CN1166284C - 大豆转基因植株培养方法 - Google Patents

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Abstract

一种大豆转基因植株培养方法，将不定芽放入含有50mg/L硫酸卡那霉素的固体MSB芽伸长培养基，同时加入液体芽伸长培养基，将转化芽放入含有30mg/L硫酸卡那霉素的固体MSB生根培养基中，同时加入液体生根培养基，用液体转化苗培养液培养得到转基因大豆种系。本发明采用固体培养基和液体培养基相互结合培养的方式，在不同的生长期分别采用芽伸长培养基和生根培养基，并在培养基中加入一定量的硫酸卡那霉素，促使大豆植株生根、发芽，更能抑制嵌合体的生长，使植株生长快速、结荚较多。

Description

大豆转基因植株培养方法
技术领域：
本发明涉及一种大豆转基因植株培养方法，是一种生物培养的工艺，属于生物技术和现代农业技术领域。
背景技术：
通过转基因技术把外源目的基因导入到受体大豆外植体中，经过转化细胞的组织培养和植株再生，培育出具有外源基因特性的新品种，其间大豆不定芽的培养、转化芽的生根和转化苗的生长是培养工艺中的关键环节。现有技术在培养中均是采用MSB(MS(Murashige and Skoog)无机成分+B5(Gamborg)有机成分)固体培养基(《现代植物生理学实验指南》汤章成主编、科学出版社，1999年)，由于固体培养基与植物组织接触面积少、气体交换不畅，营养物质浓度有差异而容易造成生长的不平衡。
发明内容：
本发明的目的在于克服现有固体培养基的不足，提供一种大豆转基因植株培养方法，解决转化苗的筛选准确率低和组培苗生长缓慢的难点，达到嵌合体少、生根快，生长健壮提高幼苗结荚率的效果。
为实现这样的目的，本发明的技术方案中，采用固体培养基和液体培养基相互结合培养的方式，在不同的生长期分别采用芽伸长培养基和生根培养基，并在培养基中加入一定量的硫酸卡那霉素，使大豆植株生根、发芽，生长迅速。
本发明的具体方法包括如下步骤：
1、切取源于坏死组织上的新芽，把形成的大豆丛生不定芽放入到固体MSB芽伸长培养基上，并同时加入0.1～0.3cm高的液体MSB芽伸长培养基，固体和液体芽伸长培养基均含有50mg/L硫酸卡那霉素，具体成分为：MSB+BA 0.2mg/L+IBA 0.2mg/L+GA3 0.3mg/L+Km50mg/L，每天16小时光照，于26℃培养15～20天，至转化芽3～4cm。
2、把高约3～4cm的转化芽切下，放入到固体MSB生根培养基上，并同时加0.5～0.7cm高的液体MSB生根培养基，固体和液体生根培养基均含有30mg/L硫酸卡那霉素，具体成分为1/2MSB+IBA 1.5mg/L+Km30mg/L，培养2～3周，诱导生根，得到转化小苗。
3、将长5cm左右的转化小苗加入0.9cm液体MSB培养基，液体MSB培养基的成分为MSB+IBA 1.5mg/L+Km25mg/L，液体MSB培养基的大量元素：NH4NO3、KNO3、KH2PO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O均减量70％～80％，转化小苗开花结荚后，可得到转基因大豆种系。
本发明具有实质性特点和显著进步，与普通固体培养基相比，固体和液体培养相互结合更能抑制嵌合体的生长，有利于生根，形成较多根毛；转基因植株固体和液体培养结合能使植株生长快速、结荚较多。
具体实施方式：
以下结合具体的实施例对本发明的技术方案作进一步描述。
实施例1
试验品种为合丰35
转化芽伸长培养基成分为：
MSB+BA 0.2mg/L+IBA 0.2mg/L+GA3 0.3mg/L+Km50mg/L，
采用固体+0.3cm高液体培养基，培养15天，转化芽伸长至3～4cm；
转化芽诱导生根培养基成分为：
1/2MSB+IBA 1.5mg/L+Km25mg/L，
采用固体+0.5cm高液体培养基，培养14天，得到大豆转基因抗性植株；
转基因植株培养基成分为：
MSB+IBA 1.5mg/L+Km25mg/L，
采用固体+0.8cm高液体培养基，NH4NO3、KNO3、KH2PO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O均减量80％，开花结荚，得到转基因大豆种系。
实施例2
试验品种为合丰35
转化芽伸长培养基成分为：
MSB+BA 0.2mg/L+IBA 0.2mg/L+GA3 0.3mg/L +Km50mg/L，
采用固体+0.2cm高液体培养基，培养18天，转化芽伸长至3～4cm；
转化芽诱导生根培养基成分为：
1/2MSB+IBA 1.5mg/L +Km25mg/L，
采用固体+0.6cm高液体培养基，培养18天，得到大豆转基因抗性植株；
转基因植株培养基成分为：
MSB+IBA 1.5mg/L +Km25mg/L，
采用固体+0.9cm高液体培养基，NH4NO3、KNO3、KH2PO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O均减量70％，开花结荚，得到转基因大豆种系。
实施例3
试验品种为合丰35
转化芽伸长培养基成分为：
MSB+BA 0.2mg/L+IBA 0.2mg/L+GA3 0.3mg/L+Km50mg/L，
采用固体+1.0cm高液体培养基，培养20天，转化芽伸长至3～4cm；
转化芽诱导生根培养基成分为：
1/2MSB+IBA 1.5mg/L +Km25mg/L，
采用固体+0.7cm高液体培养基，培养21天，得到大豆转基因抗性植株；
转基因植株培养基：
MSB+IBA 1.5mg/L+Km25mg/L，
采用固体+0.1cm高液体培养基，NH4NO3、KNO3、KH2PO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O均减量75％，开花结荚，得到转基因大豆种系。
用此方法能使植株生长速度加快，更加健壮，生物产量增加。

Claims (1)

1、一种大豆转基因植株培养方法，其特征在于具体包括如下步骤：
①把形成的不定芽放入到固体MSB芽伸长培养基上，同时加入0.1～0.3cm高的液体MSB芽伸长培养基，MSB芽伸长培养基成分为MSB+BA 0.2mg/L+IBA0.2mg/L+GA30.3mg/L+Km50mg/L，每天16小时光照，于26℃培养15～20天，至转化芽3～4cm；
②把转化芽切下，播入到固体MSB生根培养基上，同时加0.5～0.7cm高的液体MSB生根培养基，生根培养基的成分为1/2MSB+IBA 1.5mg/L+Km25mg/L，培养2～3周，诱导生根，得转化小苗；
③将转化小苗加入0.9cm液体MSB培养基，液体MSB培养基的成分为MSB+IBA1.5mg/L+Km25mg/L，其中大量元素：NH4NO3、KNO3、KH2PO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O均减量70％～80％，得到转基因大豆种系。
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