CN116640710A - 生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株、制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本公开提供了一种生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株、制备方法和应用，该菌株共同表达了鲎凝血因子FGβ＇和分子伴侣素CpkA；所述鲎凝血因子FGβ＇是对获取到的鲎凝血因子FGβ删除如SEQ ID NO:1所示的前导肽，并添加如SEQ ID NO:2所示带净正电荷的锚定肽获取到的。在本公开提供的技术方案中CpkA的羧基端带负电，而FGβ＇相应地带有一段带正电的锚定肽。通过静电相互作用，CpkA和FGβ＇结合力增强，因此CpkA可以更有效地帮助FGβ＇折叠成正确的构象，从而提高其可溶性表达。

Description

生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株、制备方法和应用
技术领域
本公开涉及生物技术领域，且更具体地，涉及一种生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株、制备方法和应用。
背景技术
FG是一种具有独特结构的异源二聚体丝氨酸蛋白酶酶原，FG是由两个非共价结合的亚基α和β组成，当(1,3)-β-D-葡聚糖存在的情况下，两个亚基被激活成为活性因子，FG被激活，启动鲎血细胞裂解物的凝血机制，因此鲎凝血因子FGβ在(1,3)-β-D-葡聚糖的检测中具有重要意义，然而，目前鲎凝血因子FGβ在原核表达时，可溶性较差。
发明内容
本公开提供了一种生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株、制备方法和应用，以解决现有技术中FGβ在原核表达时，可溶性较差的技术问题。
根据本公开的第一方面，提供了一种生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株，所述菌株共同表达了鲎凝血因子FGβ＇和分子伴侣素CpkA；
所述鲎凝血因子FGβ＇是对获取到的鲎凝血因子FGβ删除如SEQ ID NO:1所示的前导肽，并添加如SEQ ID NO:2所示带净正电荷的锚定肽获取到的。
可选地，所述菌株包含第一重组表达载体和第二重组表达载体；
所述第一重组表达载体包含所述鲎凝血因子FGβ＇；
所述第二重组表达载体包含所述分子伴侣素CpkA。
可选地，所述菌株为大肠杆菌工程菌。
可选地，所述第一重组表达载体为第一大肠杆菌表达质粒。
可选地，所述第二重组表达载体为第二大肠杆菌表达质粒。
可选地，所述菌株为Escherichia Coli BL21。
可选地，所述第一重组表达载体为pET17b。
可选地，所述第二重组表达载体为pACYC。
根据本公开的第二方面，提供了一种如上述的生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株的制备方法，包括以下步骤：
将所述鲎凝血因子FGβ＇连接到第一表达载体中，得到第一重组表达载体；其中所述鲎凝血因子FGβ＇是对获取到的鲎凝血因子FGβ删除如SEQ ID NO:1所示的前导肽，并添加如SEQ ID NO:2所示带净正电荷的锚定肽获取到的；
将分子伴侣素CpkA连接到第二表达载体中，得到第二重组表达载体；
将所述第一重组表达载体和所述第二重组表达载体共转化到工程菌中，得到生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株。
根据本公开的第三方面，提供了一种鲎凝血因子FGβ＇的制备方法，对上述的菌株加入IPTG同时诱导表达FGβ＇和CpkA两种蛋白，然后进行蛋白纯化，得到目的蛋白FGβ＇。
根据本公开的第四方面，提供了一种鲎凝血因子FGβ＇，所述鲎凝血因子FGβ＇是对获取到的鲎凝血因子FGβ删除如SEQ ID NO:1所示的前导肽，并添加如SEQ ID NO:2所示带净正电荷的锚定肽获取到的。
根据本公开的第五方面，提供了一种如上述的鲎凝血因子FGβ＇在制备(1,3)-β-D-葡聚糖含量检测试剂或真菌感染检测试剂中的应用。
根据本公开的第六方面，提供了一种重组表达载体，所述重组表达载体包含如上所述的鲎凝血因子FGβ＇。
可选地，所述重组表达载体为pET17b-FGβ＇，所述pET17b-FGβ＇的基因序列如SEQID NO:3所示。
与现有技术相比，本公开提供的生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株、制备方法和应用，至少包括以下有益效果：
本公开的菌株中共同表达了鲎凝血因子FGβ＇和分子伴侣素CpkA；鲎凝血因子FGβ＇是对获取到的鲎凝血因子FGβ删除如SEQ ID NO:1所示的前导肽，并添加如SEQ ID NO:2所示带净正电荷的锚定肽获取到的。其中，CpkA的羧基端带负电，而FGβ＇相应地带有一段带正电的锚定肽，通过静电相互作用，CpkA和FGβ＇结合力增强，因此CpkA可以更有效地帮助FGβ＇折叠成正确的构象，从而提高其可溶性表达，降低鲎凝血因子FGβ的获取难度，有利于在(1,3)-β-D-葡聚糖检测中的应用。
附图说明
为了更清楚地说明本的技术方案，下面将对本公开的描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本公开的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本公开一示例性实施例提供的生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株的制备方法的流程示意图；
图2是本公开一示例性实施例提供的生产鲎凝血因子FGβ＇的过程中SDS-PAGE蛋白质电泳图。
具体实施方式
下面将结合本中的附图，对本公开中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本公开一部分实施例，而不是全部实施例。基于本公开中的实施例，本领域普通技术人员在没有创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本实施例保护的范围。
在本公开一示例性实施例中提供了一种生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株，所述菌株共同表达了鲎凝血因子FGβ＇和分子伴侣素CpkA；
所述鲎凝血因子FGβ＇是对获取到的鲎凝血因子FGβ删除如SEQ ID NO:1所示的前导肽，并添加如SEQ ID NO:2所示带净正电荷的锚定肽获取到的。
具体地，鲎凝血因子FGβ的前导肽如SEQ ID NO:1所示，SEQ ID NO:1：ATGGATATCAGTTTCCTGGTTTTTATCACACTGTCTATGGCTCTCTTCTCGAGCAACGTGACAGGAACGTCAGTAACATCAAGGGTACGACGT。
带净正电荷的锚定肽如SEQ ID NO:2所示，SEQ ID NO:2：CGTGGTCGTCGTGGTGGT。锚定肽的氨基酸序列为RGRRGG。
CpkA是由548个氨基酸组成的分子伴侣素，适应低温，分子伴侣素是一大类能够识别并结合到不完整折叠或装配的多肽或蛋白质，并帮助其折叠成正确的空间结构的蛋白。分子伴侣素CpkA是从嗜热菌Thermococcus kodakarensis中提取发现的冷诱导型CpkA。
在本实施例提供的菌株中，CpkA的羧基端带负电，而鲎凝血因子FGβ＇相应地带有一段带正电的锚定肽，通过静电相互作用，CpkA和鲎凝血因子FGβ＇结合力增强，因此CpkA可以更有效地帮助鲎凝血因子FGβ＇折叠成正确的构象，从而提高其可溶性表达，鲎凝血因子FGβ＇是对鲎凝血因子FGβ改造获取的，在(1,3)-β-D-葡聚糖存在的情况下，FGβ＇可以被激活成为活性因子，启动鲎血细胞裂解物的凝血机制，从而通过对FGβ进行改造，并与分子伴侣共表达，解决了目前FGβ在原核表达时，可溶性较差的技术问题。
在一实施例中，菌株包含第一重组表达载体和第二重组表达载体，第一重组表达载体包含所述鲎凝血因子FGβ＇，第二重组表达载体包含所述分子伴侣素CpkA。具体地，菌株为大肠杆菌工程菌，所述第一重组表达载体为第一大肠杆菌表达质粒，所述第二重组表达载体为第二大肠杆菌表达质粒。
进一步地，所述菌株为Escherichia Coli BL21，所述第一重组表达载体为pET17b，所述第二重组表达载体为pACYC。
在本公开一示例性实施例中，提供了一种生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株在制备(1,3)-β-D-葡聚糖含量检测试剂或真菌感染检测试剂中的应用。
本公开一示例性实施例中，提供了一种生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株的制备方法，包括以下步骤：
将所述鲎凝血因子FGβ＇连接到第一表达载体中，得到第一重组表达载体；其中所述鲎凝血因子FGβ＇是对获取到的鲎凝血因子FGβ删除如SEQ ID NO:1所示的前导肽，并添加如SEQ ID NO:2所示带净正电荷的锚定肽获取到的；
将分子伴侣素CpkA连接到第二表达载体中，得到第二重组表达载体；
将所述第一重组表达载体和所述第二重组表达载体共转化到工程菌中，得到生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株。
在本实施例中，对获取到的鲎凝血因子FGβ进行改造，得到鲎凝血因子FGβ＇，具体地通过分子生物学技术将编码天然鲎凝血因子FGβ的基因中负责编码前导肽(Leadsequence)的基因部分删除，并用一段锚定肽(Anchor-tag)取代，改造好的FGβ被命名为FGβ＇。
在一种可能的实现方式中，查询FGβ基因序列，将编码天然鲎凝血因子FGβ基因中负责编码前导肽(Lead sequence)的基因部分删除，并根据大肠杆菌密码子偏好性对FGβ基因序列进行优化后合成重组质粒，利用质粒提取方法提取出重组质粒。以重组质粒为模板，进行PCR反应，将编码带净正电荷的锚定肽添加在FGβ基因序列的5＇端，得到FGβ＇的重组质粒即第一重组表达载体。
具体地，根据大肠杆菌密码子偏好性对FGβ基因序列进行优化后合成重组质粒pET17b-FGβ，利用质粒提取方法提取出pET 17b-FGβ质粒。以pET17b-FGβ质粒为模板，进行PCR反应，将编码带净正电荷的锚定肽添加在FGβ基因序列的5＇端，得到pET 17b-FGβ＇质粒。
进一步地，将分子伴侣素CpkA连接到第二表达载体中，得到第二重组表达载体。具体地，以pACYC为例，得到的第二重组表达载体为pACYC-CpkA。将第一重组表达载体和第二重组表达载体共转化至工程菌中，得到生产鲎凝血因子的菌株。
具体地，如图1所示，将编码天然鲎凝血因子FGβ的基因中负责编码前导肽(Leadsequence)的基因部分删除，并用一段锚定肽(Anchor-tag)取代，改造好的鲎凝血因子FGβ被命名为鲎凝血因子FGβ＇，得到pET17b-FGβ＇。将pET17b-FGβ＇和pACYC-CpkA共转化至大肠杆菌工程菌中，以Escherichia Coli BL21(DE3)为例，鲎凝血因子FGβ＇与CpkA在大肠杆菌中共表达后，CpkA的羧基端带负电，而鲎凝血因子FGβ＇相应地带有一段带正电的锚定肽。通过静电相互作用，CpkA和鲎凝血因子FGβ＇结合力增强，因此CpkA可以更有效地帮助鲎凝血因子FGβ＇折叠成正确的构象，从而提高其可溶性表达，即在大肠杆菌破碎液上清中大量存在。
在本公开一示例性实施例中，提供了生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株的制备方法在制备(1,3)-β-D-葡聚糖含量检测试剂或真菌感染检测试剂中的应用。
在本公开一示例性实施例中，提供了一种鲎凝血因子FGβ＇的制备方法，在获取到生产鲎凝血因子的菌株后，加入IPTG同时诱导表达FGβ＇和CpkA两种蛋白，然后进行蛋白纯化，得到目的蛋白FGβ＇。
在本公开一示例性实施例中，提供了鲎凝血因子FGβ＇的制备方法及制备出的目的蛋白在制备(1,3)-β-D-葡聚糖含量检测试剂或真菌感染检测试剂中的应用。
在本公开一示例性实施例中，提供了一种鲎凝血因子FGβ＇，鲎凝血因子FGβ＇是对获取到的鲎凝血因子FGβ删除如SEQ ID NO:1所示的前导肽，并添加如SEQ ID NO:2所示带净正电荷的锚定肽获取到的。
在本公开一示例性实施例中，提供了鲎凝血因子FGβ＇在制备(1,3)-β-D-葡聚糖含量检测试剂或真菌感染检测试剂中的应用。
在本公开一示例性实施例中，提供了一种重组表达载体，所述重组表达载体包含如上所述的鲎凝血因子FGβ＇。
在本公开一示例性实施例中，所述重组表达载体为pET17b-FGβ＇，所述pET17b-FGβ＇的基因序列如SEQ ID NO:3所示，SEQ ID NO:3：
其中，带框的基因序列为添加的锚定肽；斜体加粗/>为核糖体结合位点(ribosomebindingsite,RBS)；斜体加双下滑线的为限制性内切酶HindIII酶切位点；加粗加框的/>为限制性内切酶BamHI酶切位点；带单下划线的基因序列：GGCATCAATGAAAAACATTGTGGTTTTCGTCCGGTGATTAC CCGTATTATTGGTGGTGGTATTGCAACACCGCATAGCTGGCCGTGGATGGTTGGTATCTTTAAAGTTAATCCGCAT CGTTTTCTGTGCGGTGGTAGCATTATTAACAAAGTTAGCGTTGTTACCGCAGCGCATTGTCTGGTTACCCAGTTTG GTAATCGTCAGAACTATAGCATTTTTGTTCGTGTTGGTGCCCACGATATTGATAATAGCGGCACCAATTATCAGGT GGATAAAGTTATTGTGCACCAGGGCTATAAACATCACAGCCACTATTATGATATTGGCCTGATTCTGCTGAGCAAA CCGGTTGAATATAACGATAAAATTCAGCCGGTGTGTATCCCGGAATTTAACAAACCGCATGTGAACCTGAACAACA TCAAAGTTGTTATTACCGGTTGGGGTGTGACCGGTAAAGCAACCGAAAAACGTAATGTTCTGCGTGAACTGGAACT GCCGGTTGTTACCAATGAACAGTGTAATAAAAGCTATCAGACCCTGCCGTTTAGCAAACTGAATCGTGGTATTACC AACGATATGATTTGTGCAGGTTTTCCGGAAGGTGGTAAAGATGCATGTCAGGGTGATAGCGGTGGTCCGCTGATGT ATCAGAATCCGACCACCGGTCGTGTTAAAATTGTTGGTGTTGTTAGCTTTGGCTTTGAATGTGCACGTCCGAATTT TCCGGGTGTTTATACCCGTCTGAGCAGCTATGTTAATTGGCTGCAAGAAATTACCTTTGGTCAGAGCCTGGCAAGC CTGTTTGAAGTTGTTCCGATCTTTATACCGGAATAA为删除信号肽后的鲎凝血因子FGβ编码基因序列。需要说明的是，锚定肽与鲎凝血因子FGβ之间的基因序列为大肠杆菌表达质粒的基因片段。
在本公开一示例性实施例中，提供了上述重组表达载体在制备(1,3)-β-D-葡聚糖含量检测试剂或真菌感染检测试剂中的应用。
具体实施例
步骤10，获取pET 17b-FGβ＇。
步骤101，pET 17b-FGβ＇的构建。
在NCBI网站中的Gene Bank数据库中查询鲎凝血因子FGβ基因序列，将鲎凝血因子FGβ基因中负责编码前导肽的基因部分删除，并根据大肠杆菌密码子偏好性对FGβ基因序列进行优化后合成重组质粒pET 17b-FGβ。
利用软件Oligo7.0对鲎凝血因子FGβ的基因序列进行分析并设计引物，将一段带净正电荷的锚定肽(RGRRGG)添加到鲎凝血因子FGβ的N端，改造好的鲎凝血因子FGβ被命名为鲎凝血因子FGβ＇。所设计的引物由库美公司合成，引物序列如表1所示：
表1FGβ＇的全质粒PCR引物序列
pET 17b-FGβ质粒提取：使用接菌环挑取少量含有pET 17b-FGβ质粒的E.coli Top10菌液，在含有Amp抗性的LB液体培养基中过夜培养，采用生工公司的SanPrep柱式质粒DNA小量抽提，参照说明书上的具体操作步骤来提取pET 17b-FGβ质粒。
全质粒PCR反应体系和反应条件：以pET 17b-FGβ质粒为模板，根据表2中的全质粒PCR反应体系和反应条件进行PCR，将编码带净正电荷的锚定肽(RGRRGG)的基因序列CGTGGTCGTCGTGGTGGT添加到FGβ基因序列的5＇端，得到pET 17b-FGβ＇质粒。将得到的PCR产物通过1％琼脂糖凝胶电泳验证。
表2全质粒PCR反应体系
PCR反应条件如下：
步骤102，DpnI酶去除模板DNA
按照表3中的DpnI酶反应体系，将各组分加入EP管中混合均匀，在37℃恒温金属浴上反应15min后，在80℃恒温金属浴中加热5min使酶失活，最后使用12000rpm的高速冷冻离心机离心1min收集上清，并在-20℃条件下保存。
表3DpnI酶反应体系
步骤103，感受态的制备和转化
将PCR产物经DpnI酶处理后转化到E.coli DH5α感受态细胞中，通过含有Amp抗性的LB固体培养基筛选出转化成功的菌株。其中E.coli DH5α感受态制备方法如下：
(1)取10μL在-80℃冻存的E.coli DH5α菌液于含有5ml LB液体培养基的试管中，在37℃、180rpm恒温培养箱中培养过夜。
(2)取培养好的菌液250μL于含有5ml LB液体培养基的试管中，在37℃、180rpm恒温培养箱中培养至OD600为0.35-0.4时停止培养。
(3)菌液每1ml分装到1.5ml EP管中并冰浴15min，用高速冷冻离心机4000rpm、4℃、10min离心收集菌体。
(4)菌体中加入200μL 0.1M CaCl2溶液吹打混匀并冰浴30min后使用高速冷冻离心机4000rpm、4℃、10min离心收集菌体。
(5)菌体中加入100μL 0.1M CaCl2溶液混匀后即为E.coli DH5α感受态细胞。
转化步骤如下：
(1)将2μLpET 17b-FGβ＇质粒与新制备的E.coli DH5α感受态混匀，冰浴30min后金属浴42℃热处理90s，迅速转移到冰上3min，加入600μL预热的含有Amp抗性的LB液体培养基，在37℃、110rpm恒温培养箱中培养1h。
(2)培养好的菌液在4000rpm、4℃高速冷冻离心机中离心10min，弃上清500μL，余下菌体与培养基吹打混匀。
(3)分别取10μL和90μL菌液在含有Amp抗性的平板上均匀涂板，在37℃恒温培养箱过夜培养至有单菌落长出。
步骤104，鲎凝血因子FGβ＇的PCR验证和测序验证
(1)将步骤103中筛选出的菌株在含有Amp抗性的LB液体培养基中培养过夜，过夜培养的菌液按照步骤101的pET 17b-FGβ质粒提取方法，提取pET 17b-FGβ＇质粒。
(2)利用软件Oligo7.0设计鲎凝血因子FGβ＇的PCR验证引物，由库美公司合成，引物序列如表4所示：
表4鲎凝血因子FGβ＇的PCR验证引物序列
(3)按照表5中的PCR反应体系和反应条件进行鲎凝血因子FGβ＇的PCR验证，将得到的PCR产物通过1％琼脂糖凝胶电泳检测。
表5鲎凝血因子FGβ＇的PCR验证反应体系
PCR反应条件如下：
(4)测序验证
将经过PCR验证后的pET 17b-FGβ＇质粒送去库美公司测序，利用NCBI网站中的BLAST功能比较pET 17b-FGβ＇质粒测序结果与目的基因序列，确定pET 17b-FGβ＇质粒构建成功。
步骤20，获取pACYC-CpkA。
以pACYCDuet-1作为分子伴侣素CpkA的载体，利用NEBcutter V2.0对CpkA碱基序列进行分析，与pACYCDuet-1质粒图谱进行比对确定酶切位点，利用Oligo 7设计引物分别在5’和3’端分别加上酶切位点Nde I(CATATG)和EcoR V(GATATC)，送由库美公司进行合成，CpkA的PCR引物如表6所示：
表6 CpkA的PCR引物序列
CpkA的PCR体系如表7所示：
表7 CpkA的PCR反应体系
PCR反应条件如下：
质粒pACYCDuet-1和CpkA的PCR产物双酶切，将双酶切电泳胶通过胶回收的方式获得所需的基因片段，具体步骤依照天根柱式胶回收试剂盒提供的说明书进行胶回收操作。为了防止载体发生自身连接和环化的情况，需要将双酶切过的载体经去磷酸化酶(rSAP)处理，去除其5’末端的磷酸基团。
去磷酸化反应体系
将各组分混匀后，在37℃下温浴60min使其反应完全，然后将体系在65℃温浴5min，以失活去磷酸化酶rSAP。将EP管12000rpm离心2min，取上清利用乙醇沉淀法进一步纯化载体。向上一步得到的载体中加入1/10体积的3M醋酸钠(pH5.2)混匀，再加入1mL 95％乙醇(冰)，混匀各组分，将EP管置于-20℃静置1h。12000rpm下离心10min，弃上清，加入500μL70％乙醇清洗两次，离心弃上清，将EP管开口置于通风处至乙醇完全挥发，加入20μL无菌水溶解核酸。把经过乙醇沉淀获得的载体和经过胶回收得到的目的片段进行电泳，利用ImageJ比较两者浓度，调节浓度比载体:目的基因≥1:10，利用T4连接酶进行连接操作。将产物转化入DH5α中，将含有Cm抗性的固体培养基在37℃下过夜培养至有单菌落长出，将提取的质粒进行双酶切验证和测序验证，获取pACYC-CpkA。
步骤30，鲎凝血因子FGβ＇与分子伴侣素CpkA共表达
将测序验证正确的重组质粒pET 17b-FGβ＇与质粒pACYC-CpkA共转化到E.coliBL21(DE3)中，利用含有Amp和Cm的双抗性LB固体培养基筛选出转化成功的菌株。
加入IPTG进行诱导表达。即将筛选出的菌株在含有Amp和Cm的双抗性2YT液体培养基中培养至OD600为0.60左右时加入终浓度为1.2mM的IPTG，在16℃、110rpm、12h的条件下诱导鲎凝血因子FGβ＇表达。
使用高速冷冻离心机在4℃、9000rpm、10min条件下收集诱导后菌体，并用超声波细胞粉碎机破碎菌体后分离上清和沉淀。
通过12％的SDS-PAGE检测诱导前、诱导后、总破碎液、上清和沉淀中的鲎凝血因子FGβ＇，并用Image J分析电泳蛋白条带灰度。
PD-10脱盐柱纯化
使用PD-10脱盐柱处理上清中的鲎凝血因子FGβ＇蛋白，将经过PD-10脱盐柱处理后的FGβ＇蛋白于冰盒中保存，便于后续实验。通过12％的SDS-PAGE检测脱盐前和脱盐后的FGβ＇蛋白，并用Image J分析电泳蛋白条带灰度。
图2示出了SDS-PAGE蛋白质电泳图，其中图2中1是蛋白质分子量标记；2是破碎液上清；3是总破碎液；4是破碎液沉淀；5是用PD-10脱盐柱处理后的破碎液上清；6是PD-10脱盐柱流出液；7-9分别是将破碎液上清稀释1/2、1/5、1/10。
结果表明：pET 17b-FGβ＇成功转化至大肠杆菌中，并在上清中有大量FGβ＇表达，约占整个上清蛋白的15％以上，具有较高的可溶性。
提供所发明的方面的以上描述以使本领域的任何技术人员能够做出或者使用本公开。对这些方面的各种修改对于本领域技术人员而言是非常显而易见的，并且在此定义的一般原理可以应用于其他方面而不脱离本公开的范围。因此，本公开不意图被限制到在此示出的方面，而是按照与在此发明的原理和新颖的特征一致的最宽范围。
为了例示和描述的目的已经给出了以上描述。此外，此描述不意图将本公开的实施例限制到在此发明的形式。尽管以上已经讨论了多个示例方面和实施例，但是本领域技术人员将认识到其某些变型、修改、改变、添加和子组合。

Claims (10)

1.一种生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株，其特征在于：所述菌株共同表达了鲎凝血因子FGβ＇和分子伴侣素CpkA；
所述鲎凝血因子FGβ＇是对获取到的鲎凝血因子FGβ删除如SEQ ID NO:1所示的前导肽，并添加如SEQ ID NO:2所示带净正电荷的锚定肽获取到的。
2.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于，所述菌株包含第一重组表达载体和第二重组表达载体；
所述第一重组表达载体包含所述鲎凝血因子FGβ＇；
所述第二重组表达载体包含所述分子伴侣素CpkA。
3.根据权利要求2所述的菌株，其特征在于，所述菌株为大肠杆菌工程菌；
和/或，所述第一重组表达载体为第一大肠杆菌表达质粒；
和/或，所述第二重组表达载体为第二大肠杆菌表达质粒。
4.根据权利要求2所述的菌株，其特征在于，所述菌株为Escherichia Coli BL21；
和/或，所述第一重组表达载体为pET17b；
和/或，所述第二重组表达载体为pACYC。
5.一种如权利要求1至4中任一项所述的生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将所述鲎凝血因子FGβ＇连接到第一表达载体中，得到第一重组表达载体；其中所述鲎凝血因子FGβ＇是对获取到的鲎凝血因子FGβ删除如SEQ ID NO:1所示的前导肽，并添加如SEQ ID NO:2所示带净正电荷的锚定肽获取到的；
将分子伴侣素CpkA连接到第二表达载体中，得到第二重组表达载体；
将所述第一重组表达载体和所述第二重组表达载体共转化到工程菌中，得到生产鲎凝血因子FGβ＇的菌株。
6.一种鲎凝血因子FGβ＇的制备方法，其特征在于，对权利要求1至4任一项所述的菌株加入IPTG同时诱导表达FGβ＇和CpkA两种蛋白，然后进行蛋白纯化，得到目的蛋白FGβ＇。
7.一种鲎凝血因子FGβ＇，其特征在于，所述鲎凝血因子FGβ＇是对获取到的鲎凝血因子FGβ删除如SEQ ID NO:1所示的前导肽，并添加如SEQ ID NO:2所示带净正电荷的锚定肽获取到的。
8.一种如权利要求7所述的鲎凝血因子FGβ＇在制备(1,3)-β-D-葡聚糖含量检测试剂或真菌感染检测试剂中的应用。
9.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包含如权利要求7所述的鲎凝血因子FGβ＇。
10.根据权利要求9所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体为pET17b-FGβ＇，所述pET17b-FGβ＇的基因序列如SEQ ID NO:3所示。
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