CN116589425A

CN116589425A - 组织蛋白酶l抑制剂

Info

Publication number: CN116589425A
Application number: CN202310440959.6A
Authority: CN
Inventors: 方李超; 王亚一; 马天伟; 宋凌; 黄政; 杨金奎; 顾硕
Original assignee: Renkui Pharmaceutical Technology Beijing Co ltd; Baifang Yingku Pharmaceutical Technology Beijing Co ltd
Current assignee: Renkui Pharmaceutical Technology Beijing Co ltd; Baifang Yingku Pharmaceutical Technology Beijing Co ltd
Priority date: 2022-12-29
Filing date: 2023-04-21
Publication date: 2023-08-15

Abstract

本申请公开了多种化合物。该多种化合物能够抑制组织蛋白酶L(CatL)。本申请还公开了提供了包含至少一种这些化合物的组合物。本申请还提供了一种或多种CatL相关疾病的治疗或预防方法。该方法可包括将组合物施用于受试者。

Description

组织蛋白酶L抑制剂

交叉引用

本申请要求2022年12月29日提交的中国申请202211702259.1、2023年1月5日提交的美国申请63/478,502和2023年3月31日提交的美国申请18/194,609的优先权，所述申请中的全部内容通过引用的方式并入本文。

技术领域

本申请一般涉及蛋白酶抑制剂，特别地，涉及组织蛋白酶L(CatL)抑制剂及其在治疗或预防与CatL相关的疾病方面的药学用途。

背景技术

组织蛋白酶是一种以丝氨酸、半胱氨酸或天冬氨酸残基为亲核试剂的蛋白酶，对消化、凝血、免疫反应、肽合成等过程至关重要。组织蛋白酶一般分为三个家族：丝氨酸蛋白酶(组织蛋白酶A和G)、天冬氨酸蛋白酶(组织蛋白酶D和E)和十一种半胱氨酸蛋白酶(组织蛋白酶B、C、F、H、K、L、O、S、V、X和W)。作为组织蛋白酶中半胱氨酸蛋白酶家族的成员，CatL参与多种生理过程，包括细胞凋亡、抗原加工和细胞外基质建模。它还与病理状态有关，例如肿瘤侵袭和转移、慢性炎症、糖尿病、心血管疾病、肾脏疾病、骨骼疾病、神经退行性疾病以及病毒感染。因此，需要开发新的CatL抑制剂用于与CatL相关疾病的治疗或预防。

发明内容

根据本申请的一个方面，提供了一种化合物。化合物可由化学式(I-a)表示：

其中，R₁和R₂独立地选自H、-CH₂-基团和烷基；R₁和R₂未连接或通过单键连接；W是CO或SO₂；R₃为烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基或杂环基，R₃可选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、芳基、杂环基和烷氧基中的一个或多个基团取代；X₁为CH基团或N；X₂为O、S或N-R₄，其中R₄选自H、烷基、芳基和杂环基；X₃为H、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基，X₃可选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基和烷氧基中的一个或多个基团取代；Z₁为CH基团、C-R₅或N；Z₂为CH基团、C-R₆或N；Z₃为CH基团、C-R₇或N；以及Z₄为CH基团、C-R₈或N，其中，R₅-R₈独立地选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、-CN、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基，并且R₅-R₈中的每一个可选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、杂环基、环烷基、芳基和烷氧基中的一个或多个基团取代。

根据本申请的另一方面，提供了选自表1的化合物。表1在“具体实施方式”部分显示。

根据本申请的一个方面，提供了一种治疗受试者疾病的方法，包括：向患有疾病的受试者施用组合物，该组合物包含药学有效量的由式(I-a)表示的化合物、其异构体、其对映异构体、其非对映异构体、其外消旋体、其溶剂化物或其药学上可接受的盐，

其中，R₁和R₂独立地选自H、-CH₂-基团和烷基；R₁和R₂未连接或通过单键连接；W是CO或SO₂；R₃为烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基或杂环基，R₃可选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、芳基、杂环基和烷氧基中的一个或多个基团取代；X₁为CH基团或N；X₂为O、S或N-R₄，其中R₄选自H、烷基、芳基和杂环基；X₃为H、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基，X₃可选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基和烷氧基中的一个或多个基团取代；Z₁为CH基团、C-R₅或N；Z₂为CH基团、C-R₆或N；Z₃为CH基团、C-R₇或N；以及Z₄为CH基团、C-R₈或N，其中，R₅-R₈独立地选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、-CN、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基，并且R₅-R₈中的每一个可选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、杂环基、环烷基、芳基和烷氧基中的一个或多个基团取代，其中，该疾病包括严重急性呼吸系统综合症(SARS)、冠状病毒病19(COVID-19)、冠状病毒的长期影响(long COVID)、COVID-19的急性后遗症(PASC)、埃博拉病毒感染、中东呼吸道综合征(MERS)、单纯疱疹病毒感染、呼吸道合胞病毒(RSV)感染、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、ARDS诱发的多器官衰竭、急性肾损伤(AKI)、肝损伤、肝纤维化、癌症、骨质疏松症、炎症、动脉粥样硬化、肾脏疾病、骨骼疾病或糖尿病中的至少一种。

附加特征将部分地在随后的描述中阐述，并且部分地对于本领域技术人员在检查以下和附图时将变得显而易见，或者可以通过实施例的产生或操作而获知。本申请的特征可以通过实践或使用在下面讨论的详细示例中阐述的方法、手段和组合的各个方面来实现和获得。

附图说明

本申请将通过示例性实施例进行进一步描述。这些示例性实施例将通过附图进行详细描述。附图未按比例绘制。这些实施例是非限制性的示例性实施例，在这些实施例中，各图中相同的编号表示相似的结构，其中：

图1是根据本申请的一些实施例的制备化合物A-7的示例性常规步骤A的示意图；

图2是根据本申请的一些实施例的基于化合物A-7制备化合物A-8的示例性步骤B-1的示意图；

图3是根据本申请的一些实施例的基于化合物A-7制备化合物A-8的示例性步骤B-2的示意图；

图4是根据本申请的一些实施例的基于化合物A-7制备化合物A-8的示例性步骤B-3的示意图；

图5是根据本申请的一些实施例的制备中间体I-1的示例性步骤的示意图；

图6是根据本申请的一些实施例的制备中间体I-2的示例性步骤的示意图；

图7是根据本申请的一些实施例的制备中间体I-3的示例性步骤的示意图；

图8是根据本申请的一些实施例的制备中间体I-4的示例性步骤的示意图；

图9是根据本申请的一些实施例的制备中间体I-5的示例性步骤的示意图；

图10是根据本申请的一些实施例的制备中间体I-6的示例性步骤的示意图；

图11是根据本申请的一些实施例的制备中间体I-7的示例性步骤的示意图；

图12是根据本申请的一些实施例的制备中间体I-8的示例性步骤的示意图；

图13是根据本申请的一些实施例的制备中间体I-9的示例性步骤的示意图；

图14是根据本申请的一些实施例的制备化合物1的示例性步骤的示意图；

图15是根据本申请的一些实施例的制备化合物2的示例性步骤的示意图；

图16是根据本申请的一些实施例的制备化合物3的示例性步骤的示意图；

图17是根据本申请的一些实施例的制备化合物4的示例性步骤的示意图；

图18是根据本申请的一些实施例的制备化合物5的示例性步骤的示意图；

图19是根据本申请的一些实施例的制备化合物6的示例性步骤的示意图；

图20是根据本申请的一些实施例的制备化合物7的示例性步骤的示意图；

图21是根据本申请的一些实施例的制备化合物8的示例性步骤的示意图；

图22是根据本申请的一些实施例的制备化合物9的示例性步骤的示意图；

图23是根据本申请的一些实施例的制备化合物10的示例性步骤的示意图；

图24是根据本申请的一些实施例的制备化合物11的示例性步骤的示意图；

图25是根据本申请的一些实施例的制备化合物12的示例性步骤的示意图；

图26是根据本申请的一些实施例的制备化合物13的示例性步骤的示意图；

图27是根据本申请的一些实施例的制备化合物14的示例性步骤的示意图；

图28是根据本申请的一些实施例的制备化合物15的示例性步骤的示意图；

图29是根据本申请的一些实施例的制备化合物16的示例性步骤的示意图；

图30是根据本申请的一些实施例的制备化合物17的示例性步骤的示意图；

图31是根据本申请的一些实施例的制备化合物18的示例性步骤的示意图；

图32是根据本申请的一些实施例的制备化合物19的示例性步骤的示意图；

图33是根据本申请的一些实施例的制备化合物20的示例性步骤的示意图；

图34是根据本申请的一些实施例的制备化合物21的示例性步骤的示意图；

图35是根据本申请的一些实施例的制备化合物22的示例性步骤的示意图；

图36是根据本申请的一些实施例的制备化合物23的示例性步骤的示意图；

图37是根据本申请的一些实施例的制备化合物24的示例性步骤的示意图；

图38是根据本申请的一些实施例的制备化合物25的示例性步骤的示意图；

图39是根据本申请的一些实施例的制备化合物26的示例性步骤的示意图；

图40是根据本申请的一些实施例的制备化合物27的示例性步骤的示意图；

图41是根据本申请的一些实施例的制备化合物28的示例性步骤的示意图；

图42是根据本申请的一些实施例的制备化合物29的示例性步骤的示意图；

图43是根据本申请的一些实施例的制备化合物30的示例性步骤的示意图；

图44是根据本申请的一些实施例的制备化合物31的示例性步骤的示意图；

图45是根据本申请的一些实施例的制备化合物32的示例性步骤的示意图；

图46是根据本申请的一些实施例的制备化合物33的示例性步骤的示意图；

图47是根据本申请的一些实施例的制备化合物34的示例性步骤的示意图；

图48是根据本申请的一些实施例的制备化合物35的示例性步骤的示意图；

图49是根据本申请的一些实施例的制备化合物36的示例性步骤的示意图；

图50是根据本申请的一些实施例的制备化合物37的示例性步骤的示意图；

图51是根据本申请的一些实施例的制备化合物38的示例性步骤的示意图；

图52是根据本申请的一些实施例的制备化合物39的示例性步骤的示意图；

图53是根据本申请的一些实施例的制备化合物40的示例性步骤的示意图；

图54是根据本申请的一些实施例的制备化合物41的示例性步骤的示意图；

图55是根据本申请的一些实施例的制备化合物42的示例性步骤的示意图；

图56是根据本申请的一些实施例的制备化合物43的示例性步骤的示意图；

图57是根据本申请的一些实施例的制备化合物44的示例性步骤的示意图；

图58是根据本申请的一些实施例的制备化合物45的示例性步骤的示意图；

图59是根据本申请的一些实施例的制备化合物46的示例性步骤的示意图

图60是根据本申请的一些实施例的制备化合物47的示例性步骤的示意图

图61是根据本申请的一些实施例的制备化合物48的示例性步骤的示意图。

具体实施方式

提供以下描述以使本领域的任何技术人员能够制作和使用本申请并且在特定应用及其要求的上下文中提供。对所公开的实施例的各种修改对于本领域技术人员而言将是显而易见的，并且在不脱离本申请的精神和范围的情况下，本文定义的一般原理可以应用于其他实施例和应用。因此，本申请不限于所示的实施例，而是符合与申请专利范围一致的最广泛范围。

此处使用的术语仅用于描述特定的示例实施例并且不旨在限制。如本文所用，单数形式“一”、“一个”和“该”同样可以包括复数形式，除非上下文另有明确指示。还应当理解，如在本申请说明书中使用的术语“包括”、“包含”仅提示存在所述特征、整数、步骤、操作、组件和/或部件，但并不排除存在或添加一个或以上其它特征、整数、步骤、操作、组件、部件和/或其组合的情况。

根据以下对附图的描述，本申请的这些和其它的特征、特点以及相关结构元件的功能和操作方法，以及部件组合和制造经济性，可以变得更加显而易见，这些附图都构成本申请说明书的一部分。然而，应当理解的是，附图仅仅是为了说明和描述的目的，并不旨在限制本申请的范围。应当理解的是，附图并不是按比例绘制的。

根据本申请的一个方面，提供了多种化合物。这些化合物能够抑制CatL并可用于治疗或预防受试者的CatL相关疾病。如本文所用，术语“抑制CatL”是指在局部(例如，体外和/或体内)降低CatL的活性和/或CatL的含量。为方便起见，本申请提供的这些化合物在本文中称为“化合物”。在一些实施例中，化合物可由式(I-a)表示：

在一些实施例中，在式(I-a)中，W可以是CO或SO₂。当W为CO时，化合物可由式(I-b)表示：

当W为SO₂时，化合物可以由式(I-c)表示：

在一些实施例中，R₁和R₂可独立地选自H、-CH₂-基团和烷基。在一些实施例中，R₁和R₂可以不连接或通过单键连接。

在一些实施例中，R₃可以是烷基、氟代烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基或杂环基，且R₃可任选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、芳基、杂环基和烷氧基中的一个或多个基团取代。

在一些实施例中，X₁可以是CH基团或N。在一些实施例中，X₂可以是O、S或N-R₄，且R₄可选自H、烷基、芳基及杂环基。

在一些实施例中，X₃可以是H、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基，且X₃可任选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基和烷氧基中的一个或多个基团取代。

在一些实施例中，Z₁可以是CH基团、C-R₅或N。在一些实施例中，Z₂可以是CH基团、C-R₆或N。在一些实施例中，Z₃可以是CH基团、C-R₇或N。

在一些实施例中，Z₄可以是CH基团、C-R₈或N。在一些实施例中，R₅-R₈可独立地选自H、卤素、羟基、烷基、氟代烷基、-CN、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基，和杂环基，并且R₅-R₈中的每一个可以任选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、杂环基团、环烷基、和芳基和烷氧基中的一个或多个基团取代。

在一些实施例中，化合物可由式(II)表示：

在一些实施例中，化合物可由式(III)表示：

在一些实施例中，化合物可由式(IV)表示：

在一些实施例中，R₀可以是H、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基，且R₀可任选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基和烷氧基中的一个或多个基团取代。

在一些实施例中，化合物可由式(V)表示：

在一些实施例中，R₅-R₈中的至少一个为H。例如，R₅-R₈均为H。

在一些实施例中，R₅-R₈中的至少一个为卤素或者-CN，其余为H。

在一些实施例中，R₅-R₈中的至少一个为吡唑基团，且任选被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基中的一个或多个基团取代。例如，R₅-R₈中的一个为由式(VI-a)表示的基团：

在一些实施例中，R₉可以为H、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基。在一些实施例中，R₁₀和R₁₁可独立地选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基。式(VI-a)可以与式(II)、式(III)、式(IV)或式(V)所示的苯并恶唑基团在甲基处相连。此时，化合物可由式(II-a)、式(II-b)、式(II-c)或式(II-d)表示：

在一些实施例中，R₉-R₁₀可以是H，且化合物可以由式(II-a1)表示：

在一些实施例中，R₅-R₈中的至少一个是环烷基或杂环基，其任选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基中的一个或多个基团取代，R₅-R₈中的其他基团是氢。例如，R₅-R₈中一个可以是由式(VI-b)表示的基团：

在一些实施例中，X₄可以是S、O、SO₂、N、C或C-L₁。L₁可以选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基，并且L₁可以任选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、芳基、杂环基和烷氧基中的一个或多个基团取代。在一些实施例中，X₅可以是N或C。在一些实施例中，R₁₂不存在，或可选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基，并且可以任选被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、芳基、杂环基和烷氧基中的一个或多个基团取代。在一些实施例中，R₁₃-R₁₆可独立地选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基，并且R₁₃-R₁₆中的每一个可以任选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、芳基、杂环基和烷氧基中的一个或多个基团取代。

式(VI-b)可以与式(II)、式(III)、式(IV)或式(V)所示的苯并恶唑基在X₅处连接。在一些实施方式中，式(VI-b)中的X₄和X₅可以均为N，化合物可以由式(II-e)、式(II-f)、式(II-g)或式(II-h)表示：

在一些实施例中，在式(VI-b)中，X₄和X₅均为氮，R₁₂为甲基，且R₁₃-R₁₆为H，在此情况下，化合物可以由式(II-g1)表示：

作为另一个例子，R₅-R₈中的一个可以是由式(VI-c)表示的集团：

在一些实施例中，X₆可以是S、O、SO₂、N、C或C-L₂。L₂可选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基基团、芳基、杂芳基和杂环基。L₂可以任选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、芳基、杂环基和烷氧基中的一个或多个基团取代。在一些实施例中，R₁₇不存在，或可选自H、卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基基团，并且可以任选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、芳基、杂环基和烷氧基中的一个或多个基团取代。在一些实施例中，R₁₈-R₂₁可独立地选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基，并且R₁₈-R₂₁中的每一个可以任选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、芳基、杂环基和烷氧基中的一个或多个基团取代。

式(VI-c)可以与式(II)、式(III)、式(IV)或式(V)所示的苯并恶唑基团在甲基处相连。在一些实施例中，式(VI-c)中的X₆可以是N，且化合物可以由式(II-i)、式(II-j)、式(II-k)或式(II-l)表示：

/>

在一些实施例中，在式(VI-c)中，X₆为N，R₁₈-R₂₁为H，且R₁₇为甲基、-CH₂-CHF₂或-C₂H₄-OCH₃，在这种情况下，化合物可以由式(II-k1)、式(II-k2)和式(II-k2)表示：

作为又一示例，R₅-R₈之一可以是由式(VI-d)表示的基团：

在一些实施例中，R₂₂可以为H、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基，且R₂₂可任选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基和烷氧基中的一个或多个基团取代。在一些实施例中，R₂₃-R₂₅可独立地选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基。

在此情况下，化合物可由式(II-m)、式(II-n)、式(II-o)或式(II-p)表示：

/>

在一些实施例中，在式(VI-d)中，R₂₂为甲基，且R₂₃-R₂₅为H，在此情况下，化合物可由式(II-o1)表示：

在一些实施例中，R₅-R₈中的至少一个为杂芳基，其任选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基中的一个或多个基团取代，R₅-R₈中其余部分为H。例如，R₅-R₈中的一个可以为式(VI-e)表示的基团：

在一些实施例中，R₂₆-R₂₉可独立地选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基、杂环基，以及N-R₃₈，其中R₃₈可以选自H、烷基、芳基、杂环基和酮基。

式(VI-e)可以与式(II)、式(III)、式(IV)或式(V)所示的苯并恶唑基团在甲基处相连。在此情况下，化合物可由式(II-q)、式(II-r)、式(II-s)或式(II-t)表示：

/>

在一些实施例中，在式(VI-e)中，R₂₇-R₂₉为H，且R₂₆为甲基、-CHF₂或环丙基，因此，该化合物可由式(II-r1)、式(II-r2)、式(II-r3)表示：

又例如，R₅-R₈中的一个可以是式(VI-f)表示的基团：

在一些实施例中，R₃₀-R₃₃可独立地选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基、杂环基，N-R₃₈，其中R₃₈可以选自H、烷基、芳基、杂环基和酮基。

式(VI-f)可以与式(II)、式(III)、式(IV)或式(V)所示的苯并恶唑基团在甲基处相连。在此情况下，化合物可由式(II-u)、式(II-v)、式(II-w)或式(II-x)表示：

/>

在一些实施例中，在式(VI-f)中，R₃₁-R₃₃为H，且R₃₀为甲基、-NH₂、-NC_2H6、-NHCOCH₃或-NHCH₃，因此，化合物可由式(II-v1)、式(II-v2)、式(II-v3)、式(II-v4)和式(II-v5)表示：

/>

又例如，R₅-R₈中的一个可以是由式(VI-g)表示的基团：

在一些实施例中，R₃₄-R₃₇可独立地选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基、杂环基，和N-R₃₈，其中R₃₈可以选自H、烷基、芳基、杂环基和酮基。

式(VI-g)可以与式(II)、式(III)、式(IV)或式(V)所示的苯并恶唑基团在甲基处相连。在这种情况下，化合物可以由式(II-y)表示：

在一些实施例中，在式(VI-g)中，R₃₅-R₃₇为H，且R₃₄为甲基，因此，化合物可由式(II-y1)表示：

在一些实施方式中，R₃可以是芳基，并且R₃可以任选地被选自卤素、环烷基、氟代烷基、甲基、乙基、丙基和丁基中的一个或多个基团取代。例如，R₃可以是苯卤化基团。

在一些实施例中，R₃可以是杂环基团，并且R₃可以任选地被选自卤素、环烷基、氟代烷基、甲基、乙基、丙基和丁基中的一个或多个基团取代。例如，R₃为式(VII-a)所示的基团：

在一些实施例中，R₃₉-R₄₂可独立地选自H、卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基、杂环基，和N-R₄₉，其中R₄₉选自H、烷基、芳基、杂环基和酮基。式(VII-a)可与式(II)、式(III)、式(IV)或式(V)所示的-CO-或-SO₂-在甲基处连接。在这种情况下，化合物可以由式(II-aa)表示：

在一些实施例中，R₄₀-R₄₂为H，且R₃₉为甲基，因此，化合物可由式(II-aa1)表示：

在一些实施例中，R₃可选自咪唑基、吡咯基、吡唑基、三唑基、哌啶基、吡啶基、嘧啶基和哒嗪基，且R₃可任选地被选自环烷基、氟烷基、甲基和叔丁基中的一个或多个基团取代。例如，R₃为式(VII-b)所示的基团：

在一些实施例中，R₄₃可为H、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基。在一些实施例中，R₄₄和R₄₅可独立地选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基，并且R₄₄和R₄₅中的每一个可以任选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、芳基、杂环基和烷氧基中的一个或多个基团取代。式(VII-b)可与式(II)、式(III)、式(IV)或式(V)所示的-CO-或-SO₂-在甲基处连接。在此情况下，化合物可以由式(II-bb)表示：

/>

在一些实施例中，R₄₅是H，R₄₃是甲基、环丙基或并且R₄₄是叔丁基、环丙基或

又例如，R₃为式(VII-c)所示的基团：

在一些实施例中，R₄₆可以是H、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基。在一些实施例中，R₄₇和R₄₈可独立地选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基，并且R₄₇和R₄₈中的每一个任选被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、芳基、杂环基和烷氧基中的一个或多个基团取代。式(VII-c)可与式(II)、式(III)、式(IV)或式(V)所示的-CO-或-SO₂-在甲基处连接。在此情况下，化合物可以由式(II-cc)表示：

在一些实施例中，R₄₈是H，R₄₆是甲基、-CHF₂或-CF₃，并且R₄₇是环丙基。

在一些实施例中，R₁和R₂可以是H。在一些实施例中，R₁和R₂可以是通过单键连接的-CH₂-基团。

表1中示出了一些CatL抑制剂的示例性化合物。

表1：CatL抑制剂的示例性化合物

/>

应该注意的是，上面表1中列出的化合物仅用于说明目的。由本申请中呈现的式(例如，式(I-a)、式(I-b)、式(I-c)、式(II)、式(III)、式(IV)、和式(V))表示的其他化合物也在本申请的范围内。

根据本申请的另一个方面，提供了一种组合物。该组合物可以包括药学有效量的前述化合物、其异构体、其对映异构体、其非对映异构体、其外消旋体、其溶剂化物或其药学上可接受的盐的至少一种。

在一些实施例中，组合物可进一步包含药学上可接受的载体。例如，载体可包括涂层、胶囊、微胶囊、纳米胶囊等，或其任何组合。应当注意，载体可能需要是无毒的并且可能对药物组合物中的关键成分(例如，上述化合物)的活性没有显着影响。在一些实施例中，载体可以保护关键成分免受一些不期望的条件，例如，关键成分的氧化、分解或失活的影响。例如，胃中的酶或相对较低的pH值可能导致关键成分分解或失活。载体可以通过保护药物组合物中的关键成分来帮助维持或增加药物组合物的功效。在一些实施例中，载体可用于关键成分的控制释放。控释可以包括但不限于缓释、缓释、靶向释放等。例如，载体可以包括由胶原蛋白、明胶、壳聚糖、海藻酸盐、聚乙烯醇、聚环氧乙烷、淀粉、交联淀粉等或其任意组合制成的水凝胶胶囊、微胶囊或纳米胶囊。在一些实施例中，载体可以促进药物组合物中关键成分(例如，至少一种前述化合物)的控制释放。

在一些实施例中，可以通过口服给药、注射给药、吸入给药或局部给药将组合物给药至受试者。在一些实施例中，注射给药可包括皮下注射、肌内注射、静脉内注射等。在一些实施例中，注射施用可以包括将组合物注射到肿瘤或靠近肿瘤的区域中。在一些实施例中，注射给药可以包括将组合物注射到肾脏、肝脏、心脏、甲状腺或关节中。在一些实施例中，吸入给药可以包括施用经气溶胶喷雾剂、雾剂或粉末分散的组合物。在一些实施例中，局部给药可以包括将组合物施用到皮肤上以减轻癌症如皮肤癌或淋巴瘤。在一些实施例中，局部给药可包括阴道给药、直肠给药、鼻腔给药、耳道给药、髓内给药、关节内给药、胸膜内给药等，或其任何组合。在一些实施例中，可以通过不同给药方式的组合将组合物给药至受试者。在一些实施例中，该方法可包括按照每天三次、每天两次、每天一次、每两天一次等向受试者施用组合物。

在一些实施例中，提供了治疗受试者疾病的方法。该方法可包括将前述的组合物施用给受试者。

在一些实施例中，受试者是人。在一些实施例中，受试者是非人类动物。在一些实施例中，受试者是雄性。在一些实施例中，受试者是雌性。在一些实施例中，受试者患有疾病或出现病理状况。

在一些实施例中，该疾病可能由病毒感染引起。本申请提供的化合物显示出了显著的抗病毒作用。因此，所述化合物可用于治疗与病毒感染相关的疾病。

例如，疾病可包括严重急性呼吸系统综合症(SARS)、严重急性呼吸综合症冠状病毒1(SARS-CoV-1)感染、严重急性呼吸综合症冠状病毒2(SARS-CoV-2)感染或冠状病毒病19(COVID-19)。仅作为示例，上述化合物可用于治疗冠状病毒的长期影响(long COVID)或COVID-19的急性后遗症(PASC)。严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(SARS-CoV-2)是一种冠状病毒，在过去三年中引起了2019年冠状病毒病(COVID-19)大流行。它对全世界的公共卫生和社会经济系统构成巨大威胁。迄今为止，大多数COVID-19治疗都集中在靶向病毒刺突蛋白(S蛋白)和病毒蛋白酶(主要是3C型蛋白酶和木瓜蛋白酶型蛋白酶)上。这些治疗可有效预防SARS-CoV-2感染和COVID-19的严重症状。然而，具有免疫逃逸性的和高度传染性的SARS-CoV-2变种继续出现并在世界范围内传播。这就需要创新策略来开发新的抗病毒药物来对抗COVID-19。

又例如，疾病可以包括单纯疱疹病毒(HSV)感染。被称为疱疹的单纯疱疹病毒感染在全球很常见。有些药物可以减轻症状的严重程度和患病频率，但它们可能无法被治愈。胱抑素C是一种存在于细胞外液中的人半胱氨酸蛋白酶抑制剂。测试了胱抑素C和一种模拟其蛋白酶结合中心的三肽衍生物(Z-LVG-CHN2)对单纯疱疹病毒1型和脊髓灰质炎病毒1型的可能的抗病毒活性(J Virol，1990年2月；64(2)：941-943)。因此，本申请提供的化合物可用于治疗HSV感染。

又例如，该疾病可以包括呼吸道合胞病毒(RSV)感染。人类RSV是所有年龄段中引起下呼吸道感染的全球性的常见病因。RSV感染经常出现在婴儿、老年人和免疫功能低的患者中。RSV具有高度传染性，可能致命。目前没有可用于预防RSV感染的疫苗。目前用于治疗RSV感染的抗病毒药物具有明显的局限性。迫切需要寻找能够满足临床需求的新型药物。RSV感染增加了多种宿主蛋白酶的表达和活性，包括蛋白酶中MMP和组织蛋白酶家族。诱导表达的宿主蛋白酶反应可促进RSV感染，并可能在病情发展中起主要作用。选择性组织蛋白酶L抑制剂单用或与其他宿主蛋白酶抑制剂的联用，有可能增强RSV清除率，并防止RSV诱导的气道高反应性和过敏反应。有研究表明，组织蛋白酶抑制剂E64或利巴韦林可抑制RSV感染的小鼠的气道高反应性，增强病毒清除。(Mucosal Immunol，2015年1月；8(1)：161-175)。因此，本申请提供的化合物可用于治疗RSV感染。

又例如，疾病可以包括埃博拉病毒感染或中东呼吸综合征(MERS)。

在一些实施例中，疾病可以是急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，或ARDS诱导的多器官(例如，肺、肾、肝)的衰竭。

在一些实施例中，该疾病可以是急性肾损伤(AKI)。例如，AKI可能由抗癌药物、微生物感染、寄生虫等引起。

在一些实施例中，疾病可以是肝损伤或肝纤维化。

在一些实施例中，疾病可以是癌症。

在一些实施例中，疾病可以是骨质疏松症。

在一些实施例中，疾病可以是炎症。

在一些实施例中，疾病可以是动脉粥样硬化。

在一些实施例中，疾病可以是肾脏疾病或骨骼疾病。

在一些实施例中，疾病可以是糖尿病。

在一些实施例中，该方法可包括受试者口服组合物、向受试者注射组合物或通过局部给药向受试者施用组合物。

根据本申请的另一个方面，提供了一种在受试者中抑制组织蛋白酶L的方法。该方法可包括将先前描述的组合物施用给受试者。

在一些实施例中，向受试者施用组合物可包括：使受试者口服组合物、使受试者吸入该组合物、将组合物注射给受试者或通过局部给药向受试者施用组合物。

根据本申请的另一个方面，提供了前述化合物在受试者体内抑制组织蛋白酶L的用途。化合物的用途可以包括在抑制组织蛋白酶L的方法中提及的步骤。

根据本申请的另一个方面，提供了至少一种前述化合物在制备用于治疗受试者疾病的组合物中的用途。

下面通过实施例对本发明作进一步说明，但不应理解为对本发明保护范围的限制。

实施例

缩略语

Ac＝乙酰基

Ac₂O＝乙酸酐

Boc₂O＝二碳酸二叔丁酯

DCM＝二氯甲烷

DIPEA＝N，N-二异丙基乙胺或N-乙基-N-异丙基-丙-2-胺

DMAP＝二甲基氨基吡啶

DMA＝二甲基乙酰胺

DME＝二甲氧基乙烷

DMF＝二甲基甲酰胺

DMSO＝二甲基亚砜

EtOAc/EA＝乙酸乙酯

EtOH＝乙醇

FA＝甲酸

HATU＝1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐HOAc＝醋酸

KOAc＝醋酸钾

LiHMDS＝双(三甲基甲硅烷基)氨基锂

MeMgBr＝甲基溴化镁

MeOH＝甲醇

NaOAc＝乙酸钠

NBS＝N-溴代琥珀酰亚胺

Pd(dppf)₂Cl₂＝[1，1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯钯(II)

PE＝石油醚

PTSA＝p-甲苯磺酸一水合物

rt＝房间(环境)温度

T3P＝2，4，6-三丙基-1，3，5，2，4，6-三氧杂三膦烷-2，4，6-三氧化物

TEA＝三乙胺

TFA＝三氟乙酸

THF＝四氢呋喃

TsCl＝对甲苯磺酰氯

UV＝紫外线

X-Phos＝2-二环己基膦基-2'，4'，6'-三异丙基联苯

实施例1-化合物对CatL的抑制

体外生物学数据

人组织蛋白酶L(CatL)酶活试验

在检测缓冲液(50mM MES，pH＝5.5，2.5mM DTT，0.5mM EDTA)中进行人组织蛋白酶L酶活试验，以评估受试化合物对人类CatL蛋白酶活性的抑制作用。将60μL化合物添加到384孔稀释板中。化合物溶液按照1：3用DMSO依次稀释，每列10pts。使用Echo(LABCYTE 655)将0.05μL稀释的化合物溶液添加到384孔检测板(Corning4514)的每行中，每列包含2个重复孔。将5μL人类CatL酶(Abcam#ab81780)的工作液加入到384孔检测板中，1000rpm在离心1分钟。将混合物在25℃下孵育15分钟，然后添加5μL CatL底物(GensC-Ript#C7360HB140_5)工作液以启动反应(CatL：0.05nM，底物：500nM)。在25℃下孵育30分钟。使用BMG CLARIOStar Plusaucu读取Ex370 nm和Em460 nm的荧光信号。计算每种化合物的抑制百分比，并通过XLfit5.5.0进行非线性回归拟合得到IC₅₀(半抑制浓度)。CatL酶活试验的结果显示在下表2中。

表2：用于抑制CatL的化合物1-48的IC₅₀

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该实施例表明本申请提供的化合物可以有效地用作CatL抑制剂。根据试验结果，化合物1-48中的许多化合物对CatL表现出显著的抑制能力。具体而言，用于抑制CatL的化合物1-4、6-9、13、15、19-22、24-29、31和44的IC₅₀小于50nM。此外，用于抑制CatL的化合物2、3、6、13、20-22、24、26、27、29、33-35、38-43和45-48的IC₅₀小于10nM。

实施例2-假病毒感染试验

为了感染宿主，SARS-CoV-2需要进入宿主细胞进行病毒复制。这取决于宿主细胞蛋白酶(主要是弗林蛋白酶、TMPRSS2和组织蛋白酶L(也称为CatL或CTSL))对病毒S蛋白的正确切割和激活。TMPRSS2和弗林蛋白酶在不同位点切割病毒S蛋白，激活病毒进入宿主细胞。然后CatL将S蛋白切割成更小的片段，促进病毒和内吞体膜之间的融合，从而允许病毒基因组释放到宿主细胞中进行病毒复制。CatL切割位点在所有已知的SARS-CoV-2变体中高度保守。因此，单独抑制CatL或协同抑制其他宿主蛋白酶可能会阻止S蛋白的正确加工，以及SARS-CoV-2及其变体的感染。

使用已报告的方法构建与SARS-CoV-2的S蛋白结合的假病毒(PsVs)或突变体。对于基于VSV的PsV系统，主干由VSV-G假型病毒(G*ΔG-VSV)提供，其中VSV基因组中的VSV-G被萤火虫荧光素酶替代。为了实现对PsV的定量，使用QIAamp病毒RNA迷你试剂盒(目录号52906，QIAGEN)提取病毒RNA，并按照制造商要求使用RevertAidTM First Strand cDNA合成试剂盒(Fermentas K1622)进行逆转录。然后使用SYBR Green I Master Mix试剂(Roche)在96实时荧光定量PCR系统(Roche)上进行实时qPCR。对VSV病毒的P蛋白基因进行定量，并据此计算病毒复制数目。正向引物是：TCTCGTCTGGATCAGGCGG(SEQ IDNO：1)；反向引物是：TGCTCCTTCCACTCCATCCTCTTGG(SEQ ID NO：2)。所有PsV的用量都标准化为前述相同的量。(参见Zhao，MM等。在SARS-CoV-2刺突蛋白中发现了新的切割位点，揭示了组织蛋白酶L促进病毒感染的机制和治疗策略。细胞发现。8：53-70(2022))

将Vero E6细胞放置在Dulbecco改良Eagle的高葡萄糖细胞培养基(DMEM)(Sigma–Aldrich，St.Louis，MO，USA)中，该培养基补充有10％胎牛血清(FBS，Gibco，Carlsbad，CA)、100单位/mL青霉素-链霉素(Gibco)。所有细胞都保持在37℃的包含有95％的空气和5％的CO₂潮湿气氛中。

为评估受测化合物的抗病毒作用，将Vero E6细胞接种在96孔细胞培养板中，然后与不同浓度的受测化合物和SARS-CoV-2PsV(在每孔中加入100μL标准化PsV)共同被处理。在37℃下孵育24小时后，按照制造商的说明，使用荧光素酶底物(PerkinElmer，BRITELITEPLUS 100ml KIT，目录号6066761)测量细胞裂解物中萤火虫荧光素酶的活性。使用光度计(Promega)量化荧光素酶活性。感染率是参照仅包含溶媒的对照反应计算的。假病毒感染试验的结果如下表3所示。

表3：化合物1-48在假病毒感染试验中的结果

该实施例表明本申请提供的化合物可有效保护细胞免受病毒感染，可用于治疗或预防与病毒(如SARS-CoV-2)感染相关的疾病。根据表3中的结果，化合物1-48中的许多化合物在500nM至5uM时能够以剂量依赖性方式保护细胞免受假病毒感染，并且一些化合物(例如，化合物29、45、46)在500nM时表现出几乎完全的保护作用。

实施例3-化合物1-48的制备

常规步骤A

图1说明了制备化合物A-7的常规步骤A。如图1所示，常规步骤A可以包括步骤A-D。

步骤A苯并恶唑成环的制备

将(叔丁氧基羰基)-L-天冬酰胺酸乙酯(A-1，1当量)溶于1，2-二氯乙烷(0.2M)中，在氮气中分次加入Et₃O⁺BF₄-(1.2当量)。将所得混合物在RT(室温)下搅拌24小时。将溶于2mL乙醇(2M)中的(取代后的)氨基苯酚(A-2，1当量)的溶液通过注射器转移到溶液中。将混合物加热至90℃并搅拌24小时。将反应混合物冷却至室温，加入饱和NaHCO₃(溶液)，然后将水层用二氯甲烷萃取。复合有机层用盐水洗涤并经无水Na₂SO₄干燥。过滤和浓缩后，粗产物通过色谱法纯化(PE中的EtOAc，25％至50％)，得到所需产物A-3。

步骤B酯水解

将酯A-3(1当量)加入THF(0.1M)和1N LiOH(水溶液，3当量)中，在室温下搅拌3小时。用HCl(1M)将反应溶液调节至pH＝7，然后用DCM/MeOH(v/v，10：1)萃取。复合有机层经分离、干燥(MgSO₄)并浓缩以获得所需产物A-4。

步骤C酰胺偶联(C端)

向酸A-4(1当量)，在1-氨基环丙烷-1-腈盐酸盐A-5(1.2当量)和T₃P(50wt％EA溶液，1.1当量)的DCM(0.2M)搅拌溶液中添加DIPEA(4当量)。将反应混合物在N₂下室温中搅拌3小时。将反应混合物浓缩并通过色谱法纯化(EtOAc的PE溶液，40％至100％)，得到所需产物A-6。

步骤D N-Boc脱保护

将受保护的胺A-6的HCOOH(0.4M)溶液在25℃下搅拌5小时。在20℃下将混合物用氮气吹干，用饱和NaHCO₃(溶液)碱化并用EA萃取。将复合有机层浓缩，得到所需产物A-7。

常规步骤B-1

图2示出了基于化合物A-7制备化合物A-8的常规步骤B-1。

将胺A-7(1当量)、酰氯(1.1当量)和DIPEA(3当量)的DCM(0.5M)溶液在25℃下搅拌2小时。反应混合物经浓缩后，残余物通过预

制备型高效液相色谱法(HPLC)[(Gemini-C18，150×21.2mm，5um；ACN-H₂O(0.1％FA)；15％-80％)]纯化得到所需的产物A-8。

常规步骤B-2

图3示出了基于化合物A-7制备化合物A-8的常规步骤B-2。

向胺A-7、酸(1.2当量)和DIPEA(4当量)的DCM(0.1M)搅拌溶液逐滴添加T₃P(50wt％DMF溶液，1.2当量)。将反应在25℃下搅拌3小时。将反应混合物用水淬灭并用DCM萃取。复合有机层经Na₂SO₄干燥并真空浓缩得到粗产物，其通过制备型HPLC[(Gemini-C18，150×21.2mm，5um；ACN-H₂O(0.1％FA)；15％-80％)]纯化得到所需的产物A-8。

常规步骤B-3

图4示出了基于化合物A-7制备化合物A-8的常规步骤B-3。

向胺A-7(70mg，0.2mmol)的DMF(0.2M)搅拌溶液中加入酸(1当量)、DIPEA(5当量)和HATU(3当量)。将反应混合物在N₂下室温中搅拌2小时。反应完成后，将H₂O加入到反应混合物中，并用EA萃取。将复合有机层用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥。过滤后，溶液在真空中浓缩，残余物通过制备型HPLC纯化，得到所需的产物A-8。

中间体的制备中间体I-1：3-(叔丁基)-1-环丙基-1H-吡唑-5-羧酸的制备

图5是根据本申请的一些实施例的制备中间体I-1的示例性步骤的示意图。

步骤1 3-(叔丁基)-1-环丙基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯的制备

在环丙基肼盐酸盐(1.5g，0.0138mol)的EtOH(40mL)溶液中加入5N NaOH溶液(3mL)并在0℃搅拌10分钟。然后将混合物添加到5，5-二甲基-2，4-二氧己酸乙酯(4.14g，0.02mol)的乙醇溶液中。将所得混合物在60℃下搅拌16小时。将混合物浓缩并将残余物通过快速柱(PE/EA＝50：1)纯化以得到呈无色油状的产物(1.79g，50.3％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：237.1[M+H]⁺。

步骤2 3-(叔丁基)-1-环丙基-1H-吡唑-5-甲酸的制备

在3-(叔丁基)-1-环丙基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(1.79g，7.6mmol)的THF(18mL)溶液中加入H₂O(6mL)、MeOH(6mL)以及LiOH(3.19g，76mmol)，并在室温下搅拌5小时。降压除去溶剂。将残余物溶解在H₂O(20mL)中并使用1N盐酸溶液调节pH至7。然后将混合物用DCM(100mL×2)萃取。复合有机层用盐水(50mL)洗涤，然后用无水Na₂SO₄干燥。过滤后，溶液在真空下浓缩，得到浅粉色固体产物(1.45g，86％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：209.1[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ13.16(s，1H)，6.67(s，1H)，4.27(d，J＝3.8Hz，1H)，1.21(s，9H)，1.11-1.04(m，2H)，0.95(dd，J＝7.2，2.4Hz，2H)。

中间体I-2的制备：1-环丙基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酸

图6是根据本申请的一些实施例的制备中间体I-2的示例性步骤的示意图。

步骤1 1-环丙基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯的制备

在0℃下向(Z)-2-(乙氧基亚甲基)-4，4，4-三氟-3-氧代丁酸乙酯(2g，8.3mmol)的甲苯(20mL)溶液中加入环丙基肼盐酸盐(0.54g，4.9mmol)。将混合物在N₂下于50℃搅拌16小时。搅拌完成后，将混合物经真空浓缩。通过制备型TLC(PE：EA＝4：1)纯化残余物，得到呈白色固体状的产物(500mg，22％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：249.2[M+H]⁺。

步骤2 1-环丙基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酸的制备

将1-环丙基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(620mg，2.48mmol)的1N LiOH(5mL)溶液和THF(5mL)在室温下搅拌16小时。将混合物用5N氯化氢水溶液酸化至pH为3-4并用EA(20mL×3)萃取。复合有机层用盐水(20mL×2)洗涤，并经Na₂ SO₄干燥。然后过滤，浓缩滤液得到白色固体产物(447mg，70％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：221.0[M+H]⁺。

中间体I-3的制备：1-环丙基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酸

图7是根据本申请的一些实施例的制备中间体I-3的示例性步骤的示意图。

步骤1乙基(Z)-2-(乙氧基亚甲基)-4，4-二氟-3-氧代丁酸乙酯的制备

将4，4-二氟-3-氧代丁酸乙酯(5g，30mmol)和(二乙氧基甲氧基)乙烷(10mL，58mmol)的乙酸酐(30mL)溶液在N₂下于140℃搅拌6小时。完成后，将混合物在真空下浓缩，得到呈淡黄色油状的产物(5g，74％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：222.0[M+H]⁺。

步骤2 1-环丙基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯的制备

在乙基(Z)-2-(乙氧基亚甲基)-4，4-二氟-3-氧代丁酸乙酯(1.55g，0.45mmol)的甲苯(10mL)溶液加入环丙基肼盐酸盐(0.46g，4.2mmol)。将混合物在N₂下于50℃搅拌16小时。完成后，将混合物真空浓缩。通过制备型TLC(PE：EA＝5：1)纯化残余物，得到呈淡黄色固体状的产物(210mg，11％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：231.0[M+H]⁺。

步骤3 1-环丙基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酸的制备

将1-环丙基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(210mg，0.9mmol)的1N LiOH(2mL)溶液和THF(2mL)在室温下搅拌16小时。将混合物用5N氯化氢水溶液酸化至pH为3-4并用EA(20mL×3)萃取。复合有机层用盐水(20mL×2)洗涤，并经Na₂SO₄干燥。然后过滤，浓缩滤液得到白色固体产物(150mg，77％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：203.1[M+H]⁺。

中间体I-4的制备：3-(叔丁基)-1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑-5-甲酸

图8是根据本申请的一些实施例制备中间体I-4的示例性步骤的示意图。

步骤1 3-(叔丁基)-1-(氧杂环丁烷-3-基)-吡唑-5-甲酸乙酯的制备

向3-(叔丁基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(1.6g，8mmol)和K₂CO₃₍2.24g，16mmol)的DMF(8mL)溶液中加入3-碘氧杂环丁烷(1.3mL，12mmol)。将反应在75℃下搅拌24小时。将反应混合物用冰水淬灭，并用EtOAc(30mL×3)萃取。用水(30mL×3)和盐水(30mL)洗涤复合有机层，用无水Na₂SO₄干燥，过滤，并在负压下浓缩。残余物通过快速色谱法(PE/EtOAc＝4：1)纯化以得到呈白色固体的产物(1.9g，94％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：253.2[M+H]⁺。

步骤2 3-(叔丁基)-1-(氧杂环丁烷-3-基)-吡唑-5-甲酸的制备

向3-(叔丁基)-1-(氧杂环丁烷-3-基)-吡唑-5-甲酸乙酯(500mg，2mmol)的THF/H₂O(5：1，10mL)溶液中加入LiOH·H₂O(420mg，1mmol)。将反应混合物在室温搅拌3小时。使用1N氯化氢溶液将反应溶液的pH调节至5-6。然后用EtOAc(30mL×2)萃取混合物。复合有机层用盐水(30mL)洗涤，然后用无水Na₂SO₄干燥。过滤混合物，真空浓缩滤液，得到所需产物(400mg，89％)，为白色固体。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：225.1[M+H]⁺。

中间体I-5的制备：1，3-二环丙基-1H-吡唑-5-碳酰氯

图9是根据本申请的一些实施例的制备中间体I-5的示例性步骤的示意图。

步骤1 1，3-二环丙基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯的制备

在环丙基肼二盐酸盐(2813mg，19.4mmol)的EtOH(50mL)溶液中加入5N NaOH(3mL)。在0℃下搅拌10分钟后，加入4-环丙基-2，4-二氧代丁酸甲酯(2200mg，12.9mmol)的EtOH(50mL)溶液，并将所得混合物在60℃下搅拌14小时。在负压下移除溶剂并通过组合闪式色谱法(PE/EA＝0～50％)纯化残余物以产生呈无色油状物的产物(800mg，27％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：206.9[M+H]⁺。

第2步1，3-二环丙基-1H-吡唑-5-甲酸的制备

向1，3-二环丙基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(170mg，0.82mmol)的THF/H₂O(5：1，6mL)溶液中加入LiOH·H₂O(346mg，8.2mmol)。将反应混合物在室温搅拌4小时。使用1N氯化氢溶液将反应溶液的pH调节至5～6。然后用EA(20mL×2)萃取混合物。复合有机层用盐水(30mL)洗涤，然后用无水Na₂SO₄干燥。过滤混合物，真空浓缩滤液得到白色固体化合物产物(140mg，79.5％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：193.1[M+H]⁺。

步骤3 1，3-二环丙基-1H-吡唑-5-碳酰氯的制备

向1，3-二环丙基-1H-吡唑-5-甲酸(140mg，0.73mmol)的DCM(10mL)溶液中加入草酰氯(140mg，1.1mmol)和DMF(0.05mL)。将反应混合物在0℃下搅拌1小时。负压除去溶剂得到粗产物。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：207.1[M-Cl+MeOH]⁺。

中间体I-6的制备：1-环丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-碳酰氯

图10是根据本申请的一些实施例的制备中间体I-6的示例性步骤的示意图。

步骤1 1-环丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯的制备

将乙基(Z)-2-(乙氧基亚甲基)-3-氧代丁酸乙酯(5g，0.02mol)和环丙基肼(1.94g，0.02mol)的EA(50mL)溶液在回流下搅拌3小时。在负压下浓缩混合物并通过快速柱(PE/EA＝5：1)纯化残余物以产生呈橙色油状物的产物(0.53g，9.6％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：195.1[M+H]⁺。

步骤2 1-环丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-羧酸的制备

将乙基1-环丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(0.53g，0.7mmol)的1N氢氧化锂(10mL)水溶液和THF(10mL)混合。将反应混合物在25℃下搅拌24小时。完成后，将混合物真空浓缩。将残余物溶解于水(10mL)中，用1N氯化氢水溶液将pH调节至7，并用乙酸乙酯(10mL×2)萃取。复合有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并在真空下浓缩以得到呈黄色固体的产物(380mg，85.7％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：167.2[M+H]⁺。

步骤3 1-环丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-碳酰氯的制备

向1-环丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-甲酸(150mg，0.9mmol)的DCM(2mL)溶液中加入草酰二氯(103mg，0.8mmol)和一滴DMF。将反应混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物在真空下浓缩以产生黄色油状产物(150mg，81％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：181.0[M-Cl+MeOH]⁺。

中间体I-7的制备：2-环丙基-5-(1-甲基环丙基)吡唑-3-甲酸

图11是根据本申请的一些实施例的制备中间体I-7的示例性步骤的示意图。

步骤1 4-(1-甲基环丙基)-2，4-二氧丁酸乙酯的制备

在1-(1-甲基环丙基)乙烯酮(3.00g，30.6mmol)和草酸二乙酯(4.47g，30.6mmol)的THF(30.0mL)溶液中加入LiHMDS(30.6mL，30.6mmol)。将反应在-70℃下搅拌16小时。在0℃下用NH₄Cl溶液(100mL)淬灭反应混合物，然后用EA(100mL×3)萃取。复合有机层用盐水(100mL×3)洗涤，经Na₂SO₄干燥，并在负压下浓缩。将残余物通过快速柱(PE：EA＝0～50％)纯化以得到为棕色油状物的所需产物4-(1-甲基环丙基)-2，4-二氧丁酸乙酯(2.80g，42％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：199.1[M+H]⁺。

步骤2 2-环丙基-5-(1-甲基环丙基)吡唑-3-甲酸乙酯的制备

在0℃下用氢氧化钠水溶液(5N)将4-(1-甲基环丙基)-2，4-二氧代丁酸乙酯(2.80g，14.1mmol)的EtOH(20.0mL)溶液的pH值调节至10。将反应溶液在60℃下搅拌16小时。负压浓缩反应混合物。通过快速柱(PE：EA＝0-5％)纯化残余物以得到呈无色油状的产物2-环丙基-5-(1-甲基环丙基)吡唑-3-甲酸乙酯(2.20g，60％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：235.1[M+H]⁺。

步骤3 2-环丙基-5-(1-甲基环丙基)吡唑-3-甲酸的制备

在2-环丙基-5-(1-甲基环丙基)吡唑-3-甲酸乙酯(2.20g,9.40mmol)的THF/H₂O(3：1，24.0mL)溶液中加入LiOH(80mg，28.2mmol)。将反应在室温下搅拌16小时。负压浓缩反应混合物。残余物用水(50mL)稀释，然后用HCl(2M)水溶液将pH调节至4。将混合物用EA(100mL×3)萃取，用盐水(100mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，并负压浓缩，得到白色固体产物2-环丙基-5-(1-甲基环丙基)吡唑-3-羧酸(1.20g，55％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：207.1[M+H]⁺。

中间体I-8的制备：(S)-3-(6-溴苯并[d]恶唑-2-基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸

图12是根据本申请的一些实施例的制备中间体I-8的示例性步骤的示意图。

步骤1(S)-3-(6-溴苯并[d]恶唑-2-基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸乙酯的制备

在(叔丁氧基羰基)-L-天冬酰胺酸乙酯(20.7g，79.78mmol)的DCE(300mL)溶液中加入三乙基氧鎓四氟硼酸盐(15.1g，79.78mmol)。将反应混合物在N₂下于25℃搅拌16小时。向所得混合物中加入2-氨基-5-溴苯酚(15g，79.78mmol)。将反应混合物在N₂下于85℃下搅拌16小时。混合物用水(500mL)稀释，并用DCM(300mL×2)萃取。将有机相蒸发，并将残余物通过硅胶柱色谱法(PE：EA＝5：1)纯化以得到呈黑色油状的产物(19g，46％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：413.0415.0[M+H]⁺。

步骤2(S)-3-(6-溴苯并[d]恶唑-2-基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸的制备

在(S)-3-(6-溴苯并[d]恶唑-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸乙酯(6g，14.52mmol)的THF(45mL)溶液和H₂O(15mL)中加入LiOH·H₂O(914mg，21.78mmol)。将反应混合物在N₂下于25℃搅拌2小时。用2N氯化氢溶液将混合物的pH调节至6～7。用水(50mL)洗涤混合物，并用EA(50mL×3)萃取混合物。有机相用盐水(50mL×2)洗涤，用Na₂SO₄干燥，蒸发得到黑色油状产物(5.2g，74％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：385.0 387.0[M+H]⁺。

中间体I-9的制备：(2S)-3-(6-溴基-1，3-苯并恶唑-2-基)-2-[(3-氯苯基)甲酰胺]-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺

图13是根据本申请的一些实施例的制备中间体I-9的示例性步骤的示意图。

步骤1N-[(1S)-2-(6-溴-1，3-苯并恶唑-2-基)-1-[(1-氰基环丙基)氨基甲酰基]乙基]氨基甲酸叔丁酯的制备

将(2S)-3-(6-溴-1，3-苯并恶唑-2-基)-2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}丙酸(3.3g，0.0086mol)的DMF(30mL)溶液中添加DIEA(3.33g，0.0258mol)、HATU(4.10g，0.0129mol)和1-氨基环丙烷-1-腈(1.06g，0.0129mol)。将该溶液在N₂下于25℃搅拌2小时。加入水(50mL)，并用EA(40mL×3)萃取混合物。复合有机层用盐水(30mL×3)洗涤，然后用无水Na₂SO₄干燥。过滤后，溶液在真空下浓缩，粗产物通过组合闪式色谱法(EA/PE＝20％-25％)纯化，得到黄色固体叔的丁基N-[(1S)-2-(6-溴-1，3-苯并恶唑-2-基)-1-[(1-氰基环丙基)氨基甲酰基]乙基]氨基甲酸酯。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：449.3[M+H]⁺。

步骤2(2S)-2-氨基-3-(6-溴-1，3-苯并恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺的制备

将N-[(1S)-2-(6-溴-1，3-苯并恶唑-2-基)-1-[(1-氰基环丙基)氨基甲酰基]乙基]氨基甲酸酯(1.6g，0.0036mmol)的FA(10mL)溶液在25℃下搅拌1小时。真空浓缩所得物，得到黄色固体的(2S)-2-氨基-3-(6-溴-1，3-苯并恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺(900毫克，69％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：349.1[M+H]⁺。

步骤3(2S)-3-(6-溴-1，3-苯并恶唑-2-基)-2-[(3-氯苯基)甲酰胺基]-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺的制备

在(2S)-2-氨基-3-(6-溴基-1，3-苯并恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺(600mg，1.71mmol)的DMF(6mL)溶液中添加3-氯苯甲酸(349mg，2.23mmol)、HATU(820mg，2.23mmol)和DIEA(666mg，5.15mmol)。将溶液在N₂下于25℃搅拌2小时。加入水(50mL)，并用EA(40mL×3)萃取混合物。复合有机层用盐水(30mL×3)洗涤，然后用无水Na₂SO₄干燥。过滤后，溶液在真空下浓缩，粗产物通过组合闪式色谱法(EA/PE＝25％-30％)纯化，得到黄色固体的(2S)-3-(6-溴基-1，3-苯并恶唑-2)-基)-2-[(3-氯苯基)甲酰胺基]-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺(450mg，51％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：487.2[M+H]⁺。

实施例3.1：制备化合物1((S)-N-(3-(苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧丙-2-基)-3-氯苯甲酰胺)

图14是根据本申请的一些实施例的制备化合物1的示例性步骤的示意图。

按照常规步骤A，基于2-氨基苯酚得到黄色固体(S)-2-氨基-3-(苯并[d]恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：271.0[M+H]⁺。

按照常规步骤B-1，基于(S)-2-氨基-3-(苯丙[d]恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺(50mg)得到白色固体化合物1(25mg，33％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：409.0[M+H]⁺。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ8.34(d，J＝7.1Hz，1H)，8.17(s，1H)，7.87(t，J＝1.7Hz，1H)，7.74(d，J＝7.8HZ，1H)，7.68(m，1H)，7.54(m，2H)，7.42(t，J＝7.9Hz，1H)，7.36(m，2H)，5.16(td，J＝7.0，4.4Hz，1H)，3.69(dd，J＝16.6，4.3Hz，1H)，3.37(dd，J＝16.6，6.9Hz，1H)，1.51(m，2H)，1.24(m，2H)。

实施例3.2：制备化合物2((S)-N-(3-(4-溴苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-3-氯苯甲酰胺)

图15是根据本申请的一些实施例的制备中间体I-2的示例性步骤的示意图。

按照常规步骤A，基于2-氨基-3-溴苯酚得到黄色固体(S)-2-氨基-3-(4-溴苯并[d]恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：349.02，351.02[M+H]⁺。

按照常规步骤B-1，基于(S)-2-氨基-3-(4-溴苯并[d]恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺(40mg)得到白色固体化合物2(4mg，7％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：487.01，489.01[M+H]⁺。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.09(s，1H)，9.03(d，J＝7.9Hz，1H)，7.85(t，J＝1.8Hz，1H)，7.76–7.71(m，1H)，7.64(dd，J＝7.9，0.9Hz，1H)，7.60–7.52(m，2H)，7.47(t，J＝7.9Hz，1H)，7.25(t，J＝8.0Hz，1H)，4.96–4.89(m，1H)，3.49(dd，J＝15.6，5.6Hz，1H)，3.36(d，J＝8.9Hz，1H)，1.44(m，2H)，1.08(m，2H)。

实施例3.3：制备化合物3((S)-N-(3-(7-溴苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-3-氯苯甲酰胺)

图16是根据本申请的一些实施例的制备中间体I-3的示例性步骤的示意图。

按照常规步骤A，基于2-氨基-3-溴苯酚得到黄色固体(S)-2-氨基-3-(7-溴苯并[d]恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：349.1[M+H]⁺。

按照常规步骤B-1，基于2-氨基-6-溴苯酚和(S)-2-氨基-3-(7-溴苯并[d]恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺(35mg)，得到白色固体化合物3(17.2mg，35％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：486.8[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.11(s，1H)，9.05(d，J＝7.9Hz，1H)，7.90(t，J＝1.8Hz，1H)，7.79(d，J＝7.8Hz，1H)，7.67(m，1H)，7.61(m，2H)，7.51(t，J＝7.9Hz，1H)，7.29(t，J＝8.0Hz，1H)，4.97(td，J＝8.5、5.6Hz、1H)，3.54(dd、J＝15.6、5.5Hz、1H)，3.39(dd、J＝12.5、5.7Hz、1H)，1.48(m、2H)，1.13(m、2H)。

实施例3.4：制备化合物4((S)-3-氯-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-氟苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)苯甲酰胺)

图17是根据本申请的一些实施例的制备化合物4的示例性步骤的示意图。

按照常规步骤A，基于2-氨基-5-氟苯酚制备得到黄色固体(S)-2-氨基-N-(1-氰基环丙基)-3-(6-氟苯并[d]恶唑-2-基)丙酰胺。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：289.0[M+H]⁺。

按照常规步骤B-1，基于(S)-2-氨基-N-(1-氰基环丙基)-3-(6-氟苯并[d]恶唑-2-基)丙酰胺(60mg)得到化合物4为白色固体(20.2mg，23％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：427.0[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.10(s，1H，9.04(d，J＝7.9Hz，1H)，7.89(s，1H)，7.78(d，J＝7.8Hz，1H)，7.66(m，3H)，7.50(d，J＝7.9Hz，1H)，7.24-7.18(m，1H)，4.95(dd，J＝14.0，8.3Hz，1H)，3.48(dd，J＝15.6，5.9Hz，2H)，1.46(t，J＝6.0Hz，2H)，1.13-1.03(m，2H)。实施例3.5：制备化合物5((S)-3-氯-N-(3-(7-氰基苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)苯丙酰胺)

图18是根据本申请的一些实施例的制备化合物5的示例性步骤的示意图。

按照常规步骤A，基于3-氨基-2-羟基苯甲腈得到浅黄色固体(S)-2-氨基-3-(7-氰基苯并[d]恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：296.0[M+H]⁺。

按照常规步骤B-1，基于(S)-2-氨基-3-(7-氰基苯并[d]恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺(52mg)得到白色固体化合物5(12.5mg，16％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：434.1[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.09(s，1H)，9.04(d，J＝8.0Hz，1H)，8.02(dd，J＝8.0，1.0Hz，1H)，7.87-7.80(m，2H)，7.74(m，1H)，7.62-7.56(m，1H)，7.48(m，2H)，4.95(td，J＝8.4，5.8Hz，1H)，3.54(dd，J＝15.5，5.8Hz，1H)，3.39(dd，J＝15.5，8.7Hz，1H)，1.48-1.36(m，2H)，1.15-0.98(m，2H)。

实施例3.6：制备化合物6((S)-3-氯-N-(3-(7-氯基苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)苯丙酰胺)

图19是根据本申请的一些实施例的制备化合物6的示例性步骤的示意图。

按照常规步骤A，基于2-氨基-6-氯酚得到浅黄色固体(S)-2-氨基-3-(7-氯基苯并[d]恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：305.0[M+H]⁺。

按照常规步骤B-1，基于(S)-2-氨基-3-(7-氯基苯并[d]恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺(58mg)，得到白色固体化合物6(68.9mg，82％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：443.0[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.11(s，1H)，9.06(d，J＝7.9Hz，1H)，7.89(t，J＝1.9Hz，1H)，7.79-7.77(m，1H)，7.67-7.64(m，1H)，7.64-7.61(m，1H)，7.51(t，J＝7.9Hz，1H)，7.48-7.46(m，1H)，7.35(t，J＝8.0Hz，1H)，5.01-4.90(m，1H)，3.58-3.49(m，1H)，3.45-3.36(m，1H)，1.52-1.41(m，2H)，1.20-1.05(m，2H)。

实施例3.7：制备化合物7((S)-3-氯-N-(3-(4-氯基苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)苯丙酰胺)

图20是根据本申请的一些实施例的制备化合物7的示例性步骤的示意图。

按照常规步骤A，基于2-氨基-3-氯酚得到浅黄色固体(S)-2-氨基-3-(4-氯基苯并[d]恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：305.0[M+H]⁺。

按照常规步骤B-1，基于(S)-2-氨基-3-(4-氯基苯并[d]恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺(5mg)，得到白色固体化合物7(29mg，40％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：443.0[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.11(s，1H)，9.06(d，J＝8.0Hz，1H)，7.89(t，J＝1.7Hz，1H)，7.78(d，J＝7.8Hz，1H)，7.64(m，2H)，7.51(t，J＝7.9Hz，1H)，7.44(dd，J＝8.0，0.9Hz，1H)，7.38(t，J＝8.0Hz，1H)，4.97(dd，J＝14.2，8.1Hz，1H)，3.57-3.50(m，1H)，3.42-3.36(m，1H)，1.46(m，2H)，1.17-1.04(m，2H)。

实施例3.8：制备化合物8((S)-3-氯-N-(3-(5-氯基苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)苯丙酰胺)

图21是根据本申请的一些实施例的制备化合物8的示例性步骤的示意图。

按照常规步骤A，基于2-氨基-4-氯-苯酚得到浅黄色固体(S)-2-氨基-3-(5-氯基苯并[d]恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：305.0[M+H]⁺。

按照常规步骤B-1，基于(S)-2-氨基-3-(5-氯基苯并[d]恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺(60mg)，得到白色固体化合物8(28.9mg，33％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：442.9[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.14(s，1H)，9.08(d，J＝7.9Hz，1H)，7.92-7.86(m，1H)，7.79(dd，J＝4.9，2.7Hz，2H)，7.71(d，J＝8.7Hz，1H)，7.62(dd，J＝8.0，1.1Hz，1H)，7.52(q，J＝7.5Hz，1H)，7.41(dd，J＝8.7，2.1Hz，1H)，5.04-4.89(m，1H)，3.50(m，1H)，3.39(d，J＝8.7Hz，1H)，1.53-1.41(m，2H)，1.17-1.02(m，2H)。

实施例3.9：制备化合物9((S)-3-氯-N-(3-(5-氯基苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)丙酰胺)

图22是根据本申请的一些实施例的制备化合物9的示例性步骤的示意图。

按照常规步骤A，基于2-氨基-5-氯-苯酚得到浅黄色固体(S)-2-氨基-3-(6-氯基苯并[d]恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：305.0[M+H]⁺。

按照常规步骤B-1，基于(S)-2-氨基-3-(6-氯基苯并[d]恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺(55mg)，得到白色固体化合物9(30.1mg，42％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：442.9[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.10(s，1H)，9.04(d，J＝7.9Hz，1H)，7.88(m，2H)，7.78(d，J＝7.8Hz，1H)，7.68(d，J＝8.5Hz，1H)，7.62(m，1H)，7.51(t，J＝7.9Hz，1H)，7.39(dd，J＝8.5，1.9Hz，1H)，4.96(dd，J＝14.0，8.2Hz、1H)、3.50(dd，J＝15.6，5.9Hz，1H)、3.37(d，J＝8.7Hz，1H)、1.46(m，2H)、1.09(m，2H)。

实施例3.10：制备化合物10((S)-3-氯-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代-3-(5-(三氟甲基)苯并[d]恶唑-2-基)丙烷基-2-基)苯丙酰胺)

图23是根据本申请的一些实施例的制备化合物10的示例性步骤的示意图。

按照常规步骤A，基于2-氨基-4-三氟甲基-苯酚得到淡黄色固体(S)-2-氨基-N-(1-氰基环丙基)-3-(5-(三氟甲基)苯并[d]恶唑-2-基)丙酰胺。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：339.0[M+H]⁺。

按照常规步骤B-1，从(S)-2-氨基-N-(1-氰基环丙基)-3-(5-(三氟甲基)苯并[d]恶唑-2-基)丙基酰胺(60mg)，得到白色固体化合物10(30.8mg，36％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：477.0[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.07(s，1H)，9.02(d，J＝7.8Hz，1H)，8.08-8.04(m，1H)，7.89-7.83(m，2H)，7.73(dd，J＝6.8，5.4Hz，2H)，7.62-7.56(m，1H)，7.47(t，J＝7.9Hz，1H)，4.96(td，J＝8.3，5.9Hz，1H)，3.55-3.32(m，2H)，1.43(m，2H)，1.06(m，2H)。

实施例3.11：制备化合物11((S)-3-氯-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代-3-(6-(三氟甲基)苯并[d]恶唑-2-基)丙烷基-2-基)苯丙酰胺)

图24是根据本申请的一些实施例的制备化合物11的示例性步骤的示意图。

按照常规步骤A，基于2-氨基-5-三氟甲基-苯酚得到浅黄色固体(S)-2-氨基-N-(1-氰基环丙基)-3-(6-(三氟甲基)苯并[d]恶唑-2-基)丙基酰胺。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：339.0[M+H]⁺。

按照常规步骤B-1，基于(S)-2-氨基-N-(1-氰基环丙基)-3-(6-(三氟甲基)苯并[d]恶唑-2-基)丙酰胺(35mg)得到白色固体化合物11(25mg，51％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：477.0[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.08(s，1H)，9.03(d，J＝7.9Hz，1H)，8.16-8.10(m，1H)，7.84(m，2H)，7.76-7.71(m，1H)，7.67(m，1H)，7.58(m，1H)，7.47(t，J＝7.9Hz，1H)，4.96(td，J＝8.3，6.0Hz，1H)，3.52(m，1H)，3.41-3.32(m，1H)，1.47-1.34(m，2H)，1.13-1.05(m，2H)。

实施例3.12：制备化合物12((S)-3-氯-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代-3-(7-(三氟甲基)苯并[d]恶唑-2-基)丙烷基-2-基)苯丙酰胺)

图25是根据本申请的一些实施例的制备化合物12的示例性步骤的示意图。

按照常规步骤A，基于2-氨基-6-三氟甲基-苯酚得到浅黄色固体(S)-2-氨基-N-(1-氰基环丙基)-3-(7-(三氟甲基)苯并[d]恶唑-2-基)丙酰胺。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：339.0[M+H]⁺。

按照常规步骤B-1，基于(S)-2-氨基-N-(1-氰基环丙基)-3-(7-(三氟甲基)苯并[d]恶唑-2-基)丙酰胺(60mg)，得到白色固体化合物12(35.4mg，42％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：476.9[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.11(s，1H)，9.05(d，J＝8.0Hz，1H)，8.01(d，J＝7.8Hz，1H)，7.87(d，J＝1.8Hz，1H)，7.74(m，2H)，7.65-7.59(m，1H)，7.52(m，2H)，4.99(dd，J＝13.5，8.7Hz，1H)，3.58(dd，J＝15.7，5.4Hz，1H)，3.41(dd，J＝15.7，9.0Hz，1H)，1.48(m，2H)，1.14(m，2H)。

实施例3.13：制备化合物13((S)-N-(3-(苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-3-(叔丁基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲基酰胺)

图26是根据本申请的一些实施例的制备化合物13的示例性步骤的示意图。

按照常规步骤B-2，基于(S)-2-氨基-3-(苯并[d]恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙基酰胺(50mg)，通过制备型HPLC[(Gemini-C18，150×21.2mm，5um；ACN-H₂O(0.1％ FA)；15％-80％)]纯化化合物13，得到白色固体(15mg，19％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：435.1[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，CDC-L₃)δ8.19(s，1H)，7.99(d，J＝6.9Hz，1H)，7.67(m，1H)，7.54(s，1H)，7.38(m，2H)，6.55(s，1H)，5.06(td，J＝7.2，4.0Hz，1H)，4.13(s，3H)，3.68(dd，J＝16.9，3.9Hz，1H)，3.32(dd，J＝16.9，7.4Hz，1H)，1.55(s，2H)，1.34(d，J＝7.1Hz，9H)，1.22(m，2H)。

实施例3.14：制备化合物14((S)-N-(3-(苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-6-甲基吡啶甲酰胺)

图27是根据本申请的一些实施例的制备化合物14的示例性步骤的示意图。

按照常规步骤B-2，基于(S)-2-氨基-3-(苯并[d]恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺(50mg)，通过制备型HPLC纯化化合物14[(Gemini-C18，150×21.2mm，5um；ACN-H₂O(0.1％FA)；15％-80％)]得到白色固体(6.1mg，9％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：390.1[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.18(s，1H)，8.97(d，J＝8.3Hz，1H)，7.84(t，J＝7.6Hz，1H)，7.78(d，J＝7.3Hz，1H)，7.62(m，2H)，7.45(d，J＝7.5Hz，1H)，7.35-7.26(m，2H)，4.95(dd，J＝14.5，6.4Hz，1H)，3.52-3.39(m，2H)，2.52(m，3H)，1.47-1.38(m，2H)，1.11-0.99(m，2H)。实施例3.15：制备化合物15((S)-N-(3-(苯并[d]恶唑-2-基)-1-((氰甲基)氨基)-1-氧丙-2-基)-1，3-二环丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺)

图28是根据本申请的一些实施例的制备化合物15的示例性步骤的示意图。

步骤1(S)-3-(苯并[d]恶唑-2-基)-2-(1，3-二环丙基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)丙酸乙酯的制备

在1，3-二环丙基-1H-吡唑-5-碳酰氯(150mg，0.73mmol)和(2S)-2-氨基-3-(1，3-苯并恶唑-2-基)丙酸乙酯(170mg，0.73mmol)的DCM(30mL)溶液中添加DIPEA(282mg，2.2mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌1小时。在负压下移除溶剂且通过制备薄层色谱法(TLC)(PE/EA＝3/1)纯化残余物以产生呈白色固体的产物(170mg，56％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：408.9[M+H]⁺。

步骤2(S)-3-(苯并[d]恶唑-2-基)-2-(1，3-二环丙基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)丙烯酸的制备

将(S)-3-(苯并[d]恶唑-2-基)-2-(1，3-二环丙基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)丙酸乙酯(170mg，0.42mmol)的THF/H₂O(5：1，12mL)溶液中加入LiOH·H₂O(175mg，4.2mmol)。将反应混合物在室温搅拌1小时。通过使用1N氯化氢溶液将反应溶液的pH调节至5-6。然后用EA(20mL×2)萃取混合物。复合有机层用盐水(10mL)洗涤，然后用无水Na₂SO₄干燥。过滤混合物，真空浓缩滤液，得到黄色油状物所需产物(150mg，90％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：381.2[M+H]⁺。

步骤3(S)-N-(3-(苯并[d]恶唑-2-基)-1-((氰基甲基)氨基)-1-氧代丙-2-基)-1，3-二环丙基-1H-吡唑-5-甲基酰氨的制备

在(S)-3-(苯并[d]恶唑-2-基)-2-(1，3-二环丙基-1H-吡唑-5-甲酰氨基)丙烯酸(150mg，0.39mmol)和2-氨基乙腈盐酸盐(40mg，0.44mmol)的DCM(15mL)溶液中添加DIPEA(255mg，2.0mmol)。在0℃搅拌10分钟后，加入T₃P(50％在EA中，753mg，1.2mmol)并将混合物在室温搅拌4小时。在负压下移除溶剂且残余物通过Combi-flash(PE/EA＝0～50％)纯化以得到呈白色固体的化合物15(35.7mg，22％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：419.2[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.89-8.75(m，2H)，7.73-7.62(m，2H)，7.43-7.28(m，2H)，6.47(s，1H)，5.10-5.01(m，1H)，4.28-4.13(m，3H)，3.54(dd，J＝15.6，5.2Hz，1H)，3.37(s，1H)，3.30(s，1H)，1.86-1.77(m，1H))，1.03-0.76(m，6H)，0.59-0.50(m，2H)。

实施例3.16：制备化合物16((S)-N-(3-(苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-甲基-1H-吡唑-5-甲基酰氨)

图29是根据本申请的一些实施例的制备化合物16的示例性步骤的示意图。

步骤1(S)-3-(苯并[d]恶唑-2-基)-2-(1-环丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-甲酰氨基)丙酸乙酯的制备

在(S)-2-氨基-3-(苯并[d]恶唑-2-基)丙酸乙酯(190mg，0.81mmol)和DIPEA(410mg，4.06mmol)的DCM(5mL)溶液中加入1-环丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-碳酰氯(150mg，0.81mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌16小时。在负压下浓缩混合物以制备呈黄色油状的粗产物(210mg，54％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：383.1[M+H]⁺。

步骤2(S)-3-(苯并[d]恶唑-2-基)-2-(1-环丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-甲酰氨基)丙酸的制备

将(S)-3-(苯并[d]恶唑-2-基)-2-(1-环丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-甲酰氨基)丙酸乙酯(230mg，0.6mmol)的THF(2mL)溶液和1N LiOH(2mL)溶液在25℃下处理2小时。完成后，将混合物真空浓缩。将残余物在水(10mL)中溶解并用1N氯化氢溶液将pH调节至7并用乙酸乙酯(10mL×2)萃取。复合有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并在真空下浓缩以得到呈黄色油状的产物(140mg，52.56％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：355.1[M+H]⁺。

步骤3(S)-N-(3-(苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧丙基-2-基)-1-环丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺的制备

将(S)-3-(苯并[d]恶唑-2-基)-2-(1-环丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-甲酰氨基)丙酸溶液(140mg，0.39mmol)、1-氨基环丙烷-1-腈(70mg，0.59mmol)、T₃P(EA中的50％，754mg，2.379mmol)和DIPEA(255mg，1.97mmol)的DCM(5mL)溶液在25℃下搅拌16小时。残余物用NaHCO₃(10mL)稀释并用DCM(10mL×2)萃取。将复合有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并真空浓缩，残余物通过制备型HPLC[Gemini-C18，150×21.2mm，5um；ACN-H₂O(0.1％ TFA)，30-50]，得到白色固体化合物16(38.4mg，22％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：419.1[M+H]⁺。^1H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.05(s，1H)，7.67-7.46(m，2H)，7.45-7.30(m，2H)，4.98(dd，J＝7.8，6.2Hz，1H)，3.62-3.46(m，2H)，3.37(dd，J＝15.4，7.8Hz，1H)，3.28(dt，J＝3.2，1.6Hz，3H)，1.44(dd，J＝6.2，3.4Hz，2H)，1.15(dd，J＝18.2，1.6Hz，2H)，1.02-0.99(m，4H)。

实施例3.17：制备化合物17((S)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(5，6-二氟苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基))-1-环丙基-3-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺)

图30是根据本申请的一些实施例的制备化合物17的示例性步骤的示意图。

按照常规步骤A，基于2-氨基-4，5-二氟苯酚得到浅黄色固体(S)-2-氨基-N-(1-氰基环丙基)-3-(5，6-二氟苯并[d]恶唑-2-基)丙酰胺。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：306.8[M+H]⁺。

按照常规步骤B-1，从(S)-2-氨基-N-(1-氰基环丙基)-3-(5，6-二氟苯并[d]恶唑-2-基)丙酰胺(83mg)获得白色固体(10mg，8％)的化合物17。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：454.8[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，MeOD)δ8.10(s，1H)，7.61(ddd，J＝17.4，9.6，7.2Hz，2H)，5.02(d，J＝6.2Hz，1H)，3.61(d，J＝5.4Hz，1H)，3.55(dd，J＝15.4，6.2Hz，1H)，3.40(dd，J＝15.6，7.8Hz，1H)，2.33(s，3H)，1.50(d，J＝2.2Hz)，2H)，1.23(dd，J＝8.2，2.2Hz，2H)，1.06(d，J＝5.6Hz，4H)。

实施例3.18：制备化合物18((S)-N-(3-(苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)

图31是根据本申请的一些实施例的制备化合物18的示例性步骤的示意图。

按照常规步骤B-2，基于(S)-2-氨基-3-(苯并[d]恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺(81mg)，得到白色固体化合物18(38mg，22％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：473.1[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.24(s，1H)，7.60(s，1H)，7.54(d，J＝0.8Hz，1H)，7.39-7.27(m，2H)，4.97(d，J＝1.0Hz，1H)，3.80-3.67(m，1H)，3.49(d，J＝6.4Hz，1H)，3.40(d，J＝7.8Hz，1H)，1.44(d，J＝3.0Hz)，2H)，1.18-1.04(m，6H)。

实施例3.19：制备化合物19((S)-N-(3-(苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺)

图32是根据本申请的一些实施例的制备化合物19的示例性步骤的示意图。

按照常规步骤B-2，基于(S)-2-氨基-3-(苯并[d]恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺(50mg)，得到白色固体化合物19(14.5mg，17％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：455.1[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.22(s，1H)，7.62-7.51(m，2H)，7.38-7.29(m，2H)，7.02(t，J＝54.0Hz，1H)，4.99(s，1H)，3.76-3.68(m，1H)，3.50(d，J＝6.2Hz，1H)，3.40(d，J＝7.8Hz，1H)，1.44(s，2H)，1.19-1.02(m，6H)。

实施例3.20：制备化合物20((S)-3-(叔丁基)-N-(3-(7-氯基苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺)

图33是根据本申请的一些实施例的制备化合物20的示例性步骤的示意图。

按照常规步骤B-3，基于(2S)-2-氨基-3-(7-氯-5-氟-1，3-苯并恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺(200mg)，得到白色固体化合物20(37mg，19％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：495.2[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，MeOD)δ7.58(dd，J＝7.8，1.2Hz，1H)，7.39(dd，J＝8.0，1.2Hz，1H)，7.33(t，J＝7.8Hz，1H)，6.62(s，1H)，5.05(dd，J＝8.6，5.6Hz，1H)，3.98-3.91(m，1H)，3.62(dd，J＝15.6，5.8Hz，1H)，3.45(dd，J＝15.4，8.6Hz，1H)，1.49(t，J＝5.6Hz，2H)，1.28(s，1H)，1.25(s，9H)，1.23(d，J＝2.6Hz，1H)，1.06(dd，J＝6.4，3.8Hz，1H)，1.00-0.95(m，1H)，0.92-0.82(m，2H)。

实施例3.21：制备化合物3.21((S)-3-(叔丁基)-N-(3-(7-氯-5-氟苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺)

图34是根据本申请的一些实施例的制备化合物21的示例性步骤的示意图。

按照常规步骤A，基于2-氨基-6-氯-4-氟苯酚得到黄色油状物(2S)-2-氨基-3-(7-氯-5-氟-1，3-苯并恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：323.2[M+H]⁺。

按照常规步骤B-3，基于(2S)-2-氨基-3-(7-氯-5-氟-1，3-苯并恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺(49mg)得到白色固体化合物21(4.7mg，3％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：513.0[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.12(s，1H)，8.80(d，J＝8.0Hz，1H)，7.64(dd，J＝8.4，2.2Hz，1H)，7.55(dd，J＝9.4，2.0Hz，1H)，6.69(s，1H)，4.92(d，J＝5.8Hz，1H)，4.19(dd，J＝7.4，3.8Hz，1H)，3.53(dd，J＝15.4，5.4Hz，1H)，1.48(t，J＝4.1Hz，2H)，1.37-1.08(m，12H)，1.04(dd，J＝10.0，6.2Hz，1H)，0.94(dd，J＝9.8，5.8Hz，1H)，0.90-0.75(m，2H)。

实施例3.22：制备化合物22((S)-3-(叔丁基)-N-(3-(7-氯-5-氟苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-(氧杂环丁烷-3-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺)

图35是根据本申请的一些实施例的制备化合物22的示例性步骤的示意图。

按照常规步骤B-3，基于(2S)-2-氨基-3-(7-氯-5-氟-1，3-苯并恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺(100mg)，得到白色固体化合物22(6mg，4％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：529.2[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.15(s，1H)，8.96(d，J＝4.8Hz，1H)，7.65-7.55(m，2H)，6.85(s，1H)，5.88-5.79(m，1H)，4.75-4.95(m，5H)，3.55-3.48(m，1H)，1.55-1.42(m，2H)，1.38-1.55(m，10H)，1.19-1.05(m，2H)。

实施例3.23：制备化合物23((S)-N-(3-(4-(1H-吡唑-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-3-氯苯甲酰胺)

图36是根据本申请的一些实施例的制备化合物23的示例性步骤的示意图。

步骤1叔丁基(S)-4-(2-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-乙氧基-3-氧丙基)苯并[d]恶唑-4-基)-1H-吡唑-1羧酸盐的制备

将(S)-3-(4-溴苯并[d]恶唑-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸乙酯溶液(450mg，1.09mmol)、叔丁基4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-羧酸盐(384mg，1.31mmol)、Pd(dppf)Cl₂(70.65mg，0.10mmol)、Na₂CO₃(231mg，2.18mmol)的1，4-二恶烷/H₂O(12mL/2mL)溶液的混合物在90℃下搅拌1小时。将反应混合物用水淬灭并用EA(60mL×3)萃取。复合有机层经Na₂SO₄干燥并真空浓缩得到粗产物，其通过快速色谱法纯化(DCM中的MeOH，2％至10％)以获得白色固体产物(200mg，74％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：501.1[M+H]⁺。

步骤2(S)-3-(4-(1-(叔丁氧基羰基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸的制备

将叔丁基(S)-4-(2-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-乙氧基-3-氧丙基)苯并[d]恶唑-4-基)-1H-吡唑-1-羧酸盐(350mg，0.7mmol)、LiOH(19.06mg，0.80mmol)的THF/H₂O(15mL/4mL)溶液在25℃下搅拌1小时。用水淬灭反应混合物并用EA(60mL×3)萃取。复合有机层经Na₂SO₄干燥并在真空下浓缩以得到淡黄色固体产物(280mg，85％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：473.1[M+H]⁺。

步骤3叔丁基(S)-4-(2-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((1-氰基环丙基)氨基)-3-氧丙基)苯并[d]恶唑-4-基)-1H-吡唑-1-甲酸酯的制备

将(S)-3-(4-(1-(叔丁氧基羰基)-1H-吡唑-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸(280mg，0.59mmol)、A-5(84mg，0.71mmol)、DIPEA(228mg，1.77mmol)和T₃P(EA中50％，402mg，0.63mmol)的DCM(5mL)溶液在N₂下于25℃搅拌3小时。用水淬灭反应混合物并用DCM(30mL×3)萃取。复合有机层经Na₂SO₄干燥并在真空下浓缩以得到粗产物，其通过快速色谱法纯化(DCM中的MeOH，2％至10％)以获得白色固体产物(130mg，41％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：537.1[M+H]⁺。

步骤4(S)-3-(4-(1H-吡唑-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-2-氨基-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺的制备

将叔丁基(S)-4-(2-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((1-氰基环丙基)氨基)-3-氧丙基)苯并[d]恶唑-4-基)-1H-吡唑-1-甲酸酯(130mg，0.24mmol)加入FA(2mL)中，在25℃下搅拌3小时。负压浓缩混合物，得到残余物。残余物用饱和NaHCO₃溶液淬火并用EtOAc(60mL×3)萃取。复合有机层经Na₂SO₄干燥并在真空下浓缩以得到呈淡黄色固体状的粗制产物(30mg，37％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：437.1[M+H]⁺。

步骤5(S)-N-(3-(4-(1H-吡唑-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-3-氯苯甲酰胺的制备

将(S)-3-(4-(1H-吡唑-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-2-氨基-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺(30mg，0.09mmol)和K₂CO₃(24.66mg，0.18mmol)的EA(2mL)和H₂O(3mL)溶液中逐滴添加3-氯苯甲酰氯(18.73mg，0.11mmol)的EA(0.5mL)溶液。添加后，将反应混合物在25℃下搅拌0.5小时。然后将反应混合物用水淬灭并用EA(20mL×3)萃取。复合有机层经Na₂SO₄干燥并真空浓缩得到粗产物，其通过制备型HPLC[(Gemini-C18，150×21.2mm，5um；ACN-H₂O(0.1％FA))；15％-95％)]纯化粗产物得到白色固体化合物23(4.1mg，10％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：475.1[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ13.18(s，1H)，9.15(s，1H)，9.10(d，J＝7.8Hz，1H)，8.43(s，2H)，8.19-8.12(m，1H)，7.86(s，1H)，7.76(d，J＝8.0Hz，1H)，7.64(d，J＝6.7Hz，1H)，7.58(d，J＝9.1Hz，1H)，7.45(s，1H)，7.31(t，J＝7.8Hz，1H)，5.06(d，J＝4.1Hz，1H)，3.55(d，J＝4.2Hz，1H)，3.45(s，1H)，1.47(m，2H)，1.17-1.06(m，2H)。

实施例3.24：制备化合物24((S)-3-氯-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)丙酰胺)

图37是根据本申请的一些实施例的制备化合物24的示例性步骤的示意图。

步骤1(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)苯并[d]恶唑-2-基)丙酸乙酯的制备

将(S)-3-(6-溴苯并[d]恶唑-2-基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)丙酸乙酯(50mg，0.73mmol)、1-甲基哌嗪(73mg，0.73mmol)、Cs₂CO₃(474.5mg，1.46mmol)和RuPhos-Pd-G2(57mg，0.073mmol)的甲苯(5mL)溶液在氮气下于110℃搅拌18小时。将反应混合物冷却至室温，合并，真空浓缩得到粗产物。然后在硅胶上纯化粗产物，用DCM中的MeOH(5％至10％)溶液洗脱，得到浅棕色油状的所需产物(180mg，57％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：433.1[M+H]⁺。

步骤2(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)苯并[d]恶唑-2-基)丙酸的制备

将(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)苯并[d]恶唑-2-基)丙酸乙酯溶液(160mg，0.37mmol)和Me₃SnOH(134mg，0.74mmol)的DCE(6mL)溶液在氮气下被加热至80℃并搅拌3小时。浓缩后，然后在硅胶上纯化粗产物，用DCM中的MeOH(5％至10％)洗脱，得到浅棕色固体化合物(80mg，53.3％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：405.1[M+H]⁺。

步骤3叔丁基(S)-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸酯的制备

将(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)苯并[d]恶唑-2-基)丙酸溶液(70mg，0.17mmol)、A-5(25mg，0.21mmol)、HATU(97mg，0.26mmol)和DIPEA(66mg，0.51mmol)的DMF(3毫升)溶液在氮气下于25℃搅拌3小时。将反应混合物用水(10mL)淬灭并用EA(35mL×3)萃取。复合有机层经Na₂SO₄干燥并浓缩至干，然后在硅胶上纯化，用在DCM中的MeOH(5％至10％)洗脱以获得呈白色固体的所需产物(60mg，75％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：469.1[M+H]⁺。

步骤4(S)-2-氨基-N-(1-氰基环丙基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)苯并[d]恶唑-2-基)丙酰胺的制备

将叔丁基(S)-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸酯(60mg，0.13mmol)的FA(2mL)溶液在氮气下于25℃搅拌5小时。在20℃下用氮气将混合物吹干。然后将残余物用饱和碳酸氢钠碱化并用EA(20mL×3)萃取。将复合有机层浓缩至干，得到浅白色固体的所需产物(30mg，63.8％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：369.1[M+H]⁺。

步骤5(S)-3-氯-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)丙酰胺的制备

将(S)-2-氨基-N-(1-氰基环丙基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)苯并[d]恶唑-2-基)丙酰胺(30mg，0.08mmol)的EA(3mL)溶液中加入K₂CO₃(22mg，0.16mmol)的水(0.5mL)溶液，然后逐滴滴加3-氯苯甲酰氯(14mg，0.08mmol)的EA(1mL)溶液，加完后，将反应混合物在25℃下搅拌1小时。反应混合物用水(5mL)淬灭并用EA(15mL×3)萃取。将复合有机层浓缩至干，并将残余物通过制备型HPLC[(Gemini-C18，150×21.2mm，5um；ACN-H₂O(0.1％FA)；15％-95％)]纯化至得到白色固体化合物24(4.9mg，12％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：507.1[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.08(s，1H)，9.00(d，J＝7.9Hz，1H)，7.89(t，J＝1.8Hz，1H)，7.78(d，J＝7.8Hz，1H)，7.64-7.59(m，1H)，7.51(t，J＝7.9Hz，1H)，7.44(d，J＝8.8Hz，1H)，7.14(d，J＝2.2Hz，1H)，6.97(dd，J＝8.8，2.3Hz，1H)，4.94-4.88(m，1H)，3.43(d，J＝5.7Hz，1H)，3.26(d，J＝8.8Hz，1H)，3.17-3.11(m，4H)，2.48-2.43(m，4H)，2.22(m，3H)，1.46-1.47(m，2H)，1.13-1.02(m，2H)。

实施例3.25：制备化合物25((S)-N-(1-((氰甲基)氨基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)-1，3-二环丙基-1H-吡唑-5-甲基酰氨)

图38是根据本申请的一些实施例的制备化合物25的示例性步骤的示意图。

步骤1叔丁基(S)-(1-((氰甲基)氨基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸酯的制备

在(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)苯并[d]恶唑-2-基)丙酸溶液(500mg，1.24mmol)的DMF(20mL)溶液中加入DIPEA(798mg，6.2mmol)、HATU(1410mg，3.72mmol)和2-氨基乙腈(114mg，1.86mmol)，在室温下搅拌2小时。反应完成后，将H₂O(30mL)加入到反应混合物中，然后用EA(30mL×3)萃取。复合有机层用盐水(50mL×3)洗涤，然后用无水Na₂SO₄干燥。过滤后，溶液在真空下浓缩，残余物通过组合闪式色谱法(DCM/MeOH＝0～10％)纯化，得到黄色油状产物叔丁基(S)-(1-((氰甲基)氨基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸酯(310mg，56％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：442.9[M+H]⁺。

步骤2(S)-2-氨基-N-(氰甲基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)苯并[d]恶唑-2-基)丙酰胺的制备

将叔丁基(S)-(1-((氰甲基)氨基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸酯(310mg，0.7mmol)的FA(5mL)溶液在室温下搅拌3小时。将所得混合物用压缩空气吹干，得到棕色油状产物(S)-2-氨基-N-(氰甲基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)苯并[d]恶唑-2-基)丙酰胺(160mg，66％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：343.1[M+H]⁺。

步骤3(S)-N-(1-((氰甲基)氨基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)-1，3-二环丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺的制备

按照常规步骤B-3，基于(S)-2-氨基-N-(氰甲基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)苯并[d]恶唑-2-基)丙酰胺(70mg)，得到白色固体化合物25(5mg，4％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：517.3[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，MeOD)δ7.55(d，J＝8.8Hz，1H)，7.26(d，J＝2.2Hz，1H)，7.12(dd，J＝8.8，2.4Hz，1H)，6.39(s，1H)，5.16(dd，J＝8.8，5.6Hz，1H)，4.21(s，2H)，3.93(ddd，J＝11.2，7.4，4.0Hz，2H)，3.62(dd，J＝15.6，5.6Hz，2H)，3.39(dd，J＝15.4，8.8Hz，2H)，3.00(s，3H)，1.87(ddd，J＝13.4，8.6，5.0Hz，1H)，1.05(dd，J＝9.0，4.8Hz，1H)，0.98-0.78(m，6H)，0.65(dt，J＝6.2，4.2Hz，2H)。

实施例3.26：制备化合物26((S)-3-(叔丁基)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺)

图39是根据本申请的一些实施例的制备化合物26的示例性步骤的示意图。

按照常规步骤B-3，基于(S)-2-氨基-N-(1-氰基环丙基)-3-(6-(4-甲基哌嗪-1-基)苯并[d]恶唑-2-基)丙酰胺(80mg)，得到白色固体化合物26(14mg，11％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：559.3[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，MeOD)δ7.43(d，J＝8.8Hz，1H)，7.14(d，J＝2.2Hz，1H)，7.01(dd，J＝8.8，2.4Hz，1H)，6.50(s，1H)，4.91(dd，J＝8.2，6.0Hz，1H)，3.88-3.79(m，1H)，3.45(dd，J＝15.4，6.2Hz，2H)，3.29(d，J＝8.2Hz，4H)，2.83(s，3H)，1.39(d，J＝2.6Hz，2H)，1.19(d，J＝1.6Hz，2H)，1.15(s，9H)，1.14-1.09(m，2H)，1.02-0.69(m，6H)。

实施例3.27：制备化合物27((S)-3-氯-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(1-甲基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)丙酰胺)

图40是根据本申请的一些实施例的制备化合物27的示例性步骤的示意图。

在(S)-N-(3-(6-溴苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-3-氯苯甲酰胺(100mg，0.20mmol)的二恶烷/H₂O(10：1，5mL)溶液中添加1-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-3，6-二氢-2H-吡啶(91mg，0.41mmol)、K₃PO₄(87mg，0.411mmol)和Pd(dppf)Cl₂(15mg，0.02mmol)。将该溶液在N₂下于80℃搅拌2小时。过滤后，将溶液负压浓缩，粗品经快速层析纯化，得到白色固体目标产物27(18.6mg，17.27％)。

对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：504.2[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.09(s，1H)，9.03(d，J＝7.8Hz，1H)，7.89(t，J＝1.8Hz，1H)，7.78(d，J＝7.9Hz，1H)，7.67(d，J＝1.3Hz，1H)，7.64-7.60(m，1H)，7.58(d，J＝8.3Hz，1H)，7.52(d，J＝7.9Hz，1H)，7.43(dd，J＝8.4，1.6Hz，1H)，6.21(s，1H)，4.96(dd，J＝14.0，8.3Hz，1H)，3.51-3.35(m，4H)，3.02(d，J＝3.0Hz，2H)，2.57(d，J＝4.8Hz，2H)，2.28(s，3H)，1.47(d，J＝2.8Hz，2H)，1.12-1.06(m，2H)。

实施例3.28：制备化合物28((S)-3-氯-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(1-(2，2-二氟乙基)-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)丙酰胺)

图41是根据本申请的一些实施例的制备化合物28的示例性步骤的示意图。

在(S)-N-(3-(6-溴苯并[d]恶唑-2-基))-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-3-氯苯甲酰胺(130mg，0.47mmol)的二恶烷/H₂O(10/1，10mL)溶液中加入1-(2，2-二氟乙基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-1，2，3，6-四氢吡啶(84mg，0.57mmol)、K₃PO₄(113mg，0.94mmol)和Pd(dppf)Cl₂₍20mg，0.05mmol)。将反应混合物在N₂下于100℃搅拌16小时。在负压下除去溶剂并且通过组合闪式色谱法(DCM/MeOH＝0～10％)纯化残余物以得到呈黄色固体产物28(35mg，13％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：554.2[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，MeOD)δ7.83(t，J＝1.8Hz，1H)，7.75-7.71(m，1H)，7.62(d，J＝1.4Hz，1H)，7.58-7.53(m，2H))，7.49-7.43(m，2H)，6.18(d，J＝5.6Hz，1H)，6.04(s，1H)，5.05(dd，J＝8.2，6.4Hz，1H)，4.91(d，J＝1.8Hz，1H)，4.85(s，1H)，3.59(dd，J＝15.4，6.4Hz，1H)，3.44(dd，J＝15.4，8.2Hz，1H)，3.33(d，J＝3.4Hz，2H)，2.95-2.86(m，4H)，1.48(dd，J＝5.2，2.2Hz，2H)，1.19(dd，J＝17.0，2.4Hz，2H)。

实施例3.29：制备化合物29((S)-3-(叔丁基)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(1-(2，2-二氟乙基)-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺)

图42是根据本申请的一些实施例的制备化合物29的示例性步骤的示意图。

步骤1(S)-N-(3-(6-溴苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-3-(叔丁基)-1-环丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺的制备

在(2S)-2-氨基-3-(6-溴基-1，3-苯并恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺(1.6g，4.58mmol)和5-叔丁基-2-环丙基吡唑-3-甲酸(954mg，4.58mmol)的DCM(20mL)溶液中加入T₃P(50％的EA溶液，5.83g，9.16mmol)和DIPEA(1.18g，9.16mmol)。将反应混合物在N₂下于25℃搅拌3小时。将反应混合物浓缩并将残余物通过硅胶柱色谱法(PE：EA＝1：1)纯化以得到呈黄色固体的产物(1.3g，47％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：539.1 541.1[M+H]⁺。

步骤2(S)-3-(叔丁基)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(1-(2，2-二氟乙基)-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺的制备

在(2S)-3-(6-溴-1，3-苯并恶唑-2-基)-2-[(5-叔丁基-2-环丙基吡唑-3-基)甲酰胺]-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺(150mg，0.28mmol)、1-(2，2-二氟乙基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-3，6-二氢-2H-吡啶(114mg，0.42mmol)的二恶烷(3mL)和H₂O(0.3mL)溶液中添加K₃PO₄(118mg，0.56mmol)和Pd(dppf)Cl₂(20mg，0.028mmol)。将反应混合物在N₂下于90℃搅拌16小时。将反应混合物浓缩，残余物通过制备型HPLC[Gemini-C18 150×21.2mm，5um，流动相：ACN-H₂O(0.1％FA)，梯度：20-40]纯化，得到白色固体产物29(30mg，19％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：606.3[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.13(s，1H)，8.79(d，J＝8.0Hz，1H)，7.73(s，1H)，7.62(d，J＝8.2Hz，1H)，7.47(d，J＝8.4Hz，1H)，6.69(s，1H)，6.23(s，1H)，4.99-4.88(m，1H)，4.23-4.15(m，1H)，3.49(dd，J＝15.4，5.8Hz，1H)，3.39-3.29(m，6H)，3.09-2.56(m，4H)，1.53-1.40(m，2H)，1.24-1.17(m，9H)，1.16-1.07(m，2H)，1.06-1.01(m，1H)，0.97-0.91(m，1H)，0.87-0.78(m，2H)。

实施例3.30：制备化合物30((S)-3-氯-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(4-甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)丙酰胺)

图43是根据本申请的一些实施例的制备化合物30的示例性步骤的示意图。

在(S)-N-(3-(6-溴苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-3-氯苯甲酰胺(200mg，0.4mmol)的二恶烷(10.0mL)混合物中加入K₂CO₃₍113mg，0.8mmol)、4-甲基哌嗪-2-酮(93mg，0.8mmol)、CuI(15mg，0.08mmol)和DMEDA(7mg，0.08mmol)。将反应混合物用N₂脱气并在110℃下搅拌16小时。负压浓缩反应混合物，残余物通过制备型HPLC[Gemini-C18 150×21.2mm，5um；流动相：MeCN/H₂O(0.1％FA)；比例：10-25]纯化得到所需产物化合物30(12mg，6％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：521.1[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，MeOD)δ7.84(t，J＝1.8Hz，1H)，7.75-7.72(m，1H)，7.68(d，J＝8.5Hz，1H)，7.59(d，J＝1.6Hz，1H)，7.57-7.54(m，1H)，7.45(t，J＝7.8Hz，1H)，7.29(dd，J＝8.4，1.8Hz，1H)，5.06(dd，J＝8.2，6.2Hz)，1H)，3.79-3.76(m，2H)，3.61(dd，J＝15.4，6.2Hz，1H)，3.47(dd，J＝15.4，8.2Hz，1H)，3.29(s，2H)，2.89(t，J＝5.4Hz，2H)，2.44(s，3H)，1.52-1.44(m，2H)，1.26-1.16(m，2H)。

实施例3.31：制备化合物31((S)-N-(3-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-3-氯苯甲酰胺

图44是根据本申请的一些实施例的制备化合物31的示例性步骤的示意图。

步骤1烯丙基(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(苯并[d]噻唑-2-基)丙酸酯的制备

在(S)-3-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-4-(烯丙氧基)-4-氧代丁酸(1g，2.53mmol)、(COCl)₂(0.38g，3.0mmol)的DCM(25mL)溶液中添加1滴DMF，然后将反应混合物在N₂下于25℃搅拌2小时。然后在真空下除去溶剂以得到残余物，将残余物溶解在无水甲苯(15mL)中。然后，加入2-氨基苯硫酚(0.33g，2.6mmoL)和DIPEA(0.97g，7.5mmol)并将反应混合物加热至40℃搅拌2小时。冷却至室温后，将反应混合物中的溶剂除去，然后用水(30mL)淬灭并用DCM(120mL×3)萃取。复合有机层经Na₂SO₄干燥并在真空下浓缩以得到所需的粗产物，其通过快速色谱法纯化(PE中的EA，30％至50％)以得到白色固体产物(0.47g，32％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：485.1[M+H]⁺。

步骤2(S)-2-(((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(苯并[d]噻唑-2-基)丙烯酸的制备

在烯丙基(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(苯并[d]噻唑-2-基)丙酸酯(470mg，0.96mmol)的DCM(12mL)溶液中加入苯基硅烷(215.43mg，2.9mmol)，然后在氮气保护下加入四(三苯基膦)钯(559.23mg，0.48mmol)。添加后，将反应混合物在25℃下搅拌3小时。真空除去溶剂得到粗产物，通过快速色谱法(DCM中的MeOH，2％～10％)纯化得到浅色固体的所需产物(350mg，64.93％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：445.1[M+H]⁺。

步骤3(9H-芴-9-基)甲基(S)-(3-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸酯的制备

将(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(苯并[d]噻唑-2-基)丙烯酸(350mg，0.78mmol)、1-氨基环丙烷-1-腈氯化氢(67.73mg，0.82mmol)、DIPEA(203.06mg，0.57mmol)和HATU(358.45mg，0.45mmol)的DMF(5mL)溶液在N₂下于25℃搅拌3小时。反应混合物用水淬灭并用EA(30mL×3)萃取。复合有机层经Na₂SO₄干燥并真空浓缩得到粗产物，其通过快速色谱法纯化(DCM中的MeOH，2％至10％)以获得白色固体产物(90mg，20％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：509.1[M+H]⁺。

步骤4(S)-2-氨基-3-(苯并[d]噻唑-2-基)-N-(1-1-氰基环丙基)丙酰胺的制备

在(9H-芴-9-基)甲基(S)-(3-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸酯(90mg，0.17mmol)的MeCN(5mL)的溶液中加入Et₂NH(1mL)。将反应混合物在N₂下于25℃搅拌3小时。负压浓缩混合物得到残余物。残余物通过制备型HPLC[(Gemini-C18，150×21.2mm，5um；ACN-H₂O(0.1％ FA)；15-90)]纯化，得到白色固体的所需产物(95mg，54％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：287[M+H]⁺。

步骤5(S)-N-(3-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-3-氯苯甲酰胺的制备

在(S)-2-氨基-3-(苯并[d]噻唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺和DIPEA(16.25mg，0.12mmol)的DCM(1mL)溶液中加入滴加3-氯苯甲酰氯(7.7mg，0.04mmol)的DCM(0.5毫升)溶液。将反应混合物在25℃下搅拌0.5小时。然后将反应混合物用水淬灭并用DCM(20mL×3)萃取。复合有机层经Na₂SO₄干燥并真空浓缩得到粗产物，其通过制备型HPLC[(Gemini-C18，150×21.2mm，5um；ACN-H₂O(0.1％FA))；15％-90％)]纯化得到白色固体产物31(11.2mg，31％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：425.0[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.63(d，J＝6.4Hz，1H)，8.24(s，1H)，8.01-7.97(m，1H)，7.92(t，J＝1.8Hz，1H)，7.88(d，J＝7.8Hz，1H)，7.80-7.77(m，1H)，7.55-7.49(m，2H)，7.41(m，2H)，5.03(m，1H)，3.83(m，1H)，3.49-3.43(m，1H)，1.53-1.47(m，2H)，1.23-1.13(m，2H)。

实施例3.32：制备化合物32((S)-3-氯-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)丙酰胺)

图45是根据本申请的一些实施例的制备化合物32的示例性步骤的示意图。

步骤1(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯的制备

将(S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲氧基-4-氧代丁酸(1.3g，5.26mmol)、N¹-甲基苯-1，2-二胺(284mg，5.26mmol)、HOBt(858mg，6.31mmol)、EDCl(1.21g，6.31mmol)和Et₃N(1.59g，15.78mmol)的DCM(20mL)混合溶液在氮气下于25℃搅拌18小时。反应混合物用15mL水淬灭并用DCM(30mL×3)萃取。复合有机层经Na₂SO₄干燥并在真空下浓缩，在硅胶上纯化(PE的EtOAc溶液，50％至100％)以得到浅棕色油状的NH和NMe-酰胺的混合物。将该混合物(1.18mg，3.4mmol)加入AcOH(10mL)中在氮气下加热至60℃并搅拌18小时。将反应冷却至室温并除去溶剂得到残余物，将残余物用EtOAc(30mL)溶解并用饱和NaHCO₃(20mL)碱化，分离有机层，水层用EtOAc(30mL×3)萃取。复合有机层用盐水洗涤并经无水Na₂SO₄干燥。过滤和浓缩后，然后在硅胶上纯化粗产物，用EtOAc的石油醚(35％至100％)溶液洗脱，得到浅黄色油状产物(700mg，62.5％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：334.1[M+H]⁺。

步骤2(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸的制备

在(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸甲酯(500mg，1.50mmol)的THF(8mL)溶液中缓慢加入LiOH(72mg，3.0mmol)的水(1.5mL)溶液。添加后，将反应混合物搅拌5小时。然后将反应混合物用HCl(1M)酸化至pH＝3并用EtOAc(30mL×3)萃取。复合有机层用盐水洗涤并经无水Na₂SO₄干燥。真空除去溶剂，得到浅棕色固体粗产物(330mg，69％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：320.1[M+H]⁺。

步骤3(S)-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯的制备

将(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酸(330mg，1.03mmol)、A-5(147mg，1.24mmol)、HATU(471mg，1.24mmol)和DIPEA(401.7mg，3.09mmol)的DMF(5mL)溶液在氮气下于25℃搅拌3小时。将反应混合物用水(10mL)淬灭并用EA(35mL×3)萃取。复合有机层经Na₂SO₄干燥并浓缩至干，然后在硅胶上纯化，用(PE的EA溶液，30％至100％)洗脱以获得白色坚硬的产物(250mg，63.4％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：384.1[M+H]⁺。

步骤4(S)-2-氨基-N-(1-氰基环丙基)-3-(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酰胺的制备

将叔丁基(S)-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸酯(70mg，0.18mmol)的FA(2mL)溶液在氮气下于25℃下搅拌5小时。在20℃下用氮气将混合物吹干。然后将残余物用饱和碳酸氢钠碱化并用EA(20mL×3)萃取。然后将复合有机层浓缩至干，得到浅色固体产物(22mg，43％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：284.1[M+H]⁺。

步骤5(S)-3-氯-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)丙酰胺的制备

在(S)-2-氨基-N-(1-氰基环丙基)-3-(1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)丙酰胺(22mg，0.08mmol)和DIPEA(将20.64mg，0.16mmol)的DCM(2mL)溶液中逐滴加入3-氯苯甲酰氯(14mg，0.08mmol)的DCM(0.5mL)溶液，加入后，将反应混合物在25℃下搅拌1小时。将反应混合物用水(5mL)淬灭并用DCM(15mL×3)萃取。将复合有机层浓缩至干，并将残余物通过制备型HPLC[(Gemini-C18，150×21.2mm，5um；ACN-H₂O(0.1％FA)；15％-95％)]纯化得到白色固体状产物化合物32(4.2mg，12.4％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：422.0[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.01(s，1H)，8.98(d，J＝7.6Hz，1H)，7.91(s，1H)，7.79(d，J＝7.9Hz，1H)，7.61(d，J＝9.0Hz，1H)，7.51(t，J＝7.8Hz，2H)，7.17(m，2H)，4.96(dd，J＝14.3，7.6Hz，1H)，3.78(s，3H)，3.37(dd，J＝16.5，6.6Hz，2H)，1.47-1.36(m，2H)，1.02(m，2H)。

实施例3.33：制备化合物33(S)-N-(3-(6-溴苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-3-(叔丁基)-1-环丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺

图46是根据本申请的一些实施例的制备化合物33的示例性步骤的示意图。

在(2S)-2-氨基-3-(6-溴基-1，3-苯并恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)丙酰胺(1.6g，4.58mmol)和5-叔丁基-2-环丙基吡唑-3-甲酸(954mg，4.58mmol)的DCM(20mL)溶液中加入T₃P(50％EA溶液，5.83g，9.16mmol)和DIEA(1.18g，9.16mmol)。将反应混合物在N₂下于25℃搅拌3小时。将反应混合物浓缩并将残余物通过硅胶柱色谱法(PE：EA＝1：1)纯化以得到呈黄色固体状的所需产物化合物33(1.3g，47％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：539.1 541.1[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.17(s，1H)，8.84(d，J＝8.0Hz，1H)，8.00(d，J＝1.7Hz，1H)，7.64(d，J＝8.4Hz，1H)，7.52(dd，J＝8.4，1.8Hz，1H)，6.68(s，1H)，4.99-4.88(m，1H)，4.26-4.13(m，1H)，3.49(dd，J＝15.4，5.8Hz，1H)，3.34-3.29(m，1H)，1.55-1.39(m，2H)，1.20(s，9H)，1.13-0.80(m，6H)。

实施例3.34：制备化合物34(S)-N-((3-(6-(6-氨基吡啶-3-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-3-(叔丁基)-1-环丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺

图47是根据本申请的一些实施例的制备化合物34的示例性步骤的示意图。

在(S)-N-(3-(6-溴苯并[d]恶唑-2-基))-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-3-(叔丁基)-1-环丙基-1H-吡唑-5-甲酰胺(150mg，0.28mmol)\(6-氨基吡啶-3-基)硼酸(58mg，0.42mmol)的二恶烷(3mL)和H₂O(0.3mL)溶液中加入K₃PO₄(118mg，0.56mmol)和Pd(dppf)Cl₂(20mg，0.028mmol)。将反应混合物在N₂下于90℃搅拌10小时。将反应混合物浓缩并将残余物通过制备型TLC(DCM：MeOH＝20：1)纯化，得到棕色固体状所需产物化合物34(120mg，72％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：553.3[M+H]⁺。¹HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.08(s，1H)，8.75(d，J＝8.0Hz，1H)，8.25(d，J＝2.2Hz，1H)，7.80(d，J＝1.2Hz，1H)，7.71(dd，J＝8.6，2.4Hz，1H)，7.62(d，J＝8.2Hz，1H)，7.50(dd，J＝8.2，1.6Hz，1H)，6.65(s，1H)，6.49(d，J＝8.6Hz，1H)，6.07(s，2H)，4.96-4.85(m，1H)，4.21-4.13(m，1H)，3.45(dd，J＝15.6，5.8Hz)，1H)，3.30-3.24(m，1H)，1.49-1.38(m，2H)，1.16(s，9H)，1.12-1.05(m，2H)，1.01-0.96(m，1H)，0.93-0.88(m，1H)，0.83-0.76(m，2H)。

实施例3.35：制备化合物35(S)-N-(1-((氰甲基)氨基)-3-(6-(2-甲基吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

图48是根据本申请的一些实施例的制备化合物35的示例性步骤的示意图。

步骤1N-[(1S)-2-(6-溴-1，3-苯并恶唑-2-基)-1-[(氰甲基)氨基甲酰基]乙基]氨基甲酸叔丁酯的制备

在(2S)-3-(6-溴-1，3-苯并恶唑-2-基)-2-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}丙酸((2.90g，7.5mmol)的DMF(30.0mL)溶液中加入2-氨基乙腈(0.69g，7.5mmol)、DIEA((2.91g，22.5mmol)和HATU(5.70g，15mmol)。将反应在室温下搅拌2小时。添加水(100mL)并用EA(100mL×3)萃取反应混合物。复合有机层用盐水(100mL×3)洗涤，经Na₂SO₄干燥，并在负压下浓缩。通过快速柱(PE：EA＝0-50％)纯化残余物，得到白色固体状的所需产物叔丁基N-[(1S)-2-(6-溴-1，3-苯并恶唑-2-基)-1-[(氰基甲基)氨基甲酰基]乙基]氨基甲酸酯(2.7g，76％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：423.0[M+H]⁺。

步骤2叔丁基(S)-(1-((氰甲基)氨基)-3-(6-(2-甲基吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸酯的制备

在叔丁基(S)-(3-(6-溴苯并[d]恶唑-2-基)-1-((氰甲基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1400mg，3.31mmol)的二恶烷/H₂O(10/1，30mL)溶液中加入(2-甲基吡啶-4-基)硼酸(679mg，4.96mmol)、K₃PO₄(2103mg，9.92mmol)，和1，1-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(242mg，0.33mmol)。将反应混合物在N₂下于90℃搅拌16小时。在负压下除去溶剂并通过组合闪式色谱法(PE/EA＝0～80％)纯化残余物以产生呈棕色固体状的产物(840mg，58％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：436.1[M+H]⁺。

步骤3(S)-2-氨基-N-(氰甲基)-3-(6-(2-甲基吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)丙酰胺的制备

在叔丁基(S)-(1-((氰甲基)氨基)-3-(6-(2-甲基吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸酯(790mg，1.81mmol)的MeCN(15mL)溶液中添加TMSI(907mg，4.54mmol)。将反应混合物在N₂下于室温搅拌0.5小时。将H₂O(50mL)加入到反应混合物中，然后通过使用饱和NaHCO₃调节至pH为8。并用EA(50mL×3)萃取。复合有机层用盐水(30mL×2)洗涤，然后用无水Na₂SO₄干燥以得到呈黄色固体的产物(550mg，58％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：336.2[M+H]⁺。

步骤4(S)-N-(1-((氰甲基)氨基)-3-(6-(2-甲基吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺的制备

在(S)-2-氨基-N-(氰甲基)-3-(6-(2-甲基吡啶-4-基)苯丙[d]恶唑-2-基)丙酰胺(130mg，0.39mmol)的DMF(10mL)溶液中添加2-环丙基-5-(1-甲基环丙基)吡唑-3-甲酸(80mg，0.39mmol)，DIEA(250mg，1.94mmol)和HATU(370mg，1.16mmol)。将反应混合物在N₂下于室温下搅拌2小时。反应完成后，将H₂O(30mL)加入到反应混合物中，然后用EA(30mL×3)萃取。复合有机层用盐水(50mL×2)洗涤，然后用无水Na₂SO₄干燥。过滤后，将溶液在真空下浓缩，并将残余物通过组合闪式色谱法(DCM/MeOH＝0～10％)纯化，得到白色固体状所需产物化合物35(140mg，68％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：523.9[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.86(t，J＝6.8Hz，2H)，8.51(d，J＝5.4Hz，1H)，8.14(s，1H)，7.78(s，2H)，7.67(s，1H)，7.58(d，J＝5.2Hz，1H)，6.61(s，1H)，5.09(d，J＝5.4Hz，1H)，4.21(dd，J＝7.6，3.8Hz，1H)，4.17(dd，J＝5.6，2.0Hz，2H)，3.59(dd，J＝15.6，5.4Hz，1H)，3.42-3.36(m，1H)，2.54(s，3H)，1.33(s，3H)，1.01(dd，J＝6.3，3.8Hz，1H)，0.91(dd，J＝10.0，6.2Hz，1H)，0.85-0.74(m，4H)，0.68(dd，J＝6.2，3.8Hz，2H)。实施例3.36：制备化合物36(S)-2-((3-溴苯基)磺酰氨基)-N-(氰甲基)-3-(6-(2-甲基吡啶-4-基)苯并[d]恶唑的制备-2-基)丙酰胺

图49是根据本申请的一些实施例的制备化合物36的示例性步骤的示意图。

在0℃下在(S)-2-氨基-N-(氰甲基)-3-(6-(2-甲基吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)丙酰胺(80mg，0.24mmol)的DCM(5mL)溶液中加入3-溴苯磺酰氯(60mg，0.24mmol)和TEA(73mg，0.72mmol)。将反应混合物在N₂下于室温下搅拌3小时。浓缩所得混合物。通过制备型TLC(DCM/MeOH＝20/1)纯化残余物，得到白色固体状所需产物化合物36(S)-2-((3-溴苯基)磺酰氨基)-N-(氰甲基)-3-(6-(2-甲基吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)丙酰胺(20mg，15％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：554.0[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，MeOD)δ8.48(d，J＝5.4Hz，1H)，7.88-7.83(m，2H)，7.74(dd，J＝8.2，1.6Hz，1H)，7.69-7.62(m，3H)，7.59(d，J＝5.4Hz，1H)，7.42-7.38(m，1H)，7.16(t，J＝7.8Hz，1H)，4.49(dd，J＝9.6，5.0Hz，1H)，4.14(s，2H)，3.41(dd，J＝15.4，5.0Hz，1H)，3.21(dd，J＝15.4，9.6Hz，1H)，2.63(s，3H)。

实施例3.37：制备化合物37(S)-2-((3-氯苯基)磺酰氨基)-N-(氰甲基)-3-(6-(2-甲基吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)丙酰胺

图50是根据本申请的一些实施例的制备化合物37的示例性步骤的示意图。

在0℃下在(S)-2-氨基-N-(氰甲基)-3-(6-(2-甲基吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)丙酰胺(80mg，0.24mmol)的DCM(5mL)溶液中加入3-氯苯磺酰氯(50mg，0.24mmol)和TEA(73mg，0.72mmol)。将反应混合物在N₂下于室温下搅拌3小时。浓缩所得混合物。通过制备型TLC(DCM/MeOH＝20/1)纯化残余物，得到白色固体状所需产物化合物37(S)-2-((3-氯苯基)磺酰氨基)-N-(氰甲基)-3-(6-(2-甲基吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)丙酰胺(30mg，20％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：510.0[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，MeOD)δ8.48(d，J＝5.4Hz，1H)，7.86(d，J＝1.2Hz，1H)，7.75-7.69(m，2H)，7.66(d，J＝8.4Hz，2H)，7.60(dt，J＝10.6，2.8Hz，2H)，7.25(t，J＝4.6Hz，2H)，4.49(dd，J＝9.4，5.0Hz，1H)，4.13(s，2H)，3.41(dd，J＝15.4，5.0Hz，1H)，3.21(dd，J＝15.4，9.4Hz，2H)，2.63(s，3H)。

实施例3.38：制备化合物38(S)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(2-甲基吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

图51是根据本申请的一些实施例的制备化合物38的示例性步骤的示意图。

步骤1(2S)-3-(6-溴-1，3-苯并恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)-2-{[2-环丙基-5-(1-甲基环丙基)吡唑-3-基]甲酰胺}丙烯酰胺

在(2S)-2-氨基-3-(6-溴基-1，3-苯并恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基(454mg，1.30mmol)和2-环丙基-5-(1-甲基环丙基)吡唑-3-甲酸(295mg，1.43mmol)的DCM(10.0mL)溶液中加入DIEA(504mg，3.90mmol)和T₃P(50％在EA中，1.65g，2.60mmol)。将反应在室温下搅拌16小时。用水(100mL)稀释反应混合物并用EA(100mL×3)萃取。复合有机层用NaHCO₃(100mL×3)、盐水(100mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，并在负压下浓缩。通过快速柱(PE：EA＝0-60％)纯化残余物以得到白色固体的产物(2S)-3-(6-溴-1，3-苯并恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基))-2-{[2-环丙基-5-(1-甲基环丙基)吡唑-3-基]甲酰胺}丙酰胺(360mg，49％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：537.1[M+H]+。¹HNMR(400MHz，MeOD)δ7.83(d，J＝1.6Hz，1H)，7.54(dt，J＝8.4，5.2Hz，2H)，6.51(s，1H)，5.04(dd，J＝8.2，6.2Hz，1H)，4.01-3.89(m，1H)，3.59(dd，J＝15.4，6.2Hz，1H)，3.43(dd，J＝15.4，8.2Hz，1H)，1.57-1.46(m，2H)，1.40(s，3H)，1.23(td，J＝12.6，4.6Hz，2H)，1.11-1.05(m，1H)，1.02-0.80(m，5H)，0.70(q，J＝4.0Hz，2H).

步骤2(S)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(2-甲基吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺的制备

在(S)-N-(3-(6-溴苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(300mg，0.56mmol)的二恶烷/H₂O(10/1，15mL)溶液中添加(2-甲基吡啶-4-基)硼酸(77mg，0.56mmol)、K₃PO₄(237mg，1.12mmol)和1，1'-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(45mg，0.06mmol)。将反应混合物在N₂下于90℃搅拌16小时。浓缩所得混合物。通过制备型TLC(DCM/MeOH＝20/1)纯化残余物，得到白色固体状所需产物化合物38(S)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(2-甲基吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(208mg，68％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：550.2[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，MeOD)δ8.46(d，J＝5.2Hz，1H)，8.00(s，1H)，7.76(d，J＝0.9Hz，2H)，7.65(s，1H)，7.56(d，J＝5.2Hz，1H)，6.51(s，1H)，5.15-5.01(m，1H)，3.97-3.94(m，1H)，3.653.60(m，1H)，3.49-3.43(m，1H))，2.61(s，3H)，1.50(d，J＝3.0Hz，2H)，1.38(s，3H)，1.26-1.19(m，2H)，1.09-1.02(m，1H)，0.96-0.93(m，1H)，0.90-0.79(m，4H)，0.68(q，J＝4.0Hz，2H)。

实施例3.39：制备化合物39(2S)-N-(1-氰基环丙基)-2-{[2-环丙基-5-(1-甲基环丙基)吡唑-3-基]甲酰胺}-3-{6-[6-(二甲氨基)吡啶-3-基]-1，3-苯并恶唑-2-基}丙酰胺

图52是根据本申请的一些实施例的制备化合物39的示例性步骤的示意图。

在(S)-N-(3-(6-溴苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(80mg，0.1489mmol)的二恶烷/H₂O(10/1，2mL)溶液中添加(6-(二甲基氨基)吡啶-3-基)硼酸(37mg，0.223mmol)、K₃PO₄(63mg，0.297mmol)和1，1'-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(7mg，0.089mmol)。将反应混合物在N₂下于90℃搅拌16小时。负压除去溶剂，残留物通过制备型HPLC[Gemini-C18，150×21.2mm，5um；ACN-H₂O(0.1％FA)，25-50]纯化得到白色固体状所需产物化合物39(25mg，27％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：579.0[M+H]⁺。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.12(s，1H)，8.77(d，J＝7.8Hz，1H)，8.48(d，J＝2.2Hz，1H)，7.90(s，1H)，7.68(d，J＝8.2Hz，1H)，7.59(d，J＝8.2Hz，1H)，6.75(d，J＝8.6Hz，1H)，6.61(s，1H)，4.94(dd，J＝14.0，8.2Hz，1H)，4.24-4.12(m，1H)，3.48(dd，J＝15.4，5.6Hz，1H)，3.07(d，J＝9.8Hz，6H)，1.48(d，J＝2.4Hz，2H)，1.34(s，3H)，1.23(s，1H)，1.11(q，J＝10.6Hz，2H)，1.04-0.97(m，1H)，0.97-0.89(m，1H)，0.8 5-0.77(m，4H)，0.68(dd，J＝6.0，3.8Hz，2H)。

实施例3.40：制备化合物40(S)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(1-(2，2-二氟乙基)-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

图53是根据本申请的一些实施例的制备化合物40的示例性步骤的示意图。

在(S)-N-(3-(6-溴苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(100mg，0.18mmol)的二恶烷/H₂O(10/1，10mL)溶液中添加1-(2，2-二氟乙基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-1，2，3，6-四氢吡啶(51mg，0.18mmol)，K₃PO₄(76毫克，0.36mmol)和1，1’-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(16mg，0.02mmol)。将反应混合物在N₂下于90℃下搅拌16小时。浓缩所得混合物。通过制备型TLC(DCM/MeOH＝10/1)纯化残余物，得到白色固体状所需产物化合物40(S)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(1-(2，2-difluoroethyl)-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(8mg，7％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：604.1[M+H]⁺。1H NMR(400MHz，MeOD)δ7.64(s，1H)，7.59(d，J＝8.4Hz，1H)，7.49(d，J＝8.4Hz，1H)，6.51(s，1H)，6.20(d，J＝4.2Hz，1H)，5.99(dt，J＝55.8，4.2Hz，1H)，5.04(dd，J＝8.2，6.2Hz，1H)，3.94(td，J＝7.4，3.8Hz，1H)，3.59(dd，J＝15.2，6.2Hz，1H)，3.43(dd，J＝15.2，8.4Hz，1H)，3.37-3.34(m，2H)，2.99-2.87(m，3H)，2.65(s，2H)，1.49(t，J＝8.2Hz，2H)，1.40(s，3H)，1.31(s，1H)，1.30-1.15(m，2H)，1.06(dt，J＝8.2，5.2Hz)，1H)，1.00-0.77(m，5H)，0.70(q，J＝3.8Hz，2H)。

实施例3.41：制备化合物41(2S)-N-(1-氰基环丙基)-2-{[2-环丙基-5-(1-甲基环丙基)吡唑-3-基]甲酰胺}-3-[6-(6-乙酰氨基吡啶-3-基)-1，3-苯并恶唑-2-基]丙酰胺

图54是根据本申请的一些实施例的制备化合物41的示例性步骤的示意图。

步骤1(S)-N-(3-(6-(6-氨基吡啶-3-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

在(S)-N-(3-(6-溴苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(300mg，0.56mmol)的二恶烷/H₂O(10/1，15mL)的溶液中添加(6-氨基吡啶-3-基)硼酸(77mg，0.56mmol)、K₃PO₄(237mg，1.12mmol)和1，1’-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(45mg，0.06mmol)。将反应混合物在N₂下于90℃下搅拌16小时。浓缩所得混合物。残余物通过制备型TLC(DCM：MeOH＝10：1)纯化以得到呈白色固体的产物(140mg，45％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：551.0[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.12(s，1H)，8.76(d，J＝8.0Hz，1H)，8.29(d，J＝2.4Hz，1H)，7.85(s，1H)，7.77(dd，J＝8.6，2.4Hz，1H)，7.66(d，J＝8.2Hz，1H)，7.54(dd，J＝8.4，1.4Hz，1H)，6.61(s，1H)，6.55(d，J＝8.6Hz，1H)，6.17(s，2H)，4.93(dd，J＝14.2，8.4Hz，1H)，4.26-4.12(m，1H)，3.48(dd，J＝15.6，5.8Hz)，1H)，3.29(s，1H)，1.51-1.44(m，2H)，1.34(s，3H)，1.12-1.07(m，2H)，1.04-0.98(m，1H)，0.95-0.89(m，1H)，0.88-0.75(m，4H)。

步骤2(2S)-N-(1-氰基环丙基)-2-{[2-环丙基-5-(1-甲基环丙基)吡唑-3-基]甲酰胺}-3-[6-(6-乙酰氨基吡啶-3-基)-1，3-苯并恶唑-2-基]丙酰胺的制备

在(2S)-3-[6-(6-氨基吡啶-3-基)-1，3-苯并恶唑-2-基]-N-(1-氰基环丙基)-2-{[2-环丙基]-5-(1-甲基环丙基)吡唑-3-基]甲酰氨基}丙烯酰胺(45mg，0.081mmol)的吡啶(1mL)溶液中加入乙酰乙酸脂(16mg，0.163mmol)。将反应在N₂下于室温搅拌18小时。负压除去溶剂，残留物通过制备型HPLC[Gemini-C18，150×21.2mm，5um；ACN-H₂O(0.1％FA)，15-40]得到白色固体状所需产物化合物41(15mg，29％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：593.0[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.58(s，1H)，9.08(s，1H)，8.73(d，J＝8.0Hz，1H)，8.65(d，J＝1.8Hz，1H)，8.11(d，J＝2.4Hz，2H)，8.00(d，J＝1.4Hz，1H)，7.67(dt，J＝8.4，5.0Hz，2H)，6.57(s，1H)，4.91(td，J＝8.2，5.8Hz，1H)，4.26-4.04(m，1H)，3.51-3.42(m，1H)，3.30(dd，J＝15.6，8.8Hz，1H)，2.08(s，3H)，1.47-1.41(m，2H)，1.30(m，3H)，1.23-1.19(m，3H)，1.14-1.02(m，2H)，0.99-0.94(m，1H)，0.91-0.86(m，1H)，0.84-0.72(m，5H)，0.64(dd，J＝6.2，3.8Hz，2H)。

实施例3.42：制备化合物42(S)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(6-甲基吡啶-3-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

图55是根据本申请的一些实施例的制备化合物42的示例性步骤的示意图。

在(S)-N-(3-(6-溴苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(150mg，0.28mmol)的二恶烷/H₂O(10：1，10mL)溶液中添加(6-甲基吡啶-3-基)硼酸(57mg，0.42mmol)、K₃PO₄(118mg，0.56mmol)和1，1’-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(20mg，0.03mmol)。将反应混合物在N₂下于90℃下搅拌16小时。浓缩所得混合物得到粗产物。通过制备型TLC(DCM/MeOH＝20/1)纯化残余物，得到白色固体状所需产物化合物42(S)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(6-甲基吡啶3-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(70mg，45％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：550.2[M+H]+。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.12(s，1H)，8.80(dd，J＝14.0，5.2Hz，2H)，8.06-8.00(m，2H)，7.76(d，J＝8.4Hz，1H)，7.68(dd，J＝8.4，1.6Hz，1H)，7.36(d，J＝8.2Hz，1H)，6.61(s，1H)，4.95(d，J＝5.8Hz，1H)，4.19(d，J＝3.8Hz，1H)，3.49(d，J＝5.8Hz，1H)，3.37(d，J＝8.8Hz，1H)，1.48(d，J＝2.4Hz，2H)，1.34(s，3H)，1.12(d，J＝10.8Hz，2H)，1.00(s，1H)，0.93(s，1H)，0.80(dd，J＝5.6，3.8Hz，4H)，0.68(dd，J＝6.2、3.8Hz、2H)。

实施例3.43：制备化合物43(S)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(6-(ethyl氨基)pyridin-3-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

图56是根据本申请的一些实施例的制备化合物43的示例性步骤的示意图。

步骤1(6-(乙基氨基)吡啶-3-基)硼酸的制备

在5-溴-N-乙基吡啶-2-胺(100mg，0.5mmol)的二恶烷(10mL)溶液中加入4，4，4'，4'，5，5，5'，5'-八甲基-2，2'-双(1，3，2-二氧硼烷)(190mg，0.75mmol)、KOAc(98mg，1mmol)和Pd(dppf)Cl₂(40mg，0.05mmol)。将反应混合物在N₂下于90℃搅拌16小时。负压除去溶剂，得到黄色油状的(6-(乙基氨基)吡啶-3-基)硼酸的粗产品(90mg，纯度：60％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：167.3[M+H]⁺。

步骤2(S)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(6-(乙基氨基)吡啶-3-基)苯并[d]恶唑-2-基)的制备-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

在S)-N-(3-(6-溴苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-的溶液中添加环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(100mg，0.19mmol)的二恶烷/H₂O(10：1，10mL)溶液中加入(6-(乙基氨基)吡啶-3-基)硼酸(46mg，0.28mmol)、K₃PO₄(79mg，0.38mmol)和Pd(dppf)Cl₂(14mg，0.02mmol)。将反应混合物在N₂下于90℃搅拌16小时。在负压下除去溶剂并将残余物通过组合闪式色谱法(DCM/MeOH＝0～10％)纯化，得到白色固体状所需产物化合物43(S)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(6-(乙氨基)吡啶-3-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(43mg，39％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：579.2[M+H]⁺。¹H(400MHz，MeOD)δ8.23(d，J＝2.2Hz，1H)，7.78-7.72(m，2H)，7.67(d，J＝8.4Hz，1H)，7.54(dd，J＝8.2，1.6Hz，1H)，6.63(d，J＝8.8Hz，1H)，6.52(s，1H)，5.06(dd，J＝8.4，6.0Hz，1H)，4.00-3.92(m，1H)，3.61(dd，J＝15.2，6.2Hz，1H)，3.45(dd，J＝15.4，8.4Hz，1H)，3.40-3.35(m，2H)，1.51(d，J＝2.8Hz，2H)，1.39(s，3H)，1.28(d，J＝7.2Hz，3H)，1.25-1.16(m，2H)，1.10-1.03(m，1H)，0.97(dd，J＝10.0，6.0Hz，1H)，0.88(ddd，J＝13.6，8.6，4.0Hz，4H)，0.69(q，J＝4.0Hz，2H)。

实施例3.44：制备化合物44(S)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(6-甲基吡啶-2-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

图57是根据本申请的一些实施例的制备化合物44的示例性步骤的示意图。

步骤1(S)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代-3-(6-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)苯并[d]恶唑-2-基)丙基-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺的制备

在(S)-N-(3-(6-溴苯并[d]恶唑-2-基)-1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(500mg，0.93mmol)的二恶烷(15mL)溶液中加入4，4，5，5-四甲基-2-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼烷-2-基)-1，3，2-二氧硼烷(354mg，1.39mmol)、KOAc(183mg，1.86mmol)和Pd(dppf)Cl₂(68mg，0.09mmol)。将反应混合物在N₂下于90℃搅拌16小时。负压除去溶剂，残余物通过组合闪式色谱法(DCM/MeOH＝0～5％)纯化，得到产物(S)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代-3-(6-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)苯并[d]恶唑-2-基)丙基-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(400mg，73％)，为棕色油状物。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：585.3[M+H]⁺。

步骤2(S)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(6-甲基吡啶-2-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺的制备

在(S)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代-3-(6-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-)2-基)苯并[d]恶唑-2-基)丙基-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(40mg，0.07mmol)在二恶烷/H₂O(10：1，5mL)溶液中加入2-溴-6-甲基吡啶(13mg，0.07mmol)、K₃PO₄(33mg，0.14mmol)和Pd(dppf)Cl₂(6mg，0.01mmol)。将反应混合物在N₂下于90℃搅拌16小时。负压除去溶剂，残余物通过组合闪式色谱法(DCM/MeOH＝0～10％)纯化，得到黄色固体状所需产物化合物44(S)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(6-甲基吡啶-2-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧丙基-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(4mg，10％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：550.2[M+H]⁺。¹HNMR(400MHz，MeOD)δ8.18(d，J＝1.2Hz，1H)，7.97(dd，J＝8.4，1.6Hz，1H)，7.77(d，J＝7.6Hz，1H)，7.70(dd，J＝17.6，8.2Hz，2H)，7.24(d，J＝7.6Hz，1H)，6.51(s，1H)，5.06(dd，J＝8.4，6.2Hz，1H)，3.98-3.92(m，1H)，3.60(s，1H)，3.48(d，J＝8.4Hz，1H)，2.61(s，3H)，1.49(d，J＝2.8Hz，2H)，1.38(s，3H)，1.24-1.18(m，2H)，1.07-1.01(m，1H)，0.96(dd，J＝10.0，6.0Hz，1H)，0.88(dt，J＝9.8，5.2Hz，4H)，0.68(q，J＝4.0Hz，2H)。

实施例3.45：制备化合物45(2S)-2-[(5-叔丁基-2-环丙基吡唑-3-基)甲酰氨基]-N-(氰甲基)-3-{6-[1-(2-甲氧基乙基)-3，6-二氢-2H-吡啶-4-基]-1，3-苯并恶唑-2-基}丙酰胺

图58是根据本申请的一些实施例的制备化合物45的示例性步骤的示意图。

步骤1 1-(2-甲氧基乙基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼烷-2-基)-3，6-二氢-2H-吡啶的制备

在4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1，2，3，6-四氢吡啶(1.0g，4.07mmol)的DMF(15.0mL)溶液中加入DIEA(1.58g，12.2mmol)和1-溴-2-甲氧基乙烷(623mg，4.48mmol)。将反应在60℃下搅拌16小时。将反应混合物用水(50mL)稀释，然后用EA(50mL×3)萃取。复合有机层用盐水(100mL×3)洗涤，经Na₂SO₄干燥，并在负压下浓缩。通过快速柱(DCM：MeOH＝15：1)纯化残余物，得到无色油状的所需产物1-(2-甲氧基乙基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3，6-二氢-2H-吡啶(1.5g，96.5％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：268.2[M+H]⁺。

步骤2叔丁基N-[(1S)-1-[(氰甲基)氨基甲酰基]-2-{6-[1-(2-甲氧基乙基)-3，6-二氢-2H-吡啶-4-基]-1，3-苯并恶唑-2-基}乙基]氨基甲酸酯的制备

在1-(2-甲氧基乙基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼烷-2-基)-3，6-二氢-2H-吡啶(196mg，0.732mmol)的1，4-二恶烷/H₂O(10：1，11.0mL)溶液中添加叔丁基N-[(1S)-2-(6-溴基-1，3-苯并恶唑-2-基)-1-[(氰甲基)氨基甲酰基]乙基]氨基甲酸酯(310mg，0.732mmol)、K₂CO₃(304mg，2.20mmol)和Pd(dppf)Cl₂(59.8mg，0.0732mmol)。将反应混合物在N₂下于90℃搅拌6小时。过滤反应混合物并负压浓缩滤液。残留物用水(20mL)稀释，然后用EA(20mL×3)萃取。复合有机层用盐水(50mL×2)洗涤，经Na₂SO₄干燥，并在负压下浓缩。通过快速柱(DCM：MeOH＝20：1)纯化残余物，得到白色固体状产物叔丁基N-[(1S)-1-[(氰甲基)氨基甲酰基]-2-{6-[1-(2-甲氧基乙基)-3，6-二氢-2H-吡啶-4-基]-1，3-苯并恶唑-2-基}乙基]氨基甲酸酯(150mg，42％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：484.2[M+H]⁺。

步骤3(2S)-2-氨基-N-(氰甲基)-3-{6-[1-(2-甲氧基乙基)-3，6-二氢-2H-吡啶-4-基]-1，3-苯并恶唑-2-基}丙酰胺的制备

在叔丁基N-[(1S)-1-[(氰甲基)氨基甲酰基]-2-{6-[1-(2-甲氧基乙基)-3，6-二氢-2H-吡啶-4[-基]-1，3-苯并恶唑-2-基}乙基]氨基甲酸酯(150mg，0.310mmol)的MeCN(5.0mL)溶液加入TMSI(155mg，0.776mmol)。将反应溶液在室温下搅拌0.5小时。负压浓缩反应混合物得到棕色固体状产物(2S)-2-氨基-N-(氰甲基)-3-{6-[1-(2-甲氧基乙基)-3，6-二氢-2H-吡啶-4-基]-1，3-苯并恶唑-2-基}丙酰胺(100mg，75.7％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：384.2[M+H]⁺。

步骤4(2S)-2-[(5-叔丁基-2-环丙基吡唑-3-基)甲酰胺]-N-(氰甲基)-3-{6-[1-(2-甲氧基乙基)-3，6-二氢-2H-吡啶-4-基]-1，3-苯并恶唑-2-基}丙酰胺的制备

在上述混合物(120mg，0.248mmol)的DMF(5.0mL)溶液中加入5-叔丁基-2-环丙基吡唑-3-甲酸(62mg，0.298mmol)、DIEA(96mg，0.745mmol)，和HATU(189mg，0.496mmol)。将反应溶液在室温下搅拌2小时。将反应混合物用水(20mL)稀释，然后用EA(20mL×3)萃取。复合有机层用盐水(50mL×3)洗涤，经Na₂SO₄干燥，并在负压下浓缩。通过制备型TLC(DCM：MeOH＝15：1)纯化残余物，得到白色固体状所需产物化合物45(2S)-2-[(5-叔丁基-2-环丙基吡唑-3-基)甲酰胺]-N-(氰甲基)-3-{6-[1-(2-甲氧基乙基)-3，6-二氢-2H-吡啶-4-基]-1，3-苯并恶唑-2-基}丙酰胺(15mg，10％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：547.8[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.12(d，J＝6.8Hz，1H)，8.01(t，J＝5.6Hz，1H)，7.57(d，J＝8.2Hz，1H)，7.51(s，1H)，7.39(d，J＝8.4Hz，1H)，6.55(s，1H)，6.08(s，1H)，5.19(dd，J＝11.0，6.8Hz，1H)，4.18(t，J＝4.6Hz，2H)，3.75-3.67(m，2H)，3.68(d，J＝4.0Hz，1H)，3.53(s，2H)，3.39(s，3H)，3.33(dd，J＝16.8，6.8)Hz，1H)，3.07(s，2H)，2.97(s，2H)，2.77(s，2H)，1.43-1.39(m，1H)，1.27(d，J＝12.2Hz，9H)，1.01(d，J＝8.0Hz，2H)，0.88(t，J＝6.8Hz，2H)。

实施例3.46：制备化合物46(2S)-N-(1-氰基环丙基)-2-{[2-环丙基-5-(1-甲基环丙基)吡唑-3-基]甲酰胺}-3-{6-[1-(2-甲氧基乙基)-3，6-二氢-2H-吡啶-4-基]-1，3-苯并恶唑-2-基}丙酰胺

图59是根据本申请的一些实施例的制备化合物46的示例性步骤的示意图。

在(2S)-3-(6-溴-1，3-苯并恶唑-2-基)-N-(1-氰基环丙基)-2-{[2-环丙基-5-(1-甲基环丙基)的混合物吡唑-3-基]甲酰胺}丙酰胺(200mg，0.372mmol)和1-(2-甲氧基乙基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-3，6-二氢-2H-吡啶(249mg，0.931mmol)的二恶烷/H₂O(10：1，11mL)溶液中添加K₃PO₄(158mg，0.744mmol)和Pd(dppf)Cl₂(30毫克，0.037mmol)。反应溶液搅拌在N₂下于90℃下搅拌16小时。过滤反应混合物并用H₂O(100mL)和EtOAc(50×3mL)萃取滤液。复合有机层用盐水(100mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，并在负压下浓缩。粗产物通过SFC[柱：手性柱；流动相：CO₂-IPA(DEA)]纯化得到白色固体状目标化合物46(2S)-N-(1-氰基环丙基)-2-{[2-环丙基-5-(1-甲基环丙基)吡唑-3-基]甲酰胺}-3-{6-[1-(2-甲氧基乙基)-3，6-二氢-2H-吡啶-4-基]-1，3-苯并恶唑-2-基}丙酰胺(25mg，11％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：598.2[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.10(s，1H)，8.75(d，J＝8.0Hz，1H)，7.70(s，1H)，7.61(d，J＝8.4Hz，1H)，7.45(d，J＝8.4Hz，1H)，6.59(s，1H)，6.22(s，1H)，4.92(dd，J＝14.0，8.2Hz，1H)，4.20-4.16(m，1H)，3.54(s，2H)，3.47(dd，J＝15.6，5.8Hz，1H)，3.28(s，3H)，3.33(s，3H)，2.79(s，3H)，2.59(s，2H)，1.49-1.45(m，2H)，1.34(s，3H)，1.14-0.98(m，3H)，0.94-0.89(m，1H)，0.86-0.77(m，4H)，0.68(dd，J＝6.2，3.8Hz，2H)。

实施例3.47：制备化合物47(S)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

图60是根据本申请的一些实施例的制备化合物47的示例性步骤的示意图。

在(S)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-1-氧代-3-(6-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷)2-基)苯并[d]恶唑-2-基)丙基-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(100mg，0.17mmol)的二恶烷/H₂O(10：1，10mL)溶液中加入4-溴-2-(二氟甲基)吡啶(43mg，0.17mmol)、K₃PO₄(73mg，0.34mmol)和Pd(dppf)Cl₂(14mg，0.02mmol)。将反应混合物在N₂下于90℃搅拌16小时。负压除去溶剂，残余物通过组合闪式色谱法(DCM/MeOH＝0～10％)纯化，得到白色固体状所需化合物47(S)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧丙基-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺为(7mg，7％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：586.1[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.15(s，1H)，8.79(dd，J＝19.8，6.6Hz，2H)，8.26(s，1H)，8.06(s，1H)，7.98(d，J＝4.8Hz，1H)，7.90-7.80(m，2H)，7.02(t，J＝54.8Hz，1H)，6.61(s，1H)，4.97(d，J＝6.0Hz，1H)，4.23-4.15(m，1H)，3.52(d，J＝5.6Hz，1H)，3.41-3.35(m，1H)，1.48(s，2H)，1.33(s，3H)，1.12(d，J＝10.4Hz，2H)，1.04-0.89(m，2H)，0.86-0.74(m，4H)，0.68(dd，J＝6.2，3.8Hz，2H)。

实施例3.48：制备化合物48(S)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(2-环丙基吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺

在(S)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(2-环丙基吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(150mg，0.26mmol)的二恶烷/H₂O(10：1，10mL)溶液中添加4-溴-2-环丙基吡啶(51mg，0.26mmol)、K₃PO₄(109mg，0.51mmol)和Pd(dppf)Cl₂(19mg，0.03mmol)。将反应混合物在N₂下于90℃和搅拌16小时。负压除去溶剂，残余物通过组合闪式色谱法(DCM/MeOH＝0～10％)纯化，得到白色固体状所需化合物48(S)-N-(1-((1-氰基环丙基)氨基)-3-(6-(2-环丙基吡啶-4-基)苯并[d]恶唑-2-基)-1-氧代丙烷-2-基)-1-环丙基-3-(1-甲基环丙基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(32mg，21％)。对所得化合物进行质谱分析，测试结果如下：Mass(m/z)：576.3[M+H]⁺。¹H(400MHz，MeOD)δ8.40(d，J＝5.2Hz，1H)，7.99(s，1H)，7.76(d，J＝1.0Hz，2H)，7.54(d，J＝1.2Hz，1H)，7.47(dd，J＝5.2，1.8Hz，1H)，6.51(s，1H)，5.06(dd，J＝8.4，6.2Hz，1H)，3.98-3.92(m，1H)，3.63(dd，J＝15.4，6.2Hz，1H)，3.46(dd，J＝15.4，8.4Hz，1H)，2.21-2.16(m，1H)，1.49(t，J＝6.2Hz，2H)，1.38(s，3H)，1.24-1.18(m，2H)，1.09-1.05(m，2H)，1.03(dd，J＝4.6，2.8Hz，2H)，0.98-0.78(m，6H)，0.68(q，J＝4.0Hz，2H)。

已经如此描述了基本概念，在阅读了本详细公开内容之后，对于本领域技术人员来说可能相当明显的是，前述详细公开内容旨在仅以示例的方式呈现而不是限制性的。可以发生各种改变、改进和修改，并且这些改变、改进和修改对于本领域的技术人员是意在的，尽管这里没有明确说明。这些变更、改进和修改旨在由本申请建议，并且在本申请的示例性实施例的精神和范围内。

同时，本申请使用了特定词语来描述本申请的实施例。例如“一个实施例”、“一实施例”、和/或“一些实施例”意指与本申请至少一个实施例相关的某一特征、结构或特性。因此，应当强调并注意的是，本说明书中在不同位置两次或以上提及的“一实施例”或“一个实施例”或“一替代性实施例”并不一定是指同一实施例。此外，本申请的一个或以上实施例中的某些特征、结构或特点可以进行适当的组合。

此外，处理元素或序列的叙述顺序，或数字、字母或其他名称的使用，因此，并非旨在将要求保护的过程和方法限制为任何顺序，除非在权利要求中可能指定。尽管以上公开内容通过各种示例讨论了什么是当前被认为是本申请内容的各种有用的实施例，但是应当理解这样的细节仅用于该目的并且所附权利要求不限于所公开的实施例，而是相反，旨在涵盖在所公开的实施例的精神和范围内的修改和等同布置。例如，虽然上述各种组件的实现可以体现在硬件设备中，但是它也可以实现为纯软件的解决方案，例如安装在现有的服务器或移动设备上。

类似地，应当理解，在本申请的实施例的前述描述中，有时将各种特征组合在单个实施例、附图或其描述中以简化本申请，从而有助于理解一个或多个各种实施例。然而，这种公开方法不应被解释为反映要求保护的主题需要比每项权利要求中明确叙述的更多的特征的意图。相反，权利要求的主题不在于单个前述公开实施例的所有特征。

Claims

1.一种由式(I-a)表示的化合物，

其中，

R₁和R₂独立地选自H、-CH₂-基团和烷基；

R₁和R₂未连接或通过单键连接；

W是CO或SO₂；

R₃为烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基或杂环基，R₃可选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、芳基、杂环基和烷氧基中的一个或多个基团取代；

X₁为CH基团或N；

X₂为O、S或N-R₄，其中R₄选自H、烷基、芳基和杂环基；

X₃为H、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基，X₃可选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基和烷氧基中的一个或多个基团取代；

Z₁为CH基团、C-R₅或N；

Z₂为CH基团、C-R₆或N；

Z₃为CH基团、C-R₇或N；以及

Z₄为CH基团、C-R₈或N，其中，

R₅-R₈独立地选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、-CN、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基，并且

R₅-R₈中的每一个可选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、杂环基、环烷基、芳基和烷氧基中的一个或多个基团取代。

2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物由式(II)、式(III)、式(IV)或式(V)表示：

其中，R₀是H、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基，并且R₀可选地被选自卤素、羟基、烷基，氟代烷基、环烷基和烷氧基中的一个或多个基团取代；或

3.根据权利要求2所述的化合物，其特征在于，R₅-R₈均为H。

4.根据权利要求2所述的化合物，其特征在于，

R₅-R₈中的至少一个是卤素或-CN，并且

R₅-R₈中的其他基团为H。

5.根据权利要求2所述的化合物，其特征在于，R₅-R₈中任一个基团由下式(VI-a)、式(VI-b)、式(VI-c)、式(VI-d)、式(VI-e)、式(VI-f)或式(VI-g)表示，

其中，

R₉为H、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基，并且

R₁₀和R₁₁独立地选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基；

其中

X₄为S、O、SO₂、N、C或C-L₁，其中L₁选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基、芳基基团、杂芳基和杂环基，并且L₁可选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、芳基、杂环基和烷氧基中的一个或多个基团取代，

X₅是N或C，

R₁₂不存在，或选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基，并且可选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、芳基、杂环基和烷氧基中的一个或多个基团取代，以及

R₁₃-R₁₆独立地选自H、卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基，并且R₁₃-R₁₆中的每一个可选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、芳基、杂环基和烷氧基中的一个或多个基团取代；

其中，

X₆为S、O、SO ₂、N、C或C-L₂，其中L₂选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基、芳基基团、杂芳基和杂环基，并且L₂可选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、芳基、杂环基和烷氧基中的一个或多个基团取代，

R₁₇不存在，或选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基，并且可选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、芳基、杂环基和烷氧基中的一个或多个基团取代，以及

R₁₈-R₂₁独立地选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基，并且R₁₈-R₂₁中的每一个可选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、芳基、杂环基和烷氧基中的一个或多个基团取代；

其中

R₂₂为H、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基，R₂₂可选地被选自卤素、羟基、烷基、氟烷基、环烷基和烷氧基中的一个或多个基团取代，以及

R₂₃-R₂₅独立地选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基；

其中，R₂₆-R₃₇独立地选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基、杂环基和N-R₃₈，其中，R₃₈选自H、烷基、芳基、杂环基和酮基。

6.根据权利要求5所述的化合物，其特征在于，R₉-R₁₀是H。

7.根据权利要求5所述的化合物，其特征在于，

X₄和X₅均为N，

R₁₂是甲基，并且

R₁₃-R₁₆为H。

8.根据权利要求5所述的化合物，其特征在于，

X₆为N，

R₁₈-R₂₁为H，并且

R₁₇为甲基、-CH₂-CHF₂或-C₂H₄-OCH₃。

9.根据权利要求5所述的化合物，其特征在于，

R₂₂为甲基，并且

R₂₃-R₂₅均为H。

10.根据权利要求5所述的化合物，其特征在于，

R₂₇-R₂₉均为H，并且

R₂₆为甲基、-CHF₂或环丙基。

11.根据权利要求5所述的化合物，其特征在于，

R₃₁-R₃₃均为H，并且

R₃₀为甲基、-NH₂、-NC₂H₆、-NHCOCH₃或-NHCH₃。

12.根据权利要求5所述的化合物，其特征在于，

R₃₅-R₃₇均为H，并且

R₃₄为甲基。

13.根据权利要求2所述的化合物，其特征在于，R₃为苯卤化基团。

14.根据权利要求2所述的化合物，其特征在于，R₃是由式(VII-a)、式(VII-b)或式(VII-c)表示的基团，

其中，R₃₉-R₄₂独立地选自H、卤素、羟基、烷基、氟烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基、杂环基和N-R₄₉，其中R₄₉选自H、烷基、芳基、杂环基和酮基；

其中，

R₄₃为H、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基，并且

R₄₄和R₄₅独立地选自H、卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基，并且R₄₄和R₄₅中的每一个可选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、芳基、杂环基和烷氧基中的一个或多个基团取代；或者

其中，

R₄₆为H、烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环基，并且

R₄₇和R₄₈独立地选自H、卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、烷氧基、芳基、杂芳基和杂环基，并且R₄₇和R₄₈中的每一个可选地被选自卤素、羟基、烷基、氟代烷基、环烷基、芳基、杂环基和烷氧基中的一个或多个基团取代。

15.根据权利要求14所述的化合物，其特征在于，

R₄₀-R₄₂均为H，并且

R₃₉为甲基。

16.根据权利要求14所述的化合物，其特征在于，

R₄₅为H，

R₄₃为甲基、环丙基或以及

R₄₄为叔丁基、环丙基或

17.根据权利要求14所述的化合物，其特征在于，

R₄₈为H，

R₄₆为甲基、-CHF₂或-CF₃，并且

R₄₇为环丙基。

18.根据权利要求2所述的化合物，其特征在于，R₁和R₂为H或通过单键连接的-CH₂-基团。

19.一种选自表1的化合物：

表1

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20.一种治疗受试者疾病的方法，包括：

向患有疾病的受试者施用组合物，该组合物包含药学有效量的由式(I-a)表示的化合物、其异构体、其对映异构体、其非对映异构体、其外消旋体、其溶剂化物或其药学上可接受的盐，

其中