CN116640315A - 一种硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物及其衍生物和应用 - Google Patents
一种硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物及其衍生物和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种硫酸化透明质酸‑支链聚乙烯亚胺接枝聚合物及其衍生物和应用，属于生物医药技术领域。本发明通过对HA进行硫酸化修饰，制备S‑HA，再将PEI修饰在S‑HA的侧链上，形成S‑HA‑PEI缀合物，并进一步将RUTIN与PEI交联，制备S‑HA‑PEI‑RUTIN衍生物。通过MTT方法验证S‑HA‑PEI缀合物及其衍生物具有良好的生物相容性。经验证，这些化合物能够将M1型巨噬细胞向M2型逆转，显著降低促炎因子的表达水平，并从体质量比、结肠长度、结肠H&E染色及血常规等多尺度活性分析表明，S‑HA‑PEI缀合物及S‑HA‑PEI‑RUTIN衍生物具有较好的抗炎效果。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及一种硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物及其衍生物和应用。
背景技术
炎症性肠病(Inflammatory Bowel Disease，IBD)是一组发病非常广泛、无法治愈的慢性炎性病症，包括溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis，UC)和克罗恩病(Crohn'sdisease，CD)。预计在未来十年内很多国家的患病率增长幅度将超过40％。IBD相关药物需求将有大幅度增长。目前IBD的病因和发病机制尚不明确且无法治愈。
IBD的治疗药物已经研究了40多年时间。IBD患者的传统治疗，一般采用巯基嘌呤类免疫抑制剂，皮质类固醇消炎药等。但是由于药物特异性较差，副作用较强，临床治疗仍然无法得到令人满意的效果。在药物治疗无效，或炎症进一步发展的情况下，一般只有采用手术治疗对病变部位进行切除。
肠道主要由上皮细胞层形成的机械屏障与黏膜层的化学屏障(统称物理屏障)、周围的免疫细胞形成的免疫屏障，以及多种微生物屏障发挥维持稳态的作用。免疫屏障在肠道稳态中起着至关重要的作用。巨噬细胞作为肠道固有层中含量最丰富的天然免疫细胞群体，在IBD发生发展中发挥重要作用。M1/M2巨噬细胞极化的不平衡促进IBD的发生和发展。人类巨噬细胞
(CD45+、HLA-DR+和CD64+)在进入肠道之前分化为CD11c+、CCR2+和CX3CR1+等亚群。通过进一步分化，形成具有多种抗原耐受的，高表达IL-10的CD11c-CCR2-CX3CR1+巨噬细胞。这些细胞对共生细菌具有免疫耐受，一般不会产生促炎细胞因子。然而，这一过程在IBD患者中是失调的。与健康对照个体相比，IBD患者的CD14hi单核细胞迁移增加，导致M1型促炎巨噬细胞(CD11chi促炎单核细胞样细胞)在IBD患者发炎的结肠中积聚，表达CD64、HLA-DR、CD206、CD205、CX3CR1和CD209，但不表达CD1a、CD1c或树突细胞溶酶体相关膜蛋白(DC-LAMP)。除了细胞数量增加，IBD患者循环巨噬细胞细胞的过度分泌促炎细胞因子，如IL-23和TNF-α，它们与对侵袭性细菌的早期反应紊乱有关。因此，如何调控促炎型巨噬细胞向抑炎型巨噬细胞，是当前的重要药物开发思路。
透明质酸(Hyaluronic acid,HA)是胃肠道肠壁粘膜、上皮层、ECM的丰富成分之一。在肠道，该化合物网络位于肠壁的上皮屏障ECM下方。有报道表明，HA在肠道炎症疾病中的抗炎、调控微生物的组成，在降低肠道通透性方面起着关键作用。HA可以通过与CD44结合，靶向炎症位置的巨噬细胞表面。因此，本发明旨在基于HA开发一种新的抗炎药物。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物及其衍生物，具有良好的生物相容性和安全性，在抑制炎症及炎症相关疾病中发挥重要作用。
本发明的第一个目的是提供一种硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物衍生物(S-HA-PEI-RUTIN)，由硫酸化透明质酸与支状聚乙烯亚胺通过交联反应形成的硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物(S-HA-PEI)与琥珀酰化的芦丁再交联得到。
进一步地，所述硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物的结构如下所示：
其中，R、R′独立地选自SO3 -或H，m为10-10000之间的整数，n为1-100000之间的整数。
进一步地，所述硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物衍生物的结构如下所示：
其中，R、R′独立地选自SO3 -或H，R3选自琥珀酰化的芦丁或H，m为10-10000之间的整数，n为1-100000之间的整数。
进一步地，琥珀酰化的芦丁结构如下：
进一步地，所述硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物中，接枝率为0.1-100％
进一步地，所述硫酸化透明质酸的分子量为1000-1000000。
进一步地，所述支状聚乙烯亚胺的分子量为50-1000000。
本发明的第二个目的是提供一种上述硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物衍生物的制备方法，包括以下步骤：将活化后的硫酸化透明质酸、支链聚乙烯亚胺和琥珀酰化的芦丁混合进行交联反应。
进一步地，所述硫酸化透明质酸、支链聚乙烯亚胺和芦丁的摩尔比为1～100：1～100：1～100。
本发明的第三个目的是提供一种硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物或其衍生物在制备抗炎药物中的应用，其中，
硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物(S-HA-PEI)由硫酸化透明质酸与支状聚乙烯亚胺交联得到；
硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物衍生物(S-HA-PEI-RUTIN)由硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物(S-HA-PEI)与琥珀酰化的芦丁交联得到。
进一步地，所述抗炎药物为治疗炎症性肠病的药物。
本发明的第四个目的是提供一种用于巨噬细胞表型极化的调节剂，所述调节剂至少包括以下的一种：
(1)由硫酸化透明质酸与支状聚乙烯亚胺交联得到的硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物(S-HA-PEI)；
(2)由硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物(S-HA-PEI)与琥珀酰化的芦丁交联得到硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物衍生物(S-HA-PEI-RUTIN)。
进一步地，所述调节剂用于促进巨噬细胞向M2型极化。
本发明的第五个目的是提供一种体外调节巨噬细胞表型的方法，采用以下至少一种化合物处理细胞：
(1)由硫酸化透明质酸与支状聚乙烯亚胺交联得到的硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物(S-HA-PEI)；
(2)由硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物(S-HA-PEI)与芦丁交联得到硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物衍生物(S-HA-PEI-RUTIN)。
本发明的有益效果：
本发明对透明质酸进行硫酸化修饰，制备得到硫酸化透明质酸，将分支型聚乙烯亚胺修饰在S-HA的侧链上，制备S-HA-PEI缀合物，并进一步将RUTIN与S-HA-PEI缀合物交联，制备得到S-HA-PEI-RUTIN衍生物。通过实验验证，S-HA-PEI缀合物及S-HA-PEI-RUTIN衍生物均消除了PEI本身的毒性，呈现出较高的安全性和生物相容性。活性测试发现，两种产物能够将激活的M1型巨噬细胞RAW264.7向M2型逆转，显著降低IL-6、IL-1β等细胞因子mRNA转录水平。体内活性测试实验显示，其能够缓解小鼠溃疡性结肠炎的症状，降低UC小鼠疾病活动指数评分，改善UC小鼠的局部结肠损伤，降低UC小鼠结肠组织中的IL-6、IL-1β、TNF-α的表达水平。通过H&E染色发现，小鼠损伤的结肠损伤结构基本恢复正常，同时血常规结果也表明上述产物的抗炎活性。因此，上述化合物可以通过促进巨噬细胞由M1型向M2型转变，降低炎症的浸润程度，改善结肠组织损伤，达到缓解并治疗UC的目的。
附图说明
图1为各化合物的红外光谱图；
图2各化合物对细胞增殖情况的影响；(a)NIH-3T3细胞；(b)RAW264.7细胞；
图3为在激光扫描共聚焦显微镜下用FITC标记的样品(绿色)和细胞核(蓝色)共同孵育的细胞图像；
图4为样品对巨噬细胞的表型及功能影响；(a)巨噬细胞表型的影响；
(1)NC；(2)LPS；(3)S-HA；(4)S-HA-PEI；(5)S-HA-PEI-RUTIN；
(6)PEI；(b)巨噬细胞表型变化率；(c)IL-6的相对表达量；(d)IL-1β的相对表达量；
图5为产物在体内治疗IBD小鼠的药效学评价；(a)不同组结肠长度比较；(b)不同组结肠长度图；(c)结肠组织H&E染色图；
其中，###表示与空白对照组相比P＜0.001，*表示与模型组相比P＜0.05，**表示与模型组相比P＜0.01，***表示与模型组相比P＜0.001。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
实施例1硫酸化透明质酸的制备
(1)树脂预处理
将树脂置于50-60℃热水中浸泡，每15分钟左右换1次水，直到浸洗液无棕色、泡沫极少情况下，再加入5％盐酸溶液继续浸泡，4小时后湿法装柱，先将柱层容积为2倍的去离子水透过树脂层，再将3倍柱层容积为5％盐酸溶液按相同速度通过树脂层，用去离子水冲洗至pH 7.0左右，待用。
(2)四丁基氢氧化铵盐(HA-TBA)的合成
取1g透明质酸溶解在100mL的去离子水中，将HA水溶液转移至树脂柱中，将流速调小(液体的速度成线不成股)，滴加到TBA水溶液中，最终溶液pH不低于9。将HA-TBA转移至8KDa的透析袋中透析、冻干。待样品完全冻干成絮状后得到样品，将得到的絮状样品放置在干燥器中保存待用。
(3)硫酸化透明质酸(S-HA)的合成
精密称取1g HA-TBA样品,加入200mL无水DMF充分溶解2-3h，冰浴，且在N2条件下加入三氧化硫吡啶的DMF溶液(7.6g,40mL)，反应1h后，加入10mL去离子水淬灭反应。将溶液用1M NaOH调至pH为8.5-9，放入分子量为8KDa的透析袋,透析3天。冷冻干燥后得到样品并命名为S-HA。
(4)琥珀酰化的芦丁(RUTIN)的合成
精确称取2g芦丁和3g琥珀酸酐，溶于80mL的无水吡啶，在70℃下回流。反应完毕后，在60℃条件下旋蒸，除去无水吡啶。向产物中加入少量的无水乙醇，使其充分溶解，在冰浴条件下，向溶解液中加入无水乙醚(1：20)，使其沉淀。然后8000rpm，4℃下离心10min，除去上清液，再加无水乙醚洗涤2-3次，将沉淀在真空干燥中抽干，备用。
(5)硫酸化透明质酸与PEI(S-HA-PEI)的反应
取80mg PEI溶液溶解于Hepes缓冲液中，使其浓度为1mg/mL。精确称取160mg S-HA样品，向其中加入适量EDC和NHS，于Hepes缓冲液中反应0.5h。将2mg/mL的S-HA反应液加入1mg/mL的PEI体系，透析、冻干，得到样品备用并命名为S-HA-PEI。
(6)硫酸化透明质酸的衍生物(S-HA-PEI-RUTIN)合成
取160mg RUTIN溶液，EDC、NHS于Hepes缓冲溶液中，使其浓度为1mg/mL，反应2h，待到反应体系变成透明的绿色溶液。取160mg S-HA-PEI溶解于Hepes缓冲溶液中，使终浓度为2mg/mL，将1mg/mL的琥珀酰化芦丁溶液滴加在其中，隔夜反应后，装入3.5KDa透析袋透析3天。冻干备用并命名为S-HA-PEI-RUTIN。
，R3＝RUTIN或H。
(7)负载FITC的硫酸化透明质的合成
将5mg FITC与PEI(1mg/mL)在避光条件下混合搅拌2h,再将其加入S-HA溶液(2mg/mL)，EDC、NHS与之过夜搅拌混合反应，装在3.5KDa的透析袋内透析3天，冻干备用。
实施例2S-HA-PEI、S-HA-PEI-RUTIN的合成基本表征
S-HA的合成涉及两个反应步骤，第一步透明质酸钠溶液通过DOWEX 50WX 8-400离子交换树脂使得树脂中的阳离子与TBA交换，第二步是交换后HA与三氧化硫吡啶配合物的反应，使得6位上的羟基被硫酸根取代，其2、3、4位的羟基均有部分被硫酸根取代。如图1所示，FT-IR对得到的产物结构进行表征。与HA相比，S-HA出现了两个新的吸收峰。S＝O伸缩振动峰为1202cm-1，C-O-S伸缩振动峰为808cm-1，这表明经过上述的硫酸化处理方式使得透明质酸确实发生了硫酸化。此外在S-HA-PEI与S-HA-PEI-RUTIN出现了一个新的峰。C＝N的伸缩振动峰位1600cm-1。进而显示，该经过上述的实验方法成功的将PEI修饰在S-HA链上。通过对比S-HA-PEI与S-HA-PEI-RUTIN的图谱发现，S-HA-PEI-RUTIN在3000～3100cm-1出现苯环氢的伸缩振动，2800～2900cm-1出现了烷氢的伸缩振动，1400-1600cm-1出现了苯环骨架振动峰，在1000～1100cm-1出现苯环氢面内弯曲振动峰，证明RUTIN连接到S-HA-PEI表面。
实施例3细胞毒性实验
(1)实验细胞分组：空白组，仅加入PBS；对照组，培养基培养细胞；给药组，含有样品的培养基培养细胞，根据样品浓度(0、125、250、500、1000、2000μg/mL)分组。
(2)细胞毒性实验：将NIH-3T3细胞以8×103个/mL的密度接种于96孔板中(100μL/孔)，加入DMEM培养基，培养24h后，吸出上清。加入含有样品的培养基，每组设置5个复孔。37℃培养24h后，吸出上清，加入MTT(100μL)，37℃避光孵育3-4h，吸出上清，每孔加入100μLDMSO，用酶标仪在波长570nm处测量吸光度。根据公式计算细胞存活率(Cell viability)：
其中，C570、Csample、Ccontrol分别是空白组、给药组、以及对照组在570nm处的吸光值。RAW264.7细胞步骤同上。
采用MTT法对样品的体外细胞毒性进行测试。如图2所示，分别用含有0、125、250、500、1000、2000μg/mL药品与NIH-3T3和RAW264.7细胞共同孵育。24h后，与对照组相比，两种细胞的存活率均在100％左右，浓度的不同仅仅只会造成轻微的吸收波动，但是没有显著影响。表明所制备的样品与来源不同的细胞具有良好的生物相容性。
实施例4细胞摄取实验
将RAW264.7细胞以8×104个/mL的密度接种于共聚焦皿中，过夜培养后用FITC标记的S-HA-PEI、S-HA-PEI-RUTIN药物的培养基代替原来的培养基，药物终浓度为500μg/mL。培养8h后，将PBS溶液贴壁缓慢加入，并且轻轻洗涤3次，洗涤完毕后用4％多聚甲醛溶液(1mL)将细胞固定于共聚焦皿中。15min后，加入PBS溶液，并轻轻洗涤3次。洗完后加入600μLDAPI，在避光条件下，进行细胞核染色，15min后染色完成并且吸去DAPI，再将PBS贴壁缓慢加入并轻轻洗涤3次，洗完后加入200μL左右的PBS，用CLSM拍摄，观察细胞摄取药物情况。
如图3所示，使用CLSM观察RAW264.7细胞对S-HA-PEI及S-HA-PEI-RUTIN的摄取效果。用FITC标记S-HA-PEI和S-HA-PEI-RUTIN(500μg/mL)，用DAPI荧光染料标记RAW264.7细胞核。经过8h孵育，在CLSM图片中，RAW264.7细胞中能看到明显的绿色荧光分布，并且绿色荧光围绕在蓝色荧光外层，RAW264.7细胞成功将药物摄取并递送至细胞内。
实施例5巨噬细胞表型及功能影响
1、巨噬细胞表型的影响
RAW264.7细胞以4×104个/mL的密度接种于24孔板中(1mL/孔),加入DMEM培养基，培养24h。向其中加入溶解好的药物。每一组设三个复孔培养24h并拍照。
表1加药及组别
2、巨噬细胞功能的影响
(1)细胞铺板及加药
将RAW264.7细胞以2.5×105个/mL的密度接种于6孔板中(2mL/孔)，加DMEM培养基，培养24h。向其中加入溶解好的药物。每组设三个复孔培养24h后收细胞。
表2加药及组别
(2)RNA提取
①吸出6孔板中的培养基，用预冷PBS洗涤细胞，移液枪将剩余PBS吸干。向6孔板中每孔加入1mL Trizol试剂，室温静置5min使其裂解充分裂解，用移液枪反复吹打后转移至RNase-free的离心管中。
②向上述裂解液中加入200μL体积的氯仿，剧烈震荡使其成为乳浊液，4℃下静置5min，离心机预冷至4℃，12000×g离心15min；离心后混合液发生分层：即无色水相，白色中间层，红色有机层，小心吸取上层无色水相至新的ep管中。
③向其中加入等体积的异丙醇，上下颠倒混匀，4℃静置10min，于4℃条件下12000×g离心10min即可在ep管底部看见白色沉淀。
④小心弃去上清，向其中加入75％乙醇(注：75％乙醇用RNase-free dd H2O配置)。轻弹ep管，使沉淀悬浮，上下颠倒数次，室温静置5min；4℃用12000×g离心5min弃去上清。
⑤每孔中加入20μL RNase-free dd H2O溶解沉淀，轻弹ep管，待沉淀完全溶解，瞬时离心，取少量液体检测其浓度与纯度，其余冻存于-80℃。
(3)逆转录
根据诺唯赞HiScript III qRT Super Mix for qPCR(+gDNA wiper)逆转录试剂盒说明书先去除基因组DNA，再进行逆转录反应：
①基因组DNA去除，反应体系如表3所示：
表3基因组去除反应体系
用移液器轻轻吹打混匀，42℃下反应2min。
②配置逆转录反应体系，反应体系如表4所示：
表4逆转录反应体系
用移液器轻轻吹打混匀，37℃下反应15min，85℃下反应5s，所得cDNA保存于-20℃。
(4)实时荧光定量PCR(qRT-PCR)
相关基因引物序列如表5所示：
表5引物序列
按照诺唯赞Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix试剂盒说明书配置荧光定量PCR反应体系，如表6所示：
表6荧光定量PCR反应体系
按下表7条件进行qRT-PCR反应
表7qRT-PCR反应条件
(5)结果
巨噬细胞RAW264.7培养24h后，按照表1设置组别，加入相应药物进行孵育。0.5h后加入LPS(8μL,10μg/mL)诱导RAW264.7细胞极化。24h后采用光学显微镜拍照并计算RAW264.7细胞的极化率。如图4(a、b)所示，NC组巨噬细胞的表型基本上没有发生变化，极化比例仅为8.4％；经LPS处理后的巨噬细胞的表型基本全部发生转变，极化比例高达86.3％。经过不同的样品处理后的RAW264.7细胞，则呈现出不同的极化程度及比例。其中S-HA-PEI处理后的RAW264.7细胞极化比仅为25.7％，S-HA-PEI-RUTIN处理后的RAW264.7细胞极化比为42.5％。该结果表明，S-HA-PEI与S-HA-PEI-RUTIN可以降低RAW264.7细胞极化比例。因此，我们猜测，这些样品有可能将激活的M1型巨噬细胞RAW264.7向M2表型逆转。
如图4(c、d)所示，与NC组相比，经LPS处理后，M1型巨噬细胞中促炎因子IL-6、IL-1β的mRNA转录水平都显著上调：其中IL-6的表达是NC组的14.6倍，IL-1β的表达是NC组的2.4倍，表明细胞极化模型构建成功；与LPS组相比，S-HA-PEI、S-HA-PEI-RUTIN和PEI对RAW264.7细胞内IL-6、IL-1β的mRNA的表达都有不同程度的抑制作用，说明S-HA-PEI和S-HA-PEI-RUTIN均能在一定程度上抑制LPS诱导的炎症因子的表达。与此同时，S-HA不能降低这些前炎症因子的转录水平；而PEI能够显著降低炎症因子的转录水平上述数据说明，S-HA的促进巨噬细胞M2样极化作用与PEI结构相关。
实施例6小鼠UC模型构建及药效学分析
所有动物实验方案均通过江南大学实验动物管理与动物福利伦理委员会的批准，编号为JN.NO20221030c0841230。首先，将60只雄性C57BL/6小鼠适应性饲养7天后，按小鼠质量随机分成5组，分别为正常、3.5％DSS模型组、5-ASA组(美沙啦嗪)、S-HA-PEI组、S-HA-PEI-RUTIN组。在接下来的实验期间，除N组小鼠自由饮用无菌蒸馏水作为正常组外，其余4组均给予含3.5％DSS的无菌蒸馏水9天，建立小鼠UC模型；造模的同时，其余3组按照30mg/kg(6mg/mL)浓度给予药物，N组和M组给予等量生理盐水，每天灌胃1次，连续给药9天。给药期间，每天记录所有小鼠的体质量变化、饮食情况、精神与活动状况、皮毛光泽度、粪便性状及是否有脓血便。
(1)小鼠结肠长度测定
进行体内模型实验时，每天记录所有小鼠的重量变化、精神与活动状况、皮毛光泽度、粪便性状及脓血便情况，进行疾病活动指数(DAI)评分，评分标准如表8所示。小鼠给药结束后，先用Avertin麻醉后进行摘眼球取血，然后颈椎脱臼法处死小鼠，再进行解剖，摘取小鼠结肠组织样本，测定结肠长度；取部分用于苏木精-伊红(HE)染色，用4％多聚甲醛溶液固定；其余部分液氮速冻后置于-80℃保存。
(2)小鼠结肠组织苏木素-伊红(HE)染色
取小鼠结肠，剪取两段0.5cm的远端结肠放置于4％多聚甲醛溶液中进行固定，对结肠组织进行石蜡包埋、切片。
(3)血常规分析
收集小鼠全血，放置于抗凝的离心管中，在全自动血液细胞分析仪进行血常规分析。
(4)结果
采用3.5％DSS诱导C57BL/6J雄性小鼠，建立体内UC模型，考察S-HA-PEI及S-HA-PEI-RUTIN对UC的治疗效果。在实验过程中发现，正常组小鼠无异常情况；造模后第4天，模型组小鼠开始出现粪便变稀的情况，第5天开始出现轻微的血便情况，直到第6天血便情况日渐严重，肛门有出血现象；而5-ASA可以明显的改善上述症状；给药组的小鼠到第6天渐渐出现轻微的血便情况，其中S-HA-PEI，S-HA-PEI-RUTIN组的症状明显改善。对UC小鼠便稀、血便等症状有明显的改善。
在模型构建第14天，猝死小鼠，取出结肠段，测定结肠的长度。如图5(a)所示，与健康组相比，DSS模型组的结肠长度明显缩短。如图5(b)所示，健康组的结肠长度为7.5cm，而DSS模型组的结肠长度只有4.9cm，5-ASA组的结肠长度与DSS组相比有所改善。S-HA-PEI与S-HA-PEI-RUTIN给药组小鼠结肠长度与模型组相比较也有较为明显的改善，S-HA-PEI-RUTIN的长度略优于S-HA-PEI。
各组小鼠结肠组织病理学变化如图5(c)所示：健康组小鼠结肠结构完整，其中黏膜层结构无损且清晰可见，未见任何病变。DSS模型组结肠结构遭到严重破坏，黏膜上皮层完全损坏，上皮绒毛全部消失，大量炎症细胞浸润，粘膜下层明显变厚。在造模的同时灌胃给予药物治疗的小鼠，其结肠组织损伤表现不同程度的恢复。在给予S-HA-PEI-RUTIN的小鼠结肠中，小鼠结肠结构基本恢复正常，其粘膜上皮层结构完整，上皮细胞绒毛相对完整，粘膜下层没有出现变厚情况。在给予S-HA-PEI小鼠结肠中，结肠结构趋向正常，粘膜上皮层结构出现山峰状的绒毛，但是其粘膜下层有轻微变厚。给予阳性药5-ASA的小鼠结肠四层结构基本恢复正常。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (10)
1.一种硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物衍生物，其特征在于：由硫酸化透明质酸与支状聚乙烯亚胺通过交联反应形成的硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物与琥珀酰化的芦丁再交联得到。
2.根据权利要求1所述的硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物衍生物，其特征在于，所述硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物的结构如下所示：
其中，R、R′独立地选自SO3 -或H，m为10-10000之间的整数，n为1-100000之间的整数。
3.根据权利要求1所述的硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物衍生物，其特征在于，所述硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物衍生物的结构如下所示：
其中，R、R′独立地选自SO3 -或H，R3选自琥珀酰化的芦丁或H，m为10-10000之间的整数，n为1-100000之间的整数。
4.根据权利要求1所述的硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物衍生物，其特征在于，所述琥珀酰化的芦丁结构如下所示：
5.权利要求1-4任一项所述的硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物衍生物的制备方法，其特征在于：将活化后的硫酸化透明质酸、支链聚乙烯亚胺和琥珀酰化的芦丁混合进行交联反应。
6.一种硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物或其衍生物在制备抗炎药物中的应用，其特征在于：
硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物由硫酸化透明质酸与支状聚乙烯亚胺交联得到；
硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物衍生物由硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物与琥珀酰化的芦丁交联得到。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述抗炎药物为治疗炎症性肠病的药物。
8.一种用于巨噬细胞表型极化的调节剂，其特征在于：所述调节剂至少包括以下的一种：
(1)由硫酸化透明质酸与支状聚乙烯亚胺交联得到的硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物；
(2)由硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物与琥珀酰化的芦丁交联得到硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物衍生物。
9.根据权利要求8所述的调节剂，其特征在于：所述调节剂用于促进巨噬细胞向M2型极化。
10.一种体外调节巨噬细胞表型的方法，其特征在于，采用以下至少一种化合物处理细胞：
(1)由硫酸化透明质酸与支状聚乙烯亚胺交联得到的硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物；
(2)由硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物与琥珀酰化的芦丁交联得到硫酸化透明质酸-支链聚乙烯亚胺接枝聚合物衍生物。
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