CN116603049A - 治疗脑卒中的组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗脑卒中的组合物及其应用，所述组合物由组分A和组分B组成，所述组分A为恩利卡生或其药学上可接受的盐，所述组分B为牛磺酸或其药学上可接受的盐。本发明的发明人通过动物实验发现：恩利卡生和牛磺酸可以协同作用，显著降低脑缺血性损伤引起的脑梗死范围，因此，以恩利卡生和牛磺酸作为活性成分的药物对治疗急性缺血性脑卒中，提高患者的长期生存率和降低致残率，有重要的临床意义。

Description

治疗脑卒中的组合物及其应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，更具体地，本发明涉及一种治疗脑卒中的组合物、药物及其制备方法。

背景技术

脑卒中是全球第二大、中国第一大致死性疾病，且其高复发率及高致残率使的存活者约75％留下功能残疾，严重危害了患者身体健康和生活质量。根据《中国脑卒中防治报告2019》显示，2018年我国每5位死者中至少有1人死于脑卒中，占我国居民总死亡率的22.3％。

目前针对急性缺血性脑卒中治疗主要为一般性处理和特异性治疗。特异性治疗是治疗性缺血性脑卒中的关键，主要包括改善脑血液循环和神经保护等。在时间窗内(发病＜6h)开展静脉溶栓治疗及血管内治疗(取栓)等仍是急性缺血性脑卒中最有效的救治措施。我国缺血性脑卒中患者从发病到医院的时间平均为20.1小时，因此实际上我国脑卒中患者接受溶栓治疗的总比例小于3％。

脑卒中的救治具有高度的时间依赖性，每延迟1min救治，将丢失1.9亿神经元及138亿突触。国外获利于可以对脑卒中患者进行及时诊疗和康复护理，使患者得到有效治疗，降低死亡率，同时考虑到国外神经保护剂相关的大型研究较少，因此，对神经保护剂的推荐相对较低。但如上所述，我国脑卒中患者，常错过最佳救治时间，死亡率高。我们必须考虑更多的选择来保护脑卒中患者的神经元，以减少脑卒中死亡及伤残损失，降低社会经济负担。脑卒中发生时，越早进行神经保护、减轻脑神经死亡进展，越能有效预防有害物质对大脑的损害，为大脑赢取更多时间。

目前国内临床上依达拉奉、丁苯酞是主流的神经保护药物，其他还有胞二磷胆碱、单唾液酸四己糖神经节苷脂钠、桂哌齐特等，但总体上治疗效果并不理想，辅助用药的帽子难以摘去，亟需开发新型有效、安全的抗脑卒中新药或药物组合物来满足临床的迫切需求。

脑缺血损伤与自由基过度形成、兴奋性氨基酸毒性作用、细胞内钙超载、炎性反应等多种机制有关，无论何种机制，最终的结局都会导致神经细胞死亡、功能破坏、脑梗死灶形成。细胞死亡的方式主要有凋亡和坏死两条途径，在脑缺血损伤中神经细胞凋亡和坏死同时存在。缺血核心区以细胞坏死为主，而周围明暗带以细胞凋亡为主。

细胞凋亡主要包括内源性细胞凋亡通路(线粒体介导的凋亡通路)和外源性细胞凋亡通路(死亡受体介导的凋亡通路)。Caspase家族是一大类凋亡的调控因子，是细胞凋亡的启动者和最后的执行者。脑缺血时，死亡受体介导的凋亡通路激活的caspase-8，进一步激活其下游效应蛋白酶caspase-3及激活线粒体凋亡通路导致细胞凋亡。研究表明，抑制caspase酶活性，够阻止神经凋亡的发展，可减轻脑缺血损伤的程度，缩小梗死范围。半胱天冬酶抑制剂恩利卡生(Emricasan)能特异性抑制caspase-8、caspase-3/7，从而具有阻止因缺血脑卒中引起的神经凋亡进展，可减轻脑缺血损伤的程度，缩小梗死范围。

牛磺酸(2-氨基乙磺酸)是一种抑制性神经递质，是动物组织内含量很高的一种功能氨基酸。它以游离形式存在于细胞内，不参与代谢和蛋白合成，其生理作用非常复杂，包括抗氧化、抗炎、调节渗透压、调节细胞内钙离子、维持细胞膜稳定、抑制神经传递等作用。这些作用提示，牛磺酸可能通过阻断脑缺血后有害级联反应的多个环节引起的神经细胞坏死，对缺血后脑神经细胞具有保护作用。

脑缺血时，如同时抑制caspase酶活性以及阻断脑缺血后有害级联反应的多个环节，可同时抑制神经细胞凋亡和神经细胞调节性坏死，极大的减轻脑缺血性损伤。目前，现有技术还没有关于恩利卡生和牛磺酸联合应用的报道，尤其没有二者联合应用于治疗缺血性脑卒中。

发明内容

基于此，本发明的目的在于提供一种治疗脑卒中的组合物、药物及其制备方法。

实现上述发明目的的技术方案包括如下。

本发明的第一方面，提供了一种组合物，所述组合物由组分A和组分B组成，所述组分A为恩利卡生或其药学上可接受的盐，所述组分B为牛磺酸或其药学上可接受的盐。

本发明的第二方面，提供了上述组合物在制备治疗脑卒中的药物中的应用。

本发明的第三方面，提供了一种治疗脑卒中的药物，所述药物由活性成分和药学上可接受的辅料制成，所述活性成分为上述组合物。

本发明的第四方面，提供了一种治疗脑卒中的注射剂，所述注射剂由活性成分和溶媒制成，所述活性成分为上述组合物，所述溶媒为pH 7.4的磷酸盐缓冲液。

本发明的第五方面，提供了上述治疗脑卒中的注射剂的制备方法，包括以下步骤：将活性成分加入至pH 7.4的磷酸盐缓冲液中，混匀。

本发明的发明人通过动物实验发现：恩利卡生和牛磺酸可以协同作用，显著降低脑缺血性损伤引起的脑梗死范围。因此，以恩利卡生和牛磺酸作为活性成分的药物对治疗急性缺血性脑卒中，提高患者的长期生存率和降低致残率，有重要的临床意义。

附图说明

图1为本发明试验例中各组脑梗死TCC染色图；其中，#17：模型组(Group1)；#41：依达拉奉组(Group2)；#3：恩利卡生+牛磺酸组(Group3)；#12：恩利卡生组(Group4)；#8：牛磺酸组(Group5)。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明公开内容的理解更加透彻全面。

除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。本发明所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

在本发明中，首先通过动物实验证实了恩利卡生、牛磺酸以及两者的组合物均具有治疗脑卒中的效果，其中，恩利卡生和牛磺酸联合使用效果最好，恩利卡生和牛磺酸联合使用能同时抑制caspase酶活性和以及阻断脑缺血后有害级联反应的多个环节，可同时抑制神经细胞凋亡和神经细胞调节性坏死，极大的降低脑缺血性损伤引起的脑梗死范围，提高患者的长期生存率和降低致残率。因此，以恩利卡生和牛磺酸作为活性成分的药物可用于治疗急性缺血性脑卒中，显著降低脑梗死范围，并可降低药物的不良反应。

在本发明的其中一些实施例中，公开了一种组合物，所述组合物由组分A和组分B组成，所述组分A为恩利卡生或其药学上可接受的盐，所述组分B为牛磺酸或其药学上可接受的盐。

在其中一些实施例中，所述组分A和组分B的重量比为1:2～16。

在其中一些实施例中，所述组分A和组分B的重量比为1:4～8。

在其中一些实施例中，所述组分A和组分B的重量比为1:7～8，更优选地，所述恩利卡生和牛磺酸的重量比为1:8。

在其中一些实施例中，所述药学上可接受的盐为药学上常用的盐，如盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、乙酸盐、苯甲酸盐、富马酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、月佳基磺酸盐、氢醌磺酸盐或对甲苯磺酸盐。

在本发明的另一些实施例中，公开了上述组合物在制备治疗脑卒中的药物中的应用。

在其中一些实施例中，所述脑卒中为缺血性脑卒中或出血性脑卒中。

在其中一些实施例中，所述脑卒中为急性缺血性脑卒中。

在本发明的另一些实施例中，公开了一种治疗脑卒中的药物，所述药物由活性成分和药学上可接受的辅料制成，所述活性成分为上述组合物。

将本发明的活性成分加入常规辅料，按照常规工艺，可以制成任意药学上可接受的各种剂型，如片剂、胶囊剂、口服液剂、注射剂、乳膏剂、颗粒剂或各种缓控释制剂等。在其中一些实施例中，所述剂型为注射剂(注射液、冻干粉针或注射用浓溶液)。

在本发明的另一些实施例中，公开了一种治疗脑卒中的注射剂，所述注射剂由活性成分和溶媒制成，所述活性成分为上述组合物，所述溶媒为pH 7.4的磷酸盐缓冲液。

在本发明的另一些实施例中，公开了一种治疗脑卒中的注射剂的制备方法，包括以下步骤：将活性成分加入至pH 7.4的磷酸盐缓冲液中，混匀。

本发明的药物可以以静脉注射、肌肉注射或口服给药，优选为静脉注射给药，起效更快、生物利用度更高，尤其是对于急性以及重度缺血性脑卒中患者存在张嘴以及吞咽困难等情况，静脉给药是更优的选择，一方面克服口服给药的障碍，另一方达到快速起效的效果。

以下实施例中，恩利卡生的量和牛磺酸的量以等量的没有成盐的游离形式的恩利卡生和牛磺酸表示。恩利卡生(批号：20626)购于上海皓元生物医药科技有限公司；牛磺酸购于山东国化化学有限公司。

以下结合附图和具体实施例来详细说明本发明。

实施例1一种治疗脑卒中的药物

本实施例的治疗脑卒中的药物的活性成分为重量比1:2的恩利卡生和牛磺酸。

本实施例的药物的制备方法，包括以下步骤：

1、称取50mg恩利卡生和100mg牛磺酸；

2、加入50mL磷酸盐缓冲液(pH 7.4)，混匀后终端灭菌，即得注射剂。

本实施例的注射剂的使用方法为：通过静脉注射给药，一次给药剂量为50mL，连续给药7-14d。

实施例2一种治疗脑卒中的药物

本实施例的治疗脑卒中的药物的活性成分为重量比1:16的恩利卡生和牛磺酸。

本实施例的药物的制备方法，包括以下步骤：

1、称取25mg恩利卡生和400mg牛磺酸；

2、加入适量微晶纤维素，混匀装入硬胶囊，即得胶囊剂。

本实施例的胶囊剂的使用方法为：一日1～2粒(1粒中含恩利卡生25mg、牛磺酸400mg)，连续用药14～28天，适用于轻中度脑卒中患者的恢复期治疗。

实施例3一种治疗脑卒中的药物

本实施例的治疗脑卒中的药物的活性成分为重量比1:4的恩利卡生和牛磺酸。

本实施例的药物的制备方法，包括以下步骤：

1、称取50mg恩利卡生和200mg牛磺酸；

2、加入50mL磷酸盐缓冲液(pH 7.4)，加入适量蔗糖，混匀后过滤除菌，即得口服溶液。

本实施例的口服溶液的使用方法为：一日25～50mL，连续用药14～28天，适用于轻中度脑卒中患者的恢复期治疗。

实施例4一种治疗脑卒中的药物

本实施例的治疗脑卒中的药物的活性成分为重量比1:8的恩利卡生和牛磺酸。

本实施例的药物的制备方法，包括以下步骤：

1、称取50mg恩利卡生和400mg牛磺酸；

2、加入50mL磷酸盐缓冲液(pH 7.4)，混匀后终端灭菌，即得注射剂。

本实施例的注射剂的使用方法为：通过静脉注射给药，一次给药剂量为50mL，连续给药7～14d。

试验例恩利卡生和/或牛磺酸对缺血性脑卒中的保护作用

1、实验动物

46只(其中的6只为备用动物)雄性SD大鼠，体重为250～300g，动物饲养于屏障系统中，动物房环境条件控制为室温20℃～26℃，湿度40％～70％，饲养人员每天上下午各记录一次，房间内每小时空气更换10至20次，动物房内照明12/12小时明暗循环交替(实验活动进行中必须的中断除外)，任何中断都将记录下来。动物需进行合笼饲养，入组实验后，动物保持合笼饲养。动物笼具为聚砜材质的塑料笼具，带有玉米芯垫料，笼具中有供啃咬或遮蔽的玩具给每笼动物作为环境丰富措施。每个笼具放置一个识别组别的笼卡。

2、建模方法

采用2.5％异氟烷呼吸麻醉维持动物麻醉深度，按如下操作建立脑缺血再灌注模型：

①剃除动物脖颈部毛发；

②对手术区域进行消毒处理；

③剪开脖颈部表皮暴露左侧颈总动脉；

④结扎近心端的颈总动脉、翼腭动脉、颈外动脉；

⑤在距颈内、颈外动脉分叉2mm位置的颈总动脉处剪一小口；

⑥使用尼龙线(3-0)从颈总动脉小口处插入(深度18mm～20mm)进入颈内动脉到达左侧大脑中动脉；

⑦固定线栓；

⑧120min后拔出线栓，打开颈外动脉实现缺血再灌注；

模型成功标准：术后30min～80min内按照Longa法评分，将评分为2～3分的大鼠入组，4分或者1分以下的动物将剔除。

3、分组与给药

实施药品：将恩利卡生、牛磺酸_、恩利卡生和牛磺酸，分别用100mL磷酸盐缓冲液(pH 7.4)作为溶媒制成注射给药药液。

造模结束后，根据动物体重分为5个组，每组8只动物，分别为：

Group1-模型组(N＝8)：拔出线栓再灌时即刻给予磷酸盐缓冲液，注射体积按5mL/kg，单次给予，观察1天；

Group2-依达拉奉阳性药组(N＝8)：12mg/kg组，拔出线栓再灌时即刻给予，注射体积按5mL/kg，单次给予，观察1天；

Group3-组合物组(N＝8)：恩利卡生(5mg/kg)+牛磺酸(40mg/kg)，拔出线栓再灌时即刻给予，注射体积按5mL/kg，单次给予，观察1天；

Group4-恩利卡生单用组(N＝8)：5mg/kg，拔出线栓再灌时即刻给予，注射体积按5mL/kg，单次给予，观察1天；

Group5-牛磺酸单用组(N＝8)：40mg/kg，拔出线栓再灌时即刻给予，注射体积按5mL/kg，单次给予，观察1天。

具体分组和给药方式如表1所示。

表1

4、脑梗死评价

脑缺血再灌注后1天(再灌24小时)对动物进行安乐死，采集大脑组织，冠状切，每片3mm厚度，2％TTC染色，染色后梗死区域将呈现白色，非梗死区域呈现红色。使用Canon扫描仪双面扫描后，根据正反两面平均后的面积计算脑梗死情况，计算公式为：梗死百分比＝[1-(左脑面积-左脑梗死面积)/右脑面积]*100％。

脑组织随后使用10％中性福尔马林固定保存。所有模型成功建立的动物的数据将会被纳入统计，实验模型成功的标准为脑梗死百分比在20％～60％之间，梗死百分比小于20％的动物会被认为未成模，而梗死百分比大于60％的动物会被认为再灌失败导致梗死面积过大。

5、实验结果

各组动物脑梗死面积百分比情况结果见表2，各组脑梗死TCC染色图如图1所示。

表2各组动物脑梗死面积百分比情况

One-wayANOVA:**p<0.01vs.模型组；*p<0.05vs.模型组；^#p<0.05vs.恩利卡生组、牛磺酸组

从表2和图1可知，模型组有明显的白色梗死灶，而各给药组大鼠脑梗死灶均呈现不同幅度的缩小，表明各给药组均存在临床改善潜力，其中恩利卡生+牛磺酸的组合物对大鼠脑梗死的缩小范围效果最佳，与模型组相比具有极显著性的差异(P<0.01)，与恩利卡生组、牛磺酸组相比具有显著差异(P<0.05)，表明恩利卡生与牛磺酸联用组成的药物组合物对缺血性脑卒中有明显的治疗与改善作用，并由于两者单用。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种组合物，其特征在于，所述组合物由组分A和组分B组成，所述组分A为恩利卡生或其药学上可接受的盐，所述组分B为牛磺酸或其药学上可接受的盐。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组分A和组分B的重量比为1:2～16。

3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组分A和组分B的重量比为1:4～8。

4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述组分A和组分B的重量比为1:7～8。

5.权利要求1～4任一项所述的组合物在制备治疗脑卒中的药物中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述脑卒中为缺血性脑卒中或出血性脑卒中。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述脑卒中为急性缺血性脑卒中。

8.一种治疗脑卒中的药物，其特征在于，所述药物由活性成分和药学上可接受的辅料制成，所述活性成分为权利要求1～4任一项所述的组合物。

9.一种治疗脑卒中的注射剂，其特征在于，所述注射剂由活性成分和溶媒制成，所述活性成分为权利要求1～4任一项所述的组合物，所述溶媒为pH 7.4的磷酸盐缓冲液。

10.权利要求9所述的治疗脑卒中的注射剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将活性成分加入至pH 7.4的磷酸盐缓冲液中，混匀。