CN1165301A - 探测蛋白质的改进方法 - Google Patents
探测蛋白质的改进方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1165301A CN1165301A CN97102543A CN97102543A CN1165301A CN 1165301 A CN1165301 A CN 1165301A CN 97102543 A CN97102543 A CN 97102543A CN 97102543 A CN97102543 A CN 97102543A CN 1165301 A CN1165301 A CN 1165301A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- protein
- alkyl
- polymkeric substance
- hsa
- poly
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 82
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 82
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 36
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title description 7
- -1 poly(alkyl acrylates) Polymers 0.000 claims abstract description 44
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims abstract description 36
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 19
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 52
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 22
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 20
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims description 19
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 claims description 15
- HGAZMNJKRQFZKS-UHFFFAOYSA-N chloroethene;ethenyl acetate Chemical group ClC=C.CC(=O)OC=C HGAZMNJKRQFZKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 15
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 claims description 15
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M Acrylate Chemical compound [O-]C(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 13
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 claims description 13
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 claims description 11
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 claims description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 11
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 10
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 10
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N decanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC(O)=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 8
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 7
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 6
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 claims description 6
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 claims description 5
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-M hexanoate Chemical compound CCCCCC([O-])=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 4
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims description 4
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- OWZPCEFYPSAJFR-UHFFFAOYSA-N 2-(butan-2-yl)-4,6-dinitrophenol Chemical compound CCC(C)C1=CC([N+]([O-])=O)=CC([N+]([O-])=O)=C1O OWZPCEFYPSAJFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- QPMIVFWZGPTDPN-UHFFFAOYSA-N Tetrabromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C(C(Br)=C(Br)C(Br)=C2Br)=C2S(=O)(=O)O1 QPMIVFWZGPTDPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 3
- FWLDHHJLVGRRHD-UHFFFAOYSA-N decyl prop-2-enoate Chemical compound CCCCCCCCCCOC(=O)C=C FWLDHHJLVGRRHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 3
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 3
- 238000012764 semi-quantitative analysis Methods 0.000 claims description 3
- KUQNCHZOCSYKOR-UHFFFAOYSA-N 1,1-dioxospiro[2,1$l^{6}-benzoxathiole-3,9'-xanthene]-3',4',5',6'-tetrol Chemical compound O1S(=O)(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C(O)=C1OC1=C(O)C(O)=CC=C21 KUQNCHZOCSYKOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 claims description 2
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004214 Fast Green FCF Substances 0.000 claims description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 2
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 claims description 2
- 235000019240 fast green FCF Nutrition 0.000 claims description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 2
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- XJRBAMWJDBPFIM-UHFFFAOYSA-N methyl vinyl ether Chemical group COC=C XJRBAMWJDBPFIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 125000005910 alkyl carbonate group Chemical group 0.000 claims 2
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- IMROMDMJAWUWLK-UHFFFAOYSA-N Ethenol Chemical group OC=C IMROMDMJAWUWLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- RZSYLLSAWYUBPE-UHFFFAOYSA-L Fast green FCF Chemical compound [Na+].[Na+].C=1C=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C(=CC(O)=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=CC=1N(CC)CC1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 RZSYLLSAWYUBPE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 235000012544 Viola sororia Nutrition 0.000 claims 1
- 241001106476 Violaceae Species 0.000 claims 1
- DGOBMKYRQHEFGQ-UHFFFAOYSA-L acid green 5 Chemical compound [Na+].[Na+].C=1C=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=CC=1N(CC)CC1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 DGOBMKYRQHEFGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-L adipate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCCCC([O-])=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims 1
- ZPFKRQXYKULZKP-UHFFFAOYSA-N butylidene Chemical group [CH2+]CC[CH-] ZPFKRQXYKULZKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract description 13
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 abstract description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 abstract 7
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 abstract 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 abstract 3
- 125000005670 ethenylalkyl group Chemical class 0.000 abstract 2
- 229920001603 poly (alkyl acrylates) Polymers 0.000 abstract 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 23
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 23
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 13
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- NMHYCKTXIQQVPE-UHFFFAOYSA-N 2-iodo-6-nitro-4-[4,5,6,7-tetrabromo-3-(4-hydroxy-3-iodo-5-nitrophenyl)-1,1-dioxo-2,1lambda6-benzoxathiol-3-yl]phenol Chemical compound Oc1c(I)cc(cc1[N+]([O-])=O)C1(OS(=O)(=O)c2c1c(Br)c(Br)c(Br)c2Br)c1cc(I)c(O)c(c1)[N+]([O-])=O NMHYCKTXIQQVPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 11
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 9
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 6
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 6
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 6
- 102000002070 Transferrins Human genes 0.000 description 6
- 108010015865 Transferrins Proteins 0.000 description 6
- MWKFXSUHUHTGQN-UHFFFAOYSA-N decan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCO MWKFXSUHUHTGQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 6
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 6
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 6
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 description 5
- SZNYYWIUQFZLLT-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-1-(2-methylpropoxy)propane Chemical compound CC(C)COCC(C)C SZNYYWIUQFZLLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000005632 Capric acid (CAS 334-48-5) Substances 0.000 description 4
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 4
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Substances C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 125000002704 decyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 206010013786 Dry skin Diseases 0.000 description 2
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 2
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- ZSWFCLXCOIISFI-UHFFFAOYSA-N cyclopentadiene Chemical compound C1C=CC=C1 ZSWFCLXCOIISFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-M dodecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCC([O-])=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 125000003438 dodecyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 2
- OBNCKNCVKJNDBV-UHFFFAOYSA-N ethyl butyrate Chemical compound CCCC(=O)OCC OBNCKNCVKJNDBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FKRCODPIKNYEAC-UHFFFAOYSA-N ethyl propionate Chemical compound CCOC(=O)CC FKRCODPIKNYEAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940070765 laurate Drugs 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000002803 maceration Methods 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N methyl red Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1\N=N\C1=CC=CC=C1C(O)=O CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N 0.000 description 2
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 2
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 2
- 239000011118 polyvinyl acetate Substances 0.000 description 2
- 229920001289 polyvinyl ether Polymers 0.000 description 2
- DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M sodium;dodecane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCS([O-])(=O)=O DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HGPSVOAVAYJEIJ-XDHOZWIPSA-N 2-[(e)-(3,4-dihydroxyphenyl)-(3-hydroxy-4-oxoniumylidenecyclohexa-2,5-dien-1-ylidene)methyl]benzenesulfonate Chemical compound C1=CC(=O)C(O)=C\C1=C(C=1C(=CC=CC=1)S(O)(=O)=O)/C1=CC=C(O)C(O)=C1 HGPSVOAVAYJEIJ-XDHOZWIPSA-N 0.000 description 1
- FEUFEGJTJIHPOF-UHFFFAOYSA-N 2-butyl acrylic acid Chemical compound CCCCC(=C)C(O)=O FEUFEGJTJIHPOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QRAFJHXNLQTXQW-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropyl hydrogen carbonate Chemical compound CC(C)COC(O)=O QRAFJHXNLQTXQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXIFAEWFOJETOA-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-butyl Chemical group [CH2]CCCO SXIFAEWFOJETOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NDWUBGAGUCISDV-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybutyl prop-2-enoate Chemical compound OCCCCOC(=O)C=C NDWUBGAGUCISDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YPIFGDQKSSMYHQ-UHFFFAOYSA-N 7,7-dimethyloctanoic acid Chemical compound CC(C)(C)CCCCCC(O)=O YPIFGDQKSSMYHQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700004676 Bence Jones Proteins 0.000 description 1
- BMTAFVWTTFSTOG-UHFFFAOYSA-N Butylate Chemical compound CCSC(=O)N(CC(C)C)CC(C)C BMTAFVWTTFSTOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- DQEFEBPAPFSJLV-UHFFFAOYSA-N Cellulose propionate Chemical compound CCC(=O)OCC1OC(OC(=O)CC)C(OC(=O)CC)C(OC(=O)CC)C1OC1C(OC(=O)CC)C(OC(=O)CC)C(OC(=O)CC)C(COC(=O)CC)O1 DQEFEBPAPFSJLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NMEZJSDUZQOPFE-UHFFFAOYSA-N Cyclohex-1-enecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CCCCC1 NMEZJSDUZQOPFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N Dimethyl ether Chemical compound COC LCGLNKUTAGEVQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006424 Flood reaction Methods 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000004721 Polyphenylene oxide Substances 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N Propylene oxide Chemical compound CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000009954 braiding Methods 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000005587 carbonate group Chemical group 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical group 0.000 description 1
- 229920006218 cellulose propionate Polymers 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 229920000891 common polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000547 conjugated polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 125000001033 ether group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- RZSYLLSAWYUBPE-UHFFFAOYSA-M fast green fcf Chemical compound [Na+].[Na+].C=1C=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C(=CC(O)=CC=2)S(O)(=O)=O)C=CC=1N(CC)CC1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 RZSYLLSAWYUBPE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M hexadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LMHJFKYQYDSOQO-UHFFFAOYSA-N hydroxydecanoic acid Natural products CCCCCC(O)CCCC(O)=O LMHJFKYQYDSOQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- DGOBMKYRQHEFGQ-UHFFFAOYSA-M light green sf Chemical compound [Na+].[Na+].C=1C=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=CC=1N(CC)CC1=CC=CC(S(O)(=O)=O)=C1 DGOBMKYRQHEFGQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- DZVCFNFOPIZQKX-LTHRDKTGSA-M merocyanine Chemical compound [Na+].O=C1N(CCCC)C(=O)N(CCCC)C(=O)C1=C\C=C\C=C/1N(CCCS([O-])(=O)=O)C2=CC=CC=C2O\1 DZVCFNFOPIZQKX-LTHRDKTGSA-M 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 125000001196 nonadecyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- FSAJWMJJORKPKS-UHFFFAOYSA-N octadecyl prop-2-enoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCOC(=O)C=C FSAJWMJJORKPKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- JRZJOMJEPLMPRA-UHFFFAOYSA-N olefin Natural products CCCCCCCC=C JRZJOMJEPLMPRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YJCJVMMDTBEITC-UHFFFAOYSA-N omega-Oxy-caprinsaeure Natural products OCCCCCCCCCC(O)=O YJCJVMMDTBEITC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000007793 ph indicator Substances 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 229920000570 polyether Polymers 0.000 description 1
- 229920006254 polymer film Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 1
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 description 1
- 229920002689 polyvinyl acetate Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229910052573 porcelain Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 102220010920 rs397507455 Human genes 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000003460 sulfonic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/483—Physical analysis of biological material
- G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
- G01N33/49—Blood
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Ecology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
尿液中人血清白蛋白(HSA)的测定如下完成：将尿液接触含缓冲剂和蛋白质致误指示剂的试剂系统，在与蛋白质致误指示剂的反应中，其它通常发现于尿液中的蛋白质能够与HSA进行竞争，因而它们影响HSA检测的敏感性。本发明包括加入一些聚合物竞争性抑制剂至试剂系统中，这些抑制剂对蛋白质致误指示剂与HSA外的尿液中蛋白质的反应，抑制作用较强，而对指示剂与HSA的反应，抑制作用较弱，因而能提高试剂对HSA的敏感性。合适的聚合物抑制剂包括：聚乙烯烷基酯、聚烷基丙烯酸酯、聚乙烯烷基碳酸酯和聚乙烯烷基酮。
Description
本发明涉及用一种检测系统测定含水流体，如尿液中，的蛋白质，该检测系统含有蛋白质致误指示剂和缓冲剂。在几种影响肾脏、呼吸和中枢神经系统的病理状态的诊断中，确定尿样中存在着蛋白质是很重要的。通常需要定性或定量地测定尿液中的蛋白质，尤其是与糖尿病或肾脏疾病的诊断有关时。尿液中与糖尿病有关的主要蛋白质是白蛋白，它是分析中最常用的蛋白质。
人们已经知道几种确定尿液中存在着蛋白质的方法。最方便的是以少量尿液浸湿一种吸收条，该吸收条以蛋白质致误指示剂和缓冲剂饱和过。蛋白质致误指示剂是含有可电离基团的pH指示剂，该可电离基团在蛋白质存在时，可被置换，产生可测定的颜色变化。该指示剂在pH发生变化时，会产生同样的颜色变化，所以，在检测系统中包括有缓冲剂很重要，藉此避免pH上升，因为这种pH的上升会使指示剂在无蛋白质存在的情况下发生颜色变化，而导致假阳性结果。
以蛋白质致误指示剂，如酚磺酞，的结合为基础的蛋白质测定方法，是相对非特异性的蛋白质测定方法，本发明包括使用一些竞争性抑制剂，以提高建立在蛋白质致误指示剂的结合基础上的方法的特异性。
美国专利第5187104号讨论了蛋白质测定方法中DIDNT染料的使用，并且提到将颜色促进聚合物与试剂联用。其中提到的特定聚合物有聚丙二醇、聚丙烯醚碳酸酯和聚乙烯醚，也提到了Bayer AG标明为KOK10002的聚醚碳酸酯、来自Bayer AG的1，6-二甲基-4-壬基酚的环氧丙烷和环氧乙烷加成物，其商品名为Fenoil D4030，以及来自BASF，标明为Lutonal ISO的聚乙烯醚。
美国专利第5124266号提到使用一种检测条检测尿液中蛋白质，该检测条包括吸水载体基质，其中含蛋白质致误指示剂和缓冲剂，以基于聚氨基甲酸乙酯的化合物处理之，以防止背景颜色出现，藉以提高检测条之敏感性。
Pugia等的美国专利第5424125号提到使用聚乙烯醇和聚乙烯羧酸作为结合物，以防止缓冲剂由反应板流出。然而，没有人讨论过以下问题：能否用这些复合物加以提高或改变该方法对一种蛋白质相对其它蛋白质的特异性。
在1983年的Bunseki(32)379-386页中，Y.Fujiti谈到了在基于金属螯合染料的蛋白质检测中，使用聚乙烯醇。这篇文章谈到，聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮适合作为单细胞形成过程中的非离子表面活性剂，但未提到对白蛋白特异性的提高。
关于长链烷烃对蛋白质致误指示剂结合蛋白质的影响，已开展了一些研究。长链烷基羧酸，如软脂酸，对蛋白质致误指示剂的结合的影响，已有Kragh-Hansen在1974年的Biophysics Acta(365)360-371页中论及。软脂酸酯对酚红与白蛋白的结合，显示出中度抑制效果，其它蛋白质没有被研究过。基于此，无法预料长链烷基能改变蛋白质结合的特异性。
其他研究表明，长链烷基磺酸，如十二烷基磺酸钠，影响蛋白质致误指示剂的结合。Marcart等在1984年的Clinica Chimica Acta(141)77-84页中，Perini等在1984年的Clinica Chimica Acta(143)321-3238页中发表的研究结果表明，十二烷基磺酸钠平衡了考马斯亮蓝(CBB)对几种蛋白质的敏感性的差异，并且降低了检测白蛋白的特异性。基于此结果，可以预料长链烷基能降低系统对白蛋白的特异性。
发明概述
本发明涉及含水测试样品中人血清白蛋白的半定量分析，通过将被怀疑含有该蛋白质的流体与检测试剂接触，该检测试剂包括一种蛋白质致误指示剂染料，该指示剂与蛋白质接触会产生可测定的颜色变化而完成。本发明公开了一种改进方法，它包括向检测试剂中加入竞争性抑制剂，抑制剂可用以下化学式A表示：
其中
是一连接基团，A和B可以是一单键或氧原子。当A是氧原子，B是单键时，该聚合物为聚乙烯烷基酯；当A是单键B是氧原子时，聚合物是聚烷基丙烯酸酯；当A和B均为氧原子时，聚合物是碳酸酯；当A和B均为单键时，聚合物为聚乙烯烷基酮。R取代基为1-20个碳原子的直链、分支或环状的烷基，其中0-10个氢原子可被羟基取代。聚合物骨架包括重复的烷基或碳酸酯亚单位，如纤维素或葡萄糖胺这些亚单位可与非反应性封闭单位共聚合，通过连接基团连接到重复的聚合物亚单位上的烷基数可从10％到理论上的最大值90％。
根据本发明，在考虑中的蛋白质致误指示剂的检测中，已发现有一些聚合物抑制剂降低蛋白质致误指示剂对蛋白质的反应性。某些特定的聚合物对蛋白质致误指示剂与人血清白蛋白(HSA)的反应，抑制作用较弱，而对指示剂与其它尿液中常见蛋白质的反应，抑制作用较强。它们是测定HSA浓度的试剂的理想添加物，因为这样一种系统对HSA的特异性会得到提高。本发明中有用的聚合物抑制剂可用化学式A表示，这一化学式表示的聚合物，可以是聚乙烯烷基酯、聚烷基丙烯酸酯、聚乙烯烷基碳酸酯或聚乙烯烷基酮。本发明中发现的几种有用的聚合物列出于表5。聚合物为聚乙烯烷基酯，即前述化学式中A是氧原子，B是单键时，除了表5中列出者外，还包括一些特定的聚合物，其烷基分别为cyclohexenoate，反-5-癸酸酯，10-羟基癸酸酯和5-羟基癸酸酯，而且不限于以上情形。当使用聚烷基丙烯酸酯，即A是单键，B是氧原子时，除了表5中列出者外，合适的聚合物还包括：其烷基为辛基、环已基、双环已基和5-甲基已基的聚合物。特定的聚乙烯烷基碳酸酯，即根据前述化学式，A和B均为氧原子时，除了表5中列出者外，还包括：其烷基为十九烷基、癸基、4-羟基庚基、环戊二烯的聚合物。而A和B均为单键时表示的聚乙烯酮、包括烷基为丁基、癸基、新癸酸酯和十八烷基的聚合物，以及列出于表5中的聚合物。本发明中，这些聚合物是否有用，其分子量不是关键因素，但聚合度(n)为20-40000的聚合物较为可取，因为它们能吸附于HSA分子表面。
本发明的目的之一是用于一种分析检测条，它能测定尿液中的HSA，该检测条包括吸收载体，载体先以合适的蛋白质致误指示剂、缓冲剂和聚合物抑制剂饱和过。合适的蛋白质致误指示剂包括：四溴酚蓝(TBPB)、5，5″-二硝基-3′，3″-二碘-3，4，5，6-四溴酚磺酞(DIDNTB)、考马斯亮蓝、坚牢绿FCF、淡绿SF、焦棓酚红、邻苯二酚紫、除此之外，也可使用美国专利第5279790号公开的部花青和硝基或亚硝基取代的聚卤代酚磺酞。
检测条吸收载体优先选用滤纸，其它可用作吸收载体的材料在美国专利第3846247号中提到过，包括：毛毡、多孔瓷条和编织或缠结的玻璃纤维，合适的材料还包括木头、布、海绵状物和陶土，这些在美国专利第3552928号中提到过。或者吸收载体可采用非多孔性材料，如聚合物膜或玻璃。
制备检测条时，吸收载体以含蛋白质致误指示剂、缓冲剂和聚合物抑制剂的溶液饱和。这种饱和过程通常包括两步浸渍过程，首次浸渍液包括水或水/极性有性溶剂混合物，其中溶有缓冲剂。干燥后，检测条于二次浸渍液中浸渍。二次浸渍液为有机溶剂，其中溶有蛋白质致误指示剂和聚合物抑制剂，指示剂浓度通常为约0.2-5.0mM。
浸渍干燥后，检测条即可使用。使用时通常包括将检测条浸入尿样中，观察指示剂的颜色变化。观察可手工进行，也可使用反射分光计，以便更准确地定量。
进行分析的pH取决于试剂体系中所用的特定染料，最适合特定染料的缓冲剂是已知的，或可通过常规试验方便地确定。
实施本发明的方法详见以下实施例，这些实施例和其中包括的数据证实：正如前面的简要说明所指出的那样，使用聚合物提高染料结合方法对人血清白蛋白(HSA)的特异性是理想的。这种方法提高了尿液中HSA测定的诊断价值，使肾脏健康状况的评价更为准确。实施例I
在无聚合物存在和几种聚合物的浓度逐渐升高的情况下，分别测定了酚磺酞染料[5′，5″-二硝基-3′，3″-二碘-3，4，5，6-四溴酚磺酞(DIDNTB)]和HSA特异性，对几种长链取代烷烃也进行了测定，被测添加物的通式表示于下面的图解式I中：
R 名称 R 名称 R 名称C9H19 癸酸C15H31 十六烷酸 C17H35 聚乙烯硬脂酸酯H 聚乙烯醇
名称聚苯乙烯马来酸共聚物R 名称CO2H 聚丙烯酸SO3H 聚乙烯磺酸CONC(CH3)2CH2SO3H聚(2-丙烯酰胺-2-甲基-1-丙基磺酸)C6H4SO3Na 聚(4-苯乙烯磺酸钠)
图解式I
测定按以下方法进行：
DIDNTB蛋白质试剂由Alhstorm204滤纸经两次饱和制得。其中首次饱和采用含水乙醇混合物，其中含有酒石酸作为缓冲剂，甲基红作为背景染料，pH调至2.1。二次饱和采用甲苯/四氢呋喃混合物，其中含有DIDNTB指示剂染料和Lutanot M 40(一种聚乙烯甲基醚)，后者作为颜色促进聚合物。
水溶性聚合物，如聚乙烯醇、聚乙烯磺酸和聚(2-丙烯酰胺-2-甲基-1-丙基磺酸)，加入首次混合物。而水不溶性添加物，如癸醇、癸酸、十六烷酸、聚乙烯硬脂酸酯、聚苯乙烯/马来酸酐和聚(4-苯乙烯磺酸钠)，加入二次混合物。
混合物溶液用于饱和滤纸。每次饱和后，滤纸于105℃干燥7分钟。所得干燥试剂切成试剂条，将试剂条浸入含0或30mg/dL人血清白蛋白的尿液，或含40mg/dL其它尿液中蛋白质的尿液中，用来自BagerDiagnostics的Clinitek-200+反射分光光度计检测，每次浸渍液的详细成分列出于表3。
加入HSA之前，尿样用超滤膜过滤，该超滤膜能拦截分子量为10KDa(千道尔顿)以上的分子，因而能除去天然出现的蛋白质。尿样中总蛋白的测定，采用免疫HSA分析和上文引述过的Perini等的考马斯亮蓝(CBB)方法。筛选了175个临床样品以提供不含白蛋白而含其他尿液中蛋白质的样品。经测定，175个样品中有4个样品其总蛋白/HSA比率大于10，一个样品的比率为242。将这些尿液收集起来，用阴性尿液稀释至终浓度为：以CBB方法测定为40mg/dL，免疫HSA分析测定为1.2mg/dL，试剂反应性在CLINITEK-200+仪器上测定，结果为1000x％Reflectance@610nm/％reflectance@690nm。阴性尿液和含蛋白质的尿液间的差别为蛋白质反应性，这一试验获得的数据列出于表1。其中不含聚合物或被取代的烷烃添加物的对照体系的蛋白质反应性。与含有聚合物或烷烃的体系的蛋白质反应性进行了比较，以确定反应性的变化百分率。负数表明蛋白质反应性的损失较大。
在这些添加物存在下，将HSA反应性与其它尿液中蛋白质的反应性进行了比较，尿液中其他蛋白质包括：Tamm Horsefall糖蛋白。Bence-Jones蛋白，2-1-微珠蛋白、血红蛋白和几种低分子量蛋白片段。添加物的使用浓度为0.1％(w/w)，以使各种情况下都可测到HSA反应性，获得的数据列出于表2。0.1％的浓度相当于添加物浓度为10-20μM，超过了被测蛋白4.4μM的浓度。只有聚乙烯硬脂酸酯对其他尿液中蛋白质的抑制作用较强，而对HSA的抑制作用较弱，这表明，它能提高酚磺酞法对白蛋白的特异性，因而聚乙烯硬脂酸酯能提高酚磺酞法测定尿液中HSA的特异性。由表1可以确定，其他添加物或者没有效果，与对照相比在10％以内，或者同等地抑制HSA和其他尿液中蛋白质。由于存在6mM替代烷烃，如癸醇、癸酸和十六烷酸，不影响蛋白质反应性，可以确定：聚乙烯硬脂酸酯的效果不能仅归于聚合物中的烷基。
表1
反应性变化百分率
尿液蛋白 HSA
40mg/dL 30mg/dL无添加物 0％ 0％癸醇 6mM 8％ 3％癸酸 6mM 2％ 7％十六烷酸 6mM 1％ -2％聚乙烯醇 0.10％ -4％ -7％聚乙烯丙烯酸 0.10％ -5％ -6％聚乙烯硬脂酸酯 0.10％ -42％ -15％聚乙烯磺酸 0.10％ -51％ -51％聚(2-丙烯酰胺-2-甲基- 0.10％ -38％ -39％1-丙基磺酸)聚苯乙烯/马来酸酐 0.10％ -12％ -13％聚(4-苯乙烯磺酸钠) 0.10％ -38％ -40％
只有聚乙烯硬脂酸酯较大幅度地降低蛋白质致误指示剂对HSA外的尿液中蛋白质的敏感性，而较小幅度地降低指示剂对HSA的敏感性，因而只有它被选用作有效的抑制剂。含磺酸、烷基或芳香基的聚合物，使指示剂对HSA和其它尿液中蛋白质的敏感性同等地降低，如表1所示。聚乙烯磺酸和聚(4-苯乙烯磺酸钠)使指示剂的敏感性，包括对HSA和其它尿液中蛋白质的敏感性，降低的幅度最大。敏感性的降低随聚合物浓度上升而增加。另一方面，含羟基和羧酸盐团的聚合物，即使在高浓度下，也不降低指示剂对HSA和其它尿液中蛋白质的敏感性，如表2所示。这些结果表明，一些聚合物能降低蛋白质指示剂的蛋白质反应性。然而，为了使聚合物能有效地提高特异性，HSA反应性受到的影响，应当小于其他类型蛋白质的反应性受到的影响。
表2
聚合物浓度对HSA敏感性的影响
30mg/dL HSA的抑制百分率浓度 2.00％ 1.00％ 0.75％ 0.50％ 0.40％ 0.25％ 0.20％ 0.10％ 0.05％聚(2-丙烯酰胺-2-甲基-1 62％ 61％ 61％ 44％ 37％ 19％-丙基磺酸)聚(4-苯乙烯磺酸钠) 92％ 69％ 42％ 18％聚乙烯磺酸 71％ 71％ 55％ 44％聚乙烯醇 10％ -3％ 3％聚丙烯酸 3％ -4％ -6％聚乙烯硬脂酸酯 36％ 26％ 20％ 15％聚苯乙烯/马来酸酐 54％ 36％ 24％ 11％
表3
DIDNTB蛋白质试剂组分
成分 功能 使用浓度 允许范围
首次处理
水 溶剂 1000mL ---
甲基红 背景染料 9.5mL 0-10mg
乙醇 溶剂 100g 0-40g％
酒石酸 缓冲剂 64g(280mM) 50-750mM水溶性添加物 见表1 0.01to4g％
pH -- 2.1 1.5-3.5
二次处理
甲苯 溶剂 95mL ---
THF 溶剂 5mL 0-50mL
DIDNTB 指示剂 65.7mg(0.6mM) 0.2-5.0mMLutonal M40 聚合物促进剂0.143g％ 0-1.0g％水不溶性添加物 见表1 0.01to4g％实施例II
图解式H中所示一系列烷基聚合物存在及不存在的情况下，测定了DIDNTB染料的特异性。
图解式II见原文P14R 名称 R 名称CH3 聚乙烯乙酸酯 H 聚乙烯醇C2H5 聚乙烯丙酸酯 CH3 聚乙烯甲醚
(LUTANOLM-40)C3H7 聚乙烯丁酸酯(CH2)5CH(CH3)2 聚乙烯新癸酸酯 C2H5 聚乙烯乙醚C5H11 聚乙烯已酸酯 CH2CH(CH3)2聚乙烯异丁醚C9H17 聚乙烯癸酸酯C11H23 聚乙烯月桂酸酯C17H35 聚乙烯硬脂酸酯R 名称COCH3 聚甲基乙烯酮R 名称C4H9 聚丁基丙烯酸酯C4H8OH 聚(4-羟基丁基丙烯酸酯)C6H13 聚已基丙烯酸酯C10H21 聚癸基丙烯酸酯C12H25 聚月桂基丙烯酸酯C18H37 聚十八烷基丙烯酸酯
R 名称CH2CH(CH3)2聚乙烯异丁基碳酸酯
图解式II
为了将该实施例与常规操作联系起来，采用蛋白质试剂中常用的其他聚合物，对DIDNTB染料的特异性进行了分析，这些聚合物包括LutanolM40(见U.S.5424215)，KOK10071聚合物(见U.S.5424215)和聚乙烯醇。这些聚合物不能提高DIDNTB染料对白蛋白的特异性。KOK10071和Lutanol M40聚合物提高所有蛋白质的检测敏感性，而PVA没有明显效果，这一点可以从美国专利第5187104号和5424125号的内容中预料到。比较这些聚合物获得的数据列出于表4。
表4
代表性聚合物的比较
610nm处反应性变化百分率
0-8 0-20 0-20 0-300
体系包括 mg/dL mg/dL mg/dL mg/dL μg/pad
浓度 HSA Hb TRANS LYS Uptake无聚合物 0.000％ 12.8 8.6 7.0 11.2 17.2聚丙烯醚碳酸酯0.250％ 21.6 28.4 23.4 30.4 15.8(KOK 10071)聚乙烯醇(PVA) 0.250％ 10.8 7.1 5.4 7.6 16.8聚乙烯甲基醚 0.100％ 22.1 28.6 23.1 26.2 15.8(Lutanol M40)对照(LUTANOL 同上 20.0 33.4 24.2 16.2 15.3&KOK 10071&
PVA)
将四组烷基聚合物加入至含常用聚合物的对照配方中，对它们进行了比较。这些聚合物分别含醚、酯、丙烯酸酯和碳酸酯连接基团，对这些配方的白蛋白(HSA)、血红蛋白(Hb)、转铁蛋白(TRANS)和溶菌酶(LYS)敏感性进行了比较，结果见表5。HSA特异性提高表现为：对血红蛋白、转铁蛋白或溶菌酶的敏感性下降较大(即0％)，而对HSA的敏感性下降较小(即理想情况为≥100％。
表5
实施例2中烷基聚合物的比较
相对反应性百分率
对照 8 20 20 300
体系含有 mg/dL mg/dL mg/dL mg/dL μg/pad
浓度 Id HSA Hb TRANS LYS Uptake
醚基团聚乙烯乙醚0.025％ 6a 92％ 88％ 85％ 91％ 12.3
0.100％ 6b 70％ 80％ 75％ 8.8聚乙烯异丁醚 0.025％ 7a 75％ 80％ 50％ 76％ 5.0
0.100％ 7b 32％ 28％ 10％ 5.4
酯基团聚乙烯乙酸酯 0.025％ 8a 98％ 99％ 84％ 42％ 12.1
0.100％ 8b 120％ 98％ 92％ 13.0聚乙烯丙酸酯 0.025％ 9a 98％ 99％ 109％ 46％ 12.5
0.100％ 9b 41％ 53％ 33％ 9.3聚乙烯丁酸酯 0.025％ 10a 149％ 108％ 68％ 60％ 9.6
0.100％ 10b 22％ 20％ 6％ 7.0聚乙烯已酸酯 0.025％ 11a 128％ 50％ 10％ 23％ 8.1
0.100％ 11b 111％ 19％ 14％ 5.1聚乙烯新癸酸酯 0.025％ 12a 58％ 61％ 16％ -12％ 8.3
0.100％ 12b 31％ 54％ 26％ 8.9聚乙烯癸酸酯 0.025％ 25a 45％ 15％ 15％ -4％ 11.2
0.100％ 25b 25％ 22％ 22％ 7.4聚乙烯月桂酸酯 0.025％ 13a 92％ 76％ 55％ 17％ 12.6
0.100％ 13b 0％ 8％ 16％ 11.1聚乙烯硬脂酸酯 0.025％ 14a 111％ 102％ 94％ 43％ 13.6
0.100％ 14b 104％ 94％ 99％ 12.9
酮基团聚甲基乙烯酮 0.025％ 15a 92％ 91％ 95％ 27％ 9.3
0.100％ 15b 110％ 96％ 101％ 7.1丙烯酸酯基团聚丁基丙烯酸酯 0.025％ 18a 92％ 59％ 82％ 23％ 12.5
0.100％ 18b 64％ 46％ 12％ 12.1聚(4-羟基丁基丙 0.025％ 19a 125％ 107％ 101％ 68％ 7.9
烯酸酯
0.100％ 19b 77％ 99％ 93％ 4.8聚已基丙烯酸酯 0.025％ 20a 78％ 74％ 96％ 30％ 5.7
0.100％ 20b 43％ 39％ 38％ 5.6聚癸基丙烯酸酯 0.025％ 21a 56％ 50％ 65％ 1％ 9.1
0.100％ 21b 25％ 42％ 32％ 6.9聚月桂基丙烯酸酯 0.025％ 22a 113％ 94％ 100％ 27％ 10.9
0.100％ 22b 63％ 78％ 65％ 9.9聚十八烷基丙烯酸 0.025％ 23a 92％ 88％ 91％ 47％ 7.0
酯
0.100％ 23b 91％ 77％ 71％ 5.4碳酸酯基团聚乙烯异丁基碳酸 0.025％ 24a 29％ -9％ -9％ 9％ 8.3
酯
0.100％ 24b 6％ 0％ -9％ 7.2碳水化合物中酯基
团纤维素丁酸酯 0.105％ 25a 88％ 82％ 78％ 43％ 8.7纤维素丙酸酯 0.105％ 26a 83％ 79％ 73％ 39％ 9.3
由表5可以确定，醚不影响染料的特异性、酯、酮和碳水化合物都提高其特异性，表现为：溶菌酶敏感性下降，而HSA敏感性不变或下降较少。最佳特异性见于已酸酯、新癸酸酯，去特异性见于已酸酯，新癸酸酯、癸基和癸酸酯烷基，具有这些基团的聚合物也降低血红蛋白和转铁蛋白的敏感性，分支的和含羟基的烷基以及具有酯烷基的碳水化合物骨架也有效果。
表5中所示反应性是相对于无任何烷基聚合物的对照配方的，由于测定结果偏差，只有大于10％的结果才被认为是显著的。所有体系中均含Lutanol，KOK和PVA。其浓度在表4中提及。
同前一实施例一样，实施例II的试验步骤包括对滤纸进行两次饱和。首次饱和采用含水乙醇混合物，其中含有酒石酸缓冲剂和PVA，后者作为结合聚合物，混合物pH调至2.1。二次饱和采用甲苯混合物，其中含有蛋白质指示剂染料(DIDNTB)和促进剂聚合物(Lutanol M40和KOK 10071)，混合溶液用来饱和滤纸。每次饱和后，滤纸于105℃干燥7分钟。试剂配方中各成分的功能、适用浓度和允许范围于表6中列出。
表6成分 功能 使用浓度 允许范围
首次处理
水 溶剂 1000mL ---乙醇 溶剂 40.75mL 0-40g％PVA聚合物 结合物 0.25g％ 0-5g％柠檬酸钠 缓冲剂 41.7g 50-750mM酒石酸 缓冲剂 45.1g 50-750mM
pH -- 2.25 1.5-3.5
二次处理甲苯 溶剂 96.5mL ---THF 溶剂 3.5mL 0-50mLDIDNTB 指示剂 0.329g(3mM) 0.2-5.0mLLutonal M40 聚合物促进剂 0.100g％ 0-1.0g％KOK 10071 聚合物促进剂 0.250g％ 0-10.0g％
水不溶性抑制剂见表4 0.025％and0.1％ 0.01to4g％
Claims (18)
1.对含水测试样品中人血清白蛋白的半定量分析，该测试样品被怀疑含有人血清白蛋白以及其他蛋白质，该分析通过将被怀疑含有蛋白质的流体与检测试剂接触，该检测试剂包括蛋白质致误指示剂染料和缓冲剂，染料与蛋白质接触时，会产生可测定的颜色变化而完成，改进方法包括向检测试剂中加入竞争性抑制剂，抑制剂为以下化学式所表示的聚合物：其中
是一连接基团，A和B可以是一单键或氧原子，当A是氧原子，B是键时，该聚合物为聚乙烯烷基酯，当A是单键，B是氧原子时，聚合物是聚烷基丙烯酸酯，当A和B均为氧原子时，聚合物是聚乙烯烷基碳酸酯，当A和B均为键时，聚合物为聚乙烯烷基酮，R为1-20个碳原子的直链，分支或环状烷基，其中0-10个氢原子为羟基取代，聚合物骨架包括重复的烷基或碳水化合物亚单位，这些亚单位能与非反应性封闭单位共聚合，通过连接基团连接到重复的聚合物亚单位的烷基数，或达到理论上的最大值10％-90％。
2.权利要求1的方法，其中聚合物骨架由重复的烷基单位组成。
3.权利要求2的方法，其中重复的烷基单位为1，2-亚乙基，1，2-亚丙基，或亚丁基。
4.权利要求1的方法，其中聚合物骨架由重复的碳水化合物单位组成。
5.权利要求4的方法，其中重复的碳水化合物单位为丙烯酰胺，纤维素或葡萄糖胺。
6.权利要求1的方法，其中非反应性封闭单位为乙烯醇、环氧乙烯、丙二醇、1，2-亚乙基乙醚(ethylene ethyl ether)、乙烯基甲醚、马来酸酐、丙烯酸、己二酸酯或碳酸酯。
7.权利要求1的方法，其中蛋白质致误指示剂是酚磺酞染料。
8.权利要求1的方法，其中蛋白质致误指示剂是四溴酚蓝、5′，5″-二硝基-3′，3″-二碘-3，4，5，6，-四溴酚磺酞、考马斯亮蓝、坚牢绿FCF、淡绿SF、焦棓酚红或邻苯二酚紫。
9.权利要求1的方法，其中竞争性抑制剂为聚乙烯基烷基酯。
10.权利要求9的方法，其中聚乙烯烷基酯为聚乙烯已酸酯、聚乙烯新癸酸酯或聚乙烯癸酸酯。
11.权利要求9的方法，其中竞争性抑制剂为聚烷基丙烯酸酯。
12.权利要求11的方法，其中聚烷基丙烯酸酯为聚已基丙烯酸酯或聚癸基丙烯酸酯。
13.权利要求1的方法，其中竞争性抑制剂为聚乙烯基烷基碳酸酯。
14.权利要求13的方法，其中聚乙烯基烷基碳酸酯为聚乙烯基异丁基碳酸酯。
15.权利要求1的方法，其中竞争性抑制剂为聚乙烯基烷基酮。
16.权利要求15的方法，其中聚乙烯基烷基酮为聚甲基乙烯酮。
17.权利要求1的方法，其中含水流体是尿液。
18.半定量分析尿液中人血清白蛋白的检测装置，该装置包括吸收载体，载体中吸收有蛋白质致误指示剂染料，缓冲剂和权利要求1描述的竞争性抑制剂。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/609,674 US5750405A (en) | 1996-03-01 | 1996-03-01 | Method for the detection for protein |
| US609,674 | 1996-03-01 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1165301A true CN1165301A (zh) | 1997-11-19 |
Family
ID=24441825
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN97102543A Pending CN1165301A (zh) | 1996-03-01 | 1997-02-26 | 探测蛋白质的改进方法 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5750405A (zh) |
| EP (1) | EP0793099A1 (zh) |
| JP (1) | JPH09243638A (zh) |
| KR (1) | KR970065286A (zh) |
| CN (1) | CN1165301A (zh) |
| AU (1) | AU706440B2 (zh) |
| CA (1) | CA2189586A1 (zh) |
| TW (1) | TW438976B (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1322329C (zh) * | 2002-08-09 | 2007-06-20 | 爱科来株式会社 | 蛋白质测定用试验片及其制造方法 |
| CN1839317B (zh) * | 2003-05-19 | 2012-05-30 | 东丽株式会社 | 选择结合性物质固定化载体 |
| CN105699371A (zh) * | 2016-01-28 | 2016-06-22 | 湖北雅仕达生物技术有限公司 | 一种检测液体中含有醛的试剂及制备方法 |
| CN106957247A (zh) * | 2017-03-16 | 2017-07-18 | 长春万成生物电子工程有限公司 | 一种微蛋白指示剂的纯化方法 |
| CN108120714A (zh) * | 2017-12-20 | 2018-06-05 | 吉林省汇酉生物技术股份有限公司 | 一种检测尿液尿微量白蛋白的试剂及其应用 |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL140993A0 (en) | 2000-05-15 | 2002-02-10 | Bayer Ag | Trypsin substrate and diagnostic device, and method of using same |
| WO2002004658A1 (en) * | 2000-07-06 | 2002-01-17 | Cytoskeleton, Inc. | Compositions to measure protein concentration |
| US6955921B2 (en) | 2001-04-30 | 2005-10-18 | Bayer Corporation | Trypsin substrate and diagnostic device, and method of using same |
| AU2002311527A1 (en) * | 2001-06-25 | 2003-01-08 | Bayer Healthcare Llc | Total protein detection methods and devices at low ph |
| US7563621B2 (en) * | 2002-03-05 | 2009-07-21 | Siemens Healhcare Diagnostics Inc | Absorbing organic reagents into diagnostic test devices by formation of amine salt complexes |
| US20090117660A1 (en) * | 2005-04-30 | 2009-05-07 | Oakville Hong Kong Co., Limited | Devices and methods for sample collection and analysis |
| US20070092401A1 (en) * | 2005-10-26 | 2007-04-26 | Feier Liao | Devices and methods for sample collection and analysis |
| US9804154B2 (en) | 2013-03-12 | 2017-10-31 | Epinex Diagnostics, Inc. | Rapid test for urine albumin and urine creatinine |
| AU2017339942B2 (en) | 2016-10-03 | 2023-06-29 | Dompe Farmaceutici S.P.A. | Prevention and treatment of diabetic nephropathy |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2001557A1 (en) * | 1988-12-19 | 1990-06-19 | Timothy M. Coryn | Test method and device for total protein assay |
| US5187104A (en) * | 1991-06-06 | 1993-02-16 | Miles Inc. | Nitro or nitroso substituted polyhalogenated phenolsulfonephthaleins as protein indicators in biological samples |
| US5424215A (en) * | 1994-02-07 | 1995-06-13 | Miles Inc. | Assay for the determination of protein in a biological sample |
-
1996
- 1996-03-01 US US08/609,674 patent/US5750405A/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-09-04 TW TW085110807A patent/TW438976B/zh active
- 1996-11-04 CA CA002189586A patent/CA2189586A1/en not_active Abandoned
-
1997
- 1997-02-18 EP EP97102554A patent/EP0793099A1/en not_active Withdrawn
- 1997-02-26 CN CN97102543A patent/CN1165301A/zh active Pending
- 1997-02-27 KR KR1019970006081A patent/KR970065286A/ko not_active Application Discontinuation
- 1997-02-27 JP JP9043318A patent/JPH09243638A/ja active Pending
- 1997-02-28 AU AU15016/97A patent/AU706440B2/en not_active Ceased
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1322329C (zh) * | 2002-08-09 | 2007-06-20 | 爱科来株式会社 | 蛋白质测定用试验片及其制造方法 |
| CN1839317B (zh) * | 2003-05-19 | 2012-05-30 | 东丽株式会社 | 选择结合性物质固定化载体 |
| CN105699371A (zh) * | 2016-01-28 | 2016-06-22 | 湖北雅仕达生物技术有限公司 | 一种检测液体中含有醛的试剂及制备方法 |
| CN106957247A (zh) * | 2017-03-16 | 2017-07-18 | 长春万成生物电子工程有限公司 | 一种微蛋白指示剂的纯化方法 |
| CN106957247B (zh) * | 2017-03-16 | 2020-03-20 | 长春万成生物电子工程有限公司 | 一种微蛋白指示剂的纯化方法 |
| CN108120714A (zh) * | 2017-12-20 | 2018-06-05 | 吉林省汇酉生物技术股份有限公司 | 一种检测尿液尿微量白蛋白的试剂及其应用 |
| CN108120714B (zh) * | 2017-12-20 | 2020-11-27 | 吉林省汇酉生物技术股份有限公司 | 一种检测尿液尿微量白蛋白的试剂及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU706440B2 (en) | 1999-06-17 |
| US5750405A (en) | 1998-05-12 |
| KR970065286A (ko) | 1997-10-13 |
| CA2189586A1 (en) | 1997-09-02 |
| TW438976B (en) | 2001-06-07 |
| AU1501697A (en) | 1997-09-04 |
| EP0793099A1 (en) | 1997-09-03 |
| JPH09243638A (ja) | 1997-09-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1165301A (zh) | 探测蛋白质的改进方法 | |
| CA1288029C (en) | Fluorescent polymers | |
| EP2797679B1 (en) | Porous membranes having a hydrophilic coating and methods for their preparation and use | |
| EP0308227B1 (en) | Improved test for fecal occult blood | |
| Xiong et al. | Molecularly imprinted on-line solid-phase extraction combined with flow-injection chemiluminescence for the determination of tetracycline | |
| CN101703923A (zh) | 亲水的高蛋白结合的低荧光蛋白质印迹膜 | |
| EP0517054A1 (en) | Nitro or nitroso substituted polyhalogenated phenolsulfonephthaleins as protein indicators in biological samples | |
| WO2013101855A1 (en) | Porous membranes having a polymeric coating and methods for their preparation and use | |
| CN109781819A (zh) | 一种基于N,S-CDs/CuPc复合材料的分子印迹光电化学传感器的制备方法和应用 | |
| CN110308286A (zh) | 一种基于光热释放信号增强型甲状腺球蛋白电致化学发光免疫传感器 | |
| WO2016079170A1 (en) | Porous membranes with a polymer grafting, methods and uses thereof | |
| CN107907522A (zh) | 一种全氟化合物分子印迹荧光探针及其使用方法和应用 | |
| CN109320537A (zh) | 一种用于面粉和活体内过氧苯甲酰检测的可溶性双光子荧光探针及其制备方法和应用 | |
| CN1904619A (zh) | 检测唾液中乙醇含量的试剂条和试剂盒 | |
| CN115855923A (zh) | 一种检测排泄物隐血的组合物及其制备方法和应用 | |
| CN1973944A (zh) | 整体型固相萃取搅拌棒的制备方法 | |
| CA2125832A1 (en) | Reagent composition and method for determining lithium | |
| CN109187509B (zh) | 一种氯霉素的特异性检测的化学发光试剂盒、检测方法及应用 | |
| CN114062455B (zh) | 一种基于MXene/硫化铋复合材料的分子印迹光电化学传感器及其制备方法和应用 | |
| CN214201504U (zh) | 一种拼接式检测试剂盒 | |
| KR20240094698A (ko) | 바이오마커 탐지용 상-이동 프로브 및 이를 이용한 바이오마커 검출 방법 | |
| CN109001188B (zh) | 一种金刚烷胺和金刚乙胺的特异性分子印迹聚合物、化学发光试剂盒、检测方法及应用 | |
| CN105949495A (zh) | 一种多孔光化学氧传感膜的制备方法 | |
| JP2005121443A (ja) | プラスチックの表面処理方法、プラスチック基板およびプラスチック製バイオチップ | |
| CN118604081A (zh) | 用于检测dehp的光电化学生物传感器及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| AD01 | Patent right deemed abandoned | ||
| C20 | Patent right or utility model deemed to be abandoned or is abandoned |