CN116615219A - 包括利用混合溶剂的冷冻干燥工序的药品的制造方法 - Google Patents

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榎本太郎
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Abstract

本发明的课题在于提供包括能够在低浓度到高浓度的广泛的基质浓度下降低残留溶剂浓度的冷冻干燥法的药品的制造方法。本发明的药品的制造方法包括以下工序：(1)准备包含水、有机溶剂和冷冻干燥对象物质的混合液的工序；以及(2)将上述混合液供于冷冻干燥的工序，在此，相对于工序(1)中的水和有机溶剂的合计质量，上述有机溶剂的质量比率为68质量％以上且99质量％以下。

Description

包括利用混合溶剂的冷冻干燥工序的药品的制造方法
技术领域
本发明涉及包括利用混合溶剂的冷冻干燥工序的药品的制造方法。
背景技术
冷冻干燥法不仅对于非结晶性化合物的取出有效、而且对于不稳定的化合物的处理、注射制剂设计也是有效的手段(非专利文献1、2)。其中，水溶液的冷冻干燥是广为人知的方法。但是，水溶液的冷冻干燥由于冰的升华速度低、花费时间，因而花费大量的制造成本(非专利文献2)。另外，使用了有机溶剂与水的混合溶剂系的冷冻干燥也受到关注，由于一部分有机溶剂的升华压力高于水，且升华潜热低于水，因而随着升华速度的提高而干燥时间缩短，此外，当对水不稳定的化合物成为对象时，期待本体溶液、干燥物的稳定性的提高等(非专利文献3)。例如，报告了使用叔丁醇、二甲基亚砜、1,4-二噁烷、乙腈这样的溶剂作为有机溶剂的事例(非专利文献3、4、5、6)。其中，评价最广泛的有机溶剂/水混合溶剂系为叔丁醇/水混合体系(非专利文献3)。叔丁醇/水混合体系能够用商用冷冻干燥机完全冷冻，并且由于叔丁醇比水具有更高的蒸气压和更低的升华潜热，因而在一次干燥时易于升华，能够提高升华速度。另外，与其他有机溶剂相比，毒性较低。
另一方面，对于使用了有机溶剂与水的混合溶剂的冷冻干燥而言，控制具有毒性的残留溶剂浓度是重要的课题。作为用于冷冻干燥的溶剂之一的叔丁醇(TBA)是ICH Q3C指南中被归类为第2类溶剂并且成为作为药品中的残留溶剂浓度而言应被限制的溶剂(非专利文献7)。
在此，在冷冻干燥中，已知成为冷冻干燥对象的基质的浓度越高，残留溶剂浓度的控制就越难(非专利文献4)。例如，在非专利文献8中，报告了若需要冷冻干燥的化合物没有均匀地溶解于溶剂，则TBA的去除变得困难。即，若使用TBA-水进行冷冻干燥，则混合液会分离成富有基质的层和富有TBA的层，溶液发生层分离，这被认为是引起TBA的高残留值的原因。另外，图中显示，基质浓度越高，越容易层分离。此外，在非专利文献8中，公开了若使用6～9％的TBA对妥布霉素(tobramycin)进行冷冻干燥，则具有TBA浓度越高而残留TBA浓度越大的倾向，关于残留TBA浓度提高的原因，溶液的层分离是原因所在。此外，在非专利文献9中，将由百时美施贵宝(BMS)公司合成的作为肽的PC-1溶解于20-70％tBuOH/H2O混合溶剂，以基质浓度5～10mg/mL进行冷冻干燥，但没有进行高基质浓度下的冷冻干燥。在非专利文献10中，记载了为了降低残留TBA浓度，制备单相溶液(monophase solution)，TBA浓度使用比形成结晶的浓度更高的浓度，选择适当的环糊精种类和冷冻干燥工艺，但既没有公开也没有暗示基质浓度。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献1：Biopolymers.2000；55(3):227-250.
非专利文献2：制剂机械技术学会志(日文：製剤機械技術学会誌)2015Vol.24No.2,第15、39页.
非专利文献3：European Journal of Pharmaceutical Sciences 15(2002)115-133.
非专利文献4：Journal of Pharmaceutical Sciences 107(2018)2005-2012.
非专利文献5：Journal of Pharmaceutical Sciences 107(2018)887-896.
非专利文献6：Journal of Pharmaceutical Sciences 108(2019)399-415.
非专利文献7：ICH Q3C指南；Q3C(R8)impurities：Guideline for ResidualSolvents,Endorsed on 25March 2020.
非专利文献8：Journal of Pharmaceutical Sciences,Vol.91,(2002)1147-1155.
非专利文献9：Pharmaceutical Research,Vol.25,No.12,December 2008,2799-2806.
非专利文献10：Acta Pharmaceutical Sinica 2007,42(3)314-317.
发明内容
发明要解决的课题
如上所述，在以往的冷冻干燥中，已知基质浓度越高，残留溶剂浓度的控制就越难(非专利文献4)。实际上，当发明人等将脂溶性肽应用于现有的TBA-水系冷冻干燥法时，发现在残留溶剂浓度方面存在应当改良的点。然而，在考虑大规模的原料药的冷冻干燥的情况下，若基质浓度低则冷冻干燥的效率降低，因此特别是在工业化的大规模中，期望能够在更高的基质浓度条件下实施冷冻干燥。在本发明中，目的在于提供包括能够在低浓度到高浓度的广泛的基质浓度下降低残留溶剂浓度的冷冻干燥法的药品的制造方法。
用于解决课题的手段
本发明人等为了降低残留溶剂浓度而进行了深入研究，出人意料地发现，通过使用有机溶剂与水以特定比率混合而成的混合溶剂进行冷冻干燥，即使冷冻干燥对象物质的浓度为低浓度到高浓度的广泛浓度范围，也能够显著降低残留溶剂浓度。
即，本发明涉及以下内容。
〔1〕
一种方法，其是包括以下工序的药品的制造方法：
(1)准备包含水、有机溶剂和冷冻干燥对象物质的混合液的工序；以及
(2)将上述混合液供于冷冻干燥的工序，
其中，相对于工序(1)中的水和有机溶剂的合计质量，上述有机溶剂的质量比率为68质量％以上且97质量％以下。
〔2〕
一种方法，其是包括以下工序的冷冻干燥对象物质的冷冻干燥方法：
(1)准备包含水、有机溶剂和冷冻干燥对象物质的混合液的工序；以及
(2)将上述混合液供于冷冻干燥的工序，
其中，相对于工序(1)中的水和有机溶剂的合计质量，上述有机溶剂的质量比率为68质量％以上且99质量％以下。
〔3〕
根据〔1〕或〔2〕所述的方法，其中，上述工序(1)包括：
准备包含水和上述有机溶剂的混合溶剂，并将上述混合溶剂与上述冷冻干燥对象物质混合。
〔4〕
根据〔1〕至〔3〕中任一项所述的方法，其中，上述冷冻干燥对象物质在包含水、有机溶剂和冷冻干燥对象物质的上述混合液的容量中所占的质量比率为2w/v％以上且20w/v％以下。
〔5〕
根据〔1〕至〔4〕中任一项所述的方法，其中，上述工序(2)包括预备冷冻工序。
〔6〕
根据〔1〕至〔5〕中任一项所述的方法，其中，上述工序(2)包括多阶段的干燥工序。
〔7〕
根据〔1〕至〔6〕中任一项所述的方法，其中，包含上述有机溶剂和水的混合溶剂的凝固点为-60℃以上。
〔8〕
根据〔1〕至〔7〕中任一项所述的方法，其中，上述有机溶剂为叔丁醇。
〔9〕
根据〔1〕至〔8〕中任一项所述的方法，其中，上述冷冻干燥对象物质为脂溶性肽。
〔10〕
根据〔9〕所述的方法，其中，上述脂溶性肽具有环状结构。
〔11〕
根据〔9〕或〔10〕所述的方法，其中，上述脂溶性肽的CLogP为25以下。
〔12〕
根据〔9〕至〔11〕中任一项所述的方法，其中，上述脂溶性肽的分子量为5000以下。
〔13〕
根据〔9〕至〔12〕中任一项所述的方法，其中，上述脂溶性肽的氨基酸残基数为5以上且30以下。
〔14〕
根据〔9〕至〔13〕中任一项所述的方法，其中，上述脂溶性肽含有非天然氨基酸残基。
〔15〕
根据〔14〕所述的方法，其中，上述非天然氨基酸残基为非天然N取代氨基酸残基。
〔16〕
根据〔1〕至〔15〕中任一项所述的方法，其中，通过冷冻干燥得到的冷冻干燥粉末中的残留溶剂浓度为1.2％以下。
发明效果
根据本发明的方法，通过使用有机溶剂与水以特定比率混合而成的混合溶剂进行冷冻干燥，能够在低浓度到高浓度的广泛的基质浓度下显著降低残留溶剂浓度。
具体实施方式
除了在本说明书中另有表示的情况以外，本说明书中所使用的缩写如下所记。
2-MeTHF：2-甲基四氢呋喃
BEP：2-溴-1-乙基吡啶四氟硼酸盐
CPME：环戊基甲醚
DIPEA：N,N-二异丙基乙胺
DMAP：4-二甲基氨基吡啶
DMC：碳酸二甲酯
HATU：O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐
HMDS：1,1,1,3,3,3-六甲基二硅氮烷
LiBH4：硼氢化锂
MeCN：乙腈
MeOH：甲醇
MTBE：甲基叔丁基醚
NMI：N-甲基咪唑
Pd/C：钯碳
PyBOP：1H-苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐
T3P：丙基膦酸酐
TBAF：四丁基氟化铵
TFA：三氟乙酸
THF：四氢呋喃
TMSOTf：三氟甲磺酸三甲基硅酯
关于本说明书中的用语
在本说明书中，“冷冻干燥对象物质”是成为冷冻干燥的对象的化合物。在本发明中，作为冷冻干燥对象的化合物，优选本说明书中的药品的有效成分，更优选地可举出低分子化合物或肽化合物。需要说明的是，在本说明书中，“基质”这样的用语以与“冷冻干燥对象物质”相同的意义而使用。另外，在本说明书中，有时将成为冷冻和/或干燥的对象的组合物称为“试样”。
本说明书中的“低分子化合物”是指除后述肽化合物以外的、优选分子量2000以下的化合物，例如包括天然化合物和在制造工序中包含化学合成的化合物。低分子化合物的分子量更优选为1000以下，进一步优选为800以下，特别优选为500以下。另外，低分子化合物的CLogP优选为16以下，更优选为10以下，进一步优选为7以下，更进一步优选为6以下，特别优选为5以下，最优选为4以下。ClogP是将化合物分成部分结构并用电脑计算而得的分配系数(计算软件是公知的。例如，可以使用Daylight Chemical Information Systems,Inc.公司等的软件进行计算。)。
本说明书中的“肽化合物”只要是天然氨基酸和/或非天然氨基酸通过酰胺键或酯键连结而成的肽化合物就没有特别限定，期望为优选5残基以上、更优选7残基以上、进一步优选8残基以上、特别优选9残基以上、另外优选30残基以下、更优选25残基以下、进一步优选15残基以下、特别优选13残基以下的肽化合物。此外，肽化合物可为优选5残基以上且30残基以下、更优选7残基以上且25残基以下、进一步优选8残基以上且15残基以下、特别优选9残基以上且13残基以下的肽化合物。
在本发明中可使用的肽化合物在1个肽中优选包含至少3个N取代氨基酸，更优选包含至少5个以上的N取代氨基酸。这些N取代氨基酸在肽化合物中可以连续地存在，也可以不连续地存在。本发明中的肽化合物可以是直链状也可以是环状，优选环状肽化合物。另外，也可以具有分支结构。在具有非天然型的氨基酸残基的肽化合物中，进一步优选上述非天然型的氨基酸残基为非天然型的N取代氨基酸残基(也称为“非天然N取代氨基酸残基”)。
本说明书中的“环状肽化合物”只要是具有由5个残基以上的氨基酸构成的环状部的肽化合物就没有特别限定，其环化方法也没有限定，它是可以通过将直链肽化合物的N末端侧的基团和C末端侧的基团进行环化而得到的环状的肽化合物。环化是基于酰胺键之类的碳-氮键的环化、基于酯键、醚键之类的碳-氧键的环化、基于硫醚键之类的碳-硫键的环化、基于碳-碳键的环化、或基于杂环结构的环化等，任何形式均可。在这些之中，优选经由酰胺键或碳-碳键等共价键的环化，更优选经由基于侧链的羧基与N末端的主链的氨基的酰胺键的环化。用于环化的羧基、氨基等的位置可以是主链上的位置，也可以是侧链上的位置，只要在能够环化的位置就没有特别限制。
本说明书中的“氨基酸”包括天然氨基酸、及非天然氨基酸(有时称为氨基酸衍生物)。本说明书中的“天然氨基酸”是指Gly、Ala、Ser、Thr、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、His、Glu、Asp、Gln、Asn、Cys、Met、Lys、Arg、Pro。非天然氨基酸(氨基酸衍生物)没有特别限定，例示有β-氨基酸、D型氨基酸、N取代氨基酸(Pro除外)、α,α-二取代氨基酸、侧链与天然氨基酸不同的氨基酸、羟基羧酸等。作为本说明书中的氨基酸，任何立体配置都是允许的。氨基酸侧链的选择没有特别地设置限制，除了氢原子以外，也例如自由地选自烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、环烷基、螺键合环烷基中。可以分别赋予取代基，这些取代基也没有限制，例如可以从包含卤素原子、O原子、S原子、N原子、B原子、Si原子或P原子的任意的取代基中独立地自由选择1个或2个以上。即，例示有任选被取代的烷基、烷氧基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基、环烷基等、或氧代、氨基羰基、卤素原子等。在非限定的一方式中，本说明书中的氨基酸可以是在同一分子内具有羧基和氨基的化合物(即使在该情况下，脯氨酸、羟基脯氨酸之类的亚氨基酸也包括在氨基酸中)。
作为卤素衍生的取代基，可举出氟(-F)、氯(-Cl)、溴(-Br)、碘(-I)等。
作为O原子衍生的取代基，可举出羟基(-OH)、氧基(-OR)、羰基(-C(＝O)-R)、羧基(-CO2H)、氧基羰基(-C(＝O)-OR)、羰基氧基(-O-C(＝O)-R)、硫羰基(-C(＝O)-SR)、羰基硫基(-S-C(＝O)-R)、氨基羰基(-C(＝O)-NHR)、羰基氨基(-NH-C(＝O)-R)、氧基羰基氨基(-NH-C(＝O)-OR)、磺酰氨基(-NH-SO2-R)、氨基磺酰基(-SO2-NHR)、氨磺酰基氨基(-NH-SO2-NHR)、硫代羧基(-C(＝O)-SH)、羧基羰基(-C(＝O)-CO2H)。
作为氧基(-OR)的例子，可举出烷氧基、环烷氧基、烯氧基、炔氧基、芳氧基、杂芳氧基、芳烷氧基等。
作为羰基(-C(＝O)-R)的例子，可举出甲酰基(-C(＝O)-H)、烷基羰基、环烷基羰基、烯基羰基、炔基羰基、芳基羰基、杂芳基羰基、芳烷基羰基等。
作为氧基羰基(-C(＝O)-OR)的例子，可举出烷氧基羰基、环烷氧基羰基、烯氧基羰基、炔氧基羰基、芳氧基羰基、杂芳氧基羰基、芳烷氧基羰基等。
作为羰基氧基(-O-C(＝O)-R)的例子，可举出烷基羰氧基、环烷基羰氧基、烯基羰氧基、炔基羰氧基、芳基羰氧基、杂芳基羰氧基、芳烷基羰氧基等。
作为硫代羰基(-C(＝O)-SR)的例子，可举出烷基硫代羰基、环烷基硫代羰基、烯基硫代羰基、炔基硫基羰基、芳基硫代羰基、杂芳基硫代羰基、芳烷基硫代羰基等。
作为羰基硫基(-S-C(＝O)-R)的例子，可举出烷基羰基硫基、环烷基羰基硫基、烯基羰基硫基、炔基羰基硫基、芳基羰基硫基、杂芳基羰基硫基、芳烷基羰基硫基等。
作为氨基羰基(-C(＝O)-NHR)的例子，可举出烷基氨基羰基、环烷基氨基羰基、烯基氨基羰基、炔基氨基羰基、芳基氨基羰基、杂芳基氨基羰基、芳烷基氨基羰基等。除了这些以外，还可举出与-C(＝O)-NHR中的N原子键合的H原子被烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基进一步取代而成的化合物。
作为羰基氨基(-NH-C(＝O)-R)的例子，可举出烷基羰基氨基、环烷基羰基氨基、烯基羰基氨基、炔基羰基氨基、芳基羰基氨基、杂芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基等。除了这些以外，还可举出与-NH-C(＝O)-R中的N原子键合的H原子被烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基进一步取代而成的化合物。
作为氧基羰基氨基(-NH-C(＝O)-OR)的例子，可举出烷氧基羰基氨基、环烷氧基羰基氨基、烯氧基羰基氨基、炔氧基羰基氨基、芳氧基羰基氨基、杂芳氧基羰基氨基、芳烷氧基羰基氨基等。除了这些以外，还可举出与-NH-C(＝O)-OR中的N原子键合的H原子被烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基进一步取代而成的化合物。
作为磺酰氨基(-NH-SO2-R)的例子，可举出烷基磺酰氨基、环烷基磺酰氨基、烯基磺酰氨基、炔基磺酰氨基、芳基磺酰氨基、杂芳基磺酰氨基、芳烷基磺酰氨基等。除了这些以外，还可举出与-NH-SO2-R中的N原子键合的H原子被烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基进一步取代而成的化合物。
作为氨基磺酰基(-SO2-NHR)的例子，可举出烷基氨基磺酰基、环烷基氨基磺酰基、烯基氨基磺酰基、炔基氨基磺酰基、芳基氨基磺酰基、杂芳基氨基磺酰基、芳烷基氨基磺酰基等。除了这些以外，还可举出与-SO2-NHR中的N原子键合的H原子被烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基进一步取代而成的化合物。
作为氨磺酰基氨基(-NH-SO2-NHR)的例子，可举出烷基氨磺酰基氨基、环烷基氨磺酰基氨基、烯基氨磺酰基氨基、炔基氨磺酰基氨基、芳基氨磺酰基氨基、杂芳基氨磺酰基氨基、芳烷基氨磺酰基氨基等。此外，与-NH-SO2-NHR中的N原子键合的2个H原子可以被独立地选自烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、及芳烷基中的取代基取代，另外，这些中的2个取代基可以形成环。
作为S原子衍生的取代基，可举出硫醇基(-SH)、硫基(-S-R)、亚磺酰基(-S(＝O)-R)、磺酰基(-S(O)2-R)、磺基(-SO3H)、五氟硫烷基(-SF5)。
作为硫基(-S-R)的例子，可选自烷硫基、环烷硫基、烯硫基、炔硫基、芳硫基、杂芳硫基、芳烷硫基等中。
作为亚磺酰基(-S(＝O)-R)的例子，可举出烷基亚磺酰基、环烷基亚磺酰基、烯基亚磺酰基、炔基亚磺酰基、芳基亚磺酰基、杂芳基亚磺酰基、芳烷基亚磺酰基等。
作为磺酰基(-S(O)2-R)的例子，可举出烷基磺酰基、环烷基磺酰基、烯基磺酰基、炔基磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基磺酰基、芳烷基磺酰基等。
作为N原子衍生的取代基，可举出叠氮化物(-N3，也称为“叠氮基”)、氰基(-CN)、伯氨基(-NH2)、仲氨基(-NH-R)、叔氨基(-NR(R’))、脒基(-C(＝NH)-NH2)、取代脒基(-C(＝NR)-NR’R”)、胍基(-NH-C(＝NH)-NH2)、取代胍基(-NR-C(＝NR”’)-NR’R”)、氨基羰基氨基(-NR-CO-NR’R”)。
作为仲氨基(-NH-R)的例子，可举出烷基氨基、环烷基氨基、烯基氨基、炔基氨基、芳基氨基、杂芳基氨基、芳烷基氨基等。
作为叔氨基(-NR(R’))的例子，例如可举出烷基(芳烷基)氨基等具有各自独立地选自烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基等中的任意两个取代基的氨基，这些任意两个取代基可以形成环。
作为取代脒基(-C(＝NR)-NR’R”)的例子，可举出N原子上的3个取代基R、R’和R”各自独立地选自烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基中的基团，例如烷基(芳烷基)(芳基)脒基等。
作为取代胍基(-NR-C(＝NR”’)-NR’R”)的例子，可举出R、R’、R”和R”’各自独立地选自烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基中的基团、或者它们形成环而成的基团等。
作为氨基羰基氨基(-NR-CO-NR’R”)的例子，可举出R、R’和R”各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基中的基团、或者它们形成环而成的基团等。
作为B原子衍生的取代基，可举出硼基(-BR(R’))、二氧硼基(-B(OR)(OR’))等。这2个取代基R和R’各自独立地选自烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基等中，或者这些也可以形成环。具体而言，可举出环状硼基，更具体而言，可举出频哪醇合硼基、新戊烷二醇合硼基、邻苯二酚硼基等。
作为本说明书中的N取代氨基酸的氮原子上的取代基，具体而言，例示有烷基、C1-C6烷基、C1-C4烷基、甲基、C7-C14芳烷基、苄基、苯乙基等。
氨基酸的主链氨基可以是非取代的(-NH2)，也可以是取代的(即-NHR。在此，R表示任选具有取代基的烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基、环烷基，另外也可以如脯氨酸那样地键合于N原子的碳链与α位的碳原子形成环。)。这样的主链氨基被取代的氨基酸在本说明书中有时称为“N取代氨基酸”。作为本说明书中的“N取代氨基酸”，优选例示有N-烷基氨基酸、N-C1-C6烷基氨基酸、N-C1-C4烷基氨基酸、N-甲基氨基酸、N-C7-C14芳烷基氨基酸、N-苄基氨基酸、N-苯乙基氨基酸，但不限定于这些。
本说明书中的“氨基酸”包括分别对应的全部同位素。“氨基酸”的同位素是至少1个原子被原子序数(质子数)相同、质量数(质子和中子的数之和)不同的原子取代而成的物质。作为本说明书的“氨基酸”中所含的同位素的例子，有氢原子、碳原子、氮原子、氧原子、磷原子、硫原子、氟原子、氯原子等，分别包括2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、32P、35S、18F、36Cl等。
在本说明书中，所谓“室温”，意指空调的温度设定被设定为22℃的环境，其以本技术领域中通常的意义使用，没有特别限定，只要没有特别记载，例如为优选1～30℃、更优选15～28℃左右。
药品的制造方法和冷冻干燥对象物质的冷冻干燥方法
本发明的药品的制造方法包括以下工序：
(1)准备包含水、有机溶剂和冷冻干燥对象物质的混合液的工序；以及
(2)将上述混合液供于冷冻干燥的工序，
在此，相对于工序(1)中的水和有机溶剂的合计质量，上述有机溶剂的质量比率为68质量％以上且99质量％以下。
本发明的冷冻干燥对象物质的冷冻干燥方法包括以下工序：
(1)准备包含水、有机溶剂和冷冻干燥对象物质的混合液的工序；以及
(2)将上述混合液供于冷冻干燥的工序，
在此，相对于工序(1)中的水和有机溶剂的合计质量，上述有机溶剂的质量比率为68质量％以上且99质量％以下。
在本发明的方法中，作为冷冻干燥对象物质，可以使用低分子化合物或肽化合物。其中，可以优选使用脂溶性肽化合物。此外，在脂溶性肽中，可以更优选使用具有环状结构的脂溶性肽。
脂溶性肽的CLogP为优选25以下、更优选22以下、进一步优选20以下、进一步优选18以下、进一步优选16以下、进一步优选15以下，并为优选5以上、更优选10以上、进一步优选12以上。脂溶性肽化合物的CLogP可为优选5以上且25以下、更优选10以上且20以下、进一步优选12以上且18以下。
脂溶性肽的分子量为优选5000以下、更优选3000以下、进一步优选2000以下，并且为优选500以上、更优选800以上、进一步优选1000以上。另外，脂溶性肽化合物的分子量可为优选500以上且5000以下、更优选800以上且3000以下、进一步优选1000以上且2000以下。
作为本发明中所用的“有机溶剂”，期望与水的蒸气压相比具有更高的蒸气压、且具有比水的升华潜热更低的升华潜热的有机溶剂。作为有机溶剂，可以优选使用选自叔丁醇、二甲基亚砜、1,4-二噁烷、乙腈、乙酸、环己烷和碳酸二甲酯中的至少1种溶剂，可以更优选使用选自叔丁醇、二甲基亚砜和乙腈中的至少1种溶剂，期望进一步优选使用叔丁醇。
有机溶剂在大气压下的凝固点为优选-50℃以上、更优选0℃以上、进一步优选10℃以上、特别优选20℃以上，并且为优选50℃以下、更优选40℃以下、进一步优选30℃以下。
包含有机溶剂和水的混合溶剂在大气压下的凝固点为优选-60℃以上、更优选-40℃以上、进一步优选-20℃以上、特别优选-10℃以上，并且为优选10℃以下、更优选0℃以下、进一步优选-5℃以下。另外，包含有机溶剂和水的混合溶剂在大气压下的凝固点可以为更优选-60℃以上且10℃以下、进一步优选-20℃以上且0℃以下、特别优选-10℃以上且-5℃以下。
需要说明的是，在混合溶剂具有多个凝固点的情况下，上述是对于最低凝固点的优选范围。另外，凝固点可以通过将按预先规定的比率制备的有机溶剂与水的混合溶剂供于利用DSC(差示扫描热量计)的测定来求得。具体而言，可以通过实施例中记载的方法来求得。
在上述工序(1)中，在制备包含水、有机溶剂和冷冻干燥对象物质的混合液时，水、有机溶剂、冷冻干燥对象物质的混合的顺序没有特别限定。优选地，可以准备包含水和有机溶剂的混合溶剂、并将该混合溶剂与冷冻干燥对象物质混合而制备混合液。或者，也可以在有机溶剂中添加冷冻干燥对象物质而准备有机溶剂-对象物质混合液、并在该有机溶剂-对象物质混合液中添加水而制备混合液。
冷冻干燥对象物质在包含水、有机溶剂和冷冻干燥对象物质的混合液的容量中所占的质量比率可以将下限值优选设为2.0w/v％以上、5.0w/v％以上、7.0w/v％以上、9.0w/v％以上、或10.0w/v％以上，可以将上限值优选设为20.0w/v％以下、15.0w/v％以下、或12.0w/v％以下。冷冻干燥对象物质的质量比率可以设为这些的任意组合的范围，例如可以设为优选2.0w/v％以上且20.0w/v％以下、更优选5.0w/v％以上且15.0w/v％以下、进一步优选9.0w/v％以上且12.0w/v％以下。
相对于工序(1)中的水和有机溶剂的合计质量，有机溶剂的质量比率可以将下限值优选设为68质量％以上、70质量％以上、75质量％以上、80质量％以上、85质量％以上、88质量％以上、或90质量％以上，可以将上限值优选设为99质量％以下、97质量％以下、95质量％以下、92质量％以下、或90质量％以下。相对于工序(1)中的水和有机溶剂的合计质量，有机溶剂的质量比率可以设为这些的任意组合的范围，例如，质量比率可以设为优选68质量％以上且99质量％以下、更优选68质量％以上且97质量％以下、进一步优选80质量％以上且95质量％以下、另外进一步优选88质量％以上且92质量％以下。通过以这样的质量比率使用水和有机溶剂实施冷冻干燥，由此不仅在冷冻干燥对象物质为低浓度的情况下，而且在冷冻干燥对象物质为高浓度的情况下，都可以得到残留溶剂浓度显著降低的冷冻干燥体。
工序(2)中所使用的“冷冻干燥”是使试样中的溶剂在冷冻状态下升华而去除的工艺。更具体而言，本发明中的冷冻干燥通过以下方式来实施：使混合液冷冻后，使周围压力降低以使试样中的冷冻水和冷冻有机溶剂从固相直接升华至气相。实施冷冻干燥的方法对于本领域技术人员而言是公知的，可以使用公知的冷冻干燥装置。例如，可以使用棚式冷冻干燥机、喷雾冷冻干燥机和多歧管冷冻干燥机等，可以优选使用棚式冷冻干燥机。
在本发明中，冷冻干燥可以包括预备冷冻工序。还可以包括一次干燥、二次干燥等多阶段的干燥工序。
在预备冷冻工序中，使混合液冷却而冷冻。预备冷冻工序可以优选在大气压下实施。
预备冷冻工序中的冷却温度不因所用的有机溶剂的种类和比例而特别限定，为优选-80℃以上、更优选-60℃以上，并且为优选-10℃以下、更优选-30℃以下。另外，冷却温度可以设为优选-80℃以上且-10℃以下、更优选-60℃以上且-30℃以下。
进行冷却时的冷却速度没有特别限定，可以以优选0.1℃/分钟以上且10℃/分钟以下、更优选1℃/分钟以上且5℃/分钟以下左右的冷却速度，冷却试样至规定的冷却温度。
达到规定的冷却温度后，可以在优选30分钟以上且10小时以下、更优选1小时以上且5小时以下的期间保持规定的温度，进行试样的冷冻。
在干燥工序中，于减压下，使冷冻的试样干燥。通过减压使溶剂的沸点低温度化，使试样中的溶剂升华而从试样中去除，使试样干燥。为了供给升华时所需的能量，可以在减压后对试样进行加热。
干燥工序中对冷冻干燥装置内的试样施加的压力为优选1Pa以上且100Pa以下、更优选10Pa以上且50Pa以下。
在减压后可实施的试样的干燥中的干燥温度不因所用的有机溶剂的种类和比例而特别限定，可以设为优选-60℃以上、更优选-50℃以上、优选60℃以下、更优选50℃以下的温度。例如，在减压后可实施的干燥时的温度可以设为优选-60℃以上且60℃以下、更优选-50℃以上且50℃以下的温度范围。
用于将试样设为上述规定的干燥温度的加热时的加热速度(升温速度)不因所用的有机溶剂的种类和比例而特别限定，可以设为优选0.1℃/分钟以上、更优选为1℃/分钟以上、优选10℃/分钟以下、更优选为5℃/分钟以下左右的加热速度。例如，可以以优选0.1℃/分钟以上且10℃/分钟以下、更优选1℃/分钟以上且5℃/分钟以下左右的加热速度，加热试样至规定的干燥温度。
干燥工序可以多阶段地实施。在将干燥工序分为2阶段的情况下，在第一阶段，可以在优选-60℃以上、更优选-30℃以上的温度、并且优选0℃以下的温度下进行干燥。例如，第一阶段的干燥温度可以设为优选-60℃以上且0℃以下、更优选-30℃以上且0℃以下的温度范围。
此外在第二阶段，可以在优选0℃以上、更优选20℃以上的温度、并且优选60℃以下、更优选50℃以下的温度下进行干燥。例如，第二阶段的干燥温度可以设为优选0℃以上且60℃以下、更优选20℃以上且50℃以下的范围。
在第一阶段和第二阶段的各个阶段中，用于试样干燥的加热时的加热速度没有特别限定，可以以优选0.1℃/分钟以上、更优选1℃/分钟以上、并且优选10℃/分钟以下、更优选5℃/分钟以下左右的加热速度，加热试样至规定的干燥温度。例如，可以以优选0.1℃/分钟以上且10℃/分钟以下、更优选1℃/分钟以上且5℃/分钟以下左右的加热速度，加热试样至规定的干燥温度。
达到规定的温度后，在第一阶段和第二阶段的各个阶段中，可以在优选12小时以上且72小时以下、更优选24小时以上且50小时以下的期间保持规定的干燥温度，进行试样的干燥。
通过冷冻干燥而得到的冷冻干燥粉末中的残留溶剂浓度可以设为优选1.2％以下、更优选1％以下、进一步优选0.8％以下、特别优选0.6％(w/w)以下。需要说明的是，冷冻干燥粉末中的残留溶剂浓度可以通过使作为样品的冷冻干燥粉末溶解于适当的溶剂而制成样品溶液、并将该样品溶液供于气相色谱来测定。具体而言，可以通过实施例中记载的方法来测定。
本说明书中引用的全部现有技术文献作为参照引入到本说明书中。
实施例
以下，将作为本发明的适宜的具体方式作为实施例进行说明，但本发明并不限定于此。
〔实施例1〕
[基质溶液的制备]
将环孢素A(“环孢素A”，ZHEJIANG RUIBANG LABORATORIES公司制；分子量1202.61，CLogP：14.36，氨基酸残基数11)1.0g、以及叔丁醇(TBA，“t-Butanol”，富士胶片和光纯药公司制，凝固点约25℃)与水的混合溶剂(TBA：水＝68：32质量比)8mL在室温下混合后，将该混合液使用振荡装置(“小型旋转振荡器”，日伸理化公司制)在室温下以100rpm振荡30分钟，使环孢素A溶解。将所得混合液用上述TBA-水混合溶剂稀释至10mL，制备10％(w/v)的混合液。
[预备冷冻]
将所制备的混合液的6.5mL注入至不锈钢托盘(W23mm、D32mm、H38mm)后，设置于大气压下的冷冻干燥机(“VirTis AdVantage Pro ADP-B2EL-EOG-X”、SP SCIENTIFIC公司制)的干燥库内棚。接下来，将冷冻干燥机内的温度以冷却速度1℃/分钟冷却至-45℃，并保持该温度2小时。
[一次干燥]
预备冷冻之后，将冷冻干燥机内的压力降至150mTorr(约20Pa)后，将温度以升温速度1℃/分钟从-45℃升至-25℃，并保持在此温度。将包括从升温开始到于-25℃的保持在内的时间设为48小时。
[二次干燥]
一次干燥之后，一边维持一次干燥的压力，一边将冷冻干燥机内的温度以升温速度1℃/分钟从-25℃升至40℃，并保持在此温度。将包括从升温开始到于40℃的保持在内的时间设为48小时。
[用于残留溶剂浓度测定的前处理]
向冷冻干燥机内导入氮气，恢复压力至大气压，得到用于测定残留溶剂浓度的样品即冷冻干燥粉末。从所得到的冷冻干燥粉末中称取20.5mg，使用1,3-二甲基-2-咪唑啉酮(DMI，“1,3-dimethyl-2-imidazolidinone”，富士胶片和光纯药公司制)制备2mL溶液，制成残留溶剂浓度测定用的样品溶液。
[残留溶剂浓度的测定]
通过基于下述条件的气相色谱测定上述样品溶液中的残留溶剂浓度。
需要说明的是，作为残留溶剂标准溶液，使用将TBA 26.7mg用DMI稀释至2mL而得的溶液。
·装置：GC-2010Plus(SHIMADZU)
·柱：DB-624(Agilent Technologies)
0.53mm ID×30m，3μm膜厚
·注入量：2μL
·柱温：在40℃维持5分钟后，以升温速度10℃/分钟升温至220℃。进一步在相同温度下维持5分钟。
·注入口温度：200℃
·检测器：FID
·检测器温度：230℃
·载气：氦(线速度：35cm/s)
·分流比：1:10
·TBA的保留时间：1.30分钟
使用由气相色谱得到的色谱图的峰面积，根据以下的式1和式2算出残留溶剂浓度。
(式1)
将由式2得到的残留溶剂浓度示于表1。
〔实施例2～11、比较例1～4〕
除了基质溶液的制备时的环孢素A的使用量、TBA在TBA和水的合计质量中所占的质量比率、各个TBA质量比率下的TBA与水的混合溶剂的凝固点(在混合溶剂具有多个凝固点的情况下为最低凝固点)、用上述TBA-水混合溶剂稀释至10mL时的基质浓度、以及用于残留溶剂浓度测定的前处理中所称取的冷冻干燥粉末的量如表1中所记载的以外，与实施例1同样地测定残留溶剂浓度。将结果示于表1。
需要说明的是，对于各个TBA质量比率下的TBA与水的混合溶剂的凝固点，通过以下方法来测定(其中，TBA质量比率100％的凝固点为制造商的目录值)。
[凝固点的测定]
使用微量移液器(Rainin Pos-D正排量式移液器，METTLER TOLEDO制)，将事先以各TBA质量比率制备好的TBA与水的混合溶剂分注约3μL至SUS密闭容器(SUS密闭试样容器15μL，日立高新技术公司制)，使用样品密封器(电动样品密封器，日立高新技术公司制)将SUS容器密闭，使用热分析装置(DSC 3+，METTLER TOLEDO制)测定凝固点。
使用仪器：热分析装置DSC 3+、METTLER TOLEDO制
测定条件：以冷却速度-5℃/分钟从30℃冷却至-60℃，并在相同温度下维持20分钟。接下来以升温速度1℃/分钟从-60℃升温至30℃。
[表1]
〔合成例〕环状肽化合物1的合成
基于HPLC的分析条件如下所示。
HPLC分析条件 方法1
装置：Waters ACQUITY UPLC H-Class
柱：Ascentis Express 90A C18(Sigma-Aldrich)，2.1mm ID×50mm，2.7μm
流动相：0.05％ TFA/water(A)、0.05％ TFA/MeCN(B)
溶出法：B)5％(0分钟)→100％(5分钟)→5％(5.1分钟)→5％(7分钟)
流速：0.5mL/分钟
柱温：35℃
检测波长：210nm(PDA(光电二极管阵列))
HPLC分析条件 方法3
装置：Waters ACQUITY UPLC H-Class
柱：CAPCELL CORE ADME(OSAKA SODA)，2.1mm ID×50mm，2.7μm
流动相：0.05％ TFA/water(A)、0.05％ TFA/MeCN(B)
溶出法：B)：5％(0分钟)→100％(5分钟)→5％(5.1分钟)→5％(7分钟)
流速：0.5mL/分钟
柱温：35℃
检测波长：210nm(PDA)
HPLC分析条件 方法4
装置：Waters ACQUITY UPLC H-Class
柱：ACQUITY UPLC CSH C18(Waters)，2.1mm ID×100mm，1.7μm
流动相：0.05％ TFA/water(A)、0.05％ TFA/MeCN(B)
溶出法：B)20％(0分钟)→100％(10分钟)→100％(13.5分钟)→20％(13.6分钟)→20％(18.0分钟)
流速：0.3mL/分钟
柱温：50℃
检测波长：210nm(PDA)
HPLC分析条件 方法5
装置：Waters ACQUITY UPLC H-Class
柱：ACQUITY UPLC CSH C18(Waters)，2.1mm ID×150mm，1.7μm
流动相：0.05％ TFA/water(A)、0.05％ TFA/MeCN(B)
溶出法：B)20％(0分钟)→100％(24分钟)→100％(29分钟)→20％(29.1分钟)→20％(34分钟)
流速：0.3mL/分钟
柱温：50℃
检测波长：220nm(PDA)
将使用各化合物的HPLC的分析条件示于表2。
[表2]
合成例1：步骤H’1
化合物a03：叔丁基2-[[(2S)-2-[苄氧羰基(甲基)氨基]-3-环己基-丙酰基]-甲 基-氨基]乙酸酯的合成
在反应容器中加入化合物a01(2.00g)和化合物a02(1.37g)，接下来加入2-MeTHF(19.0mL)，进行搅拌。进一步加入DIPEA(5.5mL)后，一边将反应混合物的内温保持在32℃以下，一边滴加T3P(50w/w％2-MeTHF溶液，11.7mL)，然后在室温下搅拌1小时。以将反应混合物的内温保持在36℃以下的方式滴加5％碳酸钠水溶液(12mL)并进行搅拌后，排出水层。将所得到的有机层用5％碳酸钠水溶液(12mL×1)、5％硫酸氢钠一水合物水溶液(12mL×1)、10％氯化钠水溶液(50mL×2)进行洗涤。将所得到的有机层减压浓缩，得到包含化合物a03的残渣(2.72g)。
基于HPLC分析的保留时间：4.499分钟(HPLC分析条件：方法3)
合成例2：步骤H’2-1
化合物a04：叔丁基2-[[(2S)-3-环己基-2-(甲基氨基)丙酰基]-甲基-氨基]乙酸 酯的合成
向步骤H’1中得到的包含化合物a03的残渣(2.70g)加入2-MeTHF(18mL)后，加入5％Pd/C(1.27g，N.E.Chemcat公司制，STD型50％含水品)。利用氢气实施3次脱气置换，然后搅拌2小时。使用滤纸(桐山制作所公司制40mm，No.5C)对反应混合物进行抽滤，并将残渣用2-MeTHF溶液(18mL×3)进行洗涤。将所得到的滤液与洗涤液合并，进行减压浓缩，得到包含化合物a04的残渣(1.77g)。
基于HPLC分析的保留时间：2.419分钟(HPLC分析条件：方法3)
合成例3：步骤H’2-2
化合物a06：叔丁基2-[[(2S)-2-[[2-[苄氧羰基(甲基)氨基]乙酰基]-甲基-氨 基]-3-环己基-丙酰基]-甲基-氨基]乙酸酯的合成
将步骤H’2-1中得到的包含化合物a04的残渣(1.71g)与化合物a05(1.29g)溶解于2-MeTHF(11.6mL)并进行搅拌。进一步加入DIPEA(3.4mL)后，一边将反应混合物的内温保持在27℃以下，一边滴加T3P(50w/w％2-MeTHF溶液，7.2mL)，然后在室温下搅拌2小时。以将反应混合物的内温保持在29℃以下的方式滴加5％碳酸钠水溶液(7.2mL)并进行搅拌后，排出水层。将所得到的有机层用5％碳酸钠水溶液(7.2mL×1)、5％硫酸氢钠一水合物水溶液(7.2mL×1)、10％氯化钠水溶液(7.2mL×2)进行洗涤。将所得到的有机层减压浓缩，得到包含化合物a06的残渣(2.70g)。
基于HPLC分析的保留时间：4.458分钟(HPLC分析条件：方法3)
合成例4：步骤H’3-1
化合物a07：叔丁基2-[[(2S)-3-环己基-2-[甲基-[2-(甲基氨基)乙酰基]氨基]丙 酰基]-甲基-氨基]乙酸酯的合成
向步骤H’2-2中得到的包含化合物a06的残渣(2.70g)加入2-MeTHF(10mL)后，加入5％Pd/C(0.71g，N.E.Chemcat公司制，STD型50％含水品)。利用氢气实施3次脱气置换，然后搅拌2小时。使用滤纸(桐山制作所公司制40mm，No.5C)对反应混合物进行抽滤，并将残渣用2-MeTHF溶液(10mL×3)进行洗涤。将所得到的滤液与洗涤液合并，进行减压浓缩，得到包含化合物a07的残渣(1.82g)。
基于HPLC分析的保留时间：2.848分钟(HPLC分析条件：方法3)
合成例5：步骤H’3-2
化合物a09：叔丁基2-[[(2S)-2-[[2-[[2-[苄氧羰基(甲基)氨基]乙酰基]-甲基- 氨基]乙酰基]-甲基-氨基]-3-环己基-丙酰基]-甲基-氨基]乙酸酯的合成
将步骤H’3-1中得到的包含化合物a07的残渣(1.80g)与化合物a08(1.57g)溶解于2-MeTHF(14.2mL)并进行搅拌。进一步加入DIPEA(4.1mL)后，一边将反应混合物的内温保持在30℃以下，一边滴加T3P(50w/w％2-MeTHF溶液，8.8mL)，然后在室温下搅拌2小时。以将反应混合物的内温保持在33℃以下的方式滴加5％碳酸钠水溶液(10.8mL)并进行搅拌后，排出水层。将所得到的有机层用5％碳酸钠水溶液(10.8mL×1)、5％硫酸氢钠一水合物水溶液(10.8mL×1)、5％碳酸钠水溶液(10.8mL×1)进行洗涤。将所得到的有机层减压浓缩，得到包含化合物a09的残渣(2.61g)。
基于HPLC分析的保留时间：4.055分钟(HPLC分析条件：方法3)
合成例6：步骤H’4-1
化合物a10：叔丁基2-[[(2S)-3-环己基-2-[甲基-[2-[甲基-[2-(甲基氨基)乙酰 基]氨基]乙酰基]氨基]丙酰基]-甲基-氨基]乙酸酯的合成
向步骤H’3-2中得到的包含化合物a09的残渣(2.40g)加入2-MeTHF(12.3mL)后，加入5％Pd/C(0.44g，N.E.Chemcat公司制，STD型50％含水品)。利用氢气实施3次脱气置换，然后搅拌1小时。使用滤纸(桐山制作所公司制40mm，No.5C)对反应混合物进行抽滤，并将残渣用2-MeTHF溶液(12mL×3)进行洗涤。将所得到的滤液与洗涤液合并，进行减压浓缩，得到包含化合物a10的残渣(1.97g)。
基于HPLC分析的保留时间：2.521分钟(分析条件：方法3)
合成例7：步骤H’4-2
化合物a12：叔丁基2-[[(2S)-2-[[2-[[2-[[(2S,3S)-2-(苄氧基羰基氨基)-3-甲 基-戊酰基]-甲基-氨基]乙酰基]-甲基-氨基]乙酰基]-甲基-氨基]-3-环己基-丙酰基]-甲 基-氨基]乙酸酯的合成
将步骤H’4-1中得到的包含化合物a10的残渣(1.92g)与化合物a11(1.69g)溶解于2-MeTHF(12.8mL)并进行搅拌。进一步加入DIPEA(3.7mL)后，一边将反应混合物的内温保持在29℃以下，一边滴加T3P(50w/w％2-MeTHF溶液，7.8mL)，然后在室温下搅拌2小时。以将反应混合物的内温保持在33℃以下的方式滴加5％碳酸钠水溶液(14.4mL)并进行搅拌后，排出水层。将所得到的有机层用5％碳酸钠水溶液(14.4mL×1)、5％硫酸氢钠一水合物水溶液(14.4mL×1)、5％碳酸钠水溶液(14.4mL×1)进行洗涤。对所得到的有机层进一步重复2次利用5％硫酸氢钠一水合物水溶液(14.4mL×1)、5％碳酸钠水溶液(14.4mL×1)的洗涤。加入2-MeTHF(14.4mL)，对其用5％硫酸氢钠一水合物水溶液(14.4mL×1)、5％碳酸钠水溶液(14.4mL×1)进行洗涤。进一步用1％碳酸钠水溶液(14.4mL×3)、5％碳酸钠水溶液(14.4mL×5)、5％硫酸氢钠一水合物水溶液(14.4mL×1)、5％碳酸钠水溶液(14.4mL×1)、5％硫酸氢钠一水合物水溶液(14.4mL×1)、5％碳酸钠水溶液(14.4mL×1、7.2mL×10)进行洗涤。进一步用2.5％氨水(7.2mL×3)、10％氯化钠水溶液(1mL×1)进行洗涤。将所得到的有机层减压浓缩，得到包含化合物a12的残渣(2.39g)。
基于HPLC分析的保留时间：4.006分钟(HPLC分析条件：方法1)
合成例8：步骤H’5-1
化合物a13：叔丁基2-[[(2S)-2-[[2-[[2-[[(2S,3S)-2-氨基-3-甲基-戊酰基]-甲 基-氨基]乙酰基]-甲基-氨基]乙酰基]-甲基-氨基]-3-环己基-丙酰基]-甲基-氨基]乙酸 酯的合成
向步骤H’4-2中得到的包含化合物a12的残渣(2.15g)加入2-MeTHF(9.3mL)后，加入5％Pd/C(0.66g，N.E.Chemcat公司制，STD型50％含水品)。利用氢气实施3次脱气置换，然后搅拌2小时。使用滤纸(桐山制作所公司制40mm，No.5C)对反应混合物进行抽滤，并将残渣用2-MeTHF溶液(10mL×3)进行洗涤。将所得到的滤液与洗涤液合并，进行减压浓缩，得到包含化合物a13的残渣(1.95g)。
基于HPLC分析的保留时间：2.776分钟(HPLC分析条件：方法1)
合成例9：步骤H’5-2
化合物a15：叔丁基2-[[(2S)-3-环己基-2-[甲基-[2-[甲基-[2-[甲基-[(2S,3S)- 3-甲基-2-[[(2S)-4-甲基-2-[甲基(2-三甲基甲硅烷基乙氧基羰基)氨基]戊酰基]氨基]戊 酰基]氨基]乙酰基]氨基]乙酰基]氨基]丙酰基]-甲基-氨基]乙酸酯的合成
将步骤H’5-1中得到的包含化合物a13的残渣(1.94g)与化合物a14(1.49g)溶解于2-MeTHF(10.3mL)并进行搅拌。将反应容器在冰浴中冷却，加入DIPEA(3.0mL)后，一边将反应混合物的内温保持在9℃以下，一边滴加T3P(50w/w％2-MeTHF溶液，6.3mL)，然后移去冰浴，在室温下搅拌1小时。以将反应混合物的内温保持在22℃以下的方式滴加5％碳酸钠水溶液(12mL)并进行搅拌后，排出水层。将所得到的有机层用5％碳酸钠水溶液(12mL×1)、5％硫酸氢钠一水合物水溶液(12mL×1)、5％碳酸钠水溶液(12mL×1)进行洗涤，将所得到的有机层减压浓缩。将其再次溶解于2-MeTHF(20mL)，用5％硫酸氢钠一水合物水溶液(12mL×2)、5％碳酸钠水溶液(12mL×2)进行洗涤。向有机层加入N-甲基咪唑(0.3mL)和5％碳酸钠水溶液(12mL)并搅拌6.5小时后，排出水层。用5％碳酸钠水溶液(12mL×1)、5％硫酸氢钠一水合物水溶液(12mL×2)、5％碳酸钠水溶液(12mL×2)进行洗涤，并进行减压浓缩。再次溶解于2-MeTHF(20mL)，进一步加入庚烷：MTBE混合液(1.5：1)(20mL)，用5％碳酸钠水溶液(20mL×2)进行洗涤，并进行减压浓缩，由此得到包含化合物a15的残渣(2.38g)。
基于HPLC分析的保留时间：4.919分钟(HPLC分析条件：方法1)
合成例10：步骤H’6
化合物a16：叔丁基2-[[(2S)-3-环己基-2-[甲基-[2-[甲基-[2-[甲基-[(2S,3S)- 3-甲基-2-[[(2S)-4-甲基-2-(甲基氨基)戊酰基]氨基]戊酰基]氨基]乙酰基]氨基]乙酰 基]氨基]丙酰基]-甲基-氨基]乙酸酯的合成
向步骤H’5-2中得到的包含化合物a15的残渣(2.35g)加入2-MeTHF(14mL)后，将反应容器的外温设定为50℃，加入四丁基氟化铵(1M THF溶液，7.0mL)。将反应液照原样搅拌2小时。冷却至室温后，加入乙酸异丙酯(7mL)，用5％碳酸钾水溶液(7mL×6)进行洗涤后，进行减压浓缩，得到包含化合物a16的残渣(1.92g)。
基于HPLC分析的保留时间：2.909分钟(HPLC分析条件：方法1)
合成例11：步骤S’0
化合物a19：叔丁基(3S)-3-[苄氧羰基(甲基)氨基]-4-氧代-4-(1-哌啶基)丁酸酯 的合成
在反应容器中加入化合物a17(2.01g)、2-MeTHF(11.7mL)并搅拌。加入DIPEA(1.8mL)、化合物a18(0.53mL)后，在室温下添加T3P(3.61mL)，然后搅拌1小时。一边搅拌一边加入10％柠檬酸水溶液(12mL)后，排出水层。将所得到的有机层用10％柠檬酸水溶液(12mL×1)、5％碳酸钠水溶液(12mL×2)进行洗涤。将所得到的有机层减压浓缩，得到包含化合物a19的残渣(1.56g)。
基于HPLC分析的保留时间：3.934分钟(HPLC分析条件：方法3)
合成例12：步骤S’1-1
化合物a20：叔丁基(3S)-3-(甲基氨基)-4-氧代-4-(1-哌啶基)丁酸酯的合成
向步骤S’0中得到的包含化合物a19的残渣(3.08g)加入2-MeTHF(21.3mL)后，添加5％Pd/C(4.09g)。利用氢气实施3次脱气置换，然后搅拌2小时。使用滤纸(桐山制作所公司制40mm，No.5C)对反应混合物进行抽滤，并将残渣用2-MeTHF溶液(21.3mL×3)进行洗涤。将所得到的滤液与洗涤液合并，进行减压浓缩，得到包含化合物a20的残渣(2.09g)。
基于HPLC分析的保留时间：2.058分钟(HPLC分析条件：方法3)
合成例13：步骤S’1-2
化合物a22：叔丁基(3S)-3-[[(2S)-2-[苄氧羰基(甲基)氨基]-3-甲基-丁酰基]- 甲基-氨基]-4-氧代-4-(1-哌啶基)丁酸酯的合成
将步骤’1-1中得到的包含化合物a20的残渣(2.04g)与化合物a21(2.14g)溶解于2-MeTHF(6.3mL)并搅拌。进一步加入DIPEA(5.3mL)后，在室温下添加溶解在2-MeTHF(5.9mL)和MeCN(4.1mL)中的HATU(3.95g)，然后在50℃搅拌5小时。在室温下加入CPME(5.3mL)后，加入5％碳酸钾水溶液(4.1mL)和NMI(0.55mL)，搅拌1小时30分钟。一边搅拌一边加入2.5％铵水溶液(16.3mL)后，排出水层。将所得到的有机层用2.5％铵水溶液(16.3mL×1)、10％硫酸氢钠一水合物水溶液(20.4mL×4)、5％碳酸钾水溶液(20.4mL×1)、10％硫酸氢钠一水合物水溶液(20.4mL×3)、5％碳酸钾水溶液(20.4mL×1)进行洗涤。将所得到的有机层减压浓缩，得到包含化合物a22的残渣(3.66g)。
基于HPLC分析的保留时间：4.428分钟(HPLC分析条件：方法3)
合成例14：步骤S’2-1
化合物a23：叔丁基(3S)-3-[甲基-[(2S)-3-甲基-2-(甲基氨基)丁酰基]氨基]-4- 氧代-4-(1-哌啶基)丁酸酯的合成
向步骤S’1-2中得到的包含化合物a22的残渣(3.56g)加入2-MeTHF(18.3mL)后，添加5％Pd/C(2.10g)。利用氢气实施3次脱气置换，然后搅拌2小时30分钟。使用滤纸(桐山制作所公司制40mm，No.5C)对反应混合物进行抽滤，并将残渣用2-MeTHF(18.3mL×3)进行洗涤。将所得到的滤液与洗涤液合并，进行减压浓缩，得到包含化合物a23的残渣(2.58g)。
基于HPLC分析的保留时间：2.393分钟(HPLC分析条件：方法3)
合成例15：步骤S’2-2
化合物a25：叔丁基(3S)-3-[甲基-[(2S)-3-甲基-2-[甲基-[1-[(2,2,2-三氟乙酰 基)氨基]环戊烷羰基]氨基]丁酰基]氨基]-4-氧代-4-(1-哌啶基)丁酸酯的合成
将化合物a24(2.90g)溶解于2-MeTHF(18.6mL)并搅拌。进一步加入DIPEA(5.4mL)和步骤S’2-1中得到的包含化合物a23的残渣(2.50g)后，在室温下添加T3P(10.4mL)和DMAP(1.59g)，然后搅拌8小时。分别追加化合物a24(1.47g)、DMAP(0.80g)、T3P(5.5mL)、DIPEA(2.8mL)后，搅拌2小时。一边搅拌一边加入5％碳酸钠水溶液(20.5mL)后，排出水层。将所得到的有机层用5％硫酸氢钠一水合物水溶液(20.5mL×4)、5％碳酸钠水溶液(20.5mL×2)、5％硫酸氢钠一水合物水溶液(20.5mL×2)、5％碳酸钠水溶液(20.5mL×1)进行洗涤。将所得到的有机层减压浓缩，得到包含化合物a25的残渣(3.45g)。
基于HPLC分析的保留时间：4.002分钟(HPLC分析条件：方法3)
合成例16：步骤S’3-1
化合物a26：叔丁基(3S)-3-[[(2S)-2-[(1-氨基环戊烷羰基)-甲基-氨基]-3-甲 基-丁酰基]-甲基-氨基]-4-氧代-4-(1-哌啶基)丁酸酯的合成
将步骤S’2-2中得到的包含化合物a25的残渣(3.41g)溶解在2-MeTHF(1362mL)和MeOH(1.4mL)中并搅拌。在-20℃滴加LiBH4(ALDRICH，2M THF溶液，4.5mL)，然后搅拌2小时。滴加2,2,2-三氟乙醇(6.4mL)后，升温至0℃，然后搅拌20分钟。滴加20％氯化铵水溶液(10.2mL)，排出水层。对于所得到的有机层，在室温下加入三氟乙酸(0.69mL)后，搅拌10分钟。对于包含2M氢氧化钠水溶液(44.3mL)的反应容器，滴加包含化合物a26的反应溶液。排出水层，然后用2M氢氧化钠水溶液(34.1mL×2)、10％磷酸氢二钾水溶液(17.0mL×1)进行洗涤。将所得到的有机层减压浓缩，得到包含化合物a26的残渣(2.90g)。
基于HPLC分析的保留时间：2.868分钟(HPLC分析条件：方法3)
合成例17：步骤S’3-2
化合物a28：苄基(2S)-2-[[1-[[(1S)-1-[[(1S)-3-叔丁氧基-3-氧代-1-(哌啶-1- 羰基)丙基]-甲基-氨基甲酰基]-2-甲基-丙基]-甲基-氨基甲酰基]环戊基]氨基甲酰基]吡 咯烷-1-甲酸酯的合成
将步骤S’3-1中得到的包含化合物a26的残渣(2.90g)和化合物a27(1.66g)溶解于MeCN(14.5mL)并搅拌。进一步加入DIPEA(2.67mL)后，在室温下添加BEP(2.11g)，然后搅拌3小时。加入CPME(29.3mL)后，加入5％碳酸钾水溶液(17.4mL)和N-甲基咪唑(0.41mL)，在室温下搅拌30分钟。排出水层后，将所得到的有机层用5％硫酸氢钠一水合物水溶液(17.4mL×5)、5％碳酸钠水溶液(17.4mL×2)、5％硫酸氢钠一水合物水溶液(17.4mL×3)、5％碳酸钠水溶液(17.4mL×2)进行洗涤。将所得到的有机层减压浓缩，得到包含化合物a28的残渣(3.86g)。
基于HPLC分析的保留时间：4.323分钟(HPLC分析条件：方法3)
合成例18：步骤S’4-1
化合物a29：叔丁基(3S)-3-[甲基-[(2S)-3-甲基-2-[甲基-[1-[[(2S)-吡咯烷-2- 羰基]氨基]环戊烷羰基]氨基]丁酰基]氨基]-4-氧代-4-(1-哌啶基)丁酸酯的合成
向步骤S’3-2中得到的包含化合物a28的残渣(3.81g)加入THF(16.8mL)后，添加5％Pd/C(0.40g)。利用氢气实施3次脱气置换，然后搅拌4小时30分钟。追加5％Pd/C(0.20g)，然后搅拌1小时30分钟。使用滤纸(桐山制作所公司制40mm，No.5C)对反应混合物进行抽滤，并将残渣用2-MeTHF溶液(6.6mL×3)进行洗涤。将所得到的滤液与洗涤液合并，进行减压浓缩，得到包含化合物a29的残渣(3.12g)。
基于HPLC分析的保留时间：2.970分钟(HPLC分析条件：方法3)
合成例19：步骤S’4-2
化合物a31：叔丁基(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(苄氧基羰基氨 基)-4-苯基-丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]环戊烷羰基]-甲基-氨基]-3-甲基-丁酰基]-甲 基-氨基]-4-氧代-4-(1-哌啶基)丁酸酯的合成
将步骤S’4-1中得到的包含化合物a29的残渣(2.06g)和化合物a30(1.10g)溶解于2-MeTHF(10.3mL)并搅拌。进一步加入DIPEA(2.8mL)后，在室温下添加T3P(5.4mL)，然后搅拌2小时。分别追加化合物a30(0.55g)、DIPEA(1.1mL)、T3P(2.2mL)后，搅拌5小时。进一步地，追加化合物a30(0.57g)、DIPEA(1.1mL)、T3P(2.2mL)并静置一晚，次日搅拌2小时。加入5％碳酸钾水溶液(12.4mL)和N-甲基咪唑(0.29mL)，在室温下搅拌3小时。加入N-甲基咪唑(0.23mL)，搅拌1小时后，排出水层。加入2-MeTHF(12.4mL)、N-甲基咪唑(0.23mL)、5％碳酸钾水溶液(12.4mL)，搅拌1小时后，排出水层。将所得到的有机层用10％硫酸氢钠一水合物水溶液(12.4mL×2)、5％碳酸钾水溶液(12.4mL×1)进行洗涤。向有机层加入庚烷与MTBE的混合溶液(庚烷/MTBE＝1.5：1，12.4mL)、MeCN(4.7mL)，排出水层。向有机层加入2-MeTHF(2.1mL)后，用MeCN(7.0mL)和5％碳酸钾水溶液(17.7mL)洗涤7次。向有机层加入乙酸异丙酯(7.6mL)后，进行减压浓缩，向所得到的残渣加入乙酸异丙酯(7.6mL)，得到包含化合物a31的溶液(10.31g)。
基于HPLC分析的保留时间：4.794分钟(HPLC分析条件：方法3)
合成例20：步骤1’
化合物a32：(3S)-3-[[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(苄氧基羰基氨基)-4-苯 基-丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]环戊烷羰基]-甲基-氨基]-3-甲基-丁酰基]-甲基-氨 基]-4-氧代-4-(1-哌啶基)丁酸的合成
将步骤S’4-2中得到的包含化合物a31的残渣(10.27g)溶解于乙酸异丙酯(51.4mL)并搅拌。加入HMDS(2.1mL)后，在0℃滴加TMSOTf(1.4mL)，然后在室温下搅拌2小时30分钟。在室温下加入2-MeTHF(51.4mL)、5％磷酸氢二钾水溶液(102.8mL)，排出水层。将有机层用5％磷酸二氢钠水溶液(102.8mL)进行洗涤后，向所得到的有机层加入DIPEA(3.0mL)，进行减压浓缩，加入乙酸异丙酯(7.6mL)，得到包含化合物a32的溶液(7.92g)。
基于HPLC分析的保留时间：4.001分钟(HPLC分析条件：方法3)
合成例21：步骤2’
化合物a33：叔丁基2-[[(2S)-2-[[2-[[2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3- [[(2S)-2-[[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(苄氧基羰基氨基)-4-苯基-丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨 基]环戊烷羰基]-甲基-氨基]-3-甲基-丁酰基]-甲基-氨基]-4-氧代-4-(1-哌啶基)丁酰 基]-甲基-氨基]-4-甲基-戊酰基]氨基]-3-甲基-戊酰基]-甲基-氨基]乙酰基]-甲基-氨 基]乙酰基]-甲基-氨基]-3-环己基-丙酰基]-甲基-氨基]乙酸酯的合成
将步骤1’中得到的包含化合物a32的残渣(7.92g)和步骤H’6中得到的包含化合物a16的残渣(1.33g)溶解于2-MeTHF(4.6mL)并搅拌。在室温下添加DIPEA(1.6mL)、HATU(1.43g)，然后搅拌2小时。添加包含化合物a16的残渣(约300mg)，进一步搅拌2小时。然后，追加包含化合物a16的残渣(约300mg)，搅拌1小时30分钟。加入HATU(0.79g)后，搅拌1小时。加入CPME(3.5mL)、N-甲基咪唑(0.13mL)、5％碳酸钾水溶液(2.7mL)，在室温下搅拌3小时。排出水层后，用2.5％氨水溶液(9.2mL×1)、10％硫酸氢钠一水合物水溶液(9.2mL×1)、5％碳酸钠水溶液(9.2mL×1)、10％硫酸氢钠一水合物水溶液(9.2mL×3)、5％碳酸氢钠水溶液(9.2mL×2)进行洗涤。向有机层加入庚烷/MTBE(1.5：1，9.2mL)后，用5％碳酸钠水溶液(9.2mL×2)进行洗涤。向所得到的有机层加入2-MeTHF(9.2mL)，进行减压浓缩，得到包含化合物a33的残渣(4.49g)。
基于HPLC分析的保留时间:10.65分钟(分析条件：方法4)
合成例22：步骤3’
化合物a34：2-[[(2S)-2-[[2-[[2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2- [[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-(苄氧基羰基氨基)-4-苯基-丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]环戊烷 羰基]-甲基-氨基]-3-甲基-丁酰基]-甲基-氨基]-4-氧代-4-(1-哌啶基)丁酰基]-甲基-氨 基]-4-甲基-戊酰基]氨基]-3-甲基-戊酰基]-甲基-氨基]乙酰基]-甲基-氨基]乙酰基]-甲 基-氨基]-3-环己基-丙酰基]-甲基-氨基]乙酸的合成
将在步骤2’中得到的包含化合物a33的残渣(4.49g)溶解于2-MeTHF(49.5mL)并搅拌。在室温下添加HMDS(2.9mL)和TMSOTf(2.1mL)，然后搅拌2小时。加入5％磷酸氢二钾水溶液(14.2mL)后，排出水层。将所得到的有机层用10％柠檬酸水溶液(3.4mL)与5％磷酸氢二钾水溶液(10.5mL)的混合水溶液洗涤3次，用5％碳酸钠水溶液洗涤1次。向有机层加入THF(20.9mL)，进行3次共沸脱水后，向所得到的残渣加入THF(5.9mL)，得到包含化合物a34的溶液(9.59g)。
基于HPLC分析的保留时间:9.26分钟(分析条件：方法4)
合成例23：步骤4’
化合物a35：2-[[(2S)-2-[[2-[[2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(3S)-3-[[(2S)-2- [[1-[[(2S)-1-[(2S)-2-氨基-4-苯基-丁酰基]吡咯烷-2-羰基]氨基]环戊烷羰基]-甲基- 氨基]-3-甲基-丁酰基]-甲基-氨基]-4-氧代-4-(1-哌啶基)丁酰基]-甲基-氨基]-4-甲基- 戊酰基]氨基]-3-甲基-戊酰基]-甲基-氨基]乙酰基]-甲基-氨基]乙酰基]-甲基-氨基]-3- 环己基-丙酰基]-甲基-氨基]乙酸的合成
将5％Pd/C(0.49g，N.E.Chemcat公司制，STD型50％含水品)加入至反应容器中，悬浮于THF(8mL)，并在氢气氛下搅拌30分钟。然后进行氮置换，加入将步骤3’中得到的包含化合物a34的残渣(9.3g)溶解于THF(8mL)的溶液，在氢气氛下搅拌6小时，此时的反应转化率为76％。进行氮置换并在冰箱中保管一晚后，次日恢复至室温，搅拌2小时，此时的反应转化率为87％。进行氮置换后，将5％Pd/C(0.24g)的THF(4mL)悬浮液加入至反应液，进行氢置换后，进行4小时搅拌(反应转化率99.0％)。进行氮置换并在冰箱中保管一晚后，次日恢复至室温进行测定，此时的反应转化率为99.4％。使用滤纸(桐山制作所公司制40mm，No.5C)对反应混合物进行抽滤，并将残渣用2-MeTHF溶液(6.5mL×10)进行洗涤。将所得到的滤液与洗涤液合并，进行减压浓缩。将所得到的残渣溶解在乙腈(16.3mL)和2-MeTHF(6.5mL)中，用庚烷(37.1mL)洗涤后进行浓缩。将所得到的残渣再次溶解在乙腈(16.3mL)和2-MeTHF(6.5mL)中，用庚烷(37.1mL)洗涤后进行浓缩，得到包含化合物a35的残渣(2.96g)。
基于HPLC分析的保留时间：12.39分钟(HPLC分析条件：方法4)
合成例24：步骤5’
化合物a36：(3S,9S,18S,21S,25S,28S,34S)-9-(环己基甲基)-21-异丁基-28-异 丙基-7,10,13,16,22,26,29-七甲基-18-[(1S)-1-甲基丙基]-3-(2-苯基乙基)-25-(哌啶- 1-羰基)螺[1,4,7,10,13,16,19,22,26,29,32-十一氮杂双环[32.3.0]三十七烷-31,1’-环 戊烷]-2,5,8,11,14,17,20,23,27,30,33-十一酮的合成
制备含有前工序中得到的包含化合物a35的残渣(2.90g)和DIPEA(1.44mL)的碳酸二甲酯溶液(72.5mL)，花费3小时将其滴加至PyBOP(4.34g)的碳酸二甲酯溶液(72.5mL)。滴加结束30分钟后的时间点进行取样而确认反应后，使用滤纸(桐山制作所公司制40mm，No.5C)并通过抽滤以滤去不溶物，将残渣用碳酸二甲酯(15mL)进行洗涤。将滤液与洗涤液的合并溶液用2.5％氨水溶液(58mL)、5％硫酸氢钾水溶液(58mL)、5％磷酸氢二钠水溶液(58mL)、5％氯化钠水溶液(58mL)、0.5％氯化钠水溶液(58mL)进行洗涤。将所得的有机层在减压下进行浓缩，由此得到包含化合物a36的残渣(2.72g)。
基于HPLC分析的保留时间：18.69分钟(HPLC分析条件：方法5)
将所得到的残渣(2.72g)用硅胶柱层析法(二氯甲烷/甲醇)进行精制，得到化合物a36(1.1g)。所得到的化合物a36的分子量为1299.71，ClogP为13.64，氨基酸残基数为11。
〔实施例12～16〕
除了使用化合物a36以代替环孢素A，并且基质溶液的制备中化合物a36的使用量、TBA在TBA和水的合计质量中所占的质量比率、各个TBA质量比率下的TBA与水的混合溶剂的凝固点(在混合溶剂具有多个凝固点的情况下为最低凝固点)、用上述TBA-水混合溶剂稀释至10mL时的基质浓度、以及用于残留溶剂浓度测定的前处理中所称取的冷冻干燥粉末的量如表3中所记载的以外，与实施例1同样地测定残留溶剂浓度。将结果示于表3。
[表3]
如上述结果所示，通过在特定质量比率下使用水和有机溶剂实施冷冻干燥，由此即使在冷冻干燥对象物质为高浓度的情况下，也能够得到残留溶剂浓度显著降低的冷冻干燥体。例如，在对实施例1和比较例3以及实施例6和比较例4进行比较的情况下，可以看出，虽然TBA/水比率的差异微小，但残留溶剂浓度显著不同。以往不知晓残留溶剂浓度会导致这样的结果，并且这是通过本发明人等的研究而首次阐明的令人惊讶的结果。
产业上的可利用性
在本发明中，通过使用以特定比率混合有机溶剂和水而成的混合溶剂进行冷冻干燥，由此能够在低浓度到高浓度的广泛的基质浓度下显著降低残留溶剂浓度。即，根据本发明的方法，由于即使在基质高浓度条件下实施冷冻干燥也能够降低残留溶剂浓度，因此，即使例如在工业的大规模下也能够效率良好地实施冷冻干燥。

Claims (15)

1.一种方法，其是包括以下工序的药品的制造方法：
(1)准备包含水、有机溶剂和冷冻干燥对象物质的混合液的工序；以及
(2)将所述混合液供于冷冻干燥的工序，
在此，相对于工序(1)中的水和有机溶剂的合计质量，所述有机溶剂的质量比率为68质量％以上且99质量％以下。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述工序(1)包括：
准备包含水和所述有机溶剂的混合溶剂，并将所述混合溶剂与所述冷冻干燥对象物质混合。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述冷冻干燥对象物质在包含水、有机溶剂和冷冻干燥对象物质的所述混合液的容量中所占的质量比率为2w/v％以上且20w/v％以下。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，所述工序(2)包括预备冷冻工序。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，所述工序(2)包括多阶段的干燥工序。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，包含所述有机溶剂和水的混合溶剂的凝固点为-60℃以上。
7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，所述有机溶剂为叔丁醇。
8.根据权利要求1～7中任一项所述的方法，其中，所述冷冻干燥对象物质为脂溶性肽。
9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述脂溶性肽具有环状结构。
10.根据权利要求8或9所述的方法，其中，所述脂溶性肽的CLogP为25以下。
11.根据权利要求8～10中任一项所述的方法，其中，所述脂溶性肽的分子量为5000以下。
12.根据权利要求8～11中任一项所述的方法，其中，所述脂溶性肽的氨基酸残基数为5以上且30以下。
13.根据权利要求8～12中任一项所述的方法，其中，所述脂溶性肽含有非天然氨基酸残基。
14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述非天然氨基酸残基为非天然N取代氨基酸残基。
15.根据权利要求1～14中任一项所述的方法，其中，通过冷冻干燥得到的冷冻干燥粉末中的残留溶剂浓度为1.2％以下。
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