CN116650557B - 一种抗菌消炎剂、敷料及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本申请涉及医用材料技术领域,尤其涉及一种基于生物技术的抗菌消炎剂、敷料及其制备方法;以重量份数计,所述抗菌消炎剂的原料包括:澳洲茶树精油:0.1~10份,乳化剂:0.1~10份和水凝胶:0.1~5份;所述抗菌消炎敷料的结构包括抗菌消炎层和敷料本体,所述抗菌消炎层包括所述抗菌消炎剂;通过引入澳洲茶树精油活性植物成分,可以提高抗菌消炎剂的广谱抗菌性以及对超级细菌的抗菌持久性;同时由于澳洲茶树精油为脂溶性物质,引入乳化剂通过高压均质法可以使得澳洲茶树精油形成超分子纳米结构,使得包埋效果稳定,减少刺激性,再通过水凝胶进一步形成抗菌消炎层,实现抗菌消炎剂的广谱抗菌、生物相容性高且性能稳定。
Description
技术领域
本申请涉及医用材料技术领域,尤其涉及一种抗菌消炎剂、敷料及其制备方法。
背景技术
随着大量的抗生素被不合理使用甚至滥用,使得对抗生素治疗产生“抵抗作用”的新型细菌—“超级细菌”的出现,而随着越来越多的耐药性致病菌出现,一些有效的抗菌药物不断减效甚至失效,给人类健康和生命安全造成了极大威胁。目前已发现的耐药菌有六大类,包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和鲍曼不动杆菌,且耐药菌往往能通过形成生物被膜的方式,进一步增强自身的抵抗能力,这使得耐药菌更难以被解决。澳洲茶树精油的主要成分为挥发油、萜类、鞣质、脂肪酸和脂类化合物等,具有广谱抗菌的作用,但难溶于水,易挥发,大大限制了其应用。
纳米缓释技术制备的粒子粒径为纳米级,比表面积极大,进入人体后与作用部位的接触面积极大,还可解决许多药物水溶性差、不稳定等问题。同时其包裹有效成分,能够减少药物降解、提高药物的稳定性;纳米缓释技术包括脂质体、微乳、纳米乳等剂型。其中,纳米乳是由水相、油相、乳化剂与助乳化剂等自发形成的,是指粒径在200纳米以下的乳滴组成的体系,可以将脂溶性药物包裹在乳滴中;纳米乳呈高度分散性,作为药物载体有提高药物生物利用度、增强靶向性等特点。纳米乳可使脂溶性药物在制剂中的含量显著增大,还可使活性物质的吸收明显加快。微乳是指粒径在 100 纳米以下的乳滴组成的体系,同样具有纳米乳的特点。
脂质体是磷脂双分子层构成的囊泡,药物根据性质可包封在内水相或脂质膜中。脂质体由生物可降解的物质(磷脂和胆固醇)组成,对人体无毒,组织相容性好。脂质体与细胞膜亲和力强,可增加被包裹药物穿透细胞膜的能力。脂质体包裹技术可解决某些脂溶性药物难溶于水的难题。非离子表面活性剂囊泡(Niosomes)是指某些非离子表面活性剂(如司盘60)在一定条件下在水中自组装成囊泡结构,类似脂质体。它同样可以作为药物载体,具有类似脂质体的一些体内外特征。
目前湿性敷料的种类繁多,能适应大部分的创面愈合需求,但是仍然存在功效单一、无法对超级细菌产生抗性,且亲和力差、透气性较差、生物相容性较低和降解性不够理想等问题;而创面伤口的愈合主要取决于敷料及抗菌消炎剂,因此如何提供一种广谱抗菌、生物相容性高且性能稳定的抗菌消炎剂,是目前亟需解决的技术问题。
发明内容
本申请提供了一种抗菌消炎剂、敷料及其制备方法,以解决现有技术中湿性敷料的抗菌剂功效单一、无法对超级细菌产生抗性和生物相容性较低的技术问题。
第一方面,本申请提供了一种抗菌消炎剂,以重量份数计,所述抗菌消炎剂的原料包括:
澳洲茶树精油:0.1~10份,乳化剂:0.1~10份和水凝胶:0.1~5份。
可选的,所述澳洲茶树精油的活性成分包括4-松油醇和1,8-桉叶素;所述4-松油醇占所述澳洲茶树精油的质量之比≥35%;
所述1,8-桉叶素占所述澳洲茶树精油的质量之比≤5%。
可选的,所述乳化剂包括聚山梨醇酯-80、PEG-40氢化蓖麻油、PEG-60氢化蓖麻油和PPG-26-丁醇聚醚-26、磷脂、羊毛脂、阿拉伯树胶中的至少一种。
第二方面,本申请提供了一种制备第一方面所述的抗菌消炎剂的方法,所述方法包括:
向所述澳洲茶树精油中加入乳化剂进行混匀,并搅拌乳化,得到精油初乳;
对所述精油初乳进行高压均质,以实现精油初乳的均质化,得到澳洲茶树精油脂质体;
向所述澳洲茶树精油脂质体中加入水凝胶和水,并进行混合,后进行搅拌,得到抗菌消炎剂;
其中,所述澳洲茶树精油脂质体的平均粒径为1nm~100nm。
可选的,所述搅拌乳化的时间为2min~8min,所述搅拌的转速为600r/min~1000r/min;和/或,
所述高压均质包括在15000psi~20000psi的条件下均质3次。
第三方面,本申请提供能了一种抗菌消炎敷料,所述抗菌消炎敷料的结构包括抗菌消炎层和敷料本体,所述抗菌消炎层包括第一方面所述的抗菌消炎剂。
可选的,以重量份数计,所述抗菌消炎敷料的原料包括:微纳米水溶性粉末:1~10份;所述微纳米水溶性粉末包括微纳米纤维素粉粉末和/或微纳米淀粉粉末。
可选的,所述微纳米淀粉粉末包括纳米级谷类淀粉粉末和/或纳米级薯类淀粉粉末;和/或,
所述微纳米水溶性粉末的粒径为10nm~100nm。
第四方面,本申请提供了一种制备第三方面所述的抗菌消炎敷料的方法,所述方法包括:
配制微纳米水溶性粉末溶液;
向所述敷料本体上涂布所述抗菌消炎剂,得到敷料凝胶制剂;
向所述敷料凝胶制剂涂覆所述微纳米水溶性粉末溶液,并进行压实成型,得到抗菌消炎敷料。
可选的,所述配制微纳米水溶性粉末溶液,包括步骤:
筛分所述微纳米水溶性粉末,后向筛分料中加入冷水,并进行加热和搅拌至所述筛分料完全溶解,得到微纳米水溶性粉末溶液;
其中,所述筛分料和所述冷水的质量之比为1:6~8,所述加热的终点温度为40℃~50℃。
本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点:
本申请实施例提供的一种抗菌消炎剂,通过引入澳洲茶树精油活性植物成分,因其具有性质安全温和、抗菌谱广、有效抑制杀灭细菌、真菌、病毒的特点,可以提高抗菌消炎剂的广谱抗菌性以及对超级细菌的抗菌持久性;同时由于澳洲茶树精油为脂溶性物质,引入乳化剂可以使得澳洲茶树精油形成超分子纳米结构,利用该结构可以包裹住澳洲茶树精油的有效活性成分,实现对澳洲茶树精油的有效活性成分的包埋,再通过水凝胶进一步稳定形成的超分子纳米结构,使得包埋效果稳定,而该包埋技术能显著提高难溶的脂溶性抗菌活性成分的水溶解度,促进抗菌活性成分透皮吸收,提高抗菌活性成分稳定性、降低抗菌活性成分的刺激性和毒副作用,显著提高抗菌活性成分的生物利用度,从而实现抗菌消炎剂的广谱抗菌、缓释持久高效抗菌、生物相容性高且能对超级细菌产生抗性。
附图说明
此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分,示出了符合本申请的实施例,并与说明书一起用于解释本申请的原理。
为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,对于本领域普通技术人员而言,在不付出创造性劳动性的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本申请实施例提供的制备抗菌消炎剂的方法的流程示意图;
图2为本申请实施例提供的制备抗菌消炎敷料的方法的流程示意图;
图3为本申请实施例提供的制备抗菌消炎敷料的方法的详细流程示意图;
图4为本申请实施例提供的每日老鼠创面情况的活体成像扫描结果图;
图5为本申请实施例提供的抗菌消炎敷料的药物缓释实验结果图;
图6为本申请实施例提供的茶树精油脂质体和茶树精油原油的缓释效果对比示意图;
图7为本申请实施例提供的茶树精油脂质体和茶树精油原油对创面修复效果的SEM电镜检测结果对比图;
图8为本申请实施例提供的茶树精油脂质体和茶树精油原油对创面抗菌效果的涂布实验结果图。
图9为本申请实施例提供的茶树精油脂质体和茶树精油原油对细胞毒性实验结果图;
图10为本申请实施例提供的茶树精油脂质体和茶树精油原油的特异性免疫荧光结果对比图;
图11为本申请实施例提供的茶树精油脂质体和茶树精油原油的线粒体活性氧刺激性对比图;
图12为本申请实施例提供的抗菌消炎剂作用于MRSA感染模型的总体样本PC1控制图;
图13为本申请实施例提供的抗菌消炎剂作用于MRSA感染模型的差异代谢物KEGG分类图;
图14为本申请实施例提供的抗菌消炎剂作用于MRSA感染模型的差异代谢物相关性热图;
图15为本申请实施例提供的抗菌消炎剂作用于MRSA感染模型的差异代谢物KEGG通路图;
图16为本申请实施例提供的茶树精油脂质体和茶树精油原油的水溶性测试结果对比图。
具体实施方式
为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合本申请实施例中的附图,对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例是本申请的一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例,都属于本申请保护的范围。
除非另有特别说明,本申请中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等,均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
本申请实施例提供了一种抗菌消炎剂,以重量份数计,所述抗菌消炎剂的原料包括:
澳洲茶树精油:0.1~10份,乳化剂:0.1~10份和水凝胶:0.1~5份。
本申请实施例中,控制澳洲茶树精油的重量份数为0.1~10份的积极效果是在该重量份数的范围内,由于澳洲茶树精油具有性质安全温和、抗菌谱广、有效抑制杀灭细菌、真菌、病毒的特点,但是脂溶性的茶树精油的原油易挥发,而为了弥补茶树精油易挥发的问题,大部分会提高药物含量,这将大大增加创面的刺激性,影响创面的愈合;同时为了保证澳洲茶树精油能够同乳化剂形成超分子纳米结构,且能充分包裹住澳洲茶树精油的有效活性成分。因此需控制澳洲茶树精油的重量份数。
控制乳化剂的重量份数为0.1~10份的积极效果是在该重量份数的范围内,能通过乳化剂乳化澳洲茶树精油,使其形成澳洲茶树精油初乳,再采用高压均质的方式实现澳洲茶树精油初乳的均质化,得到超分子纳米结构,能方便其对澳洲茶树精油中有效成分的包裹,从而形成长缓释的小分子物质,提高活性物的稳定性,显著降低功效活性物的刺激性,提高生物利用度,进而实现消炎抗菌剂的长效作用。
控制水凝胶的重量份数为0.1~5份的积极效果是在该重量份数的范围内,能通过水凝胶将形成的超分子纳米结构稳定在抗菌消炎剂中,使得澳洲茶树精油的有效成分能够在抗菌消炎剂中稳定存在,同时水凝胶本身的孔隙结构可以有效的提高抗菌消炎剂的透气性。
在一些可选的实施方式中,所述澳洲茶树精油的活性成分包括4-松油醇和1,8-桉叶素;所述4-松油醇占所述澳洲茶树精油的质量之比≥35%;
所述1,8-桉叶素占所述澳洲茶树精油的质量之比≤5%。
本申请实施例中,控制澳洲茶树精油的具体活性成分和具体含量,能保证澳洲茶树精油具有性质安全温和、抗菌谱广、有效抑制杀灭细菌、真菌、病毒的特点。
在一些可选的实施方式中,所述乳化剂包括聚山梨醇酯-80、PEG-40氢化蓖麻油、PEG-60氢化蓖麻油和PPG-26-丁醇聚醚-26中的至少一种。
本申请实施例中,控制乳化剂的具体种类,能保证澳洲茶树精油的乳化效果,保证澳洲茶树精油中的脂质成分形成脂质分子,方便其对澳洲茶树精油中有效成分的包裹,从而形成长缓释的小分子物质,提高活性物的稳定性,显著降低功效活性物的刺激性,提高生物利用度,进而实现消炎抗菌剂的长效作用。
且乳化剂为了保证效果的稳定,还包括甘油葡糖苷和/或1,2-戊二醇,进一步保证澳洲茶树精油中的脂质成分形成脂质分子,方便其对澳洲茶树精油中有效成分的包裹,从而形成长缓释的小分子物质,提高活性物的稳定性,显著降低功效活性物的刺激性,提高生物利用度,进而实现消炎抗菌剂的长效作用。
如图1所示,基于一个总的发明构思,本申请实施例提供了一种制备所述抗菌消炎剂的方法,所述方法包括:
S1.混合所述澳洲茶树精油中和乳化剂,并搅拌乳化,得到精油初乳;
S2.对所述精油初乳进行高压均质,以实现精油初乳的均质化,得到澳洲茶树精油脂质体;
S3.向所述澳洲茶树精油脂质体中加入水凝胶和水,并进行混合,后进行搅拌,得到抗菌消炎剂;
其中,所述澳洲茶树精油脂质体的平均粒径为1nm~100nm。
本申请实施例中,采用乳化剂和澳洲茶树精油相互作用,利用搅拌和高压均质的工艺,使得乳化剂将澳洲茶树精油的脂质成分分散并形成脂质分子,利用脂质分子包裹澳洲茶树精油中有效成分,形成球形载体,使得澳洲茶树精油形成长效缓释产品,在使用后能在较长时间内延缓且持续释放功效活性物以达到持续作用的效果;再通过水凝胶稳定住该球形载体的同时可以提高抗菌消炎剂的生物相容性和生物降解性。
控制抗菌消炎剂的具体平均粒径,一方面能够保证球形载体的粒径能够快速穿透细胞膜成分并作用于患处,另一方面还能保证球形载体在敷料材料上的稳定存在,从而进一步保证使用后能在较长时间内延缓且持续释放功效活性物以达到持续作用的效果。
该方法是针对上述抗菌消炎剂的制备方法,该抗菌消炎剂的具体原料组成可参照上述实施例,由于该方法采用了上述实施例的部分或全部技术方案,因此至少具有上述实施例的技术方案所带来的所有有益效果,在此不再一一赘述。
在一些可选的实施方式中,所述搅拌乳化的时间为2min~8min,所述搅拌乳化的转速为600r/min~1000r/min;和/或,
所述高压均质包括在15000psi~20000psi的条件下均质3次。
控制搅拌的时间和转速以及均质压力,能够利用乳化剂将澳洲茶树精油的脂质成分充分乳化并分散成超分子纳米结构,同时保证该超分子纳米结构对澳洲茶树精油的活性有效成分的包裹效果,使得澳洲茶树精油形成包埋球形载体,使得澳洲茶树精油形成长效缓释产品,在使用后能在较长时间内延缓且持续释放功效活性物以达到持续作用的效果。
高压均质可采用高压均质机、高速纳米粉碎机或超声均质反应设备,且均质最终粒径的大小可通过对多孔径聚碳酸酯过滤器(PC滤膜)的使用来轻松且可重复的选择。
基于一个总的发明构思,本申请实施例提供了一种抗菌消炎敷料,所述抗菌消炎敷料由外到内依次包括抗菌消炎层和敷料本体,所述抗菌消炎层包括所述抗菌消炎剂。
本申请实施例中,通过限定抗菌消炎敷料的具体结构,利用抗菌消炎剂形成抗菌消炎层,采用抗菌消炎层中的水凝胶成分,利用水凝胶的孔隙结构,提高敷料的透气性,同时水凝胶的具有良好的生物相容性,且由于抗菌消炎剂、敷料本体都为易降解物质,因此可以提高敷料的可降解性。
所述敷料本体选自棉布或老化/氧化的棉布、无纺布、纱布、涤纶、多孔有机高分子材料中的至少一种,敷料本体的规格长*宽可为10*15cm、20*25cm、40*50cm;且敷料本体可采用经纬交织法制备而成,采用经纬交织法制备敷料本体可使得整体敷料具有柔软亲肤、舒适透气、抑制肉芽组织过度生长、肉芽整齐、有良好的顺应性、易揭除而不损伤肉芽组织、不产生疼痛,减轻创面疤痕的优良特性。
所述敷料本体还可以选自壳聚糖膜,壳聚糖膜可以通过羧甲基壳聚糖制备而来,此时以重量份数计,所述抗菌消炎敷料的原料包括:羧甲基壳聚糖:0.1~5份。
控制羧甲基壳聚糖的重量份数为0.1~5份的积极效果是在该重量份数的范围内,能将羧甲基壳聚糖溶于水中并烘烤形成壳聚糖膜,从而能保证壳聚糖膜和敷料凝胶制剂之间形成复杂的孔隙结构,保证澳洲茶树精油的功效,同时保证敷料的透气性。
采用所述羧甲基壳聚糖配制壳聚糖膜,具体步骤为:
将羧甲基壳聚糖加入蒸馏水配成4%的壳聚糖混悬液,放入60℃烘箱内连续烘烤40h,制备壳聚糖膜。
在一些可选的实施方式中,以重量份数计,所述抗菌消炎敷料的原料包括:微纳米水溶性粉末:1~10份;所述微纳米水溶性粉末包括微纳米纤维素粉粉末和/或微纳米淀粉粉末。
本申请实施例中,控制微纳米水溶性粉末的重量份数为1~10份的积极效果是在该重量份数的范围内,由于微纳米水溶性粉末包括微纳米纤维素粉粉末和微纳米淀粉粉末,其表面具有大量的亲水性羟基,不仅可以提高敷料的亲水性和创面的亲和能力,还能通过微纳米水溶性粉末配合水凝胶形成复杂的多孔结构,固定形成的包埋球形载体的同时还能提高敷料的透气性。
控制微纳米淀粉粉末的具体种类,能保证微纳米水溶性粉末的表面能存在大量的水溶性羟基,保证敷料的吸水保湿性,同时能进一步减轻澳洲茶树精油对创面的刺激。
综上所述,本申请的敷料通过澳洲茶树精油、微纳米水溶性粉末、乳化剂、羧甲基壳聚糖和水凝胶之间的相互作用,使得敷料整体具有性质安全温和、抗菌谱广、有效抑制杀灭细菌、真菌、病毒的特点,同时针对超级细菌具有良好的抗菌,并且防止创面细菌滋生和繁殖,促进组织细胞再生,加速创面修复愈合,且该敷料透气性好、生物相容性好、亲和力强、降解快,减少创面肉芽、瘢痕组织形成,有利于创面组织细胞的更新代谢,生成新的胶原蛋白,促进创面的无痕修复和愈合。
在一些可选的实施方式中,所述微纳米淀粉粉末包括纳米级谷类淀粉粉末和/或纳米级薯类淀粉粉末;和/或,
所述微纳米水溶性粉末的粒径为10nm~100nm。
本申请实施例中,控制微纳米水溶性粉末的具体粒径,能保证微纳米水溶性粉末表面的具有足够的水溶性羟基,从而保证敷料的吸水保湿性,同时微纳米水溶性粉末的水溶性较好,还可以避免敷料对伤口创面的刺激。
如图2所示,基于一个总的发明构思,本申请实施例提供了一种制备所述抗菌消炎敷料的方法,所述方法包括:
S1.配制微纳米水溶性粉末溶液;
S2.向所述敷料本体上涂布所述抗菌消炎剂,得到抗菌消炎层;
S3.向所述抗菌消炎层涂覆所述微纳米水溶性粉末溶液,并进行压实成型,得到抗菌消炎敷料。
本申请实施例中,通过先在敷料本体的表面涂布抗菌消炎剂,最后再加入微纳米水溶性粉末溶液,得到具有广谱抗菌、透气性高、亲和力高、生物相容性高和降解快的抗菌消炎敷料。
在一些可选的实施方式中,所述配制微纳米水溶性粉末溶液,包括步骤:
S201.筛分所述微纳米水溶性粉末,后向筛分料中加入冷水,并进行加热和搅拌至所述筛分料完全溶解,得到微纳米水溶性粉末溶液;
其中,所述筛分料和所述冷水的质量之比为1:6~8,所述加热的终点温度为40℃~50℃。
本申请实施例中,通过先采用冷水初步溶解微纳米水溶性粉末,再加热和搅拌,使得微纳米水溶性粉末溶解完全,从而保证微纳米水溶性粉末溶液中有足够多的微纳米水溶性物质。
控制筛分料和冷水的质量之比,以及加热的终点温度,能有效的保证对微纳米水溶性粉末的溶解完全,从而保证微纳米水溶性粉末的表面有足够多的水溶性羟基。
下面结合具体的实施例,进一步阐述本申请。应理解,这些实施例仅用于说明本申请而不用于限制本申请的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照国家标准测定。若没有相应的国家标准,则按照通用的国际标准、常规条件、或按照制造厂商所建议的条件进行。
澳洲茶树精油又叫互生叶白千层(MELALEUCA ALTERNIFOLIA)叶油,为纯天然植物提取物,是一种中高效的杀菌剂,澳洲茶树精油的主要功效成分4-松油醇和1,8桉叶素对人体皮肤表面的致病菌显示出了较好的杀灭作用,能有效对抗包括白色念珠菌、革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌等在内的26种皮癣菌、32种白色念珠菌及22种小芽孢菌,具有显著的抗感染抗霉菌功效,且对耐药菌也有较好抗菌活性。此外,澳洲茶树精油还具有增强机体免疫调节能力,提高机体抗病能力,促进伤口愈合、止血、消炎止痛、舒缓镇静等作用,是一种优良的天然抗菌剂。
微纳米纤维素粉易于经水分散溶解形成胶体,具有分散均匀、成胶强度大、维持粒径小等特点,在医药、纺织和新材料制备等领域被广泛运用。
壳聚糖是天然高分子生物多糖甲壳素脱乙酰化产物,具有优良的耐溶剂性和耐碱性,良好的生物相容性与皮肤亲和性,抑菌性、透气性、吸水性、保湿性好,有促进伤口止血、愈合等优点,可用作医学材料。
本申请中的澳洲茶树精油如无特殊说明,均购买自南宁万家辉香料有限公司。
实施例1
一种抗菌消炎剂,以重量份数计,抗菌消炎剂的原料包括:
澳洲茶树精油:3份,乳化剂:3份和水凝胶:1份。
澳洲茶树精油的活性成分包括4-松油醇和1,8-桉叶素;4-松油醇占所述澳洲茶树精油的质量之比≥35%;
1,8-桉叶素占所述澳洲茶树精油的质量之比≤5%。
乳化剂采用聚山梨醇酯-80、PEG-40氢化蓖麻油和PPG-26-丁醇聚醚-26混合乳化。
所述澳洲茶树精油脂质体的平均粒径为70.68nm。
抗菌消炎敷料的原料包括:微纳米水溶性粉末:5份,羧甲基壳聚糖:2.5份,微纳米水溶性粉末为微纳米纤维素粉粉末。
敷料的制备方法包括以下步骤:
(1)按上述比例称取适量微纳米纤维素粉,过筛,加入冷水,微纳米纤维素粉与冷水的质量百分比为1:6~8,机械搅拌均匀,加热至40℃~50℃,边加热边搅拌至完全溶解,得微纳米纤维素粉溶液,备用;
(2)在澳洲茶树精油加入乳化剂,于40℃水浴锅中混和均匀,并通过1000rpm机械搅拌使形成初乳,采用ATS高压均质机15000psi下均质3次,得澳洲茶树精油脂质体;
(3)将水凝胶和余量水按上述比例依次加入上述的澳洲茶树精油脂质体,保温30℃~40℃,用磁力搅拌器充分搅拌均匀,得敷料凝胶制剂;
(4)按上述比例称取适量羧甲基壳聚糖,加入蒸馏水配成4%的壳聚糖混悬液,放入60℃烘箱内连续烘烤40h,制备壳聚糖膜,将壳聚糖膜覆于敷料本体上;
(5)将得到的敷料凝胶制剂均匀涂布于含有壳聚糖膜的敷料本体中,再将微纳米纤维素粉溶液涂覆于凝胶制剂表面,经压实成型,得胶体敷料。
实施例2
将实施例2和实施例1进行对比,实施例2和实施例1的区别在于:
以重量份数计,抗菌消炎剂的原料包括:
澳洲茶树精油:10份,乳化剂(采用聚山梨醇酯-80、PEG-40氢化蓖麻油和PPG-26-丁醇聚醚-26的混合液):10份,水凝胶:5份。
以重量份数计,抗菌消炎敷料的原料包括:
微纳米水溶性粉末:10份,羧甲基壳聚糖:5份;
其中,微纳米水溶性粉末为微纳米纤维素粉粉末。
敷料的制备方法同实施例1。
实施例3
将实施例3和实施例1进行对比,实施例3和实施例1的区别在于:
以重量份数计,抗菌消炎剂的原料包括:澳洲茶树精油:0.1份,乳化剂:0.1份,水凝胶:0.1份。
以重量份数计,抗菌消炎敷料的原料包括:
微纳米水溶性粉末:1份,羧甲基壳聚糖:0.1份;
其中,所述微纳米水溶性粉末为微纳米纤维素粉粉末。
敷料的制备方法同实施例1。
实施例4
将实施例4和实施例1进行对比,实施例4和实施例1的区别在于:
以重量份数计,抗菌消炎剂的原料包括:澳洲茶树精油:5份,乳化剂:1.5份,水凝胶:1.5份。
以重量份数计,抗菌消炎敷料的原料包括:微纳米水溶性粉末:7.5份,羧甲基壳聚糖:3.75份;其中,所述微纳米水溶性粉末为微纳米纤维素粉粉末。
敷料的制备方法同实施例1。
实施例5
将实施例5和实施例1进行对比,实施例5和实施例1的区别在于:
以重量份数计,抗菌消炎剂的原料包括:澳洲茶树精油:5份,乳化剂:0.5份,水凝胶:0.5份。
以重量份数计,抗菌消炎敷料的原料包括:微纳米水溶性粉末:2.5份,羧甲基壳聚糖:1.25份;
其中,所述微纳米水溶性粉末为微纳米纤维素粉粉末。
敷料的制备方法同实施例1。
实施例6
将实施例6和实施例1进行对比,实施例6和实施例1的区别在于:
以重量份数计,抗菌消炎剂的原料包括:澳洲茶树精油:2.5份,乳化剂:2.5份,水凝胶:1份。
以重量份数计,抗菌消炎敷料的原料包括:微纳米水溶性粉末:2.5份,羧甲基壳聚糖:1.25份;
其中,所述微纳米水溶性粉末为微纳米纤维素粉粉末。
敷料的制备方法同实施例1。
实施例7
将实施例7和实施例1进行对比,实施例7和实施例1的区别在于:
以重量份数计,抗菌消炎剂的原料包括:澳洲茶树精油:7.5份,乳化剂:7.5份,水凝胶:2.5份。
以重量份数计,抗菌消炎敷料的原料包括:微纳米水溶性粉末:2.5份,羧甲基壳聚糖:1.25份;
其中,所述微纳米水溶性粉末为微纳米纤维素粉粉末。
敷料的制备方法同实施例1。
对比例1
将对比例1和实施例1进行对比,对比例1和实施例1的区别在于:
不含有澳洲茶树精油成分,其余同实施例1。
对比例2
将对比例2和实施例1进行对比,对比例2和实施例1的区别在于:
不含有微纳米纤维素粉和羧甲基壳聚糖,其余同实施例1。
对比例3
将对比例3和实施例1进行对比,对比例3和实施例1的区别在于:
不含澳洲茶树精油、微纳米纤维素粉和羧甲基壳聚糖,其余组分和制备方法同实施例1。
相关实验及效果数据:
对TTO-NL进行水溶性测试,结果如图16所示,这说明TTO-NL即茶树精油脂质体较茶树精油原油具备了良好的水溶性,这将很大程度上改善创面应用的稳定性和利用率。
一、测试实施例1中抗菌消炎剂的抗菌效果,具体步骤如下:
1.常规细菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌)的中和剂鉴定实验和杀菌实验:
(1)器材:
待测样品:实施例1的抗菌消炎剂。
试验菌种:大肠杆菌(8099),由中国工业微生物菌种保藏管理中心提供,培养第4代;
金黄色葡萄球菌(ATCC6538),由北纳创联生物科技有限公司提供,培养第3代;
中和剂配方:含2.1%卵磷脂+2.0%葡萄糖+0.5%硫代硫酸钠+1.5%吐温80+0.5%蛋白胨+1.2%亚硫酸钠的水溶液。
培养基:NA/20221201、NA/20221206。
仪器设备:电热恒温培养箱DHP-9272(WPE-RH0342、WPE-RH0343)、生物安全柜BSC-1604ⅡA2(WPE-RH0310)、生物安全柜BSC-1604ⅡB2(WPE-RH0311)。
(2)方法:
检验依据:GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录C3.1中和剂鉴定试验,附录C3.2杀菌试验。
检测环境:温度:24.2℃,湿度:41%RH。
中和剂鉴定试验:受试物作用1min,试验重复3次。
杀菌试验:受试物分别作用2min,5min,10min,20min,试验重复3次,结果如表1、表2和表3所示。
(3)结果分析:
1)大肠杆菌中和剂鉴定试验结果如表1所示:
表1中所列各组序号及所代表的内容与检验依据的规定相同。
第3、4、5组间重复1误差率为4.0%、重复2差率为4.0%、重复3误差率为4.0%。
表1大肠杆菌中和剂鉴定实验结果情况表
2).大肠杆菌的杀菌效果如表2所示:
表2对大肠杆菌的杀菌效果结果情况表
注:阴性对照组:PBS、培养基无细菌生长。
3).对金黄色葡萄球菌的杀菌效果如表3所示:
表3对金黄色葡萄球菌的杀菌效果结果情况表
注:阴性对照组:PBS、培养基无细菌生长。
(4)结论:由表1、表2和表3的数据可知:
经检验,含2.1%卵磷脂+2.0%葡萄糖+0.5%硫代硫酸钠+1.5%吐温80+0.5%蛋白胨+1.2%亚硫酸纳的水溶液的中和剂可有效中和受试物的杀菌成分,且中和剂及中和产物对受试菌及培养基无不良影响,表明该中和剂适用于该受试物的定量杀灭试验。
经检验,该样品分别作用2min、5min、10min、20min时对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的平均杀菌率均为≥90%,产品有杀菌作用,符合GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录C3.2.2的要求。
2.白色念珠菌的中和剂鉴定实验和杀菌实验:
白色念珠菌(ATCC10231),由北纳创联生物科技有限公司提供,培养第3代。
检测环境:温度:24.2℃,湿度:42%RH。
其余器材和方法同上。
白色念珠菌的中和剂鉴定实验结果如表4所示。
表4中所列各组序号及所代表的内容与检验依据的规定相同。
第3、4、5组间重复1误差率为4.3%、重复2差率为5.6%、重复3误差率为4.3%。
表4白色念珠菌的中和剂鉴定实验结果情况表
其杀菌效果如表5所示。
表5对白色念珠菌的杀菌效果结果情况表
注:阴性对照组:PBS、培养基无细菌生长。
结论:由表4和表5的数据可知:
经检验,含2.1%卵磷脂+2.0%葡萄糖+0.5%硫代硫酸钠+1.5%吐温80+0.5%蛋白胨+1.2%亚硫酸纳的水溶液的中和剂可有效中和受试物的杀菌成分,且中和剂及中和产物对受试菌及培养基无不良影响,表明该中和剂适用于该受试物的定量杀灭试验。
经检验,该样品分别作用2min、5min、10min、20min时对白色念珠菌平均杀菌率均≥90%,产品有杀菌作用,符合GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录C3.2.2的要求。
3.铜绿假单胞菌的中和剂鉴定实验和杀菌实验:
铜绿假单胞菌(ATCC15442),由北纳创联生物科技有限公司提供,培养第4代。
水浴锅DC0510(WPE-RH0327)。
检测环境:温度:24.3℃,湿度:42%RH。
检验依据:WS/T 650-2019《抗菌和抑菌效果评价方法》。
受试物分别作用1.5min、3min、4.5min,试验重复3次。
其余器材和方法同上。
中和剂鉴定实验结果如表6所示。
表6中所列各组序号及所代表的内容与检验依据的规定相同。
第1、2、3组间重复1误差率为1.5%、重复2差率为1.5%、重复3误差率为1.6%。
表6铜绿假单胞菌的中和剂鉴定实验结果情况表
其杀菌效果如表7所示。
表7对铜绿假单胞菌的杀菌效果结果情况表
注:阴性对照组:PBS、培养基无细菌生长。
结论:由表6和表7的数据可知:
经检验,含2.1%卵磷脂+2.0%葡萄糖+0.5%硫代硫酸钠+1.5%吐温80+0.5%蛋白胨+1.2%亚硫酸纳的水溶液的中和剂可有效中和受试物的杀菌成分,且中和剂及中和产物对受试菌及培养基无不良影响,表明该中和剂适用于该受试物的定量杀灭试验。
经检验,该样品分别作用3min对铜绿假单胞菌平均杀菌率均≥99.9%,有较强抗菌作用,符合WS/T650-2019《抗菌和抑菌效果评价方法》5.2.1.7的要求。
4.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的中和剂鉴定实验和杀菌实验:
(1)器材:
待测样品:实施例1的抗菌消炎剂。
试验菌种:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(ATCC43300),由广东省微生物菌种保藏中心提供,培养第5代;
中和剂配方:含3%吐温-80、0.5%硫代硫酸钠、0.5%L-组氨酸、0.5%蛋白胨、0.85%氧化钠、1.43%卵磷脂、0.1%半胱氨酸的PBS溶液。
稀释液、培养基:PBS溶液、营养琼脂培养基。
仪器设备:生化培养箱(编号:QFM-B-PO16)、生物安全柜(编号:QFM-B-PO05)、低温恒温槽(编号:QFM-B-P014)。
(2)方法:
检验依据:WS/T 650-2019《抗菌和抑菌效果评价方法》5.2.1.4中和剂鉴定试验,5.2.1悬液定量杀菌试验。
检测环境:温度:22.0℃,湿度:58%RH。
菌悬液的制备:取试验菌24h新鲜斜面培养物用PBS洗下,制成菌悬液(回收菌量为1.0x104CFU/mL~9.0x104CFU/mL)。
中和剂鉴定试验:受试物作用10min,试验按照标准要求分成4组,试验重复3次。
杀菌试验:受试物分别作用1.5min、3min、4.5min,试验重复3次。试验温度为20℃±1℃。
(3)结果分析:
1).耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中和剂鉴定试验结果如表8所示:
表8耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的中和剂鉴定实验结果情况表
2).经3次重复试验,在试验温度为20℃±1℃条件下,受试物分别作用1.5min、3min、4.5min,对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(ATCC 43300)的杀菌率均>99.9%,结果如表9所示:
表9对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的杀菌效果结果情况表
注:阴性对照组无细菌生长。
(3)结论:由表8和表9的数据可知:
该样品原液,作用时间3min,试验重复3次,对耐甲西林金黄色葡萄球菌(ATCC43300)的杀菌率均>99.9%,符合WS/T 650-2019《抗菌和抑菌效果评价方法》5.2.1.7的结果判定(杀菌率≥99%),对所测菌株有较强抗菌作用。
5.多次完整皮肤刺激实验:
(1)样品信息:
待测样品:实施例1的抗菌消炎剂,性状:无色透明液体,样品配制:原样,直接使用。
(2)实验动物和饲养环境:
动物品种:新西兰白兔;等级:普通级;来源:上海市松江区车墩实验动物良种场有限公司,生产许可证号:SCXK (沪)2022-0001,质量合格证号:20220001000289,性别:雌性,体重:2.1kg~2.2kg。
饲料来源:上海舟虞生物科技有限公司,生产许可证号:沪饲证(2021) 04027。
饲养环境:普通级动物房,房间号:321,饲养室温度16℃~26℃,相对湿度40%~70%,实验动物使用许可证号:SYXK (沪)2021-0023。
仪器设备:电子计数称ASC-30(WPE-TL0055)。
(3)方法:
检验依据:《消毒技术规范》(2002年版) 2.3.3。
操作程序:
试验前动物在实验动物房环境中适应3d时间。
试验前约24h,将实验动物背部柱两侧被毛剃掉,去毛范围左右各约3cmx3cm不得损伤皮肤。
次日称重后将受试物0.5mL涂抹于面积为2.5cmx2.5cm左侧去毛皮肤上,右侧作为空白对照。在涂抹后4h后用温水除去残留物。每天涂抹1次,连续涂抹14d。
临床观察:在每次涂抹24h后观察结果,同时为了便于受试物的涂抹和结果观察,需要时可剪毛。记录每天每只动物红斑和水肿的积分。
判新标准和评分:按《消毒技术规范》(2002年版)2.3.3.4的评价规定进行多次皮肤刺激反应积分评分,对样品和对照的红斑和水肿进行观察并评分,计算出每天每只动物皮肤刺激反应积分均值(刺激指数),按照皮肤刺激强度分级来判断皮肤刺激强度。
(4)结果分析:
1).新西兰白兔未见其他毒性反应。
2).多次完整皮肤刺激反应评分情况,具体见表10。
表10新西兰白兔多次完整皮肤刺激性试验结果
注:每天每只动物积分均值(皮肤刺激指数)=每只动物14d的红斑和水肿总积分/(受试动物数*多次皮肤试验刺激天数)
(5)结论:
由表10可知,经检验,该样品对新西兰白兔多次完整皮肤刺激后,每天每只动物皮肤刺激反应积分均值(刺激指数)为0.00,属无刺激性。符合《消毒技术规范》(2002年版)2.3.13.1标准要求。
6.急性眼刺激实验:
(1)样品信息:
待测样品:实施例1的抗菌消炎剂,性状:无色透明液体,样品配制:原样,直接使用。
(2)实验动物和饲养环境:
动物品种:新西兰白兔;等级:普通级;来源:上海市松江区车墩实验动物良种场有限公司,生产许可证号:SCXK (沪)2022-0001,质量合格证号:20220001000288,性别:雄性,体重:2.0kg~2.2kg。
饲料来源:上海舟虞生物科技有限公司,生产许可证号:沪饲证(2021)04027。
饲养环境:普通级动物房,房间号:323,饲养室温度16℃~26℃,相对湿度40%~70%,实验动物使用许可证号:SYXK (沪)2021-0023。
仪器设备:电子计数称ASC-30(WPE-TL0055)。
(3)方法:
检验依据:《消毒技术规范》(2002年版) 2.3.4。
操作程序:
试验前动物在实验动物房环境中适应3d时间。
在试验开始前的24h内要对动物的两只眼睛进行检查(包括使用荧光素钠检查)。有眼睛刺激症状、角膜缺陷和结膜损伤的动物不能用于试验。
吸取受试物0.1mL滴入新西兰白兔左侧眼结膜囊内,右侧眼以生理盐水作为正常对照。滴眼后将眼被动闭合4s,30s后用生理盐水冲洗。
临床检查:分别于滴眼后1h、24h、48h和72h,肉眼观察新西兰免眼结膜、虹膜和角膜的损伤与恢复情况。72h内未出现刺激反应,故终止试验。在24h观察和记录结束之后,对所有动物眼睛用2%荧光素钠溶液作进一步检查。
判断标准和评分:
按家兔急性眼刺激反应的评分标准,对新西兰白免眼角膜,虹膜和结膜的急性刺激反应进行评分,并分别计算每只动物在三个不同观察时间(24h、48h和72h)角膜损害、虹膜损害、结膜充血和结膜水肿四方面的“平均评分”(即每只动物的24h、48h和72h评分之和除以观察数3)。
分别以动物眼角膜、虹膜和结膜充血、水肿的平均评分和恢复时间,按《消毒技术规范》(2002年版)2.3.4.4中表2-14、表2-15的眼刺激反应分级标准判定受试物对眼睛的刺激强度。
(4)结果分析:
1).新西兰白兔的兔眼染毒后,未见其他毒性反应。
2).眼刺激反应评分情况,具体见表11。
表11新西兰白兔眼刺激反应评分结果(72h内)
注:“平均评分”(即每只动物的24h、48h和72h评分之和除以观察数3)
(5)结论:
经检验,该样品对新西兰白免急性眼刺激反应平均评分为0.00,属无刺激性,符合《消毒技术规范》(2002年版)2.3.13.1标准要求)。
7.鲍曼不动杆菌的中和剂鉴定实验和杀菌实验:
(1)器材:
待测样品:实施例1的抗菌消炎剂。
试验菌种:鲍曼不动杆菌(CICC10980),由中国工业微生物菌种保藏管理中心提供,培养第4代。
中和剂配方:含2.1%卵磷脂+2.0%葡萄糖+0.5%硫代硫酸钠+1.5%吐温80+0.5%蛋白胨+1.2%亚硫酸钠的水溶液。
培养基:NA/20230308。
仪器设备:电热恒温培养箱LRH-250F (WPE-RH0253)、水浴锅DC0510 (WPE-RH0327)、生物安全柜BSC-1604ⅡB2(WPE-RH0311)。
(2)方法:
检验依据:WS/T 650-2019《抗菌和抑菌效果评价方法》5.2.1.4中和剂鉴定试验,5.2.1悬液定量杀菌试验。
检测环境:温度:23.6℃,湿度:42%RH。
中和剂鉴定试验:试验重复3次。
悬液定量杀菌试验:受试物分别作用1.5min、3min、4.5min,试验重复3次。
(3)结果分析:
1).鲍曼不动杆菌中和剂鉴定试验结果如表12所示:
表12中所列各组序号及所代表的内容与检验依据的规定相同。
第1、2、3组间重复1误差率为1.0%、重复2差率为2.8%、重复3误差率为2.8%。
表12鲍曼不动杆菌中和剂鉴定实验结果情况表
2).经3次重复试验,受试物分别作用1.5min、3min、4.5min,对鲍曼不动杆菌(CICC10980)的杀菌率均>99.97%。结果如表13所示:
表13对鲍曼不动杆菌的杀菌效果结果情况表
注:阴性对照组:PBS、培养基无细菌生长。
(3)结论:由表12和表13的数据可知:
经检验,含2.1%卵磷脂+2.0%葡萄糖+0.5%硫代硫酸钠+1.5%吐温80+0.5%蛋白胨+1.2%亚硫酸钠的水溶液的中和剂可有效中和该样品的杀菌成分,且中和剂及中和产物对受试菌及培养基无不良影响,表明该中和剂适用于该样品的定量杀灭试验。
经检验,该样品分别作用1.5min、3min、4.5min,试验重复3次,对鲍曼不动杆菌(CICC 10980)的杀菌率均>99.97%,符合WS 650-2019《抗菌和抑菌效果评价方法》5.2.1.7的结果判定(杀菌率≥99%),对所测菌株有较强抗菌作用。
二、测试抗菌消炎敷料的抗菌性和长缓释功效,具体步骤如下:
1.TTO脂质体长效缓释功效:
(1)体外方法:设定紫外吸收光谱仪发射波长299nm(TTO对应参数)测定各节点样品的药物含量,将基质甲醇作为空白设定(=0)。
实验组:将1cm*1cm大小样品敷料用10mL甲醇溶解,充分混合得到浸提液,使用色谱仪进行茶树精油主要有效成分(松油醇-4和1,8-桉叶素)的检测。72h几乎未检测到药物成分升高,结果如图4所示。
(2)体内方法:荧光素偶联标记茶树油原油及茶树油脂质体,利用活体成像仪扫描每日老鼠创面情况,大体观察剩余茶树油浓度,结果如图5和图6所示。
(3)结果: 敷料的缓释时间约为72小时;TTO-NL即茶树精油脂质体较茶树精油原油有更长的释放时程。
2.TTO对于细菌生物膜有深层灭菌作用:
(1)方法:选用C57小鼠正常皮肤作为人为擦伤模型,进行体内模拟实验,接种MRSA(ATCC 43300)在创面,第二天可以见到创面生物膜形成,覆盖敷料,设定三组实验(空白组,TTO,TTO脂质体组)。在覆盖处理后的第1和第3天取下目标皮肤组织每组取样六个(n=3),一半使用无菌咽拭子从创面取样作涂板实验进行菌落计数,另一半固定脱水作电镜检测,结果如图7所示。
(2)使用无菌咽拭子从创面取样作涂板实验进行菌落计数的方法:用咽拭子从上述皮肤样本取样获得目标组织中的菌体样本,生理盐水10倍稀释后均匀涂布在细胞培养皿中,分别设置空白组、TTO组和TTO-NL组,有氧37℃静置1天,结果如图8所示。
(3)结果:脂质体敷料可以到达创面深部彻底杀灭细菌。
三、茶树油脂质体敷料的创面刺激性:
1.方法:为了进行细胞毒性试验,设定两组角质细胞HACAT分别与TTO脂质体敷料样品和TTO原油敷料共培养。孵育3h和12h后,使用CCK-8试剂盒评估细胞毒性。并使用智能Reart 96平板阅读器在酶标仪450nm处读取培养基的吸光度,结果如图9所示。
2.方法:设定TTO和TTO-NL组培养角质形成细胞HACAT与目标敷料共培养24h,借助线粒体特异性免疫荧光(Mt.,红色)及氧化损伤线粒体DNA的特异性免疫荧光(8-OHdG,绿色)对各组共培养细胞进行孵育染色,结果如图10所示,同时统计TTO组和TTO-NL组的角质形成细胞HACAT的氧化损失,结果如图11所示。
3.结果:TTO组中的细胞见更明显的氧化损线粒体DNA,提示线粒体存在损伤,即TTO较TTO-NL对角质形成细胞有统计学意义上的氧化应激损伤,这说明含有TTO脂质体敷料降低细胞毒性,避免对创面细胞产生损伤。
四、探究TTO脂质体促愈机制:
已知PGF2α信号通路是由PGF2α受体(PTGFR)介导的,该受体与G蛋白Gq结合,激活多种信号通路,包括PLC/PKC、MAPKs、PI3K和激活的T细胞NFAT信号通路。FP受体是PTGFR之一,通过上调Src和PAI-1的表达,促进血管衰老,诱导细胞衰老、氧化应激和血管重构。IL-1诱导多种促炎细胞因子和趋化因子的表达,包括IL-6,并上调COX-2的表达,导致前列腺素合成的增加。参与TTO抗菌机制的分级微环境的代谢变化和信号转导途径尚未完全明确,故进一步探索相关机制有利于制定特异性分散生物膜和降低细胞毒性的策略。
1.方法:滴加等量的生理盐水(空白对照组,NS)和TTO-NL(实验组)于小鼠的MRSA感染模型中,防水敷料覆盖12小时后,咽拭子蘸取创面渗液,进行分析处理,具体如下,n=3:
(1)样品提取流程:
1)从-80℃冰箱中取出样本放在冰上解冻(后续所有操作都要求在冰上行);
2)加入70%甲醇水内标提取液400μL,涡旋3min;
3)冰水浴中超声10min,取出样本继续涡旋1min,-20℃冰箱中静置30min;
4)在4℃条件下,12000r/min离10min,移取上清液300μL到另一对应编号离心管中。
5)在4℃条件下,12000r/min再离心3min,移取上清液200μL到对应进样瓶内衬管中,
用于上机分析。
(2)色谱质谱采集条件:
液相色谱条件(T3)色谱柱:Waters ACQUITY UPLC HSS T3 C18 1.8 μm,2.1mm *100mm;流动相A:超纯水(0.1%的甲酸);流动相B:乙腈(0.1%的甲酸);仪器柱温:40℃;流速0.40mL/min;进样量:2μL。
表14正负离子模式质谱条件情况表
(3)数据预处理
质谱下机原始数据经过ProteoWizard转换为mzML格式,采用XCMS程序进行峰提取,对齐,保留时间校正。采用“SVR”方法对峰面积进行校正,并对各组样本中缺失率>50 %的峰进行过滤,结果如图12所示。校正筛选后的峰,通过检索实验室自建数据库、整合公共库、AI预测库以及metDNA方法得到代谢物鉴定信息,结果如图13、图14和图15所示。
如图12所示,PC1 Scores在正负3个标准差(Standard Deviation,SD)范围内为正常范围,即仪器稳定。(注:图中横坐标为样本检测顺序,纵坐标反映PC1值,黄色和红色的线分别定义了正负2个、3个标准差范围。绿色的点代表质控QC样本,黑色的点代表试验样本。)
图13中,纵坐标为KEGG代谢通路的名称,横坐标为注释到该通路下的差异代谢物个数及其个数占被注释上的代谢物总数的比例。
图14中,横向为差异代谢物名称;纵向为差异代谢物名称;不同颜色代表皮尔逊 (Pearson)相关系数的高低,相关系数与颜色间的关系见右侧图例说明,红色表示正相关性较强,绿色表示负相关性较强,颜色越深代表样品间相关系数的绝对值越大。
图15中,红色表示代谢物含量在实验组中显著上调,蓝色代表该代谢物被检测到但未发生显著变化,绿色表示代谢物含量在实验组中显著下调,橙色则表示同时包含上调、下调代谢物。
结果表明:利用京都基因和基因组百科全书(KEGG),非靶向代谢组学提示TTO脂质体促愈机制是对类固醇相关通路调节来实现的。
综上所述,与现有技术相比,本申请中的敷料融合了澳洲茶树精油植物活性成分,而澳洲茶树精油是一种优良的天然抗菌剂,具有显著的抗菌消炎、抗感染作用,还能增强机体免疫调节能力,加速创面愈合;纳米包埋缓释技术的运用使澳洲茶树精油均匀分散成纳米级小分子物质,使澳洲茶树精油小分子牢固附着于敷料以壳聚糖膜为载体的敷料本体中,从而达到缓释持久温和抗菌的目的。
本申请实施例中的一个或多个技术方案,至少还具有如下技术效果或优点:
(1)本申请实施例提供的一种抗菌消炎剂,由于澳洲茶树精油为脂溶性物质,引入乳化剂可以使得澳洲茶树精油形成超分子纳米结构,利用该结构可以包裹住澳洲茶树精油的有效活性成分,实现对澳洲茶树精油的有效活性成分的包埋,再通过水凝胶进一步稳定形成的超分子纳米结构,使得包埋效果稳定,而该包埋技术能显著提高难溶的脂溶性抗菌活性成分的水溶解度,促进抗菌活性成分透皮吸收,提高抗菌活性成分稳定性、降低抗菌活性成分的刺激性和毒副作用,显著提高抗菌活性成分的生物利用度,同时该抗菌消炎剂所形成的敷料对创面的亲和力强,且生物相容性好,同时羧甲基壳聚糖所形成的壳聚糖膜和和水凝胶的复杂孔隙结构还能提高敷料的透气性;由于该敷料的成分大部分为生物材料,因此其相比其他敷料的降解较快,同时能减少创面肉芽、瘢痕组织形成,有利于创面组织细胞的更新代谢,生成新的胶原蛋白,促进创面的无痕修复和愈合。
(2)本申请实施例提供的一种制备抗菌消炎剂的方法,通过运用纳米包埋缓释技术制备富含澳洲茶树精油的抗菌消炎敷料,达到缓释持久温和抗菌的目的,与现有技术相比,具有温和安全无刺激、实用有效、抗菌谱广、抗菌持久等特点,适用于各类型炎症感染的外用治疗。
(3)本申请实施例提供的一种抗菌消炎敷料,具有天然、安全、温和、有效、抗菌谱广等特点,能有效应对抗皮肤感染,杀灭抑制包括白色念珠菌、革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌等以及“超级细菌”如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌,具有显著的抗感染抗霉菌功效,还能加速各种类型伤口的无痕愈合,尤其适合烧烫伤创面的修复。
(4)本申请实施例提供的一种抗菌消炎敷料,通过“消+械组合(抗菌消炎剂+敷料布)”术前直接杀菌,术后配合敷料使用可使感染创面伤口三天72小时,活性物达到持续释放,减少更换敷料布的频次。
本申请的各种实施例可以以一个范围的形式存在;应当理解,以一范围形式的描述仅仅是因为方便及简洁,不应理解为对本申请范围的硬性限制;因此,应当认为所述的范围描述已经具体公开所有可能的子范围以及该范围内的单一数值。例如,应当认为从1到6的范围描述已经具体公开子范围,例如从1到3,从1到4,从1到5,从2到4,从2到6,从3到6等,以及所述范围内的单一数字,例如1、2、3、4、5及6,此不管范围为何皆适用。另外,每当在本文中指出数值范围,是指包括所指范围内的任何引用的数字(分数或整数)。
在本申请中,在未作相反说明的情况下,使用的方位词如“上”和“下”具体为附图中的图面方向。另外,在本申请说明书的描述中,术语“包括”“包含”等是指“包括但不限于”。在本文中,诸如“第一”和“第二”等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来,而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。在本文中,“和/或”,描述关联对象的关联关系,表示可以存在三种关系,例如,A和/或B,可以表示:单独存在A,同时存在A和B,单独存在B的情况。其中A,B可以是单数或者复数。在本文中,“至少一个”是指一个或者多个,“多个”是指两个或两个以上。“至少一种”、“以下至少一项(个)”或其类似表达,是指的这些项中的任意组合,包括单项(个)或复数项(个)的任意组合。例如,“ a,b,或c中的至少一项(个)”,或,“a,b,和c中的至少一项(个)”,均可以表示:a, b, c, a-b(即a和b), a-c, b-c,或a-b-c,其中a,b,c分别可以是单个,也可以是多个。
以上所述仅是本申请的具体实施方式,使本领域技术人员能够理解或实现本申请。对这些实施例的多种修改对本领域的技术人员来说将是显而易见的,本文中所定义的一般原理可以在不脱离本申请的精神或范围的情况下,在其它实施例中实现。因此,本申请将不会被限制于本文所示的这些实施例,而是要符合与本文所申请的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (5)
1.一种抗菌消炎敷料,其特征在于,所述抗菌消炎敷料的结构包括抗菌消炎层和敷料本体,所述抗菌消炎层包括抗菌消炎剂;以重量份数计,所述抗菌消炎剂的原料为:
澳洲茶树精油:0.1~10份,乳化剂:0.1~10份和水凝胶:0.1~5份;
所述乳化剂为聚山梨醇酯-80、PEG-40氢化蓖麻油、PEG-60氢化蓖麻油和PPG-26-丁醇聚醚-26中的至少一种;
以重量份数计,所述抗菌消炎敷料的原料还包括:微纳米水溶性粉末:1~10份;所述微纳米水溶性粉末为微纳米纤维素粉粉末和/或微纳米淀粉粉末;
制备抗菌消炎剂的方法包括:
混合所述澳洲茶树精油和乳化剂,并搅拌乳化,得到精油初乳;
对所述精油初乳进行高压均质,以实现精油初乳的均质化,得到澳洲茶树精油脂质体;
向所述澳洲茶树精油脂质体中加入水凝胶和水,并进行混合,后进行搅拌,得到抗菌消炎剂;
其中,所述澳洲茶树精油脂质体的平均粒径为1nm~100nm。
2.根据权利要求1所述的抗菌消炎敷料,其特征在于,所述微纳米淀粉粉末为纳米级谷类淀粉粉末和/或纳米级薯类淀粉粉末;和/或,
所述微纳米水溶性粉末的粒径为10nm~100nm。
3.根据权利要求1所述的抗菌消炎敷料,其特征在于,所述澳洲茶树精油的活性成分包括4-松油醇和1,8-桉叶素;所述4-松油醇占所述澳洲茶树精油的质量之比≥35%;
所述1,8-桉叶素占所述澳洲茶树精油的质量之比≤5%。
4.根据权利要求1所述的抗菌消炎敷料,其特征在于,所述搅拌乳化的时间为2min~8min,所述搅拌乳化的转速为600r/min~1000r/min;和/或,
所述高压均质包括在15000psi~20000psi的条件下均质3次。
5.一种制备权利要求1-4任一项所述的抗菌消炎敷料的方法,其特征在于,所述方法包括:
筛分所述微纳米水溶性粉末,后向筛分料中加入冷水,并进行加热和搅拌至所述筛分料完全溶解,得到微纳米水溶性粉末溶液;
向所述敷料本体上涂布所述抗菌消炎剂,得到抗菌消炎层;
向所述抗菌消炎层涂覆所述微纳米水溶性粉末溶液,并进行压实成型,得到抗菌消炎敷料;
其中,所述筛分料和所述冷水的质量之比为1:6~8,所述加热的终点温度为40℃~50℃。
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