겐 패밀리,
- ECM 탄성 섬유 패밀리: 엘라스틴, 트로포엘라스틴, 엘라스틴-연관 단백질, 특히 피브릴린 1, 리실 산화효소, 특히 LOX 및 LOXL, EBP(엘라스틴 결합 단백질), 피불린 3 및 5, 에밀린 1 및 2.
이들은 특히 ECM의 구성 프로테오글리칸, 구체적으로 퍼레칸, 베르시칸, 류신-풍부 프로테오글리칸(SLRP), 특히 데코린, 비글리칸 및 루미칸으로부터 선택되는 분비 프로테오글리칸이다.
또한 ECM의 구성 당단백질, 특히 피브로넥틴, 라미닌, SPARC(Secreted Protein Rich in Cystein; 시스테인이 풍부한 분비 단백질) 및 테나신을 포함한다.
또한 ECM을 구성하는 글리코사미노글리칸(GAG), 구체적으로 히알루론산, 헤파란 설페이트, 더마탄 설페이트 및 콘드로이틴 설페이트를 포함한다.
또한 ECM에 포함된 단백질인 ECM 성장 인자, 특히 VEGF, PDGF, HGF 및 FGF, 구체적으로 FGF2 및 FGF 7을 포함한다.
용어 "ECM 분자"는 아마도 전구체 형태의 배양 배지에서 ECM 또는 다른 구획, 특히 세포내 및 세포외 구획에 있는 분자를 지칭한다.
본 발명에 따르면, 용어 "ECM 분자 전구체"는 ECM을 구성하거나 이에 포함되기 전에 세포에 의해 합성된 ECM 분자의 천연 및/또는 중간 형태를 의미한다. 이러한 형태는 ECM에 들어가기 전에 성숙 현상을 겪기 때문에 종종 접두사 "프로(Pro)-" 또는 "트로포(Tropo)-"로 지정된다. 예를 들어, 이들은 프로콜라겐, 트로포콜라겐, 프로엘라스틴 및 트로포엘라스틴이다.
우선적으로, 세포외 기질 분자는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 콜라겐, 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 탄성 섬유로부터 선택된다.
본 발명의 목적상, 용어 "건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 콜라겐 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 탄성 섬유의 발현을 유지 및/또는 증가시키는"은 본 발명에 따른 균주의 부재 하에 측정된 유전자 발현 및/또는 단백질 합성에 비해, 본 발명에 따른 균주로 처리된 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 콜라겐 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 탄성 섬유의 유전자 발현, 즉 mRNA(메신저 RNA)의 발현 및/또는 이의 단백질 합성의 수준의 감소를 방지하는 것 및/또는 상기 수준을 증가시키는 것을 의미한다.
구체적으로, 콜라겐 및/또는 탄성 섬유의 유전자 발현 및/또는 단백질 합성의 수준이 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주의 부재 하에 측정된 콜라겐 및/또는 탄성 섬유의 유전자 및/또는 단백질 발현의 수준에 비해, 적어도 20%, 우선적으로는 적어도 40%, 훨씬 더 우선적으로는 적어도 50% 증가한다.
본 발명의 우선적인 방식에서, 피불린-5 및/또는 에밀린-1의 단백질 발현 수준을, 예를 들어 실시예 3에 기재된 바와 같이 균주의 부재 하에 시험관내 배양된 진피 섬유아세포에서 측정된 단백질 발현 수준에 비해, 적어도 20%, 우선적으로는 적어도 40%, 훨씬 더 우선적으로는 적어도 50% 증가시키는 사안이다.
유리하게는, 피불린-5 및/또는 에밀린-1의 단백질 발현 증가의 측정은, 예를 들어 실시예 3에 제시된 방법에 따라, 우선적으로는 모세관 전기영동에 의한 분석 후, 시험관내 측정에 의해 수행된다.
본 발명의 목적상, 용어 "모세관 전기영동에 의한 분석"은 연구된 단백질, 즉 피불린-5 및/또는 에밀린-1에 특이적인 항체를 화학발광 신호를 측정하여 단백질을 검출하기 위한 화학발광 기질 및 퍼옥시다제에 접합된 상기 단백질에 부착시키는 것으로 이루어진 기법을 의미한다.
본 발명의 목적상, 용어 "콜라겐"은 건강한 피부 및/또는 또는 건강한 점막에 존재하는 유형 I, III, IV, V, VI, VII, XII, XIII, XIV, XVI, XVII, XXIV, XXIX의 콜라겐 단백질을 의미한다. 유리한 방식에 따라, 콜라겐은 유형 I, III, IV, V 및/또는 XIV 콜라겐, 우선적으로는 유형 I, IV 및/또는 V 콜라겐, 더 우선적으로는 유형 I 콜라겐으로부터 선택된다.
본 발명의 목적을 위해, 용어 "유형 I 콜라겐 단백질"은 피부, 각막, 힘줄, 인대 및 뼈, 더 우선적으로는 피부에 존재하는 콜라겐 단백질을 의미한다. 따라서, 본 발명의 우선적 방식에서, 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주는 이에 따라 건강한 피부 및/또는 건강한 점막에서 유형 I 콜라겐의 단백질 발현을 유지 및/또는 증가시키기 위해 사용된다.
본 발명의 유리한 방식에 따르면, 이러한 증가는 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주의 부재 하에 시험관내에서 배양된 진피 섬유아세포에서 측정된 콜라겐의 유전자 및/또는 단백질 발현의 수준과 비교한 증가이다.
본 발명의 우선적인 방식에서, 예를 들어 실시예 2에 기재된 바와 같은 프로토콜에 따라 균주의 부재 하에 시험관내에서 배양된 진피 섬유아세포에서 측정된 단백질 발현의 수준에 비해 적어도 10%, 우선적으로는 적어도 50%, 훨씬 더 우선적으로는 적어도 20%의 유형 I 콜라겐의 단백질 발현의 수준이 증가한다.
유리하게는, 단백질 발현 증가의 측정은, 예를 들어 실시예 2에 제시된 바와 같은 방법에 따라, 우선적으로는 효소 결합 면역흡착 분석 또는 ELISA 후에 시험관내 측정에 의해 수행된다.
본 발명의 목적상, 용어 "효소 면역분석법"은 주어진 콜라겐 단백질, 우선적으로는 유형 I 콜라겐 단백질에 특이적인 항체를 형광 측정에 의한 드러냄을 목적으로 상기 단백질에 고정시키는 것으로 이루어진 기법을 의미한다. 유리하게는, 드러냄은 형광에 의해 수행된다.
또 다른 유리한 방식에 따르면, 유전자 발현 증가의 측정은, 우선적으로는 RT-qPCR 후에 시험관내 측정에 의해 수행된다.
바람직한 구현예에서, 본 발명에 따른 균주는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 생체역학적 특성, 우선적으로는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 견고성 및/또는 탄력성 및/또는 밀도, 더 우선적으로는 건강한 피부 및/또는 점막, 구체적으로 건강한 진피의 견고성, 및/또는 건강한 피부 및/또는 점막, 구체적으로 건강한 진피의 탄력성을 유지 및/또는 증가시키는 데 사용된다.
본 발명의 목적상, 용어 "건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 생체역학적 특성"은 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 견고성 및/또는 탄력성 및/또는 밀도 및/또는 압축에 대한 저항성 및/또는 신장에 대한 저항성 및/또는 가요성 및/또는 신축성 및/또는 변형을 견디는 능력을 의미한다. 우선적으로 이는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막, 구체적으로 건강한 진피의 견고성 및/또는 탄력성 및/또는 밀도이고, 훨씬 더 우선적으로 이는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막, 구체적으로 건강한 진피의 견고성 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막, 구체적으로 건강한 진피의 탄력성이다.
건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 생체역학적 특성은 당업자에게 알려진 측정 기법, 특히 당김, 비틀기, 흡인, 만입, 레바토메트리(levatometry), 탄도 측정법(ballistometry), 고해상도 초음파 영상화 또는 탄성 측정법(elastography)에 의해, 우선적으로는 만입 또는 고해상도 초음파 영상화에 의해 연구될 수 있다.
본 발명의 목적상, 용어 "건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 생체역학적 특성을 유지 및/또는 증가시키는"은 본 발명에 따른 균주의 부재 하에 측정된 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 생체역학적 특성에 비해 본 발명에 따른 균주로 처리된 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 생체역학적 특성, 우선적으로는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막, 구체적으로 건강한 진피의 견고성, 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막, 구체적으로 건강한 진피의 탄력성, 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막, 구체적으로 건강한 진피의 밀도의 감소를 방지하는 것 및/또는 상기 생체역학적 특성을 증가시키는 것을 의미한다.
우선적으로, 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주의 부재 하에 측정된 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 생체역학적 특성에 비해 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주로 처리된 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 생체역학적 특성은 적어도 5%, 우선적으로는 10% 증가한다.
본 발명의 목적상, 미용적 관점에서, 용어 "건강한 피부 및/또는 건강한 점막, 구체적으로 건강한 진피의 견고성을 유지 및/또는 증가시키는"은, 심미적 목적을 위해 건강한 피부 및/또는 건강한 점막, 특히 내적 인자의 결과로 특히 견고성을 상실한 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 견고성의 감소를 방지하는 것 및/또는 상기 견고성을 증가시키는 것을 의미한다. 내적 인자는, 예를 들어 "성숙한" 피부, 즉 40세 초과의 사람들의 피부에서 발견될 수 있는 피부 및/또는 점막의 조직 노화, 즉 시간-유도 노화일 수 있다. 이는 세포 스트레스, 식이 변화와 같은 비병리학적 생리적 변화, 또는 구체적으로 사춘기, 임신, 폐경 및/또는 남성 갱년기 동안의 호르몬 변화에 기인할 수 있다. 이러한 견고성의 감소는 또한 예를 들어 공해, 흡연, 담배, 독소 또는 기후 및/또는 기계적 공격 인자와 같은 공격적인 환경 요인과 같은 외적 인자의 결과로 발생할 수 있다.
우선적인 방식에 따르면, 견고성의 감소는 UV 방사선에 의해 유도된 것이 아니다.
우선적으로, 건강한 피부 및/또는 건강한 점막, 구체적으로 건강한 진피의 견고성이 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주의 존재 하에 적어도 1%, 우선적으로는 적어도 3%, 더 유리하게는 적어도 5% 증가한다. 본 발명의 유리한 구현예에서, 이는 생체내, 우선적으로는 인간 얼굴의 피부에서 측정된 증가이다.
본 발명의 목적상, 미용적 관점에서, 용어 "건강한 피부 및/또는 건강한 점막, 구체적으로 건강한 진피의 탄력성을 유지 및/또는 증가시키는"은, 심미적 목적을 위해, 특히 예를 들어 "성숙한" 피부, 즉 40세 초과, 구체적으로 50세 초과의 사람들의 피부에서 발견되는 피부 및/또는 점막의 조직 노화, 즉 시간-유도 노화, 세포 스트레스, 식이 변화와 같은 비병리학적 생리적 변화, 또는 구체적으로 사춘기, 임신, 폐경 및/또는 남성 갱년기 동안의 호르몬 변화와 같은 내적 인자의 결과로 탄력성을 상실한 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 탄력성의 감소를 방지하는 것 및/또는 상기 탄력성을 증가시키는 것을 의미한다. 이러한 탄력성의 감소는 또한, 공격적인 환경 요인, 예를 들어 공해, 흡연, 담배, 독소 또는 기후 및/또는 기계적 공격 인자와 같은 외적 인자의 결과로 발생할 수 있다.
우선적인 방식에 따르면, 탄력성의 감소는 UV 방사선에 의해 유도된 것이 아니다.
추가적으로, 피부 및/또는 점막의 "탄력성을 증가시키는"이라는 용어는 본 발명에 따른 균주의 부재 하에 검출된 탄력성에 비해 균주의 존재 하에 적어도 2%, 유리하게는 적어도 4%, 더 유리하게는 적어도 6%의 생체내에서 측정된 탄력성의 증가를 의미한다. 본 발명의 우선적인 구현예에서, 이러한 측정은 인간 얼굴 피부에서 이루어진다. 우선적인 방식에서, 이러한 증가는 본 발명에 따른 균주의 존재 하에 적어도 10일, 우선적으로는 28일, 더 우선적으로는 30일, 유리하게는 적어도 56일의 처리 후 평가된다.
더 유리하게는, 탄력성은, 특히 실시예 4에 기재된 바와 같이 다양한 탄력성 구성요소, 특히 순 탄력성, 탄력성 회복 및/또는 전체 탄력성을 측정함으로써 평가된다.
본 발명의 목적상, 미용적 관점에서, 용어 "건강한 피부 및/또는 건강한 점막, 구체적으로 건강한 진피의 밀도를 유지 및/또는 증가시키는"은, 심미적 목적을 위해 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 밀도, 특히 내적 인자의 결과로 특히 밀도를 상실한 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 밀도의 감소를 방지하는 것 및/또는 상기 밀도를 증가시키는 것을 의미한다. 내적 인자는, 예를 들어 "성숙한" 피부, 즉 40세 초과의 사람들의 피부에서 발견될 수 있는 피부 및/또는 점막의 조직 노화, 즉 시간-유도 노화일 수 있다. 이는 세포 스트레스, 식이 변화와 같은 비병리학적 생리적 변화, 또는 구체적으로 사춘기, 임신, 폐경 및/또는 남성 갱년기 동안의 호르몬 변화에 기인할 수 있다. 이러한 밀도의 감소는 또한 예를 들어 공해, 흡연, 담배, 독소 또는 기후 및/또는 기계적 공격 인자와 같은 공격적인 환경 요인과 같은 외적 인자의 결과로 발생할 수 있다.
우선적인 방식에 따르면, 밀도의 감소는 UV 방사선에 의해 유도된 것이 아니다.
우선적으로, 건강한 피부 및/또는 건강한 점막, 구체적으로 건강한 진피의 밀도가 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주의 존재 하에 적어도 1%, 우선적으로는 적어도 3%, 더 유리하게는 적어도 5% 증가한다. 본 발명의 유리한 구현예에서, 이는 생체내, 우선적으로는 인간 얼굴의 피부에서 측정된 증가이다.
견고성 및/또는 탄력성 및/또는 밀도의 생체내 측정은 당업자에게 알려진 통상적인 방법, 특히 Cutometer(피부탄력측정기), Tonoderm™, 초음파 스캐너, 또는 dermaTOP과 결합된 DynaSKIN®을 사용한 측정에 의해 수행될 수 있다.
본 발명에 따르면, 락토바실러스 크리스파투스 균주는 온전한 형태, 특히 생존가능한 및/또는 비활성화된, 특히 사멸된 온전한 형태, 및/또는 용해물의 형태, 및/또는 이의 분획물 중 하나 이상의 형태, 및/또는 이의 대사산물 중 하나 이상, 우선적으로는 이의 세포분비체(secretome)의 형태로 사용될 수 있다.
각각의 형태에 대해, 본 발명에 따른 균주는 단리되거나 발효 및/또는 배양 배지와 조합될 수 있다.
우선적으로, 본 발명에 따른 균주는 이의 발효 및/또는 배양 배지와 조합된다.
본 발명의 목적상, 용어 "단리된"은 발효 및/또는 성장 배지에서 회합될 수 있는 하나 이상의 화합물과 혼합되지 않음을 의미한다.
본 발명의 목적상, 용어 "온전한 형태"는 용해된 형태와는 반대로 박테리아 외피가 온전한 형태인 천연 형태를 의미한다. 온전한 형태로 사용하는 경우 락토바실러스 크리스파투스 균주는 생존가능한 및/또는 비활성된 및/또는 사멸된 상태일 수 있다.
본 발명의 목적상, 용어 "생존가능한"은 배양물에서 콜로니를 형성할 수 있는 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주를 지칭한다.
생존가능한 온전한 형태의 락토바실러스 크리스파투스 균주의 생성은 당업자에게 통상적으로 알려진 임의의 방법에 따라 수행될 수 있다. 유리하게는, 이는 예를 들어 실시예 1.a 또는 1.f.에 기재된 바와 같은 프로토콜에 따라 수행될 것이다.
본 발명의 목적상, 용어 "비활성화된"은 더 이상 일시적으로 또는 명확하게 배양물에서 콜로니를 형성할 수 없는 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주를 지칭한다.
락토바실러스 크리스파투스 균주의 비활성화는 당업자에게 통상적으로 알려진 임의의 방법을 통해 수행될 수 있다. 이는 특히 방사선 조사, 열처리에 의해, 또는 특정 조건 하에서, 동결 건조, 고압 처리 또는 압출에 의해 비활성화될 수 있다. 유리하게는, 이는 열처리에 의해, 더 유리하게는, 예를 들어 실시예 1.b에 기재된 바와 같은 프로토콜에 따라 수행될 것이다.
열 비활성화는 주어진 시간 동안, 유리하게는 약 10초 내지 90분, 우선적으로는 약 15분 내지 1시간 동안, 유리하게는 약 60℃ 내지 150℃의 온도에서 락토바실러스 크리스파투스 균주를 인큐베이션함으로써 수행될 수 있다. 우선적으로, 이는 약 80℃에서 약 30분 동안 인큐베이션될 것이다.
본 발명의 목적상, 용어 "사멸된"은 더 이상 명확하게 배양물에서 콜로니를 형성할 수 없는 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주를 지칭한다.
본 발명의 목적상, 용어 "용해물"은 세포 용해로 알려진 현상에 의해 생물학적 세포의 파괴 또는 용해 후에 수득되는 물질을 의미하며, 따라서 고려 중인 미생물의 세포에 자연적으로 함유된 세포내 생물학적 성분 및 세포막 구성요소의 단편의 방출을 유발한다. 따라서 사용된 용해물은 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스의 균주의 모든 세포내 생물학적 성분 및 세포벽 및 막의 성분으로부터 형성된다.
용해물은 당업자에게 통상적으로 알려진 임의의 방법을 통해 수득될 수 있다. 용해물은 특히 삼투압 충격, 열 충격, 초음파, 효소 용해, 틴들간헐멸균법에 의해, 또는 원심분리 유형의 기계적 스트레스 하에, 또는 압력 증가 또는 이러한 다양한 기술의 조합에 의해 수득될 수 있다.
우선적으로, 용해물은 기계적 작용과 압력 증가의 조합에 의해 수득될 것이다. 더 우선적으로, 용해물은, 예를 들어 실시예 1.b에 기재된 바와 같은 프로토콜에 따라 수득될 것이다.
본 발명의 우선적인 구현예에서, 용해물은 박테리아 배양물 및/또는 발효 배지와 조합될 것이다.
본 발명의 목적상, 용어 "분획물"은 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 세포외 기질 분자의 발현을 유지 및/또는 증가시키는 데, 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 생체역학적 특성을 유지 및/또는 증가시키는 데 효율적인 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주의 단편을 의미한다. 이 분획물은 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주의 용해에 의해 수득된 세포내 생물학적 성분 및 세포벽 및 막 성분의 전체가 아닌 일부에 해당한다.
본 발명의 특정 구현예에 따르면, 분획물은 박테리아 원형질일 수 있다.
본 발명의 우선적인 구현예에서, 분획물은 박테리아 배양물 및/또는 발효 배지와 조합될 것이다.
본 발명의 목적상, 용어 "대사산물"은 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주의 대사로부터 유도되고 또한 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 세포외 기질 분자의 발현을 유지 및/또는 증가시키는 데, 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 생체역학적 특성을 유지 및/또는 증가시키는 데 효율적인 하나 이상의 유기 및/또는 무기 분자를 의미한다. 우선적으로, 이는 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주의 세포분비체이다.
본 발명의 특정 구현예에서, 대사산물은 박테리아 배양물 및/또는 발효 배지와 조합될 것이다.
본 발명의 목적상, 용어 "세포분비체"는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 세포외 기질 분자의 발현을 유지 및/또는 증가시키는 데, 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 생체역학적 특성을 유지 및/또는 증가시키는 데 효율적인 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주에 의해 분비되는 모든 유기 및/또는 무기 분자를 의미한다.
세포분비체는 당업자에게 통상적으로 알려진 임의의 방법을 통해 수득될 수 있다. 유리하게는, 세포분비체는 예를 들어 실시예 1.d 또는 1e에 기재된 바와 같은 프로토콜에 따라 수득될 것이다.
본 발명의 우선적인 구현예에서, 세포분비체는 박테리아 배양물 및/또는 발효 배지와 조합될 것이다.
본 발명의 우선적인 구현예에 따르면, 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주는 생존가능한 온전한 형태 및/또는 용해물 형태로 사용될 것이다.
본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주는 임의의 알려진 락토바실러스 크리스파투스 종으로부터 유래될 수 있다. 우선적으로, 락토바실러스 크리스파투스 균주는 명칭 CNCM I-5579로 2020년 9월 9일에 파스퇴르 연구소(28 rue du Docteur Roux, F-75024 Paris cedex 15)에 부다페스트 조약 하에 기탁된 종이다.
이러한 락토바실러스 크리스파투스의 특정 균주의 장점은 건강한 피부에서 자연적으로 발견된 최초의 락토바실러스 크리스파투스 종이라는 것이다.
본 발명에 따르면, 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주는, 우선적으로는 국소 및/또는 경구 적용, 더 우선적으로는 국소 적용을 위해 의도된, 활성 성분의 형태로 단독으로, 및/또는 화장품 및/또는 기능식품 및/또는 약제학적 조성물, 특히 피부과 조성물로 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 살아있는 온전한 형태로 사용되는 경우, 및 활성 성분의 형태로 단독으로 사용되는 경우, 본 발명에 따른 균주는, 유리하게는 말토덱스트린 중의 건조 형태, 즉 분말 형태일 수 있으며, 바람직하게는 균주 함량이 분말의 총 중량에 대하여 10 중량% 내지 80 중량%(w/w)의 균주, 우선적으로는 30 중량% 내지 70 중량%(w/w), 더 유리하게는 40 중량% 내지 60 중량%(w/w)의 균주일 수 있다.
대안적으로, 본 발명에 따른 살아있는 온전한 형태는 용매에 가용성으로 및/또는 희석되어 사용될 수 있다. 우선적으로는, 이 용매는 20 부피%(v/v) 미만의 물, 더 우선적으로는 5 부피%(v/v) 미만의 물을 함유하고; 더 우선적으로는 용매는 물을 전혀 함유하지 않는다. 매우 우선적으로는, 이 용매는 화장용으로 허용가능한 오일이다.
온전한 비활성화된, 특히 사멸된 형태, 및/또는 용해물의 형태, 및/또는 이의 분획물 중 하나 이상의 형태, 및/또는 이의 대사산물 중 하나 이상, 특히 이의 세포분비체의 형태로 사용되는 경우, 및 활성 성분의 형태로 단독으로 사용되는 경우, 본 발명에 따른 균주는, 유리하게는 말토덱스트린 중의 건조 형태, 즉 분말 형태일 수 있으며, 우선적으로는 균주 함량이 분말의 총 중량에 대하여 5 중량% 내지 80 중량%(w/w)의 균주, 우선적으로는 10 중량% 내지 70 중량%(w/w), 매우 우선적으로는 약 20 중량% 내지 50 중량(w/w)의 균주, 더 유리하게는 분말의 총 중량에 대하여 10 중량% 내지 50 중량%(w/w)의 균주일 수 있다.
대안적으로, 본 발명에 따른 비활성화된 온전한 형태, 특히 사멸된 형태, 및/또는 용해물, 및/또는 분획물, 및/또는 대사산물, 특히 세포분비체는, 용매, 특히 극성 용매, 예컨대 물, 알코올, 폴리올, 글리콜, 예컨대 펜틸렌 글리콜 및/또는 헥실렌 글리콜 및/또는 카프릴릴 글리콜, 또는 이들의 혼합물, 우선적으로는 물-글리콜 또는 수성-알코올 혼합물에, 더 우선적으로는 헥실렌 글리콜, 카프릴릴 글리콜 및 이들의 혼합물로부터 선택되는 글리콜을 포함하는 용매에 가용성으로 및/또는 희석되어 사용될 수 있다.
다른 구현예에서, 본 발명에 따른 균주는 적어도 하나의 화장품용으로 허용가능한 및/또는 기능식품적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 화장품 및/또는 기능식품 조성물에 포함될 수 있다. 우선적으로, 본 발명에 따른 균주는 적어도 하나의 화장품용으로 허용가능한 부형제를 포함하는 화장품 조성물에 포함된다.
본 발명의 목적상, 용어 "화장품용으로 허용가능한 부형제"는 국소적으로 허용가능한 화합물 및/또는 용매, 즉 인간 두피를 포함한 피부, 및/또는 점막과의 접촉 시 알레르기 반응을 유발하지 않고, 무독성이며 화학적으로 불안정하지 않은 화합물 및/또는 용매를 의미한다.
본 발명의 우선적인 구현예에서, 본 발명에 따른 균주는 조성물의 총 부피에 대해 1×10-4 부피% 내지 10 부피%(v/v), 우선적으로는 1×10-4 부피% 내지 5 부피%(v/v), 더 유리하게는 1x10-3 부피% 내지 3 부피%(v/v), 더 우선적으로는 0.1 부피% 내지 2 부피%(v/v)의 함량으로 화장품 및/또는 피부과 조성물에 존재하며, 상기 조성물은 또한 적어도 하나의 화장품용으로 허용가능한 부형제를 포함한다.
유리하게는, 본 발명에 따른 균주는 조성물의 총 중량에 대해 1×10-4 중량% 내지 10 중량%, 우선적으로는 1×10-4 중량% 내지 5 중량%, 더 유리하게는 1×10-3 중량% 내지 0.5 중량%의 농도로 화장품 및/또는 피부과 조성물에 존재하며, 상기 조성물은 또한 적어도 하나의 화장품용으로 허용가능한 부형제를 포함한다.
특히 유리한 방식으로, 본 발명에 따른 균주는 이의 대사산물 중 하나 이상, 특히 이의 세포분비체의 형태로 사용되는 경우, 화장품 및/또는 피부과 조성물에 조성물의 총 중량에 대해 0.05 중량% 내지 0.5 중량%의 농도, 더 우선적으로는 약 0.1 중량%의 농도로 존재하며, 상기 조성물은 또한 적어도 하나의 화장품용으로 허용가능한 부형제를 포함한다.
특히 유리하게는, 본 발명에 따른 균주는 생존가능한 온전한 형태로 사용되는 경우, 화장품 및/또는 피부과 조성물에 조성물의 총 중량에 대해 0.01 중량% 내지 0.1 중량%의 농도로, 더 우선적으로는 약 0.025 중량%의 농도로 존재하며, 상기 조성물은 또한 적어도 하나의 화장품용으로 허용가능한 부형제를 포함한다.
본 발명의 화장품 및/또는 피부과 조성물은 수성 또는 유성 용액, 크림 또는 수성 젤 또는 유성 젤, 특히 샤워 젤, 샴푸; 유제(milk); 에멀젼, 마이크로에멀젼 또는 나노에멀젼, 특히 수중유 또는 유중수 또는 다중 또는 규소계 에멀젼; 마스크; 세럼; 로션; 액체 비누; 피부용 바(bar); 연고; 밤(balm); 버터; 무스; 패치; 바람직하게는 액체, 페이스트 또는 고체인 무수 제품, 예를 들어 메이크업 파우더, 봉 또는 스틱 형태, 특히 립스틱 형태로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 화장품 및/또는 피부과 조성물은 또한 메이크업 제품 또는 메이크업-제거 제품일 수 있다.
유리하게는, 락토바실러스 크리스파투스 균주 또는 본 발명의 조성물은 신체 및/또는 얼굴 및/또는 두피의 전부 또는 일부, 바람직하게는 다리, 허벅지, 팔, 복부, 목선, 목, 겨드랑이 또는 입술, 더 우선적으로는 얼굴의 전부 또는 일부, 우선적으로는 뺨, 이마, 턱, 입술 또는 눈의 윤곽에 적용하고자 한다.
유리하게는, 균주 및/또는 이를 포함하는 조성물은 건강한 피부의 처진 부위 및/또는 무너진 부위 및/또는 톤이 부족한 건강한 피부 부위에 적용하고자 한다.
따라서, 유리하게는, 화장품 조성물은 건강한 피부 및/또는 건강한 점막에 국소 적용하기 위한 것이다.
우선적으로는, 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주는 피지선, 특히 두피를 포함하는 피부 및/또는 점막에 대한 중성 및 순한 조성물의 제형화에 특히 적합하다.
대안적으로, 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주는 경구 적용에 통상적으로 사용되는 임의의 제시 형태, 특히 기능식품 활성 성분 및/또는 기능식품 조성물의 형태일 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 선택적으로 다른 관심 화합물과 함께, 임의의 적합한 용매 및/또는 임의의 적합한 비히클 및/또는 임의의 적합한 부형제를 함유할 수 있다.
결과적으로, 이들 조성물의 경우, 부형제는, 예를 들어 방부제, 피부 연화제, 유화제, 계면활성제, 보습제, 증점제, 컨디셔너, 매트화제, 안정화제, 산화방지제, 텍스쳐링제, 광택제, 필름형성제, 가용화제, 안료, 착색제, 향료 및 자외선 차단제를 포함하는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 화합물을 함유한다. 이들 부형제는 바람직하게는 아미노산 및 이의 유도체, 폴리글리세롤, 에스테르, 셀룰로스 중합체 및 유도체, 라놀린 유도체, 인지질, 락토페린, 락토페록시다제, 수크로스계 안정화제, 비타민 E 및 이의 유도체, 천연 및 합성 왁스, 식물성 오일, 트리글리세리드, 불검화물, 피토스테롤, 식물성 에스테르, 실리콘 및 이의 유도체, 단백질 가수분해물, 호호바 오일 및 이의 유도체, 지용성/수용성 에스테르, 베타인, 아민 옥사이드, 식물 추출물, 수크로스 에스테르, 이산화티타늄, 글리신, 및 파라벤으로 이루어진 군, 더 바람직하게는 부틸렌 글리콜, 스테아레스-2, 스테아레스-21, 글리콜-15 스테아릴 에테르, 세테아릴 알코올, 페녹시에탄올, 메틸파라벤, 에틸파라벤, 프로필파라벤, 부틸파라벤, 부틸렌 글리콜, 천연 토코페롤, 글리세롤, 디하이드록시세틸 소듐 포스페이트, 이소프로필 하이드록시세틸 에테르, 글리콜 스테아레이트, 트리이소노나노인, 옥틸 코코에이트, 폴리아크릴아미드, 이소파라핀, 라우레스-7, 카보머, 프로필렌 글리콜, 글리세롤, 비사보롤, 디메티콘, 수산화나트륨, PEG-30 디폴리하이드록시스테아레이트, 카프릭/카프릴산 트리글리세리드, 세테아릴 옥타노에이트, 디부틸 아디페이트, 포도씨유, 호호바유, 황산마그네슘, EDTA, 사이클로메티콘, 잔탄검, 시트르산, 소듐 라우릴 설페이트, 광물성 왁스 및 오일, 이소스테아릴 이소스테아레이트, 프로필렌 글리콜 디펠라르고네이트, 프로필렌 글리콜 이소스테아레이트, PEG 8, 밀랍, 수소화 팜핵유의 글리세리드, 수소화 팜유의 글리세리드, 라놀린 오일, 참기름, 세틸 락테이트, 라놀린 알코올, 피마자유, 이산화티타늄, 락토스, 수크로스, 저밀도 폴리에틸렌, 등장 식염수 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된다.
피부(두피를 포함함) 및/또는 점막의 건강 및/또는 물리적 외관을 개선시키기 위한 많은 화장품용 활성 성분이 당업자에게 알려져 있다. 당업자는 최상의 효과를 얻기 위해 화장품, 기능식품 또는 피부과 조성물을 제형화하는 방법을 알고 있다. 또한, 이들 화합물은 서로 조합될 때 상승 효과를 가질 수 있다. 이들 조합도 또한 본 발명에 포함된다. 문헌[CTFA Cosmetic Ingredient Handbook, Second Edition (1992)]은 구체적으로 국소 사용에 적합한, 화장품 및 약제학 산업에서 일반적으로 사용되는 다양한 화장품 및 약제학적 성분을 기재한다. 이들 성분의 부류의 예는 다음 화합물을 포함하지만 이에 제한되지 않는다: 연마제, 흡수제, 향료, 안료, 염료, 에센셜 오일, 수렴제 등과 같은 심미적 목적을 위한 화합물(예를 들어, 정향유, 멘톨, 장뇌, 유칼립투스 오일, 유게놀, 멘틸 락테이트, 위치 하젤 증류액), 여드름 방지제, 응집 방지제, 소포제, 항균제(예를 들어, 요오도프로필 부틸카르바메이트), 산화방지제, 결합제, 생물학적 첨가제, 완충제, 팽윤제, 킬레이트제, 첨가제, 살생물제, 변성제, 증점제 및 비타민, 및 이들의 유도체 또는 등가물, 필름 형성 물질, 중합체, 유백제, pH 조절제, 환원제, 탈색제 또는 미백제(예를 들어, 하이드로퀴논, 코직산, 아스코르브산, 마그네슘 아스코르빌 포스페이트, 아스코르빌 글루코사민), 컨디셔닝제(예를 들어, 습윤제).
화장품 조성물은 또한 동일한 특성을 갖고 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주와 상승 또는 비상승 효과를 유도하는 다른 화장품 및/또는 기능 식품 작용제, 또는 보완 효과를 갖는 화장품 작용제를 포함할 수 있다.
이들은, 예를 들어 주름 방지 성분, 섬유아세포의 활성 또는 증식을 자극하는 작용제, 세포외 기질의 분자를 자극하는 작용제일 수 있다.
이들은 또한 락토바실러스 크리스파투스 균주와의 상승 효과를 위한 항노화 활성 성분 및/또는 긴장제(tensioning agent)일 수 있다. 유리하게는, 이들은 콜라겐의 유전자 및/또는 단백질 발현을 증가시키는 활성 성분 또는 콜라겐의 분해를 방지하는 활성 성분이며, 예컨대 레티놀, 비타민 C, BASF Beauty Care Solutions에서 CollguardTM라는 명칭으로 판매하는 다빌라 루고사(Davilla rugosa) 추출물, LinefactorTM라는 명칭으로 판매하는 히비스커스 아벨모스쿠스(Hibiscus abelmoschus) 종자 추출물, 본 출원인이 DermicanTM이라는 명칭으로 판매하는 펩티드, 또는 기업 Sederma에서 MatrixylTM, Matrixyl 3000TM 및 RegestrilTM이라는 명칭으로 또는 기업 Codif에서 Neuroguard라는 명칭으로, 또는 기업 Silab에서 EternalineTM이라는 명칭으로 판매하는 제품이다.
본 발명에 사용될 수 있는 긴장제는 합성 중합체, 예컨대 폴리우레탄 라텍스 또는 아크릴 라텍스, 천연 기원의 중합체, 특히 전분 형태 또는 카라기난, 알기네이트, 한천, 젤란, 셀룰로스계 중합체 및 펙틴 형태의 폴리홀로시드; 식물성 단백질 및 단백질 가수분해물; 혼합 규산염; 왁스 미립자; 예를 들어 실리카, 실리카-알루미나 복합체로부터 선택되는 무기 충전제의 콜로이드 입자; 및 이들의 혼합물로부터 선택될 수 있다.
마지막으로, 이들은 화장품 성분, 예를 들어 항균제, 자유 라디칼 스캐빈저, 수딩제, 진정제 또는 이완제, 안색, 구체적으로 얼굴의 광채를 개선하기 위해 미세순환에 작용하는 작용제, 치유제 또는 슬리밍제일 수 있다. 유리하게는, 본 발명의 화장품 및/또는 피부과 조성물은 또한 하나 이상의 긴장제 및/또는 하나 이상의 항균제 및/또는 하나 이상의 자유 라디칼 스캐빈저 및/또는 하나 이상의 수딩제 및/또는 하나 이상의 하나 이상의 슬리밍제 및/또는 미세순환에 작용하는 하나 이상의 작용제를 함유한다.
본 발명의 우선적인 방식에서 락토바실러스 크리스파투스 균주와 조합된 항균제 중에서, 2,4,4'-트리클로로-2'-하이드록시디페닐 에테르(또는 트리클로산), 3,4,4'-트리클로로바닐리드, 페녹시에탄올, 페녹시프로판올, 페녹시이소프로판올, 헥사미딘 이세티오네이트, 메트로니다졸 및 이의 염, 미코나졸 및 이의 염, 이트라코나졸, 테르코나졸, 에코나졸, 케토코나졸, 사페르코나졸, 플루코나졸, 클로트리마졸, 부토코나졸, 옥시코나졸, 술파코나졸, 술코나졸, 테르비나핀, 운데실렌산 및 이의 염, 벤조일 퍼옥사이드, 3-하이드록시벤조산, 4-하이드록시벤조산, 피트산, N-아세틸-L-시스테인, 리포산, 아젤라산 및 이의 염, 아라키돈산, 레조르시놀, 옥톡시글리세롤, 옥타노일글리신, 카프릴릴글리콜, 10-하이드록시-2-데칸산, 파르네솔, 피토스핑고신 및 이들의 혼합물이 언급될 수 있다.
자유 라디칼 스캐빈저는 비타민 C 및 아스코르빌 글루코시드, 페놀 및 폴리페놀, 구체적으로 탄닌, 엘라그산 및 탄닌산을 포함하는 이의 유도체; 에피갈로카테킨 및 이를 함유하는 천연 추출물, 구체적으로 녹차 추출물; 안토시아닌; 페놀산, 스틸벤; 모노사이클릭 또는 폴리사이클릭 방향족 화합물 스캐빈저, 탄닌, 예컨대 엘라그산 및 인돌 유도체 및/또는 중금속 스캐빈저, 예컨대 EDTA, 비타민 E와 같은 자유 라디칼 스캐빈저, 및 이의 유도체, 예컨대 토코페릴 아세테이트; 바이오플라보노이드; 코엔자임 Q10 또는 유비퀴논일 수 있다.
본 발명의 조성물에 포함된 진정제로서, 펜타사이클릭 트리테르펜, 우르솔산 및 이의 염, 올레아놀산 및 이의 염, 베툴린산 및 이의 염, 살리실산의 염, 구체적으로 아연 살리실레이트, 비사보롤, 알란토인, 오메가-3 불포화 오일, 코르티손, 하이드로코르티손, 인도메타신 및 베타메타손, 항염증 활성제, 특히 특허 출원 FR 2 847 267에 기재된 것들, 구체적으로 본 출원인이 Inhipase™라는 명칭으로 판매하는 푸에라리아 로바타(Pueraria lobata)의 뿌리 추출물, 및 테오브로마 카카오(Theobroma cacao)의 추출물이 사용될 수 있다.
미세순환에 작용하는 활성 성분, 혈관보호제 또는 혈관확장제는 플라보노이드, 루스코게닌, 니코티네이트 및 에센셜 오일로부터 선택될 수 있다.
슬리밍 활성제는 특히 특허 US 2003/086949(Coletica)에 기재된 것과 같은 지방단백질 리파제 억제제 및 구체적으로 고양이 발톱(Uncaria tomentosa) 추출물; 배출 활성제, 특히 헤스페리틴 라우레이트(Flavagrum™) 또는 퀘르시틴 카프릴레이트(Flavenger™); 포스포디에스테라제 효소 억제제, 아데닐레이트 사이클라제 활성화제, cAMP 및/또는 스페르민 및/또는 스페르미딘을 소거할 수 있는 활성제로부터 선택될 수 있다. 콜레우스 포스콜리(Coleus forskohlii) 뿌리 추출물, 세크로피아 옵투사(Cecropia obtusa) 추출물, 우바 락투카(Uva lactuca), 카페인, 포스콜린, 테오필린, 테오브로민 및/또는 이의 유도체, 본 출원인이 판매하는 Slimexcess™라는 명칭의 가수분해된 카파 카라기난 제품 및/또는 이의 혼합물이 언급될 수 있다.
본 발명의 주제는 또한, 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 세포외 기질 분자의 발현을 유지 및/또는 증가시키기 위해, 바람직하게는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 콜라겐 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 탄성 섬유의 발현을 유지 및/또는 증가시키기 위해, 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 생체역학적 특성, 특히 견고성 및/또는 탄력성 및/또는 밀도, 바람직하게는 견고성을 유지 및/또는 증가시키기 위해, 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주 또는 이를 포함하는 화장품 조성물을 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 적어도 하나의 부위에 국소 적용하는 것을 포함하는 미용 관리 방법이다.
유리하게는, 우선적으로 본 발명에 따른 화장품 조성물의 형태인 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주는 정기적인 국소 적용에 사용되며, 적어도 10일 동안, 우선적으로는 20일 동안, 더 우선적으로는 적어도 28일 동안 우선적으로는 적어도 1일 1회, 유리하게는 1일 2회 사용된다.
유리하게는, 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주 또는 이를 포함하는 조성물의 국소 적용은 신체 및/또는 얼굴 및/또는 두피의 전부 또는 일부, 우선적으로는 다리, 허벅지, 팔, 복부, 목선, 목, 겨드랑이 또는 입술, 더 우선적으로는 얼굴의 전부 또는 일부, 우선적으로는 뺨, 이마, 턱, 입술 또는 눈의 윤곽에 수행된다.
건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 세포외 기질 분자의 발현을 유지 및/또는 증가시키기 위한, 우선적으로는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 콜라겐 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 탄성 섬유의 발현을 유지 및/또는 증가시키기 위한, 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 생체역학적 특성, 특히 견고성 및/또는 탄력성 및/또는 밀도, 우선적으로는 견고성을 유지 및/또는 증가시키기 위한 본 발명에 따른 미용 관리 방법은, 유리하게는 다음 단계를 포함한다:
- 개체에서, 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 세포외 기질 분자의 발현을 유지 및/또는 증가시키는 것, 우선적으로는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 콜라겐 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 탄성 섬유의 발현을 유지 및/또는 증가시키는 것, 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 생체역학적 특성, 특히 견고성 및/또는 탄력성 및/또는 밀도, 우선적으로는 견고성을 유지 및/또는 증가시키는 것이 필요한 건강한 피부 및/또는 건강한 점막 부위의 확인, 및
- 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 세포외 기질 분자의 발현을 유지 및/또는 증가시키는 데, 우선적으로는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 콜라겐 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 탄성 섬유의 발현을 유지 및/또는 증가시키는 데, 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 생체역학적 특성, 특히 견고성 및/또는 탄력성 및/또는 밀도, 우선적으로는 견고성을 유지 및/또는 증가시키기는 데 효과적인 양으로, 즉 하기의 락토바실러스 크리스파투스 균주의 함량으로, 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주를 포함하는 화장품 조성물의 건강한 피부 및/또는 건강한 점막 부위에의 국소 적용:
- 조성물의 총 부피에 대해 1×10-4 부피% 내지 10 부피%(v/v), 우선적으로는 1×10-4 부피% 내지 5 부피%(v/v), 더 유리하게는 1×10-3 부피% 내지 3 부피%(v/v), 더 우선적으로는 0.1 부피% 내지 2 부피%(v/v), 및/또는
- 조성물의 총 중량에 대해 1×10-4 중량% 내지 10 중량%(w/w), 우선적으로는 1×10-4 중량% 내지 5 중량%(w/w), 더 유리하게는 1×10-3 중량% 내지 0.5 중량%(w/w).
본 발명의 목적상, 용어 "국소 경로"는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막 부위의 표면 상으로의 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주 또는 조성물의 직접적인 국소 적용 및/또는 분무를 의미한다.
본 발명의 목적상, 용어 "국소 및/또는 경구적으로 허용가능한"은 각각 국소 및/또는 경구 적용에 적합하며, 두피를 포함한 피부에 대해 무독성, 비자극성이고, 알레르기 반응을 유발하지 않으며 화학적으로 불안정하지 않은 성분을 의미한다.
본 발명의 주제는 또한, 피부 및/또는 점막의 세포외 기질 분자의 양 및/또는 발현의 감소, 피부 및/또는 점막의 콜라겐 및/또는 탄성 섬유의 양 및/또는 발현의 감소, 및/또는 피부 및/또는 점막의 양 및 생체역학적 특성의 감소, 특히 피부 및/또는 점막의 견고성의 감소, 및/또는 피부 및/또는 점막의 탄력성의 감소, 및/또는 피부 및/또는 점막의 밀도의 감소를 수반하는 피부 및/또는 점막의 병리를 치료 및/또는 예방하기 위해, 유리하게는 국소 경로를 통해 사용하기 위한, 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주 단독, 또는 이를 포함하는 피부과 조성물의 락토바실러스 크리스파투스 균주이다.
본 발명의 목적상, 피부과학적 관점에서, 용어 "피부 및/또는 점막의 견고성의 감소를 수반하는 피부 및/또는 점막 병리를 치료 및/또는 예방하는"은 피부 및/또는 점막 병리, 예를 들어 주사 또는 모세혈관확장증의 결과로 견고성을 상실한 피부 및/또는 점막의 견고성의, 치료적 목적을 위한 증가를 의미한다.
본 발명의 목적상, 피부과학적 관점에서, 용어 "피부 및/또는 점막의 탄력성의 감소를 수반하는 피부 및/또는 점막 병리를 치료 및/또는 예방하는"은 피부 및/또는 점막 병리, 예를 들어 일광탄력섬유증 또는 피부이완증 병리의 결과로 탄력성을 상실한 피부 및/또는 점막의 탄력성의, 치료적 목적을 위한 증가를 의미한다.
본 발명의 목적상, 피부과학적 관점에서, 용어 "피부 및/또는 점막의 밀도의 감소를 수반하는 피부 및/또는 점막 질환을 치료 및/또는 예방하는"은 피부 및/또는 점막 질환, 예컨대 엘러스-단로스 증후군 및/또는 피부다공증의 결과로 밀도를 상실한 피부 및/또는 점막의 밀도의, 치료적 목적을 위한 증가를 의미한다.
본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주는 적어도 하나의 약제학적 및/또는 피부학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물, 우선적으로는 피부과 조성물의 형태일 수 있다. 본 발명의 일 구현예에서, 상기 조성물은 국소적으로 및/또는 경구적으로, 우선적으로는 국소적으로 적용된다.
유리하게는, 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주는 약제학적, 우선적으로는 피부과 조성물에 조성물의 총 중량에 대해 1×10-4 중량% 내지 10 중량%, 우선적으로는 1×10-4 중량% 내지 5 중량%, 더 유리하게는 1×10-3 중량% 내지 0.5 중량%의 농도로 존재하며, 상기 조성물은 또한 적어도 하나의 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함한다.
유리하게는, 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주는 약제학적, 우선적으로는 피부과 조성물에 조성물의 총 부피에 대해 1×10-4 부피% 내지 10 부피%(v/v), 우선적으로는 1×10-4 부피% 내지 5 부피%(v/v), 더 유리하게는 1×10-3 부피% 내지 0.5 부피%(v/v), 더 우선적으로는 0.1 부피% 내지 2 부피%(v/v)의 농도로 존재하며, 상기 조성물은 또한 적어도 하나의 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함한다.
본 발명은 하기 도면 및 실시예의 설명을 읽으면 더 잘 이해될 것이다.
본 발명의 설명을 참조하는 실시예가 하기에 제시된다. 이들 실시예는 예시 목적으로 제공되며 결코 본 발명의 범주를 제한하지 않는다. 각각의 실시예는 일반적인 범주를 가진다.
실시예는 본 발명의 필수적인 부분을 형성하며, 실시예를 포함하여 전문에서 취해진 설명으로부터 임의의 선행 기술에 비해 신규한 것으로 보이는 임의의 특징은 본 발명의 필수적인 부분을 형성한다.
또한, 실시예에서, 달리 표시하지 않는 한 모든 백분율은 중량 기준으로 제공되고, 달리 표시하지 않는 한 온도는 섭씨 온도로 표현되며, 달리 표시하지 않는 한 압력은 대기압이다.
실시예 1. 다양한 형태의 락토바실러스 크리스파투스의 준비
실시예 1.a: 엘. 크리스파투스의 생존가능한 온전한 형태의 생성.
단리된 엘. 크리스파투스 박테리아(CNCM I-5579)를 MRS 배양 배지에 시딩하고, 37℃에서 혐기적으로 인큐베이션하였다. pH = 6의 값으로 pH를 유지하고, 배지를 24시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 종료 시, 배지를 원심분리하고, 세포 농축물을 발효 배지에 재현탁하고, 말토덱스트린의 존재 하에 동결 건조하여 최종 말토덱스트린 양이 성분의 총 중량에 대해 70 중량%(w/w)가 되도록 하였다.
실시예 1.b: 엘. 크리스파투스의 비활성화된 온전한 형태의 생성
단리된 엘. 크리스파투스 박테리아(CNCM I-5579)를 MRS 배양 배지에 시딩하고, 37℃에서 혐기적으로 인큐베이션하였다. pH = 6의 값으로 pH를 유지하고, 배지를 24시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 종료 시, 배지를 원심분리하고, 세포 농축물을 80℃에서 30분 동안 가열하여 비활성화시켰다. 그 다음 세포 농축물을 글리세롤에 재현탁하였다.
실시예 1.c: 엘. 크리스파투스 박테리아 용해물의 생성
단리된 엘. 크리스파투스 박테리아(CNCM I-5579)를 MRS 배양 배지에 시딩하고, 37℃에서 혐기적으로 인큐베이션하였다. pH = 6의 값으로 pH를 유지하고, 배지를 24시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 종료 시, 전체를 고압 균질화기로 처리하였다. 그 다음 용해물을 글리세롤에 재현탁하였다.
실시예 1.d: 엘. 크리스파투스 박테리아 세포분비체의 생성
단리된 엘. 크리스파투스 박테리아(CNCM I-5579)를 MRS 배양 배지에 시딩하고, 37℃에서 혐기적으로 인큐베이션하였다. pH = 6의 값으로 pH를 유지하고, 배지를 24시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 종료 시, 배지를 여과하여 박테리아 세포분비체를 회수하였다. 그 다음 세포분비체를 글리세롤에 재현탁하였다.
실시예 1.e: 분말 형태의 엘. 크리스파투스 박테리아 세포분비체의 생성
단리된 엘. 크리스파투스 박테리아(CNCM I-5579)를 MRS 배양 배지에 시딩하고, 37℃에서 혐기적으로 인큐베이션하였다. pH = 6의 값으로 pH를 유지하고, 배지를 24시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 종료 시, 배지를 여과하여 박테리아 세포분비체를 회수하였다. 그 다음 세포분비체에 말토덱스트린을 분무하여, 최종 말토덱스트린 양이 성분의 총 중량에 대해 90%(w/w)가 되도록 하였다.
실시예 1.f: 엘. 크리스파투스의 생존가능한 온전한 형태의 생성
단리된 엘. 크리스파투스 박테리아(CNCM I-5579)를 MRS 배양 배지에 시딩하고, 37℃에서 혐기적으로 인큐베이션하였다. pH = 6의 값으로 pH를 유지하고, 배지를 24시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 종료 시, 배지를 원심분리하고, 세포 농축물을 발효 배지에 재현탁하고, 말토덱스트린의 존재 하에 동결 건조하여 최종 말토덱스트린 양이 성분의 총 중량에 대해 50 중량%(w/w)가 되도록 하였다.
실시예 2: 본 발명에 따른 엘. 크리스파투스 균주의 존재 하에서의 섬유아세포에 의한 유형 I 콜라겐 발현의 증가.
건강한 34세 공여자로부터 수득한 "정상적인", 즉 병리가 없는 인간 섬유아세포를 24-웰 플레이트에 시딩한 다음, 융합(confluent)될 때까지 DMEM 배지에서 배양하였다.
106 CFU/mL의 농도로 PBS로 희석된 MRS 배지에서 배양 웰 위의 곤돌라에 시딩된 실시예 1.a에 따른 엘. 크리스파투스 박테리아의 존재 하에 48시간 동안 인큐베이션을 계속하였다. 본 발명에 따른 균주를 첨가하지 않은 동일한 배양 배지를 대조군(Control)으로 사용하였다.
인큐베이션 종료 시, 박테리아를 제거하고 수산화 암모늄 완충액으로 세포를 용해시켰다. 그 다음 완충액을 제거하고, 웰을 PBS/BSA(포스페이트-완충 식염수/소혈청알부민)의 혼합물로 포화시켰다.
포화 후, 항-콜라겐 I 1차 항체(Interchim/Acris, 프랑스 몽류송 소재, LH0284/R1038)를 몇 분 동안 인큐베이션한 후, 유로퓸-접합 2차 항체(Perkin Elmer)를 인큐베이션한 다음, EnVision® 다중-라벨 플레이트 판독기(Perkin Elmer)를 사용하여 (λexc. 340 nm/λem. 615 nm)에서 형광을 측정한다.
형광 결과를 본 발명에 따른 엘. 크리스파투스 균주의 부재 하에(대조군) 동일한 세포 배지로 수득한 형광에 대해 정규화하고 각각의 조건 하에서 수득한 DNA의 양과 관련시켰다. 제시된 결과는 6개 분석의 평균에 해당한다(n = 6).
결과
본 발명의 생성물인 실시예 1.a에 따른 엘. 크리스파투스 균주는 시험관내에서 배양된 인간 피부 섬유아세포에 의한 콜라겐 I의 상당한 자극을 나타내었다. 따라서 상기 균주는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 견고성을 증가시키는 데 사용될 수 있다.
실시예 3: 본 발명에 따른 엘. 크리스파투스 균주의 존재 하에서의 섬유아세포에 의한 탄성 섬유의 형성에 관여하는 단백질인 피불린-5 및 에밀린-1 발현의 증가.
건강한 19세 공여자로부터 수득한 "정상적인", 즉 병리가 없는 인간 섬유아세포를 FGM(Fibroblast Growth Medium; 섬유아세포 성장 배지)에서 배양하였다. 일단 배양되면, 실시예 1.e에 따라 수득된 엘. 크리스파투스 박테리아 세포분비체의 존재 하에 배양 배지 및 세포분비체의 총 중량에 대해 0.1%(w/w)의 농도로 인큐베이션을 48시간 동안 계속하였다. 본 발명에 따른 균주를 첨가하지 않은 동일한 배양 배지를 대조군(Control)으로 사용하였다.
인큐베이션 종료 시, 배양 배지를 제거하고 세포를 용해 완충액으로 용해시켰다.
모세관 전기영동-기반 단백질 분석 시스템을 통해 피불린-5와 에밀린-1을 확인 및 정량화하였다. 세포 용해물로부터 수득한 단백질의 양, 즉 피불린-5에 대한 용해물 0.2 mg/mL 및 에밀린-1에 대한 용해물 상청액 0.2 mg/mL를 모세관에 침착시키고 여기에 1차 항-피불린-5 또는 항-에밀린-1 항체를 첨가한 후, 호스래디쉬 퍼옥시다제 및 화학발광 기질에 접합된 2차 항체를 첨가하였다. 전체를 30분 동안 인큐베이션한 다음, 피불린-5 단백질의 검출로 인한 화학발광 신호를 적합한 소프트웨어를 사용하여 모세관 전기영동으로 정량화하였다.
결과는 수행된 분석의 평균 ± 표준 편차이며, 이는 100%로 정규화된 처리되지 않은 대조군에 대한 백분율로 표시되어 있다. 결과의 통계 분석은 일원 ANOVA 테스트를 사용하여 처리되지 않은 대조군과 비교하여 수행하였다. 유의수준은 5%로 설정하였다.
결과
본 발명의 실시예 1.e에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주의 세포분비체는 시험관내에서 배양된 인간 피부 섬유아세포에 의한 피불린-5 단백질 발현의 상당한 50% 증가를 나타내었다. 따라서, 락토바실러스 크리스파투스 균주, 구체적으로 이의 세포분비체는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 탄력성을 증가시키는 데 사용될 수 있다.
본 발명의 실시예 1.e에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주의 세포분비체는 시험관내에서 배양된 인간 피부 섬유아세포에 의한 에밀린-1 단백질 발현의 상당한 53% 증가를 나타내었다. 따라서, 락토바실러스 크리스파투스 균주, 구체적으로 이의 세포분비체는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 탄력성을 증가시키는 데 사용될 수 있다.
실시예 4: 본 발명에 따른 엘. 크리스파투스 균주의 존재 하에서의 피부 탄력성 증가의 생체내 측정.
얼굴의 피부 탄력 감소를 나타내는 40세 내지 50세 여성 30명의 집단에게 크림의 총 중량에 대해 1%(w/w)의 실시예 1.e에 따른 엘. 크리스파투스 균주의 세포분비체의 최종 중량 농도를 포함하는, 실시예 7b)에 기재된 바와 같은 에멀젼 형태의 크림, 또는 상기 세포분비체를 물로 대체한 동일한 "플라세보" 에멀젼의 형태를 얼굴의 절반에 하루에 2회 적용의 비율로 2개월 동안 적용하였다.
Cutometer®를 사용하여 피부의 생체역학적 특성 평가를 수행하였다. 이 임상 평가 장비는 3가지 상이한 매개변수, 즉 피부의 전반적인 탄력성, 즉각적인 탄력성, 및 탄력 회복을 측정하는 능력을 가지며, 이들 매개변수 모두는 피부의 탄력성을 반영한다. 이들 측정으로부터, 피부의 탄력성의 상태를 반영하는 다양한 매개변수를 도출하였다.
연구 시작(D0), 1개월의 적용 후(D28), 마지막으로 2개월의 적용 후(D56) 피부의 전체적이고 즉각적인 탄력성과 또한 탄력 회복을 Cutometer®로 측정하였다.
실시예 1.e에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주의 세포분비체의 효능을 플라세보 에멀젼으로 얻은 효능과 비교하였다.
결과
2개월 사용 후, 실시예 1.e에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주의 세포분비체를 함유하는 제형은 모든 탄력성 매개변수에서 상당한 증가를 유도하였다. 이 증가는 D0에서의 연구 시작에 비해 상당하지만 플라세보에 비해서도 상당하다. 이들 결과는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 생체역학적 특성, 구체적으로 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 탄력성을 생체내에서 유지 및/또는 증가시키기 위한, 제형화된 락토바실러스 크리스파투스 균주, 구체적으로 이의 세포분비체의 유익한 효과를 나타낸다.
실시예 5: 본 발명에 따른 엘. 크리스파투스 균주의 존재 하에서의 피부 밀도 증가의 생체내 측정.
이마의 주름 및 얼굴 피부의 생체역학적 특성의 감소가 나타난 45세 내지 65세 여성 31명의 집단에게 크림의 총 중량에 대해 0.05%(w/w)의 실시예 1.f에 따라 수득한 엘. 크리스파투스 균주의 최종 중량 농도를 포함하는, 실시예 7.c에 제시된 제형에 기재된 바와 같은 에멀젼 형태의 크림, 또는 상기 균주를 물로 대체한 동일한 "플라세보" 에멀젼의 형태를 얼굴의 절반에 하루에 2회 적용의 비율로 2개월 동안 적용하였다.
초음파 프로브가 장착된 스캐너를 사용하여 피부 밀도의 평가를 수행하였다. 스캐너에 의해 세포외 매트릭스 화합물의 합성을 반영하는 피부 밀도의 시각화가 가능하다.
연구 시작(D0), 1개월의 적용 후(D28), 마지막으로 2개월의 적용 후(D56) 피부 밀도 및 두께의 개선을 측정하였다.
실시예 1.f에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주의 효능을 플라세보 에멀젼의 효능과 비교하였다.
결과
2개월 사용 후, 실시예 1.f에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주의 제형은 피부 밀도의 상당한 증가를 유도하였다. 이 증가는 D0에서의 연구 시작에 비해 상당하지만 플라세보에 비해서도 상당하다.
이들 결과는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 생체역학적 특성, 구체적으로 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 밀도를 생체내에서 유지 및/또는 증가시키기 위한, 제형화된 락토바실러스 크리스파투스 균주의 유익한 효과를 나타낸다.
실시예 6: 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주를 포함하는 화장품 성분의 예
실시예 7: 본 발명에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주를 포함하는 화장품 조성물의 예
실시예 7.a: 실시예 1.c에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주를 포함하는 화장품 조성물의 예
당업자에게 알려진 방법을 사용하여 본 발명에 따른 조성물을 제조하기 위해 하기의 다양한 상 A, B, C 및 D를 함께 혼합한다. 비율은 백분율로 표시되어 있으며 원문에서 대문자로 나타낸 명칭은 성분의 INCI 명칭에 해당한다.
상 A
글리세릴 스테아레이트 및 PEG-100 스테아레이트
4.00
펜타에리스리틸 디스테아레이트
1.50
세테아릴 이소노나노에이트
3.00
프로필헵틸 카프릴레이트
5.00
코코일 카프릴레이트
2.00
디카프릴릴 카르보네이트
3.00
디메티콘
1.00
상 B
물
64.43
프로필렌 글리콜, 페녹시에탄올, 클로르페네신, 메틸파라벤
1.00
글리세롤
1.57
잔탄검
0.20
부틸렌 글리콜
2.00
수산화나트륨, 물
0.15
상 C
카보머
0.15
물
10
상 D
실시예 1c)에 따라 수득된 락토바실러스 크리스파투스 추출물
1.00
실시예 7.b: 실시예 1.e에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주를 포함하는 화장품 조성물의 예
비율은 백분율로 표시되어 있으며 원문에서 대문자로 나타낸 명칭은 성분의 INCI 명칭에 해당한다.
상 A
글리세린
5.00
부틸렌 글리콜
10.00
잔탄검
2.00
상 B
물
58.95
벤조산나트륨
0.25
글리세린, 물, 소듐 레불리네이트, 소듐 아니세이트
1.00
상 C
폴리글리세릴-2 디폴리하이드록시스테아레이트
1.00
디프로필헵틸 카르보네이트
3.00
디카프릴릴 카르보네이트
3.00
카프릴릴 카프릴레이트/카프레이트
10.00
라우레스-7 시트레이트
0.50
상 D
시트르산
0.30
상 E
실시예 1e에 따라 수득된 락토바실러스 크리스파투스 추출물
1.00
물
4.00
당업자에게 알려진 방법을 사용하여 교반하면서 A에 B를 첨가한 다음, AB에 C를 첨가함으로써 실온에서 다양한 상 A, B 및 C를 함께 혼합한다. D를 이용하여 pH를 4.9로 조정한다. 그 다음 상 E를 첨가한다. 마지막으로 Ultra-Turrax 블렌더로 균질화를 수행하여 본 발명에 따른 조성물을 제조한다.
실시예 7.c: 실시예 1.f에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주를 포함하는 화장품 조성물의 예
표 8에 따라 하기 정의된 제형으로 피부에 적용하기 직전에 실시예 1.f에 따라 수득된 락토바실러스 크리스파투스 균주를 제형의 총 중량에 대해 0.05%(w/w)의 최종 농도로 첨가한다.
실시예 8: 피부과 조성물의 예
실시예 8a): 본 발명에 따른 엘. 크리스파투스의 생존가능한 온전한 균주를 함유하는 연고
하기 조성물을, 구체적으로 함께 혼합되는 다양한 상에 대하여, 당업자에게 알려진 방법에 따라 제조한다.
표시된 양은 조성물의 총 중량에 대한 중량 백분율이다.
성분 *
3.00
부형제:
저밀도 폴리에틸렌
5.50
액상 바셀린
qs 100
* 성분을 상기 실시예 1a)에 따라 제조한다. 본 발명에 따른 성분을 멸균한 다음 건조시킨 후 연고 형태로 조성물에 혼입한다.
실시예 8b): 실시예 1c)에 따른 락토바실러스 크리스파투스 균주를 함유하는 크림.
상 A와 B를 75℃까지 가열한 다음 교반하면서 혼합한다. 혼합물이 실온으로 되돌아오면, 상 C와 D를 교반하면서 첨가한다.
Claims (16)
- 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 세포외 기질 분자의 발현을 유지 및/또는 증가시키기 위한, 락토바실러스 크리스파투스(Lactobacillus crispatus) 균주, 우선적으로는 명칭 CNCM I-5579로 기탁된 종인 락토바실러스 크리스파투스 균주의 화장품 및/또는 기능식품 용도.
- 제1항에 있어서, 상기 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 세포외 기질 분자는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 콜라겐 섬유, 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 탄성 섬유로부터 선택되는, 용도.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 유형 I, III, IV, V, VI, VII, XII, XIII, XIV, XVI, XVII, XXIV 및/또는 XXIX 콜라겐, 우선적으로는 유형 I, III, IV, V 및/또는 XIV, 우선적으로는 유형 I, IV 및/또는 V 콜라겐 섬유, 더 우선적으로는 유형 I 콜라겐 섬유의 발현을 유지 및/또는 증가시키기 위한, 용도.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 생체역학적 특성, 우선적으로는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 견고성 및/또는 탄력성 및/또는 밀도, 더 우선적으로는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 견고성 및/또는 탄력성을 유지 및/또는 증가시키기 위한, 용도.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 균주는 온전한 형태, 특히 생존가능한 및/또는 비활성화된, 특히 사멸된 온전한 형태, 및/또는 용해물의 형태, 및/또는 이의 분획물 중 하나 이상의 형태, 및/또는 이의 대사산물 중 하나 이상, 우선적으로는 이의 세포분비체(secretome)의 형태로 사용되는, 용도.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 균주는 생존가능한 온전한 형태 및/또는 용해물 형태로 사용되고/되거나 사용되는 균주가 명칭 CNCM I-5579로 기탁된 락토바실러스 크리스파투스 균주인, 용도.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 락토바실러스 크리스파투스 균주는 발효 및/또는 배양 배지와 조합되는, 용도.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 락토바실러스 크리스파투스 균주는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막에 국소적으로 적용되는, 용도.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 락토바실러스 크리스파투스 균주가 화장품 조성물에 조성물의 총 중량에 대해 1×10-4 중량% 내지 10 중량%, 우선적으로는 1×10-4 중량% 내지 5 중량%, 더 유리하게는 1×10-3 중량% 내지 0.5 중량%의 농도로 존재하며, 상기 조성물은 또한 적어도 하나의 화장품용으로 허용가능한 부형제를 포함하는, 용도.
- 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 세포외 기질 분자의 발현을 유지 및/또는 증가시키기 위해, 바람직하게는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 콜라겐 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 탄성 섬유의 발현을 유지 및/또는 증가시키기 위해, 및/또는 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 생체역학적 특성, 특히 견고성 및/또는 탄력성 및/또는 밀도, 바람직하게는 견고성을 유지 및/또는 증가시키기 위해, 제5항 내지 제7항 중 어느 한 항에 청구된 락토바실러스 크리스파투스 균주 또는 제9항에 청구된 화장품 조성물을 건강한 피부 및/또는 건강한 점막의 적어도 하나의 부위에 국소 적용하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 미용 관리 방법.
- 제10항에 있어서, 상기 제5항 내지 제7항 중 어느 한 항에 청구된 락토바실러스 크리스파투스 균주 또는 제9항에 청구된 화장품 조성물을 국소 적용하는 것은 신체 및/또는 얼굴 및/또는 두피의 전부 또는 일부, 우선적으로는 다리, 허벅지, 팔, 복부, 목선, 목, 겨드랑이 또는 입술, 더 우선적으로는 얼굴의 전부 또는 일부, 우선적으로는 뺨, 이마, 턱, 입술 또는 눈의 윤곽에 수행되는, 미용 관리 방법.
- 제10항 또는 제11항에 있어서, 상기 화장품 조성물은 상기 제5항 내지 제7항 중 어느 한 항에 청구된 락토바실러스 크리스파투스 균주를 조성물의 총 중량에 대해 1×10-4 중량% 내지 10 중량%, 우선적으로는 1×10-4 중량% 내지 5 중량%, 더 유리하게는 1×10-3 중량% 내지 0.5 중량%의 농도로 포함하며, 상기 조성물은 또한 적어도 하나의 화장품용으로 허용가능한 부형제를 포함하는, 미용 관리 방법.
- 피부 및/또는 점막의 세포외 기질 분자의 양 및/또는 발현의 감소, 피부 및/또는 점막의 콜라겐 및/또는 탄성 섬유의 양 및/또는 발현의 감소, 및/또는 피부 및/또는 점막의 생체역학적 특성의 감소, 특히 피부 및/또는 점막의 견고성의 감소, 및/또는 피부 및/또는 점막의 탄력성의 감소, 및/또는 피부 및/또는 점막의 밀도의 감소를 수반하는 피부 및/또는 점막의 병리를 치료 및/또는 예방하기 위해, 유리하게는 국소 경로를 통해 사용하기 위한, 락토바실러스 크리스파투스 균주, 또는 이를 포함하는 피부과 조성물로서,
상기 균주는 온전한 형태, 특히 생존가능한 및/또는 비활성화된, 특히 사멸된 온전한 형태, 및/또는 용해물의 형태, 및/또는 이의 분획물 중 하나 이상의 형태, 및/또는 이의 대사산물 중 하나 이상, 우선적으로는 이의 세포분비체의 형태로 사용되고/되거나.
상기 균주는 발효 및/또는 배양 배지와 조합되는, 락토바실러스 크리스파투스 균주, 또는 이를 포함하는 피부과 조성물. - 제13항에 있어서, 적어도 하나의 피부학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 피부과 조성물의 형태임을 특징으로 하는, 락토바실러스 크리스파투스 균주.
- 제13항 또는 제14항에 있어서, 약제학적, 우선적으로는 피부과 조성물에 조성물의 총 중량에 대해 1×10-4 중량% 내지 10 중량%, 우선적으로는 1×10-4 중량% 내지 5 중량%, 더 유리하게는 1×10-3 중량% 내지 0.5 중량%의 농도로 존재하며, 상기 조성물은 또한 적어도 하나의 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 것을 특징으로 하는, 락토바실러스 크리스파투스 균주.
- 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 균주는 제5항 내지 제7항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은, 락토바실러스 크리스파투스 균주.
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