CN116655785B - 一种抑制寨卡病毒感染的单克隆抗体及其应用 - Google Patents
一种抑制寨卡病毒感染的单克隆抗体及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及医药技术领域，公开了一种抑制寨卡病毒感染的单克隆抗体及其应用。本发明单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括的CDR1氨基酸序列是：SEQ ID NO.3，CDR2氨基酸序列是：SEQ ID NO.4，CDR3的氨基酸序列是SEQ ID NO.5，其轻链可变区包括的CDR1的氨基酸序列是：SEQ ID NO.6，CDR2的氨基酸序列是：SEQ ID NO.7，CDR3的氨基酸序列是：SEQ ID NO.8。其能够与ZIKV宿主细胞受体CD104结合，能有效抑制ZIKV病毒感染宿主细胞，大大提高Ifnar1‑/‑小鼠A129感染ZIKV的存活率。因此在预防或治疗寨卡病毒感染引起的疾病中具有较大的应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种抑制寨卡病毒的方法及其应用。
背景技术
寨卡病毒（ZIKV）属于黄病毒科黄病毒属，基因组为单股正链RNA，是一种主要通过伊蚊传播的虫媒病毒，自然宿主尚不明确。
ZIKV感染的潜伏期尚不清楚，一般为3-12天。ZIKV感染者中，有80%左右为隐性感染，只有约20%会表现轻微症状。ZIKV的最大危害在于其感染能够导致新生儿小头畸形。在2015年5月-2016年1月间，巴西报道了将近4000例感染分娩了小头畸形儿的孕妇伴随ZIKV感染，与往年小头畸形比例相比，上升了约20倍。有证据表明ZIKV可以突破血胎屏障并感染胎儿，受感染胎儿脑脊液中寨卡病毒拷贝数比成人血清中病毒拷贝数高。除引起新生儿小头畸形外，ZIKV还可能攻击中枢神经系统，引发格林巴利综合征。ZIKV可突破血睾屏障感染睾丸组织及精子。ZIKV可在部分感染者的精液中存在超过8个月以上。此外，有研究显示ZIKV可能在不引起任何临床症状的情况下，导致妇女生育能力的丧失。
发明内容
经过前期研究，发明人鉴定到宿主细胞CD104是ZIKV病毒的受体，并证明了CD104参与了ZIKV入侵宿主细胞，协助寨卡病毒侵入宿主细胞。因此，本发明旨在基于ZIKV的宿主细胞受体CD104，筛选并获得具有抑制ZIKV侵入的单克隆抗体。具体以ZIKV的受体CD104为抗原免疫BALB/c小鼠，通过杂交瘤技术筛选单克隆抗体，采用小鼠中和实验检测抗体中和活性，选取中和活性高的抗体进一步进行保护剂量、窗口期和预防效果评价，扩增抗体轻重链可变区并分析其CDR序列。
本发明提供一种抑制寨卡病毒感染的单克隆抗体或其抗原结合片段，其是针对CD104抗原的单克隆抗体或其抗原结合片段。
具体地一个抗体称为13H10，其包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括的CDR1氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，CDR2氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，其轻链可变区包括的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。
更具体地，重链可变区氨基酸序列为：SEQ ID NO.1，轻链可变区氨基酸序列为：SEQ ID NO.2。
本发明进一步提供所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的编码核酸。
本发明也提供所述的编码核酸的表达载体，以及含所述的编码核酸，或所述的表达载体的重组细胞。
本发明提供含有所述的单克隆抗体或其抗原结合片段作为有效成分的预防或治疗寨卡病毒感染引起的疾病的药物组合物。任选地，还包括药学上可接受助剂。
本发明还提供所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的用途，其是在制备针对寨卡病毒感染引起的疾病的预防或治疗的药物中应用。具体实施方式中，所述疾病是新生儿小头畸形、格林巴利综合征、妇女生育能力的丧失。
本发明通过研究筛选得到与受体CD104结合的单克隆抗体，尤其获得的一个鼠源单克隆抗体13H10能够与ZIKV宿主细胞受体CD104结合，能够有效抑制ZIKV病毒感染宿主细胞，大大提高Ifnar1-/-小鼠A129感染ZIKV的存活率。
附图说明
图1、Biacore实验检测13H10抗体与CD104之间的亲和力结果图。其中，图右侧自上而下的6个浓度分别对应图中自上而下的6个线条。
图2、流式细胞实验检查13H10抗体影响ZIKV在细胞内复制情况图。
图3、动物实验检查13H10抗体对A129小鼠的存活率影响的结果图。
图4、解剖实验检查13H10抗体对孕鼠胎盘影响的结果图。
图5、解剖实验检查13H10抗体对孕鼠胚胎影响的结果图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明进行进一步的说明，以期对本发明有更好的理解，但不构成对本发明的限制。
实施例中用到的材料
1、实验动物、细胞、菌株
雌性BALB/c小鼠（6-8 周）（维通利华），雄性昆明小鼠（6-8 周）（维通利华），Ifnar1-/-小鼠A129（维通利华代购自Jackson Lab），SP2/0细胞（实验室保存）。
2、实验试剂与耗材
96孔酶标板（NEST），Protein-G亲和层析柱（GE公司），HRP标记的羊抗鼠IgG（Thermo）， TMB（索莱宝），完全弗氏佐剂（Sigma），不完全弗氏佐剂（Sigma），1640培养液（Gibico），双抗（Gibico），血清（Gibico），PEG（Sigma），小鼠单抗Ig类/亚类鉴定试剂（博奥龙），BoNTA毒性标准品（本实验室），DMEM培养基（Kccell），细胞/细菌总RNA提取试剂盒（天根），RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit（Thermo），质粒小提试剂盒（天根），PVDF膜（Millipore），Easysee Western Blot Kit（全式金）SDS-PAGE样品缓冲液（生工），DMSO（伊诺凯），细胞培养瓶T25（Corning），细胞冻存管（Corning），20 mL、50 mL 无菌离心管（Corning）6、24、96孔细胞培养板（COSTAR）。
3、溶液配制
包被缓冲液：称取Na2CO31.59 g， NaHCO32.93 g溶于800 mL ddH2O中，调节pH到9.6定容到1 L。
封闭液（5% 脱脂奶粉、ELISA稀释液）：称取脱脂奶粉5 g溶于PBST缓冲液中，现用现配，充分溶解。
PBS（磷酸盐缓冲液）：称取NaCl 8 g，KCl 0.2 g ，Na2HPO4·12H2O 3.58 g ，KH2PO40.24 g溶于800mL ddH2O中浓HCl调节pH 到7.4，定容到1 L。
PBST：1 L PBS中加500 μL 吐温20，混匀。
2%的BSA：称取2 g白蛋白BSA，溶于ddH2O定容到100 m了。
不完全培养液：DMEM无血清培养基。
HAT选择培养基液：用含20% Sigma血清的DMEM培养基将50×HAT稀释为1×HAT。
冻存液：90% 的Sigma血清，10% DMSO。
LB液体培养基：称取NaCl 10 g，酵母提取物5 g，蛋白胨10 g，溶于800mL ddH2O中，定容到1 L。
LB固体培养基：每100mL液体LB加1.5 g琼脂。
Protein-G纯化结合缓冲液：称取NaH2PO41.47 g， Na2HPO4·12H2O1.1 g，定容至1L，调节pH至7.0，抽滤。
Protein-G纯化洗脱缓冲液：称取Glycine 7.507 g，定容至1 L，浓HCl调节pH至2.7，抽滤。
1M pH7.9的tris-HCl缓冲液：称取Tris-Base 12.11 g，溶于ddH2O定容至100 mL，用浓HCl调节pH至9.0。
1640细胞培养基：1640培养基加入10% Gibico血清和1%双抗。
DMEM细胞培养基：DMEM培养基加入10% Sigma血清和1%双抗。
10×转膜缓冲液：称取甘氨酸29 g，Tris- Base 58 g，SDS 3.7 g溶于ddH2O定容到1 L。
1×转模缓冲液：量取100mL 10×转膜缓冲液中加入200命令甲醇再用ddH2O定容至1 L。
实施例中用到的方法
1、单克隆抗体13H10的制备与纯化
（1）按单克隆抗体制备方法，选取雌性BALB/c小鼠（6-8w），将50 μg抗原CD104与完全弗氏佐剂混匀，采用皮下多点注射的方式进行首次免疫。第21 d 以相同剂量的CD104与不完全弗氏佐剂混匀、以相同的注射方式进行第2次免疫，第42 d不加佐剂用相同的剂量CD104进行腹腔注射完成第3次免疫。第56 d以500 μg的剂量CD104采用腹腔注射进行强化免疫。
（2）强化免疫后3 d，将小鼠断颈处死，用75%酒精消毒。在将无菌状态下分离出脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞按1:5比例混合，采用PEG法进行细胞融合。筛选阳性克隆，采用有限稀释法将阳性孔进行克隆化。
（3）获得稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株后，取杂交瘤细胞培养上清与ZIKV共孵育，测定其对ZIKV侵染Vero细胞的抑制效果。筛选获得抑制效果最好的一株单克隆抗体13H10。
（4）采用BALB/c小鼠通过体内诱生方法制备抗体。每只小鼠腹腔注射0.5 mL液体石蜡，2周以后取1×106个表达13H10抗体的杂交瘤细胞腹腔注射，注射细胞10天后收集腹水，饱和硫酸铵盐析后用Protein-G亲和层析柱进行纯化。
2、单克隆抗体13H10与CD104的亲和力测定
（1）为不影响结果的分析，需保证实验中蛋白所在的缓冲液与用于实验过程中的缓冲液完全一致。通过分子筛层析柱将用于SPR实验中的所有蛋白换液至HEPES-EP缓冲液中（10 mM HEPES-HCl，300 mM NaCl，0.005 % Tween-20，pH 7.4），使用前将缓冲液用0.22μm的滤膜过滤，并超声除气。
（2）本实验使用仪器为Biacore 8k，ProteinG芯片。稀释流动相蛋白CD104，浓度为1 uM，流过芯片表面，确定无非特异性结合。
（3）将固定相蛋白抗体流过传感器芯片，通过分析传感图，确定抗体蛋白13H10能偶联到芯片表面，此步骤中的固定蛋白可用0.1M Gly pH=3.0洗脱。
（4）将流动相蛋白用缓冲液稀释到10 nM、100nM、1 μM，分别流过芯片，初步判断二者亲和力所在范围。
（5）设计系列浓度梯度，倍比稀释流动相蛋白CD104（0 nM, 25 nM, and 50 nM,100 nM, 200 nM, 400 nM, 和800 nM ），依次流过固定相通道。通常需保证最后算得的亲和力值位于浓度梯度的中间或中间偏低的位置。进样时选用KINJECT 模式，机器流速为30μL/min，结合时间和解离时间均为60 s。
（6）利用Biacore8k软件分析动力学参数、计算亲和力。
3、单克隆抗体13H10保护小鼠存活率的效果评价
为了检测抗体是否具有中和作用，能否起到抗病毒作用，将20只6周龄的干扰素受体缺陷小鼠分成2组，分别腹腔注射13H10抗体以及IgG，第二天注射103FFU ZIKV-SMGC-1病毒，注射之前及之后每天都称体重检测体重变化，记录小鼠死亡情况。小鼠体重降低到初始体重的75%以下时，将小鼠处死并记为死亡。
4、单克隆抗体13H10抑制ZIKV对敏感细胞的感染
（1）将细胞分至6孔板，培养12~24小时，细胞汇合度约为70%。
（2）取一定量的抗体用培养基稀释后加入到细胞中，4℃孵育60分钟。
（3）将处理后的细胞按照MOI 0.5感染ZIKV病毒，4℃孵育1小时。
（4）吸走上清，冷PBS 洗三次。
（5）细胞直接处理用于实验分析，或培养特定时间后用于实验分析。
5、病毒滴度检测
（1）将10cm培养皿中的Vero细胞用胰酶消化，随后用10%血清的DMEM重悬。
（2）将重悬细胞计数，分至96孔板，每孔约1000个细胞，继续培养12~24小时。
（3）吸取100ul病毒原液，用含2%血清的培养基进行倍比稀释，稀释倍数从10倍到108倍。
（4）每个稀释度按每孔100μl的量加入到96孔板中，每个稀释度重复10个孔，同时设置两个孔的阴性对照。
（5）置于培养箱中，37℃ 5% CO2条件下培养5天，每天观察细胞病变情况。
（6）计算50%细胞病变以上及以下的比距，比距=（高于50%的病变率-50%）/(高于50%的病变率-小于50%的病变率)。
（7）lgTCID50=距离比例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数。TCID50含义为：将病毒稀释接种100ul的细胞可使50%的细胞发生病变。
6、抗体重链、轻链可变区基因的扩增
用天根RNAprep pure Cell/Bacteria Kit RNAprep pure 培养细胞/细菌总RNA提取试剂盒调取细胞中的总RNA，用Thermo Scientific Revert Aid First Strand cDNASynthesis Kit将其逆转录成cDNA。
（1）阳性克隆株细胞的复苏和培养
将装有细胞株的冻存管从液氮罐中取出立即放入37℃水中融化，融化后立即1000r/min离心3 min。去上清，取1 mL DMEM细胞培养基迅速加入冻存管中重悬细胞，转移到加有10 mL DMEM细胞培养基的细胞培养瓶中。待细胞长到增值期取1mL到装有10 mL DMEM细胞培养基的细胞培养瓶中，待细胞长到增值期提取总RNA。
（2）提取阳性克隆株的总RNA
将细胞轻轻吹起并计数，收集细胞于离心管中1000 r/min离心3 min，去上清（控制细胞量不超过5×106个）。按天根细胞/细菌总RNA提取试剂盒说明书提取总RNA (最后用30 µL的无核酸酶的ddH2O洗脱)。
（3）逆转录成单链cDNA
根据Thermo Scientific RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit说明书设计体系如下：
试剂融化后按以上体系混匀后置于冰上，离心3~5 s在65℃孵育5 min。
将试管冰浴加入以下组分：
轻轻混匀后离心3~5 s，42℃，孵育60 min。将反应体系置70℃金属浴5 min终止反应。最后将cDNA保存于-70℃冰箱中。
以获得抗体的cDNA为模板，采用简并引物（李竞、王琰、李全喜等。抗胃癌鼠单抗3H11V区基因的克隆及人-鼠嵌合轻链的表达.中华微生物学和免疫学杂志.1997年5月第17卷第3期。）分别扩增出抗体轻链及重链可变区基因。将抗体可变区基因连入pMD-18T质粒后转入DH5ɑ，将菌落PCR鉴定结果为阳性的菌送测序，通过PCR引物与测得的序列比对截取抗体基因序列。查看其阅读框后用数据库IMGT分析测得的抗体可变区序列分析得出其CDR区序列。
（4）目的片段PCR
取得到的抗体的cDNA 为模板PCR。所用PCR简并引物如表1，抗体轻链的正向引物有5种，抗体重链的正向引物有4种。根据Trans Taq DNA Polymerase HiFi Fidelity(HiFi) 说明书设计PCR反应体系如下：
PCR程序采用降落PCR，95℃预变性5 min，95℃变性30 s，前十个循环退火温度依次从65℃降到56℃，后20个循环维持56℃。72℃延伸90 s，共30个循环，72℃终延伸10 min，20℃保存。
表1 抗体可变区扩增引物序列表
（5）基因片段的切胶回收
采用1% 琼脂糖胶分离PCR产物，分别回收轻链可变区的基因片段以及重链可变区的基因片段。若是有非特异条带选取250-500 bp之间的条带回收。
（6）轻链可变区的基因片段以及重链可变区的基因片段的鉴定
将回收目的片段连入pMD-18T，转入DH5a,进行蓝白斑筛选，挑白斑进行菌落PCR鉴定，将鉴定成功的菌液送测序。
连接反应体系如下：
将体系混匀后16℃过夜，次日将连接产物与100 µL DH5α感受态细胞冰上混匀，冰浴30 min，42℃ 热激90 s，再冰浴2 min，加入200 µL无抗性LB培养基混匀后于37℃摇床200r/min活化0.5 h。将活化好的菌均匀的涂布于AMP 抗性的LB固体培养基置37℃培养箱中培养过夜。
挑取单克隆于5 mL AMP抗性的LB液体培养基中培养8 h。取菌液为模板进行菌液PCR鉴定，设计PCR 反应体系如下：
程序采用降落PCR，95℃预变性5 min，95℃变性30 s，前十个循环退火温度依次从65℃降到56℃，后20个循环维持56℃。72℃延伸90 s，共30个循环，72℃终延伸10 min，20℃保存。
采用1%琼脂糖胶对PCR产物进行分离鉴定后将PCR结果为阳性的菌液送测序。将测序成功的菌液提质粒，保存质粒。
（7）通过RCR引物从测序得到的序列中找出抗体可变区序列
用软件DNAMAN 将正向引物和反向引物引物与测序所得的序列进行序列比对，中间的序列即为单抗可变区的基因序列。保存单抗可变区的基因序列。
7、对扩增出的抗体可变区氨基酸序列进行同源性分析
通过IMGT数据库对测得的抗体可变区序列进行分析总结。
8、抗体保护小鼠存活率的效果评价
为了检测抗体是否具有中和作用，能否起到抗病毒作用，将6周龄的干扰素受体缺陷小鼠分成2组，分别腹腔注射13H10抗体以及IgG，第二天注射104FFU ZIKV-SMGC-1病毒，注射之前及之后每天都称体重检测体重变化，记录小鼠死亡情况。小鼠体重降低到初始体重的75%以下时，将小鼠处死并记为死亡。
9、抗体保护孕鼠胎盘抵抗寨卡病毒感染的效果评价
8到9周龄的干扰素缺陷雌鼠与野生型C57小鼠交配，取E5.5的雌性鼠40只，随后将鼠分为2组，其中一组每只注射500μg的IgG，一组注射500μg的13H10。第二天注射104FFUZIKV-SMGC-1病毒，在病毒感染后的第8天解剖，拍照记录胎盘大小，称量胎盘湿重。胎盘放进8%多聚甲醛中（PFA），浸泡72小时后更换成60%乙醇溶液，之后进行石蜡包埋、切片和苏木精-伊红法染色。同时将每组小鼠的一部分胎盘匀浆并检测病毒滴度。
实施例
1、单克隆抗体的筛选、制备与鉴定
选取雌性BALB/c小鼠（6-8周）进行3次CD104抗原免疫，通过Elisa实验筛选效价最高的小鼠（>30000）进行加强免疫。采用细胞融合技术将该免疫加强的小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0进行融合筛选杂交瘤细胞，阳性孔进行克隆化最终得到30株阳性细胞株。通过细胞上清对ZIKV的中和活性初步测定选出活性最好的1株，并将其产生的抗体命名为13H10。培养该株杂交瘤细胞后，利用Protein-G亲和树脂，从细胞培养上清中分离纯化13H10抗体。
通过Biocore实验测定13H10与CD104的亲和力常数（结果如图1和表2）。
表2、CD104与13H10相互作用动力学参数
2、13H10抗体能有效抑制ZIKV病毒感染宿主细胞
为进一步验证13H10抗体能够有效抑制ZIKV的感染，进行中和抑制实验，即用13H10抗体与宿主细胞孵育，封闭掉细胞表面CD104与ZIKV的结合位点，随后用ZIKV 4℃孵育1小时感染，37度培养一段时间后检测ZIKV在宿主细胞内的复制情况。
将13H10（80μg/ml）或兔IgG分别与Hun7，LLC-MK2，Vero细胞孵育，随后4℃感染ZIKV 1小时，1小时后用预冷的培养基洗三次，加入10% FBS的DMEM放入培养箱中培养24小时，流式检测ZIKV在细胞内的复制情况。结果显示与IgG相比，13H10抗体可以有效抑制ZIKV在3种敏感细胞系中的感染（图2）。
3、13H10抗体提高ZIKV感染小鼠的存活率
将5到6周龄的Ifnar1-/-小鼠随机分成2组，每组12只。通过肌肉注射方式500μg13H10和IgG，第2天后通过足底注射104FFU ZIKV-SMGC-1，之后每天监测小鼠的体重及健康状态。
在注射ZIKV后，IgG组的10只小鼠体重呈下降趋势并在第8天之后，出现死亡，在第11天时，所有小鼠都会死亡。而注射了13H10的抗体，在第12天出现第一只小鼠的死亡，13天出现第二只小鼠的死亡，最终存活率在80%，因此13H10抗体具有很好的保护作用（图3）。
4、13H10抗体保护小鼠抵抗寨卡病毒感染引起的胎盘损伤
ZIKV感染孕妇会导致胎儿的小头症，一项回顾性研究发现在感染了ZIKA的孕妇中有29%的胚胎表现出发育异常，包括小头症、宫内生长受限、胎儿死亡、死产，而在胎儿发育的过程中，孕期的第一个三个月是胎儿脑部发育的关键时期。
为研究小头症和ZIKV感染孕妇之间的关系，有一项研究报道了孕期小鼠感染模型。ZIKA感染在人类和灵长类中能够有效克服I型干扰素受体（IFNAR1）介导的免疫反应，但是小鼠中则不能。因此研究者通过双基因拷贝缺失型的Ifnar1-/-的母鼠与野生型雄鼠交配，产生的胚胎幼鼠获得一个Ifnar1基因，从而获得完整的感染素应答，在孕期的第5.5天注射抗体，第6.5天（小鼠妊娠期在19-21天之间，第6.5天相当于人类怀孕的3个月，是胎儿脑部发育的关键时期）通过足底注射ZIKA病毒模拟蚊虫叮咬感染，在第13.5以及16.5天处理胚胎，检测胎盘和胎儿的特征。
基于以上模型，我们将36只小鼠分为Mock组，IgG组及13H10组，每组12只。在孕鼠的第5.5天各注射500μg的抗体，第6.5天足底注射104FFU ZIKV-SZ01的病毒，在病毒感染的第8天处死小鼠进行检测。结果发现，IgG组的胎盘萎缩明显，远远小于13H10抗体处理过的胎盘（图4）。另外，IgG组的胚胎也明显萎缩变小，而13H10抗体处理组的胎盘发育相对正常（图5）。这都说明了13H10抗体具有明显的保护ZIKV对小鼠胎盘和胚胎的损伤效果。
5、抗体重链、轻链可变区序列扩增与分析
采用天根RNAprep pure Cell/Bacteria Kit RNAprep pure 培养细胞/细菌总RNA提取试剂盒调取细胞中的总RNA，用Thermo Scientific RevertAid First StrandcDNA Synthesis Kit将其逆转录成cDNA。以获得抗体的cDNA为模板，采用简并引物分别扩增出抗体轻链及重链可变区基因。将抗体可变区基因连入pMD-18T质粒后转入DH5ɑ，将菌落PCR鉴定结果为阳性的菌送测序，测得抗体轻重链可变区序列及其CDR序列如下：13H10的重链可变区（VH）序列（SEQ ID NO：1）：QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTRYAITWVRQPPGKGLEWLGVIWTGGGTNYNSTLKSRLSISKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTARYYCATYGSSHLWYFDVWGPGTTVTVSS。13H10的轻链可变区（VL）序列（SEQ ID NO：2）：DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSLKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPWTFGGGTKLEIK。
其中，重链的CDR1为：RYAIT（SEQ ID NO：3），CDR2为：VIWTGGGTNYNSTLKS（SEQ IDNO：4），CDR3为：YGSSHLWYFDV（SEQ ID NO：5）；轻链的CDR1为：RSSQSIVHSNGNTYLE（SEQ IDNO：6），CDR2为：KVSNRFS（SEQ ID NO：7），CDR3为：FQGSHVPWT（SEQ ID NO：8）。
经IMGT软件分析确定抗体CDR区序列及同源基因（表3）。
表3、13H10抗体序列同源性分析
。
Claims (9)
1.一种抑制寨卡病毒感染的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，是针对CD104抗原的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包括重链可变区和 轻链可变区，所述重链可变区包括的CDR1氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，CDR2氨基 酸序列如SEQ ID NO.4所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，其轻链可变区包 括的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示， CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。
2.如权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，重链可变区氨基酸序 列为：SEQ ID NO.1，轻链可变区氨基酸序列为：SEQ ID NO.2。
3.如权利要求1或2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的编码核酸。
4.含如权利要求3所述的编码核酸的表达载体。
5.含如权利要求3所述的编码核酸，或如权利要求4所述的表达载体的重组细胞。
6.含有权利要求1或2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段作为有效成分的预防或治疗寨卡病毒感染引起的疾病的药物组合物。
7.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，还包括药学上可接受助剂。
8.权利要求1或2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的用途，其特征在于，在制备针对寨卡病毒感染引起的疾病的预防或治疗的药物中应用。
9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述疾病是新生儿小头畸形、格林巴利综合征、妇女生育能力的丧失。
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