CN116650581A - 一种预防或治疗心房颤动药物组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种预防或治疗心房颤动的药物组合物及其应用。由黄芪，当归等药材组成，本发明是在络病理论的指导下，益气升陷组方思想为基础，以温通走窜之风药为辅药，佐以化瘀通络、流气畅络等药物，全方具有补益升提，荣养络脉，熄内外风功效。

Description

一种预防或治疗心房颤动药物组合物及其应用

技术领域

本发明涉及一种预防或治疗心房颤动的中药组合物及其应用，属于中草药应用领域，针对心房颤动症患者，确立“通补络虚，熄风定悸”的治法，并制定组方，全方具有荣养络脉、熄风定悸的功效，为临床治疗心房颤动提供新的治疗思路。

背景技术

心房颤动（Atrial fibrillation，AF）是中老年人群最常见的心血管疾病，全球患病率约为1%-2%，其中阵发性房颤（Paroxysmal atrial fibrillation，PAF）约占AF发病率1/3，是指房颤发生时间≤7d且可自行终止。研究显示，PAF易引发如血栓栓塞、脑卒中、认知功能障碍和心力衰竭等严重并发症，PAF患者脑卒中患病风险较正常人风险增加5倍，可见PAF已成为严重危害人类健康的心血管疾病之一。

PAF发病机制复杂，心房重构是PAF发生和维持的重要基础，主要包括电重构、结构重构和自主神经重构。

目前PAF的主要治疗手段为口服抗心律失常药物和射频消融术，两种治疗方法虽疗效确切，但长期服用抗心律失常药物易导致药物性心律失常、肺纤维化、肝硬化、甲亢等副作用。射频消融术作为PAF的一线治疗手段，但存在操作风险及术后复发风险，降低患者依从性。因此，亟需研发治疗PAF安全有效且宜长期服用的药物。中医药具有系统干预和综合调节优势，毒副作用少，用药安全性高。

发明内容

本发明药物组合物是贾振华教授基于络病理论指导，基于PAF“宗气亏虚，虚气留滞，内风扰络”病机特点，制定的创新中药组方，全方补益升提，荣养络脉，熄内外风，发挥“通补络虚，熄风定悸”功效。本方取风药气轻味薄之性，增强疏散风邪、调畅气机、活血通络之效，使邪去正安，心神得养。本研究拟通过检测本发明药物组合物对Ach-CaCl2诱导PAF大鼠房颤易感性、心房传导离散度、神经分布密度及心房电重构、结构重构、神经重构的影响，探索本发明药物组合物对于PAF的治疗作用，以期为PAF提供有效干预新途径。

本发明药物组合物属中药制剂，由黄芪，当归等药物组成，具有“通补络虚，熄风定悸”的功效，适用于阵发性房颤症（宗气亏虚型）。与同类中成药产品相比，本发明药物组合物在立方原则与方药组成上具有创新性，区别于既往研究多采用温补肾阳药物治疗心房颤动症，而是针对宗气亏虚这一病变基础，补益升提，熄风定心悸，方中黄芪、葛根、升麻、柴胡补益宗气，升阳举陷，宗气得补，肺气得敛，心气得充，气息足则脉律齐，甘松理气健脾，流畅络气，使补而不滞，补中寓通。酸枣仁、柏子仁、当归养血安神，心神得安，悸动得缓。山萸肉养阴熄风，牡蛎潜阳熄风，辅以羌活祛外风，共奏熄风定悸之功，风药温通走窜，行而不滞，散而不郁，气机调达，血脉通畅，脉律有序，心悸得止。血为气之母，血瘀则气滞，以延胡索、川芎行气导滞，活血化瘀，气血通达，因瘀所致惊惕不安、胸闷不舒、气短乏力得缓。黄连泻心火而止心烦，佐制本方温散补益药性，两者合用一清一补，泻火不伤阴，滋阴不留邪。该方针对阵发性房颤证属宗气亏虚，虚气留滞，内风扰络患者，宗气亏虚，虚气留滞，内风扰络为基本病机，补益升提，荣养络脉，熄风定悸，改善患者临床症状和生活质量，同时对于宗气亏虚所致气短懒言、神疲乏力、头晕耳鸣、胸闷不舒、失眠多梦等全身证候表现亦有显著疗效，药简效宏，显示出本处方的特色与创新之处。

本发明所述的预防或治疗心房颤动的药物组合物，由如下重量份的成分组成：黄芪20-40份，升麻5-15份，柴胡5-15份，葛根20-40份，酸枣仁10-20份，柏子仁10-20份，当归10-20份，牡蛎20-40份，川芎10-20份，元胡10-20份，羌活5-15份，黄连5-15份，甘松10-20份，山萸肉20-40份。

优选的该组合物包括如下重量份的组分：黄芪30份，升麻10份，柴胡10份，葛根30份，酸枣仁15份，柏子仁15份，当归15份，牡蛎30份，川芎15份，元胡15份，羌活10份，黄连10份，甘松15份，山萸肉30份。

该组合物也可优选为包括如下重量份的组分：黄芪20份，升麻15份，柴胡5份，葛根40份，酸枣仁10份，柏子仁20份，当归10份，牡蛎40份，川芎10份，元胡20份，羌活5份，黄连15份，甘松10份，山萸肉40份。

该组合物还可优选为包括如下重量份的组分：黄芪40份，升麻5份，柴胡15份，葛根20份，酸枣仁20份，柏子仁10份，当归20份，牡蛎20份，川芎20份，元胡10份，羌活15份，黄连5份，甘松20份，山萸肉20份。

该组合物亦可优选为包括如下重量份的组分：黄芪35份，升麻12份，柴胡12份，葛根30份，酸枣仁12份，柏子仁12份，当归12份，牡蛎35份，川芎15份，元胡15份，羌活10份，黄连10份，甘松15份，山萸肉30份。

该组合物中，黄芪优选为生黄芪，牡蛎优选为生牡蛎，酸枣仁优选为炒酸枣仁。

该组合物可以制备的制剂剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、口服液、颗粒剂、注射剂或散剂。

本发明还提供了该药物组合物在制备心房结构重构药物中的应用。

本发明也提供了该药物组合物在制备改善心房电传导改善心脏电重构药物中的应用。

本发明也提供了该药物组合物在制备改善交感神经重构药物中的应用。

本发明药物组合物通过试验证实，可以降低房颤易感性、传导离散度，降低TH蛋白分布密度及分布均一程度、下调TH蛋白表达。

本发明还提供了该药物组合物在制备改善缝隙链接蛋白43(connexion43,Cx43)分布、上调缝隙链接蛋白43表达药物中的应用。

本发明药物组合物是以中医络病理论为指导，提出阵发性房颤“宗气亏虚，虚气留滞，内风扰络”的病机特点。宗气走息道而行呼吸，贯心脉而行气血，宗气亏虚，气不归源，在上浮撼于胸臆，则心悸易惊，甚则不能自主；气虚运血无力，气短懒言、神疲乏力，不能上荣头面，故见头晕耳鸣；心藏神，心神失养则悸动不安、心神不宁；心血气虚，内风泛越，风胜内扰则心悸不寐；气虚血行不畅，脉道不充，血行迟滞，致瘀血阻脉，气血运行失和，则惊惕不安、胸闷不舒。

基于阵发性房颤“宗气亏虚，虚气留滞，内风扰络”的主要病机，提出“通补络虚，熄风定悸”治法，研制通补防颤方组方，发明人确立了本发明药物组合物的组方：

君药：生黄芪；臣药：酸枣仁，山萸肉，元胡；佐药：柏子仁，当归；生牡蛎；川芎，甘松，葛根，黄连，羌活；使药：升麻，柴胡。

方中重用生黄芪补益宗气，升阳举陷，黄芪为“补气诸药之最”，长于补肺脾之气，善治胸中大气下陷，以黄芪为君药，宗气有根，气血归源，宗气走息道畅呼吸，贯心脉行气血，心络得气血温煦濡养则脉律如常。酸枣仁荣养心阴，安神定悸，主烦心不得眠，心神敛则神志安，悸动得缓，夜寐转安；山萸肉益肾填精，养阴熄风，血脉通畅，脉律有序，耳鸣得缓；延胡索活血止痛，行气散瘀，气血通达，胸闷自消；三者共为臣药，使得补而不滞，补中寓通，共奏养心安神，行气散瘀，熄风定悸之效。佐以柏子仁养心安神，除烦定悸；当归为“血中圣药”，补气生精，补血活血，益神志补而不滞，柏子仁与当归相辅相成，合酸枣仁敛阴养血安神，悸动得缓，夜寐得安。生牡蛎敛阴潜阳，重镇安神，摄纳浮越之阳气、戢敛簸摇之阴气，助山萸肉养阴熄风，神志安，悸动缓。川芎活血行气，祛风止痛，为血中之气药，活血而不动血，行气而不伤正，通达气血，化瘀不伤正，助元胡行气通瘀，改善患者因瘀所致惊惕不安、胸闷不舒；甘松理气健脾，流畅络气，使补而不滞，补中寓通；葛根升举阳气，助黄芪补益宗气之效；黄连清热燥湿、泻火解毒，善泻心火而止心烦，佐制黄芪温散补益之药性，两者合用一清一补，泻火不伤阴，滋阴不留邪。羌活祛风止痛，调达肢体，通畅血脉，本方取其祛外风之义，以上八味药共为佐药。以升麻、柴胡为使药，可载药上行，升提宗气，助黄芪、葛根增强升阳举陷之效，宗气升，使气血通畅，心脉得通，胸闷得舒。

综上，本方以黄芪、葛根、升麻、柴胡补益宗气，升阳举陷，宗气得补，肺气得敛，心气得充，气息足则脉律齐，甘松理气健脾，流畅络气，使补而不滞，补中寓通。酸枣仁、柏子仁、当归养血安神，心神得安，悸动得缓。山萸肉养阴熄风，牡蛎潜阳熄风，辅以羌活祛外风，共奏熄风定悸之功，风药温通走窜，行而不滞，散而不郁，气机调达，血脉通畅，脉律有序，心悸得止。血为气之母，血瘀则气滞，以延胡索、川芎行气导滞，活血化瘀，气血通达，因瘀所致惊惕不安、胸闷不舒、气短乏力得缓。黄连泻心火而止心烦，佐制本方温散补益药性，两者合用一清一补，泻火不伤阴，滋阴不留邪。诸药合用，则气息足、睡眠安、脉律齐、悸动止。

附图说明

图1：大鼠正常心电图与房颤心电图。

图2：本发明药物组合物对阵发性房颤大鼠房颤诱发时间（A）、房颤持续时间（B）的影响。

图3：本发明药物组合物对房颤大鼠心脏电传导的影响。

图4：本发明药物组合物对阵发性房颤大鼠左心房直径、左心房面积的影响。

图5：本发明药物组合物采用Masson染色检测对阵发性房颤大鼠心房肌组织胶原纤维的影响（×200）。

图6：本发明药物组合物免疫组化法检测对阵发性房颤大鼠TH蛋白表达的影响（×400）。

图7：本发明药物组合物Western-blot法检测对阵发性房颤大鼠TH、Cx43蛋白表达的影响。

图8：本发明药物组合物免疫荧光检测各组大鼠心房组织Cx43蛋白表达的影响（×400）。

具体实施方式

功能性试验

为了说明本发明药物组合物的功效，用实施例制备的实施例1、实施例2、实施例3的样品进行了功能性试验。

1.材料与方法

1.1 动物

SPF级雄性SD大鼠，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)2016-0011，5-6周龄，体质量（160-200）g，实验动物饲养于络病研究与创新中药国家重点实验室。温度20℃～25℃，相对湿度40%～70%，动物自由饮水进食，动物实验符合络病研究与创新中药国家重点实验室动物伦理委员会规定的实验动物道德伦理相关规定（动物试验伦理审查表编号：N2021073）。

1.2 药品与试剂

本发明药物组合物实施例1，实施例2，实施例3（由以岭医药研究院提供）；盐酸胺碘酮片（批号：AHG0717，购于赛诺菲制药有限公司）；乌来糖（批号：DC08BA0021，购于BBILife Sciences）；氯化乙酰胆碱（批号：BCBX5660，购于SIGMA-ALDRICH公司）；无水氯化钙（批号：YD20190102，天津市永大化学试剂有限公司）；兔SP Kit试剂盒（批号：2122B0701，购于北京中山杉金桥生物技术有限公司）；重组Anti-GAPDH抗体（批号：GR3219790-17，购于Abcam公司）；山羊抗兔IgG H&L预吸附二抗（批号：GR3361088-5，购于Abcam公司）；酪氨酸羟化酶（TH，批号：GR3370594-10，ab137869，购于Abcam公司）；乙酰胆碱转移酶（购于Abcam公司）；缝隙连接蛋白 43（购于Abcam公司）；DAPI（北京索莱宝科技有限公司）。

1.3仪器

PowerLab生理记录仪，埃德仪器国际贸易（上海）有限公司；Vevo小动物超声成像系统，富士胶片（中国）投资有限公司；3K15高速冷冻离心机，德国SIGMA有限公司；小动物离体心脏灌流系统（Langendorff），德国HSE有限公司；多通道矩阵电信号标测系统（MappingLab），英国MappingLab有限公司）；221BR半干转膜仪（日本Bio-Rad公司）；ERS301电泳仪（美国CE公司）；DYY-Ⅲ型桥式电泳槽，北京市六一仪器厂；Odyssey双色红外激光成像系统，美国LI-Cor公司。

2.方法

2.1 分组与给药

大鼠分为6组，每组15只，空白对照组（Control组）、模型组（Model组）、本发明药物组合物实施例1（TBL组）、本发明药物组合物实施例2（TBM组）、本发明药物组合物实施例3（TBH组）、胺碘酮组（AMD组）。Control组：纯水灌胃1mL/100g /d，持续30天；于第24天开始尾静脉注射生理盐水0.1mL/100g/d，连续注射7d。

Model组：纯水灌胃1mL/100g /d，持续30天，于第24天开始尾静脉注射Ach-CaCl₂（内含60μg/mL Ach和10mg/mL CaCl₂）混合药液0.1mL/100g/d，连续注射7d。

TBL组、TBM组、TBH组：分别采用本发明药物组合物实施例1、实施例2、实施例3制得的提取液部分进行灌胃给药8g/kg/d，持续30天，于第24天开始尾静脉注射Ach-CaCl₂ 混合药液0.1mL/100g/d，连续注射7d。

AMD组：灌胃给药80mg/kg/d，持续7天，于第24天开始给药并尾静脉注射Ach-CaCl₂混合药液0.1mL/100g/d，连续7d。

2.2 指标检测

标本采集前禁水禁食12h，采用25%乌来糖0.5mL/100g腹腔注射麻醉大鼠后，连接电子心电图检测每组大鼠房颤易感性（计算房颤诱发时间及房颤持续时间）；每组随机选取3只大鼠，采用离体心脏灌流方法，使用电Mapping系统检测大鼠心房传导离散度；其余大鼠备皮消毒后，采用小动物超声仪记录左心房直径及面积；腹主动脉取血之后，暴露心脏，眼科镊仔细剥离心包膜，沿主动脉段向上慢慢分离主动脉，迅速取出心脏，剔除外周胸腺和心包组织，生理盐水洗净，一部分心脏组织置入4%多聚甲醛溶液固定，经脱水、石蜡包埋后，制成厚度约4μm的切片，用于Masson染色和免疫组化检测，另一部分心脏组织液氮冻存以备后续Western-blot检测。

2.3 PAF模型评价

25%乌来糖0.5mL/100g腹腔注射麻醉大鼠后，连接电子心电图机肢体导联，尾静脉注射Ach-CaCl₂混合液诱发大鼠PAF并立即记录心电图，以出现f波及P波消失为房颤发生标志，以f波消失及P波出现为房颤终止标志，评估PAF大鼠模型制备情况。

2.4 心电图检测房颤易感性

PAF模型制备成功之后，运用LabChart软件记录各组大鼠尾静脉注射Ach-CaCl₂混合液时间点及造模后的房颤起止时间点，计算出房颤诱发时间和持续时间，评价各组动物的房颤易感性。

2.5 电Mapping系统检测心房传导变化

提前准备K-H溶液，充氧（95%O₂+5%CO₂）至少30min；测定pH值为7.4，将配制好的液体倒入灌流装置恒温储液槽中，预热至37℃。随机选取每组3只大鼠，注射100 IU/mL肝素（1mL/100g）抗凝之后麻醉，经胸骨正中切口开胸暴露心脏，迅速将心脏连同主动脉弓取出，预冷K-H溶液洗净；用镊子撑开主动脉弓断端，连接到Langendorff灌注系统。测定压力值为80mmHg，使用MappingLab标测系统进行检测，每只大鼠心脏的电极位置尽量保持一致，待心房电传导稳定后选取心房波测量心房传导离散度，使用EMapScope 5.0软件分析各组之间差异。

2.6 超声心动图检测左心房直径、左心房面积

大鼠胸腹部消毒备皮，采用小动物超声仪进行超声心动图检查。以二维超声模式截取大鼠心脏的动图，测量大鼠左心房直径、左心房面积以评估各组大鼠心房结构重构情况。

2.7 Masson染色检测心房肌组织胶原纤维的情况

常规脱蜡后行Masson染色，Weigert铁苏木素5min，酸性乙醇分化5-15s，蒸馏水洗涤，丽春红品红染色液染色5¬10min，弱酸溶液洗涤1min，磷钼酸溶液1-2min，弱酸溶液洗涤1min，苯胺蓝染色液染1-2min，弱酸溶液洗涤1min，脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，光学显微镜随机选择不同视野观察心房肌组织胶原纤维情况。

2.8免疫组化检测心房组织TH蛋白表达情况

各组石蜡切片常规脱蜡至水，抗原修复，3%H2O2孵育，血清封闭，滴加一抗、二抗，PBS液作为阴性对照，DAB显色，封片。以镜下出现棕黄色颗粒为阳性标准。采用计算机辅助形态计量分析系统（Image-Pro plus 6.0）自动识别免疫组化显色后的交感神经并计算其像素面积，每片选取6个随机区域，以神经面积与总检测面积的比值（um2/mm2）表示神经平均分布密度，将神经密度最大的视野减去最小视野神经密度均值的差值均值作为神经分布的不均一程度，检测TH平均分布密度及分布不均一程度情况。

2.9 免疫荧光检测心房组织 Cx43 蛋白分布情况

将每组石蜡切片进行脱蜡，然后将其置于含有柠檬酸钠-EDTA 抗原修复液的修复容器内，用微波炉加热，自然冷却后，将切片放入PBS（pH7.4）中，用摇床上摇晃清洗 3 次，每次 5min。迅速甩干切片，将 3%双氧水溶液滴盖于组织上，在37℃下避光孵育10min后，随后将切片放 PBS（pH7.4）中，在摇床上摇晃清洗 3 次，每次5min；将切片甩干后，加入5%BSA，在室温下封闭30min，进行血清封闭，然后将切片放入PBS（pH7.4）中，在摇床上晃动洗涤3次，每次5min。滴加稀释好的一抗（Cx43，1：100）完全覆盖住组织，4℃孵育过夜。一抗孵育完成 PBS 洗涤之后，用稀释好的二抗（Alexa Fluor 594，1：500）进行标记，室温孵育50min，最后采用含 DAPI 的封片剂封片，使用激光共聚焦显微镜进行观察，DAPI 染色的细胞核在紫外的激发下呈蓝色，并以对应的荧光标记的红光作为阳性反应，检测 Cx43 蛋白分布情况。

2.10 Western-blot检测心房组织TH、Cx43蛋白表达水平

取出液氮冻存标本，用眼科剪取100mg标本，生理盐水洗净心脏残留血液后，加入裂解液，充分裂解后进行蛋白定量，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，待结束后，将凝胶半干转膜至PVDF膜上；封闭液封闭后，一抗4℃孵育过夜（TH 1:1000，GAPDH 1:5000）；室温洗膜后，与山羊抗兔IgG H&L预吸附二抗（1:25000）室温孵育1h，洗膜后，用Odyssey双色红外激光成像系统进行图像扫描，以GAPDH作为内参，计算目的蛋白灰度值比值，分析统计TH、Cx43 蛋白表达量。

2.11 统计学方法

使用 SPSS 20.0统计软件分析处理实验结果。数据结果以表示，采用单因素方差分析(One-way ANOVA)进行检验。各组数据比较前先进行正态性及方差齐性检验，方差齐性两两比较采用最小显著差法(LSD)，方差不齐通过非参数检验进行分析。

3.结果

3.1 阵发性房颤模型制备

如图1所示，Control组为大鼠正常心电图，P波正常，RR间期规则；Model组P波消失代之以不规则的f波，RR间期绝对不规则，提示阵发性房颤模型制备成功。

3.2 本发明药物组合物对PAF大鼠房颤易感性的影响

采用心电图检测各组大鼠房颤诱发时间及持续时间，以评估PAF大鼠房颤易感性。如表1及图2-A和2-B所示，与Model组相比，TBL组、TBM组、TBH组及AMD组房颤诱发时间明显延长，持续时间明显缩短（P<0.01，0.001）；与AMD组相比，TBM组、TBH组房颤诱发时间无统计学差异（P>0.05），TBL组、TBM组、TBH组房颤持续时间无统计学差异（P>0.05）。综上表明本发明药物组合物各实施例均可明显延长房颤诱发时间，缩短房颤持续时间，提示本发明药物组合物可降低PAF大鼠房颤易感性。

3.3 本发明药物组合物对PAF大鼠心房电传导的影响

采用MappingLab标测系统监测各组大鼠心房传导离散度变化，以评估PAF大鼠心房电传导情况，如表2及图3所示，与Control组相比，Model组传导离散度升高（P<0.05），与Model组相比，TBL组、TBM组、TBH组与AMD组传导离散度均明显降低（P<0.05），各给药组组间无统计学差异（P>0.05）。综上表明本发明药物组合物各实施例均可降低房颤心房传导离散度，提示本发明药物组合物可改善PAF大鼠心房电传导情况。

3.4 本发明药物组合物对PAF大鼠左心房直径、左心房面积的影响

采用小动物超声检测各组大鼠心房直径、心房面积，以评估PAF大鼠心房结构重构情况。如图4所示，与Control组相比，Model组LAD、LA area均显著扩大（P<0.001），与Model组相比，TBL组、TBM组、TBH组及AMD组LAD、LA area均明显缩小（P<0.05，0.01，0.001）；与AMD组相比，TBM组、TBH组心房直径无统计学差异（P>0.05），TBL组、TBM组、TBH组心房面积无统计学差异（P>0.05）。综上表明本发明药物组合物各实施例均可明显缩小左心房直径、左心房面积，提示本发明药物组合物可改善PAF大鼠的心房结构重构。

3.5 本发明药物组合物对PAF大鼠心房肌组织胶原纤维的影响

采用Masson染色检测各组大鼠心房肌组织纤维增生情况，以评估PAF大鼠心房结构重构情况。如附图5所示，Control组心房肌组织未见胶原纤维沉积；与Control组相比，Model组心房肌组织胶原纤维沉积在血管周围可见明显增多；与Model组相比，TBL组、TBM组、TBH组及AMD组心房肌组织血管周围胶原纤维沉积明显减少，综上表明通补防颤方明显减少PAF大鼠心房肌组织胶原纤维，提示通补防颤方可改善PAF大鼠心房结构重构。

3.6 本发明药物组合物对PAF大鼠TH蛋白表达的影响

3.6.1 免疫组化法检测本发明药物组合物对PAF大鼠TH蛋白表达的影响

采用免疫组化法检测各组大鼠TH蛋白表达，以评估PAF大鼠交感神经重构情况。如表4及图6所示，与Control组相比，Model组TH蛋白平均分布密度及分布不均一程度明显升高，形态粗糙无序，聚集成束，证实了房颤模型大鼠心脏交感神经发生重构（P<0.001）；与Model组相比，TBL组、TBM组、TBH组与AMD组TH蛋白平均分布密度及分布均一程度明显降低（P<0.01，0.001），与AMD组相比，TBH组TH蛋白分布均一程度明显降低（P<0.001），各给药组组间无统计学差异（P>0.05）。综上表明本发明药物组合物明显降低PAF大鼠TH分布密度及分布均一程度，提示本发明药物组合物可改善PAF大鼠交感神经重构。

3.6.2 Western-blot法检测本发明药物组合物对PAF大鼠TH蛋白表达的影响

采用Western-blot法检测各组大鼠心房组织TH蛋白表达，以评估PAF大鼠交感神经重构情况。如表5及图7（A为TH蛋白；B为Cx43蛋白）所示，与Control组相比，Model组TH的蛋白表达量明显上调（P<0.001），与Model组相比，TBL组、TBM组、TBH组及AMD组TH蛋白表达量明显下调（P<0.001），各给药组组间无统计学差异（P>0.05）。综上表明本发明药物组合物明显下调PAF大鼠TH蛋白表达，提示本发明药物组合物可改善PAF大鼠交感神经重构。

3.7 本发明药物组合物对PAF大鼠Cx43蛋白表达的影响

3.7.1 免疫荧光法检测本发明药物组合物对PAF大鼠Cx43蛋白表达的影响

采用免疫荧光法检测各组大鼠Cx43蛋白表达及分布情况，如图8所示，Control组Cx43蛋白表达清晰，主要呈间断性条状分布，少数呈点状散在分布；Model组Cx43蛋白表达明显减少，呈点状散在分布；TBL组、TBM组、TBH组及AMD组Cx43蛋白表达明显增加，且可见部分Cx43呈条状分布。综上说明本发明药物组合物能够上调大鼠Cx43蛋白表达并改善Cx43蛋白分布情况。

3.7.2 Western-blot法检测本发明药物组合物对PAF大鼠Cx43蛋白表达的影响

采用Western-blot法检测各组大鼠心房组织 Cx43 蛋白表达，如表5及图7（A为TH蛋白；B为Cx43蛋白）所示，与Control组相比，Model组Cx43蛋白表达量明显下调（P<0.01）；与Model 组相比，TBL组、TBM组、TBH组 Cx43 蛋白表达量明显上调（P<0.05）；AMD 组 Cx43蛋白表达量上调，但无统计学差异（P>0.05）。综上说明本发明药物组合物明显上调大鼠Cx43蛋白表达。

4.讨论

PAF发病机制包括触发机制和维持机制，既往研究维持机制发现“多发子波”假说、折返激动及局灶驱动伴颤动样传导等可导致PAF，而心房重构是其产生的基础，可导致心房功能及结构的改变。Ach和CaCl₂在心房电重构过程起重要作用，Ach和CaCl₂联合使用可导致传导部分阻滞和脉冲扩散不一致，降低窦房结对异位兴奋点的抑制作用，类似房颤的重入机制，因此本研究采用大鼠尾静脉注射Ach-CaCl₂混合液建立PAF动物模型，旨在探索通补防颤方对于Ach-CaCl₂混合液诱导PAF的防治作用。本实验结果显示模型组大鼠心电图P波消失代之以大小形态完全的f波，RR间期绝对不规则，提示PAF大鼠模型制备成功，与既往文献研究结果一致。

PAF的发生和维持与心房重构密切相关，主要包括电重构、结构重构及神经重构。心房电传导受离子通道、泵和交换器调控，而心房电传导紊乱会导致心房电重构促使PAF的发生和维持，其主要特征包括心房有效不应期缩短和离散性增加、心脏传导延迟和频率自适应下降。房颤发生初期，心房肌细胞膜稳定性下降，造成细胞内Ca²⁺内流明显增多引起钙超载，导致有效不应期和动作电位时程缩短，降低房颤的阈值，增加房颤易感性。本研究结果显示本发明药物组合物可明显降低PAF大鼠房颤易感性，降低心房传导离散度，提示本发明药物组合物可改善PAF大鼠的心房电重构。心房结构重构是PAF发生发展的核心环节，心房扩大导致心房结构改变，促进激动的异向性传导，降低部分细胞间的电耦联，加强异位兴奋点局灶驱动活动，使传导不均一性和延迟增加并形成折返，促使房颤发生。左心房直径与心房面积均是房颤结构重构重要预测因子，心房直径与面积值与房颤复发率呈正相关，因此左心房直径及左心房面积是评价心房扩大程度的主要方法。本研究结果显示本发明药物组合物可缩小PAF大鼠左心房直径与心房面积，减少纤维沉积，提示本发明药物组合物可改善PAF大鼠心房结构重构。心房长期快速起搏可引起心房自主神经纤维发生密度、形态甚至空间分布的改变，造成神经重构，易于房颤触发与维持。TH为去甲肾上腺素合成的限速酶，是交感神经定位及活动的标志。本研究结果显示本发明药物组合物可降低交感神经分布密度及下调相关蛋白表达量，提示本发明药物组合物可改善PAF大鼠心房神经重构。

纤维化是结构重构最突出的表现，心房纤维化主要是指心房成纤维细胞增殖分化为肌成纤维细胞，引起细胞外基质重塑，伴随心房肌细胞肥大或增生的一种病理生理过程。心房纤维化可引起心房不均一传导，导致单向传导阻滞和折返的发生，引发房颤，长时间房颤可加重心房纤维化程度，进一步促进房颤维持和发展。Cx43是一种在心脏中表达的主要通道蛋白，以呈旌状或阶梯状排列形式主要存在于相邻细胞的连接处及闰盘部，其正常表达和分布对心脏正常电活动和协调舒缩起着重要作用。Cx43蛋白异常可加速心房肌纤维化的形成，引起细胞之间传导电耦联失常，从而引发心律失常。本研究结果显示PAF大鼠心房直径与心房面积扩大，心房肌组织纤维沉积增加，Cx43蛋白分布异常及表达量减少，提示PAF大鼠心房发生结构重构。本发明药物组合物可不同程度的缩小左心房直径与心房面积、减少心房纤维沉积、升高Cx43蛋白表达，改善Cx43蛋白分布，从而改善 PAF 大鼠结构重构。

根据阵发性房颤临床表现可将其归属于中医学中“心悸”“怔忡”“惊悸”范畴，病位在心。贾振华教授以中医络病理论为指导，提出阵发性房颤“宗气亏虚，虚气留滞，内风扰络”病机特点。宗气走息道而行呼吸，贯心脉而行气血，宗气亏虚，气不归源，在上浮撼于胸臆，则心悸易惊，甚则不能自主，如《素问•平人气象论》中所言“出于左乳下，其动应衣，宗气泄也”。基于上述病机特点，确立“通补络虚，熄风定悸”治法及通补防颤方组方。阵发性房颤起病急骤，具有易于诱发、突发突止、不能自主、反复发作的发病特征，其发作典型表现为自觉心中急剧跳动，难以自主。从宏观角度，阵发性房颤的典型表现与发作特征与风邪“风性主动”“善行而数变”特点类似；从微观角度，阵发性房颤心电图表现为窦性P波消失，代之以形态、大小、间隔都不相同f波，与风邪“善行数变”特点具有相似性，表明PAF发病与风邪密切相关。该方取风药温通走窜之性，发散、通阳、活血、疏通经络，使心神得养，悸动而消。综上所述，通补防颤方的不同剂量组可有效改善心脏电重构、结构重构及神经重构。进一步佐证了络病理论指导PAF病变的理论价值，在PAF防治中具有潜在发展前景。本研究在动物整体层面初步证实了通补防颤方具有改善PAF电重构、结构重构及神经重构的作用，其具体调控机制有待从分子水平进一步深入研究。

实施例1：

原料药配方为：黄芪20g，升麻15g，柴胡5g，葛根40g，酸枣仁10g，柏子仁20 g，当归10g，牡蛎40g，川芎10g，元胡20g，羌活5g，黄连15g，甘松10g，山萸肉40g。

以上重量份原料药，按照常规制剂方法提取，浓缩，干燥，制成胶囊剂即得。

实施例2：

原料药配方为：生黄芪30g，升麻10g，柴胡10g，葛根30g，炒酸枣仁15g，柏子仁15g，当归15g，生牡蛎30g，川芎15g，元胡15g，羌活10g，黄连10g，甘松15g，山萸肉30g。

按常规工艺提取，浓缩，干燥，制粒，整粒，压片即得片剂。

实施例3：

原料药配方为：生黄芪35g，升麻12g，柴胡12g，葛根30g，炒酸枣仁12g，柏子仁12g，当归12g，生牡蛎35g，川芎15g，元胡15g，羌活10g，黄连10g，甘松15g，山萸肉30g。

按常规工艺提取，浓缩，干燥，制粒，整粒，装胶囊即得。

实施例4：

原料药配方为：黄芪40g，升麻5g，柴胡15g，葛根20g，酸枣仁20g，柏子仁10g，当归20g，牡蛎20g，川芎20g，元胡10g，羌活15 g，黄连5g，甘松20g，山萸肉20g。

按常规工艺提取，浓缩，制粒，整粒，制备得到颗粒剂。

实施例5：

黄芪30g，升麻10g，柴胡10g，葛根30g，酸枣仁15g，柏子仁15 g，当归15g，牡蛎30g，川芎15g，元胡15g，羌活10g，黄连10g，甘松15g，山萸肉30g。

按常规工艺提取，过滤，制备得到口服液。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (12)

1.一种预防或治疗心房颤动的药物组合物，其特征在于该组合物包括如下重量份的组分：黄芪20-40份，升麻5-15份，柴胡5-15份，葛根20-40份，酸枣仁10-20份，柏子仁10-20份，当归10-20份，牡蛎20-40份，川芎10-20份，元胡10-20份，羌活5-15份，黄连5-15份，甘松10-20份，山萸肉20-40份。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于该组合物包括如下重量份的组分：黄芪30份，升麻10份，柴胡10份，葛根30份，酸枣仁15份，柏子仁15份，当归15份，牡蛎30份，川芎15份，元胡15份，羌活10份，黄连10份，甘松15份，山萸肉30份。

3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于该组合物包括如下重量份的组分：黄芪20份，升麻15份，柴胡5份，葛根40份，酸枣仁10份，柏子仁20份，当归10份，牡蛎40份，川芎10份，元胡20份，羌活5份，黄连15份，甘松10份，山萸肉40份。

4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于该组合物包括如下重量份的组分：黄芪40份，升麻5份，柴胡15份，葛根20份，酸枣仁20份，柏子仁10份，当归20份，牡蛎20份，川芎20份，元胡10份，羌活15份，黄连5份，甘松20份，山萸肉20份。

5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于该组合物包括如下重量份的组分：黄芪35份，升麻12份，柴胡12份，葛根30份，酸枣仁12份，柏子仁12份，当归12份，牡蛎35份，川芎15份，元胡15份，羌活10份，黄连10份，甘松15份，山萸肉30份。

6.根据权利要求1-5任一所述的组合物，其特征在于该组合物的组分中，黄芪优选为生黄芪，牡蛎优选为生牡蛎，酸枣仁为炒酸枣仁。

7.根据权利要求1-5任一所述的组合物，其特征在于该组合物的制剂剂型为胶囊剂、片剂、丸剂、口服液、颗粒剂、注射剂或散剂。

8.根据权利要求1-5任一所述的组合物，其特征在于本药物组合物在制备心房结构重构药物中的应用。

9.根据权利要求1-5任一所述的组合物，其特征在于本药物组合物在制备改善心房电传导改善心脏电重构药物中的应用。

10.根据权利要求1-5任一所述的组合物，其特征在于本药物组合物在制备改善交感神经重构药物中的应用。

11.根据权利要求1-5任一所述的组合物，其特征在于本药物组合物在制备降低房颤易感性、传导离散度，降低TH蛋白分布密度及分布均一程度、下调TH蛋白表达药物中的应用。

12.根据权利要求1-5任一所述的组合物，其特征在于本药物组合物在制备改善缝隙链接蛋白43分布、上调缝隙链接蛋白43表达药物中的应用。