ES2934986T3 - Derivados heterocíclicos - Google Patents

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Sarah Schlesiger
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Abstract

Los compuestos de fórmula (I): Q1-Q2-Q3, en los que Q1, Q2 y Q3 tienen los significados indicados en la reivindicación 1, degradan proteínas diana, y pueden emplearse, entre otras, para el tratamiento de enfermedades como el cáncer, esclerosis múltiple, enfermedades cardiovasculares, lesión del sistema nervioso central y diferentes formas de inflamación. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Derivados heterocíclicos
Antecedentes de la invención
La invención tiene el objeto de determinar compuestos novedosos que tienen propiedades valiosas, en particular aquellos que se pueden usar para la preparación de medicamentos.
La presente invención se relaciona con compuestos de unión a ligasa E3 que degradan proteínas diana, preferentemente MetAP2.
Los compuestos de esta invención son derivados heterocíclicos y son útiles para el tratamiento de enfermedades tales como tumores, metástasis tumorales, enfermedades proliferativas de las células mesangiales, hemangioma, retinopatía proliferativa, artritis reumatoide, neovascularización aterosclerótica, psoriasis, neovascularización ocular, osteoporosis, diabetes y obesidad, leucemia linfoide, linfoma, paludismo e hipertrofia prostática. La presente invención proporciona también métodos para preparar estos compuestos y composiciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos.
Las moléculas pequeñas degradadoras se utilizan cada vez más como herramientas para examinar los papeles funcionales de las proteínas y han surgido como una modalidad terapéutica novedosa. Al funcionar al nivel postransduccional, estas moléculas proporcionan el potencial para respuestas biológicas diferenciadas en comparación con los inhibidores clásicos y han ampliado el repertorio de métodos para el silenciamiento de proteínas más allá de los enfoques genéticos (por ejemplo: la inactivación de un gen, siARN).
Las moléculas degradadoras proporcionan un ejemplo de una técnica genética química capaz de dirigirse más en lo general hacia el proteoma. Estas moléculas quiméricas están diseñadas para inducir la degradación de sus proteínas diana a través del sistema proteosoma ubiquitina (UPS [por sus siglas en inglés]), eliminando de ese modo a las proteínas preexistentes. El UPS es la vía intracelular más importante para la degradación de proteínas en el que una serie de enzimas conocidas como E1s (enzimas activadores de la ubiquitina), E2s (enzimas conjugadoras de la ubiquitina) y E3s (ligasas de la ubiquitina) llevan a cabo enlaces covalentes de la proteína ubiquitina de 76 aminoácidos y 9 u (9 kDa) a una proteína diana. Las reacciones enzimáticas posteriores dan como resultado la formación de una cadena de poliubiquitina, que dirige a la proteína para su degradación por parte del proteosoma 26S.
Los degradadores bifuncionales comprenden un motivo de unión a ligasa E3 que está enlazado a una fracción de molécula de unión a la proteína diana. En consecuencia, estas moléculas secuestran la maquinaria de degradación de la propia célula al reclutar una ligasa E3 cercana a la proteína diana. La proximidad espacial permite la ubiquitinación de la proteína y el posterior reconocimiento y agotamiento por parte del UPS a través de la formación de un complejo terciario estable.
La especificidad a una proteína diana en particular se asocia con la ligasa E3 (Li W, et al. PLoS One. 2008; 3:e1487) lo que facilita la etapa final de fijación de la ubiquitina a la proteína diana. Mientras que la primera generación de degradadores se desarrolló exitosamente con el uso de péptidos como motivos de reconocimiento a la ligasa de ubiquitina E3, no eran permeables a la célula o no podían hacer permeable a la célula al agregar un motivo permeable a la célula, tal como el péptido TAT (Sakamoto KM, et al Proc Natl Acad Sci U S A. 2001; 98:8554-8559; Zhang D, et al. Bioorg Med Chem Lett. 2004; 14:645-648; Schneekloth JS Jr. et al. J Am Chem Soc. 2004; 126:3748-3754.). La escasa permeabilidad celular de la primera generación de degradadores bifuncionales mejoró significativamente con el descubrimiento de moléculas pequeñas que se unen a las ligasas E3, tales como el ligando Von Hippel Lindau (VHL) de unión a la ligasa VHL (Buckley et al, J. Am. Chem. Soc., 2012, 134 (10), pp. 4465-4468) o los derivados de unión de talidomida al CRBN o a la ligasa E3 a cereblon (Winter et al, Science 19 Jun 2015: Vol. 348, Issue 6241, pp. 1376-1381). Tener todos los degradantes de molécula pequeña a la mano permitió a los científicos optimizar aquellos compuestos herramienta en compuestos terapéuticos importantes.
Hasta ahora, los degradadores que se dirigen al receptor a andrógenos (AR [por sus siglas en inglés]) y al receptor a estrógenos (ER [por sus siglas en inglés]) se han desarrollado como candidatos clínicos, demostrando las aplicaciones potenciales de estas moléculas en el tratamiento de los cánceres de próstata y de mama (Rodriguez-Gonzalez A, et al. Oncogene. 2008; 27:7201-7211; Cyrus K, et al. Chembiochem. 2010; 11:1531-1534).
Junto con los degradadores que se orientan a la metionina aminopeptidasa 2 (MetAP-2) (Sakamoto KM, et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 2001; 98:8554-8559; WO2002020740) se han desarrollado una gama de otros degradantes bifuncionales que se orientan a las proteínas que van desde las quinasas, proteínas de señalización, así como proteínas citosólicas y receptores de membrana (ejemplos en Ottis et al a Cs Chem. Biol., 2017, 12 (4), pp. 892-898).
La síntesis de los compuestos degradadores que median la degradación de la MetAP-2 al reclutar la ligasa VHL E3 se informa en el documento W02002020740. Este enfoque se centra en los ligandos de la MetAP-2 que unen la proteína diana de forma covalente y una secuencia peptídica que se orienta al VHL. Una forma de acción covalente deteriora drásticamente la función catalítica putativa de las moléculas degradadoras.
En esta invención, la proteína diana MetAP-2 se une mediante ligandos de unión reversible descritos, por ejemplo, en el documento WO2013/149704. La ligasa E3 es reconocida por motivos conocidos según se describe, por ejemplo, en los documentos WO2018/033556 o CN107540608.
Se ha determinado que los compuestos y las sales de estos, de acuerdo con la invención, tienen propiedades farmacológicas muy valiosas, al mismo tiempo que son bien tolerados.
De forma sorprendente, se determinó que los compuestos de la invención degradan la MetAP-2 de una manera dependiente de la dosis en líneas celulares importantes para la enfermedad.
Los compuestos de la invención inhiben la enzima MetAP-2 con una concentración nanomolar e inhiben la proliferación celular de las HUVEC con IC50 micromolar, como se muestra en la tabla que se anexa.
Esta inhibición de la MetAP-2 en los ensayos enzimáticos, así como en los ensayos celulares se compara con la inhibición de la MetAP-2 demostrada con los compuestos de las solicitudes de Merck W o 2012/048775, WO 2013/149704, WO 2016/020031. En consecuencia, los compuestos que se reivindican actualmente son útiles para el tratamiento de enfermedades según se describe en los documentos WO 2012/048775, WO 2013/149704, WO 2016/020031.
La presente invención se relaciona específicamente con compuestos de la fórmula I que degradan la proteína diana MetAP2, con composiciones que comprenden estos compuestos y con procesos para el uso de estos para el tratamiento de enfermedades y malestares.
El hospedero o paciente puede pertenecer a cualquier especie de mamífero, por ejemplo, una especie de primate, particularmente humanos; roedores, incluidos ratones, ratas y hámsteres; conejos; caballos, vacas, perros, gatos, etc. Los modelos animales son de interés para las investigaciones experimentales, al proporcionar un modelo para el tratamiento de enfermedades humanas.
La susceptibilidad de una célula en particular para el tratamiento con los compuestos de acuerdo con la invención se puede determinar mediante pruebas in vitro. Usualmente, un cultivo de la célula se combina con un compuesto de acuerdo con la invención en diversas concentraciones por un periodo de tiempo que es suficiente para permitir que los agentes activos, tal como un anti IgM induzca una respuesta celular, como una expresión de un marcador de superficie, habitualmente entre aproximadamente una hora y una semana. Las pruebas in vitro se pueden llevar a cabo usando células cultivadas de sangre o de una muestra de biopsia. La cantidad de marcador de superficie expresado se evalúa mediante citometría de flujo usando anticuerpos específicos que reconocen al marcador.
La dosis varía dependiendo del compuesto específico usado, de la enfermedad específica, del estado del paciente, etc. Una dosis terapéutica usualmente es suficiente reducir de forma considerable la población no deseada de células en el tejido diana, al mismo tiempo que se mantiene la viabilidad del paciente. El tratamiento se continúa generalmente hasta que ha tenido lugar una reducción considerable, por ejemplo, de al menos aproximadamente un 50 % de reducción de la carga celular, y se puede continuar hasta que esencialmente no se detecten células no deseadas en el cuerpo.
Antecedentes de la invención
Se divulgan otros derivados de amidas cíclicas, como inhibidores de la actividad de la proteínas diana en el documento WO 2018/033556 A1.
Las amidas cíclicas se describen como inhibidores de la MetAP-2 en los documentos WO 2012/048775 A1, WO 2013/149704 A1 y WO 2016/020031 A1.
Breve descripción de la invención
La invención se relaciona con compuestos de la fórmula I
Q1-Q2-Q3
en que
Q1 denota
Figure imgf000004_0002
Z denota O u CH2,
Q denota O, NH, NCH3 o CH2,
Q2 denota alquileno no ramificado que tiene 4-25 átomos de C, en que los grupos 1-8 de CH2 no adyacentes se pueden reemplazar por O, CONH y/o NHCO y en que un grupo CH2 se puede reemplazar por
Figure imgf000004_0001
Q3 denota
Figure imgf000005_0001
L denota NR4CO, CONR4 , NH, O, CO, S, SO2 , SO(=NH), NHCONH, SO2NH o NHSO2 ,
R denota NR2R4 , Alc, C(=CH2)[C(R4)2]nAr2 , Het2 , O[C(R4)2]nAr2 o OA,
X denota CO o CH2 ,
Y denota CO o CH2 ,
R1 denota (CH2)n, [C(R4)2]nAr1-, (CH2)nHet-, (CH2)nCic-, [C(R4)2]nCONHAr1-, [C(R4)2]nNA-, O[C(R4)2]nAr1- o [C(R4)2]nCOO(CH2)nAr1-,
R2 en donde el sustituyente L está conectado directamente con Ar1, Het o Cic, denota H, [C(R4)2]nAr2 , (CH2)nCOHet1, (CH2)nCOAr2 , (CH2)mNA2 , (CH2)nCic o (CH2)nHet1,
R3 denota OH o OCOA,
R4 denota H o un alquilo que tiene 1,2, 3 o 4 átomos de C,
R2 y R4 en conjunto también denotan un alquileno que tiene 2, 3, 4 o 5 átomos de C, donde un grupo CH2 puede reemplazarse también por N(CH2)mOH o SO2 ,
R5 , R6 cada uno, independientemente entre sí, H, F o A,
R5 y R6 en conjunto también denotan un alquileno que tiene 2, 3, 4 o 5 átomos de C, donde un grupo CH2 se puede reemplazar también por NCOA u O,
R7 denota H, Hal o A,
Ar1 denota fenilo, que es no sustituido o mono, ditri, tetra o pentasustitutido por Hal, OH, OA, CONH2 , CONHA, CONA2 , NHSO2A, CONHCic, NHSO2Cic, CONHAr2 , Het1, COHet1 y/o NASO2A,
Ar2 denota un fenilo que es no sustituido o mono, di, tri, tetra o pentasustituido por Hal, A, CONH2 , y/o OAr3 , Ar3 denota un fenilo que es no sustituido o monosustituido por NH2 ,
Het denota un mono o bicíclico saturado, no saturado o heterociclo aromático que tiene 1 a 4 átomos de N, y/u O y/u S que son no sustituidos o mono, di o trisustituido por Hal, A, OA, CN, NH2 , NHA, NA2, NO2 , CN, COOH, c Oo A, (CH2)nCONH2, (CH2)nCONHA, (CH2)nCONA2, NHCOA, COA, CHO, Het1, SO2A, SO2NH2 , SO2NHA, SO2NA2 , CONHNH2 , CONHAr3 , =O y/o Ar3 ,
Het1 denota piridazinil, pirazolil, piridil, piperazinil, morfolinil, pirimidinil, furil, tienil, imidazolil, pirrolil, oxazolil, oxadiazolil, isoxazolil, tiazolil, triazolil, tetrazolil, tiadiazol, piperidin-1-il, pirrolidin1-il, tetrahidropiranil, 1,2-oxazinan-2-il, 1,2,5-oxadiazinan-2-il, 1,3-oxazinan-3-il o hexahidropirimidinil, cada uno de los cuales es no sustituido o mono, di o trisustituido por A y/u OA,
Het2 denota isoindolil,
A denota un alquilo no ramificado o ramificado que tiene 1-10 átomos de C, en que 1-7 átomos de H se pueden reemplazar por F, Cl, Br, OH, CHO, COA, COOA, CN, CONA2 , CONHA y/o CONH2 , y/o en que uno o dos grupos CH y/o CH2 no adyacentes se pueden reemplazar por O u Cic,
Alc denota un alquenilo que tiene 2, 3, 4, 5 o 6 átomos de C
Cic denota un alquilo cíclico que tiene 3-7 átomos de C que es no sustituido o mono, di o trisustituido por NHCOA, NHSO2 ,OH, OA, A, NH2 , NHA, NA2 , COOA, COOH y/o CONHA,
Hal denota F, Cl, Br o I,
m denota 1, 2, 3 o 4,
n denota 0, 1, 2, 3 o 4,
p denota 1, 2 o 3,
y sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos, que incluyen sus mezclas en todas las proporciones.
La invención también se relaciona con formas ópticamente activas (estereoisómeros), los enantiómeros, los racematos, los diaestereómeros y los hidratos y solvatos de estos compuestos.
Por otra parte, la invención se relaciona con derivados farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la fórmula I.
El término solvatos de los compuestos se considera que significa aducciones de moléculas de disolvente inerte sobre los compuestos que se forman debido a su fuerza de atracción mutua. Los solvatos son, por ejemplo, mono o dihidratos o alcóxidos.
Se entiende que la invención también se relaciona con los solvatos de las sales. El término derivados farmacéuticamente aceptables se considera que significa, por ejemplo, las sales de los compuestos de acuerdo con la invención y también los compuestos llamados profármaco.
Según se usa en este documento, y a menos que se señale de otra forma, el término “profármaco” significa un derivado de un compuesto de fórmula I que se puede hidrolizar, oxidar o reaccionar de otra manera bajo condiciones biológicas (in vitro o in vivo) para proporcionar un compuesto activo, particularmente un compuesto de fórmula I. Ejemplos de pro­ fármacos incluyen, pero no se limitan a derivados y metabolitos de un compuesto de fórmula I que incluyen fracciones de molécula biohidrolizables tales como amidas biohidrolizables, ésteres biohidrolizables, carbamatos biohidrolizables, carbonatos biohidrolizables, ureidos biohidrolizables y análogos de fosfato biohidrolizables. En ciertas realizaciones, los profármacos de compuestos con grupos funcionales carboxilo son los ésteres de alquilo inferior del ácido carboxílico. Los ésteres de carboxilato se forman convenientemente esterificando cualquiera de las fracciones de molécula de ácido carboxílico presentes en la molécula. Los profármacos se pueden preparar usualmente con el uso de métodos bien conocidos.
La expresión “cantidad efectiva” denota la cantidad de un medicamento o de un ingrediente farmacéutico activo que da lugar a una respuesta biológica o médica en un tejido, sistema, animal o humano que se busca o que se desea, por ejemplo, por un investigador o un médico.
Además, la expresión “cantidad terapéuticamente efectiva” denota una cantidad que, en comparación con un sujeto correspondiente que no ha recibido esta cantidad, tiene las siguientes consecuencias:
tratamiento mejorado, curación, prevención o eliminación de una enfermedad, síndrome, padecimiento, dolencia, trastorno o efectos secundarios o también la reducción en el avance de una enfermedad, dolencia o trastorno.
La expresión “cantidad terapéuticamente efectiva” también abarca las cantidades que son efectivas para aumentar la función fisiológica normal.
La invención también se relaciona con el uso de mezclas de los compuestos de la fórmula I, por ejemplo, mezclas de dos diastereoisómeros, por ejemplo, en la relación de 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:10, 1:100 o 1:1000.
Estos son preferentemente de forma particular mezclas de compuestos estereoisoméricos.
“Tautómeros” se refiere a formas isoméricas de un compuesto que está en equilibrio entre sí. Las concentraciones de las formas isoméricas dependerán del entorno en el que se encuentre el compuesto y pueden ser diferentes dependiendo, por ejemplo, de si el compuesto es un sólido o está en una solución orgánica o acuosa.
La invención se relaciona con los compuestos de fórmula I y sus sales y con un proceso para la preparación de compuestos de la fórmula I, en donde L denota CONR4, y sales, solvatos, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos,
caracterizados porque un compuesto de fórmula II
Figure imgf000006_0001
en que X, R, R1, R3, R5, R6, R7 y p tienen los significados señalados en la reivindicación 1,
y L1 denota Cl, Br, I o un grupo OH libre o modificado funcionalmente de forma reactiva,
se hace reaccionar con un compuesto de la fórmula III
Q1-Q2-NH2 III
en que Q1 y Q2 tienen los significados señalados en la reivindicación 1,
y/o
una base o ácido de la fórmula I se convierte en una de sus sales.
Por arriba o por debajo, los radicales R1, R2 , R3 tienen los significados señalados para la fórmula I, a menos que se establezca explícitamente de otra forma.
A denota alquilo, este es no ramificado (lineal) o ramificado, y tiene 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 átomos de C. A denota preferentemente metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo o terc-butilo, además también pentilo, 1-, 2 o 3-metilbutilo, 1,1, 1,2 o 2,2-dimetilpropilo, 1 -etilpropilo, hexilo, 1, 2, 3 o 4-metilpentilo, 1,1, 1,2, 1,3, 2,2, 2,3 o 3,3-dimetilbutilo, 1 o 2-etilbutilo, 1 -etil-1-metilpropilo, 1 -etil-2-metilpropilo, 1,1,2 o 1,2,2-trimetilpropilo, además, preferentemente, por ejemplo, trifluorometilo. A significa muy especialmente preferentemente alquilo con 2, 3, 4, 5 o 6 átomos de C, preferentemente etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, pentilo, hexilo, trifluorometilo, pentafluoroetilo o 1,1, 1 -trifluoroetilo. Además, A denota preferentemente CH2OCH3, CH2CH2OH o CH2CH2OCH3. Alquilo cíclico significa preferiblemente ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilO u Cicloheptilo.
R preferentemente denota NR2R4 , además Alc, C(=CH2)[C(R4)2]nAr2 o Het2.
R denota preferentemente de forma particular NR2R4 , y preferentemente de forma muy particular NHCH2Ar2
X denota preferentemente CO, además CH2.
Y denota preferentemente CO, además CH2.
R1 denota preferentemente (CH2K [C(R4)2]nAr1-, (CH2)nHet- o (CH2)nCic-, además [C(R4)2]nCONHAr1 o [C(R4)2]nNA-. El sustituyente L está conectado directamente a Ar1, Het o Cic y no a la fracción de molécula (CH2)n o [C(R4)2]n.
R1 denota preferentemente de forma particular o-, m- o p-fenileno, indol-diilo o benzimidazol-diilo.
R2 denota preferentemente [C(R4)2]nAr2 , (CH2)nCic o (CH2)nHet1.
R3 denota preferentemente OH.
R4 denota preferentemente H, metilo, etilo o propilo, preferentemente de forma muy particular H o metilo.
R5 , R6 denota preferentemente H.
R7 denota preferentemente H, F o CH3.
Ar1 denota preferentemente fenilo, o-, m- o p-fluorofenilo, o-, m- o p-bromofenilo, o-, m- o p-clorofenilo, o-, m- o phidroxifenilo, o-, m- o p-metoxifenilo, o-, m- o p-aminocarbonilfenilo, además preferentemente 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- o 3,5-difluorofenilo, 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3, 4- o 3,5-diclorofenilo, 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- o 3,5-dibromofenilo, 2,3,4-, 2,3,5­ , 2,3,6-, 2,4,6- o 3,4,5-triclorofenilo, p-yodofenilo, 4-fluoro-3-clorofenilo, 2-fluoro-4-bromofenil o 2,5-difluoro-4-bromofenil. Ar1 denota preferentemente fenilo.
Ar2 denota preferentemente fenilo, o-, m- o p-tolilo, o-, m- o p-etilofenilo, o-, m- o p-propilofenilo, o-, m- o pisopropilofenilo, 0- , m- o p-terc-butilofenilo, o-, m- o p-trifluorometilofenilo, o-, m- o p-fluorofenilo, o-, m- o pbromofenilo, o-, m- o pclorofenilo, o-, m- o p-aminocarbonilofenilo, además preferentemente 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- o 3,5-difluorofenilo, 2,3-, 2.4- , 2,5-, 2,6-, 3, 4- o 3,5-diclorofenilo, 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3, 4- o 3,5-dibromofenilo, 2,3,4-, 2,3,5-, 2,3,6-, 2,4,6- o 3,4,5-triclorofenilo, p-yodofenilo, 4-fluoro-3-clorofenilo, 2-fluoro-4-bromofenilo, 2,5-difluoro-4-bromofenilo o 2,5-dimetil-4-clorofenilo.
Ar2 denota preferentemente fenilo que es no sustituido o mono-, di-, tri- o tetrasustituido por Hal.
Ar2 denota además preferentemente de forma particular fenilo que es mono- o disustituido por Hal.
Independientemente de sustituciones adicionales, denota preferentemente Het denota preferentemente 2- o 3-furilo, 2- o 3- tienilo, 1-, 2- o 3-pirrolilo, 1-, 2, 4- o 5-imidazolilo, 1-, 3-, 4- o 5-pirazolilo, 2-, 4- o 5-oxazolilo, 3-, 4- o 5-isoxazolilo, 2-, 4-o 5-tiazolilo, 3-, 4- o 5-isotiazolilo, 2-, 3- o 4-piridilo, 2-, 4-, 5- o 6-pirimidinilo, además preferentemente 1,2,3-triazol-1-, -4-o -5-ilo, 1,2,4-triazol- 1-, -3- o 5-ilo, 1- o 5-tetrazolilo, 1,2,3-oxadiazol-4- o -5-ilo, 1,2,4-oxadiazol-3- o -5-ilo, 1,3,4-tiadiazol-2- o -5-ilo, 1,2,4- tiadiazol-3- o -5-ilo, 1,2,3-tiadiazol-4- o -5-ilo, 3- o 4-piridazinilo, pirazinilo, 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6- o 7-indolilo, 4- o 5-isoindolilo, 1-, 2-, 4- o 5-benzimidazolilo, 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6- o 7-indazolilo, 1-, 3-, 4-, 5-, 6- o 7-benzopirazolilo, 2-, 4-, 5-, 6- o 7-benzoxazolilo, 3-, 4-, 5-, 6- o 7- benzisoxazolilo, 2-, 4-, 5-, 6- o 7-benzotiazolilo, 2-, 4-, 5-, 6- o 7-benzisotiazolilo, 4-, 5-, 6- o 7-benz-2,1,3-oxadiazolilo, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- o 8-quinolilo, 1-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- o 8-isoquinolilo, 3- , 4-, 5-, 6-, 7- o 8-cinnolinilo, 2-, 4-, 5-, 6-, 7- o 8-quinazolinilo, 5- o 6-quinoxalinilo, 2-, 3-, 5-, 6-, 7- o 8-2H-benzo-1,4-oxazinilo, además preferentemente 1,3-benzodioxol-5-ilo, 1,4-benzodioxan-6-ilo, 2,1,3-benzotiadiazol-4- o -5-il o 2,1,3-benzoxadiazol-5-ilo.
Los radicales heterocíclicos puede estar parcial o completamente hidrogenado. De este modo, el Het no sustituido puede denotar también, por ejemplo, 2,3-dihidro-2-, -3-, -4- o -5-furilo, 2,5-dihidro-2-, -3-, - 4- o 5-furilo, tetrahidro-2 o -3-furilo, 1,3-di-oxolan4-ilo, tetrahidro-2 o -3-tienilo, 2,3-dihidro-1-, -2-, -3-, - 4- o -5-pirrolilo, 2,5-dihidro-1-, -2-, -3-, - 4- o -5-pirrolilo, 1- , 2 o 3-pirrolidinilo, tetra-hidro-1-, -2 o -4-imidazolilo, 2,3-dihidro-1-, -2-, -3-, - 4- o -5-pirazolilo, tetra-hidro-1-, -3 o -4-pirazolilo, 1,4-dihidro-1-, -2-, -3 o -4-piridilo, 1,2,3,4-tetrahidro-1-, -2-, -3-, -4-, -5 o -6-piridilo, 1-, 2-, 3 o 4-piperidinilo, 2-, 3 o 4-morfolinilo, tetrahidro-2-, -3 o -4-piranilo, 1,4-dioxanilo, 1,3-dioxan-2-, -4-or -5-ilo, hexahidro-1-, -3 o -4-pi ridazinilo, hexahidro-1-, -2-, - 4- o -5-pi rimidinilo, 1-, 2 o 3-piperazinilo, 1,2,3,4-tetrahidro-1-, -2-, -3-, -4-, -5-, -6-, -7 o -8-quinolilo, 1.2.3.4- tetrahidro-1-, -2-, -3-, -4-, -5-, -6-, -7 o -8-isoquinolilo, 2-, 3-, 5-, 6-, 7 u 8-3,4-dihidro-2H-benzo1,4-oxazinilo, además preferentemente 2,3-metilenodioxifenilo, 3,4-metilenodioxifenilo, 2,3-etilenodioxifenilo, 3,4-etilenodioxifenilo, 3,4-(difluorometilenodioxi)fenilo, 2,3-dihidrobenzofuran-5 o 6-ilo, 2,3-(2-oxometilenodioxi)fenilo o también 3,4-dihidro-2H-1,5benzodioxepin-6- o -7-ilo, además preferentemente 2,3-dihidro-benzofuranilo o 2,3-dihidro-2-oxofuranilo.
Het además denota preferentemente pirazinilo, pirazolilo, benzimidazolilo, piridilo, indolilo, dihidroindolilo, benzofuranilo, tetrahidropi ranilo, dihidroquinolinilo, dihidroisoquinolinilo, tetrahidroquinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo, indazolilo, imidazolilo, pirrolilo, oxazolilo, oxadiazolilo, isoxazolilo, benzotiazolilo, piperidin-1-ilo, pirrolidin-1-ilo, 3,4-dihidro-2H-pirido[3,2-b]-1,4-oxazinilo, 3,4-dihidro-2H-benzo-1,4-oxazinilo, benzofuranilo, azetidinilo, 3-azabicilo[3.2.0]hexilo, pirrolo[2,3-b]piridinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidro-1,8-naftiridinilo, 2,3-dihidrobenzoisotiazolilo, 1,2,3,4-tetrahidrobenzotiazinil o hexahidro-benzo-1,3-dioxolil, cada uno de los cuales es no sustituido o mono-, di- o trisustituido por Hal, A, OA, CN, NH2, NHA, NA2, NO2, CN, COOH, COOA, (CH2)nCONH2, (CH2)nCONHA, (CH2)nCONA2, NHCOA, COA, CHO, Het1, SO2A, SO2NH2, SO2NHA,SO2NA2, CONHNH2, CONHAr3 , =O y/o Ar3.
Het además denota preferentemente benzimidazolilo o indolilo, cada uno de los cuales es no sustituido o monosustituido por Hal.
Het1 denota preferentemente piridazinilo, pirazolilo, piridilo, piperazinilo, morfolinilo, pirimidinilo, furilo, tienilo, imidazolilo, pirrolilo, oxazolilo, oxadiazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, triazolilo, tetrazolilo, tiadiazolo, piperidin-1-ilo, pirrolidin1-ilo, tetrahidropi ranilo, 1,2-oxazinan-2-ilo, 1,2,5-oxadiazinan-2-ilo, 1,3-oxazinan-3-ilo o hexahidropirimidinilo, cada uno de los cuales es no sustituido o monosustituido por A y/o OA.
Het1 además denota preferentemente piridilo, pirimidinilo, furilo, tienilo, imidazolilo, pirrolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, triazolilo o tetrazolilo.
Het1 además denota preferentemente piridilo, furilo, tienilo, imidazolilo o pirrolilo.
Q2 preferentemente denota CH2OCH2CH2OCH2CH2O, (CH2)2O(CH2)2O(CH2)2O(CH2)2O(CH2)2O(CH2)2, OCH2CH2CH2OCH2 CH2CH2, (CH2)5, (CH2)6, (CH2)7, (CH2)8, (CH2)3O(CH2)4 , (CH2)2O(CH2)4O, en donde uno del grupo CH2 se puede reemplazar por un grupo tal como
Figure imgf000008_0001
es decir, independientes entre sí.
Los compuestos de la fórmula I pueden tener uno o más centros quirales y, por lo tanto, pueden tener lugar en diversas formas estereoisoméricas. La fórmula I abarca todas estas formas.
En consecuencia, la invención se relaciona, en particular, con compuestos de la fórmula I en que al menos uno de los dichos radicales tiene uno de los significados preferidos anteriormente señalados. Algunos grupos preferidos de compuestos pueden expresarse mediante las siguientes subfórmulas Ia a le, que se ajustan a la fórmula I y en las que los radicales no designados con mayor detalle tienen el significado indicado para la fórmula I, pero en los que
en Ia Het denota pirazinilo, pirazolilo, benzimidazolilo, piridilo, tienilo, furanilo, indolilo, dihidroindolilo, benzofuranilo, tetrahidropiranilo, dihidroquinolinilo, dihidroisoquinolinilo, tetrahidroquinolinilo, tetra-hidroisoquinolinilo, indazolilo, imidazolilo, pirrolilo, oxazolilo, oxadiazolilo, isoxazolilo, benzotiazolilo, piperidin-1-ilo, pirrolidin-1-ilo, 3,4-di hidro-2H-pirido[3,2-b]-1,4-oxazinilo, 3,4-dihidro-2H-benzo-1,4-oxazinilo, benzofuranilo, azetidinilo, 1H-pirrolo[2,3-b]piridinilo, 2H-cromenilo, 3-azabicilo[3.2.0]hexilo, pirrolo[2,3-b]piridinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidro-1,8-nafthiridinil 2,3-dihidrobenzoisotiazolilo, 1,2,3,4-tetrahidrobenzotiazinil o hexahidrobenzo-1,3-dioxolilo, cada uno de los cuales es no sustituido o mono-, di- o trisustituido por Hal, A, OA, CN, NH2, NHA, NA2, NO2, CN, COOH, COOA, (CH2)nCONH2, (CH2)nCONHA, (CH2)nCONA2, NHCOA, COA, CHO, Het1, SO2A, SO2NH2, SO2NHA,SO2NA2, CONHNH2, CONHAr3 , =O y/o A r3 ; en Ib Het denota benzimidazolilo o indolilo, cada uno de los cuales es no sustituido o monosustituido por Hal; en Ic Q1 denota
Figure imgf000009_0002
en Id R denota NR2R4 ;
en le R1 denota (CH2K [C(R4)2]nAr1 o (CH2)nHet-;
en If Ar2 denota fenilo que es no sustituido o mono-, di-, tri- o tetra-sustituido por Hal;
en Ig R2 denota [C(R4)2]nAr2 , (CH2)nCic o (CH2)nHet1;
en Ih A denota alquilo no ramificado o ramificado que tiene 1-6 átomos de C, en que 1-5 átomos de H se pueden reemplazar por F, Cl
y/o OH;
en Ii Q1 denota
Figure imgf000009_0003
Z denota
Q denota NH, NCH3 o CH2,
Q2 denota quileno no ramificado que tiene 4-25 átomos de C, en que 1-8 grup
Figure imgf000009_0001
reemplazar por O, CONH y/o NHCO y en que un grupo CH2 se puede reemplazar por
Figure imgf000010_0001
Q3 denota
Figure imgf000010_0002
L denota NR4CO, CONR4, NH, O, CO, S, S 02, SO(=NH), NHCONH, SO2NH o NHSO2,
R denota NR2R4 ,
X denota CO o CH2 ,
Y denota CO o CH2 ,
R1 denota (CH2)n, [C(R4)2]nAr1 o (CH2)nHet-, en donde el sustituyente L está conectado directamente a Ar1, Het o Cic,
R2 denota [C(R4)2]nAr2 , (CH2)nCic o (CH2)nHet1,
R3 denota o H,
R4 denota H o un alquilo que tiene 1,2, 3 o 4 átomos de C,
R5 , R6 denota H,
R7 denota H, Hal o A,
Ar1 denota fenilo,
Ar2 denota fenilo que es no sustituido o mono-, di-, tri- o tetra-sustituido por Hal,
Het denota pirazinilo, pirazolilo, benzimidazolilo, piridilo, tienilo, furanilo, indolilo, dihidroindolilo, benzofuranilo, tetrahidropiranilo, dihidroquinolinilo, dihidroisoquinolinilo, tetrahidroquinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo, indazolilo, imidazolilo, pirrolilo, oxazolilo, oxadiazolilo, isoxazolilo, benzotiazolilo, piperidin-1-ilo, pirrolidin-1-ilo, 3,4-dihidro-2H-pirido[3,2-b]-1,4-oxazinilo, 3,4-dihidro-2H-benzo-1,4-oxazinilo, benzofuranilo, azetidinilo, 3-azabicilo[3.2.0]hexilo, pirrolo[2,3-b]piridinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidro-1,8-naftiridinilo, 2,3-dihidrobenzoisotiazolilo, 1,2,3,4-tetrahidrobenzotiazinil o hexahidrobenzo-1,3-dioxolil, cada uno de los cuales es no sustituido o mono-, di- o trisustituido por Hal, A, OA, CN, NH2, NHA, NA2 , NO2 , CN, COOH, COOA, (CH2)nCONH2, (CH2)nCONHA, (CH2)nCONA2 , NHCOA, COA, CHO, Het1, SO2A, SO2NH2 , SO2NHA, SO2NA2 , CONHNH2 , CONHAr3 , =O y/o Ar3 ,
Het1 denota piridilo, furilo, tienilo, imidazolilo o pirrolilo,
A denota alquilo no ramificado o ramificado que tiene 1-6 átomos de C, en que 1-5 átomos de H se pueden reemplazar por F, Cl y/o OH,
Cic denota alquilo cíclico que tiene 3-7 átomos de C,
Hal denota F, Cl, Br o I,
n denota 0, 1,2, 3 o 4,
p denota 1,2 o 3;
y sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos, que incluyen sus mezclas en todas las proporciones.
Los compuestos de fórmula I y también los materiales de partida para su preparación se preparan, además, por métodos conocidos per se, como se describe en la literatura (por ejemplo, en trabajos normativos, tales como Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie [Métodos de química orgánica], Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart), para ser preciso bajo condiciones de reacción que son conocidas y adecuada para tales reacciones. Se puede hacer uso aquí de variantes conocidas per se que no se mencionan con mayor detalle aquí.
Los compuesto de la fórmula I se pueden obtener preferentemente al hacer reaccionar los compuesto de la fórmula II con un compuesto de la fórmula III.
Los compuestos de la fórmula II y de la fórmula III son conocidos generalmente. Sin embargo, si son novedosos, se pueden preparar por métodos conocidos per se.
En los compuestos de la fórmula II, L denota preferentemente Cl, Br, I o un grupo OH libre o reactivamente modificado, tal como, por ejemplo, un éster activado, una imidazolida o alquilsulfoniloxi que tiene 6-10 átomos de C (preferentemente metilsulfoniloxi o trifluorometilsulfoniloxi) o arilsulfoniloxi que tiene 6-10 átomos de C (preferentemente fenilo o ptolilsulfoniloxi).
La reacción se logra preferentemente en presencia de un agente deshidratante, tal como, por ejemplo, una carbodiimida, tal como N,N'-diciclohexilcarbodiimida ("DCCI"), 1,1'-carbonyldiimidazol o N-3-dimetilaminopropil-N'-etilcarbodiimida ("DAPECI"), adicionalmente anhídrido propanofosfónico T3P (cf. Angew. Chem. 92, 129 (1980)), difenilfosforil azida o 2-etoxi-N-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina, opcionalmente en presencia de N-hidroxibenzotriaol;
Figure imgf000011_0001
Más aún, preferentemente preferido es HATU [0-(7-Azabenzotriazol-1-il)-N, N, N’, N'--tetrametiluronium-hexafluorfosfato]
Figure imgf000011_0002
La reacción se lleva a cabo en un disolvente inerte y generalmente se lleva a cabo en presencia de un agente quelante de ácido, preferiblemente una base orgánica, tal como DIPEA, 4-metilmorfolina, trietilamina, dimetilanilina, piridina o quinolina.
También puede ser favorable la adición de un hidróxido, carbonato o bicarbonato de metal alcalino o alcalinotérreo u otra sal de un ácido débil de los metales alcalinos o alcalinotérreos, preferentemente de potasio, sodio, calcio o cesio.
En función de las condiciones empleadas, el tiempo de reacción oscila entre unos minutos y 14 días, la temperatura de reacción se sitúa entre -15 ° y 150 °, normalmente entre 0 ° y 120 °, particularmente entre 20 ° y 40 °C.
Los disolventes inertes adecuados, por ejemplo, hidrocarburos, como hexano, éter de petróleo, benceno, tolueno o xileno; hidrocarburos clorados, como tricloroetileno, 1,2-dicloroetano, tetracloruro de carbono, cloroformo o diclorometano; alcoholes, tales como metanol, etanol, isopropanol, n-propanol, n-butanol o terc-butanol; éteres, como éter dietílico, éter diisopropílico, tetrahidrofurano (THF) o dioxano; éteres de glicol, tales como éter monometílico o monoetílico de etilenglicol, éter dimetílico de etilenglicol (diglima); cetonas, como acetona o butanona; amidas, como acetamida, dimetilacetamida o dimetilformamida (DMF); nitrilos, como acetonitrilo; sulfóxidos, como dimetilsulfóxido (DMSO); disulfuro de carbono; ácidos carboxílicos, como ácido fórmico o ácido acético; compuestos nitro, tales como nitrometano o nitrobenceno; ésteres, tales como acetato de etilo, o mezclas de los dichos disolventes.
Se da preferencia particular a los éteres de glicol, tales como éter monometílico de etilenglicol, THF, diclorometano y/o DMF.
Sales farmacéuticas y otras formas
Los dichos compuestos de acuerdo con la invención se pueden usar en sus forma final distinta de una sal. Por otro lado, la presente invención también abarca el uso de estos compuestos en forma de sus sales farmacéuticamente aceptables, que pueden derivarse de diversos ácidos y bases orgánicos e inorgánicos mediante procedimientos conocidos en la técnica. Las formas en sal farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la fórmula I son preparadas en su mayoría por métodos convencionales. Si el compuesto de la fórmula I contiene un grupo carboxilo, se puede formar una de sus sales adecuadas haciendo reaccionar el compuesto con una base adecuada para dar la sal de adición de la base correspondiente. Tales bases son, por ejemplo, hidróxidos de metales alcalinos, incluidos hidróxido de potasio, hidróxido de sodio e hidróxido de litio; hidróxidos de metales alcalinotérreos, tales como hidróxido de bario e hidróxido de calcio; alcóxidos de metales alcalinos, por ejemplo, etóxido de potasio y propóxido de sodio; y diversas bases orgánicas, como piperidina, dietanolamina y N-metilglutamina. Las sales de aluminio de los compuestos de la fórmula I también se incluyen. En el caso de ciertos compuestos de la fórmula I, las sales por adición de ácido se pueden formar al tratar estos compuestos con ácidos orgánicos e inorgánicos farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, haluros de hidrógeno, tales como hidrocloruro, bromuro de hidrógeno o yoduro de hidrógeno, otros ácidos minerales y las correspondientes sales de estos, como sulfato, nitrato o fosfato y similares, y monoarilsulfonatos alquílicos, tales como etanosulfonato toluenosulfonato y bencenosulfonato, y otros ácidos orgánicos y las correspondientes sales de estos, como acetato, trifluoroacetato, tartrato, maleato, succinato, citrato, benzoato, salicilato, ascorbato y similares. En consecuencia, las sales por adición de ácido farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la fórmula I incluyen los siguientes: acetato, adipato, alginato, arginato, aspartato, benzoato, benzenesulfonato (besilato), bisulfato, bisulfito, bromuro, butirato, camforato, camforsulfonato, caprilato, cloruro, clorobenzoato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, dihidrogenfosfato, dinitrobenzoato, dodecilsulfato, etanesulfonato, fumarato, formato, galacterato (de ácido mucíco), galacturonato, glucoheptanoato, gluconato, glutamato, glicerofosfato, hemisuccinato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, hippurato, clorhidrato, hidrobromuro, hidroyoduro, 2-hidroxietanosulfonato, yoduro, isetionato, isobutirato, lactato, lactobionato, malato, maleato, malonato, mandelato, metafosfato, metanesulfonato, metilbenzoato, monohidrogenofosfato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, nitrato, oxalato, oleato, palmoato, pectinato, persulfato, fenilacetato, 3-fenilpropionato, fosfato, fosfonato, ftalato, pero esto no representa una restricción.
Además, las sales base de los compuestos de acuerdo con la invención incluyen aluminio, amonio, calcio, cobre, hierro(III), hierro(II), litio, magnesio, manganeso(III), manganeso(II), potasio, sodio y sales de zinc, pero esto no pretende representar una restricción. De las sales mencionadas anteriormente, se da preferencia al amonio; las sales de metales alcalinos sodio y potasio, y las sales de metales alcalinotérreos calcio y magnesio Las sales de los compuestos de la fórmula I que derivan de bases orgánicas no tóxicas farmacéuticamente aceptables incluyen sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas sustituidas, también incluyen aminas sustituidas que tienen lugar de forma natural, aminas cíclicas y resinas básicas intercambiadoras de iones, por ejemplo, arginina, betaína, cafeína, cloroprocaína, colina, N,N'-dibenziletilenodiamina (benzatina), diciclohexilamina, dietanolamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilenediamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lidocaína, lisina, meglumina, N-metil-D-glucamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietanolamina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina y tris-(hidroximetil)metilamina (trometamina), pero esto no pretende representar una restricción.
Los compuestos de la presente invención que contienen grupos que tienen nitrógeno básico se pueden cuaternizar usando agentes tales como haluros de alquilo (C1-C4), por ejemplo metilo, etilo, isopropilo y cloruro de terc-butilo, bromuro y yoduro; sulfatos dialquilo(C1-C4), por ejemplo, dimetilo, dietilo y diamilsulfato; haluro de alquilo(C10-C18), por ejemplo, decilo, dodecilo, laurilo, miristilo y cloruro de estearilo, bromuro y yoduro; y haluros de alquil arilo(C1-C4), por ejemplo cloruro de bencilo y bromuro de fenetilo. Ambos compuestos, tanto los solubles en agua como en aceite, de acuerdo con la invención, se pueden preparar usando tales sales.
Las sales farmacéuticas mencionadas anteriormente que son preferidas incluyen acetato, trifluoroacetato, besilato, citrato, fumarato, gluconato, hemisuccinato, hipurato, clorhidrato, bromhidrato, isetionato, mandelato, meglumina, nitrato, oleato, fosfonato, pivalato, fosfato de sodio, estearato, sulfato, sulfosalicilato, tartrato, tiomalato, tosilato y trometamina, pero esto no pretende representar una restricción.
Se da particular preferencia al clorhidrato, diclorhidrato, hidrobromuro, maleato, mesilato, fosfato, sulfato y succinato.
Las sales de adición de ácido de compuestos básicos de fórmula I se preparan al poner en contacto la forma de base libre con una cantidad suficiente del ácido deseado, lo que da lugar a la formación de la sal de manera convencional. La base libre se puede regenerar al poner en contacto la forma de sal con una base y al aislar la base libre de manera convencional. Las formas de base libre difieren en cierto aspecto de sus correspondientes formas de sal con respecto a ciertas propiedades físicas, tales como la solubilidad en disolventes polares; en el sentido de la invención, sin embargo, las sales corresponden por lo demás a sus respectivas formas de base libre.
Según se mencionó, las sales de adición de bases farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la fórmula I están formadas con metales o aminas, tal como metales alcalinos y metales de tierras alcalinas o aminas orgánicas. Los metales preferidos son sodio, potasio, magnesio y calcio. Las aminas orgánicas preferidas son N,N'-dibenciletilendiamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilendiamina, N-metil-D-glucamina y procaína.
Las sales de adición de base de compuestos ácidos de acuerdo con la invención se preparan al poner en contacto la forma de ácidos libre con una cantidad suficiente de la base deseada, lo que da lugar a la formación de la sal de manera convencional. La ácidos libres se pueden regenerar al poner en contacto la forma de sal con un ácido y al aislar el ácido libre de manera convencional. Las formas de ácido libre difieren en cierto aspecto de sus correspondientes formas de sal con respecto a ciertas propiedades físicas, tales como la solubilidad en disolventes polares; sin embargo, para los fines de la invención, las sales corresponden por lo demás a las respectivas formas de ácido libre de estas.
Si un compuesto de acuerdo con la invención contiene más de un grupo que es capaz de formar sales farmacéuticamente aceptables de este tipo, la invención también abarca múltiples sales. Las formas salinas múltiples usuales incluyen, por ejemplo, bitartrato, diacetato, difumarato, dimeglumina, difosfato, disodio y triclorhidrato, pero esto no pretende representar una restricción.
Con respecto a lo expuesto anteriormente, puede observarse que la expresión “sal farmacéuticamente aceptable” en el presente contexto se entiende como un ingrediente activo que comprende un compuesto de fórmula I en forma de una de sus sales, en particular si esta forma de sal imparte propiedades farmacocinéticas mejoradas al ingrediente activo en comparación con la forma libre del ingrediente activo o cualquier otra forma de sal del ingrediente activo utilizada anteriormente. La forma de sal farmacéuticamente aceptable del ingrediente activo también puede proporcionar a este ingrediente activo por primera vez una propiedad farmacocinética deseada que no tenía antes e incluso puede tener una influencia positiva en la farmacodinámica de este ingrediente activo con respecto a su eficacia terapéutica en el cuerpo.
Isótopos
Se espera además que un compuesto de la fórmula I incluya formas marcadas de isótopos de estas. Una forma marcada con isótopos de un compuesto de fórmula I es idéntica a este compuesto, excepto por el hecho de que uno o más átomos del compuesto han sido reemplazados por un átomo o átomos que tienen una masa atómica o número de masa que difiere de la masa atómica o número de masa del átomo que generalmente tiene lugar de forma natural. Los ejemplos de isótopos que están fácilmente disponibles comercialmente y que pueden incorporarse en un compuesto de fórmula I mediante métodos bien conocidos incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, por ejemplo, 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 31P, 32P, 35S, 18F y 36Cl, respectivamente. Un compuesto de fórmula I, un profármaco de este o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera que contenga uno o más de los isótopos mencionados anteriormente y/o otros isótopos de otros átomos pretende ser parte de la presente invención. Un compuesto marcado con isótopo de fórmula I se puede usar de varias formas beneficiosas. Por ejemplo, un compuesto marcado con isótopo de fórmula I en el que, por ejemplo, se ha incorporado un radioisótopo, tal como 3H o 14C, es adecuado para ensayos de distribución de tejido de sustrato y/o medicamento. Estos radioisótopos, es decir, tritio (3H) y carbono14 (14C), son especialmente preferidos debido a su sencilla preparación y excelente detectabilidad. La incorporación de isótopos más pesados, por ejemplo, deuterio (2H), en un compuesto de la fórmula I tiene ventajas terapéuticas debido a la mayor estabilidad metabólica de este compuesto marcado con isótopos. Una mayor estabilidad metabólica se traduce directamente en una mayor vida media in vivo o en dosis más bajas, lo que en la mayoría de las circunstancias representaría una realización preferida de la presente invención. Un compuesto marcado con isótopo de la fórmula I generalmente se puede preparar llevando a cabo los procedimientos descritos en los esquemas de síntesis y la descripción relacionada, en la parte de ejemplo y en la parte de preparación en el presente texto, reemplazando un reactivo no marcado con isótopo por un reactivo marcado con isótopos fácilmente disponible.
El deuterio (2H) también se puede incorporar en un compuesto de fórmula I con el fin de manipular el metabolismo oxidativo del compuesto por medio del efecto de isótopo cinético primario. El efecto cinético primario del isótopo es un cambio en la velocidad de una reacción química que resulta del intercambio de núcleos isotópicos, que a su vez es causado por el cambio en las energías del estado fundamental necesarias para la formación de enlaces covalentes después de este intercambio isotópico. El intercambio de un isótopo más pesado generalmente da como resultado una disminución de la energía del estado fundamental para un enlace químico y, por lo tanto, provoca una reducción en la velocidad de ruptura del enlace limitante de la velocidad. Si la ruptura del enlace tiene lugar en la cercanía de una región de punto de silla a lo largo de la coordenada de una reacción de múltiples productos, las proporciones de distribución de productos pueden alterarse sustancialmente. Para explicación: si el deuterio está unido a un átomo de carbono en una posición no intercambiable, las diferencias de velocidad de kM/kD = 2-7 son las habituales. Si esta diferencia de velocidad se aplica con éxito a un compuesto de la fórmula I que es susceptible de oxidación, el perfil de este compuesto in vivo puede modificarse drásticamente y dar como resultado propiedades farmacocinéticas mejoradas.
Al descubrir y desarrollar agentes terapéuticos, el experto en la técnica intenta optimizar los parámetros farmacocinéticos conservando las propiedades in vitro deseables. Es razonable suponer que muchos compuestos con perfiles farmacocinéticos deficientes son susceptibles al metabolismo oxidativo. Los ensayos de microsomas hepáticos in vitro actualmente disponibles proporcionan información valiosa sobre el curso del metabolismo oxidativo de este tipo, lo que a su vez permite el diseño racional de compuestos deuterados de fórmula I con estabilidad mejorada a través de la resistencia a tal metabolismo oxidativo. De esta manera se obtienen mejoras significativas en los perfiles farmacocinéticos de los compuestos de fórmula I, y pueden expresarse cuantitativamente en términos de aumentos en la vida media in vivo (t1/2), concentración en el efecto terapéutico máximo (Cmáx.), área bajo la curva de respuesta a la dosis (AUC [por sus siglas en inglés]) y F; y en términos de eliminación, dosis y costes de materiales reducidos.
A continuación se pretende ilustrar lo anterior: un compuesto de la fórmula I que tiene múltiples sitios potenciales de ataque para el metabolismo oxidativo, por ejemplo, átomos de hidrógeno bencílico y átomos de hidrógeno unidos a un átomo de nitrógeno, se prepara como una serie de análogos en los que varios las combinaciones de átomos de hidrógeno se reemplazan por átomos de deuterio, de modo que algunos, la mayoría o la totalidad de estos átomos de hidrógeno han sido reemplazados por átomos de deuterio. Las determinaciones de la vida media permiten una determinación favorable y precisa de la medida en que ha mejorado la resistencia al metabolismo oxidativo. De esta manera, se determina que la vida media del compuesto original puede extenderse hasta en un 100 % como resultado de un intercambio deuteriohidrógeno de este tipo.
El intercambio deuterio-hidrógeno en un compuesto de la fórmula I también se puede usar para lograr una modificación favorable del espectro de metabolitos del compuesto de partida para disminuir o eliminar metabolitos tóxicos no deseados. Por ejemplo, si surge un metabolito tóxico a través de la escisión del enlace oxidativo carbono-hidrógeno (C-H), se puede suponer razonablemente que el análogo deuterado disminuirá o eliminará en gran medida la producción del metabolito no deseado, incluso si la oxidación particular no es un paso determinante de la velocidad. Se puede encontrar más información sobre el estado de la técnica con respecto al intercambio deuterio-hidrógeno, por ejemplo, en Hanzlik et al., J. Org. Chem. 55, 3992-3997, 1990, Reider et al., J. Org. Chem. 52, 3326-3334, 1987, Foster, Adv. Drug Res. 14, 1-40, 1985, Gillette et al, Biochemistry 33(10) 2927-2937, 1994, y Jarman et al. Carcinogenesis 16(4), 683-688, 1993.
La invención se refiere además a medicamentos que contienen al menos un compuesto de fórmula I y/o derivados, solvatos y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos, incluidas sus mezclas en todas las proporciones, y opcionalmente excipientes y/o adyuvantes.
Las formulaciones farmacéuticas se pueden administrar en forma de unidades de dosificación que comprenden una cantidad predeterminada de ingrediente activo por unidad de dosificación. Una unidad de este tipo puede comprender, por ejemplo, de 0,5 mg a 1 g, preferentemente de 1 mg a 700 mg, de manera particularmente preferida de 5 mg a 100 mg, de un compuesto de acuerdo con la invención, dependiendo de la condición tratada, el método de administración y de la edad, el peso y el estado del paciente, o las formulaciones farmacéuticas se pueden administrar en forma de unidades de dosificación que comprenden una cantidad predeterminada de ingrediente activo por unidad de dosificación. Las formulaciones de unidades de dosificación preferidas son aquellas que comprenden una dosis diaria o una dosis parcial, como se indicó anteriormente, o una fracción correspondiente de esta de un ingrediente activo. Además, las formulaciones farmacéuticas de este tipo se pueden preparar usando un proceso generalmente conocido en la técnica farmacéutica.
Las formulaciones farmacéuticas se pueden adaptar para la administración a través de cualquier método adecuado deseado, por ejemplo, por métodos de vía oral (incluyendo bucal o sublingual), rectal, nasal, tópica (incluyendo bucal, sublingual o transdérmica), vaginal o parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa o intradérmica). Tales formulaciones se pueden preparar usando todos los procesos conocidos en la técnica farmacéutica, por ejemplo, combinando el ingrediente activo con el (los) excipiente(s) o adyuvante(s).
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración oral se pueden administrar como unidades separadas, como, por ejemplo, cápsulas o comprimidos; polvos o gránulos; soluciones o suspensiones en líquidos acuosos o no acuosos; espumas comestibles o alimentos en espuma; o emulsiones líquidas de aceite en agua o emulsiones líquidas de agua en aceite.
De este modo, por ejemplo, en el caso de la administración oral en forma de comprimido o cápsula, el componente principio activo puede combinarse con un excipiente inerte oral, no tóxico y farmacéuticamente aceptable, tal como por ejemplo, etanol, glicerol, agua y similares. Los polvos se preparan triturando el compuesto hasta un tamaño fino adecuado y mezclándolo con un excipiente farmacéutico triturado de manera similar, como, por ejemplo, un carbohidrato comestible, tal como, por ejemplo, almidón o manitol. También puede estar presente un saborizante, conservante, dispersante y colorante.
Las cápsulas se producen preparando una mezcla de polvo como se ha descrito anteriormente y rellenando con ella cubiertas de gelatina moldeadas. Antes de la operación de llenado, pueden agregarse a la mezcla de polvos agentes deslizantes y lubricantes como, por ejemplo, ácido silícico altamente disperso, talco, estearato de magnesio, estearato de calcio o polietilenglicol en forma sólida. También se puede agregar un disgregante o solubilizante, tal como por ejemplo agar-agar, carbonato de calcio o carbonato de sodio, para mejorar la disponibilidad del medicamento después de la toma de la cápsula.
Además, si se desea o es necesario, se pueden incorporar a la mezcla aglomerantes, lubricantes y disgregantes adecuados, así como colorantes. Los aglomerantes adecuados incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales, como, por ejemplo, glucosa o beta-lactosa, edulcorantes hechos de maíz, caucho natural y sintético, tales como, por ejemplo, acacia, tragacanto o alginato de sodio, carboximetilcelulosa, polietilenglicol, ceras y similares. Los lubricantes usados en estas formas de dosificación incluyen oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio y similares. Los desintegrantes incluyen, sin limitarse a estos, almidón, metilcelulosa, agar, bentonita, goma xantana y similares. Los comprimidos se formulan, por ejemplo, preparando una mezcla de polvo, granulando o prensando en seco la mezcla, agregando un lubricante y un desintegrante y presionando toda la mezcla para obtener los comprimidos. Se prepara una mezcla en polvo al mezclar el compuesto triturado de manera adecuada con un diluyente o una base, como se describió anteriormente, y opcionalmente con un aglomerante, como, por ejemplo, carboximetilcelulosa, un alginato, gelatina o polivinilpirrolidona, un retardante de disolución, tal como por ejemplo, parafina, un acelerador de la absorción, tal como por ejemplo, una sal cuaternaria y/o un absorbente, tal como por ejemplo, bentonita, caolín o fosfato dicálcico. La mezcla de polvo se puede granular humedeciéndola con un aglomerante, como, por ejemplo, jarabe, pasta de almidón, mucílago de acadia o soluciones de celulosa o materiales poliméricos y presionándola a través de un tamiz. Como alternativa a la granulación, la mezcla de polvo se puede pasar a través de una máquina de formación de comprimidos, dando grumos de forma no uniforme, que se rompen para formar gránulos. Los gránulos se pueden lubricar mediante la adición de ácido esteárico, una sal de estearato, talco o aceite mineral para evitar que se peguen a los moldes de fundición de comprimidos. La mezcla lubricada se prensa entonces para obtener comprimidos. Los compuestos de acuerdo con la invención también se pueden combinar con un excipiente inerte de flujo libre y después prensarse directamente para obtener comprimidos sin llevar a cabo las etapas de granulación o prensado en seco. Puede estar presente una capa protectora transparente u opaca que consta de una capa de sellado de goma laca, una capa de azúcar o material polimérico y una capa brillante de cera. Se pueden agregar colorantes a estos recubrimientos para poder diferenciar entre diferentes unidades de dosificación
Los líquidos orales, tales como, por ejemplo, solución, jarabes y elixires, se pueden preparar en forma de unidades de dosificación de modo que una cantidad dada comprenda una cantidad predeterminada del compuesto. Los jarabes se pueden preparar disolviendo el compuesto en una solución acuosa con un sabor adecuado, al mismo tiempo que los elixires se preparan usando un vehículo alcohólico no tóxico. Las suspensiones se pueden formular por dispersión del compuesto en un vehículo no tóxico. También se pueden agregar solubilizantes y emulsionantes como, por ejemplo, alcoholes isoestearílicos etoxilados y éteres de sorbitol polioxietilenado, conservantes, aditivos de sabor como, por ejemplo, aceite de menta o edulcorantes naturales o sacarina u otros edulcorantes artificiales y similares.
Las formulaciones de unidades de dosificación para la administración oral pueden, si se desea, encapsularse en microcápsulas. La formulación también se puede preparar de tal forma que la liberación se prolongue o retrase, como, por ejemplo, mediante recubrimiento o integración de material particulado en polímeros, cera y similares.
Los compuestos de la fórmula I y sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticos de estos se pueden administrar también en forma de sistemas de suministro de liposomas, tales como, por ejemplo, vesículas unilamelares pequeñas, vesículas unilamelares grandes y vesículas multilamelares. Los liposomas se pueden formar a partir de diversos fosfolípidos, como por ejemplo colesterol, estearilamina o fosfatidilcolinas.
Los compuestos de fórmula I y las sales, tautómeros y estereoisómeros de estos también se pueden administrar usando anticuerpos monoclonales como portadores individuales a los que se acoplan las moléculas del compuesto. Los compuestos también se pueden acoplar a polímeros solubles como portadores dirigidos de medicamentos . Tales polímeros pueden incluir polivinilpirrolidona, copolímero de pirano, polihidroxipropilmetacrilamidofenol, polihidroxietilaspartamidofenol o polietilenóxido polilisina, sustituidos por radicales palmitoílo. Además, los compuestos se pueden acoplar a una clase de polímeros biodegradables que son adecuados para lograr la liberación controlada de un medicamento, por ejemplo, ácido poliláctico, poliepsiloncaprolactona, ácido polihidroxibutírico, poliortoésteres, poliacetales, polidihidroxipiranos, policianoacrilatos y copolímeros de bloques reticulados o anfipáticos. de hidrogeles.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración transdérmica se pueden administrar como emplastos independientes para un contacto estrecho y prolongado con la epidermis del receptor. De este modo, por ejemplo, el ingrediente activo puede liberarse del emplasto por iontoforesis.
Los compuestos farmacéuticos adaptados para la administración tópica se pueden formular como ungüentos, cremas, suspensiones, lociones, polvos, soluciones, pastas, geles, pulverizaciones, aerosoles o aceites.
Para el tratamiento ocular u otro tejido externo, por ejemplo, la boca y la piel, las formulaciones se aplican preferiblemente como ungüento o crema tópica. En el caso de la formulación para dar un ungüento, el ingrediente activo se puede emplear con una base de crema parafínica o miscible en agua. Alternativamente, el ingrediente activo se puede formular para dar una crema con una base de crema de aceite en agua o una base de agua en aceite.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la aplicación tópica ocular incluyen gotas para los ojos, en las que el ingrediente activo se disuelve o suspende en un vehículo adecuado, en particular un disolvente acuoso.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para aplicación tópica en la boca incluyen pastillas masticables, pastillas y enjuagues bucales.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración rectal pueden administrarse en forma de supositorios o enemas.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración nasal en las que la sustancia portadora es un sólido comprenden un polvo grueso que tiene un tamaño de partícula, por ejemplo, en el intervalo de 20 a 500 micras, que se administra de la misma manera que se inhala el rapé, es decir, por inhalación rápida a través de las fosas nasales desde un recipiente que contiene el polvo cerca de la nariz. Las formulaciones adecuadas para la administración como pulverizador o gotas nasales con un líquido como sustancia de soporte abarcan soluciones de principios activos en agua o aceite.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración por inhalación abarcan polvos o nieblas finamente particulados, que pueden generarse mediante varios tipos de dispensadores presurizados con aerosoles, nebulizadores o insufladores.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración vaginal se pueden administrar como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones en aerosol.
Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para administración parenteral incluyen soluciones inyectables estériles acuosas y no acuosas que comprenden antioxidantes, soluciones amortiguadoras, bacteriostáticos y solutos, por medio de los cuales la formulación se vuelve isotónica con la sangre del receptor que se va a tratar; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas, que pueden comprender medios de suspensión y espesantes. Las formulaciones se pueden administrar en envases de unas sola dosis o de múltiples dosis, por ejemplo, ampollas y viales sellados, y almacenarse en estado congelado y deshidratado al vacío (liofilizado), de forma que solo la adición del líquido portador estéril, por ejemplo, agua para inyección, sea necesaria inmediatamente antes de su uso. Las soluciones de inyección y las suspensiones preparadas de acuerdo con la receta se pueden preparar a partir de polvos, gránulos y comprimidos estériles.
No hace falta decir que, además de los constituyentes particularmente mencionados anteriormente, las formulaciones también pueden comprender otros agentes habituales en la técnica con respecto al tipo particular de formulación; de este modo, por ejemplo, las formulaciones que son adecuadas para la administración oral pueden comprender sabores.
Una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula I depende de varios factores, incluidos, por ejemplo, la edad y el peso del animal, la condición precisa que requiere tratamiento y su gravedad, la naturaleza de la formulación y el método de administración, y lo determina en última instancia el médico tratante o el veterinario. Sin embargo, una cantidad eficaz de un compuesto de acuerdo con la invención está generalmente en el intervalo de 0,1 a 100 mg/kg de peso corporal del receptor (mamífero) por día y particularmente típicamente en el intervalo de 1 a 10 mg/kg de peso corporal por día. De este modo, la cantidad real por día para un mamífero adulto de 70 kg de peso suele estar entre 70 y 700 mg, donde esta cantidad se puede administrar como una dosis única por día o generalmente en una serie de dosis parciales (como, por ejemplo, dos, tres, cuatro, cinco o seis) al día, de modo que la dosis diaria total sea la misma. Una cantidad efectiva de una sal o solvato o de un derivado fisiológicamente funcional de este puede determinarse como la fracción de la cantidad efectiva del compuesto de acuerdo con la invención per se. Se puede suponer que dosis similares son adecuadas para el tratamiento de otros padecimientos mencionados anteriormente.
Un tratamiento combinado de este tipo se puede lograr con la ayuda de la dosificación simultánea, consecutiva o separada de los componentes individuales del tratamiento. Los productos de combinación de este tipo emplean los compuestos de acuerdo con la invención.
La invención se refiere además a medicamentos que comprenden al menos un compuesto de fórmula I y/o las sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos, incluidas sus mezclas en todas las proporciones, y al menos un ingrediente activo adicional del medicamento.
La invención también se refiere a un conjunto (kit) que consta de paquetes separados de
(a) una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula I y/o las sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos, incluidas sus mezclas en todas las proporciones,
y
(b) una cantidad efectiva de un ingrediente activo adicional del medicamento.
El conjunto comprende recipientes adecuados, como cajas, botellas, bolsas o ampollas individuales. El conjunto puede, por ejemplo, comprender ampollas separadas, cada una de las cuales contiene una cantidad efectiva de un compuesto de la fórmula I y/o las sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos, incluidas sus mezclas en todas las proporciones, y una cantidad efectiva de un ingrediente activo adicional del medicamento en forma disuelta o liofilizada.
“Tratar”, como se usa en este documento, significa un alivio, en su totalidad o en parte, de los síntomas asociados con un trastorno o enfermedad, o la desaceleración o la detención de una mayor progresión o empeoramiento de esos síntomas, o la prevención o profilaxis de la enfermedad o trastorno en un sujeto en riesgo de desarrollar la enfermedad o trastorno.
El término “cantidad efectiva” en relación con un compuesto de fórmula (I) puede significar una cantidad capaz de aliviar, en su totalidad o en parte, los síntomas asociados con un trastorno o enfermedad, o retrasar o detener la progresión o el empeoramiento de esos síntomas, o prevenir o proporcionar profilaxis para la enfermedad o trastorno en un sujeto que tiene o que está en riesgo de desarrollar una enfermedad descrita en este documento, tal como padecimientos inflamatorios, inmunitarios, cáncer o padecimientos metabólicos.
Uso
La presente invención se refiere específicamente a compuestos de la fórmula I y sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos, incluidas sus mezclas en todas las proporciones,
para el uso para el tratamiento de enfermedades en las que interviene la degradación y/o modulación de MetAP-2.
La presente invención se refiere específicamente a compuestos de la fórmula I y sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos, incluidas mezclas de de estos en todas las proporciones, para el uso para la degradación y/o modulación de MetAP-2.
La presente invención se refiere específicamente a compuestos de la fórmula I y sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos, incluidas sus mezclas en todas las proporciones, para su uso en el tratamiento y control de enfermedades.
Estas enfermedades incluyen la proliferación de células tumorales, la neovascularización patológica (o angiogénesis), que promueve el crecimiento de tumores sólidos, la neovascularización en el ojo (retinopatía diabética, degeneración macular inducida por la edad y similares) y la inflamación (psoriasis, artritis reumatoide y la como), y enfermedades proliferativas de las células mesangiales.
La invención se relaciona con compuestos para uso de la fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 y sales, solvatos, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos, incluidas sus mezclas en todas las proporciones, para el tratamiento y/o prevención de tumores, metástasis tumorales, enfermedades proliferativas de las células mesangiales, hemangioma, retinopatía proliferativa, artritis reumatoide, neovascularización aterosclerótica, psoriasis, neovascularización ocular, osteoporosis, diabetes y obesidad, leucemia linfoide, linfoma, malaria e hipertrofia prostática.
La invención se relaciona con compuestos para su uso donde la enfermedad tumoral se selecciona del grupo del epitelio escamoso, de la vejiga, del estómago, de los riñones, de la cabeza y el cuello, del esófago, del cuello uterino, de la tiroides, del intestino, del hígado, del cerebro, de la próstata, del tracto urogenital, del sistema linfático, del estómago, de la laringe, del pulmón, de la piel, leucemia monocítica, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de pulmón de células pequeñas, cáncer de páncreas, glioblastoma, carcinoma de mama, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica, leucemia linfática aguda, leucemia linfática crónica, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin.
La presente invención abarca el uso de los compuestos de fórmula I y/o las sales y solvatos fisiológicamente aceptables de estos para la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de tumores, enfermedades tumorales y/o metástasis tumorales.
La enfermedad tumoral se selecciona preferentemente del grupo
tumor del epitelio escamoso, la vejiga, el estómago, los riñones, la cabeza y el cuello, el esófago, el cuello uterino, la tiroides, el intestino, el hígado, el cerebro, la próstata, el tracto urogenital, el sistema linfático, el estómago, la laringe, el pulmón, la piel, leucemia monocítica, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de pulmón microcítico, cáncer de páncreas, glioblastoma, carcinoma de mama, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica, leucemia linfática aguda, leucemia linfática crónica, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin.
Asimismo, se incluye el uso de los compuestos según la reivindicación 1 de acuerdo con la invención y/o las sales y solvatos fisiológicamente aceptables de estos para la preparación de un medicamento para el tratamiento de osteoporosis, diabetes y obesidad.
De la misma forma, se abarca el uso de los compuestos de acuerdo con la reivindicación 1 según la invención y/o las sales y solvatos fisiológicamente aceptables de estos para la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de una enfermedad en que está implicada la angiogénesis.
Una enfermedad de este tipo en que está implicada la angiogénesis es una enfermedad ocular, tal como la vascularización de la retina, la retinopatía diabética, la degeneración macular inducida por la edad y similares.
La enfermedad angiogénica se selecciona preferentemente del grupo retinopatía diabética, artritis, cáncer, psoriasis, sarcoma de Kaposi, hemangioma, angiogénesis miocárdica, neovascularización de placa aterosclerótica, enfermedades oculares angiogénicas, neovascularización coroidea, fibroplasia retrolental, degeneración macular, rechazo de trasplante de córnea, rubeosis iridis, glaucoma neuroscular, síndrome de Oster Webber.
La enfermedad proliferativa de las células mesangiales se selecciona preferentemente del grupo
glomerulonefritis, nefropatía diabética, nefroesclerosis maligna, síndrome de microangiopatía trombótica, rechazo de trasplante, glomerulopatía.
El uso de compuestos de la fórmula I y/o sales y solvatos fisiológicamente aceptables de estos para la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de enfermedades inflamatorias cae de la misma manera dentro del alcance de la presente invención. Ejemplos de tales enfermedades inflamatorias incluyen artritis reumatoide, psoriasis, dermatitis de contacto, reacción de hipersensibilidad retardada y similares.
La enfermedad inflamatoria se selecciona preferentemente del grupo enfermedad inflamatoria del intestino, artritis, aterosclerosis, asma, alergias, enfermedades renales inflamatorias, esclerosis múltiple, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, enfermedades inflamatorias de la piel, enfermedades parodontales, psoriasis, enfermedad inmunitaria promovida por células T.
La enfermedad inflamatoria intestinal se selecciona preferentemente del grupo de colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, colitis inespecífica.
La enfermedad inmunitaria promovida por células T se selecciona preferentemente del grupo de encefalomielitis alérgica, neuritis alérgica, rechazo de trasplantes, reacción de injerto contra huésped, miocarditis, tiroiditis, nefritis, lupus eritematoso sistémico, diabetes mellitus insulinodependiente.
La enfermedad de la artritis se selecciona preferiblemente del grupo
artritis reumatoide, osteoartritis, síndrome de Caplan, síndrome de Felty, síndrome de Sjogren, espondilitis anquilosante, enfermedad de Still, condrocalcinosis, artritis metabólica, fiebre reumática, enfermedad de Reiter, síndrome de Wissler. La enfermedad renal inflamatoria se selecciona preferentemente del grupo glomerulonefritis, lesión glomerular, síndrome nefrótico, nefritis intersticial, nefritis lúpica, síndrome de Goodpasture, granulomatosis de Wegener, vasculitis renal, nefropatía por IgA, enfermedad glomerular idiopática.
La enfermedad inflamatoria de la piel se selecciona preferiblemente del grupo de psoriasis, dermatitis atópica, sensibilidad al contacto, acné.
Asimismo, se abarca el uso de los compuestos de fórmula I y/o sales y solvatos fisiológicamente aceptables de estos para la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de una enfermedad o afección en un mamífero, en que a este método se administra una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con la invención a un mamífero enfermo que necesita de tal tratamiento. La cantidad terapéutica varía según la enfermedad específica y se puede determinar por el experto en la técnica sin un esfuerzo excesivo.
La presente invención también abarca el uso de compuestos de fórmula I y/o sales y solvatos fisiológicamente aceptables de estos para la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de la vascularización de la retina. Asimismo, se incluye el uso de los compuestos de la fórmula I y/o sales fisiológicamente aceptables de estos para la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o combate de una enfermedad inducida por un tumor en un mamífero, en que a este método se administra una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con la invención a un mamífero enfermo que necesita de tal tratamiento. La cantidad terapéutica varía según la enfermedad específica y se puede determinar por el experto en la técnica sin un esfuerzo excesivo.
Los compuestos de fórmula I descritos se pueden administrar en combinación con otros agentes terapéuticos conocidos, incluidos los antineoplásicos. Como se usa aquí, el término “antineoplásico” se refiere a cualquier agente que se administra a un paciente con cáncer con el fin de tratar el cáncer.
El tratamiento contra el cáncer definido anteriormente se puede aplicar como una monoterapia o puede implicar, además de los compuestos de fórmula I divulgados en este documento, cirugía convencional o radioterapia o terapia médica. Tal terapia medicinal, por ejemplo, una quimioterapia o una terapia dirigida, puede incluir uno o más, pero preferentemente uno, de los siguientes agentes antitumorales:
Agentes alquilantes
tales como altretamina, bendamustina, busulfán, carmustina, clorambucilo, clormetina, ciclofosfamida, dacarbazina, ifosfamida, improsulfán, tosilato, lomustina, melfalán, mitobronitol, mitolactol, nimustina, ranimustina, temozolomida, tiotepa, treosulfán, mecloretamina, carbocuona; apazicuona, fotemustina, glufosfamida, palifosfamida, pipobroman, trofosfamida, uramustina, TH-3024, VAL-0834;
Compuestos de platino
tales como carboplatino, cisplatino, eptaplatino, hidrato de miriplatino, oxaliplatino, lobaplatino, nedaplatino, picoplatino, satraplatino;
lobaplatino, nedaplatino, picoplatino, satraplatino;
Agentes modificadores del ADN
tal como amrubicina, bisantreno, decitabina, mitoxantrona, procarbazina, trabectedina, clofarabina;
amsacrine, brostallicin, pixantrone, laromustine13;
Inhibidores de la topoisomerasa
tales como etopósido, irinotecán, razoxano, sobuzoxano, tenipósido, topotecán; amonafida, belotecán, acetato de eliptinio, voreloxina;
Modificadores de microtúbulos
tales como cabazitaxel, docetaxel, eribulina, ixabepilona, paclitaxel, vinblastina, vincristina, vinorelbina, vindesina, vinflunina;
fosbretabulina, tesetaxel;
Antimetabolitos
tales como asparaginasa3, azacitidina, levofolinato de calcio, capecitabina, cladribina, citarabina, enocitabina, floxuridina, fludarabina, fluorouracilo, gemcitabina, mercaptopurina, metotrexato, nelarabina, pemetrexed, pralatrexato, azatioprina, tioguanina, carmofur;
doxifluridina, elacitabina, raltitrexed, sapacitabina, tegafur23, trimetrexato;
Antibióticos antineoplásicos
tales como bleomicina, dactinomicina, doxorrubicina, epirrubicina, idarrubicina, levamisol, miltefosina, mitomicina C, romidepsina, estreptozocina, valrrubicina, zinostatina, zorrubicina, daunurobicina, plicamicina;
aclarubicina, peplomicina, pirarubicina;
Hormonas/antagonistas
tales como abarelix, abiraterona, bicalutamida, buserelina, calusterona, clorotrianiseno, degarelix, dexametasona, estradiol, fluocortolona, fluoximesterona, flutamida, fulvestrant, goserelina, histrelina, leuprorelina, megestrol, mitotano, nafarelina, nandrolona, nilutamida, octreotida, prednisolona, raloxifeno, tamoxifeno, tirotropina alfa, toremifeno, trilostano, triptorelina, dietilestilbestrol;
acolbifena, danazol, deslorelina, epitiostanol, orteronel, enzalutamida13;
Inhibidores de aromatasa
tales como aminoglutetimida, anastrozol, exemestano, fadrozol, letrozol, testolactona;
formestano;
Inhibidores de cinasa de molécula pequeña
tales como crizotinib, dasatinib, erlotinib, imatinib, lapatinib, nilotinib, pazopanib, regorafenib, ruxolitinib, sorafenib, sunitinib, vandetanib, vemurafenib, bosutinib, gefitinib, axitinib;
afatinib, alisertib, dabrafenib, dacomitinib, dinaciclib, dovitinib, enzastaurin, nintedanib, lenvatinib, linifanib, linsitinib, masitinib, midostaurin, motesanib, neratinib, orantinib, perifosine, ponatinib, radotinib, rigosertib, tipifarnib, tivantinib, tivozanib, trametinib, pimasertib, brivanib alaninate, cediranib, apatinib4, cabozantinib Smalate13, ibrutinib13, icotinib4, buparlisib2, cipatinib4, cobimetinib13, idelalisib13, fedratinib1, XL-6474;
Fotosensibilizantes
tales como metoxsalen3;
porfímero de sodio, talaporfina, temoporfina;
Anticuerpos
tales como avelumab, alemtuzumab, besilesomab, brentuximab vedotin, cetuximab, denosumab, ipilimumab, ofatumumab, panitumumab, rituximab, tositumomab, trastuzumab, bevacizumab, pertuzumab23;
catumaxomab, elotuzumab, epratuzumab, farletuzumab, mogamulizumab, necitumumab, nimotuzumab, obinutuzumab, ocaratuzumab, oregovomab, ramucirumab, rilotumumab, siltuximab, tocilizumab, zalutumumab, zanolimumab, matuzumab, dalotuzumab123 onartuzumab13 racotumomab1, tabalumab13, EMD-5257974, nivolumab13;
Citoquinas
tales como aldesleucina, interferón alfa2, interferón alfa2a3, interferón alfa2b23; celmoleucina, tasonermina, teceleucina, oprelvequina13, interferón beta-1a4 recombinante;
Conjugados de fármacos
tales como denileucina diftitox, ibritumomab tiuxetan, iobenguane 1123, prednimustina, trastuzumab emtansina, estramustina, gemtuzumab, ozogamicina, aflibercept;
cintredekin besudotox, edotreotide, inotuzumab ozogamicin, naptumomab estafenatox, oportuzumab monatox, technetium (99mTc) arcitumomab13, vintafolide13;
Vacunas
tales como sipuleucel3; vitespen3, emepepimut-S3, oncoVAX4, rindopepimut3, troVax4, MGN-16014, MGN-17034; Misceláneos
alitretinoína, bexaroteno, bortezomib, everolimus, ácido ibandrónico, imiquimod, lenalidomida, lentinan, metirosina, mifamurtida, ácido pamidrónico, pegaspargasa, pentostatina, sipuleucel3, sizofiran, tamibaroteno, temsirolimus, talidomida, tretinoína, vismodegib, ácido zoledrónico, vorinostat;
celecoxib, cilengitida, entinostat, etanidazol, ganetespib, idronoxil, iniparib, ixazomib, lonidamina, nimorazol, panobinostat, peretinoína, plitidepsina, pomalidomida, procodazol, ridaforolimus, tasquinimod, telotristat, thymalfasin, tirapazamina, tosedostat, trabedersen, ubenimex, valspodar, gendicina4 , picibanil4 , reolisina4, clorhidrato de retaspimicina13, trebananib23 , virulizina4 , carfilzomib13 , endostatina4 , immucotel4 , belinostat3 , MGN-17034 ;
1 Prop. INN (nombre internacional propuesto no patentado [por sus siglas en inglés])
2 Rec. INN (nombres internacionales recomendados no patentados [por sus siglas en inglés])
3 USAN (nombre adoptado en los Estados Unidos [por sus siglas en inglés])
4 Sin INN.
Las abreviaturas siguientes se refieren respectivamente a las definiciones que aparecen a continuación:
aq (acuoso), h (hora), g (gramo), L (litro), mg (miligramo), MHz (megahertz), min. (minuto), mm (milímetro), mmol (milimol), mM (milimolar), m.p. (punto de fusión), eq (equivalente), mL (mililitro), L (microlitro), ACN (acetonitrilo), AcOH (ácido acético), CDQ b (cloroformo deuterado), CD3OD (metanol deuterado), CH3CN (acetonitrilo), c-hex (ciclohexano), DCC (diciclohexil carbodiimida), DCM (diclorometano), DIC (diisopropil carbodiimida), DIEA (diisopropiletil-amina), DMF (dimetilformamida), DMSO (dimetilsulfoxido), DMSO-d6 (dimetilsulfóxido deuterado), EDC (1-(3-dimetil-amino-propil)-3-etilcarbodiimida), ESI (ionización por electroaspersión), EtOAc (acetato de etilo), Et2O (dietiléter), EtOH (etanol), HATU (dimetilamino-([1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-iloxi)-metileno]-dimetilamonio hexafluorofosfato), HPLC (cromatografía de líquidos de alta resolución), i-PrOH (2-propanol), K2CO3 (carbonato de potasio), LC (cromatografía de líquidos), MeOH (metanol), MgSO4 (sulfato de magnesio), MS (espectrometría de masas), MTBE (metil terc-butil éter), NaHCO3 (bicarbonato de sodio), NaBH4 (borohidruro de sodio), NMM (N-metil morfolina), NMR (resonancia magnética nuclear), PyBOP (benzotriazol-1-il-oxi-tris-pirrolidino-fosfonio hexafluorofosfato), RT (temperatura ambiente), Rt (tiempo de retención), SPE (extracción en fase sólida), TBTU (2-(1-H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrafluoro borato de tetrametiluromio), TEA (trietilamina), TFA (ácido trifluoroacético), THF (tetrahidrofurano), TLC (cromatografía de capa delgada), UV (ultravioleta).
Arriba y abajo, todas las temperaturas se indican en °C. En los siguientes ejemplos, “preparación convencional” significa: se agrega agua si es necesario, el pH se ajusta, si es necesario, a valores entre 2 y 10, dependiendo de la constitución del producto final, la mezcla se extrae con acetato de etilo o diclorometano, las fases se separan, se seca la fase orgánica sobre sulfato de sodio, se evapora y el residuo se purifica mediante cromatografía sobre gel de sílice y/o por cristalización. Los valores en el gel de sílice; eluyente: acetato de etilo/metanol 9:1.
1H NMR se registró en Bruker DPX-300, DRX-400, AVII-400 o en un espectrómetro a 500 MHz, usando la señal residual de disolvente deuterado como referencia interna. Los desplazamientos químicos (8 ) se informan en ppm en relación con la señal del disolvente residual (8 = 2,49 ppm por 1H NMR en DMSO-d6). Los datos de 1H NMR se reportan de la forma siguiente: Desplazamiento químico (multiplicidad, constantes de acoplamiento y cantidades de hidrógeno). La multiplicidad se abrevia de la forma siguiente: s (singlete), d (doblete), t (triplete), q (cuarteto), m (multiplete), br (amplio).
Prueba de actividad bioquímica de MetAP-2
La actividad de MetAP-2 se determinó mediante un ensayo acoplado a enzima con el uso del tripéptido Met-Ala-Ser (MAS) como sustrato y la MetAP-2 humana recombinante (His-TevMetAP-2, preparada por Merck). La metionina liberada es convertida por la L-aminoácido oxidasa (AAO [por sus siglas en inglés]) en metionina oxidada y se libera peróxido de hidrógeno. En una segunda etapa, la peroxidasa de rábano picante cataliza la oxidación del leucocolorante dianisidina a dianisidina oxidada utilizando peróxido de hidrógeno como sustrato conjunto. La dianisidina ox producida se detectó fotométricamente como un aumento en la absorbancia a 450 nm. La actividad de MetAP2 se determinó en un modo de medición cinética. La liberación de una molécula de metionina corresponde a la producción de una molécula de dianisidina ox. La actividad enzimática de MetAP2 corresponde directamente al aumento en la absorbancia por tiempo.
A mayor detalle, el ensayo se realizó en una placa de microvaloración de 384 pozos (Greiner 78110 MTP, transparente) en un volumen de reacción total de 50 |jl a 22 °C. 0,35 mg de MetAP2 rec humana con etiqueta de His en el extremo N-terminal (preparado en casa, AA 2-478, concentración final (fc) 123 nM), 1 unidad de peroxidasa de rábano picante (Roche, Mannheim), 0,02 unidades de L-aminoácido oxidasa (Merck, Darmstadt), 0,6 mM de dianisidina (Merck, Darmstadt, disuelta en 50 mM de HCl, DMSO al 10 %) se incubaron en ausencia o en presencia del compuesto de prueba (10 concentraciones de dilución) en 100 mM de Hepes, 50 mM de NaCl, 50 mM de MnCh a pH 7,0 durante 15 min a 22 °C. La reacción se inició al agregar 500 jM (fc) del péptido MAS (Merck, Darmstadt). Después de mezclar, se realizó la primera medición de absorbancia en un lector multimodo Envision (Perkin-Elmer, Waltham) a una longitud de onda de 450 nm. La reacción se incubó a 22 °C durante 45 min adicionales y se realizó la segunda medición de absorbancia. Se determinó el aumento de absorbancia por tiempo. El valor de control utilizado fue la reacción sin inhibidor con DMSO al 0,5 % (fc). Como control de inhibidor farmacológico se utilizó Fumagillin (Merck, Darmstadt) en una concentración final de 5 jM . Los valores inhibitorios (IC50) se determinaron usando el programa ASSAY ANALYZER@ de GeneData (Basel, Suiza).
Ensayo de proliferación de HUVEC
La proliferación de las células endoteliales primarias HUVEC se usó como ensayo sobre los mecanismos celulares25.Con la aplicación del ensayo de proliferación celular directa CyQUANT® (Invitrogen C35011), que está basado en una tinción de unión a ADN fluorescente permeable a la célula, el contenido del ADN se usa como una medición directa para el conteo celular. Células HUVEC agrupadas (Promocell C-12203) se cultivaron en medio suministrado por Promocell (Cat No C-22020) para un máximo de 4 pasajes. Para el ensayo, se siembran 500 células/pozos en placas de cultivo negras de 384 pozos con fondo transparente en 70 | j l de medio de cultivo y se incuban durante 6 horas a 37 °C, con 5 % de CO2. Se agregaron 10 j l de compuestos de prueba prediluidos y las células se incuban durante 3 días a 37 °C, a 5 % de CO 2 antes de la medición del contenido de ADN. El reactivo de detección CyQUANT se prepara de acuerdo con el protocolo del fabricante, se agregaron 20 jl/pozo y se incubaron a 37 °C, con 5 % de CO2 por al menos 1 h antes de la medición de fluorescencia en el lector multimodo Envision (Perkin-Elmer, Waltham) con 480 nm de excitación y con emisión de 535 nm (modo de lectura de fondo). El ensayo se realiza como respuesta a la dosis con 10 diluciones del compuesto. Los valores inhibitorios (IC50) se determinaron usando el programa ASSAY ANALYZER ® de GeneData (Basel, Suiza).
Además, se puede demostrar la degradación de MetAP-2 en las células. Véanse los barridos que aparecen más adelante. Esta degradación sugiere un efecto prolongado/sostenido ya que la proteína diana MetAP-2 no solo es inhibida sino incluso degradada/eliminada de la célula por los compuestos y, en consecuencia, el tratamiento de las indicaciones debería ser aún más eficaz.
Los resultados iniciales de la degradación de MetAP-2 fueron obtenidos después de 24 h de incubación de los compuestos en tres concentraciones diferentes (0,1; 1; 10 jM ), lisado celular, separación SDS-PAGE [por sus siglas en inglés], transferencia electroforética y detección con ayuda de anticuerpo.
La ima en a continuación indica la forma en que dos compuestos "A1" "A2" de radan en el tiempo la MetAP-2.
Figure imgf000021_0001
Las tablas siguientes contienen una cuantificación de estos resultados.
En resumen:
"A2" mostró actividad a 10 jM (40 % de reducción de la proteína MetAP-2 después de 24 h y una reducción del 20 % después de 48 h)
"A1" es más activo: A 10 jM : 10 % de reducción después de 6 h, 70 % de reducción después de 24 h y nuevamente 70 % después de 48 h. A 1 jM : 15 % de reducción después de 6 h, 40 % de reducción después de 24 h. Después de 48 h, se puede detectar cualquier reducción. A 0,1 jM : 30 % de reducción después de 24 h.
Comparación de los niveles de proteína MetAP2 en células HTC116 después de tratamientos con el compuesto a diferentes concentraciones y puntos en el tiempo. A manera de control, se usó DMSO y sus valores se estableció como "1". Valores de MetAp2 <1 significan degradación.
Figure imgf000022_0001
( B I D ' Í M O t O I f l ^ O l O
T -" T -" v " T -" T -" O " O " O " O " O "
(seuBJjiqjB sspepmn) ^dVl l^AI sp leyes
Figure imgf000023_0001
Figure imgf000024_0001

Figure imgf000025_0002
Los ejemplos preferidos que se muestran a continuación degradan la MetAP-2 en células HCT116 de una manera dependiente de la dosis y del tiempo.
Figure imgf000025_0001
1. Síntesis ejemplar de "A1":
5-[3-[(3,5-difluorofenil)metilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-1-il]-N-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxo-isoindolin-4-il]amino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etil]-1H-indol-2-carboxamida
Figure imgf000026_0001
Los bloques de construcción se prepararon como se conoce en la literatura y se unieron en una reacción de formación de amida como se muestra a continuación:
Figure imgf000026_0002
A una solución agitada disponible de forma comercial de 2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-4-fluoro-2,3-dihidro-1H-isoindol1,3-diona (200 mg; 0,72 mmol) en N,N-dimetilformamida (1,5 ml; 18 mmol) se agregó N-(17-amino-3,6,9,12,15-pentaoxaheptadecan-1-il)carbamato de tercbutilo disponible comercialmente (275 mg; 0,72 mmol) y carbonato de sodio anhidro (153 mg; 1,45 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 90 °C durante 14 h. Después de enfriarse a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se evaporó, se disolvió en DMSO y se purificó mediante cromatografía de fase inversa. Las fracciones que contienen el producto se evaporaron. El compuesto terc-butilo N-(17-{[2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3-dioxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-4-il]amino}-3,6,9,12,15-pentaoxahepta-decan-1-il)carbamato se disolvió en diclorometano (4 ml) y se trató con ácido trifluoroacético (1 ml) durante 3 h. La reacción se evaporó hasta secarse, se co-evaporó dos veces con tolueno y se usó directamente en la siguiente reacción sin purificación adicional.
Figure imgf000026_0003
Procedimiento:
Ácido 5-(3-{[(3,5-difluorofenil)metil]carbamoil}-3-hidroxi-2-oxopirrolidin-1-il)-1H-indol-2-carboxílico (30 mg; 0,07 mmol), 5-(15-amino-4,7,10,13-tetraoxa-1-azapentadecan-1-il)-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-2,3-dihidro-1H-isoindol-1, se disolvieron 3-diona (40,5 mg; 0,07 mmol), HATU (31,9 mg; 0,08 mmol) y 4-metilmorfolina (31 ml; 0,28 mmol) en N,N-dimetilformamida (5,4 ml) y se agitaron durante 14 h a temperatura ambiente.
Una vez completada la reacción indicada por LC-MS, la mezcla se evaporó hasta secarse, se volvió a disolver en DMSO y se purificó para HPLC de preparación. Todas las fracciones fueron verificadas por UPLC. dando una fracción de producto puro de 25,1 mg y una fracción impura. La fracción impura se disolvió en DCM/MeOH, se absorbió en Isolute® y se purificó mediante cromatografía en columna utilizando DCM a DCM/20%MeOH como eluyentes. Las fracciones puras se combinaron.
El producto se liofilizó a partir de agua/MeCN.
Datos analíticos:
Rendimiento: 42,2 mg (66 %)
apariencia: sólido blanco
LC-MS: RT: 1,46 min; área: 100 %, m/z 452,8= [M+2H]2+; m/z 904,8= [M+H]+ NMR:
1H NMR (700 MHz, DMSO-de) 611,62 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 11,05 (s, 1H), 8,69 (t, J = 6,4 Hz, 1 H), 8,55 (t, J = 5,7 Hz, 1 H), 7,78 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,61 7,51 (m, 2H), 7,43 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,177,10 (m, 2H), 7,06 (tt, J = 9,4, 2,4 Hz, 1H), 7,00 (qd, J = 6,4, 3,1 Hz, 4H), 6,88 (dd, J = 8,5, 2,2 Hz, 1H), 6,70 (s, 1H), 5,03 (dd, J = 12,8, 5,5 Hz, 1H), 4,41 (dd, J = 15,8, 6,8 Hz, 1 H), 4,27 (dd, J = 15,8, 6,0 Hz, 1 H), 3,89 (ddt, J = 9,2, 5,8, 3,4 Hz, 2H), 3,593,45 (m, 18H), 3,44 (q, J = 5,9 Hz, 2H), 3,363,33 (m, 2H), 2,87 (m, 1H), 2,652,51 (m, 4H), 2,172,10 (m, 1H), 1,99 (dtd, J = 13,1,5,4, 2,4 Hz, 1H).
Los compuestos siguientes se prepararon de forma análoga:
5-[3-[(3,5-difluorofenil)metilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-1-il]-N-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo3-piperidil)-1,3-dioxoisoindolin-5-il]amino]- etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etil]-1 H-indol-2-carboxamida (“A2”)
Figure imgf000027_0001
LC-MS: RT: 1,46 min, área: 100%, m/z 452,8= [M+2H]2+, m/z 904,8= [M+H]+. 1H NMR (700 MHz, DMSO-de) 611,62 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 11,05 (s, 1H), 8,69 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 8,55 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,61 - 7,51 (m, 2H), 7,43 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,16
- 7,11 (m, 2H), 7,06 (tt, J = 9,4, 2,4 Hz, 1H), 7,00 (qd, J = 6,4, 3,1 Hz, 3H), 6,88 (dd, J = 8,5, 2,2 Hz, 1 H), 6,70 (s, 1 H), 5,03 (dd, J = 12,8, 5,5 Hz, 1H), 4,41 (dd, J = 15,8, 6,8 Hz, 1H), 4,27 (dd, J = 15,8, 6,0 Hz, 1H), 3,89 (ddt, J = 9,2, 5,8, 3,43,4 Hz, 2H), 3,59 - 3,46 (m, 14H), 3,44 (q, J = 5,9 Hz, 2H), 3,33,36-3,32 (m, 3H), 2,87 (m, 1H), 2,65- 2,52 (m, 4H), 2,20­ 2,07 (m, 1 H), 1,99 (dtd, J = 13,1,5,4, 2,4 Hz, 1H).
(3RS)-N-[(3,5-difluorofenil)metil]-3-hidroxi-1-{2-[(5-{[(2S)-1-[(2S,4R)-4-hidroxi-2-({[4-(4-metil-1,3-tiazol5-il)fenil]metil}carbamoil)pirrolidin-1-il]-3,3-dimetil-1-oxobutan-2-il]carbamoil}pentilo)carbamoil]-1 H-indol-5-il}-2-oxopirrolidin-3-carboxamida ("A3")
Figure imgf000027_0002
LC-MS: RT: 1,51 min, área: 96 %, m/z 638,3 = fragmento.
1H NMR (700 MHz, DMSO-de) 611,56 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 8,98 (s, 1H), 8,66 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 8,52 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 8,43 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 7,81 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 7,77 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,52 (dd, J = 9,0, 2,1 Hz, 1H), 7,44 - 7,40 (m, 3H), 7,38 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,10 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,05 (tt, J = 9,3, 2,6 Hz, 1H), 7,00 (h, J = 4,7 Hz, 2H), 4,54 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 4,42 (dt, J = 13,0, 7,0 Hz, 3H), 4,35 (dq, J = 6,5, 3,5, 3,0 Hz, 1H), 4,27 (dd, J = 15,8, 6,1 Hz, 1H), 4,22 (dd, J = 15,9, 5,6 Hz, 1H), 3,91 - 3,87 (m, 2H), 3,69 - 3,62 (m, 2H), 3,26 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 2,62 (ddd, J = 11,8, 6,6, 4,8 Hz, 1H), 2,27 (dt, J = 14,6, 7,6 Hz, 1H), 2,14 (ddd, J = 14,7, 9,9, 5,9 Hz, 2H), 2,03 (ddd, J = 11,2, 7,9, 2,6 Hz, 1H), 1,90 (ddd, J = 12,8, 8,5, 4,7 Hz, 1H), 1,591,47 (m, 4H), 1,351,26 (m, 2H), 0,93 (s, 9H). 5-[3-[(3,5-difluorofenil)metilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-1-il]-N--[5-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxo-isoindolin-5-il]amino]pentilo]-1 H-indol-2-carboxamida (“A4”)
Figure imgf000028_0001
LC-MS: RT: 1,53 min, área: 97 %, m/z 770,4.
1H NMR (500 MHz, DMSO-de) 611,56 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 11,02 (s, 1H), 8,66 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 8,46 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 7,77 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,52 (dd, J = 8,9, 2,1 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,12 - 7,02 (m, 2H), 6,95 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 6,85 (dd, J = 8,4, 2,1 Hz, 1H), 5,02 (dd, J = 12,72,7, 5,4 Hz, 1H), 4,42 (dd, J = 15,8, 6,8 Hz, 1H), 4,27 (dd, J = 15,8, 6,0 Hz, 1H), 3,93 - 3,86 (m, 2H), 3,31 (q, J = 6,7 Hz, 2H), 3,17 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 2,87 (ddd, J = 16,6, 13,7, 5,3 Hz, 1H), 2,66- 2,57 (m, 2H), 2,54 (s, 4H), 2,14 (dt, J = 12,8, 7,5 Hz, 1H), 1,99 (ddd, J = 12,6, 5,6, 3,2 Hz, 1H), 1,62 (dp, J = 15,0, 7,3 Hz, 4H), 1,45 (dt, J = 13,8, 7,1 Hz, 2H).
5-[3-[(3,5-difluorofenil)metilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-1-il]-N-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)1,3-dioxoisoindolin-4-il]amino]etoxi]- etoxi]etil]-1 H-indol-2-carboxamida (“A5”)
Figure imgf000028_0002
LC-MS: RT: 1,49 min, área: 98 %, m/z 816,4.
1H NMR (500 MHz, DMSO-de) 611,58 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 11,06 (s, 1H), 8,66 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 8,50 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 7,76 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,57 - 7,51 (m, 2H), 7,42 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,11 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,10 - 7,04 (m, 2H), 7,01 (qd, J = 6,9, 3,6 Hz, 4H), 6,67 (s, 1H), 6,58 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 5,04 (dd, J = 12,8, 5,4 Hz, 1H), 4,42 (dd, J = 15,8, 6,8 Hz, 1H), 4,27 (dd, J = 15,8, 6,0 Hz, 1H), 3,89 (dd, J = 8,3, 5,5 Hz, 2H), 3,67 - 3,49 (m, 8H), 3,43 (dq, J = 11,1,5,6 Hz, 4H), 2,87 (ddd, J = 16,8, 13,7, 6,1 Hz, 1H), 2,66- 2,53 (m, 4H), 2,14 (dt, J = 12,9, 7,5 Hz, 1H), 2,08 -1,94 (m, 1H), 1,24 (d, J = 3,4 Hz, 1H).
5-[3-[(3,5-difluorofenil)metilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-1-il]-N-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-hidroxi-2-[[4-(4-metiltiazol-5-il)fenil]metilcarbamoil]pirrolidin-1-carbonil]-2,2-dimetil-propil]amino]-2oxo-etoxi]etoxi]etil]-1H-indol-2-carboxamida (“A6”)
Figure imgf000028_0003
LC-MS: RT: 1,48 min, área: 91 %, m/z 670,3 = fragmento.
1H NMR (500 MHz, DMSO-de) 611,58 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 8,95 (s, 1H), 8,66 (t, J = 6,5 Hz, 1 H), 8,53 (dt, J = 9,8, 5,9 Hz, 2H), 7,77 (t, J = 1,4 Hz, 1H), 7,54 (dt, J = 8,9, 1,8 Hz, 1H), 7,43 (dd, J = 9,2, 5,3 Hz, 2H), 7,38 (s, 4H), 7,12 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,09 - 6,97 (m, 3H), 4,57 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,50 - 4,32 (m, 6H), 4,26 (dt, J = 15,7, 6,4 Hz, 2H), 3,98 (d, J = 1,3 Hz, 2H), 3,92 - 3,85 (m, 2H), 3,71 - 3,54 (m, 8H), 3,47 (q, J = 5,6 Hz, 2H), 2,66- 2,57 (m, 1H), 2,43 (s, 3H), 2,182,10 (m, 1H), 2,102,03 (m, 1H), 1,91 (ddd, J = 13,0, 8,7, 4,6 Hz, 1H), 0,94 (s, 9H).
5-[3-[(3,5-difluorofenil)metilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-1-il]-N-N-[2-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-hidroxi-2-[[4-(4-metiltiazol-5-il)fenil]metilcarbamoil]pirrolidin-1-carbonil]-2,2-dimetil-propil]amino]-2-oxo-etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etil]-1Hindol-2-carboxamida ("A7")
Figure imgf000029_0001
LC-MS: RT: 1,49 min, área: 98%, m/z 538,4 = [M+2H]2+, m/z 1075,4 = [M+H]+ 1H NMR (700 MHz, DMSO-de) 811,62 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 8,98 (s, 1H), 8,69 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 8,57 (m, 2H), 7,77 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,54 (dd, J = 9,0, 2,1 Hz, 1H), 7,48 - 7,33 (m, 6H), 7,13 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,06 (tt, J = 9,3, 2,4 Hz, 1H), 7,00 (h, J = 4,3 Hz, 2H), 6,70 (s, 1H), 5,14 (s, 1H), 4,56 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,46 - 4,33 (m, 4H), 4,26 (ddd, J = 16,1, 11,0, 5,8 Hz, 2H), 3,95 (s, 2H), 3,90 (tq, J = 9,1,4,7, 4,0 Hz, 2H), 3,67 (dd, J = 10,6, 4,0 Hz, 1H), 3,63 - 3,48 (m, 14H), 3,43 (q, J = 5,9 Hz, 2H), 2,65- 2,58 (m, 1H), 2,44 (s, 3H), 2,14 (dt, J = 12,7, 7,5 Hz, 1H), 2,06 (ddd, J = 9,1,4,4, 2,2 Hz, 1H), 1,90 (ddd, J = 13,1, 8,9, 4,6 Hz, 1H), 1,291,17 (m, 1H), 0,94 (s, 9H).
5-[3-[(3,5-difluorofenN)metNcarbamoN]-3-hidroxi-2-oxo-pirroNdin-1-N]-N-N-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[(1S)-1-[(2S,4R)-4-hidroxi-2-[[4-(4-metiltiazol-5-il)fenil]metilcarbamoil]pirrolidin-1-carbonil]-2,2-dimetil-propil]amino]-2-oxo-etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etil]-
Figure imgf000029_0002
LC-MS: RT: 1,49 min, área: 100 %, m/z 560,4= [M+2Hf+ m/z 1119,4= [M+H]+.
1H NMR (700 MHz, DMSO-de) 811,62 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 8,98 (s, 1H), 8,69 (t, J = 6,5 Hz, 1H), 8,57 (m, 2H), 7,77 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,54 (dd, J = 8,9, 2,1 Hz, 1H), 7,45 - 7,37 (m, 6H), 7,13 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,06 (tt, J = 9,3, 2,4 Hz, 1H), 7,00 (h, J = 4,3 Hz, 2H), 4,56 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,41 (m, 3H), 4,35 (tt, J = 4,4, 2,1 Hz, 1H), 4,26 (m, 3H), 3,96 (m, 2H), 3,90 (m, 3H), 3,67 (dd, J = 10,6, 4,0 Hz, 1H), 3,62 - 3,58 (m, 3H), 3,56 - 3,42 (m, 18H), 2,66- 2,58 (m, 1H), 2,44 (s, 3H), 2,14 (m, 1H), 2,05 (ddt, J = 12,0, 7,6, 1,9 Hz, 1H), 1,90 (ddd, J = 13,0, 8,8, 4,5 Hz, 1H), 0,94 (s, 9H). 5-[3-[(3,5-difluorofenil)metilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-1-il]-N-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo3-piperidil)-1,3-dioxo-isoindolin-
Figure imgf000029_0003
5-[3-[(3,5-difluorofenil)metilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidi n-1-il]-N-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidM)-1,3-d¡oxo-¡so¡ndol¡n-4-¡l]ox¡etox¡]-etox¡]etoxi]etox¡]etox¡]et¡l]-1H-¡ndol-2-carboxam¡da (“A10”)
Figure imgf000030_0001
5-[3-[(3,5-difluorofenil)metilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-1-il]-N-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxo-isoindolin-4-il] etoxi]-etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etil]-1H-indol-2-carboxamida (“A l 1 ”)
Figure imgf000030_0002
5-[3-[(3,5-difluorofenil)metilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-1-il]-N-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2,6-dioxo3-piperidil)-1,3-dioxoisoindolin-4-il]oxietoxi]-etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etil]-N-metil-1H-indol-2-carboxamida (“A12”)
Figure imgf000030_0003
5-[3-[(3,5-difluorofenil)metilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-1-il]-N-[5-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-d¡oxo-¡so¡ndol¡n-4-¡l]ox¡etoxi]-etox¡]etox¡]etox¡]pent¡l]-1H-¡ndol-2-carboxam¡da “A13”
Figure imgf000030_0004
5-[3-[(3,5-difluorofenil)metilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-1-il]-N-[8-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxoisoindolin-4-il]oxietoxi]-etoxi]-etoxi]octil]-1H-indol-2-carboxamida (“A14”)
Figure imgf000031_0001
5-[3-[(3,5-difluorofenil)metilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-1-il]-N-[2-[2-[2-[2-[5-[[2-(2,6-dioxo3-piperidil)-1,3-dioxoisoindolin-4-il]amino]-pentoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etil]-1 H-indol-2-carboxamida (“A15”)
Figure imgf000031_0002
5-[3-[(3,5-difluorofenil)metilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-1-il]-N-[2-[2-[2-[8-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxoisoindolin-4-il]amino]octoxi]-etoxi]etoxi]etil]-1 H-indol-2-carboxamida (“A16”)
Figure imgf000031_0003
5-[3-[(3,5-difluorofenil)metilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-1-il]-N-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxo-isoindolin-4-il]amino]-etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etil]-1 H-benzimidazol-2-carboxamida (“A17”)
Figure imgf000031_0004
N-[(3,5-difluorofenil)metil]-1 -[4-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxo-isoindolin-4-il]amino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]]etilcarbamoil]fenil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-3-carboxamida (“A18”)
Figure imgf000032_0001
5-[3-[(3-cloro-5 fluoro-fenil)metilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-1-il]-N-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxo-isoindolin-4-il] amino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etil]-1 H-indol-2-carboxamida (“A19”)
Figure imgf000032_0002
piperidil)-1,3-dioxo-isoindolin-4-il]amino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etil]-1 H-indol-2-carboxamida ("A20")
Figure imgf000032_0003
5-[3-[(3,5-difluorofenil)metilcarbamoil]-3,4-dihidroxi-2-oxo-pirrolidin-1-il]-N-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3piperidil)-1,3-dioxo-isoindolin-4-il]amino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etil]-1H-indol-2-carboxamida ("A21")
Figure imgf000032_0004
5-[3-[(3-cloro-5 fluoro-fenil)metilcarbamoil]-5-fluoro-3-hidroxi-2-oxopirrolidin-1-il]-N-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxo-isoindolin-4-il]amino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]eti¡]-1 H-indol-2-carboxamida ("A22")
Figure imgf000033_0001
5-[3-[(3-doro-5-fluoro-fenil)metilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-1-piperidil]-N-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxo-isoindolin-4-M] amino]-etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etil]-1H-indol-2-carboxamida (“A23”)
Figure imgf000033_0002
5-[3-[(3,5-difluorofenil)etilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-1 -il]-N-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxoisoindolin-4-il]amino]-etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etil]-1H-indol-2-carboxamida ("A24")
Figure imgf000033_0003
N-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxo-isoindolin-4-il]amino]-etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etil]-5-[3-hidroxi-2-oxo-3-[2-(2-tienil)-etilcarbamoil]pirrolidin-1-il]-1H-indol-2-carboxamida ("A25")
Figure imgf000033_0004
N-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxo-isoindolin-4-il]amino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etil]-5-[3-[2-(2-furil)etilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-1-il]-1H-indol-2-carboxamida ("A26")
Figure imgf000034_0001
5-[3-(cidohexilmetilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-1-il]-N-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxoisoindolin-4-il]amino]-etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etil]-1H-indol-2-carboxamida (“A27”)
Figure imgf000034_0002
N-[(3,5-difluorofenil)metil]-1-[6-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxo-isoindolin-4-il]amino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]]etilcarbamoil]-6-oxo-hexil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-3-carboxamida (“A28”)
Figure imgf000034_0003
N-[(3,5-difluorofenil)metil]-1 -[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxo-isoindolin-4-il]-]amino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etil]piperazina-1-carbonil]-1H-indol-5-il]-3-hidroxi-2-oxo-pyrrolidina-3-carboxamida (“A29”)
Figure imgf000034_0004
N-[(3,5-difluorofenil)metil]-1-[2-[9-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxo-isoindolin-4-il]amino]etoxi]etoxi]etoxi]etil]-3,9-diazaspiro[5.5]undecano-3-carbonil]-1H-indol-5-il]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidina-3-carboxamida (“A30”)
Figure imgf000035_0001
5-[3-[(3,5-difluorofenil)metilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidi n-1-il]-N-[14-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidM)-1,3-dioxo-isoi ndolin-5-il]amino]tetradecil]-1 H-indol-2-carboxamida ("A31")
Figure imgf000035_0002
5-[3-[(3,5-difluorofenil)metilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-1-il]-N-[3-[3-[3-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)1,3-dioxoisoindolin-5-il]amino]propoxi]-propoxi]propoximetil]-1H-indol-2-carboxamida (“A32”)
Figure imgf000035_0003
5-[3-[(3,5-difl uorofenil)metilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidi n-1 -il]-N-[4-[3-[4-[[2-(2,6-dioxo-3-pi peridil)1,3-dioxo-¡so¡ndol¡n-5-¡l]amino]butox¡]-propox¡]but¡l]-1H-¡ndol-2-carboxam¡da (“A33”)
Figure imgf000035_0004
5-[3-[(3,5-difluorofenil)metilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-1-il]-N-[2-[2-[2-[2-[[2-[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxoisoindolin-5-il]oxiacetil]-amino]etoxi]etoxi]etoxi]etil]-1H-indol-2-carboxamida ("A34")
Figure imgf000036_0001
N-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxo-isoindolin-4-il]aminojetoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etilsulfamoil]-1 H-indol-5-il]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-3-carboxamida ("A35")
Figure imgf000036_0002
2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxo-isoindolin-4-il]amino]-etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]ethyl5-[3-[(3,5-difluorofenil)metilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-1-il]-1 H-indol-2-sulfonato ("A36")
Figure imgf000036_0003
N-[(3,5-difluorofenil)metil]-1-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxo-isoindolin-4-il]amino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi-sulfonimidoil]-1 H-indol-5-il]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-3-carboxamida “A37”
Figure imgf000036_0004
N-[(3,5-difluorofenil)metil]-1-[4-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxo-isoindolin-4-il]amino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]]etil-carbamoilamino]fenil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-3-carboxamida (“A38”)
Figure imgf000037_0001
no]-etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]etil N-[4-[3-[(3,5-difluorofenil)-metilcarbamoil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-1-il]fenil]carbamato ("A39")
Figure imgf000037_0002
N-[(3,5-difluorofenil)metil]-1-[4-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxo-isoindolin-4-il]amino]etoxi]etoxi]etoxi]etoxi]-etoxi]etoxi]etilfulfanil]fenil]-3-hidroxi-2-oxo-pirrolidin-3-carboxamida (“A40”)
Figure imgf000037_0003
N-[(3,5-difluorofenil)metil]-1-[4-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[[2-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1,3-dioxo-isoindolin-4-¡l]am¡no]etox¡]etox¡]etox¡]etox¡]-etox¡]etox¡]etox¡]fen¡l]-3-h¡drox¡-2-oxo-pirrol¡d¡n-3-carboxam¡da “A41”
Figure imgf000037_0004
5-[(3S)-3-{[(3,5-difluorofenil)metil]carbamoil}-3-hidroxi-2-oxopirrolidin-1-il]-N-(2-{2-[2-(2-{[2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3-dioxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-5-il]amino}etoxi)etoxi]etoxi}etil)-1H-indol-2-carboxamida ("A42")
Método
Figure imgf000038_0001
Tipo de instrumento MS: SHIMADZU LCMS-2020; columna: Kinetex EVO C1830*2,1 mm,5um; fase móvil A: 0,0375 % TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % TFA en acetonitrilo (v/v); gradiente: 0,0 min 5 % B ^ 0,80 min 95 % B ^ 1,20 min 95 % B ^ 1,21 min 5 % B ^ 1,55 min 5 % B; tasa de flujo: 1,5 (mL/min); temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: 220 nm y 254 nm.
Método 2:
Tipo de instrumento HPLC: SHIMADZU LC-20AB; columna: Kinetex C18 LC Columna 4,6X50mm,5um; fase móvil A: 0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % de TFA en acetonitrilo (v/v); gradiente: 0,0 min 10 % B ^ 2,40 min 80 % B ^ 3,70 min 80 % B ^ 3,71 min 10 % B ^ 4,00 min 10 % B; temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: PDA (220 nm y 215 nm y 254 nm).
Procedim iento general para la preparación del in term edio 3
Figure imgf000038_0002
Se agitó una solución del compuesto 3a (70 mg, 253 umol), amina 3 (80 mg, 416 umol) y DIEA (222 mg, 1,72 mmol, 300 uL) en DMSO (3 mL) a 90 °C bajo N 2 durante 1,5 h. La LCMS (Rt = 0,687 min, MS 1 = 449,2) mostró que se detectó la MS del intermedio 3. La mezcla se enfrío a 25 - 30 °C, el valor del pH de la mezcla se ajustó a 6 - 7 con AcOH. La mezcla se purificó mediante Prep-HPLC (columna: Phenomenex Synergi C18 150*25*10m; fase móvil: [agua (0,225 %FA) ACN]; B%: 0 % 30 %, 10 min), la fracción se concentró bajo presión reducida para dar el intermedio 3 (50 mg, 96,4 umol, rendimiento del 12,7 %, 95,3 % de pureza, FA) como aceite café, que se confirmó por LCMS (Rt = 0,698 min, MS 1 = 449,3).
LCMS: (Método 1), Rt = 0,687 min, MS 1 = 449,2
Procedimiento general para la preparación del compuesto base "A42"
Figure imgf000039_0001
A una solución de Int 8 (35 mg, 81,5 umol) en DMF (2 mL) se agregó de forma sucesiva DIEA (30 mg, 232 umol) y HATU (35 mg, 92,0 umol) a 0 °C bajo N2, la mezcla se agitó a 0 °C durante 10 min, después se agregó una solución de intermedio 3 (40 mg, 80,8 umol, 1,00 eq, FA) en DMF (2,00 mL) a la mezcla a 0 °C, se agitó durante 1 hbajo N 2 a 0 °C. La mezcla se vertió sobre agua helada (20,0 mL), se extrajo con acetato de etilo (10,0 mL x 2), la fase orgánica se separó y se lavó con salmuera (20,0 mL x 2), se secó con Na2SO4, se filtró, el filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener un aceite color café. Se purificó mediante Prep-HPLC (columna: Phenomenex Synergi C18 75*30* 3um; fase móvil: [agua (0,225 % FA)-ACN]; B%: 31 %-51 %, 8 min), el disolvente de la fracción se retiró mediante liofilización a A42 (23 mg, 24,52 umol, 30,32 % de rendimiento) como un sólido color amarillo, que se confirmó mediante 1H-NMR, LCMS y HPLC.
1H NMR: 400 MHz, DMSO-cfe;
11,62 (s, 1 H), 11,05 (s, 1 H), 8,70 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 8,60-8,52 (m, 1 H), 8,42 (s, 1H), 7,78 (s, 1 H), 7,58-7,50 (m, 2H), 7,42 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,18-7,10 (m, 2H), 7,09-6,96 (m, 4H), 6,87 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,72 (s, 1H), 5,02 (d, J = 8 , 8 Hz, 1H), 4,41 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,26 (d, J = 8 , 8 Hz, 1H), 3,89 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 3,59-3,49 (m, 15H), 2,92-2,81 (m, 1H), 2,65-2,58 (m, 3H), 2,19-2,10 (m, 1H), 2,03-1,95 (m, 1H), 1,23 (s, 1H)
LCMS: Rt = 0,720 min, MS 1 = 860,2;
HPLC: Rt = 1,860 min
5-[(3S)-3-{[(3,5-difluorofenil)metil]carbamoil}-3-hidroxi-2-oxopirrolidin-1 -il]-N-{15-[2-(2,6-dioxopi peridin-3-il)-1,3-dioxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-5-il]-3,6,9,12-tetraoxapentadec-14-in-1 -il}-1 H-indol-2-carboxamida ("A43")
Figure imgf000039_0002
Método LC-MS o HPLC:
Método 1:
Tipo de instrumento MS: SHIMADZU LCMS-2020, columna: Kinetex EVO C1830*2,1 mm, 5um, fase móvil A:
0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % TFA en acetonitrilo (v/v), gradiente: 0,0 min 0 % B^-0,8 min 95 % B^-1,2 min 95 % B^1,21 min 5 % B^1,55 min 5 % B, tasa de flujo: 1,5 mL/min, temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: 220 nm y 254 nm.
Método 2:
Tipo de instrumento MS: SHIMADZU LCMS-2020, columna: Kinetex EVO C1830*2,1 mm, 5um, fase móvil A: 0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % de TFA en acetonitrilo (v/v), gradiente: 0,0 min 0 % B^-3,0 min 95 % B ^3 ,5 min 95 % B^3,51 min 5 % B^-4,0 min 5 % B, tasa de flujo: 0,8 mL/min, temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: 220 nm y 254 nm.
Procedim iento general para la preparación del com puesto 9c
Figure imgf000040_0001
A una solución del compuesto 9b (52 mg, 927 umol) en DMF (4 mL) se agregó NaH (70 mg, 1,75 mmol, 60 % de pureza) a 20-25 °C bajo N2 y se agitó durante 30 min, después se agregó el compuesto 9a (300 mg, 842 umol, 1,00 eq) bajo N2 a 20-25 °C, después de la adición, la solución de mezcla se agitó a 20-25 °C durante 1 h. La TLC (éter de petróleo: Acetato de etilo = 1:1) mostró que el compuesto 9a se había consumido (Rf = 0,60), se detectó un nuevo punto (Rf = 0,40). La solución de reacción se vertió en agua ( 10 ml), luego se extrajo con acetato de etilo ( 10 ml x 2 ), la capa orgánica combinada se lavó con salmuera ( 20 ml), luego se secó sobre Na2SO4, se filtró y concentró bajo presión reducida para obtener el producto en bruto. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía de columna de sílice (SiO2, éter de petróleo: acetato de etilo = 20:1-10:1-3:1, se recolectó el punto (Rf = 0,40)). El compuesto 9c (200 mg, 603 umol, 71,7 % de rendimiento) se obtuvo como un aceite incoloro, que fue confirmado por 1H-NMR.
1H NMR: 400 MHz, CDCla
8 5,09 (s, 1H), 4,23 (d, J = 2,4 Hz, 2H), 3,61-3,76 (m, 12H), 3,56 (t, J = 5,2 Hz, 2H) 3,34 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 2,50-2,53 (m, 1H), 1,47 (s, 9H).
Procedim iento general para la preparación del com puesto 9d
Figure imgf000040_0002
A una solución del compuesto 9f (187 mg, 554 umol) en THF (5 mL) se agregó Cul (15 mg, 78,7 umol) y DIPEA (585 mg, 4,53 mmol) a 20-25 °C bajo N2, después Pd(dppf)Ch»CH2Cl2 (38 mg, 46,5 umol) y el compuesto 9c (150 mg, 452 umol) se agregaron a la solución a 20-25 °C bajo N2, después se agitó a 60-65 °C durante 2 h. La LCMS mostró que se detectó la MS del compuesto 9d (RT = 0,903 min M/Z+1 = 588), la TLC (éter de petróleo: acetato de etilo = 0:1) mostró que el compuesto 9c (Rf = 0,67) se había consumido, se detectó un nuevo punto (Rf = 0,30). La solución de reacción se enfrío a 20-30 °C, después se inactivó con ácido acético a pH = 3-4 y se vertió en agua (10 ml), luego se extrajo con acetato de etilo (10 mL*2), la capa orgánica combinada se lavó con salmuera (5 ml), se secó sobre Na2SO4, se filtró y concentró bajo presión reducida para obtener el producto en bruto. Después se purificó mediante cromatografía de columna de sílice (SÍO2, éter de petróleo: acetato de etilo = 10:1-5:1-0:1, se recolectó el punto (Rf = 0,30)). El compuesto 9d (90 mg, 145 umol, 32,1 % de rendimiento) se obtuvo como un aceite incoloro, que fue confirmado por LCMS, RT = 0,897 min, M/Z+1 100 = 488), 1H-NMR
1H NMR: 400 MHz, CDCla
8 7,94 (s, 1H), 7,81-7,88 (m, 1H), 7,70-7,79 (m, 1H), 7,26-7,48 (m, 1H), 4,91 (dd, J = 12,4, 5,2 Hz, 1H), 4,94-5,00 (m, 1H), 4,40 (s, 1H), 4,21 (s, 1H), 4,14,13 (s, 1H), 3,61-3,75 (m, 12H), 3,55 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 3,26-3,36 (m, 2H), 2,71-2,95 (m, 2H), 2,13-2,23 (m, 1H), 1,37 (s, 9H).
LCMS: (Método 1), RT = 0,903 min, M/Z = 588
Procedim iento general para la preparación del com puesto 9e
Figure imgf000041_0001
A una solución del compuesto 9d (90 mg, 153 umol) en DCM (3 mL) se agregó mediante goteo TFA (174 mg, 1,53 mmol) a 20-25 °C, después de agregarse, la mezcla se agitó a 20-25 °C durante 2 h. La TLC (éter de petróleo: acetato de etilo = 0: 1) mostró que el compuesto 9d se había consumido (Rf = 0,60), se detectó un nuevo punto (Rf = 0,00). La solución de reacción se concentró bajo presión reducida a 30 °C para obtener un compuesto 9e (90 mg, 110 umol, 72,3% de rendimiento, TFA) como un aceite color café, el que se confirmó mediante LCMS, RT = 0,746 min, M/Z+1 = 488).
LCMS: (Método 1), RT = 0,746 min, M/Z = 488
Figure imgf000041_0002
A una solución del compuesto 9h (25 mg, 58,2 umol) in DMF (3 mL) se agregó Cul (38 mg, 294 umol) y HATU (34 mg, 4,53 mmol) a 10-15 °C bajo N2, después el compuesto 9e (42 mg, 69,8 umol, TFA) se disolvió en DMF (1 mL) se agregó a la solución a 10-15 °C, después de la adición, se agitó a 10-15 °C durante 1 h. La LCMS mostró que se detectó la MS del compuesto 9d (RT = 0,917 min M/Z+1 = 899). La solución de reacción se inactivó con AcOH (2 ml), después se vertió sobre agua (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (10 mL*2), la capa orgánica combinada se lavó con salmuera (20 mL), se secó sobre Na2SO4, se filtró y concentró bajo presión reducida para obtener el producto en bruto. El producto en bruto se purificó mediante pre-HPLC (columna: Phenomenex Gemini-NX C1875*30 mm*3um; fase móvil: [agua (0,1 % TFA)-ACN]; B%: 35 %-45 %, 7 min), el disolvente se concentró bajo presión reducida para eliminar el ACN, después se extrajo con acetato de etilo (10 mL*3) se lavó con salmuera (10 mL), posteriormente se secó sobre Na2SO4, se filtró y concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto base (33,7 mg, 35,6 umol, 61,1 % de rendimiento) como un sólido color blanco, que se confirmó mediante LCMS, RT = 2,199 min, M/Z+1 = 899, 1H-NMR, HPLC (RT = 1,856 min).
1H NMR: 400 MHz, DMSO-da
8 11,62 (s, 1H), 11,14 (s, 1H), 8,48-8,77 (m, 2H), 7,88-8,08,03 (m, 3H), 7,78 (s, 1H), 7,40-7,59 (m, 2H), 7,00 - 7,25 (m, 4H), 6,71 (s, 1H), 5,15-5,28 (m, 1H), 4,37-4,54 (m, 2H), 4,24-4,35 (m, 1H), 3,90 (t, J = 6 , 8 Hz, 3H), 3,63-3,71 (m, 2H), 3,48-3,60 (m, 14H), 3,40 - 3,48 (m, 2H), 2,82-2,99 (m, 1H), 2,59-2,66 (m, 2H), 1,96-2,23 (m, 2H).
LCMS: (Método 2), RT = 2,199 min, M/Z = 899
HPLC: (Método 2), RT = 1,856 min
5-[(3S)-3-{[(3,5-difluorofenil)metil]carbamoil}-3-hidroxi-2-oxopirrolidin-1-il]-N-(14-{[2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3-dioxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-4-il]amino}-3,6,9,12-tetraoxatetradecan-1-il)-1H-indol-2-carboxamida ("A44")
Figure imgf000042_0001
Método LC-MS o HPLC:
Método 1:
Tipo de instrumento MS: SHIMADZU LCMS-2020; columna: Kinetex EVO C1830*2,1 mm,5um; fase móvil A: 0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % de TFA en acetonitrilo (v/v); gradiente: 0,0 min 5 % B ^ 0,80 min 95 % B ^ 1,20 min 95 % B ^ 1,21 min 5 % B ^ 1,55 min 5 % B; tasa de flujo: 1,5 mL/min; temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: 220 nm y 254 nm.
Método 2:
Tipo de instrumento HPLC: SHIMADZU LC-20AB; columna: Kinetex C18 LC Columna 4,6X50mm,5um; fase móvil A: 0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % de TFA en acetonitrilo (v/v); gradiente: 0,0 min 10 % B ^ 2,40 min 80 % B ^ 3,70 min 80 % B ^ 3,71 min 10 % B ^ 4,00 min 10 % B; temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: PDA (220 nm y 215 nm y 254 nm).
Procedim iento general para la preparación del com puesto 4a
Figure imgf000042_0002
A una solución del compuesto 2a (8,00 g, 19,2 mmol) en EtOH (60,0 mL) se agregó NaN3 (2,49 g, 38,3 mmol). La mezcla se agitó a 60-65 °C durante 16 h bajo N2. La TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 1/2) mostró que el compuesto 2a (Rf = 0,75) se consumió y se formó un nuevo punto (Rf = 0,80). La mezcla de reacción se vertió sobre solución acuosa sobre NaHCO3 (150 mL), después se extrajo con MTBE (30,0 mL x 5). La capa orgánica se usó directamente para la siguiente etapa.
Procedim iento general para la preparación de la am ina 11
hú
Figure imgf000043_0001
Una mezcla del compuesto 4a (2,76 g, solución MTBE, 9,57 mmol, 75,0 mL), Pd/C (200 mg, húmedo, 10 % de pureza) en THF (75 mL) se desgasificó y se purgó con H2 (103,42 kPa [15 psi]) en 3 ocasiones a 20-25 °C, después la mezcla se agitó durante 21 h al mismo tiempo que se calentaba a 55-60 °C bajo H 2 (103,42 kPa [15 psi]). La 1H NMR mostró que permanecía el compuesto 4a. Se agregó PPh3 (5,50 g, 21,0 mmol, 2,19 eq) a la mezcla. La mezcla se mantuvo agitándose a 35-40 °C durante 12 h. La 1H-NMR mostró que el compuesto 4a estaba consumida y el compuesto amina 11 se había formado. La mezcla de reacción se filtró sobre diatomita, el filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener un residuo de color café. Después la solución acuosa de HCI (1 M, 25 mL) se agregó al residuo, la mezcla se lavó con acetato de etilo (40 mL x 2). La capa acuosa se separó y se liofilizó para obtener el compuesto amina 11 (1,30 g, 4,20 mmol, 2HCl) como sólido color amarillo, que se confirmó mediante 1H-NMR.
1H NMR: 400 MHz, DMSO-cfe;
8 8,00 (s, 6 H) 3,60-3,65 (m, 4H) 3,51-3,60 (m, 12H) 2,92-3,01 (m, 4H)
Procedim iento general para la preparación dei interm edio 11
Figure imgf000043_0002
Una solución del compuesto amina 11 (100 mg, 323 umol, 2HCl), DIEA (222 mg, 1,72 mmol, 300 uL) y el compuesto 3a_1 (80 mg, 289 umol) en DMSO (5,00 mL) se agitó a 90 °C bajo N 2 durante 1,5 h. La LCMS mostró que se detectó la MS del compuesto intermedio 11 (Rt = 0,748 min, MS 1 = 493,3). La mezcla se enfrío a 25-30 °C y el valor del pH se ajustó a 5-6 con AcOH, después se purificó mediante prep-HPLC (columna: Phenomenex Synergi C18 150 * 25 * 10pm; fase móvil: [agua (0,225 % FA)-ACN]; B%: 7 %-37 %,10 min, MS+1 = 493,3). La fracción se concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto intermedio 11 (45 mg) como aceite color café, que se confirmó mediante la etapa siguiente.
LCMS: (Método 1), Rt = 0,748 min, MS+1 = 493,3;
Procedimiento general para la preparación de! compuesto base "A44"
Figure imgf000044_0001
A una solución del compuesto Int 8 (36 mg, 83,8 umol) en DMF (1,00 mL) se agregó de forma sucesiva DIEA (35 mg, 271 umol) y HATU (40 mg, 105 umol) a 0-10 °C bajo N 2, la mezcla se agitó a 0-10 °C durante 10 min, después se agregó una solución del compuesto intermedio 11 (45 mg, 83,6 umol, FA) en DMF (1,00 mL) a la mezcla a 0-10 °C, se agitó durante 1 hbajo N 2 a 0-10 °C. La LCMS mostró que se detectó la MS del compuesto A44 (Rt = 0,878 min, MS 1 = 904,4). La mezcla se vertió sobre agua helada (20 mL), se extrajo con acetato de etilo (10,0 mL x 2), la fase orgánica se separó y se lavó con salmuera (20,0 mL x 2), se secó con Na2SO4, se filtró, el filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener un aceite color café. Se purificó mediante prep-HPLC (columna: Phenomenex Synergi C18150 * 25 * 10 pm; fase móvil:
[agua (0,225 %FA) - ACN]; B%: 29% -59%,10 min), la fracción se concentró bajo presión reducida para obtener A44 (25,88 mg, 99,5 % de pureza) como sólido color amarillo, que se confirmó mediante 1H-NMR, 19F-NMR, LCMS, (Rt = 0,884 min, MS 1 = 904,4) y HPLC (Rt = 1,974 min).
1H NMR: 400 MHz, DMSO-cfe;
8 11,6 (s, 1H), 10,9-11,3 (m, 1H), 8,69 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 8,55 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,50-7,61 (m, 2H), 7,42 (d, J = 8 , 8 Hz, 1H), 6,93-7,24 (m, 6 H), 6,72 (s, 1H), 6,58 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 5,00-5,10 (m, 1 H), 4,37-4,45 (m, 1H), 4,22-4,30 (m, 1H), 3,89 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,46-3,58 (m, 18H), 2,81-2,93 (m, 2H), 2,58 (d, J = 15,2 Hz, 3H), 2,09-2,17 (m, 1H), 1,97­ 2,07 (m, 1H), 1,23 (s, 1H).
19F NMR: 400 MHz, DMSO-cfe;
8-110 ,29
LCMS: (Método 1), Rt = 0,878 min, MS+ 1 = 904,4;
HPLC: (Método 2), Rt = 1,974 min;
5-[(3S)-3-{[(3,5-difluorofenil)metil]carbamoil}-3-hidroxi-2-oxopirrolidin-1 -N]-N-{2-[2-(2,6-dioxopiperidm3-N)-1,3-dioxo-2,3-dihidro-1H-isomdol-4-N]-5,8,11,14,17-pentaoxa-2-azanonadecan-19-N}-N-metN-1H-mdol-2-carboxamida (MA45M)
Figure imgf000044_0002
Método LC-MS o HPLC:
Método 1:
Tipo de instrumento MS: SHIMADZU LCMS-2020; columna: Kinetex EVO C1830*2,1 mm,5um; fase móvil A: 0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % de TFA en acetonitrilo (v/v); gradiente: 0,0 min 5 % B ^ 0,80 min 95 % B ^ 1,20 min 95 % B ^ 1,21 min 5 % B ^ 1,55 min 5 % B; tasa de flujo: 1,5 mL/min; temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: 220 nm y 254 nm.
Método 2:
Tipo de instrumento HPLC: SHIMADZU LC-20AB; columna: Kinetex C18 LC Columna 4,6X50mm,5um; fase móvil A: 0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % de TFA en acetonitrilo (v/v); gradiente: 0,0 min 10 % B ^ 4,20 min 80 % B ^ 5,30 min 80 % B ^ 5,31 min 10 % B ^ 6,00 min 10 % B; temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: PDA (220 nm y 215 nm y 254 nm).
Procedim iento general para la preparación del com puesto 12b
Figure imgf000045_0001
A una solución del compuesto 12a (500 mg, 1,78 mmol) en DCM (10 mL) se agregó Boc2O (807 mg, 3,70 mmol, 850 uL) a 0-10 °C, la mezcla se agitó durante 3 h al mismo tiempo que se calentaba a 25 °C bajo N 2. La TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 0/1) mostró que el compuesto 12a (Rf = 0,00) se consumió y se formó un nuevo punto (Rf = 0,30). La mezcla se vertió sobre agua (50 mL), se extrajo con acetato de etilo (20 mL x 3), la fase orgánica se lavó con salmuera (50 mL x 4), después se concentró bajo presión reducida para obtener aceite color café, que se usó directamente para la siguiente etapa.
Procedim iento general para la preparación del com puesto 12c
CH3I
Figure imgf000045_0002
A una solución del compuesto 12b (1,00 g, 2,08 mmol) en DMF (10 mL) se agregó NaH (200 mg, 5,00 mmol, 60 % de pureza) a 0-10 °C bajo N2, se agitó durante 1 ha 0-10 °C bajo N 2, después se agregó a la mezcla CH3I (650 mg, 4,58 mmol, 285 uL, 2,20 eq), se agitó durante 10 h bajo N2 al mismo tiempo que se calentaba a 25 °C. La TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 0/1) mostró que permanecía el compuesto 12b (Rf = 0,30) y se formaba un nuevo punto (Rf = 0,40). Después, la mezcla se enfrió a 0-10 °C, NaH (200 mg, 5,00 mmol, 60 % de pureza, 2,40 eq) se agregó a la mezcla bajo N2, se agitó durante 1 hbajo N 2 a 0-10 °C, después CH 3I (1,50 g, 10,6 mmol, 660 uL, 5,08 eq) se agregó a la mezcla a 0-10 °C bajo N 2, la mezcla se agitó durante 48 h bajo N2 al mismo tiempo que se calentaba a 25 °C. La TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 0/1) mostró que el compuesto 12b (Rf = 0,30) se consumió y se formó un nuevo punto (Rf = 0,40). La LCMS mostró que se detectó la MS del compuesto lCm S (Rt = 1,183 min, MS 23 = 531,4) 12c. La mezcla se vertió sobre agua (30 mL), se extrajo con acetato de etilo (20 mL x 3), la fase orgánica se lavó con salmuera (50 mL x 2), después se separó y secó con Na2SO4, se filtró, el filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener un aceite color café. Se purificó mediante cromatografía de columna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etilo, 1/0-0/1, Rf = 0,40) para obtener el compuesto 12c (400 mg, 786 umol) como un aceite incoloro, que se confirmó mediante 1H-NMR.
1H NMR: 400 MHz, CDCh;
6 3,48-3,68 (m, 20H), 3,37 (d, J = 2,8 Hz, 4H), 2,89 (s, 6 H), 1,43 (s, 18H)
LCMS: (Método 1), Rt = 1,183 min, MS+ 1 = 531,4;
Procedim iento general para ia preparación dei com puesto am ina 12
Figure imgf000046_0001
amina 11
A HCl/dioxano (4 M, 20,0 mL) se agregó una solución del compuesto 12c (400 mg, 786 umol) en dioxano (10 mL) a 25­ 30 °C bajo N2, la mezcla se agitó a 25-30 °C bajo N 2 durante 3 h. Se tomaron 300 mL de mezcla de reacción y se concentraron bajo presión reducida para obtener un aceite color café, se envió para monitoreo por 1H-NMR. La 1H-NMR mostró que se formó el compuesto amina 12. La mezcla se concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto amina 12 como aceite color café, que se usó directamente para la etapa siguiente.
1H NMR: 400 MHz, CDCb;
8 3,84-3,96 (m, 4H), 3,69 (s, 10H), 3,67 (s, 6 H), 3,20 (s, 4H), 2,78 (t, J = 5,6 Hz, 5H), 2,56 (s, 5H).
Procedim iento generai para ia preparación dei com puesto in term edio 12
Figure imgf000046_0002
Una solución del compuesto 11a (50 mg, 181 umol), del compuesto amina 12 (200 mg, 524 umol, 2HCl) y DIEA (230 mg, 1,78 mmol, 310 uL) en DMSO (3 mL) se agitó a 90 °C durante 1 hbajo N 2. La LCMS mostró que se detectó la MS del compuesto intermedio 12 (Rt = 0,770 min, MS 1 = 565,3). La mezcla se enfrío a 25-30 °C, el valor del pH de la mezcla se ajustó a 5-6 con AcOH, después se purificó mediante prep-HPLC (columna: Phenomenex Synergi C18150*25* 10mm; fase móvil: [agua (0,225 % FA) ACN]; B%: 3%-33%, 10min). La reacción se concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto intermedio 12 (50 mg, 81,9 umol, 45,2 % de rendimiento, FA) como aceite color amarillo, que se usó directamente para la etapa siguiente.
LCMS: (Método 1), Rt = 0,770 min, MS+ 1 = 565,3;
Procedimiento general para la preparación del compuesto base “A45”
Figure imgf000047_0001
A una solución del compuesto Int 8 (30 mg, 70,0 umol) en DMF (1,00 mL) se agregó de forma sucesiva DIEA (37 mg, 287 umol, 50 uL) y HATU (40 mg, 105 umol) a 0-10 °C bajo N2, la mezcla se agitó a 0-10 °C durante 10 min, después se agregó una solución del compuesto intermedio 12 (45 mg, 73,7 umol, FA) en DMF (1,00 mL) a la mezcla a 0-10 °C, se agitó durante 1 hbajo N2, a 0-10 °C. La LCMS mostró que se detectó la m S del compuesto A45 (Rt = 0,878 min, MS 1 = 976,7). La mezcla se vertió sobre agua helada (10 mL), se extrajo con acetato de etilo (20 mL x 3), la fase orgánica se lavó con salmuera (20 mL x 3), se secó con Na2SO4, se filtró, el filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener un aceite color café. Se purificó mediante Prep-HPLC (columna: Phenomenex Synergi C18 150*25* 10mm; fase móvil:
[agua (0,225 %FA) - Ac N]; B%: 30% 60%,10 min), la fracción se concentró bajo presión reducida para obtener A45 (30,51 mg, 31,2 umol, 42,4 % de rendimiento, 99,9 % de pureza) como sólido color amarillo, que se confirmó mediante 1H-NMR, 19F-NMR, LCMS (Rt = 0,901 min, MS 1 = 976,5) y HPLC (Rt = 2,761 min).
1H NMR: 400 MHz, DMSO-de;
6 11,6 (s, 1H), 11,1 (s, 1 H), 8,70 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,52-7,61 (m, 2H), 7,42 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,19-7,30 (m, 2H), 6,95-7,11 (m, 3H), 6,89 (s, 1H), 6,72 (s, 1H), 5,08 (dd, J = 13,2, 5,2 Hz, 1H), 4,41 (dd, J = 15,6, 6 , 8 Hz, 1H), 4,21­ 4,29 (m, 1 H), 3,89 (t, J = 6 , 8 Hz, 3H), 3,64 (dd, J = 7,6, 4,0 Hz, 10H), 3,53 (d, J = 2,8 Hz, 3H), 3,47 (s, 2H), 3,41-3,43 (m, 4H), 3,31 (s, 4H), 3,03 (s, 3H), 2,81-2,95 (m, 3H), 2,58- 2,65 (m, 4H), 2,10-2,18 (m, 1H), 1,96-2,06 (m, 1H).
19F NMR: 400 MHz, DMSO-cfe;
6 -110,29
LCMS: (Método 1), Rt = 0,897 min, MS+ 1 = 976,7;
HPLC: (Método 2), Rt = 2,761 min.
5-[(3S)-3-{[(3,5-difluorofenil)metil]carbamoil}-3-hidroxi-2-oxopirrolidin-1-il]-N-{18-[2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3-dioxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-4-il]-3,6,9,12,15-pentaoxaoctadec-17-in-1-il}-1H-indol-2-carboxamida (“A46”)
Figure imgf000047_0002
Método LC-MS o HPLC:
Método 1:
Tipo de instrumento MS: SHIMADZU LCMS-2020; columna: Kinetex EVO C1830*2,1 mm,5um; fase móvil A: 0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % de TFA en acetonitrilo (v/v); gradiente: 0,0 min 5 % B ^ 0,80 min 95 % B ^ 1,20 min 95 % B ^ 1,21 min 5 % B ^ 1,55 min 5 % B; tasa de flujo: 1,5 (mL/min); temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: 220 nm y 254 nm.
Método 2:
Tipo de instrumento HPLC: SHIMADZU LC-20AB; columna: Kinetex C18 LC Columna 4,6X50mm,5um; fase móvil A: 0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % de TFA en acetonitrilo (v/v); gradiente: 0,0 min 10 % B ^ 4,20 min 80 % B ^ 5,30 min 80 % B ^ 5,31 min 10 % B ^ 6,00 min 10 % B; temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: PDA (220 nm y 215 nm y 254 nm).
Figure imgf000048_0001
A una solución del compuesto 14b (10,0 g, 54,0 mmol, 7,30 mL) y KOH (2,39 g, 36,2 mmol, 85,0 % de pureza) en H2O (500 mL) se agregó por goteo a una solución de KmnO4 (40,0 g, 252 mmol) en H2O (100 mL) a 25-30 °C durante 0,5 h, la mezcla se agitó a 100 °C durante 9,5 h. Se tomaron 0,5 mL de la mezcla y se agregaron a 3 mL de agua, se agregó EtOH (1 mL) en la solución, el valor del pH de la mezcla se ajustó a 1 con 1 M de solución acuosa de HCI, se extrajeron con acetato de etilo (1 mL), la fase orgánica se concentró bajo presión reducida para obtener un sólido blanco. Se envió para monitoreo mediante HNMR y LCMS, La 1H-NMR mostró que el compuesto mostrado 14b se consumió y que el compuesto 14c se formó. El LCMS mostró que no se detectó MS del compuesto 14c. La mezcla se enfrió a 30 °C, el EtOH (200 mL) se agregó por goteo en la mezcla a 30 - 40 °C bajo N 2, se agitó durante más de 1 h, después la mezcla se extrajo con acetato de etilo (400 mL x 2), la fase orgánica se lavó con salmuera (400 mL x 3), se secó con Na2SO4, se filtró, el filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto 14c como un sólido color blanco, que se confirmó mediante 1H-NMR.
1H NMR: 400 MHz, DMSO-cfe;
6 8,00 (dd, J = 7,6, 1,2 Hz, 1H), 7,76 (dd, J = 8,0, 1,2 Hz, 1H), 7,32 (t, J = 8,0 Hz, 1H)
Procedim iento general para la preparación dei com puesto 14d
Figure imgf000048_0002
Una solución del compuesto 14c (9,50 g, 38,8 mmol) en AC2O (80 mL) se agitó a 140 °C durante 2 h bajo N2. Se tomaron 0,2 mL de la mezcla y se envió para monitoreo mediante 1H-NMR. La 1H-NMR mostró que el compuesto 14c se consumió y se formó el compuesto 14d. La mezcla se concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto 14d ( 8 g, en estado crudo) como sólido color café, que se confirmó mediante la 1H-NMR.
1H NMR: 400 MHz, DMSO-cfe;
6 8,18 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,06 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,78-7,90 (m, 1H)
Procedimiento general para la preparación del compuesto 14a
Figure imgf000049_0001
A una solución del compuesto 14d (650 mg, 2,86 mmol) y al compuesto 14d_1 (630 mg, 3,83 mmol, HCl) en AcOH (15,0 mL) se agregó AcONa (380 mg, 4,63 mmol) a 25-30 °C, la mezcla se agitó a 120 °C durante 2 h bajo N 2. Se tomaron 0,3 mL de la mezcla y se concentró bajo presión reducida para obtener un sólido color gris, se envió para monitoreo mediante NMR. La 1H-NMR mostró que se había formado el compuesto 14a. La mezcla se enfrió a 25-30 °C, después se filtró, se recolectó la torta del filtro como un sólido color gris. El sólido se vertió sobre 0,05 M de solución acuosa de HCI (50 mL) y se agitó durante 0,5 h, después se filtró. La torta del filtro se lavó con agua (20 mL), se recolectó y se secó bajo presión reducida (-0,09 Mpa) a 60 °C para obtener el compuesto 14a (800 mg, 2,37 mmol, 82,9 % de rendimiento) como sólido color gris, que se confirmó mediante 1H-NMR
1H NMR: 400 MHz, DMSO-d6;
8 11,15 (s, 1H), 8,06 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,72-7,82 (m, 1H), 5,17 (dd, J = 12,8, 5,4 Hz, 1H), 2,80­ 2,97 (m, 1H), 2,52 -2,70 (m, 2H), 1,962,15 (m, 1H).
Figure imgf000049_0002
14a 1
A una solución del compuesto 2a_1 (1,50 g, 26,7 mmol, 1,58 mL) en DMF (100 mL) se agregó NaH (2,10 g, 52,5 mmol, 60 % de pureza) en lotes a 0-10 °C bajo N2 , se agitó durante 0,5 ha 0-10 °C bajo N 2 , el compuesto 2a (10,0 g, 23,9 mmol) se agregó por goteo a la mezcla a 0-10 °C bajo N 2 , la mezcla se agitó durante 1,5 h al mismo tiempo que se calentaba a 15-20 °C bajo N 2. La LCMS mostró que no se detectó MS del compuesto 14a_1 . Se tomaron 0,5 mL de la mezcla y se vertió sobre agua helada (2 mL), se extrajeron con acetato de etilo (2 mL), la fase orgánica se separó y se concentró bajo presión reducida para obtener un aceite incoloro. La 1H-NMR mostró que el compuesto 2a se había consumido y que se había formado el compuesto 14a_1. La mezcla se vertió sobre agua helada (200 mL), se extrajo con acetato de etilo (100 mL x 3), la fase orgánica se lavó con salmuera (100 mL x 3), se secó con Na2SO4, se filtró, el filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto 14a_1 (7,60 g, producto en bruto) como aceite color café, se usó directamente para la siguiente etapa.
1H NMR: 400 MHz, CDCb;
8 4,16 (d, J = 2,4 Hz, 2H), 3,59-3,67 (m, 18H),3,35 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 2,41 (t, J = 2,4 Hz, 1H)
Procedimiento general para la preparación del compuesto 14a_2
Figure imgf000050_0001
A una solución del compuesto 14a_1 (1,00 g, 3,32 mmol) en una mezcla del disolvente de THF (16 mL) y H2O (2 mL) se agregó PPh3 (1,74 g, 6,64 mmol) a 25 °C, la mezcla se agitó a 60 °C durante 2 h bajo N2. La LCMS mostró que se detectó la MS del compuesto (Rt = 1,146 min, MS 1 = 263,2) 14a_2. La mezcla se vertió sobre agua (20 mL), el valor del pH de la mezcla se ajustó a 2-3 con 1 M de solución acuosa de HCI, se extrajo con acetato de etilo (20 mL x 3), la solución acuosa se separó y el valor del pH se ajustó a 10-11 con solución acuosa de Na2CO3. Esta se concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto 14a_2 (1 g, en estado crudo) como aceite color café, que se confirmó mediante la 1H-NMR
1H NMR: 400 MHz, CDCla;
S 4,89 (s, 2H), 4,13-4,26 (m, 2H), 3,61-3,69 (m, 16H), 3,49 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 2,77-2,92 (m, 2H), 2,42 (t, J = 2,4 Hz, 1H)
LCMS: (Método 1), Rt = 1,146 min, MS+ 1 = 263,2;
Procedim iento general para la preparación del com puesto 14a_3
Figure imgf000050_0002
14a 3
A una solución de 14a_2 (1 g, 3,63 mmol) en DCM (5,00 mL) se agregó de forma sucesiva TEA (1,10 g, 10,9 mmol, 1,52 mL) y una solución de Boc2O (950 mg, 4,35 mmol, 1 mL) en DCM (5 mL) a 25-30 °C, la mezcla se agitó a 25-30 °C durante 2 h bajo N 2. Se tomaron 0,5 mL de la mezcla y se vertió sobre agua (2 mL), se extrajeron con acetato de etilo (1 mL), la fase orgánica se separó y se lavó con salmuera (2 mL x 3), después se separó y se concentró bajo presión reducida para obtener un aceite color café. La 1H-NMR mostró que el compuesto 14a_3 se había formado. La mezcla se vertió sobre agua (20 mL), se extrajo con acetato de etilo (40 mL), la fase orgánica se separó y se lavó con salmuera (30 mL x 3), se secó con Na2SO4, se filtró, el filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener un aceite color café. La TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 0/1, Rf = 0,70). El aceite se purificó mediante cromatografía de columna (SiO2 , éter de petróleo/acetato de etilo, 1/0-0/1, Rf = 0,70) para obtener el compuesto 14a_3 (750 mg, 2,00 mmol) como aceite incoloro, que se confirmó mediante 1H-NMR.
1H NMR: 400 MHz, CDCl3;
S 5,09 (s, 1H), 4,18 (d, J = 2,4 Hz, 2H), 3,59-3,68 (m, 16H), 3,51 (t, J = 5,07 Hz, 2H), 3,21-3,35 (m, 2H), 2,41 (t, J = 2,4 Hz, 1H), 1,42 (s, 9H).
Procedimiento general para la preparación de! compuesto 14a_4
Figure imgf000051_0001
A una solución del compuesto 14a (400 mg, 1,19 mmol) y el compuesto 14a_3 (500 mg, 1,33 mmol) en THF (10,0 mL) se agregó de forma sucesiva DIEA (1,48 g, 11,5 mmol, 2 mL), Cul (50 mg, 262 umol, 0,22 eq) y Pd(dppf)Cl2 (100 mg, 136 umol) a 25-30 °C, la mezcla se agitó a 6 6 °C bajo N 2 durante 2 h. LCMS (Rt = 0,878 min, MS -100 1 = 532,3) mostró que se detectó MS del compuesto 14a_4. La mezcla se enfrió a 25-30 °C, después se vertió sobre agua (30 mL), se extrajo con acetato de etilo (30 mL x 3), la fase orgánica se lavó con salmuera (30 mL x 2), después se separó y secó con Na2SO4, se filtró. El filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener un aceite color café. El aceite se purificó mediante Prep-HPLC (cromatografía de fase inversa ACN (0% 50%)/H2O (ácido fórmico 0,1%)), la fracción se concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto 14a_4 (120 mg, 143 umol, 12,1 % de rendimiento) como aceite color café, que se confirmó mediante LCMS (Rt = 0,878 min, m S 100 1 = 532,3).
LCMS: (Método 1), Rt = 0,878 min, MS-100 1 = 532,3;
Procedim iento general para la preparación del com puesto 14a_5
Figure imgf000051_0002
A una solución del compuesto 14a_4 (120 mg, 143 umol) en DCM (10 mL) se agregó TFA (1,54 g, 13,5 mmol, 1 uL) a 25 °C, la mezcla se agitó a 25 °C bajo N 2 durante 8 h. La lCm S (Rt = 0,737 min, MS1 = 532,3) mostró que se detectó la MS del compuesto 14a_5. La mezcla se concentró bajo presión reducida para obtener un aceite color café. El aceite se purificó mediante PrepHPLC (columna: Phenomenex luna C18 150*25mm* 10um; fase móvil: [agua (0,1 % TFA) ACN]; B%: 12 % 42 %, 9 min), la fracción se concentró bajo presión reducida para dar el compuesto 14a_5 (50 mg, 77,5 umol, 53,9 % de rendimiento, TFA) como aceite color café, que se confirmó por LCMS (Rt = 0,761 min, MS+1 = 532,2).
LCMS: Rt = 0,737 min, MS+1 = 532,3;
Procedimiento general para la preparación del compuesto base “A46”
Figure imgf000052_0001
A una solución del compuesto Int 8 (30 mg, 69,9 umol) en DMF (2 mL) se agregó de forma sucesiva DIEA (58 mg, 449 umol, 80 uL) y HATU (46 mg, 121 umol) a 0-10 °C bajo N2, se agitó a 0-10 °C durante 20 min, una solución del compuesto después se agregó una solución del compuesto 14a_5 (50 mg, 85 umol, FA) en DMF (1,00 mL) a la mezcla a 0-10 °C bajo N 2, se agitó aún más por 1 h a 0-10 °C bajo N2. La LCMS mostró que se detectó el valor de la MS del compuesto base (Rt = 0,872 min, MS+1 = 943,4). La mezcla se vertió sobre agua helada (20 mL), se extrajo con acetato de etilo (15 mL x 2), la fase orgánica se lavó con salmuera (30 mL x 3), después se separó y secó con Na2SO4, se filtró. El filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener un aceite color café. La aceite se purificó mediante Prep-HPLC (columna: Phenomenex Synergi C18 150*25*10mm; fase móvil: [agua (0,225 %FA) - ACN]; B%: 28 %,58 %,10 min), la fracción se concentró bajo presión reducida para obtener A46 (13,19 mg, 14,0 mmol, 16,2 % de rendimiento, 100 % de pureza) como sólido color amarillo claro, que se confirmó mediante 1NMR, 19F-NMR, LCMS (Rt = 0,885 min, MS+1 = 943,4) y HPLC (Rt = 2,671 min).
1H NMR: 400 MHz, DMSO-de;
6 11,6 (s, 1 H), 11,1 (s, 1H), 8,69 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 8,55 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 7,80-7,97 (m, 3H), 7,77 (s, 1H), 7,48-7,59 (m, 1H), 7,42 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,92-7,17 (m, 4H), 6,71 (s, 1H), 5,00-5,25 (m, 1H), 4,344,56 (m, 3H), 4,20-4,33 (m, 1H), 3,89 (t, J = 6 , 8 Hz, 2H), 3,67-3,76 (m, 2H), 3,43-3,60 (m, 18H), 2,85- 2,97 (m, 1H), 2,56-2,68 (m, 3H), 2,11-2,20 (m, 1H), 2,04 (s, 1 H).
19F NMR: 400 MHz, DMSO-de;
6 -110,29
LCMS: (Método 1), Rt = 0,872 min, MS 1 = 943,4
HPLC: (Método 2), Rt = 2,671 min.
5-[(3S)-3-{[(3,5-difluorofenil)metil]carbamoil}-3-hidroxi-2-oxopirrolidin-1-il]-N-{2-[2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3-dioxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-5-il]-5,8,11,14-tetraoxa-2-azahexadecan-16-il}-N-metil-1H-indol-2-carboxamida (“A47”)
Figure imgf000052_0002
Procedimiento general para la preparación del compuesto 4f;
Figure imgf000053_0001
A una solución del compuesto 4d (500 mg, 1,15 mmol) en DMF (10 mL) se agregó NaH (230 mg, 5,75 mmol, 60 % de pureza) a 0-10 °C bajo N2, la mezcla se agitó durante 1 ha 0-10 °C bajo N 2, después se agregó mediante goteo CH3l (600 mg, 4,23 mmol, 263 uL) a la mezcla a 0-10 °C, la mezcla se mantuvo agitándose durante 11 horas bajo N2 al mismo tiempo que se calentaba a 25 °C. La mezcla se vertió sobre solución acuosa saturada de NH4Cl (30 mL), se extrajo con acetato de etilo (15 mL x 2), la fase orgánica combinada se lavó con salmuera (30 mL x3), la fase orgánica se separó y se secó con Na2SO4, después se filtró. El filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener un aceite color café. El aceite se purificó mediante cromatografía de columna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etilo = 1/0 1/1, Rf = 0,50). El compuesto 4f (500 mg, 1,08 mmol, 94 % de rendimiento) se obtuvo como aceite color amarillo.
1H NMR: 400 MHz, CDCla;
3,67-3,54 (m, 16H), 3,39 (d, J = 2,2 Hz, 4H), 2,91 (s, 6 H), 1,46 (s, 18H)
Procedim iento genera l para la preparación de la am ina 4
Figure imgf000053_0002
amina 4
A una solución del compuesto 4f (500 mg, 1,08 mmol) en EtOAc (5 mL) se agregó HCl/EtOAc (4 M, 5 mL) a 0-10 °C bajo N 2, la mezcla se agitó durante 1 ha 20 °C bajo N 2, la TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 1/2) el compuesto 4f (Rf = 0,4) se consumió y se formó un nuevo punto (Rf = 0). La mezcla se concentró y se diluyó con MeOH (20 ml), la solución se alcalinizó con resina de intercambio de bases, se filtró y el filtrado se concentró. El compuesto de amina 4 (280 mg, producto en bruto) se obtuvo como aceite color amarillo y se confirmó con 1H-NMR.
1H NMR: 400 MHz, MeOH;
8 3,74 - 3,80 (m, 4 H), 3,68 (d, 10 H), 3,16 - 3,26 (m, 4 H), 2,74 (s, 6 H)
Procedimiento general para la preparación del intermedio 4
Figure imgf000054_0001
ínterin ¡diate 4
Intermedio 4
A una solución del compuesto 3a (250 mg, 905 umol) y amina 4 (250 mg, 946 umol) en DMSO (3 mL) se agregó DIEA (371 mg, 2,87 mmol, 0,5 mL), y la mezcla se agitó a 90 °C durante 1 hora. La reacción se diluyó con AcOH (1 mL). La mezcla se purificó con pre-HPLC (columna: Phenomenex Synergi C18 150*25*10 um; fase móvil: [agua (0,225 % FA)-ACN]; B%: 5%-35%, 10min). El intermedio 4 (130 mg, 229,44 umol, 25 % de rendimiento, FA) se obtuvo como goma de color amarillo.
LCMS: RT = 0,725 min, m/z (M 1) = 521,2
1H NMR: 400 MHz, DMSO;
8 8,35 (s, 1H), 7,63 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,11 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,02-6,99 (m, 1H), 5,08-5,03 (m, 1H), 3,71-3,68 (m, 2H), 3,63-3,60 (m, 2H), 3,55 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 3,50-3,48 (m, 12H), 3,09 (s, 3H), 2,93-2,84 (m, 3H), 2,60-2,54 (m, 2H), 2,42 (s, 3H), 2,01-1,99 (m, 1H).
Procedim iento general para la preparación del com puesto “A 47"
Figure imgf000054_0002
A una solución de Int 8 (40 mg, 93,2 mmol) en DMF (1 mL) se agregó de forma sucesiva DIEA (35 mg, 271 mmol) y HATU (38 mg, 99,9 mmol) a 0 °C bajo N2, la mezcla se agitó a 0 °C durante 10 min, después una solución de intermedio 4 (50 mg, 88,3 mmol) en DMF (1 mL) se agregó sobre la mezcla a 0 °C, se agitó durante 1 hbajo N 2 a 0 °C. La mezcla de reacción se vertió sobre agua helada (30 mL) y se extrajo con EtOAc (20 mL*3). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (20 mL), se secó sobre Na2SO4, se filtró y concentró. La mezcla se purificó mediante Prep-HPLC (columna: 3_Phenomenex Luna C1875*30 mm*3 um; fase móvil: [agua (0,225 % FA)-ACN]; B%: 32%-62%, 7min). El “A47” (30,46 mg, 30,9 umol, 35,1 % de rendimiento, 99,3 % de pureza, sal FA) se obtuvo como sólido de color amarillo.
1H NMR: 400 MHz, DMSO-cfe;
8 11,56 (s, 1H), 11,18-10,85 (m, 1H), 8,69 (t, J = 6,3 Hz, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,66-7,51 (m, 2H), 7,42 (d, J = 8 , 8 Hz, 1H), 7,12-6,95 (m, 5H), 6,89 (s, 1H), 6,72 (s, 1H), 5,07-5,02 (m, 1H), 4,44-4,39 (m, 1H), 4,29-4,23 (m, 1H), 3,89 (s, 2H), 3,80­ 3,46 (m, 23H), 3,05 (s, 3H), 2,94-2,85 (m, 1H), 2,67 (s, 3H), 2,22-2,12 (m, 1H), 2,03-1,97 (m, 1H).
LCMS: RT = 0,908 min, m/z (M 1) = 932,4;
HPLC: RT = 1,948 min.
(3S)-N-[(3,5-difluorofenil)metil]-1-{2-[4-(2-{2-[2-(2-{[2-(2,6-dioxopiperidin-3- M)-1,3-dioxo-2,3-dihidro-1Hisomdol-5-M]ammo}etoxi)etoxi]etoxi}etN)piperazma-1-carbonM]-1H-mdol-5-N}-3-hidroxi-2-oxopirroNdma-3-carboxamida (“A48”)
Figure imgf000055_0001
Una solución del compuesto 5a (5 g, 25,9 mmol) y TEA (2,88 g, 28,5 mmol) en DCM (150 mL) se trató con CbzCl (4,80 g, 28,1 mmol) en una porción y la mezcla se agitó a 20 °C durante 10 horas. La mezcla se concentró y se purificó mediante cromatografía de columna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etilo = 2/1 a 0/1), (éter de petróleo/acetato de etilo = 0/1, Rf = 0,4). El compuesto 5a (2,50 g, 7,21 mmol, 94,4 % de pureza) se obtuvo como aceite incoloro.
LCMS: RT = 0,775 min, m/z (M 23) = 550,3
Procedimiento general para la preparación del compuesto 5c
Figure imgf000056_0001
A una solución del compuesto 5b (2,50 g, 7,64 mmol) y TEA (2,18 g, 21,5 mmol, HCl) en DCM (40 mL) se agregó cloruro de 4-metilbenzenosulfonilo (2,20 g, 11,5 mmol) a 25 °C, la mezcla se agitó a 40 °C durante 10 h bajo N2. La mezcla se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etilo = 5/1 a 1/2), (éter de petróleo/acetato de etilo = 1/2, Rf = 0,5). El compuesto 5c (2,00 g, 4,15 mmol, 54 % de rendimiento) se obtuvo como aceite color amarillo).
1H NMR: 400 MHz, CDCla;
8 7,79 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,36-7,31 (m, 7H), 5,32 (s, 1H), 5,09 (s, 2H), 4,15-4,11 (m, 2H), 3,66-3,63 (m, 2H), 3,60-3,54 (m, 10H), 3,40-3,36 (m, 2H), 2,44 (s, 3H)
Procedim iento general para la preparación del com puesto 5d
Figure imgf000056_0002
A una solución del compuesto 5c (1,50 g, 3,11 mmol) y de terc-butil piperazina-1-carboxilato (600 mg, 3,22 mmol) en MeCN (10 mL) se agregó Kl (1,03 g, 6,23 mmol) y K2CO3 (1,29 g, 9,34 mmol), la mezcla se agitó a 70 °C bajo N 2 durante 12 horas. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró. El residuo se purificó mediante columna cromatográfica de fase inversa (condición de 0,1% de NH3.H2O). El compuesto 5d (500 mg, 32 % de rendimiento) se obtuvo como aceite color amarillo
LCMS: RT = 0,989 min, m/z (M 1) = 496,5
1H NMR: 400 MHz, CDCl3;
7,37-7,27 (m, 5H), 5,58 (s, 1H), 5,10 (s, 2H), 3,65-3,55 (m, 12H), 3,44-3,38 (m, 6 H), 2,56 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 2,42 (d, J = 4,4 Hz, 4H), 1,46 (s, 9H)
Procedimiento general para la preparación de la amina 5-
Figure imgf000057_0001
amina 5
A una solución de compuesto 5d (500 mg, 1,01 mmol) en i-PrOH (20 mL) se agregó Pd/C (100 mg, 10 % de pureza) bajo N2, la suspensión se mantuvo al vacío y se purgó con H2 en tres ocasiones, después la mezcla se agitó bajo H2 (103,42 kPa [15 psi]) a 25 °C durante 10 horas. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró. El compuesto amina 5 (360 mg, en bruto) se obtuvo como aceite color amarillo.
1H NMR: 400 MHz, CDCla;
8 3,67-3,1 (m, 10H), 3,51 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 3,44-3,42 (m, 4H), 2,86 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 2,59 (t, J= 5,8 Hz, 2H), 2,45-2,43 (m, 4H), 1,45 (s, 9H)
Procedim iento general para la preparación de 1;
Figure imgf000057_0002
A una solución del compuesto 3a (150 mg, 543 mmol) y DIEA (281 mg, 2,17 mmol, 378 |jL) en DMSO (3 mL) se agregó amina 5 (350 mg, 968 mmol) a 100 °C y la mezcla se agitó a 100 °C durante 8 horas. La LCMS mostró que se detectó la masa deseada (RT = 0,758 min, m/z= 618,3). La mezcla de reacción mezcla se purificó con pre-HPLC (columna: Phenomenex luna C 18150 * 40 mm * 15 um; fase móvil: [agua (0,225 % FA)-A CN]; B%: 9%-39%, 10min). El compuesto 1 (85 mg, 121 jmol, 22 % rendimiento, 94,35 % de pureza, FA) se obtuvo como goma color amarilla y se confirmó con LCMS.
LCMS: RT = 0,762 min, m/z (M 1) = 618,3
Procedimiento general para la preparación de 2
Figure imgf000058_0001
A una solución del compuesto 1 (80 mg, 130 |jmol) en dioxano (2 mL) se agregó HCl/dioxano (4 M, 2 mL) a 0 °C, después la mezcla se agitó a 20 °C durante 10 min. La mezcla de reacción se concentró. El compuesto 2 (76 mg, en bruto, 2HCl) se obtuvo como goma color amarillo.
LCMS: RT = 0,650 min, m/z (M 1) = 518,3
Procedim iento general para la preparación del com puesto “A 48"
Figure imgf000058_0002
A una solución de Int 8 (52 mg, 120 mmol) en DMF (1 mL) se agregó de forma sucesiva DIEA (23 mg, 181 mmol, 31,6 |jL) y HATU (59 mg, 155 |jmol) a 0 °C bajo N2, la mezcla se agitó a 0 °C durante 10 min, después una solución del compuesto 2 (76 mg, 129 mmol, 2HCl) en DMF (1 mL) se agregó sobre la mezcla a 0 °C, se agitó durante 1 hbajo N 2 a 0 °C. La mezcla de reacción se vertió sobre agua helada (30 mL) y se extrajo con EtOAc (20 mL*3). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (20 mL), se secó sobre Na2SO4, se filtró y concentró. La mezcla se purificó mediante Prep-HPLC (columna: Phenomenex Luna C 18 150 * 25 mm * 10 um; fase móvil: [agua (0,225 % FA)-ACN]; B%: 15%-45%, 10min). El “A48” (35,04 mg, 35,3 jmol, 27 % de rendimiento, 98 % de pureza, FA) se obtuvo como sólido de color amarillo.
1H NMR: 400 MHz, D M S O d
8 11,61 (s, 1H), 11,05 (s, 1H), 8,69 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,56-7,54 (m, 2H), 7,42 (d, J = 8 , 8 Hz, 1H), 7,14 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 7,08-6,99 (m, 4H), 6,89 (d, J = 8 , 6 Hz, 1H), 6,78 (s, 1H), 5,05-5,00 (m, 1H), 4,44-4,39 (m, 1H), 4,29-4,24 (m, 1H), 3,90-3,87 (m, 2H), 3,60-3,50 (m, 19H), 3,37-3,24 (m, 2H), 2,91-2,82 (m, 2H), 2,63-2,54 (m, 6 H), 2,18-2,13 (m, 1H), 1,99-1,97 (m, 1H)
LCMS: RT = 0,818 min, m/z (M 1) = 932,4;
HPLC: RT = 1,487 min.
(3S)-N-[(3,5-difluorofenil)metil]-1-[2-(9-{2-[2-(2-{[2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3-dioxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-5il]amino}etoxi)etoxi]etil}-3,9-diazaespiro[5,5]undecano-3-carbonil)-1H-indol-5-il]-3-hidroxi-2-oxopirrolidina-3-carboxamida (“A49”)
Figure imgf000059_0001
Procedimiento general para la preparación del compuesto 6b
Figure imgf000059_0002
A una solución del compuesto 6a (1,00 g, 3,53 mmol) y TEA (1 g, 9,88 mmol, 1,38 mL) en DCM (20 mL) se agregó cloruro de 4-metilbenzenosulfonilo (1,01 g, 5,29 mmol) a 20 °C, la mezcla se agitó a 40 °C durante 10 h bajo N2. La mezcla se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna (SiO2, éter de petróleo:acetato de etilo = 5/1 a 1/1), (éter de petróleo/acetato de etilo = 1:1, Rf = 0,5). El compuesto 6b (1,40 g, 3,20 mmol, 91 % de rendimiento) se obtuvo como aceite color amarillo y se confirmó con la siguiente etapa.
Procedimiento general para la preparación de la amina 4
Figure imgf000060_0001
A una solución del compuesto 6b (800 mg, 1,83 mmol) y el compuesto 6c (500 mg, 1,97 mmol) en MeCN (10 mL) se agregó Kl (700 mg, 4,22 mmol) y K2CO3 (800 mg, 5,79 mmol), la mezcla se agitó a 70 °C bajo N 2 durante 12 horas. La mezcla se enfrió a 25 °C, el n se vertió sobre agua (50 mL), se extrajo con acetato de etilo (30 mL x 2), la fase orgánica combinada se lavó con salmuera (50 mL x 3), se separó y secó con Na2SO4, se filtró. El filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener un aceite color café. El aceite se purificó mediante cromatografía de fase inversa (c HsCN:H20 (contenido de 0,1 % de NH3.H2O) = 0:1 45:1), la fracción se recolectó y concentró bajo presión reducida para obtener un aceite incoloro. El compuesto 6d (500 mg, 962 |jmol, 49 % de rendimiento) se obtuvo como aceite color amarillo.
1H NMR: 400 MHz, CDCla;
8 7,42-7,28 (m, 5H), 5,10 (s, 2H), 3,73-3,52 (m, 8 H), 3,43-3,27 (m, 6 H), 2,61 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 2,48 (s, 4H), 1,53 (t, J = 5,3 Hz, 4H), 1,45 (s, 9H), 1,39 (s, 4H)
Procedim iento general para la preparación de la am ina 6
Figure imgf000060_0002
A una solución de compuesto 6d (500 mg, 962 jmol) en i-PrOH (20 mL) se agregó Pd/C (100 mg, 10 % de pureza) bajo N2, la suspensión se mantuvo al vacío y se purgó con H2 en tres ocasiones, después la mezcla se agitó bajo H2 (103,42 kPa [15 psi]) a 25 °C durante 10 h. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró. El compuesto amina 6 (350 mg, 908 jmol, 94 % de rendimiento) se obtuvo como aceite color amarillo y se confirmó con 1H-NMR.
1H NMR: 400 MHz, CDCl3;
8 3,63-3,58 (m, 6 H), 3,55-3,49 (m, 2H), 3,36-3,34 (m, 4H), 2,86 (t, J= 5,2 Hz, 2H), 2,59 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,45 (s, 4H), 1,54-1,51 (m, 1H), 1,52 (t, J = 5,6 Hz, 3H), 1,44 (s, 8 H), 1,42-1,39 (m, 4H)
Procedimiento general para la preparación del compuesto 1
Figure imgf000061_0001
A una solución del compuesto 3a (100 mg, 362 mmol) y DIEA (374 mg, 2,90 mmol, 504 mL) en DMSO (1 mL) se agregó amina 6 (250 mg, 648 |jmol) a 100 °C y la mezcla se agitó a 100 °C durante 12 horas. La mezcla de reacción se purificó con pre-HPLC (columna: Phenomenex luna C18 150 * 25 mm * 10 um; fase móvil: [agua (0,225 % FA)-ACN]; B%: 15%-45%, 10min). El compuesto 1 (90 mg, 127 umol, 35 % de rendimiento, 91 % de pureza) se obtuvo como sólido de color amarillo.
LCMS: RT = 0,636 min, m/z (M 1) = 642,2
Procedim iento general para la preparación del in term edio 6
Figure imgf000061_0002
A una solución del compuesto 1 (80 mg, 106 jmol) en dioxano (2 mL) se agregó HCl/dioxano (4 M, 1,70 mL) a 0 °C y la mezcla se agitó a 20 °C durante 1 Horas. La mezcla de reacción se concentró. El intermedio 6 (61 mg, en bruto, HCl) se obtuvo como sólido de color amarillo y se confirmó con la siguiente etapa.
Figure imgf000062_0001
A una solución de Int 8 (45 mg, 105 pmol) en DMF (1 mL) se agregó de forma sucesiva DIEA (13,4 mg, 104 pmol, 18,1 pL) y HATU (39,5 mg, 104 pmol) a 0 °C bajo N2, la mezcla se agitó a 0 °C durante 10 min, después una solución del intermedio 6 (60 mg, 104 pmol, HCl) en DMF (1 mL) se agregó sobre la mezcla a 0 °C, se agitó durante 1 hbajo N 2 a 0 °C. La mezcla de reacción se vertió sobre agua helada (30 mL) y se extrajo con EtOAc (20 mL * 3). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (20 mL), se secó sobre Na2SO4, se filtró y concentró. La mezcla se purificó mediante Prep-HPLC (columna: Phenomenex luna C18 150 * 25 mm * 10 um; fase móvil: [agua (0,225 % FA)-ACN]; B%: 18%-48%, 9min). El “A49” (40,4 mg, 38,4 pmol, 37 % de rendimiento, 95 % de pureza) se obtuvo como sólido de color amarillo.
1H NMR: 400 MHz, DMSO-de;
811,58 (s, 1H), 11,05 (s, 1 H), 8,70 (t, J = 6,4 Hz, 1 H), 8,26 (s, 1 H), 7,77 (s, 1H), 7,57-7,52 (m, 2H), 7,41 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,17 (t, J = 5,4 Hz, 1 H), 7,09-7,00 (m, 4H), 6,90 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,76 (s, 1H), 5,05-5,00 (m, 1H), 4,44-4,39 (m, 1H), 4,29-4,24 (m, 1H), 3,88 (d, J= 7,2 Hz, 2H), 3,68-3,59 (m, 14H), 3,38-3,35 (m, 1H), 2,81-2,79 (m, 1H), 2,62-2,57 (m, 5H), 2,46-2,45 (m, 1H), 2,39 (s, 3H), 2,18-2,15 (m, 1H), 1,99-1,96 (m, 1H), 1,46 (s, 8H)
LCMS: RT = 0,813 min, m/z (M 1) = 953,8;
HPLC: RT = 1,767 min.
(3S)-N-[(3,5-difiuorofeml)metil]-1 -{2-[(13-{[2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3-dioxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-5M]carbamoM}tridecM)carbamoM]-1H-indol-5-M}-3-hidroxi-2-oxopirroMdin-3-carboxamida ("A50")
Figure imgf000062_0002
Método LC-MS o HPLC:
Método 1:
Tipo de instrumento MS: SHIMADZU LCMS-2020, columna: Kinetex EVO C1830*2,1 mm, 5um, fase móvil A: 0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % TFA en acetonitrilo (v/v), gradiente: 0,0 min 0 % B ^ 0,8 min 95 % B ^ -1,2 min 95 % B ^ -1,21 min 5 % B ^ -1,55 min 5 % B, tasa de flujo: 1,5 mL/min, temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: 220 nm y 254 nm.
Método 2:
Tipo de instrumento MS: SHIMADZU LCMS-2020, columna: Kinetex EVO C1830*2,1 mm, 5um, fase móvil A: 0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % de TFA en acetonitrilo (v/v), gradiente: 0,0 min 0 % B ^-3,0 min 95 % B^-3,5 min 95 % B^-3,51 min 5 % B ^-4,0 min 5 % B, tasa de flujo: 0,8 mL/min, temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: 220 nm y 254 nm.
4. Experimento para la corrida a gran escala:
Procedim iento general para la preparación del com puesto 1b
Figure imgf000063_0001
A una solución del compuesto 1a (3 g, 153 umol) en MeOH (100 mL) se agregó Ba(OH)2 (1,08 g, 6,28 mmol) a 20-25 °C, después de agregarse, la mezcla se agitó a 50-55 °C durante 12 h. La TLC (éter de petróleo: acetato de etilo = 5:1) mostró que la traza compuesto 1a (Rf = 0,60) se había consumido completa, se detectó un nuevo punto (Rf = 0,10). La solución de reacción se filtró y la torta del filtro se lavó con MeOH (20 mL) y se agitó en 1N HCI (50 mL) durante 30 min. Después se filtró y la torta del filtro se concentró bajo presión reducida que se usó directamente para la etapa siguiente. El compuesto 1b (2,30 g, 8,44 mmol, 80,6 % de rendimiento) se obtuvo como un sólido color blanco, que fue confirmado por 1HNMR.
1H NMR: 400 MHz, CDCla
8 3,69 (d, J = 4,0 Hz, 3H), 2,25-2,54 (m, 5H), 1,29 (s, 19H).
Procedim iento general para la preparación del com puesto 1c
Figure imgf000063_0002
A una solución del compuesto 1b (2,30 g, 8,44 umol) en THF (23 mL) se agregó BH3-Me2S (10 M, 1,01 mL) a 15-20 °C bajo N 2, después de agregarse, la mezcla se agitó a 20-25 °C durante 12 h bajo N 2. La TLC (éter de petróleo: acetato de etilo = 5:1) mostró que el compuesto 1b (Rf = 0,10) se había consumido, se detectó un nuevo punto (Rf = 0,20). La solución de reacción se vertió sobre NH4Cl (50 mL) saturado, después se extrajo con acetato de etilo (50 mL*5) y se lavó con salmuera (30 mL), se secó sobre Na2SO4, se filtró y concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto 1c (1,60 g, en bruto) como un sólido color blando que se usó directamente para la siguiente etapa.
Procedim iento general para la preparación del com puesto 1d
Figure imgf000063_0003
A una solución del compuesto 1c (1,60 g, 6,19 umol) y TsCl (2,40 g, 12,6 mmol) en DCM (50 mL) se agregó Et3N (1,92 g, 18,9 mmol) y DMAP (400 mg, 3,27 mmol) a 20-25 °C, después de agregarse, la solución de mezcla se agitó a 20-25 °C durante 2 h. La TLC (éter de petróleo: acetato de etilo = 5:1) mostró que el compuesto 1c (Rf = 0,25) se había consumido, se detectó un nuevo punto (Rf = 0,65). La solución de reacción se vertió en agua (200 mL), después se extrajo con acetato de etilo (50 mL*2), y la capa orgánica combinada se lavó con 1 N HCI a pH = 6-7, y se lavó con salmuera (50 mL), secó sobre Na2SO4, se filtró y concentró bajo presión reducida para obtener el producto en bruto. Se purificó mediante cromatografía de columna de sílice (SiO2, éter de petróleo: acetato de etilo = 50:1-25:1- 10:1), se recolectó el punto (Rf = 0,65). El compuesto 1d (2 g, 4,85 mmol, 78,3 % de rendimiento) se obtuvo como un sólido color blanco, que fue confirmado por 1HNMR.
1H NMR: 400 MHz, CDCla
8 7,81 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,37 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 4,04 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,69 (s, 3H), 2,47 (s, 3H), 2,32 (t, J= 7,6 Hz, 2H), 1,61-1,73 (m, 4H), 1,17 1,41 (m, 18H).
Procedim iento general para la preparación del com puesto 1e
Figure imgf000064_0001
A una solución del compuesto 1d (2 g, 4,85 mmol) en MeOH (20 mL) y H2O (2 mL) se agregó NaN3 (470 mg, 7,23 mmol) a 20- 25 °C, después de agregarse, la mezcla se agitó a 60-65 °C durante 12 h bajo N2. La 1H NMR en bruto (0,5 mL de solución se vertieron sobre 1 mL de agua y después se extrajeron con 1 mL de acetato de etilo, posteriormente se concentraron) mostró que se detectó el compuesto 1e. La solución de reacción se usó directamente para la siguiente etapa.
1H NMR: 400 MHz, CDCl3
8 3,69 (s, 3H), 3,27 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,32 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,55-1,72 (m, 4H), 1,19-1,44 (m, 18H).
Procedim iento general para la preparación del com puesto 1 f
Figure imgf000064_0002
A la solución de la última etapa se agregó PPh3 (2,41 g, 9,17 mmol) a 20-25 °C, después de la adición, la solución de mezcla se agitó a 20-25 °C durante 36 h. La 1H NMR en bruto (0,5 mL de la solución de reacción se vertieron sobre 1 mL de agua, después se extrajero con 1 mL de acetato de etilo, posteriormente se concentraron) mostró que se detectó el compuesto 1f. La solución de reacción se vertió en agua (20 mL) y se ajustó con 1N HCI a pH = 2, después se extrajo con acetato de etilo (20 mL*2), la fase acuosa se ajustó con solución de NaHCO3 a pH = 7, y se extrajo con acetato de etilo (20 mL*2), posteriormente se concentró bajo presión reducida para obtener el producto en bruto. El compuesto 1f (1 g, 3,88 mmol, 84,7 % de rendimiento) se obtuvo como sólido color blanco.
1H NMR: 400 MHz, CDCl3
8 3,57 (s, 3H), 2,16-2,29 (m, 4H), 1,44-1,61 (m, 4H), 1,01-1,32 (m, 18H).
Procedimiento general para la preparación del compuesto 1g
Figure imgf000065_0001
A una solución del compuesto 1f (1 g, 3,40 mmol) en DCM (10 mL) y MeOH (1 mL) se agregó B0 C2O (1,11 g, 5,10 mmol), DMAP (84 mg, 687 umol) y EfeN (1,03 g, 10,2 mmol), posteriormente se agitó a 20-25 °C durante 12 h. La TLC (éter de petróleo: acetato de etilo = 20:1) mostró que se detectó un nuevo punto (Rf = 0,60), el compuesto 1f se había consumido (Rf = 0,10). La solución de reacción se vertió en agua (20 mL) y se extrajo con acetato de etilo (20 mL*2), después la capa orgánica se lavó con 1 N HCI a pH = 7, y se lavó con salmuera (20 mL), se secó sobre Na2SO4, se filtró y concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto 1g (900 mg, en bruto) coo un sólido color blanco, que se confirmó mediante 1H NMR.
1H NMR: 400 MHz, CDCla
84,41 (s, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,03 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 2,23 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,50-1,63 (m, 2H), 1,34-1,44 (m, 11H), 1,13­ 1,29 (m, 18H).
Procedim iento general para la preparación del com puesto 1h
Figure imgf000065_0002
A una solución del compuesto 1g (900 mg, 2,52 mmol) en THF (10 mL) y H2O (2 mL) se agregó UOH.H2O (126 mg, 3 mmol) a 20-25 °C, después de agregarse, la mezcla se agitó a 20-25 °C durante 12 h. La TLC (éter de petróleo: acetato de etilo = 2:1) mostró que el compuesto 1g se había consumido (Rf = 0,90), se detectó un nuevo punto (Rf = 0,30). La solución de reacción se vertió en agua (20 mL) y se ajustó con 1N HCI a pH = 2 para, después se extrajo con acetato de etilo (10 mL*2), la capa orgánica se lavó con salmuera (10 mL), se secó sobre Na2SO4, se filtró y concentró bajo presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía de columna de sílice (SiO2, éter de petróleo: acetato de etilo = 10:1-5:1:12:1), el punto se (Rf = 0,30) para obtener el compuesto 1h (600 mg, 1,75 mmol, 69,4 % de rendimiento) como un sólido color blanco.
Procedimiento general para la preparación del compuesto 1m
Figure imgf000066_0001
A una solución del compuesto 1h (80 mg, 232 umol) y del compuesto 1h_1 (60 mg, 219 umol) en ACN (4 mL) y DMF (2 mL) se agregó TCFH (151 mg, 538 umol) y NMI (125 mg, 1,52 mmol) bajo N2 a 20-25 °C, después de la adición, la mezcla se agitó a 20-25 °C durante 12 h. La solución de reacción se inactivó con AcOH (2 mL), después se vertió en agua (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (10 mL*2), la capa orgánica se lavó con salmuera (10 mL), se secó sobre Na2SO4, se filtró y concentró bajo presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante pre-HPLC (columna: Phenomenex luna C18 150*25mm* 10um; fase móvil: [agua (0,1 %TFA) - ACN]; B%: 59 %-89 %, 10 min), después se concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto 1m (40 mg) como un aceite incoloro.
LCMS: (método 1), RT = 1,125 min, m/z = 543
P rocedim iento general para la preparación del com puesto 1n
Figure imgf000066_0002
A una solución del compuesto 1m (40 mg, 66 ,8 umol) en DCM (5 mL) se agregó TFA (76 mg, 666 umol, 10,0 eq) a 20-25 °C, después de la adición, la mezcla se agitó a 20-25 °C durante 6 h. La LCMS mostró que el compuesto 1n se había detectado (RT = 0,853 min m/z = 499). La solución de reacción se concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto 1n (40,0 mg, TFA) como un aceite color café.
LCMS: (método 1), RT = 0,853 min, m/z = 499
Procedimiento general para la preparación del compuesto “A50"
Figure imgf000067_0001
A una solución del compuesto 1n_1 (25 mg, 58,2 umol) en DMF (3 mL) se agrego Cul (40 mg, 309 umol) y HATU (35 mg, 4,53 mmol) a 10-15 °C, después de la adición el compuesto 1n (40 mg, 65,3 umol, TFA) se disolvió en DMF (1 mL), se agregó a la solución a 10-15 °C, posteriormente se agitó a 10-15 °C durante 1 h. La solución de reacción se inactivó con AcOH a pH = 3, después se vertió en agua (10 mL), y se extrajo con acetato de etilo (10 mL*3), la capa orgánica se lavó con salmuera ( 10 mL), se secó sobre Na2SO4, se filtró y concentró bajo presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante pre-HPLC (columna: Phenomenex Gemini-NX C1875*30 mm*3um; fase móvil: [agua (0,1 %TFA) - A c N]; B%: 58 % - 68 %,7 min), después se concentró bajo presión reducida para obtener “A50” (27,86 mg, 29,6 umol, 50,9 % de rendimiento, 96,8 % de pureza) como sólido color blanco, que se confirmó mediante 1HNMR, LCMS RT = 1,045 min, m/z+1=910), HPLC (, RT = 2,455 min)
1H NMR: 400 MHz, DMSO-cfe
8 11,59 (s, 1H), 11,11 (s, 1H), 10,53 (s, 1H), 8,70 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 8,46 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,82-7,99 (m, 2H), 7,78 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,52-7,57 (m, 1H), 7,43 (d, J = 8 ,8 Hz, 1H), 6,96-7,15 (m, 4H), 6,71 (s, 1H), 5,05-5,14(m, 1H) 4,39-4,45 (m, 1H), 4,22-4,32 (m, 1H), 3,90 (t, J = 6 ,8 Hz, 2H), 3,22-3,28 (m, 2H), 2,77-2,99 (m, 1H), 2,59-2,70 (m, 2H), 2,38 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,02-2,21 (m, 2H), 1,89-1,93(m, 1H), 1,49-1,74 (m, 4H), 1,22-1,44 (m, 18H).
LCMS: (método 1), RT = 1,045 min, m/z = 910
HPLC: (método 2), RT = 2,455 min
5-[(3S)-3-{[(3,5-difluorofenil)metil]carbamoil}-3-hidroxi-2-oxopirrolidin-1-il]-N-{4-[4-(4-{[2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3-dioxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-5-il]amino}butoxi)butoxi]butilo}-1H-indol-2-carboxamida ("A51")
Figure imgf000067_0002
Método LC-MS o HPLC:
Método 1:
Tipo de instrumento MS: SHIMADZU LCMS-2020, columna: Kinetex EVO C1830*2,1 mm, 5um, fase móvil A: 0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % TFA en acetonitrilo (v/v), gradiente: 0,0 min 0 % B ^ 0,8 min 95 % B ^ -1,2 min 95 % B ^ -1,21 min 5 % B ^ -1,55 min 5 % B, tasa de flujo: 1,5 mL/min, temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: 220 nm y 254 nm.
Método 2:
Tipo de instrumento MS: SHIMADZU LCMS-2020, columna: Kinetex EVO C1830*2,1 mm, 5um, fase móvil A: 0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % de TFA en acetonitrilo (v/v), gradiente: 0,0 min 0 % B^-3,0 min 95 % B^-3,5 min 95 % B^-3,51 min 5 % B^-4,0 min 5 % B, tasa de flujo: 0,8 mL/min, temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: 220 nm y 254 nm.
4. Experimento para la corrida a gran escala:
Procedim iento general para la preparación del com puesto 7b
Figure imgf000068_0001
A una solución del compuesto 7a (1 g, 5,28 mmol) y al compuesto 7a_1 (3,42 g, 15,8 mmol) en THF (10 mL) se agregó NaH (634 mg, 15,8 mmol, 60 % de pureza) a 0-5 °C bajo N 2, después la mezcla se agitó a 20-25 °C durante 3 h bajo N2. La TLC (éter de petróleo: acetato de etilo = 5:1) mostró que compuesto 7a se había consumido (Rf = 0,05), se detectó un nuevo punto (Rf = 0,40). La solución de reacción se vertió en agua (10 mL), después se extrajo con acetato de etilo (10 mL*2), la capa orgánica combinada se lavó con salmuera (10 mL), se secó sobre Na2SO4, se filtró y concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto 7b (460 mg, 1,42 mmol, 26,8 % de rendimiento) como un aceite incoloro, que se confirmó mediante 1H NMR.
1H NMR: 400 MHz, CDCla
8 4,58 (s, 1H), 3,29-3,53 (m, 6H), 3,07 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 1,81-1,95 (m, 2H), 1,61-1,75 (m, 2H), 1,45-1,58 (m, 4H), 1,37 (s, 9H).
Procedim iento general para la preparación del com puesto 7c
Figure imgf000068_0002
A una solución del compuesto 7b (350 mg, 1,08 mmol) y al compuesto 7b_1 (486 mg, 5,39 mmol, 476 uL) en DMF (10 mL) se agregó NaH (560 mg, 14,0 mmol, 60 % de pureza) a 20-25 °C bajo N 2, después la mezcla se agitó a 20 - 25 °C durante 1 h. La TLC (éter de petróleo: acetato de etilo = 5:1) mostró que se detectaron nuevos puntos (Rf = 0,45, 0,10), el compuesto 7b (Rf = 0,70) se había consumido. La solución de reacción se vertió en agua (100 mL), después se extrajo con acetato de etilo (30 mL*3), la capa orgánica se lavó con salmuera (30 mL), se secó sobre Na2SO4, se filtró y concentró bajo presión reducida. Después se purificó mediante cromatografía de columna de sílice (SiO2, éter de petróleo: acetato de etilo = 20:1-10:1- 3:1), se recolectó el punto (Rf = 0,10). El compuesto 7c (230 mg, 689 umol, 63,9 % de rendimiento) se obtuvo como un aceite incoloro, que fue confirmado por 1HNMR.
1H NMR: 400 MHz, CDCla
8 4,65 (s, 1H), 3,54-3,64 (m, 2H), 3,29-3,46 (m, 8H), 3,06 (d, J= 5,6 Hz, 2H), 1,47-1,73 (m, 12H), 1,37 (s, 9H).
Procedimiento general para la preparación de! compuesto 7d
Figure imgf000069_0001
A una solución del compuesto 7c (230 mg, 689 umol) y TsCI (200 mg, 1,05 mmol) en DCM (5 mL) se agregó EfeN (210 mg, 2,08 mmol) a 20-25 °C, después de agregarse, la solución de mezcla se agitó a 20-25 °C durante 8 h. La TLC (éter de petróleo: acetato de etilo = 1:1) mostró que el compuesto 7c (Rf = 0,10) se había consumido, un nuevo punto (Rf = 0,70) se detectó. La solución de reacción se vertió en agua (10 mL), después se extrajo con acetato de etilo (10 mL*2), la capa orgánica combinada se lavó con salmuera (10 mL), se secó sobre Na2SO4, se filtró y concentró bajo presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía de columna de sílice (SiO2, éter de petróleo: acetato de etilo = 20:1-10:1-5:1, se recolectó el punto (Rf = 0,70)). El compuesto 7d (120 mg, 246 umol, 35,6 % de rendimiento) se obtuvo como aceite incoloro, que fue confirmado por la siguiente etapa.
Procedim iento general para la preparación del com puesto 7e
Figure imgf000069_0002
A una solución del compuesto 7d (90 mg, 184 umol) y del compuesto 7d_1 (56 mg, 204 umol) en DMF (5 mL) se agregó Nal (14 mg, 93,4 umol) y K2CO3 (51 mg, 369 umol, 2,00 eq) a 20-25 °C, después de la adición, la solución de mezlca se agitó a 100 °C durante 1 h. La solución de reacción se enfrió a 15-20 °C, después de vertió en agua (20 mL) y se extrajo con acetato de etilo (10 mL*2), la capa orgánica combinada se lavó con salmuera (10 mL), se secó sobre Na15SO4, se filtró y concentró bajo presión reducida para obtener el producto en bruto. El producto en bruto se purificó mediante pre-HPLC (columna: Phenomenex Gemini-NX C1875*30 mm*3um; fase móvil: [agua (0 ,1 % TFA)Ac N]; B%: 52 %-62 %, 7 min), después, la fracción se concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto 7e (40 mg, 80,2 umol, 43,4 % de rendimiento) como aceite color verde pálido, que se confirmó por LCMS RT = 0,967 min, m/z+1 = 489): LCMS: (método 1), RT = 0,967 min, m/z = 489
Procedim iento general para la preparación del com puesto 7 f
Figure imgf000069_0003
A una solución del compuesto 7e (40 mg, 69,6 umol) en DCM (5 mL) se agregó TFA (154 mg, 1,35 mmol) a 25 °C, después se agitó a 25 °C durante 12 h. La LCMS mostró que el compuesto 7f se había detectado (RT = 0,795 min , m/z = 489). La solución de reacción se concentró bajo presión reducida a para obtener un compuesto 7f (40 mg, 66,3 umol, 95,3% de rendimiento, TFA) como un aceite color amarillo, que confirmó mediante 1H NMR
1H NMR: 400 MHz, DMSO-de
6 7,55 (s, 3H), 7,43 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6 ,86 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,75 (dd, J = 8,4, 2,0 Hz, 1H), 5,02 (dd, J = 13,2, 5,4 Hz, 1H), 4,31 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 3,17-3,34 (m, 10H), 2,81-2,95 (m, 1H), 2,64-2,76 (m, 3H), 1,88-2,01 (m, 1H) 1,30-1,59 (m, 14H).
LCMS: (método 1), RT = 0,795 min, m/z+1= 489
Procedim iento general para la preparación de “A 51”
Figure imgf000070_0001
A una solución del compuesto 7f_1 (30 mg, 69,8 umol) en DMF (3 mL) se agregó HATU (85 mg, 105 umol, 1,51 eq) y DIEA (45 mg, 348 umol) a 10-15 °C, después de la adición, la mezcla se agitó a 10-15 °C durante 30 min, posteriormente, se agregó el compuesto 7f (40 mg, 66,3 umol, TFA) en DMF (2 mL) a la solución a 10-15 °C bajo N 2, entonces se agitó a 10-15 °C durante 1 h. La LCMS mostró que se detectó la MS del compuesto 7 (RT = 0,949 min, m/z = 900). La solución de reacción se inactivó con AcOH (0,5 mL), después se vertió en agua (20 mL) y se extrajo con acetato de etilo (10 mL*2), la capa orgánica combinada se lavó con salmuera (10 mL), se secó sobre Na2SO4, se filtró y concentró bajo presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante pre-HPLC (columna: Phenomenex Gemini-NX C1875*30 mm*3um; fase móvil: [agua (0,1 %TFA) - ACN]; B%: 48 %-58 %, 7 min), después se concentró bajo presión reducida para obtener el producto. El compuesto “A51” (44,3 mg, 47,7 umol, 68,3 % de rendimiento) se obtuvo como una goma color amarillo, que fue confirmado por 1H NMR, LCMS RT = 0,945 min, m/z = 900),
HPLC RT = 2,292 min).
1H NMR:, 400 MHz, DMSO-de
6 11,59 (s, 1H), 8,70 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 8,70 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,48-7,64, (m, 2H), 7,43 (d, J = 8 ,8 Hz, 1H), 6,92-7,17 (m, 5H), 6,84 (dd, J = 8,4, 2,0 Hz, 1H), 5,11 (dd, J = 12,8, 5,2 Hz, 2H), 4,25-4,45 (m, 2H), 3,90 (t, J = 6,4 Hz, 1H) (superposición de la señal de H2O), 3,64 (s, 1H), 3,18-3,48 (m, 10H), 2,86-3,07 (m, 1H), 2,56-2,81 (m, 4H) (superposición de la señal de DMSO), 1,92-2,24 (m, 3H), 1,35-1,70 (m, 14H).
LCMS: (método 1), RT = 0,945 min m/z = 900
HPLC: (método 2), RT = 2,292 min
5-[(3S)-3-{[(3,5-difluorofeml)metN]carbamoN}-3-hidroxi-2-oxopirrolidm-1 -M]-N-(14-{[2-(2,6-dioxopiperidm-3-M)-1,3-dioxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-5-il]oxi}-3,6,9,12-tetraoxatetradecan-1-il)-1H-indol-2-carboxamida ("A52")
Figure imgf000070_0002
Método LC-MS o HPLC:
Método 1:
Tipo de instrumento MS: SHIMADZU LCMS-2020, columna: Kinetex EVO C1830*2,1 mm, 5um, fase móvil A: 0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % TFA en acetonitrilo (v/v), gradiente: 0,0 min 0 % B ^ 0,8 min 95 % B ^ -1,2 min 95 % B ^ -1,21 min 5 % B ^ -1,55 min 5 % B, tasa de flujo: 1,5 mL/min, temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: 220 nm y 254 nm.
Método 2:
Tipo de instrumento MS: SHIMADZU LCMS-2020, columna: Kinetex EVO C1830*2,1 mm, 5um, fase móvil A: 0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % de TFA en acetonitrilo (v/v), gradiente: 0,0 min 0 % B^-3,0 min 95 % B^-3,5 min 95 % B^-3,51 min 5 % B^-4,0 min 5 % B, tasa de flujo: 0,8 mL/min, temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: 220 nm y 254 nm.
4. Experimento para la corrida a gran escala:
Procedim iento general para la preparación del com puesto 8-3
Figure imgf000071_0001
A una solución del compuesto 8-2 (90 mg, 328 umol), amina 8 (100 mg, 296 umol) y DEAD (70 mg, 402 umol) en THF (3,00 mL) se agregó PPh3 (130 mg, 495 umol) a 0-5 °C. La mezcla se agitó a 10~20 °C durante 1 h. Después, la mezcla se agitó a 55-60 °C durante 12 h. La LCMS mostró que la MS del compuesto 8-2 permanecía (RT = 0,652 min, m/z (M+1) = 275) y la MS del compuesto 8-3 no se encontró. A la mezcla se agregó PPh3 (172 mg, 656 umol) y DEAD (114 mg, 655 umol) a 55-60 °C y se mantuvo agitando durante 1 h. La LCMS se mostró que la MS del compuesto 8-2 permanecía (RT = 0,643 min, m/z (M+1) = 275) y se encontró la MS del compuesto 8-3 (RT = 0,881 min, m/z (M+23) = 616). La TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 0/1) mostró que el compuesto 8-2 (Rf = 0,68) se permanecieron y se encontró un nuevo punto principal (Rf = 0,25). La mezcla de reacción se ajustó con AcOH a pH = 6~7 y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice (columna rápida de sílice, eluyente de 0~100 % de acetato de etilo/gradiente de éter de petróleo). Se recolectó el punto de Rf = 0,25. El compuesto 8-3 (110 mg, 182 umol, 55,4 % de rendimiento, 98,2 % de pureza) se obtuvo como goma de color amarillo.
LCMS: (método 1), RT = 0,881 min, m/z (M+23)= 616
LCMS: (método 1), RT = 0,877 min, m/z(M+1-100)= 494
Procedimiento general para la preparación del compuesto 8-4
Figure imgf000072_0001
A una solución del compuesto 8-3 (110 mg, 185 umol) en DCM (5,00 mL) se agregó TFA (211 mg, 1,85 mmol). La mezcla se agitó a 15-20 °C durante 6 h. La TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 0/1) mostró que el compuesto 8-3 (Rf = 0,25) se había consumido y se encontró un nuevo punto principal (Rf = 0,00). La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida. El compuesto 8-4 (98 mg, 155 umol, 83,8 % de rendimiento, 96,3 % de pureza, sal TFA) se obtuvo como goma de color amarillo.
LCMS: (método 1), RT = 0,752 min, m/z (M+1)= 494
Procedim iento general para la preparación del com puesto “A 52 ”
Figure imgf000072_0002
A una solución de Int 8 (30 mg, 69,8 umol) en DMF (3 mL) se agregó HATU (40 mg, 105 umol) y DIEA (45 mg, 348 umol) a 10-15 °C, después de la adición, el compuesto 8-4 (51 mg, 84,0 umol, sal de TFA) en DMF (1 mL) se agregó a la solución, posteriormente se agitó a 10-15 °C durante 1 h. La LCMS mostró que Int 8 se había consumido y se encontró un nuevo pico con la MS deseada (RT = 0,871 min, m/z (M+1) = 905). La solución de reacción se vertió en agua (5 mL), después se inactivó con AcOH (1,00 mL) y se extrajo con acetato de etilo (10 mL*2), la capa orgánica se lavó con salmuera (10 mL), se secó sobre Na2SO4, se filtró y concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante pre-HPLC (columna: Phenomenex Luna C18 150*25mm*10um; fase móvil: [agua (0,1 %TFA) - ACN]; B%: 25 %-55 %,10 min), después se concentró bajo presión reducida para obtener el “A52” (51,4 mg, 56,8 umol, 81,3 % de rendimiento, 100 % de pureza), que se confirmó mediante 1HNMR y LCMS como una goma de color amarillo claro.
1H NMR: 400 MHz, DMSO-d6
8 11,62 (s, 1H), 11,11 (s, 1 H), 8,70 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 8,56 (t, J = 5,6 Hz, 1H) 7,83 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,54 (dd, J = 8 ,8 , 2,0 Hz, 1H), 7,41-7,47 (m, 2H), 7,36 (dd, J = 8,4, 2,4 Hz, 1H), 7,11-7,16 (m, 1H), 6,97-7,10 (m, 3H), 5,12 (dd, J = 12,8, 5,6 Hz, 1H), 4,42 (dd, J = 16,0, 6 ,8 Hz, 1H), 4,22-4,34 (m, 3H), 3,90 (t, J = 6 ,8 Hz, 2H), 3,73-3,78 (m, 2H), 2,83-2,96 (m, 1H), 2,54-2,66 (m, 3H), 2,09-2,19 (m, 1H), 1,99-2,09 (m, 1H). LCMS: (método 2), RT = 2,144 min, m/z (M+1)= 905
5-[(3S)-3-{[(3,5-difluorofenil)metil]carbamoil}-3-hidroxi-2-oxopirrolidin-1-il]-N-(14-{[2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3-dioxo-2,3-dihidro-1 H-isoindol-4-il]oxi}-3,6,9,12-tetraoxatetradecan-1 -il)-1 H-indol-2-carboxamida ("A53")
Figure imgf000073_0001
Método LC-MS o HPLC:
Método 1:
Tipo de instrumento MS: SHIMADZU LCMS-2020, columna: Kinetex EVO C1830*2,1 mm, 5um, fase móvil A: 0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % TFA en acetonitrilo (v/v), gradiente: 0,0 min 0 % B ^ 0,8 min 95 % B ^ -1,2 min 95 % B ^ -1,21 min 5 % B ^ -1,55 min 5 % B, tasa de flujo: 1,5 mL/min, temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: 220 nm y 254 nm.
Método 2:
Tipo de instrumento MS: SHIMADZU LCMS-2020, columna: Kinetex EVO C1830*2,1 mm, 5um, fase móvil A: 0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % de TFA en acetonitrilo (v/v), gradiente: 0,0 min 0 % B ^ -3,0 min 95 % B ^ -3,5 min 95 % B ^ -3,51 min 5 % B^-4,0 min 5 % B, tasa de flujo: 0,8 mL/min, temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: 220 nm y 254 nm.
4. Experimento para la corrida a gran escala:
Procedim iento general para la preparación de la amina 13-
Figure imgf000073_0002
amina 13
A una solución del compuesto 13a (650 mg, 2,31 mmol) y TEA (468 mg, 4,63 mmol) en DCM (6,50 mL) se agregó por goteo (Boc)2O (706 mg, 3,23 mmol) a 10-20 °C bajo atmósfera de N 2 y se mantuvo agitando a 10-20 °C durante 16 h bajo atmósfera de N2. La TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1) mostró que el compuesto 13a (Rf = 0,00) había desaparecido y se encontró el nuevo punto (Rf = 0,52). La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía rápida de gel de sílice (ISCO®; columna rápida de sílice X g SepaFlash®, eluyente de 0~2% de metanol/DCM). La amina 13 (610 mg, 1,60 mmol, 69,2 % de rendimiento) se obtuvo como un aceite incoloro que fue confirmado mediante 1HNMR.
1H NMR:, 400 MHz, CDCla
8 5,22 (s, 1H), 3,59-3,77 (m, 20 H), 3,55 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 3,32 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 2,87-3,07 (m, 1H), 1,45 (s, 9H) Procedimiento general para la preparación del compuesto 13-2
Figure imgf000074_0001
A una solución de amina 13 (265 mg, 694 umol) y del compuesto 13-1 (200 mg, 729 umol) en THF (10,0 mL) se agregó PPh3 (600 mg, 2,29 mmol) a 20-25 °C bajo atmósfera de N 2. Después se agregó por goteo a la mezcla DEAD (320 mg, 1,84 mmol) a 55-60 °C bajo atmósfera de N 2 y se mantuvo agitando a 55-60 °C durante 12 horas bajo atmósfera de N 2. La LC-MS (EW18817-71-P1A1) mostró que se detectó la MS del compuesto 13-2 (RT = 0,867 min, m/z (M-100+1) = 538). La mezcla se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice (columna rápida de sílice (SepaFlash®, eluyente de 0~100 % de acetato de etilo/gradiente de éter de petróleo). El residuo se purificó mediante prep-HPLC (condición TFA, columna: Phenomenex Gemini-NX C18 75*30 mm*3um; fase móvil: [agua (0,1 %TFA) - ACN]; B%: 35%-45%, 7min). El compuesto 13-2 (190 mg, 294 umol, 40,4 % de rendimiento, 99 % de pureza) se obtuvo como goma de color amarillo, que se confirmó mediante LCMS (MS escindida por BOC: RT = 0,711 min).
LCMS: (método 1), RT = 0,877 min, m/z (M-56+1)= 538 (RT = 0,711 min, m/z (M-100+1)= 494)
Procedim iento general para ia preparación dei compuesto 13-3
Figure imgf000074_0002
A una solución del compuesto 13-2 (190 mg, 298 umol) en DCM (5 mL) se agregó TFA (340 mg, 2,98 mmol) a 20-25 °C y se mantuvo agitando durante 12 h. La TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 0/1) mostró que el compuesto 13-2 (Rf = 0,28) se consumió y se formó un nuevo punto (Rf = 0,00). La mezcla se concentró bajo presión reducida. El compuesto 13-3 (151 mg, 230 umol, 77,5 % de rendimiento, 99,6 % de pureza, sal TFA) se obtuvo como goma de color amarillo.
Procedimiento general para la preparación del compuesto “A53"
Figure imgf000075_0001
A una solución de Int 8 (30 mg, 69,8 umol) en DMF (3,00 mL) se agrego HATU (40 mg, 105 umol) y DIEA (45 mg, 348 umol) a 10-15 °C, después de la adición, el compuesto 13-3 (55 mg, 84,4 umol, sal de TFA) en DMF (1,00 mL) se agregó a la solución, posteriormente se agitó a 10-15 °C durante 1 h. La LCMS mostró que Int 8 permaneció (RT = 0,750 min, M+1 = 538) y se encontró un nuevo pico con la MS del compuesto 13 (RT = 0,904 min, M+1 = 949). La solución de reacción se vertió en agua (5,00 mL), después se inactivó con AcOH (1,00 mL) y se extrajo con acetato de etilo (10,0 mL*2), la capa orgánica se lavó con salmuera (10,0 mL), se secó sobre Na2SO4, se filtró y concentró bajo presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante pre-HPLC (columna: Phenomenex Gemini-NX C1875*30 mm*3um; fase móvil:
[agua (0,1 %TFA) - Ac N]; B%: 38 %-48 %,7 min), después se liofiliza para obtener “A53” (28,32 mg, 29,8 umol, 42,7 % de rendimiento, 100 % de pureza), que se confirmó mediante 1HNMR y LCMS como una goma de color amarillo.
1H NMR: 400 MHz, DMSO-cfe
8 11,62 (s, 1H), 11,10 (s, 1H), 8,70 (t, J= 6,4 Hz, 1H), 8,56 (t, J= 5,6 Hz, 1H), 7,75-7,85 (m, 2H), 7,50-7,58 (m, 2H), 7,41­ 7,49 (m, 2H), 7,13 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,03-7,11 (m, 1H), 6,97-7,03 (m, 2H), 6,72 (s, 1H), 5,09 (dd, J = 12,8, 5,4 Hz, 1H), 4,37-4,48 (m, 1H), 4,31-4,36 (m, 2H), 4,21-4,31 (m, 1H), 3,90 (t, J = 6 ,8 Hz, 2H), 3,75-3,84 (m, 2H), 3,62 (dd, J = 5,6, 3,6 Hz, 2H), 3,41-3,58 (m, 20H), 2,82-2,96 (m, 1H), 2,54-2,66 (m, 3H), 2,15 (dt, J= 13,2, 7,6 Hz, 1H), 1,97-2,07 (m, 1H) (~20 H superposición de la señal de H2O, ~3H superposición de la señal de DMSO).
LCMS: (método 2), RT = 2,101 min, m/z (M+1)= 949
5-[(3S)-3-{[(3,5-difluorofenil)metil]carbamoil}-3-hidroxi-2-oxopirrolidin-1-il]-N-(14-{[2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3-dioxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-4-il]oxi}-3,6,9,12-tetraoxatetradecan-1-il)-1H-indol-2-carboxamida ("A54")
Figure imgf000075_0002
Método LC-MS o HPLC:
Método 1:
Tipo de instrumento MS: SHIMADZU LCMS-2020, columna: Kinetex EVO C182,1 X 30 mm, 5um, fase móvil A: 0,025% NH3»H2O en agua (v/v), B: acetonitrilo, gradiente: 0,0 min 5 % B ^-0,8 min 95 % B^-1,2 min 95 % B^-1,21 min 5 % B ^ -1,55 min 5 % B, tasa de flujo: 1,5 mL/min, temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: 220 nm y 254 nm.
Método 2:
Tipo de instrumento MS: SHIMADZU LCMS-2020, columna: Kinetex EVO C1830*2,1 mm, 5um, fase móvil A: 0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % TFA en acetonitrilo (v/v), gradiente: 0,0 min 5 % B^-0,8 min 95 % B ^-1,2 min 95 % B^-1,21 min 5 % B^-1,55 min 5 % B, tasa de flujo: 1,5 mL/min, temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: 220 nm y 254 nm.
4. Experimento para la corrida a gran escala:
Procedim iento general para la preparación del in term edio 16b
Figure imgf000076_0001
A una solución del compuesto 16a (1,10 g, 5,69 mmol) en DCM (10 mL) se agregó TEA (1,32 g, 13,1 mmol, 1,82 mL) a 25 30 °C bajo N2, después CbzCl (1,17 g, 6,83 mmol, 100 uL) se agregó a la mezcla a 2530 °C bajo N 2, la mezcla se agitó durante 10 h. La mezcla se enfrió a 0 - 10 °C, TEA (5 g, 49,4 mmol) se agregó a la mezcla a 0 - 10 °C bajo N2, posteriormente se agregó TsCI (5,00 g, 26,2 mmol) a la mezcla a 0 - 10 °C bajo N 2, se agitó a 25 - 30 °C durante 6 h bajo N 2. Se tomaron 0,5 mL de la mezcla de reacción y se vertió sobre agua (3 mL), se extrajeron con acetato de etilo (1 mL), la fase orgánica se lavó con agua (3 mL x 3), después se concentró bajo presión reducida para obtener un aceite incoloro. La LCMS Rt = 0,915 min, m/z (M 1) = 482,4) mostró que se había detectado la MS del compuesto 16b, la HNMR (EW18785-17-P1A2) mostró que el compuesto 16b se había formado. La mezcla se vertió sobre agua (100 mL), se extrajo con acetato de etilo (50 mL x 2), la fase orgánica se lavó con salmuera (100 mL x 3), se secó con Na2SO4, se filtró, el filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener un aceite color café. La TLC 1(éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1, Rf = 0,30). El aceite se purificó mediante cromatografía de columna (SiO2, éter de petróleo/acetato de etilo, 1/0 1/1, Rf = 0,30) para obtener el compuesto 16b (1,80 g, 3,74 mmol, 65,7 % de rendimiento) como aceite color café.
1H NMR: 400 MHz, CDCla
8 7,78 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,26-7,42 (m, 7H), 5,42 (s, 1H), 5,08 (s, 2H), 4,76 (s, 1H), 4,11 (d, J = 4,4 Hz, 2H), 3,45-3,74 (m, 13H), 3,37 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 2,43 (s, 3H), 1,83 (s, 3H)
LCMS: (método 1), Rt = 0,915 min, m/z (M+ 1)= 482,4
Procedim iento general para la preparación del com puesto 16d
Figure imgf000076_0002
A una solución del compuesto 16b (1 g, 2,08 mmol) y el compuesto 16c (600 mg, 2,36 mmol) en DMA (20 mL) se agregó TEA (2,18 g, 21,5 mmol, 3 mL, 10,4 eq) a 25 °C, la mezcla se agitó a 70 °C durante 9 h. La mezcla se enfrió a 25 - 30 °C, se vertió en agua (50 mL), se extrajo con acetato de etilo (20 mL x 3), la fase orgánica se lavó con salmuera (30 mL x 3), después se separó y secó con Na2SO4, se filtró. El filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener un aceite color café. La aceite se purificó mediante Prep-HPLC (columna: Waters Xbridge C18 150*50mm* 10um; fase móvil: [agua (10mM NH4HCO3)-ACN]; B%: 38 % 68 %, 11,5 min), la fracción se concentró bajo presión reducida para dar el compuesto 16d (500 mg, 886 umol, 42,7 % de rendimiento) como aceite color café.
1H NMR: 400 MHz CDCla
8 7,30 (m, 5H), 5,92 (s, 1H), 5,09 (s, 2H), 3,58 (m, 12H), 3,38 (m, 6H), 2,54 (m, 2H), 2,40 (m, 4H), 1,49 (m, 4H), 1,44 (s, 9H).
LCMS: (método 1), Rt = 0,844 min, m/z (M+ 1)= 564,5
Procedim iento general para la preparación de la am ina 16
Figure imgf000077_0001
A una solución del compuesto 16d (180 mg, 319 umol) en MeOH (3 mL) se agregó Pd(OH)2 (225 mg, 320 umol, 20 % de pureza). La mezcla se agitó a 20 °C durante 1 hbajo H 2 (103,42 kPa [15 psi]). La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida para obtener amina 16 (120 mg, 279 umol, 87,4 % de rendimiento) como aceite de color amarillo.
1H NMR: 400 MHz, CDCla
8 3,71-3,59 (m, 11H), 3,39 (s, 4H), 3,35 (s, 1H), 3,32 (s, 1H), 3,04-2,95 (m, 1H), 2,69-2,62 (m, 2H), 2,56 (s, 4H), 1,57 (s, 4H), 1,45 (s, 13H)
Procedim iento general para la preparación de la am ina 16
Figure imgf000077_0002
A una solución del compuesto 3a_1 (80 mg, 289 mmol) en DMSO (3 mL) se agregó DIEA (140 mg, 1,08 mmol, 188 uL) y amina 16 (120 mg, 279 umol). La mezcla se agitó a 90 °C durante 1 h. La mezcla de reacción se acidificó a pH = 5 mediante adición de AcOH. El producto en bruto se purificó mediante HPLC de fase inversa (0,1% condición FA) para obtener el compuesto 16_A (50 mg, 72,9 umol, 26,1 % de rendimiento) como un sólido color rojo.
Procedim iento general para la preparación del com puesto 16_B
Figure imgf000077_0003
Una mezcla del compuesto 16_A (40 mg, 58,3 umol) en HCl/dioxano (4 M, 5 mL) se agitó a 20 °C durante 1 h. La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto 16_B (30 mg, 51,2 umol, 87,8 % de rendimiento) como aceite de color amarillo.
LCMS: Rt = 0,539 min, m/z (M 1) = 586,2
P rocedim iento general para ia p reparación d e i com puesto “A 54 ”
Figure imgf000078_0001
A una solución de Int 8 (30 mg, 60,8 umol) en DMF (3 mL) se agregó de forma sucesiva DIEA (24 mg, 185 umol) y HATU (30 mg, 78,9 umol) a 0 °C bajo N2, la mezcla se agitó a 0 °C durante 10 min, después se agregó una solución del compuesto 16_B (30 mg, 51,2 umol, FA) en DMF (3,00 mL) a la mezcla a 0 °C, se agitó durante 20 min bajo N2 a 0 °C. La mezcla se vertió sobre agua helada (20,0 mL), se extrajo con acetato de etilo (10,0 mL x 2), la fase orgánica se separó y se lavó con salmuera (20,0 mL x 2), se secó sobre Na2SO4, se filtró. El filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener un aceite color café. El producto en bruto se purificó mediante Prep-HPLC (columna: Phenomenex Synergi C18 75*30* 3um; fase móvil: [agua (0,225 %FA) - ACN]; B%: 20 %-40 %, 8 min), el disolvente de la fracción se eliminó mediante liofilización para obtener "A54" (8,38 mg, 7,93 umol, 15,4 % de rendimiento, 94,2 % de pureza) como sólido color amarillo.
1H NMR: 400 MHz, DMSO-de;
8 11,58 (s, 1H), 11,07 (s, 1H), 8,80-8,61 (m, 1H), 8,32 (s, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,65-7,51 (m, 2H), 7,41 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,32-7,20 (m, 1H), 7,18-7,06 (m, 1H), 7,06-6,96 (m, 3H), 6,76 (s, 1H), 6,72 (s, 1H), 6,60 (s, 1H), 5,14-4,97 (m, 1H), 4,41 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 4,26 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,88 (d, J = 8,4 Hz, 3H), 3,76-3,61 (m, 8 H), 3,55 (d, J = 4,4 Hz, 4H), 3,47 (s, 4H), 3,05 (s, 2H), 2,86 (d, J= 12,4 Hz, 3H), 2,61 (d, J= 4,8 Hz, 3H), 2,37 (s, 3H), 2,19-2,11 (m, 1H), 2,02 (s, 1H), 1,46 (s, 8 H).
LCMS: Rt = 0,846 min, m/z (M 1) = 997,5;
HPLC: Rt = 1,675 min.
(3S)-N-[(3,5-difluorofeml)metN]-1 -{2-[(1-C[2-(2,6-dioxopiperidm-3-il)-1,3-dioxo-2,3-dihidro-1H-isomdol-5-N]carbamoN}-2,5,8,11,14-pentaoxahexadecan-16-N)carbamoN]-1H-mdol-5-N}-3-hidroxi-2-oxopirroNdma-3-carboxamida (“A55”)
Figure imgf000078_0002
Método LC-MS o HPLC:
Método 1:
Tipo de instrumento MS: SHIMADZU LCMS-2020, columna: Kinetex EVO C1830*2,1 mm, 5um, fase móvil A: 0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % TFA en acetonitrilo (v/v), gradiente: 0,0 min 0 % B^-0,8 min 95 % B ^-1,2 min 95 % B^-1,21 min 5 % B^-1,55 min 5 % B, tasa de flujo: 1,5 mL/min, temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: 220 nm y 254 nm.
Método 2:
Tipo de instrumento MS: SHIMADZU LCMS-2020, columna: Kinetex EVO C1830*2,1 mm, 5um, fase móvil A: 0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % de TFA en acetonitrilo (v/v), gradiente: 0,0 min 0 % B ^ -3,0 min 95 % B ^ -3,5 min 95 % B ^ -3,51 min 5 % B^-4,0 min 5 % B, tasa de flujo: 0,8 mL/min, temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: 220 nm y 254 nm.
4. Experimento para la corrida a gran escala:
Procedim iento general para la preparación del com puesto 2b
Figure imgf000079_0001
2b
Una mezcla del compuesto 2a (5,00 g, 12,0 mmol), acetato de sodio (10,0 g, 122 mmol) en DMF (75 mL) se desgasificó y purgó con N2 en 3 ocasiones, y después la mezcla se agitó a 95-100 °C durante 16 h bajo atmósfera de N2. La TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 1/2) mostró que el compuesto 2a (Rf = 0,65) se consumió y se formó un principal punto (Rf = 0,62). La mezcla de reacción se vertió sobre solución acuosa de bicarbonato de sodio saturado (300 mL), se extrajo con MTBE (100 mL x 3). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (60 mL x 2), la fase orgánica se separó y secó con Na2SO4, se filtró y el filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto 2b (4,27 g, en bruto) como un aceite color amarillo.
1H NMR: 400 MHz, CDCla
8 4,16-4,25 (m, 2H), 3,64-3,70 (m, 16H), 3,38 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 2,07 (s, 3H).
Procedim iento general para la preparación del com puesto 2c
Figure imgf000079_0002
2c
Una mezcla del compuesto 2b (3,66 g, 12,0 mmol), NaOH (2 M, 35 mL) en MeOH (35 mL) se agitó a 20-25 °C durante 12 h bajo atmósfera de N2. La TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1) indicaba que el compuesto 2b (Rf = 0,50) se consumió completamente y se formó un nuevo punto (Rf = 0,20). La reacción estaba limpia de acuerdo con la TLC. La mezcla de reacción se diluyó con H2O (200 mL), se lavó con MTBE (50 x 2 mL). Después, la capa acuosa se saturó con NaCl (s) y se extrajo con EtOAc (100 mL x 2). La capa orgánica combinada se secó con Na2SO4, se filtró y el filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto 2c (1,96 g, 7,44 mmol, 62,1% de rendimiento) como un aceite color amarillo.
1H NMR: 400 MHz, CDCla
8 3,69-3,73 (m, 2H), 3,62-3,68 (m, 14H), 3,57-3,61 (m, 2H), 3,33-3,42 (m, 2H).
Procedim iento general para la preparación del com puesto 2d
Figure imgf000080_0001
A una solución de NaH (1,83 g, 45,8 mmol, 60 % de pureza) en THF (30 mL) se agregó el compuesto 2c (1,96 g, 7,44 mmol) en THF (10 mL) a 0-5 °C bajo N2 y se mantuvo agitando durante 1 h a 20-25 °C bajo N 2. A la mezcla se agregó metil 2-bromoacetato (2,28 g, 14,9 mmol, 1,40 mL) en THF (10 mL) a 0-5 °C bajo N 2 y se mantuvo agitando durante 12 h a 20-25 °C bajo N 2. La TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1) indicó que el compuesto 2c (Rf = 0,50) se consumió completamente. La mezcla de reacción se vertió sobre NH4Cl (120 mL) saturado, se extrajo con EtOAc (30 mL x 3), las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (15 mL), la fase orgánica se separó y secó con Na2SO4, se filtró y la filtración se concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto 2e (200 mg, en bruto) como un aceite color café, que se verificó mediante 1H NMR. La capa acuosa se ajustó a pH = 5-6 con ácido(s) cítrico(s). Después, la mezcla se extrajo con MeCN (tres veces, 100 mL, 50 mL, 50 mL). La capa orgánica combinada (compuesto 2d en solución MeCN) se verificó mediante 1H NMR y se usó directamente para la siguiente etapa.
1H NMR: 400 MHz, CDCla
8 3,48-3,63 (m, 20H), 3,25-3,30 (m, 2H).
Procedim iento general para la preparación del com puesto 2e
Figure imgf000080_0002
A una solución del compuesto 2d (2,39 g, 7,44 mmol) en MeCN (200 mL) se agregó K2CO3 (4,11 g, 29,8 mmol) a 20-25 °C, se agitó durante 1 h a 20-25 °C bajo atmósfera de N 2. Después, se agregó a la mezcla Mel (10,6 g, 74,4 mmol, 4,63 mL) a 20-25 °C bajo atmósfera de N 2. La mezcla se agitó a 20-25 °C durante 12 h bajo N2. La 1H NMR mostró que el compuesto 2d había desaparecido y se encontró el compuesto 2e (la mezcla de reacción se concentró y dirigió a 1H NMR). La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida. El residuo se disolvió con EtOAc (200 mL), después, la solución se secó sobre Na2SO4, se filtró y el filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto 2e (890 mg, 2,65 mmol, 35,7% de rendimiento) como un aceite color café.
1H NMR: 400 MHz, CDCl3
8 4,18 (s, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,62-3,74 (m, 18H), 3,40 (t, J= 5,2 Hz, 2H).
Procedimiento general para la preparación dei compuesto 2f
Figure imgf000081_0001
Una mezcla del compuesto 2e (800 mg, 2,39 mmol), PPh3 (1,12 g, 4,27 mmol) en H2O (3 mL) y THF (15 mL) se desgasificó y purgó con N2 en 3 ocasiones, y después la mezcla se agitó a 20-25 °C durante 4 h bajo atmósfera de N2. La TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 0/1) mostró que el compuesto 2e (Rf = 0,60) se consumió (la solución reactante se usó directamente para la siguiente etapa.
Procedim iento general para la preparación del com puesto 2g
Figure imgf000081_0002
Una mezcla del compuesto 2f (800 mg, 2,59 mmol), TEA (730 mg, 7,21 mmol, 1,00 mL), (Boc)2O (1,30 g, 5,96 mmol, 1,37 mL), DMAP (145 mg, 1,19 mmol) en H2O (3 mL) y THF (15 mL) se desgasificó y purgó con N2 en 3 ocasiones, y después la mezcla se agitó a 20-25 °C durante 12 h bajo atmósfera de N2. La TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 0/1) mostró que se había formado el compuesto 2g (Rf = 0,45). La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó con cromatografía rápida de gel de sílice (columna rápida de sílice, eluyente de 0-100 % de acetato de etilo/gradiente de éter de petróleo), el punto (Rf = 0,45) se recolectó para obtener el compuesto 2g (145 mg, 354 umol, 13,7 % de rendimiento) como un aceite color amarillo.
1H NMR: 400 MHz, CDCh
85,06 (s, 1H), 4,17 (s, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,59-3,74 (m, 16H), 3,54 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 3,31 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 1,44 (s, 9H).
Procedim iento general para la preparación del com puesto 2h
Figure imgf000081_0003
Una mezcla del compuesto 2g (145 mg, 354 umol), LiOH»H2O (30 mg, 715 umol) en THF (4 mL) y H2O (1 mL) se agitó a 20-25 °C durante 12 h bajo atmósfera de N2. La TLC (diclorometano/ metanol = 10/1) mostró que el compuesto 2g (Rf = 0,60) se había consumido y se formó un nuevo punto principal (Rf = 0,00). La mezcla de reacción se diluyó con H2O (30 mL). La mezcla se ajustó a pH = 3-4 con ácido cítrico (4 M en H2O) y se agregó NaCl(s) hasta saturarse. Después, la mezcla se extrajo con EtOAc (10 mL x 3), las capas orgánicas se combinaron y secaron sobre Na2SO4, se filtró y el filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto 2h (137 mg, 346 umol, 97,8% de rendimiento) como un aceite color amarillo, que se confirmó mediante 1H NMR.
1H NMR: 400 MHz, DMSO-de
8 12,53 (s, 1H), 6,74 (s, 1H), 4,01 (s, 2H), 3,44-3,62 (m, 16H), 3,35-3,38 (m, 2H), 3,05 (q, J= 6,0 Hz, 2H), 1,37 (s, 9H).
Procedim iento general para la preparación del com puesto 2i
Figure imgf000082_0001
A una solución del compuesto 2h (70 mg, 177 umol) y del compuesto 2h_1 (51 mg, 186 umol) en ACN (4 mL) y DMF (2 mL) se agregó TCFH (121 mg, 431 umol) y NMI (100 mg, 1,22 mmol) bajo N2 a 20-25 °C, después de la adición, la mezcla se agitó a 20-25 °C durante 2 h. La LCMS mostró que se detectó el compuesto 2i (RT = 0,876 min, m/z (M+1-100 = 551), la TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 0/1) mostró que el compuesto 2i se había consumido (Rf = 0,00), se detectó un nuevo punto (Rf = 0,10). La solución de reacción se inactivó con AcOH (1 mL) , después se vertió en agua (10 mL) y se extrajo con acetato de etilo (10 mL*2), la capa orgánica se lavó con salmuera (10 mL), se secó sobre Na2SO4, se filtró y concentró bajo presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante cromatografía de columna de sílice (SiO2, éter de petróleo/acetato de etilo=5/1-1/1 -0/1, el punto Rf = 0,10 se recolectó) después se concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto 2i (90 mg, 137 umol, 77,4 % de rendimiento) como un aceite color amarillo pálido.
LCMS: (método 1), RT = 0,875 min, m/z(M+1-100)= 551
Procedim iento general para la preparación del com puesto 2j
Figure imgf000082_0002
A una solución del compuesto 2i (90 mg, 138 umol) en DCM (5 mL) se agregó TFA (158 mg, 1,39 mmol) a 20-25 °C, después del agregado, la mezcla se agitó a 20-25 °C durante 3 h. La LCMS mostró que la MS había detectado el compuesto 2j (RT = 0,733 min m/z (M+1) = 551). La de reacción se concentró bajo presión reducida para obtener el compuesto 2j (90 mg estado crudo, TFA) como un aceite color amarillo.
LCMS: (método 1), RT = 0,733 min, m/z (M+1)= 551
Procedimiento general para la preparación del compuesto “A55”
Figure imgf000083_0001
A una solución del compuesto int 8 (30 mg, 69,8 umol) en DMF (3 mL) se agrego HATU (40 mg, 105 umol) y DIEA (45 mg, 348 mmol) a 10-15 °C, después de la adición el compuesto 2j (55 mg, 82,7 umol TFA) se disolvió en DMF (1 mL), se agregó a la solución a 10-15 °C, posteriormente se agitó a 10-15 °C durante 1 hbajo N 2. La LCMS mostró que se detectó la masa del compuesto 2 (RT = 0,890 min, m/z (M 1) = 962). La solución de reacción se inactivó con AcOH (1 mL) y se vertió en agua (5 mL), después se extrajo con acetato de etilo (10 mL*2), la capa orgánica se lavó con salmuera (10 mL), se secó sobre Na2SO4, se filtró y concentró bajo presión reducida. El producto en bruto se purificó mediante pre-HPLC (columna: Phenomenex Luna C18 150*25 mm*10 um; fase móvil: [agua (0,1 % TFA)-Ac N]; B%: 25%-55%, 10 min), después se concentró bajo presión reducida para obtener “A55” (33,96 mg, 33,6 umol, 95,2 % de pureza) como goma color amarillo.
LCMS: (método 1), RT = 0,885 min, m/z (M+1)= 962
HPLC: (método 2), RT = 1,885 min
1 H NMR: 400 MHz, DMSO-de
8 11,68 (s, 1H), 11,18 (s, 1H), 10,39 (s, 1H), 8,76 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 8,61 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 8,36 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 8,09 (dd, J = 8,4, 1,6 Hz, 1H), 7,95 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,60 (dd, J = 8 ,8 , 2,0 Hz, 1H), 7,49 (d, J = 8 ,8 Hz, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,01-7,15 (m, 3H), 5,19 (dd, J= 12,8, 5,2 Hz, 1H), 4,48 (dd, J = 16,0, 6 ,8 Hz, 1H), 4,33 (dd, J = 16,0, 6,0 Hz, 1H), 4,23 (s, 2H), 3,96 (t, J = 6 ,8 Hz, 1H), 3,83-3,43 (m, 24H superposición de la señal de H2O), 2,89-3,02(m, 1H), 2,64-2,76 (m, 2H), 2,05-2,27 (m, 2H).
(3S)-N-[(3,5-difluorofenil)metil]-1-{2-[4-(14-{[2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1,3-dioxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-4-M]ammo}-3,6,9,12-tetraoxatotradecan-1-M)piperazma-1-carboml]-1H-mdol-5-M}-3-hidroxi-2-oxopirroMdma-3-carboxamida (“A56”)
Figure imgf000083_0002
Método LC-MS o HPLC:
Método 1:
Tipo de instrumento MS: SHIMADZU LCMS-2020, columna: Kinetex EVO C182,1 X 30 mm, 5um, fase móvil A: 0,025% NH3»H2O en agua (v/v), B: acetonitrilo, gradiente: 0,0 min 0 % B ^ -0,8 min 60 % B ^ -1,2 min 60 % B ^ -1,21 min 0 % B ^ -1,55 min 0 % B, tasa de flujo: 1,5 mL/min, temperatura del horno: 40 °C; detección de UV: 220 nm y 254 nm. Método 2:
Tipo de instrumento MS: SHIMADZU LCMS-2020, columna: Kinetex EVO C1830*2,1 mm, 5um, fase móvil A: 0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % TFA en acetonitrilo (v/v), gradiente: 0,0 min 0 % B ^ -0,8 min 60 % B ^ -1,2 min 60 % B ^ -1,21 min 0 % B ^ -1,55 min 0 % B, tasa de flujo: 1,5 mL/min, temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: 220 nm y 254 nm. 4,0 min 0 % B, tasa de flujo: 0,8 mL/min, temperatura del horno: 50 °C; detección de UV: 220 nm y 254 nm.
Experimento para la corrida a gran escala:
P rocedim iento general para ia p reparación d e i com puesto 15a
Figure imgf000084_0001
Una mezcla del compuesto 2a (5 g, 12 mmol), del compuesto 15a_1 (2,90 g, 13,2 mmol), K2CO3 (3,31 g, 24,0 mmol) en ACN (30,0 mL) se desgasificó y purgó con N2 en 3 ocasiones, y después la mezcla se agitó a 75-80 °C durante 12 h bajo atmósfera de N2. La TLC (éter de petróleo: acetato de etilo = 1/2) mostró que el compuesto 2a (Rf = 0,75) se consumió y se encontró un nuevo punto principal (Rf = 0,05). La mezcla de reacción se vertió sobre H2O (140 mL), la mezcla se extrajo con MTBE (30,0 mL x 3). La capa orgánica se combinó y usó para la siguiente etapa.
P rocedim iento general para ia preparación d e i com puesto 15_A
Figure imgf000084_0002
Una mezcla del compuesto 15a (5,58 g, 12 mmol), PPh3 (6,30 g, 24,0 mmol) en THF (80 mL) y H2 (10 mL) se desgasificó y purgó con N2 en 3 ocasiones, y después la mezcla se agitó a 55-60 °C durante 12 h bajo atmósfera de N2. La TLC (éter de petróleo: acetato de etilo = 1/2) mostró que permaneció el compuesto 15a (Rf = 0,60). La mezcla se mantuvo agitando a 55-60 °C durante 16 h. La LCMS mostró que el compuesto 15a se había consumido, se detectó un nuevo pico con valor de MS para la amina 15 (RT = 0,941 min, M+1 = 440). La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida. La mitad del residuo se purificó por cromatografía en columna (SiO2, DCM/MeOH = 1/0 a 10/1) para obtener la amina 15 (430 mg, 978 umol, 8,16 % de rendimiento) como un aceite amarillo que se confirmó por 1H NMR y LCMS.
1H NMR: 400 MHz, CDCb
8 7,28-7,41 (m, 5H), 5,13 (s, 2H), 3,59-3,67 (m, 13H) 3,51-3,58 (m, 5H), 2,90 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 2,61 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 2,48 (s, 4H), 2,18 (s, 2H) (superposición de la señal de H2O)
LCMS: (método 1), RT = 0,966 min, m/z (M+ 1)= 440
Procedimiento general para la preparación dei compuesto 15_A
Figure imgf000085_0001
en DMSO (3 mL) se agitó a 90 °C durante 1 hbajo N 2. Tres lotes se llevaron a cabo tres lotes. La mezcla se enfrío a 25 -30 °C, el valor del pH de la mezcla se ajustó a 6 - 7 con AcOH. El mezcla se purificó mediante Prep-HPLC (columna: Phenomenex Synergi C18 150*25* 10um; fase móvil: [agua (0,225 % FA)-ACN]; B%: 18 % - 48 %, 10 min), la fracción se concentró bajo presión reducida para dar el compuesto 15_A (160 mg, 204 umol, 37,7 % de rendimiento, 94,9 % de pureza, FA) como aceite color amarillo.
LCMS: EW18785-68-P1A, Rt = 0,799 min, m/z (M 1) = 696,4
Procedim iento general para ia preparación dei com puesto 15-1
Figure imgf000085_0002
Una mezcla del compuesto 15_A (40 mg, 57,4 umol) en Hbr (10 mL) y HOAc (5 mL) se agitó a 20 °C durante 1 hbajo atmósfera N 2. La mezcla de reacción se acidificó a pH = 7 mediante adición de NaHCO3 (aq), y se concentró después bajo presión reducida para obtener un residuo. El producto en bruto se purificó mediante HPLC de fase inversa (0,1% condición FA) para obtener el compuesto 15-1 (30 mg, 53,4 umol, 92,9 % de rendimiento) como un sólido color amarillo y se confirmó mediante la siguiente etapa.
LCMS: Rt = 0,543 min, m/z (M 1) = 562,0
Procedimiento general para la preparación de! compuesto “A56”
Figure imgf000086_0001
A una solución de Int 8 (20 mg, 46,5 umol) en DMF (3 mL) se agregó de forma sucesiva DIEA (20 mg, 154 umol) y HATU (30 mg, 78,9 umol) a 0 °C bajo N2, la mezcla se agitó a 0 °C durante 10 min, después se agregó una solución del compuesto 15-1 (30 mg, 53,4 umol, FA) en DMF (3,00 mL) a la mezcla a 0 °C, se agitó durante 20 min bajo N2 a 0 °C. La mezcla se vertió sobre agua helada (20,0 mL), se extrajo con acetato de etilo (10,0 mL x 2), la fase orgánica se separó y se lavó con salmuera (20,0 mL x 2), se secó con Na2SO4, se filtró, el filtrado se concentró bajo presión reducida para obtener un aceite color café. Se purificó mediante Prep-HPLC (columna: Phenomenex Synergi C18 150*50* 3um; fase móvil: [agua (0,225 %FA) - ACN]; B%: 20 %-50 %, 10min), el disolvente de la fracción se eliminó mediante liofilización para obtener "A56" (10 mg, 10,1 umol, 18,9 % de rendimiento, 98,3 % de pureza) como sólido color amarillo.
1H NMR: 400 MHz, DMSO-d6;
8 11,61 (s, 1H), 11,09 (s, 1 H), 8,69 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 8,25 (s, 1 H), 7,89-7,72 (m, 1H), 7,60-7,50 (m, 2H), 7,42 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 7,13 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,09-6,98 (m, 4H), 6,79 (s, 1H), 6,72 (s, 1H), 6,59 (s, 1H), 5,10-5,00 (m, 1H), 4,41 (d, J = 6,4, 15,5 Hz, 1 H), 4,31 -4,23 (m, 1H), 3,89 (s, 3H), 3,72 (s, 5H), 3,60 (t, J = 5,6 Hz, 3H), 3,53 (d, J = 4,0 Hz, 5H), 3,50 (s, 7H), 3,49-3,46 (m, 6 H), 2,64-2,60 (m, 3H), 2,14 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 2,04 (s, 1H).
LCMS: Rt = 0,671 min, m/z (M 1) = 973,3;
HPLC: Rt = 1,637 min.
(3S)-N-[(3,5-difluorofeml)metN]-1 -{2-[(16-{[2-(2,6-dioxopiperidm-3-il)-1,3-dioxo-2,3-dihidro-1H-isomdol-4-M]carbamoM}hexadecM)carbamoM]-1H-mdol-5-M}-3-hidroxi-2-oxopirroMdm-3-carboxamida ("A57")
Figure imgf000086_0002
Método LC-MS o HPLC:
Método 1:
Tipo de instrumento MS: SHIMADZU LCMS-2020, columna: Kinetex EVO C1830*2,1 mm, 5um, fase móvil A: 0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % TFA en acetonitrilo (v/v), gradiente: 0,0 min 5 % B ^ -0,8 min 95 % B ^ -1,2 min 95 % B ^ -1,21 min 5 % B ^ -1,55 min 5 % B, tasa de flujo: 1,5 mL/min, temperatura del horno: 50 °C; detección de PDA: 220 nm y 254 nm.
Método 2:
Tipo de instrumento MS: SHIMADZU LCMS-2020, columna: Kinetex EVO C1830*2,1 mm, 5um, fase móvil A: 0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % TFA en acetonitrilo (v/v), gradiente: 0,0 min 5 % B ^ -3,0 min 95 % B ^ -3,5 min 95 % B ^ 3,51 min 5 % B ^ 4,0 min 5 % B, tasa de flujo: 0,8 mL/min, temperatura del horno: 50 °C; detección de PDA: 220 nm y 254 nm.
Método 3:
Tipo de instrumento: SHIMADZU LC-20AD, columna: Kinetex C18 LC columna 4,6 x 50 mm, 5um, fase móvil A: 0,0375 % de TFA en agua (v/v), B: 0,01875 % TFA en acetonitrilo (v/v), gradiente: 0,0 min 10 % B^2,40 min 80 % B ^3 ,7 min 80 % B^3,71 min 10 % B^4,00 min 10%B, , tasa de flujo: 1,5 mL/min, temperatura del horno: 50 °C; detección de PDA: (220 nm y 215nm y 254nm)
4. Experimento para la corrida a gran escala:
Procedim iento general para la preparación del com puesto 10b
Figure imgf000087_0001
Una mezcla del compuesto 10a (3 g, 9,99 mmol) y H2SO4 ( 8 gotas, 98 % de pureza) en MeOH (30 mL) se agitó a 64-65 °C durante 12 h bajo atmósfera de N2. La 1H NMR mostró que el compuesto 10a había desaparecido y se encontró el compuesto 10b (la solución se determinó directamente mediante 1H NMR). La mezcla de reacción se enfrió a 10-20 °C y se mantuvo agitando a 10-20 °C durante 30 min, después se filtró y la torta de filtro se secó bajo presión reducida para obtener un compuesto 10b (3,02 g, 9,19 mmol, 92,1 % de rendimiento) como un sólido color blanco, que se confirmó mediante 1H NMR.
1H NMR: 400 MHz, CDCla
8 3,69 (s, 6 H), 2,32 (t, J = 7,2 Hz, 4H), 1,59-1,69 (m, 4H), 1,22-1,37 (m, 22H).
Procedim iento general para la preparación del com puesto 10c
Figure imgf000087_0002
A una suspensión del compuesto 10b (3,02 g, 9,19 mmol) en MeOH (12,0 mL) se agregó una solución de Ba(OH)2 ( 866 mg, 5,05 mmol) en MeOH (12 mL) a 10-20 °C bajo atmósfera de N 2 y se mantuvo agitando a 15-25 °C durante 22 horas bajo atmósfera de N2. La 1H NMR mostró que el compuesto 10b se había retenido (se agregó una gota de solución de reacción a una gota de 12 M HCl, después se determinó mediante 1H NMR). La mezcla de reacción se agitó a 15-25 °C durante 12 horas bajo atmósfera de N2. La 1H NMR mostró que el compuesto 10c se había retenido (se agregó una gota de solución de reacción a una gota de 12 M HCl, después se determinó mediante 1H NMR). La mezcla de reacción se filtró y la torta del filtro se suspendió en 4 M de solución de HCI (15 mL) a 15-25 °C y se mantuvo agitando a 15-25 °C durante 30 min, después la mezcla se filtró y la torta del filtro se secó bajo presión reducida para obtener un compuesto 10c (2,42 g, 7,70 mmol, 83,7 % de rendimiento) como un sólido color blanco, que se confirmó mediante 1H NMR.
1H NMR: 400 MHz, CDCla
8 3,60 (s, 3H), 2,19-2,33 (m, 4H), 1,41,48-1,63 (m, 4H), 1,12-1,33 (m, 22H).
Procedimiento general para la preparación del compuesto 10d
Figure imgf000088_0001
A una suspensión del compuesto 10c (2,42 g, 7,70 mmol) en THF (25,0 mL) se agregó BH3-Me2S (10,0 M, 940 uL) por goteo a 0-10 °C bajo atmósfera de N 2 y se mantuvo agitando a 10-20 °C durante 12 Horas bajo atmósfera de N2. La 1H NMR mostró que el compuesto 10d se había retenido (se agregó una gota de solución de reacción a una gota de 12 M HCl, después se determinó mediante 1H NMR). La mezcla de reacción se vertió en solución saturada de NH4Cl (25 mL) a 0-10 °C y se mantuvo agitada a 10-20 °C durante 15 mind, la fase acuosa se extrajo con EtOAc (50 mLx 2), la fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y el filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo se verificó mediante 1H NMR. La TLC 1(éter de petróleo/acetato de etilo = 3/1). El residuo se purificó mediante columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo, 20/1 a 3/1), el punto (Rf = 0,32) se recolectó para dar el compuesto 10d (1,98 g, 6,59 mmol, 85,6 % de rendimiento) como un sólido color blanco, que se confirmó mediante 1H NMR.
1H NMR: 400 MHz, CDCla
83,60 (s, 3H), 3,57 (t, J = 7,2 Hz, 2 H), 2,23 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,44-1,61 (m, 4H), 1,13-1,33 (m, 22H).
Procedim iento general para la preparación del com puesto 10e
Figure imgf000088_0002
A una suspensión del compuesto 10d (1,98 g, 6,59 mmol) en DCM (20,0 mL) se agregó TEA (1,33 g, 13,2 mmol, 1,83 mL), DMAP (80 mg, 655 umol) y cloruro de 4-metilbencenosulfonilo (1,63 g, 8,57 mmol) a 10-20 °C bajo atmósfera de N 2 y se mantuvo agitada a 10-20 ° C durante 16 horas bajo atmósfera de N2. A la mezcla se le añadió agua (50,0 mL) a 10­ 20 °C y la fase orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y el filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo, 1/1 a 3/0), el punto (Rf = 0,83) se recolectó para dar el compuesto 10e (1,43 g, 3,15 mmol, 47,7 % de rendimiento) como un sólido color blanco.
1H NMR: 400 MHz, CDCla;
87,72 (d, J = 8,4Hz, 2H), 7,27 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 3,95 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,60 (s, 3H), 2,38 (s, 3H), 2,23 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,52-1,60 (m, 4H), 1,10-1,28 (m, 24H).
Procedim iento general para la preparación del com puesto 10 f
Figure imgf000088_0003
A una solución del compuesto 10e (1,43 g, 3,15 mmol) en MeOH (20 mL) y H2 O (1,50 mL) se agregó NaN3 (310 mg, 4,77 mmol) a 15- 25 °C, después la mezcla se calentó a 64-65 °C y se mantuvo agitándose a 64-65 °C durante 19 horas. La 1H NMR mostró que el compuesto 10e había desaparecido y se encontró el compuesto 10f (a 0,3 mL de la solución de reacción se agregó NaHCO3 saturado (5 mL) y DCM (4,00 mL), la fase orgánica se concentró bajo presión reducida a 25 °C, después se determinó por 1H NMR). La mezcla de reacción se enfrió a 15-25 °C. La mezcla de reacción no se purificó y se usó directamente para la siguiente etapa.
1H NMR: 400 MHz, CDCb;
83,69 (s, 3H), 3,28 (t, J= 6 ,8 Hz, 2H), 2,34 (t, J= 6 ,8 Hz, 2H), 1,56-1,72 (m, 4H), 1,24-1,43 (m, 22H).
Procedim iento general para la preparación del com puesto 10g
Figure imgf000089_0001
A la mezcla del compuesto 10f (1,02 g, 3,13 mmol) se agregó PPh3 (1,48 g, 5,64 mmol) a 15-25 °C y se mantuvo agitándose a 15-25 °C durante 12 horas. La 1H NMR mostró que el compuesto 10f había desaparecido y se encontró el compuesto 10g (la solución reactante se determinó directamente mediante 1H NMR). A la mezcla se agregó solución 1 M de HCI hasta pH = 1-2 a 15-25 °C, después la mezcla se concentró bajo presión reducida. Al residuo se agregó EtOAc (15,0 mL) a 15-25 °C y se mantuvo agitándose a 15-25 °C durante 15 min, se filtró y la torta del filtro se secó bajo presión reducida para obtener 10g (1,15 g, TsOH y sal de HCI) como un sólido color blanco.
1H NMR: 400 MHz, DMSO-cfó;
8 7,70 (s, 3H), 7,48 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,12 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,58 (s, 3H), 2,70-2,83 (m, 2H), 2,29 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,29 (s, 1,5H), 1,45-1,58 (m, 4H), 1,19-1,34 (m, 24H).
Procedim iento general para la preparación del com puesto 10h
Figure imgf000089_0002
A la mezcla del compuesto 10g (1,15 g, TsOH y sal de HCI) en DCM (10 mL) y MeOH (1 mL) se agregó Boc2O (1,03 g, 4,71 mmol, 1,08 mL), DMAP (39 mg, 319 umol) y TEA (794 mg, 7,84 mmol, 1,09 mL) a 15-25 °C y se mantuvo agitándose a 15-25 °C durante 12 h bajo atmósfera de N2. La MS mostró que el valor de MS del compuesto 10g había desaparecido. La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo, 1/0 a 20/1), para obtener el compuesto 10h (341 mg, 853 umol, 27,2 % de rendimiento) como un sólido color blanco.
1H NMR: 400 MHz, CDCl3;
8 4,42 (s, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,03 (q, J = 6,4 Hz, 2H), 2,23 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,49-1,61 (m, 4H), 1,37 (s, 9H), 1,11-1,29 (m, 24H).
Procedimiento general para la preparación del compuesto intermedio 10i
Figure imgf000090_0001
A la mezcla del compuesto 10h (341 mg, 853 mmol) en THF (4 mL) y H2O (2 mL) se agregó LiOH»H2O (46 mg, 1,10 mmol) a 0-10 °C y se mantuvo agitándose a 20-30 °C durante 12 horas. A la mezcla se agregó agua (20,0 mL) y EtOAc (50 mL), después solución de ácido cítrico al 10 % hasta que el pH = 3 a 0-10 °C. La fase orgánica se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y el filtrado se concentró bajo presión reducida, que se confirmó mediante 1H NMR. El residuo se purificó mediante columna de gel de sílice (éter de petróleo/acetato de etilo, 1/0 a 5/1). El punto (Rf = 0,22) se recolectó para obtener el compuesto 10i (228 mg, 591 umol, 69,3 % de rendimiento) como un sólido color blanco.
1H NMR: 400 MHz, CDCla
8 4,54 (s, 1H), 3,00-3,20 (m, 2H), 2,37 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,60-1,70 (m, 4H), 1,46 (s, 9H), 1,21-1,40 (m, 24H).
Figure imgf000090_0002
A la solución del compuesto 10i (128 mg, 332 mmol) y del compuesto 10_1 (118 mg, 432 mmol) en ACN (30,0 mL) se agregó NMI (190 mg, 2,31 mmol, 184 uL) y TCFH (240 mg, 855 umol) a 20-30 °C bajo atmósfera de N 2 y se mantuvo agitando a 20-30 °C durante 20 h bajo atmósfera de N2. La LCMS mostró que el valor de MS del compuesto 10j no se encontró. Se agregó a la mezcla TCFH (240 mg, 855 umol) y NMI (190 mg, 2,31 mmol, 184 uL) a 20-30 °C bajo atmósfera de N 2 y se mantuvo agitándose a 20-30 °C durante 16 horas bajo atmósfera de N 2. La LCMS mostró que el valor de la MS del compuesto 10j (RT = 1,208 min, MS = 641,5) no se encontró. La mezcla de reacción se vertió en agua (30 mL) a 0-10 °C, la fase acuosa se saturó con NaCl sólido y se extrajo con EtOAc (80 mL x 2), la fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y el filtrado se concentró bajo presión reducida a 30 °C, que se confirmó mediante LCMS RT = 1,215 min, MS = 641,5). El residuo se purificó por fase inversa (TFA), la fracción recolectada (RT = 1,215 min) se concentró directamente bajo presión reducida para obtener un compuesto 10j (42 mg, 65,5 umol, 19,7 % de rendimiento, 100 % de pureza) como sólido color blanco.
LCMS: (método 1), RT = 1,213 min, m/z (M+1)= 641,5
Procedimiento general para la preparación del compuesto 10k
Figure imgf000091_0001
A una solución del compuesto 10j (42 mg, 65,5 mmol) en DCM (3,00 mL) se agregó (154 mg, 1,35 mmol, 100 uL) a 20­ 30 °C bajo atmósfera de N2 y se mantuvo agitando a 20-30 °C durante 5 horas bajo atmósfera de N 2. La LCMS mostró que el valor de la MS del compuesto 10k (RT = 0,938 min, MS = 541,3) no se encontró. La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida a 30 °C para dar un compuesto 10k (40 mg, 58,8 umol, 89,8% de rendimiento, 96,3% de pureza) como un sólido color amarillo, que se confirmó mediante LCMS, RT = 0,933 min, m/z (M+1) = 541,4).
LCMS: (método 1), RT = 0,933 min, m/z (M+1)= 541,4
Figure imgf000091_0002
A la solución del compuesto int 8 (30 mg, 69,9 umol) y DIPEA (37 mg, 286 umol, 49,9 uL) en DMF (2,00 mL) se agregó HATU (40 mg, 105 umol) y una solución del compuesto 10k ( 48 mg, 73,3 umol, TFA) en DMF (2,00 mL) a 0-10 °C bajo atmósfera de N 2 y se mantuvo agitando a 0-10 °C durante 4 horas bajo atmósfera de N2. A la mezcla de reacción se agregó ácido acético glacial hasta que un pH = 5-6 a 0-5 °C, después la mezcla se vertió en agua (20,0 mL) a 0-5 °C, la fase acuosa se extrajo con EtOAc (30,0 mL x 3), la fase orgánica combinada se secó sobre Na2SO4anhidro, se filtró y el filtrado se concentró bajo presión reducida, el residuo se verificó mediante LCMS. El residuo se purificó mediante prep-HPLC (columna: Phenomenex Luna C18 150*40mm*15um; fase móvil: [agua (0,1 %TFA) - Ac N]; B%: 62 %-92 %, 11 min), la fracción recolectada se concentró directamente bajo presión reducida. El residuo se verificó mediante LCMS (RT = 2,946 min, MS = 952,5). El residuo se purificó además mediante prep-HPLC (columna: Phenomenex GeminiNX C18 75*30mm*3um; fase móvil: [agua (0,1 %TFA) - ACN]; B%: 70 % - 80 %, 7 min), la fracción recolectada se concentró directamente bajo presión reducida para obtener el compuesto “A57” (7,02 mg, 7,25 umol, 10,4 % de rendimiento, 98,3 % de pureza) como un sólido color café.
1H NMR: 400 MHz, DMSO-de;
6 11,58 (s, 1H), 11,15 (s, 1 H), 9,68 (s, 1H), 8,69 (t, J = 6,0 Hz, 1H), 8,42-8,52 (m, 2H), 7,83 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,61 (d, J = 6 ,8 Hz, 1H), 7,53 (dd, J = 8 ,8 , 2,0 Hz, 1 H), 7,43 (d, J = 8 ,8 Hz, 1H), 7,11 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,97-7,09 (m, 3H), 6,72 (s, 1H), 5,14 (dd, J = 12,8, 6,4 Hz, 1H), 4,43 (dd, J = 15,6, 6 ,8 Hz, 1H), 4,28 (dd, J = 16,4, 6,0 Hz, 1 H), 3,87-3,93 (m, 1H) 3,28 (q, J = 6,4 Hz, 3H), 3,05 (q, J = 6,0 Hz, 1H), 2,83-2,97 (m, 2H), 2,55-2,70 (m, 7H), 2,46 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,13-2,20 (m, 1H), 1,99-2,10 (m, 3H), 1,46-1,67 (m, 5H), 1,15-1,41 (m, 46H).
19F NMR: 400 MHz, DMSO-de;
8 -110,35.
LCMS: (método 2), RT = 2,946 min, m/z (M+1)= 952,5 LCMS: (método 1), RT = 1,139 min, m/z (M+1)= 952,5 HPLC: (método 3), RT = 2,715 min
2. Pruebas ejemplares del compuesto
1. Cultivo celular
Se cultivaron células HCT116 en placas de 6 pozos. Se agregó con pipeta 1 mL de medio recién elaborado y se incubó por al menos 1 h (37 °C, 5 % de CO2, 95 % de rH).
Las células se cosecharon y contaron en Vi-Cell. Equinr. 70198475 se ajustó la concentración celular a 0,35e6 células/mL y se agregó 1 mL de suspensión celular (total 0,35e6 células/pozo). Las células se incubaron durante 24 horas (37 °C, 5 % CO 2, 95 % rH)
2. Tratamiento del compuesto
HCT116: 24h: ~50 % confluente antes del tratamiento
Tratamiento con compuestos seleccionados
Los compuestos de descongelarán la primera vez, solución concentrada: 10 mM; concentración final: 10 |jM y 1 mM y 0,1 |jM
El tratamiento con solución basada en DMSO con el Abastecedor Digital: HCT116 platte 2A1.jpg_meta.xml
^ crear un nuevo protocolo de abastecimiento para el compuesto
^ aplicar el nombre del compuesto de prueba y su concentración concentrada (en mM) para la prueba
^ series de diluciones de 3x 1:10
^ 0,3 % de DMSO final, normalización del DMSO para cada pozo
^ agitar después del agregado del compuesto/DMSO
Las células se incubaron durante 24 horas más (37 °C, 5 % CO 2, 95 % rH)
3. Lisado celular
HCT116: 70-80 % confluente antes del lisado
- las células se lisaron después de la incubación con solución amortiguadora de lisis RIPA que incluye inhibidor de proteasa y de fosfatasa Halt™
Cóctel (1x)
todas las etapas se realizaron en hielo o a 4°C
- aspirar el sobrenadante de las células
- lavar las células dos veces con 2,0 mL de solución amortiguadora PBS enfriada con hielo
- aspirar el sobrenadante de las células después de cada etapa de lavado
- lisar las células con 100 jiL de solución amortiguadora Ripa por pozo
- raspar las células con raspador de células y los lisados se transfirieron a tubos Eppendorf
- incubar durante 15 min en hielo
- centrifugar durante 150 min a 13000 x g y 4 °C
- transferir los sobrenadantes a tubos Eppendorf nuevos
- retirar 20 jiL de lisado para el ensayo de BCA [por sus siglas en inglés]
- hacer en alícuota y congelar a -20 °C
4. Ensayo de BCA de los extractos de proteínas
Determinación de la concentración de proteína de los lisados con el kit de ensayo de BCA para proteínas. El BSA suministrado con el kit es de 2 mg/mL.
Diluir el estándar (concentración de la solución concentrada de BSA = 2 mg/mL) en una placa de 96 pozos: Las muestras se corrieron a 1:4. Diluir en solución amortiguadora de lisado, la solución amortiguadora de lisado se corrió sola para determinar el fondo de los detergentes en el ensayo.
Reactivo BCA: Diluir el reactivo A y el reactivo B en una relación de 1:50. A 9,8 mL del reactivo A agregar 200 |jL del reactivo B.
Procedimiento de ensayo: Colocar con pipeta 5 jL/pozo del estándar o de muestras en 96 pozos (véase el diseño de la placa). Las muestras se corrieron por duplicado. Solución blanco = 5 jL/pozo PBS o 5 jL/pozo de solución amortiguadora de lisado. Agregar 100 jL/pozo del reactivo preparado de BCA. Tapar la placa para mezclar o agitar durante 1-2 min en el mezclador Eppendorf. Incubar a 37 °C durante 30 min.
Leer la DO (OD) a 562 nm. La placa se leyó en EnVision 2104 Multilabel Reader (Perkin Elmer, número de equipo 70160330) última verificación del instrumento el 17-08-2017 (una vez al año) (A25/531). AEH181012_BCA.csv
5. Análisis de datos:
Los duplicados se promediaron en EXCEL y el fondo promedio del PBS se restó para obtener la curva estándar.
Se creó una línea de tendencia, la ordenada en el origen (b) se estableció en 0. La R2 debe ser de >0,950 para resultados aceptables. La solución blanco de la solución amortiguadora del lisado se restó de los valores de la prueba y los valores promediados y corregidos de fondo de la D.O. se usaron con la ecuación para calcular mg/ml y después se corrigieron para obtener el factor de dilución para el valor de mg/mL final. Solo los resultados de los valores de OD dentro del intervalo de la curva estándar son aceptables. Los valores fuera del intervalo de la curva estándar fueron ignorados. BCA AEH00350 Berechnung.xlsx
6. Cálculo y preparación de la muestra
- descongelar los lisados en hielo de AEH00350
- calcular el volumen de la muestra para transferencia tipo Western (Western Blot, WB) cargando 10 jg de proteína total / 13 jL por ranura:
- diluir las muestras con solución amortiguadora de lisado y 10x de agentes reductores y 4x de solución amortiguadora LDS a 10jg.
- calentarlos a 70 °C durante 10 min y 1000 rmp
7. Análisis de transferencia tipo Western (WB)
- insertar un NuPAGE 4-12 % Bis-Tris Midi Gel (26 pozos) y fijar en cámara de electroforesis de dispositivo celular Criterion (BIORAD, #165-6001)
- llenar la cámara con solución amortiguadora de corrida 1x NuPAGE MES SDS
- llenar las muestras con pipeta, véase estándar de proteína pre-tinción Blue Plus 2 y MagicMark XP por combo: - 3 jL de Marcador Magic Marker y 7 mL de Marcador Seeblue, 13 jL de muestra por diseño de ranura xlsx (slotlayout.xlsx)
- dos geles con el diseño siguiente
- corrida de 2D-SDS-Página: 45 min con const. 200 V (suministro de energía directa)
- remojar la membrana de nitrocelulosa en metanol y papel de transferencia en solución amortiguadora de transferencia 1x
- preparar la transferencia intercalada: papel de transferencia 2x, gel, membrana, papel de transferencia 2x a un Fast Blot B44 (Biometra, #015-200)
- corrida de transferencia tipo Western: 1h 35 min con const. 150mA
Bloqueo
- transferir la membrana a la solución amortiguadora de bloqueo y agitar durante 1 h a temperatura ambiente (RT) - Bloqueo de la solución: Solución amortiguadora de bloqueo Odyssey
Incubación con anticuerpo primario MetAP2 clon EPR6887 RabMAb Abcam ab134124 (1:5000)
- Solución de anticuerpo primario: 0,5x de solución amortiguadora de bloqueo Odyssey 0,5x PBS 0,1 % de Tween20 - incubación con anticuerpo primario durante toda la noche a 4°C con agitado ligero:
Incubación con anticuerpo secundario (cabra anti-conejo (700nm), sondas moleculares A2107639542A (1:20000)
- lavar las membranas en 4 ocasiones durante 10 minutos a temperatura ambiente
- Solución de lavado: 1x de PBS 0,1 % de Tween20
- Incubar la membrana con anticuerpo secundario durante 1h en un agitador a temperatura ambiente en la oscuridad - Solución de anticuerpo secundario: 0,5x de solución amortiguadora de bloqueo Odyssey 0,5x PBS 0,1 % de Tween20+ 0,01 %
SDS
- última etapa de lavado solo con 1x de PBS
- obtener imágenes de la membranas en el generador de imágenes Odyssey
Tabla 1
Figure imgf000094_0001
Los ejemplos siguientes están relacionados con medicamentos:
Ejemplo A: Viales de inyección
Una solución de 100 g de un principio activo de fórmula I y 5 g de hidrogenofosfato disódico en 3 l de agua bidestilada se ajusta a pH 6,5 con 2 N de ácido clorhídrico, se filtra en condiciones estériles, se transfiere a viales para inyección, se liofiliza en condiciones estériles y se cierra herméticamente en condiciones estériles. Cada vial de inyección contiene 5 mg de ingrediente activo.
Ejemplo B: Supositorios
Se funde una mezcla de 20 g de un principio activo de fórmula I con 100 g de lecitina de soja y 1400 g de manteca de cacao, se vierte en moldes y se deja enfriar. Cada supositorio contiene 20 mg de ingrediente activo.
Ejemplo C: Solución
Se prepara una solución a partir de 1 g de un ingrediente activo de fórmula I, 9,38 g de NaH2PO4 • 2 H2O, 28,48 g de Na2HPO4 • 12 H2O y 0,1 g de cloruro de benzalconio en 940 ml de agua bidestilada. El pH se ajustó a 6,8, y la solución se llevó a 1 l, se esterilizó mediante irradiación. Esta solución se puede usar en forma de gotas oftálmicas.
Ejemplo D: Ungüento
Se mezclan 500 mg de un principio activo de la fórmula I con 99,5 g de vaselina en condiciones asépticas.
Ejemplo E: Comprimidos
Una mezcla de 1 kg de principio activo de la fórmula I, 4 kg de lactosa, 1,2 kg de fécula de patata, 0,2 kg de talco y 0,1 kg de estearato de magnesio se prensa de forma convencional para obtener comprimidos de forma tal que cada comprimido contiene 10 mg de ingrediente activo.
Ejemplo F: Grageas
Los comprimidos se prensan de manera análoga al Ejemplo E y posteriormente se recubren de manera convencional con un recubrimiento de sacarosa, almidón de patata, talco, tragacanto y colorante.
Ejemplo G: Cápsulas
Se introducen 2 kg de ingrediente activo de fórmula I en cápsulas de gelatina dura de forma convencional de manera que cada cápsula contenga 20 mg del ingrediente activo.
Ejemplo H: Ampollas
Una solución de 1 kg de ingrediente activo de fórmula I en 60 l de agua bidestilada se filtra en condiciones estériles, se transfiere a ampollas, se liofiliza en condiciones estériles y se sella en condiciones estériles. Cada ampolla contiene 10 mg de ingrediente activo.

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Compuestos de la fórmula I
    Q1-Q2-Q3 I
    en que
    Q1 denota
    Figure imgf000096_0001
    Z denota O u CH2,
    Q denota O, NH, NCH3 o CH2,
    Q2 denota alquileno no ramificado que tiene 4-25 átomos de C, en que los grupos 1-8 de CH2 no adyacentes se pueden reemplazar por O, CONH y/o NHCO y en que un grupo CH2 se puede reemplazar por
    Figure imgf000097_0001
    Q3 denota
    Figure imgf000097_0002
    L denota NR4CO, CONR4, NH, O, CO, S, SO2, SO(=NH), NHCONH, SO2NH o NHSO2,
    R denota NR2R4, Alc, C(=CH2)[C(R4)2]nAr2, Het2, O[C(R4)2]nAr2 u OA,
    X denota CO o CH2,
    Y denota CO o CH2,
    R1 denota (CH2K [C(R4)2]nAr1-, (CH2)nHet-, (CH2)nCic-, [C(R4)2]nCONHAr1-, [C(R4)2]nNA-, O[C(R4)2]nAr1- o [C(R4)2]nCOO(CH2)nAr1-, en donde el sustituyente L está conectado directamente a Ar1, Het o Cic,
    R2 denota H, [C(R4)2]nAr2, (CH2)nCOHet1, (CH2)nCOAr2 , (CH2)mNA2, (CH2)nCic o (CH2)nHet1,
    R3 denota OH u OCOA,
    R4 denota H o un alquilo que tiene 1,2, 3 o 4 átomos de C,
    R2 y R4 en conjunto también denotan un alquileno que tiene 2, 3, 4 o 5 átomos de C, donde un grupo CH2 puede reemplazarse también por N(CH2)mOH o SO2,
    R5, R6 cada uno, independientemente entre sí, H, F o A,
    R5 y R6 en conjunto también denotan un alquileno que tiene 2, 3, 4 o 5 átomos de C, donde un grupo CH2 se puede reemplazar también por NCOA u O,
    R7 denota H, Hal o A,
    Ar1 denota fenilo, que es no sustituido o mono, di- tetra o pentasustitutido por Hal, OH, OA, CONH2, CONHA, CONA2, NHSO2A, CONHCic, NHSO2Cic, CONHAr2, Het1, COHet1 y/o NASO2A,
    Ar2 denota un fenilo que es no sustituido o mono, di, tri, tetra o pentasustituido por Hal, A, CONH2, y/u OAr3,
    Ar3 denota un fenilo que es no sustituido o monosustituido por NH2,
    Het denota un mono o bicíclico saturado, no saturado o heterociclo aromático que tiene 1 a 4 átomos de N, y/o O y/o S que son no sustituidos o mono, di o trisustituido por Hal, A, OA, CN, NH2, NHA, NA2, NO2, CN, COOH, c Oo A, (CH2)nCONH2, (CH2)nCONHA, (CH2)nCONA2, NHCOA, COA, CHO, Het1, SO2A, SO2NH2, SO2NHA, SO2NA2, CONHNH2, CONHAr3, =O y/o Ar3,
    Het1 denota piridazinil, pirazolil, piridil, piperazinil, morfolinil, pirimidinil, furil, tienil, imidazolil, pirrolil, oxazolil, oxadiazolil, isoxazolil, tiazolil, triazolil, tetrazolil, tiadiazol, piperidin-1-il, pirrolidin-1-il, tetrahidropiranil, 1,2-oxazinan-2-il, 1,2,5-oxadiazinan-2-il, 1,3-oxazinan-3-il o hexahidro-pirimidinil, cada uno de los cuales es no sustituido o mono, di o trisustituido por A y/u OA,
    Het2 denota isoindolil,
    A denota un alquilo no ramificado o ramificado que tiene 1-10 átomos de C, en que 1-7 átomos de H se pueden reemplazar por F, Cl, Br, Oh , CHO, COA, COOA, CN, CONA2, CONHA y/o CONH2, y/o en que uno o dos grupos CH y/o CH2 no adyacentes se pueden reemplazar por O u Cic,
    Alc denota un alquenilo que tiene 2, 3, 4, 5 o 6 átomos de C
    Cic denota un alquilo cíclico que tiene 3-7 átomos de C que es no sustituido o mono, di o trisustituido por NHCOA, NHSO2, OH, OA, A, NH2, NHA, NA2, COOA, COOH y/o CONHA,
    Hal denota F, Cl, Br o I,
    m denota 1, 2, 3 o 4,
    n denota 0, 1, 2, 3 o 4,
    p denota 1, 2 o 3,
    y sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos, que incluyen sus mezclas en todas las proporciones.
    2. Compuestos de acuerdo con la reivindicación 1 en que
    Het denota pirazinilo, pirazolilo, benzimidazolilo, piridilo, tienilo, furanilo, indolilo, dihidroindolilo, benzofuranilo, tetrahidropiranilo, dihidroquinolinilo, dihidroisoquinolinilo, tetrahidroquinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo, indazolilo, imidazolilo, pirrolilo, oxazolilo, oxadiazolilo, isoxazolilo, benzotiazolilo, piperidin-1-ilo, pirrolidin-1-ilo, 3,4-dihidro-2H-pirido[3,2-b]-1,4-oxazinilo, 3,4-dihidro-2H-benzo-1,4-oxazinilo, benzofuranilo, azetidinilo, 1H-pirrolo[2,3-b]piridinilo, 2H-cromenilo, 3-azabicilo[3.2.0]hexilo, pirrolo[2,3-b]piridinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidro-1,8 -nafthiridinil 2,3-dihidrobenzoisotiazolilo, 1 ,2,3,4-tetrahidrobenzotiazinil o hexahidrobenzo-1 ,3-dioxolilo, cada uno de los cuales es no sustituido o mono-, di- o trisustituido por Hal, A, OA, CN, NH2, NHA, NA2, NO2, CN, COOH, COOA, (CH2)nCONH2, (CH2)nCONHA, (CH2)nCONA2, NHCOA, COA, CHO, Het1, SO2A, SO2NH2, SO2NHA, SO2NA2, CONHNH2, CONHAr3, =O y/o Ar3; y sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos, que incluyen sus mezclas en todas las proporciones.
    3. Compuestos de acuerdo con la reivindicación 1 o 2 , en que
    Q1 denota
    Figure imgf000098_0001
    y solvatos, sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos, que incluyen sus mezclas en todas las proporciones.
    4. Compuestos de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1-3, en que
    R denota NR2R4,
    y solvatos, sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos, que incluyen sus mezclas en todas las proporciones.
    5. Compuestos de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1-4, en que
    R1 denota (CH2)n, [C(R4)2]nAr1- o (CH2)nHet-,
    y solvatos, sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos, que incluyen sus mezclas en todas las proporciones.
    6. Compuestos de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1-5, en que
    R2 denota [C(R4)2]nAr2, (CH2)nCic o (CH2)nHet1,
    y solvatos, sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos, que incluyen sus mezclas en todas las proporciones.
    7. Compuestos de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1-6, en que
    Het denota benzimidazolilo o indolilo, cada uno de los cuales es no sustituido o monosustituido por Hal, y solvatos, sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos, que incluyen sus mezclas en todas las proporciones.
    8. Compuestos de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1-7, en que
    A denota alquilo lineal o ramificado que tiene 1-6 átomos de C, en
    que 1-5 átomos de H se pueden reemplazar por F, Cl y/u OH, y solvatos, sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos, que incluyen sus mezclas en todas las proporciones.
    9. Compuestos de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 1-8, en que
    Q1 denota
    Figure imgf000099_0001
    Z denota O u CH2,
    Q denota O, NH, NCH3 o CH2,
    Q2 denota alquileno no ramificado que tiene 4-25 átomos de C, en que los grupos 1-8 de CH2 no adyacentes se pueden reemplazar por O, CONH y/o NHCO y en que un grupo CH2 se puede reemplazar por
    Figure imgf000099_0002
    Q3 denota
    Figure imgf000100_0001
    L denota NR4CO, CONR4, NH, O, CO, S, SO2, SO(=NH), NHCONH, SO2NH o NHSO2,
    R denota NR2R4,
    X denota CO o CH2,
    Y denota CO o CH2,
    R1 denota (CH2)n, [C(R4)2]nAr1 o (CH2)nHet-, en donde el sustituyente L está conectado directamente a Ar1, Het o Cic, R2 denota [C(R4)2]nAr2, (CH2)nCic o (CH2)nHet1,
    R3 denota o H,
    R4 denota H o un alquilo que tiene 1,2, 3 o 4 átomos de C,
    R5, R6 denota H,
    R7 denota H, Hal o A,
    Ar1 denota fenilo,
    Ar2 denota fenilo que es no sustituido o mono-, di-, tri- o tetra-sustituido por Hal,
    Het denota pirazinilo, pirazolilo, benzimidazolilo, piridilo, tienilo, furanilo, indolilo, dihidroindolilo, benzofuranilo, tetrahidropiranilo, dihidroquinolinilo, dihidroisoquinolinilo, tetra-hidroquinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo, indazolilo, imidazolilo, pirrolilo, oxazolilo, oxadiazolilo, isoxazolilo, benzotiazolilo, piperidin-1-ilo, pirrolidin-1-ilo, 3,4-dihidro-2H-pirido[3,2-b]-1,4-oxazinilo, 3,4-dihidro-2H-benzo-1,4-oxazinilo, benzofuranilo, azetidinilo, 1H-pirrolo[2,3-b]piridinilo, 2H-cromenilo, 3-azabicilo[3.2.0]hexilo, pirrolo[2,3-b]piridinilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidro-1,8 -nafthiridinil 2,3-dihidrobenzoisotiazolilo, 1 ,2,3,4-tetrahidrobenzotiazinil o hexahidrobenzo-1 ,3-dioxolilo, cada uno de los cuales es no sustituido o mono-, di- o trisustituido por Hal, A, OA, CN, NH2, NHA, NA2, NO2, CN, COOH, COOA, (CH2)nCONH2, (CH2)nCONHA, (CH2)nCONA2, NHCOA, COA, CHO, Het1, SO2A, SO2NH2, SO2NHA, SO2NA2, CONHNH2, CONHAr3, =O y/o Ar3;
    Het1 denota piridilo, furilo, tienilo, imidazolilo o pirrolilo,
    A denota alquilo no ramificado o ramificado que tiene 1-6 átomos de C, en que 1-5 átomos de H se pueden reemplazar por F, Cl y/u OH,
    Cic denota alquilo cíclico que tiene 3-7 átomos de C,
    Hal denota F, Cl, Br o I,
    n denota 0, 1, 2, 3 o 4,
    p denota 1, 2 o 3,
    y solvatos, sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos, que incluyen sus mezclas en todas las proporciones.
    10. Compuestos de acuerdo con la reivindicación 1, seleccionados del grupo
    Figure imgf000100_0002
    Figure imgf000101_0001
    Figure imgf000101_0002
    Figure imgf000102_0001
    Figure imgf000103_0001
    Figure imgf000104_0001
    Figure imgf000105_0001
    Figure imgf000106_0001
    Figure imgf000107_0001
    Figure imgf000108_0001
    Figure imgf000109_0001
    Figure imgf000110_0001
    Figure imgf000111_0001
    y solvatos, sales, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos, que incluyen sus mezclas en todas las proporciones.
    11. Proceso para la preparación de compuestos de la fórmula I de acuerdo con las reivindicaciones 1-10 y sales, solvatos, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos,
    en donde L denota CONR4,
    caracterizado porque un compuesto de fórmula II
    Figure imgf000112_0001
    en que X, R, R1, R3, R5, R6, R7 y p tienen los mismos significados señalados en la reivindicación 1,
    y L1 denota Cl, Br, I o un grupo OH libre o modificado funcionalmente de forma reactiva,
    se hace reaccionar con un compuesto de la fórmula III
    Q1-Q2-NH2 III
    en que Q1 y Q2 tienen los significados señalados en la reivindicación 1, y/o
    una base o ácido de la fórmula I se convierte en una de sus sales.
    12. Medicamentos que comprenden al menos un compuesto de la fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 y/o sales, solvatos, tautómeros, estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos, que incluyen sus mezclas en todas las proporciones, y opcionalmente un portador, excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable.
    13. Compuestos de la fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 y sales, solvatos, tautómeros y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos en todas las proporciones, para uso en el tratamiento y/o la prevención de tumores, metástasis tumorales, enfermedades proliferativas de las células mesangiales, hemangioma, retinopatía proliferativa, artritis reumatoide, neovascularización aterosclerótica, psoriasis, neovascularización ocular, osteoporosis, diabetes y obesidad, leucemia linfoide, linfoma, paludismo e hipertrofia prostática
    14. Compuestos para uso de acuerdo con la reivindicación 13, donde la enfermedad tumoral se selecciona del grupo del epitelio escamoso, de la vejiga, del estómago, de los riñones, de la cabeza y el cuello, del esófago, del cuello uterino, de la tiroides, del intestino, del hígado, del cerebro, de la próstata, del tracto urogenital, del sistema linfático, del estómago, de la laringe, del pulmón, de la piel, leucemia monocítica, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de pulmón de células pequeñas, cáncer de páncreas, glioblastoma, carcinoma de mama, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica, leucemia linfática aguda, leucemia linfática crónica, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin.
    15. Medicamentos que comprenden al menos un compuesto de la fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 y/o sales, solvatos y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de estos, que incluyen sus mezclas en todas las proporciones, y al menos un ingrediente activo adicional del medicamento.
    16. Conjunto (kit) que consiste en paquetes separados de
    (a) una cantidad efectiva de un compuesto de la fórmula I de acuerdo con la reivindicación 1 y/o sus sales, solvatos y estereoisómeros farmacéuticamente aceptables, que incluyen sus mezclas en todas las proporciones, y
    (b) una cantidad efectiva de un ingrediente activo adicional del medicamento.
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