CN116514966A - 抗dkk1抗体、其药物组合物及用途 - Google Patents
抗dkk1抗体、其药物组合物及用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116514966A CN116514966A CN202310094332.XA CN202310094332A CN116514966A CN 116514966 A CN116514966 A CN 116514966A CN 202310094332 A CN202310094332 A CN 202310094332A CN 116514966 A CN116514966 A CN 116514966A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- seq
- amino acid
- acid sequence
- nos
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 31
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 363
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 150
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 114
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 114
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 113
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 109
- 101000864646 Homo sapiens Dickkopf-related protein 1 Proteins 0.000 claims abstract description 107
- 102100030074 Dickkopf-related protein 1 Human genes 0.000 claims abstract description 91
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 51
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 62
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 45
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 44
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 44
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 40
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 claims description 33
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 claims description 33
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 claims description 33
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 25
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 22
- 102000050762 human DKK1 Human genes 0.000 claims description 21
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 21
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 21
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 20
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 20
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 20
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 20
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 16
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 15
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 14
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 11
- 229940122429 Tubulin inhibitor Drugs 0.000 claims description 11
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 claims description 11
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 11
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 claims description 10
- 102000037984 Inhibitory immune checkpoint proteins Human genes 0.000 claims description 10
- 108091008026 Inhibitory immune checkpoint proteins Proteins 0.000 claims description 10
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 claims description 10
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 9
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 claims description 8
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 claims description 6
- 239000004973 liquid crystal related substance Substances 0.000 claims description 6
- 229960003552 other antineoplastic agent in atc Drugs 0.000 claims description 6
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 5
- 101710112752 Cytotoxin Proteins 0.000 claims description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 4
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 claims description 4
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 claims description 4
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 claims description 4
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 claims description 4
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 claims description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 4
- 239000013066 combination product Substances 0.000 claims description 3
- 229940127555 combination product Drugs 0.000 claims description 3
- 101000961149 Homo sapiens Immunoglobulin heavy constant gamma 4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000840257 Homo sapiens Immunoglobulin kappa constant Proteins 0.000 claims description 2
- 101710138871 Ig gamma-1 chain C region Proteins 0.000 claims description 2
- 102100039345 Immunoglobulin heavy constant gamma 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100039347 Immunoglobulin heavy constant gamma 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100029572 Immunoglobulin kappa constant Human genes 0.000 claims description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 35
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 5
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 102
- 238000000034 method Methods 0.000 description 55
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 34
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 27
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 25
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 23
- 108050003627 Wnt Proteins 0.000 description 16
- 102000013814 Wnt Human genes 0.000 description 16
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 16
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 15
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 13
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 12
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 11
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 11
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 10
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 10
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 10
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 9
- 101710099518 Dickkopf-related protein 1 Proteins 0.000 description 9
- 101001039199 Homo sapiens Low-density lipoprotein receptor-related protein 6 Proteins 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 9
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 9
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 9
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 9
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 9
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 9
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 8
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 8
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 102100040704 Low-density lipoprotein receptor-related protein 6 Human genes 0.000 description 7
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 7
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 7
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 7
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 7
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 7
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 6
- 101000574302 Homo sapiens Mitochondrial genome maintenance exonuclease 1 Proteins 0.000 description 6
- 102100025785 Mitochondrial genome maintenance exonuclease 1 Human genes 0.000 description 6
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 6
- 102100021923 Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1 Human genes 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 6
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- -1 tubulin inhibitor Substances 0.000 description 6
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 description 5
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 description 5
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 5
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 5
- 101001043594 Homo sapiens Low-density lipoprotein receptor-related protein 5 Proteins 0.000 description 5
- 102100021926 Low-density lipoprotein receptor-related protein 5 Human genes 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 230000004156 Wnt signaling pathway Effects 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 5
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 5
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 5
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N monopropylene glycol Natural products CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 5
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 4
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 208000022072 Gallbladder Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 4
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 4
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 201000010175 gallbladder cancer Diseases 0.000 description 4
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 238000007477 logistic regression Methods 0.000 description 4
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 4
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 4
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 4
- HBZBAMXERPYTFS-SECBINFHSA-N (4S)-2-(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,2-f][1,3]benzothiazol-2-yl)-4,5-dihydro-1,3-thiazole-4-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(=N1)c1nc2cc3CCNc3cc2s1 HBZBAMXERPYTFS-SECBINFHSA-N 0.000 description 3
- 206010004593 Bile duct cancer Diseases 0.000 description 3
- 235000003351 Brassica cretica Nutrition 0.000 description 3
- 235000003343 Brassica rupestris Nutrition 0.000 description 3
- 101150015099 CHIA1 gene Proteins 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 3
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XDXDZDZNSLXDNA-TZNDIEGXSA-N Idarubicin Chemical compound C1[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1C2=C(O)C(C(=O)C3=CC=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2C[C@@](O)(C(C)=O)C1 XDXDZDZNSLXDNA-TZNDIEGXSA-N 0.000 description 3
- XDXDZDZNSLXDNA-UHFFFAOYSA-N Idarubicin Natural products C1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C2=C(O)C(C(=O)C3=CC=CC=C3C3=O)=C3C(O)=C2CC(O)(C(C)=O)C1 XDXDZDZNSLXDNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 3
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 3
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 3
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 3
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 3
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 208000026900 bile duct neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 101150014959 chi1 gene Proteins 0.000 description 3
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 230000009850 completed effect Effects 0.000 description 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 3
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 210000003236 esophagogastric junction Anatomy 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 3
- 229960000908 idarubicin Drugs 0.000 description 3
- 229960001101 ifosfamide Drugs 0.000 description 3
- HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N ifosfamide Chemical compound ClCCNP1(=O)OCCCN1CCCl HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 238000003468 luciferase reporter gene assay Methods 0.000 description 3
- 235000010460 mustard Nutrition 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 3
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 3
- 238000003030 reporter gene method Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 3
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 3
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XRBSKUSTLXISAB-XVVDYKMHSA-N (5r,6r,7r,8r)-8-hydroxy-7-(hydroxymethyl)-5-(3,4,5-trimethoxyphenyl)-5,6,7,8-tetrahydrobenzo[f][1,3]benzodioxole-6-carboxylic acid Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@H](O)[C@@H](CO)[C@@H]2C(O)=O)=C1 XRBSKUSTLXISAB-XVVDYKMHSA-N 0.000 description 2
- FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N (E)-dacarbazine Chemical compound CN(C)\N=N\c1[nH]cnc1C(N)=O FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N 0.000 description 2
- NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydroxy-15-(4-hydroxy-18-methoxycarbonyl-5,18-seco-ibogamin-18-yl)-16-methoxy-1-methyl-6,7-didehydro-aspidospermidine-3-carboxylic acid methyl ester Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGJZLNKBHJESQX-UHFFFAOYSA-N 3-Epi-Betulin-Saeure Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C(O)=O)CCC(C(=C)C)C5C4CCC3C21C QGJZLNKBHJESQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CLOUCVRNYSHRCF-UHFFFAOYSA-N 3beta-Hydroxy-20(29)-Lupen-3,27-oic acid Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C(O)=O)CCC5(C)CCC(C(=C)C)C5C4CCC3C21C CLOUCVRNYSHRCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 4'-epidoxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 0.000 description 2
- VVIAGPKUTFNRDU-UHFFFAOYSA-N 6S-folinic acid Natural products C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N(C=O)C1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 VVIAGPKUTFNRDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DIZWSDNSTNAYHK-XGWVBXMLSA-N Betulinic acid Natural products CC(=C)[C@@H]1C[C@H]([C@H]2CC[C@]3(C)[C@H](CC[C@@H]4[C@@]5(C)CC[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]5CC[C@@]34C)[C@@H]12)C(=O)O DIZWSDNSTNAYHK-XGWVBXMLSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000219193 Brassicaceae Species 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 229930188224 Cryptophycin Natural products 0.000 description 2
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010002156 Depsipeptides Proteins 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N Epirubicin Natural products COc1cccc2C(=O)c3c(O)c4CC(O)(CC(OC5CC(N)C(=O)C(C)O5)c4c(O)c3C(=O)c12)C(=O)CO HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 2
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N Hydroxyurea Chemical compound NC(=O)NO VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 2
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 2
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 2
- 229920001491 Lentinan Polymers 0.000 description 2
- 239000012515 MabSelect SuRe Substances 0.000 description 2
- VFKZTMPDYBFSTM-KVTDHHQDSA-N Mitobronitol Chemical compound BrC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CBr VFKZTMPDYBFSTM-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 229930192392 Mitomycin Natural products 0.000 description 2
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 2
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 2
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- HFVNWDWLWUCIHC-GUPDPFMOSA-N Prednimustine Chemical compound O=C([C@@]1(O)CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)[C@@H](O)C[C@@]21C)COC(=O)CCCC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 HFVNWDWLWUCIHC-GUPDPFMOSA-N 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- CYQFCXCEBYINGO-UHFFFAOYSA-N THC Natural products C1=C(C)CCC2C(C)(C)OC3=CC(CCCCC)=CC(O)=C3C21 CYQFCXCEBYINGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FOCVUCIESVLUNU-UHFFFAOYSA-N Thiotepa Chemical compound C1CN1P(N1CC1)(=S)N1CC1 FOCVUCIESVLUNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 2
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 2
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 2
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 2
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 2
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 2
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 2
- 229940045713 antineoplastic alkylating drug ethylene imines Drugs 0.000 description 2
- 150000001541 aziridines Chemical class 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- QGJZLNKBHJESQX-FZFNOLFKSA-N betulinic acid Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CC[C@@H](C(=C)C)[C@@H]5[C@H]4CC[C@@H]3[C@]21C QGJZLNKBHJESQX-FZFNOLFKSA-N 0.000 description 2
- 229960005520 bryostatin Drugs 0.000 description 2
- MJQUEDHRCUIRLF-TVIXENOKSA-N bryostatin 1 Chemical compound C([C@@H]1CC(/[C@@H]([C@@](C(C)(C)/C=C/2)(O)O1)OC(=O)/C=C/C=C/CCC)=C\C(=O)OC)[C@H]([C@@H](C)O)OC(=O)C[C@H](O)C[C@@H](O1)C[C@H](OC(C)=O)C(C)(C)[C@]1(O)C[C@@H]1C\C(=C\C(=O)OC)C[C@H]\2O1 MJQUEDHRCUIRLF-TVIXENOKSA-N 0.000 description 2
- MUIWQCKLQMOUAT-AKUNNTHJSA-N bryostatin 20 Natural products COC(=O)C=C1C[C@@]2(C)C[C@]3(O)O[C@](C)(C[C@@H](O)CC(=O)O[C@](C)(C[C@@]4(C)O[C@](O)(CC5=CC(=O)O[C@]45C)C(C)(C)C=C[C@@](C)(C1)O2)[C@@H](C)O)C[C@H](OC(=O)C(C)(C)C)C3(C)C MUIWQCKLQMOUAT-AKUNNTHJSA-N 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000005094 computer simulation Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 2
- 229960003901 dacarbazine Drugs 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- CYQFCXCEBYINGO-IAGOWNOFSA-N delta1-THC Chemical compound C1=C(C)CC[C@H]2C(C)(C)OC3=CC(CCCCC)=CC(O)=C3[C@@H]21 CYQFCXCEBYINGO-IAGOWNOFSA-N 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- PZXJOHSZQAEJFE-UHFFFAOYSA-N dihydrobetulinic acid Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C(O)=O)CCC(C(C)C)C5C4CCC3C21C PZXJOHSZQAEJFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 229930188854 dolastatin Natural products 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 229960001904 epirubicin Drugs 0.000 description 2
- 229960001842 estramustine Drugs 0.000 description 2
- FRPJXPJMRWBBIH-RBRWEJTLSA-N estramustine Chemical compound ClCCN(CCCl)C(=O)OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 FRPJXPJMRWBBIH-RBRWEJTLSA-N 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- VVIAGPKUTFNRDU-ABLWVSNPSA-N folinic acid Chemical compound C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N(C=O)C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 VVIAGPKUTFNRDU-ABLWVSNPSA-N 0.000 description 2
- 235000008191 folinic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011672 folinic acid Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- CHPZKNULDCNCBW-UHFFFAOYSA-N gallium nitrate Chemical compound [Ga+3].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O CHPZKNULDCNCBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 102000055436 human LRP6 Human genes 0.000 description 2
- 229960001330 hydroxycarbamide Drugs 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 229940115286 lentinan Drugs 0.000 description 2
- 229960001691 leucovorin Drugs 0.000 description 2
- 229960003538 lonidamine Drugs 0.000 description 2
- WDRYRZXSPDWGEB-UHFFFAOYSA-N lonidamine Chemical compound C12=CC=CC=C2C(C(=O)O)=NN1CC1=CC=C(Cl)C=C1Cl WDRYRZXSPDWGEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- MQXVYODZCMMZEM-ZYUZMQFOSA-N mannomustine Chemical compound ClCCNC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CNCCCl MQXVYODZCMMZEM-ZYUZMQFOSA-N 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 229960004961 mechlorethamine Drugs 0.000 description 2
- HAWPXGHAZFHHAD-UHFFFAOYSA-N mechlorethamine Chemical compound ClCCN(C)CCCl HAWPXGHAZFHHAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001924 melphalan Drugs 0.000 description 2
- SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N melphalan Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 229960005485 mitobronitol Drugs 0.000 description 2
- VFKZTMPDYBFSTM-GUCUJZIJSA-N mitolactol Chemical compound BrC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CBr VFKZTMPDYBFSTM-GUCUJZIJSA-N 0.000 description 2
- 229950010913 mitolactol Drugs 0.000 description 2
- 229960001156 mitoxantrone Drugs 0.000 description 2
- KKZJGLLVHKMTCM-UHFFFAOYSA-N mitoxantrone Chemical compound O=C1C2=C(O)C=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C(NCCNCCO)=CC=C2NCCNCCO KKZJGLLVHKMTCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 description 2
- MQYXUWHLBZFQQO-UHFFFAOYSA-N nepehinol Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C)CCC(C(=C)C)C5C4CCC3C21C MQYXUWHLBZFQQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 229960001756 oxaliplatin Drugs 0.000 description 2
- DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L oxaliplatin Chemical compound O1C(=O)C(=O)O[Pt]11N[C@@H]2CCCC[C@H]2N1 DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 229960005079 pemetrexed Drugs 0.000 description 2
- QOFFJEBXNKRSPX-ZDUSSCGKSA-N pemetrexed Chemical compound C1=N[C]2NC(N)=NC(=O)C2=C1CCC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 QOFFJEBXNKRSPX-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 2
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- 229960004694 prednimustine Drugs 0.000 description 2
- 229960000624 procarbazine Drugs 0.000 description 2
- CPTBDICYNRMXFX-UHFFFAOYSA-N procarbazine Chemical compound CNNCC1=CC=C(C(=O)NC(C)C)C=C1 CPTBDICYNRMXFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 2
- BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M sodium acetic acid acetate Chemical compound [Na+].CC(O)=O.CC([O-])=O BHZOKUMUHVTPBX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N teniposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@@H](OC[C@H]4O3)C=3SC=CC=3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 NRUKOCRGYNPUPR-QBPJDGROSA-N 0.000 description 2
- 229960001278 teniposide Drugs 0.000 description 2
- 229960001196 thiotepa Drugs 0.000 description 2
- WYWHKKSPHMUBEB-UHFFFAOYSA-N tioguanine Chemical compound N1C(N)=NC(=S)C2=C1N=CN2 WYWHKKSPHMUBEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 2
- 229960004560 triaziquone Drugs 0.000 description 2
- PXSOHRWMIRDKMP-UHFFFAOYSA-N triaziquone Chemical compound O=C1C(N2CC2)=C(N2CC2)C(=O)C=C1N1CC1 PXSOHRWMIRDKMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 2
- 229960004355 vindesine Drugs 0.000 description 2
- UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N vindesine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(N)=O)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1N=C1[C]2C=CC=C1 UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WDQLRUYAYXDIFW-RWKIJVEZSA-N (2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-4-[(2r,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[[(2r,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxymethyl]oxan-2-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 WDQLRUYAYXDIFW-RWKIJVEZSA-N 0.000 description 1
- YXTKHLHCVFUPPT-YYFJYKOTSA-N (2s)-2-[[4-[(2-amino-5-formyl-4-oxo-1,6,7,8-tetrahydropteridin-6-yl)methylamino]benzoyl]amino]pentanedioic acid;(1r,2r)-1,2-dimethanidylcyclohexane;5-fluoro-1h-pyrimidine-2,4-dione;oxalic acid;platinum(2+) Chemical compound [Pt+2].OC(=O)C(O)=O.[CH2-][C@@H]1CCCC[C@H]1[CH2-].FC1=CNC(=O)NC1=O.C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N(C=O)C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 YXTKHLHCVFUPPT-YYFJYKOTSA-N 0.000 description 1
- XRBSKUSTLXISAB-UHFFFAOYSA-N (7R,7'R,8R,8'R)-form-Podophyllic acid Natural products COC1=C(OC)C(OC)=CC(C2C3=CC=4OCOC=4C=C3C(O)C(CO)C2C(O)=O)=C1 XRBSKUSTLXISAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VDFVNEFVBPFDSB-UHFFFAOYSA-N 1,3-dioxane Chemical compound C1COCOC1 VDFVNEFVBPFDSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DEEULBIVHZVMHX-UHFFFAOYSA-N 1-nitroacridine Chemical compound C1=CC=C2C=C3C([N+](=O)[O-])=CC=CC3=NC2=C1 DEEULBIVHZVMHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 2'-deoxyinosine Chemical group C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(N=CNC2=O)=C2N=C1 VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BOMZMNZEXMAQQW-UHFFFAOYSA-N 2,5,11-trimethyl-6h-pyrido[4,3-b]carbazol-2-ium-9-ol;acetate Chemical compound CC([O-])=O.C[N+]1=CC=C2C(C)=C(NC=3C4=CC(O)=CC=3)C4=C(C)C2=C1 BOMZMNZEXMAQQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FLKFEULZGUGYQU-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-oxopentanoic acid Chemical compound NC(C(=O)O)CC(=O)C.NC(C(=O)O)CC(=O)C FLKFEULZGUGYQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NAQNVOSSGCIIDH-UHFFFAOYSA-N 4-[4-[bis(2-chloroethyl)amino]phenyl]butanoic acid;hydrochloride Chemical compound [Cl-].OC(=O)CCCC1=CC=C([NH+](CCCl)CCCl)C=C1 NAQNVOSSGCIIDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000219198 Brassica Species 0.000 description 1
- 101001039256 Caenorhabditis elegans Low-density lipoprotein receptor-related protein Proteins 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 1
- XXGMIHXASFDFSM-UHFFFAOYSA-N Delta9-tetrahydrocannabinol Natural products CCCCCc1cc2OC(C)(C)C3CCC(=CC3c2c(O)c1O)C XXGMIHXASFDFSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100030091 Dickkopf-related protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100037985 Dickkopf-related protein 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100037986 Dickkopf-related protein 4 Human genes 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- MPJKWIXIYCLVCU-UHFFFAOYSA-N Folinic acid Natural products NC1=NC2=C(N(C=O)C(CNc3ccc(cc3)C(=O)NC(CCC(=O)O)CC(=O)O)CN2)C(=O)N1 MPJKWIXIYCLVCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710181403 Frizzled Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 229940121710 HMGCoA reductase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101000694288 Homo sapiens 40S ribosomal protein SA Proteins 0.000 description 1
- 101000864647 Homo sapiens Dickkopf-related protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000951342 Homo sapiens Dickkopf-related protein 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000951340 Homo sapiens Dickkopf-related protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 101001030069 Homo sapiens Major vault protein Proteins 0.000 description 1
- 101001043564 Homo sapiens Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000738769 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase alpha Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 1
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 229930182499 Lappaol Natural products 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- 230000006051 NK cell activation Effects 0.000 description 1
- 208000003788 Neoplasm Micrometastasis Diseases 0.000 description 1
- SYNHCENRCUAUNM-UHFFFAOYSA-N Nitrogen mustard N-oxide hydrochloride Chemical compound Cl.ClCC[N+]([O-])(C)CCCl SYNHCENRCUAUNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- KMSKQZKKOZQFFG-HSUXVGOQSA-N Pirarubicin Chemical compound O([C@H]1[C@@H](N)C[C@@H](O[C@H]1C)O[C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1CCCCO1 KMSKQZKKOZQFFG-HSUXVGOQSA-N 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 102000016971 Proto-Oncogene Proteins c-kit Human genes 0.000 description 1
- 108010014608 Proto-Oncogene Proteins c-kit Proteins 0.000 description 1
- 229930185560 Pseudouridine Natural products 0.000 description 1
- PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N Pseudouridine C Natural products OC1C(O)C(CO)OC1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OWPCHSCAPHNHAV-UHFFFAOYSA-N Rhizoxin Natural products C1C(O)C2(C)OC2C=CC(C)C(OC(=O)C2)CC2CC2OC2C(=O)OC1C(C)C(OC)C(C)=CC=CC(C)=CC1=COC(C)=N1 OWPCHSCAPHNHAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 229920000519 Sizofiran Polymers 0.000 description 1
- 241000187398 Streptomyces lividans Species 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- XZSRRNFBEIOBDA-CFNBKWCHSA-N [2-[(2s,4s)-4-[(2r,4s,5s,6s)-4-amino-5-hydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-2,5,12-trihydroxy-7-methoxy-6,11-dioxo-3,4-dihydro-1h-tetracen-2-yl]-2-oxoethyl] 2,2-diethoxyacetate Chemical compound O([C@H]1C[C@](CC2=C(O)C=3C(=O)C4=CC=CC(OC)=C4C(=O)C=3C(O)=C21)(O)C(=O)COC(=O)C(OCC)OCC)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 XZSRRNFBEIOBDA-CFNBKWCHSA-N 0.000 description 1
- ZOZKYEHVNDEUCO-XUTVFYLZSA-N aceglatone Chemical compound O1C(=O)[C@H](OC(C)=O)[C@@H]2OC(=O)[C@@H](OC(=O)C)[C@@H]21 ZOZKYEHVNDEUCO-XUTVFYLZSA-N 0.000 description 1
- 229950002684 aceglatone Drugs 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940045714 alkyl sulfonate alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 150000008052 alkyl sulfonates Chemical class 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 229960001220 amsacrine Drugs 0.000 description 1
- XCPGHVQEEXUHNC-UHFFFAOYSA-N amsacrine Chemical compound COC1=CC(NS(C)(=O)=O)=CC=C1NC1=C(C=CC=C2)C2=NC2=CC=CC=C12 XCPGHVQEEXUHNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940045686 antimetabolites antineoplastic purine analogs Drugs 0.000 description 1
- 229940045687 antimetabolites folic acid analogs Drugs 0.000 description 1
- 229940045688 antineoplastic antimetabolites pyrimidine analogues Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 150000008209 arabinosides Chemical class 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N beta-Pseudouridine Natural products OC1OC(CN2C=CC(=O)NC2=O)C(O)C1O WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N bis(2-chloroethyl) sulfide Chemical compound ClCCSCCCl QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000001364 causal effect Effects 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 229960004630 chlorambucil Drugs 0.000 description 1
- JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N chlorambucil Chemical compound OC(=O)CCCC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 229940000425 combination drug Drugs 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 229960000684 cytarabine Drugs 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 229950003913 detorubicin Drugs 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 1
- WVYXNIXAMZOZFK-UHFFFAOYSA-N diaziquone Chemical compound O=C1C(NC(=O)OCC)=C(N2CC2)C(=O)C(NC(=O)OCC)=C1N1CC1 WVYXNIXAMZOZFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950002389 diaziquone Drugs 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- RIYVKHUVXPAOPS-UHFFFAOYSA-N dithiine Chemical compound S1SC=CC=C1 RIYVKHUVXPAOPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000007783 downstream signaling Effects 0.000 description 1
- 229960004242 dronabinol Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- XOPYFXBZMVTEJF-PDACKIITSA-N eleutherobin Chemical compound C(/[C@H]1[C@H](C(=CC[C@@H]1C(C)C)C)C[C@@H]([C@@]1(C)O[C@@]2(C=C1)OC)OC(=O)\C=C\C=1N=CN(C)C=1)=C2\CO[C@@H]1OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1OC(C)=O XOPYFXBZMVTEJF-PDACKIITSA-N 0.000 description 1
- XOPYFXBZMVTEJF-UHFFFAOYSA-N eleutherobin Natural products C1=CC2(OC)OC1(C)C(OC(=O)C=CC=1N=CN(C)C=1)CC(C(=CCC1C(C)C)C)C1C=C2COC1OCC(O)C(O)C1OC(C)=O XOPYFXBZMVTEJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950000549 elliptinium acetate Drugs 0.000 description 1
- 229940120655 eloxatin Drugs 0.000 description 1
- JOZGNYDSEBIJDH-UHFFFAOYSA-N eniluracil Chemical compound O=C1NC=C(C#C)C(=O)N1 JOZGNYDSEBIJDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950010213 eniluracil Drugs 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- YJGVMLPVUAXIQN-UHFFFAOYSA-N epipodophyllotoxin Natural products COC1=C(OC)C(OC)=CC(C2C3=CC=4OCOC=4C=C3C(O)C3C2C(OC3)=O)=C1 YJGVMLPVUAXIQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930013356 epothilone Natural products 0.000 description 1
- 150000003883 epothilone derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000034964 establishment of cell polarity Effects 0.000 description 1
- XFBVBWWRPKNWHW-UHFFFAOYSA-N etodolac Chemical compound C1COC(CC)(CC(O)=O)C2=N[C]3C(CC)=CC=CC3=C21 XFBVBWWRPKNWHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005293 etodolac Drugs 0.000 description 1
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 150000002224 folic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 229940044658 gallium nitrate Drugs 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052732 germanium Inorganic materials 0.000 description 1
- GNPVGFCGXDBREM-UHFFFAOYSA-N germanium atom Chemical compound [Ge] GNPVGFCGXDBREM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- JUINSXZKUKVTMD-UHFFFAOYSA-N hydrogen azide Chemical compound N=[N+]=[N-] JUINSXZKUKVTMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 description 1
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000012931 lyophilized formulation Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 229950008612 mannomustine Drugs 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N mercaptopurine Chemical compound S=C1NC=NC2=C1NC=N2 GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001428 mercaptopurine Drugs 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 238000001565 modulated differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000004985 myeloid-derived suppressor cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 150000004005 nitrosamines Chemical class 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229940127084 other anti-cancer agent Drugs 0.000 description 1
- KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N oxaloacetic acid Chemical compound OC(=O)CC(=O)C(O)=O KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 230000008560 physiological behavior Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229960000952 pipobroman Drugs 0.000 description 1
- NJBFOOCLYDNZJN-UHFFFAOYSA-N pipobroman Chemical compound BrCCC(=O)N1CCN(C(=O)CCBr)CC1 NJBFOOCLYDNZJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001221 pirarubicin Drugs 0.000 description 1
- 150000003057 platinum Chemical class 0.000 description 1
- 229960001237 podophyllotoxin Drugs 0.000 description 1
- YJGVMLPVUAXIQN-XVVDYKMHSA-N podophyllotoxin Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@H](O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 YJGVMLPVUAXIQN-XVVDYKMHSA-N 0.000 description 1
- YVCVYCSAAZQOJI-UHFFFAOYSA-N podophyllotoxin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2C3=CC=4OCOC=4C=C3C(O)C3C2C(OC3)=O)=C1 YVCVYCSAAZQOJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000191 poly(N-vinyl pyrrolidone) Polymers 0.000 description 1
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 1
- 229920001583 poly(oxyethylated polyols) Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229960005205 prednisolone Drugs 0.000 description 1
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000004850 protein–protein interaction Effects 0.000 description 1
- PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N pseudouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 1
- 229920005604 random copolymer Polymers 0.000 description 1
- BMKDZUISNHGIBY-UHFFFAOYSA-N razoxane Chemical compound C1C(=O)NC(=O)CN1C(C)CN1CC(=O)NC(=O)C1 BMKDZUISNHGIBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000460 razoxane Drugs 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- OWPCHSCAPHNHAV-LMONGJCWSA-N rhizoxin Chemical compound C/C([C@H](OC)[C@@H](C)[C@@H]1C[C@H](O)[C@]2(C)O[C@@H]2/C=C/[C@@H](C)[C@]2([H])OC(=O)C[C@@](C2)(C[C@@H]2O[C@H]2C(=O)O1)[H])=C\C=C\C(\C)=C\C1=COC(C)=N1 OWPCHSCAPHNHAV-LMONGJCWSA-N 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 229950001403 sizofiran Drugs 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- UGNWTBMOAKPKBL-UHFFFAOYSA-N tetrachloro-1,4-benzoquinone Chemical compound ClC1=C(Cl)C(=O)C(Cl)=C(Cl)C1=O UGNWTBMOAKPKBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011285 therapeutic regimen Methods 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 229960003087 tioguanine Drugs 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960005294 triamcinolone Drugs 0.000 description 1
- GFNANZIMVAIWHM-OBYCQNJPSA-N triamcinolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@@]3(F)[C@@H](O)C[C@](C)([C@@]([C@H](O)C4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 GFNANZIMVAIWHM-OBYCQNJPSA-N 0.000 description 1
- 229930013292 trichothecene Natural products 0.000 description 1
- 150000003327 trichothecene derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229960000875 trofosfamide Drugs 0.000 description 1
- UMKFEPPTGMDVMI-UHFFFAOYSA-N trofosfamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)OCCCN1CCCl UMKFEPPTGMDVMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003744 tubulin modulator Substances 0.000 description 1
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000588 tumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000381 tumorigenic effect Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000402 unacceptable toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
Abstract
本发明属于生物医药领域,涉及一种抗DKK1抗体、其药物组合物及用途。具体地,本发明涉及一种抗DKK1抗体或其抗原结合片段,其中,所述抗DKK1抗体包含重链可变区和轻链可变区,所述重链可变区包含HCDR1至HCDR3,所述轻链可变区包含LCDR1至LCDR3,其中,HCDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO:1等;HCDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO:2等;HCDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO:3等;LCDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO:4等;LCDR2的氨基酸序列选自SEQ IDNO:5等;LCDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO:6等。本发明的抗DKK1抗体能够与DKK1高特异性地结合,有效地阻断Wnt信号通路,从而抑制DKK1的对肿瘤微环境形成的促进作用和对肿瘤发生发展的促进作用,具有良好的抗肿瘤效果。
Description
技术领域
本发明属于生物医药领域,涉及一种抗DKK1抗体、其药物组合物及用途。
背景技术
DKK1是Wnt/β-catenin信号转导通路的分泌性抑制剂,属于抑制Wnt信号传导的蛋白质家族之一的DKK(dickkopf)家族,具有抑制Wnt诱导的轴复制的能力。DKK家族目前有4个家族成员,即DKK1,DKK2,DKK3和DKK4。
Wnt信号通路涉及对胚胎发育和致瘤过程的控制。胞外Wnt蛋白负责胚胎发育过程中的多种细胞类型的生长和分化,并对多种癌症的发展有促进作用。遗传分析表明DKK1在上游抑制Wnt信号转导,DKK1与LRP6拮抗性的相互作用,阻断Wnt介导的信号激活。
当DKK1蛋白不存在时,Wnt和Frizzled,LRP6结合形成异源三聚体,激活下游信号通路,维持β-catenin的稳定,其入核后聚集,促进成骨细胞相关基因和抑癌基因的转录和翻译。而当DKK1蛋白存在时,DKK1与Wnt竞争结合LRP6分子,下游一系列的信号反应促使β-catenin磷酸化然后被降解。从而阻断了β-catenin入核,进而阻断了成骨细胞相关基因和抑癌基因的转录翻译。当抗DKK1抗体存在时,抗体竞争LRP6与DKK1分子的结合,有利于Wnt和Frizzled,LRP6重新形成异源三聚体。下游信号通路回复,使得成骨细胞相关基因和抑癌基因的转录翻译恢复正常,起到促进成骨细胞稳定和增殖的作用以及抑制癌细胞发生和增殖的作用。DKK1可以通过增加MDSC和Treg细胞的抑制活性,下调肿瘤细胞表面激活NK细胞的配体,促进Th2细胞极化以及降低IFNγ的产生,从而促进了肿瘤微环境的形成。此外,DKK1还可以促进肿瘤的生长和迁移,促进CSC样细胞的产生,促进肿瘤血管生成,从而直接促进肿瘤的发生发展(Yu等,Signal Transduct Target Therapy,2021,6(1);Nikolai等,Cancer Letters,2020,482)。2021年3月22日,LeapTherapeutics宣布其靶向DKK1靶点的DKN-01单克隆抗体在2期临床治疗晚期妇科癌症取得积极结果。临床结果表面,DKN-01在高表达DKK1的患者中更有效,其客观缓解率为14%,疾病控制率为57%。
DKK1是肿瘤的重要调节因子,作为一个关键的治疗靶点值得更多的关注;并且事实上,开发DKK1抑制剂的策略已经在不同的病理模型产生了令人鼓舞的临床结果(HewenJiang等,Drug Discovery of DKK1Inhibitors,Frontiers in Pharmacology,March2022,Volume 13,p1-17)。然而迄今为止,针对该靶点的抗体药物仍未上市,其中在癌症治疗方面进展最快的两个分子正处于单药或联合用药的临床研究阶段(Jiang等,FrontPharmacol,2022,13),分别为正处于治疗多发性骨髓瘤、胆囊癌、食管癌、肝癌、肝细胞癌、膀胱癌、前列腺癌、肺癌、妇科癌症、结肠癌、直肠癌的研究中的DKN-01(CN110114087A),以及处于治疗多发性骨髓瘤和骨肉瘤研究中的BHQ-880(WO2007084344)。然而对于提供能够单独地或与其它药剂相组合,通过增强对人类DKK1的抑制活性,从而促进Wnt通路介导的抑癌基因表达的其他更有效、特异、安全和/或稳定的药剂,仍存在着未满足的需求。
发明内容
本发明人经过深入的研究和创造性的劳动,制得表达抗DDK1抗体的杂交瘤细胞株并获得了表达的抗DDK1抗体。进一步地,本发明人在此基础上设计了嵌合抗体并进行了人源化改造。本发明人惊奇地发现,本发明的抗DDK1抗体对DDK1具有较高的亲和力和/或特异性,能够有效地抑制肿瘤生长,具有良好的抗肿瘤潜力。由此提供了下述发明:
本发明的一个方面涉及一种抗DKK1抗体或其抗原结合片段,
其中,所述抗DKK1抗体包含重链可变区和轻链可变区,所述重链可变区包含HCDR1至HCDR3,所述轻链可变区包含LCDR1至LCDR3,
其中,
HCDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:7、SEQ IDNO:13、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:31;
HCDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:14、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:26和SEQ ID NO:32;
HCDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:9、SEQ IDNO:15、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:78;
LCDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10、SEQ IDNO:16、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:28和SEQ ID NO:34;
LCDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:17、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:35;
LCDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:36。
在本发明的一些实施方式中,所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,其中:
所述抗体的重链可变区,其中,
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示,
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:78所示,
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示,
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示,
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示,
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:25所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:26所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:27所示,或者
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:31所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:32所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:33所示;
并且
所述抗体的轻链可变区,其中,
LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示,
LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示,
LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示,
LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:23所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示,
LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:28所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示,或者
LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:34所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:35所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:36所示。
在本发明的一些实施方式中,所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,其中,
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示;
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:78所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示;
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示;
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示;
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:23所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示;
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:25所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:26所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:27所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:28所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示;
或者
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:31所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:32所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:33所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:34所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:35所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:36所示。
轻链和重链的可变区决定抗原的结合;每条链的可变区均含有三个高变区,称互补决定区(CDR)(重链(H)的CDR包含HCDR1、HCDR2、HCDR3,轻链(L)的CDR包含LCDR1、LCDR2、LCDR3;其由Kabat等人命名,见Bethesda M.d.,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,Fifth Edition,NIH Publication 1991;1-3:91-3242。
在本发明的一些实施方式中,所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,其中,
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:37、SEQ IDNO:39、SEQ IDNO:41、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47、SEQ ID NOs:49-53、SEQ ID NOs:58-62和SEQ ID NOs:68-73;并且
所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ IDNO:40、SEQ IDNO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77。
在本发明的一些实施方式中,所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,其中,
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:37所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:39所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:41所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:43所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:45所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:47所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:49所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:50所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:51所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:52所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:53所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:58所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:59所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:60所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:61所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:62所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:68所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:69所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:70所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:71所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:72所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77。
在本发明的一些实施方式中,所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,其中,
所述抗体的重链的氨基酸序列选自SEQ ID NOs:79-83、SEQ ID NOs:88-92和SEQID NOs:98-103;并且
所述抗体的轻链的氨基酸序列选自SEQ ID NOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQID NOs:104-107。
在本发明的一些实施方式中,所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,其中,
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:79所示,轻链的氨基酸序列选自SEQID NOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:80所示,轻链的氨基酸序列选自SEQID NOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:81所示,轻链的氨基酸序列选自SEQID NOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:82所示,轻链的氨基酸序列选自SEQID NOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:83所示,轻链的氨基酸序列选自SEQID NOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:88所示,轻链的氨基酸序列选自SEQID NOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:89所示,轻链的氨基酸序列选自SEQID NOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:90所示,轻链的氨基酸序列选自SEQID NOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:91所示,轻链的氨基酸序列选自SEQID NOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示,轻链的氨基酸序列选自SEQID NOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:98所示,轻链的氨基酸序列选自SEQID NOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:99所示,轻链的氨基酸序列选自SEQID NOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:100所示,轻链的氨基酸序列选自SEQID NOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:101所示,轻链的氨基酸序列选自SEQID NOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:102所示,轻链的氨基酸序列选自SEQID NOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
或者
所述抗体的重链可的氨基酸序列如SEQ ID NO:103所示,轻链的氨基酸序列选自SEQ ID NOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107。
在本发明的一些实施方式中,所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,其中,所述抗DKK1抗体或其抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、dAb、互补决定区片段、单链抗体、人源化抗体、嵌合抗体或双抗体。
本发明的另一方面涉及一种抗DKK1的抗体或其抗原结合片段,其具有如下特征:
(a)与本文任一项所述的抗体或抗原结合片段结合相同的、或完全重叠的、或部分重叠的人DKK1蛋白的表位;或
(b)与本文任一项所述的抗体或抗原结合片段竞争性结合人DKK1蛋白的表位。
在本发明的一些实施方式中,所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,其中,
所述的抗体包括非-CDR区,且所述非-CDR区来自不是鼠类的物种,例如来自人抗体。
在本发明的一些实施方式中,所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,其中,所述抗体的重链恒定区为Ig gamma-1chain C region(例如NCBI ACCESSION:P01857)或Iggamma-4chain C region(例如NCBI ACCESSION:P01861.1);轻链恒定区为Ig kappa chainC region(例如NCBI ACCESSION:P01834);
优选地,所述抗体的重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:112所示,所述抗体的轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:113所示。
本发明的另一方面涉及一种分离的核酸分子,其编码本发明中任一项所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段。
本发明的再一方面涉及一种重组载体,其包含本发明的分离的核酸分子。
本发明的再一方面涉及一种宿主细胞,其包含本发明的分离的核酸分子,或者本发明的重组载体。
本发明的再一方面涉及一种偶联物,其包括抗体以及偶联部分,其中,所述抗体为本发明中任一项所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,所述偶联部分为可检测的标记;优选地,所述偶联部分为细胞毒素、免疫调节剂、放射性同位素、荧光物质、发光物质、有色物质或酶。
本发明的再一方面涉及一种试剂盒,其包括本发明中任一项所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,或者包括本发明的偶联物;
优选地,所述试剂盒还包括第二抗体,其特异性识别所述抗体;任选地,所述第二抗体还包括可检测的标记,例如细胞毒素、免疫调节剂、放射性同位素、荧光物质、发光物质、有色物质或酶。
本发明的再一方面涉及一种双特异性抗体,其包括第一蛋白功能区和第二蛋白功能区,其中:
所述第一蛋白功能区靶向DKK1,
所述第二蛋白功能区靶向不同于DKK1的靶点,
其中,所述第一蛋白功能区为本发明中任一项所述的抗体或抗原结合片段。
在本发明的一些实施方式中,所述的双特异性抗体,其中,所述第一蛋白功能区和第二蛋白功能区直接连接或者通过连接片段连接。
在本发明的一些实施方式中,所述的双特异性抗体,其中,所述第一蛋白功能区和第二蛋白功能区独立地为1个、2个或者2个以上。
在本发明的一些实施方式中,所述的双特异性抗体,其中,所述单链抗体分别连接在免疫球蛋白形式的抗体的两条重链的C末端。
本发明的再一方面涉及一种药物组合物,其包含本发明中任一项所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,或者包含本发明的偶联物;
可选地,所述药物组合物还包含一种或多种其它抗肿瘤药物;优选地,所述其它抗肿瘤药物为化疗药物或抗体药物;优选地,所述化疗药物为微管蛋白抑制剂;优选地,所述抗体药物为免疫检查点抑制剂;优选地,所述化疗药物为紫杉醇;
可选地,所述药物组合物还包括一种或多种药学上可接受的辅料(例如载体和/或赋形剂)。
在本发明的一个或多个实施方式中,所述的药物组合物,其中,按照抗体的质量计算,抗DKK1抗体或其抗原结合片段与紫杉醇的质量比为(1:5)-(5:1),例如:1:5、1:4、1:3、1:2、1:1、2:1、3:1、4:1或5:1。
本发明的再一方面涉及一种组合产品,其包含独立包装的第一产品和第二产品,其中,
所述第一产品包含其包含本发明中任一项所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,或者包含本发明的偶联物;
所述第二产品包含一种或多种其它抗肿瘤药物;优选地,所述其它抗肿瘤药物为化疗药物或抗体药物;优选地,所述化疗药物为微管蛋白抑制剂;优选地,所述抗体药物为免疫检查点抑制剂;优选地,所述化疗药物为紫杉醇;
优选地,所述第一产品和所述第二产品还独立地包含一种或多种药学上可接受的辅料(例如载体和/或赋形剂);
优选地,所述组合产品还包含产品说明书。
在本发明的一个或多个实施方式中,所述的组合产品,其中,按照抗体的质量计算,抗DKK1抗体或其抗原结合片段与紫杉醇的质量比为(1:5)-(5:1),例如:1:5、1:4、1:3、1:2、1:1、2:1、3:1、4:1或5:1。
本发明的再一方面涉及本发明中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、本发明的偶联物、本发明中任一项所述的双特异性抗体或者本发明中任一项所述的药物组合物在制备治疗和/或预防DKK1介导的疾病的用途;优选地,所述DKK1介导的疾病为肿瘤;优选地,所述肿瘤选自胆囊癌、膀胱癌、骨肉瘤、食管癌、胆管癌、子宫内膜癌、卵巢癌、胃癌、胃食管交界处癌、结肠癌、直肠癌、肝细胞癌、前列腺癌、肺癌和骨髓瘤中的一种或多种。
根据本发明中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、本发明的偶联物、本发明中任一项所述的双特异性抗体或者本发明中任一项所述的药物组合物,其用于治疗和/或预防DKK1介导的疾病;优选地,所述DKK1介导的疾病为肿瘤;优选地,所述肿瘤选自胆囊癌、膀胱癌、骨肉瘤、食管癌、胆管癌、子宫内膜癌、卵巢癌、胃癌、胃食管交界处癌、结肠癌、直肠癌、肝细胞癌、前列腺癌、肺癌和骨髓瘤中的一种或多种。
本发明的再一方面涉及一种治疗或预防DKK1介导的疾病的方法,包括给予有需求的受试者以有效量的本发明中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、本发明的偶联物、本发明中任一项所述的双特异性抗体或者本发明中任一项所述的药物组合物的步骤;;优选地,所述DKK1介导的疾病为肿瘤;优选地,所述肿瘤选自胆囊癌、膀胱癌、骨肉瘤、食管癌、胆管癌、子宫内膜癌、卵巢癌、胃癌、胃食管交界处癌、结肠癌、直肠癌、肝细胞癌、前列腺癌、肺癌和骨髓瘤中的一种或多种。
优选地,给药方式为静脉滴注或静脉注射。
在本发明的一些实施方式中,所述治疗或预防DKK1介导的疾病的方法为疗或预防肿瘤的方法。在本发明的一些实施方式中,所述治疗或预防肿瘤的方法还包括向所述受试者联合施用一种或多种疗法的步骤,所述疗法包括手术治疗和/或放射疗法和/或施用一种或多种其它抗肿瘤药物;
优选地,所述其它抗肿瘤药物为化疗药物或抗体药物;优选地,所述化疗药物为微管蛋白抑制剂;优选地,所述抗体药物为免疫检查点抑制剂;优选地,所述化疗药物为紫杉醇。
附图简述
图1:ELISA检测杂交瘤抗体对DDK1与LRP6结合的阻断作用。
图2A:荧光素酶报告基因法检测杂交瘤抗体对DDK1对Wnt信号抑制作用的拮抗效果。
图2B:荧光素酶报告基因法检测杂交瘤抗体对DDK1对Wnt信号抑制作用的拮抗效果。
图3:ELISA检测嵌合抗体对DDK1与LRP6结合的阻断作用。
图4A:ELISA检测嵌合抗体与DKK1的结合作用。
图4B:ELISA检测嵌合抗体与DKK1的结合作用。
图5A:荧光素酶报告基因法检测嵌合抗体对Wnt信号通路的回复作用。
图5B:荧光素酶报告基因法检测嵌合抗体对Wnt信号通路的回复作用。
图5C:荧光素酶报告基因法检测嵌合抗体对Wnt信号通路的回复作用。
图6:ELISA检测人源化抗体与DDK1的结合作用。
图7:ELISA检测人源化抗体对DDK1与LRP6结合的阻断作用。
图8:荧光素酶报告基因法检测人源化抗体对DKK1对Wnt信号抑制作用的拮抗效果。
图9:人源化抗体hu3对肿瘤生长的抑制作用。
图10:人源化抗体hu3对肿瘤生长的抑制作用。
本发明涉及的部分序列(下划线标出部分为CDR)
SEQ ID NO:1
EYTMH
SEQ ID NO:2
VIDPSNGDTSYNQKFKG
SEQ ID NO:3
TTGPWFAS
SEQ ID NO:4
RASQDISNYLN
SEQ ID NO:5
YKSRLHS
SEQ ID NO:6
QQVHTLPPT
SEQ ID NO:7
ENTMH
SEQ ID NO:8
GINPHKGGTSYNQKFKGSEQ ID NO:9
DWLGAMDY
SEQ ID NO:10
ITSTDIDDDMN
SEQ ID NO:11
EGNTLRP
SEQ ID NO:12
LQSDNLPYT
SEQ ID NO:13
SYNML
SEQ ID NO:14
VIFPGNGDTSYNPKFKGSEQ ID NO:15
DGYPSMDY
SEQ ID NO:16
ITSTDIDDDMN
SEQ ID NO:17
EGNSLRP
SEQ ID NO:18
LQFNNMPLT
SEQ ID NO:19
TSGMGVG
SEQ ID NO:20
HIWWDDVKRYNPALKSSEQ ID NO:21
IARSPTGFAY
SEQ ID NO:22
SASSSVSYMY
SEQ ID NO:23
DTSNLAS
SEQ ID NO:24
QQWSSYPPALT
SEQ ID NO:25
AFDVH
SEQ ID NO:26
VIWIGGTTDYNGAFISSEQ ID NO:27
KRGNYYNMDY
SEQ ID NO:28
RSSTGTVTTTNYAN
SEQ ID NO:29
GTNNRAP
SEQ ID NO:30
ALWYSNHWV
SEQ ID NO:31
NHGMN
SEQ ID NO:32
WINTNTGEPTYADDFKG
SEQ ID NO:33
RGYGFPYYYTMDY
SEQ ID NO:34
RSSTGAVTTRNYAN
SEQ ID NO:35
GTKNRAP
SEQ ID NO:36
ALWYSNRLV
SEQ ID NO:37
MGWSWIFLFLLSGTAGVLSEVQLQQSGPELVKPGASVRISCKTSGYTFTEYTMHWVKQSHGKSLEWIGV IDPSNGDTSYNQKFKGRATLTVDKSSSTAYMDLRSLTSEDSALYYCSSTTGPWFACWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:38
MSSAQFLGLLLLCFQGTRCDIQMTQTTSSLSASLGDRVTINCRASQDISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYY KSRLHSGVPTRFSGSGSGTDFSLTISNLVQEDIATYFCQQVHTLPPTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:39
MGWSWIFLFLLSGTAGVLSEVQLQQSGPELVKPGASVKIFCKTSGYTFTENTMHWVKQTHGKSLEWIGG INPHKGGTSYNQKFKGKATLTVDKSSSTACMELRSLTSEDSTVYYCARDWLGAMDYWGQGTSVTVSP
SEQ ID NO:40
MFSLALLLSLLLLCVSDSRAETTVTQSPASLSMAIGEKVTIRCITSTDIDDDMNWYQQKPGEPPKLLISEGNTLRPGVPSRFSSSGYGTDFVFTIENMLSEDVADYYCLQSDNLPYTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:41
MGWNCFILFLVATATGVHSQVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMLWVKQTPGQGLEWIGV IFPGNGDTSYNPKFKGKAALTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARDGYPSMDYWGQGTSVTVSS
SEQ ID NO:42
MLSLAPLLSLLLLCVSDSRAETIVTQSPASLSVATGEKVTIRCITSTDIDDDMNWYQQKPGEPPKLLISEGNSLRPGVPSRFSSSGYGTDFVFTIENTLSEDVADYYCLQFNNMPLTFGAGTKLELK
SEQ ID NO:43
MGRLTSSFLLLIVPAYVLSQVTLKESGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMGVGWIRQPSGKGLEWLAHIWWDDVKRYNPALKSRLTISKDTSSSQVFLKIASVDTTDTASYYCSRIARSPTGFAYWGQGTL
SEQ ID NO:44
MDFQVQIFSFLLISASVILSRGQIVLTQSPVIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMYWYQQKPGSSPRLLIYDTSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSSYPPALTFGAGTKLELK
SEQ ID NO:45
MAVLGLLFCLVTFPSCVLSQVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTAFDVHWVRQSPGKGLEWLGVIWIGGTTDYNGAFISRLSISKDNSKSQVFFKMNSLQAKDTAIYYCARKRGNYYNMDYWGQGTSVTVAS
SEQ ID NO:46
MAWISLILSLLALSSGAISQAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGTVTTTNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNHWVFGGGTKLTVL
SEQ ID NO:47
MAWVWTLLFLMAAAQSAQAQIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNHGMNWVKQAPGKGLKWMGWINTNTGEPTYADDFKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDTATYFCARRGYGFPYYYTMDYWGQGTSVTVSS
SEQ ID NO:48
MAWISLILSLLALSSGAISQAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTRNYANWVQEKADHLLTGLIGGTKNRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAKYFCALWYSNRLVFGGGTKLTVL
SEQ ID NO:49
EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKTSGYTFTEYTMHWVRQMPGKELEWMGVIDPSNGDTSYNQKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCSSTTGPWFASWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:50
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEYTMHWVRQAPGQGLEWMGVIDPSNGDTSYNQKFKGRVTLTVDKSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARTTGPWFASWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:51
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTEYTMHWVRQAPGQGLEWMGVIDPSNGDTSYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCSSTTGPWFASWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:52
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEYTMHWVRQAPGQRLEWMGVIDPSNGDTSYNQKFKGRVTITVDKSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCSSTTGPWFASWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:53
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEYTMHWVRQAPGQRLEWMGVIDPSNGDTSYNQKFKGRVTLTVDKSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARTTGPWFASWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:54
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYKSRLHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQVHTLPPTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:55
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYKSRLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVHTLPPTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:56
EIVMTQSPPTLSLSPGERVTLSCRASQDISNYLNWYQQKPGQAPRLLIYYKSRLHSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAVYYCQQVHTLPPTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:57
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYKSRLHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYFCQQVHTLPPTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:58
EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKTSGYSFTENTMHWVRQMPGKELEWMGGINPHKGGTSYNQKFKGHVTISVDKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCARDWLGAMDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:59
EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKTSGYTFTENTMHWVRQMPGKELEWMGGINPHKGGTSYNQKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCARDWLGAMDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:60
EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKTSGYTFTENTMHWVRQMPGKELEWMGGINPHKGGTSYNQKFKGHVTLSVDKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCARDWLGAMDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:61
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTENTMHWVRQAPGQGLEWMGGINPHKGGTSYNQKFKGRVTLTVDKSSSTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDWLGAMDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:62
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTENTMHWVRQAPGQGLEWMGGINPHKGGTSYNQKFKGRVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDWLGAMDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:63
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCITSTDIDDDMNWYRQKPGKVPKLLISEGNTLRPGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLQSDNLPYTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:64
DIQVTQSPSSLSASVGDRVTITCITSTDIDDDMNWYQQKPGKAPKLLISEGNTLRPGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCLQSDNLPYTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:65
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCITSTDIDDDMNWYQQKPGQPPKLLISEGNTLRPGVPARFSSSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCLQSDNLPYTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:66
DTVLTQSPASLAVSPGQRATITCITSTDIDDDMNWYQQKPGQPPKLLISEGNTLRPGVPARFSSSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCLQSDNLPYTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:67
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCITSTDIDDDMNWYQQKPGQPPKLLISEGNTLRPGVPARFSSSGSGTDFTLTINPVEANDVANYYCLQSDNLPYTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:68
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYNMLWVRQAPGQRLEWMGVIFPGNGDTSYNPKFKGRVTITADKSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGYPSMDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:69
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYNMLWVRQAPGQRLEWMGVIFPGNGDTSYNPKFKGRVTLTADKSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGYPSMDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:70
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSSYNMLWVRQAPGQGLEWMGVIFPGNGDTSYNPKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGYPSMDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:71
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYNMLWVRQAPGQGLEWMGVIFPGNGDTSYNPKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGYPSMDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:72
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYNMLWVRQAPGQGLEWMGVIFPGNGDTSYNPKFKGRVTLTADKSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGYPSMDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:73
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYNMLWVRQAPGQRLEWMGVIFPGNADTSYNPKFKGRVTLTADKSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGYPSMDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:74
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCITSTDIDDDMNWYQQKPGKAPKLLISEGNSLRPGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQFNNMPLTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:75
DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCITSTDIDDDMNWYQQKPGKAPKLLISEGNSLRPGVPSRFSSSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQFNNMPLTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:76
DTQLTQSPSFLSASVGDRVTITCITSTDIDDDMNWYQQKPGKAPKLLISEGNSLRPGVPSRFSSSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQFNNMPLTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:77
EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCITSTDIDDDMNWYQQKPDQSPKLLISEGNSLRPGVPSRFSSSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCLQFNNMPLTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:78
TTGPWFAC
SEQ ID NO:79
EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKTSGYTFTEYTMHWVRQMPGKELEWMGVIDPSNGDTSYNQKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCSSTTGPWFASWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:80
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEYTMHWVRQAPGQGLEWMGVIDPSNGDTSYNQKFKGRVTLTVDKSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARTTGPWFASWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:81
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTEYTMHWVRQAPGQGLEWMGVIDPSNGDTSYNQKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCSSTTGPWFASWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:82
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEYTMHWVRQAPGQRLEWMGVIDPSNGDTSYNQKFKGRVTITVDKSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCSSTTGPWFASWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:83
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTEYTMHWVRQAPGQRLEWMGVIDPSNGDTSYNQKFKGRVTLTVDKSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARTTGPWFASWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:84
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYKSRLHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQVHTLPPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:85
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYKSRLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVHTLPPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:86
EIVMTQSPPTLSLSPGERVTLSCRASQDISNYLNWYQQKPGQAPRLLIYYKSRLHSGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFAVYYCQQVHTLPPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:87
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYKSRLHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYFCQQVHTLPPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:88
EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKTSGYSFTENTMHWVRQMPGKELEWMGGINPHKGGTSYNQKFKGHVTISVDKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCARDWLGAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:89
EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKTSGYTFTENTMHWVRQMPGKELEWMGGINPHKGGTSYNQKFKGHVTISADKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCARDWLGAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:90
EVQLLQSAAEVKRPGESLRISCKTSGYTFTENTMHWVRQMPGKELEWMGGINPHKGGTSYNQKFKGHVTLSVDKSSSTAYLQWSSLKASDAAMYYCARDWLGAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:91
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTENTMHWVRQAPGQGLEWMGGINPHKGGTSYNQKFKGRVTLTVDKSSSTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDWLGAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:92
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTENTMHWVRQAPGQGLEWMGGINPHKGGTSYNQKFKGRVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDWLGAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:93
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCITSTDIDDDMNWYRQKPGKVPKLLISEGNTLRPGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLQSDNLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:94
DIQVTQSPSSLSASVGDRVTITCITSTDIDDDMNWYQQKPGKAPKLLISEGNTLRPGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCLQSDNLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:95
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCITSTDIDDDMNWYQQKPGQPPKLLISEGNTLRPGVPARFSSSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCLQSDNLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:96
DTVLTQSPASLAVSPGQRATITCITSTDIDDDMNWYQQKPGQPPKLLISEGNTLRPGVPARFSSSGSGTDFTLTINPVEANDTANYYCLQSDNLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:97
DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCITSTDIDDDMNWYQQKPGQPPKLLISEGNTLRPGVPARFSSSGSGTDFTLTINPVEANDVANYYCLQSDNLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:98
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYNMLWVRQAPGQRLEWMGVIFPGNGDTSYNPKFKGRVTITADKSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGYPSMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:99
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYNMLWVRQAPGQRLEWMGVIFPGNGDTSYNPKFKGRVTLTADKSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGYPSMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:100
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFSSYNMLWVRQAPGQGLEWMGVIFPGNGDTSYNPKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGYPSMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:101
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYNMLWVRQAPGQGLEWMGVIFPGNGDTSYNPKFKGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGYPSMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:102
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYNMLWVRQAPGQGLEWMGVIFPGNGDTSYNPKFKGRVTLTADKSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGYPSMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:103
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYNMLWVRQAPGQRLEWMGVIFPGNADTSYNPKFKGRVTLTADKSSSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGYPSMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:104
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCITSTDIDDDMNWYQQKPGKAPKLLISEGNSLRPGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQFNNMPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:105
DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCITSTDIDDDMNWYQQKPGKAPKLLISEGNSLRPGVPSRFSSSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQFNNMPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:106
DTQLTQSPSFLSASVGDRVTITCITSTDIDDDMNWYQQKPGKAPKLLISEGNSLRPGVPSRFSSSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQFNNMPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:107
EIVLTQSPDFQSVTPKEKVTITCITSTDIDDDMNWYQQKPDQSPKLLISEGNSLRPGVPSRFSSSGSGTDFTLTINSLEAEDAATYYCLQFNNMPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:108
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYTMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGFGTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPGYNNYYFDIWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
SEQ ID NO:109
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCHASDSISNSLHWYQQKPGQAPRLLIYYARQSIQGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSESWPLHFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:110
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVSGISYSGSNTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMGIDLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:111
DIALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGFNYVSWYQQHPGKAPKLMIHDGSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCQSWDVSPITAVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
SEQ ID NO:112
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO:113
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
发明详述
本发明提供了抗DKK1抗体或其抗原结合片段,其特征在于具有独特的CDR序列组成,与人类DKK1结合具有高亲和力和高特异性。本发明提供的抗DKK1抗体或其抗原结合片段可作为独立的疗法或与其它疗法/或其他抗癌药剂联合,用于诸如癌症的治疗。
定义
除非另有说明,本发明的实施将采用分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术,这些都在本领域的技术范围内。
为了可以更容易地理解本发明,某些科技术语具体定义如下。除非本文其它部分另有明确定义,否则本文所用的科技术语都具有本发明所属领域普通技术人员通常理解的含义。关于本领域的定义及术语,专业人员具体可参考Current Protocolsin MolecularBiology(Ausubel)。氨基酸残基的缩写是本领域中所用的指代20个常用L-氨基酸之一的标准3字母和/或1字母代码。本文(包括权利要求书)所用单数形式包括其相应的复数形式,除非文中另有明确规定。
术语“约”在与数字数值联合使用时意为涵盖具有比指定数字数值小5%的下限和比指定数字数值大5%的上限的范围内的数字数值。
本文术语“DKK1”,是Wnt/β-catenin信号转导通路的分泌性抑制剂,属于抑制Wnt信号传导的蛋白质家族之一的DKK(dickkopf)家族,指来自任何脊椎动物(包括哺乳动物如灵长类动物(例如人)和啮齿类动物(例如,小鼠和大鼠)的任何天然DKK1,除非另有说明。该术语涵盖“全长”未加工的DKK1以及由细胞内加工产生的任何形式的DKK1或其任何片段。该术语还包括天然存在的DKK1的变体,例如,剪接变体或等位变体。在一些实施方案中,DKK1是指来自人和小鼠DKK1全长或其片段(诸如其缺乏信号肽的成熟片段)。在一些实施方案中,DKK1是指与Genbank登录号NP_036374.1(SEQ ID NO:31)氨基酸残基32-266序列一致的成熟人DKK1(氨基酸残基1-31为前导肽)。
“百分比(%)氨基酸序列同一性”定义为在将所述序列进行比对(并在必要时导入空位)以获取最大百分比序列同一性,且不将任何保守取代视为序列同一性的部分之后,候选序列中的氨基酸残基与参比多肽序列中的相同氨基酸残基的百分比。可使用本领域各种方法进行序列比对以便测定百分比氨基酸序列同一性,例如,使用公众可得到的计算机软件如BLAST、BLAST-2、ALIGN或MEGALIGN(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以决定测量比对的适宜参数,包括对所比较的序列全长获得最大比对所需的任何算法。
“免疫应答”是指由例如淋巴细胞、抗原呈递细胞、吞噬细胞、粒细胞和由上述细胞或肝产生可溶性大分子(包括抗体、细胞因子和补体)的作用,该作用导致从人体选择性损害、破坏或清除侵入的病原体、感染病原体的细胞或组织、癌细胞或者在自体免疫或病理性炎症的情况下的正常人细胞或组织。
“信号转导途径”或“信号转导活性”是指通常由蛋白质间相互作用诸如生长因子对受体的结合启动的生化因果关系,所述关系导致信号从细胞的一部分传递至细胞的另一部分。一般地,传递包括引起信号转导的系列反应中的一种或多种蛋白质上的一个或多个酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸残基的特定磷酸化。倒数第二过程通常包括细胞核事件,从而导致基因表达的变化。
术语“活性”或“生物活性”,或术语“生物性质”或“生物特征”此处可互换使用,并包括但不局限于表位/抗原亲和力和特异性、在体内或体外中和或拮抗DKK1活性的能力、IC50、抗体的体内稳定性和抗体的免疫原性质。本领域公知的抗体的其它可鉴定的生物学性质或特征包括,例如,交叉反应性(即通常与靶定肽的非人同源物,或与其它蛋白质或组织的交叉反应性),和保持哺乳动物细胞中蛋白质高表达水平的能力。使用本领域公知的技术观察、测定或评估前面提及的性质或特征,所述技术包括但不局限于ELISA、FACS或BIACORE等离子体共振分析、不受限制的体外或体内中和测定、受体结合、细胞因子或生长因子的产生和/或分泌、信号转导和不同来源(包括人类、灵长类或任何其它来源)的组织切片的免疫组织化学。
“抗体”是指具有所需生物活性的任何形式的抗体。因此,其以最广义使用,具体包括但不限于单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、人源化抗体、完全人抗体、嵌合抗体和骆驼源化单结构域抗体。
“分离的抗体”是指结合化合物的纯化状态,且在这种情况下意指该分子基本不含其它生物分子,例如核酸、蛋白质、脂质、糖或其它物质例如细胞碎片和生长培养基。术语“分离(的)”并非意指完全不存在这类物质或不存在水、缓冲液或盐,除非它们以明显干扰本文所述结合化合物的实验或治疗应用的量存在。
“单克隆抗体”是指获自基本均质抗体群的抗体,即组成该群的各个抗体除可能少量天然存在的突变之外是相同的。单克隆抗体是高度特异性的,针对单一抗原表位。相比之下,常规(多克隆)抗体制备物通常包括大量针对不同表位(或对不同表位有特异性)的抗体。修饰语“单克隆”表明获自基本均质抗体群的抗体的特征,且不得解释为需要通过任何特定方法产生抗体。
“全长抗体”,天然存在时包含四条肽链的免疫球蛋白分子,两条重(H)链(全长时约50-70kDa)和两条轻(L)链(全长时约25kDa)通过二硫键互相连接。每一条重链由重链可变区(在本文中缩写为VH)和重链恒定区(在本文中缩写为CH)组成。重链恒定区由3个结构域CH1、CH2和CH3组成。每一条轻链由轻链可变区(在本文中缩写为VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH和VL区可被进一步细分为具有高可变性的互补决定区(CDR)和其间隔以更保守的称为框架区(FR)的区域。每一个VH或VL区由按下列顺序:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4从氨基末端至羧基末端排列的3个CDR和4个FR组成。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白对宿主组织或因子(包括免疫系统的各种细胞(例如,效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq))的结合。
抗体(“亲代抗体”)的“抗原结合片段”包括抗体的片段或衍生物,通常包括亲代抗体的抗原结合区或可变区(例如一个或多个CDR)的至少一个片段,其保持亲代抗体的至少一些结合特异性。抗体结合片段的实例包括但不限于Fab,Fab',F(ab')2和Fv片段;双抗体;线性抗体;单链抗体分子,例如sc-Fv;由抗体片段形成的纳米抗体(nanobody)和多特异性抗体。当抗原的结合活性在摩尔浓度基础上表示时,结合片段或衍生物通常保持其抗原结合活性的至少10%。优选结合片段或衍生物保持亲代抗体的抗原结合亲和力的至少20%、50%、70%、80%、90%、95%或100%或更高。还预期抗体的抗原结合片段可包括不明显改变其生物活性的保守或非保守氨基酸取代(称为抗体的“保守变体”或“功能保守变体”)。术语“结合化合物”是指抗体及其结合片段两者。
“单链Fv”或“scFv”抗体是指包含抗体的VH和VL结构域的抗体片段,其中这些结构域存在于单条多肽链中。Fv多肽一般还包含VH和VL结构域之间的多肽接头,其使scFv能够形成用于抗原结合的所需结构。
“结构域抗体”是只含有重链可变区或轻链可变区的免疫功能性免疫球蛋白片段。在某些情况下,两个或更多个VH区与肽接头共价连接形成二价结构域抗体。二价结构域抗体的2个VH区可靶向相同或不同的抗原。
“二价抗体”包含2个抗原结合部位。在某些情况下,2个结合部位具有相同的抗原特异性。然而,二价抗体可以是双特异性的。
“双抗体”是指具有两个抗原结合部位的小抗体片段,所述片段包含在同一多肽链(VH-VL或VL-VH)中与轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)。通过使用短得不允许在同一链的两个结构域之间配对的接头,迫使该结构域与另一链的互补结构域配对并产生两个抗原结合部位。
“嵌合抗体”是具有第一抗体的可变结构域和第二抗体的恒定结构域的抗体,其中第一抗体和第二抗体来自不同物种。通常可变结构域获自啮齿动物等实验动物的抗体(“亲代抗体”),而恒定结构域序列获自人抗体,使得与亲代啮齿动物抗体相比,所得嵌合抗体在人受试者中诱导不良免疫应答的可能性较低。
“人源化抗体”是指含有来自人和非人(例如鼠、大鼠)抗体的序列的抗体形式。一般而言,人源化抗体包含基本所有的至少一个、通常两个可变结构域,其中所有或基本所有的超变环相当于非人免疫球蛋白的超变环,而所有或基本所有的构架(FR)区是人免疫球蛋白序列的构架区。人源化抗体可包含任选的至少一部分的人免疫球蛋白恒定区(Fc)。
“完全人抗体”是指只包含人免疫球蛋白蛋白质序列的抗体。如在小鼠中、在小鼠细胞中或在来源于小鼠细胞的杂交瘤中产生,则完全人抗体可含有鼠糖链。同样,“小鼠抗体”是指仅包含小鼠免疫球蛋白序列的抗体。或者,如果在大鼠中、在大鼠细胞中或在来源于大鼠细胞的杂交瘤中产生,则完全人抗体可含有大鼠糖链。同样,“大鼠抗体”是指仅包含大鼠免疫球蛋白序列的抗体。
“同种型”抗体是指由重链恒定区基因提供的抗体种类(例如,IgM、IgE、IgG诸如IgGl、IgG2或IgG4)。同种型还包括这些种类之一的修饰形式,其中修饰已被产生来改变Fc功能,例如以增强或减弱效应子功能或对Fc受体的结合。
术语“核酸”或“多核苷酸”是指脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)及其呈单链或双链形式的聚合物。除非明确地限制,否则术语包括具有与参照核酸相似的结合性质并且以与天然存在的核苷酸相似的方式被代谢的含有已知的天然核苷酸的类似物的核酸(参见,属于Kariko等人的美国专利No.8,278,036,其公开了尿苷被假尿苷替代的mRNA分子,合成所述mRNA分子的方法以及用于在体内递送治疗性蛋白的方法)。除非另有所指,否则特定核酸序列还隐含地包括其保守修饰的变体(例如,简并密码子取代)、等位基因、直系同源物、SNP和互补序列以及明确指出的序列。具体地,简并密码子取代可通过生成其中一个或多个选择的(或全部)密码子的第三位被混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代的序列来实现(Batzer等人,Nucleic Acid Res.19:5081(1991);Ohtsuka等人,J.Biol.Chem.260:2605-2608(1985);和Rossolini等人,Mol.Cell.Probes 8:91-98(1994))。
“构建体”是指任何重组多核苷酸分子(诸如质粒、粘粒、病毒、自主复制多核苷酸分子、噬菌体或线性或环状单链或双链DNA或RNA多核苷酸分子),衍生自任何来源,能够与基因组整合或自主复制,构成如下多核苷酸分子,其中已经以功能操作的方式连接(即,可操作地连接)一或多个多核苷酸分子。重组构建体通常会包含可操作地连接至转录起始调节序列的本发明的多核苷酸,这些序列会导引多核苷酸在宿主细胞中的转录。可使用异源及非异源(即,内源)启动子两者导引本发明的核酸的表达。
“载体”是指任何重组多核苷酸构建体,该构建体可用于转化的目的(即将异源DNA引入到宿主细胞中)。一种类型的载体为“质粒”,是指环状双链DNA环,可将额外DNA区段连接至该环中。另一类型的载体为病毒载体,其中可将额外DNA区段连接至病毒基因组中。某些载体能够在被引入到的宿主细胞中自主复制(例如,具有细菌复制起点的细菌载体及游离型哺乳动物载体)。在引入到宿主细胞中后,其他载体(例如,非游离型哺乳动物载体)整合至宿主细胞的基因组中,且因此与宿主基因组一起复制。此外,某些载体能够导引被操作性连接的基因的表达。本文将此类载体称为“表达载体”。
本文所用术语“表达载体”是指能够在转化、转染或转导至宿主细胞中时复制及表达目的基因的核酸分子。表达载体包含一或多个表型选择标记及复制起点,以确保维护载体及以在需要的情况下于宿主内提供扩增。
用于细胞或受体的“活化”、“刺激”和“处理”可具有相同含义,例如细胞或受体用配体活化、刺激或处理,除非上下文另外或明确规定。“配体”包括天然和合成配体,例如细胞因子、细胞因子变体、类似物、突变蛋白和来源于抗体的结合化合物。“配体”还包括小分子,例如细胞因子的肽模拟物和抗体的肽模拟物。“活化”可指通过内部机制以及外部或环境因素调节的细胞活化。“应答/反应”,例如细胞、组织、器官或生物体的应答,包括生化或生理行为(例如生物区室内的浓度、密度、粘附或迁移、基因表达速率或分化状态)的改变,其中改变与活化、刺激或处理有关,或者与例如遗传编程等内部机制有关。
如本文中所用,术语任何疾病或病症的“治疗”或“医治”在一个实施方案中是指改善疾病或病症(即,减缓或阻止或减少疾病的进展或其临床症状的至少一个)。在另一个实施方案中,“治疗”或“医治”是指缓解或改善至少一个身体参数,包括可能不能被患者辨别出的那些物理参数。在另一个实施方案中,“治疗”或“医治”是指在身体上(例如,可辨别的症状的稳定)、生理上(例如,身体参数的稳定)或在这两方面调节疾病或病症。除非在本文中明确描述,否则用于评估疾病的治疗和/或预防的方法在本领域中通常是已知的。
“受试者”包括任何人或非人动物。术语“非人动物”包括所有脊椎动物,例如哺乳动物和非哺乳动物,诸如非人灵长类动物、绵羊、狗、猫、马、牛、鸡、两栖动物、爬行动物等。
“联合”一种或多种其它抗肿瘤药物的施用包括同时(共同)施用和任意次序的连续施用。
“治疗有效量”、“治疗有效剂量”和“有效量”是指本发明的DKK1抗体或其抗原结合片段当单独或与其它治疗药物组合给予细胞、组织或受试者时,有效预防或改善一种或多种疾病或病况的症状或该疾病或病况的发展的量。治疗有效剂量还指足以导致症状改善的抗体或其抗原结合片段的量,例如治疗、治愈、预防或改善相关医学病况或者提高这类病况的治疗、治愈、预防或改善的速度的量。当对个体施用单独给予的活性成分时,治疗有效剂量仅是指该成分。当组合施用时,治疗有效剂量是指引起治疗效果的活性成分的综合量,不论是组合、依次给予还是同时给予。治疗有效量将导致诊断标准或参数提高至少10%,通常至少20%,优选至少约30%,更优选至少40%,最优选至少50%。
“癌症”和“癌性”指或描述哺乳动物中特征通常为细胞生长不受调控的生理疾患。此定义中包括良性和恶性癌症以及休眠肿瘤或微转移。
抗DKK1抗体及其产生
术语“抗DKK1抗体”、“抗DKK1”、“DKK1抗体”或“结合DKK1的抗体”能够以足够的亲合力结合DKK1蛋白或其片段以致所述抗体可以用作靶向DKK1的诊断剂和/或治疗剂。
可采用用于产生抗体的任何合适方法来产生本发明的抗体。任何合适形式的DKK1都可用作产生抗体的免疫原(抗原)。通过举例而非限制,任何DKK1变体或其片段都可用作免疫原。在一些实施方式中,产生鼠源的单克隆抗人DKK1抗体的杂交瘤细胞可通过本领域公知的方法产生。这些方法包括但不限于最初由Kohler等(1975)(Nature 256:495-497)研发的杂交瘤技术。优选根据标准方案,分离出小鼠脾细胞,用PEG或通过电融合与小鼠骨髓瘤细胞系融合。然后通过筛选分泌抗体具有DKK1抑制活性的杂交瘤细胞。本发明的杂交瘤细胞免疫球蛋白可变区的DNA序列可利用基于简并引物PCR的方法测定。
来源于啮齿动物(如小鼠)的抗体在体内用作治疗药物时可引起不需要的抗体免疫原性,重复使用导致人体产生针对治疗性抗体的免疫应答,这类免疫应答至少导致丧失治疗功效,而严重的则导致潜在致死过敏反应。降低啮齿动物抗体的免疫原性的一种方法包括嵌合抗体的产生,其中将小鼠可变区与人恒定区融合(Liu等(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA84:3439-43)。然而,嵌合抗体中的完整啮齿动物可变区的保留仍可在患者中引起有害的免疫原性。将啮齿动物可变结构域的互补决定区(CDR)环移植到人构架上(即人源化)已被用于进一步将啮齿动物序列减至最低(Jones等(1986)Nature 321:522;Verhoeyen等(1988)Science 239:1534)。
在一些实施方案中,本发明的嵌合或人源化抗体可基于所述制备的鼠单克隆杂交瘤抗体的序列来制备。编码重链和轻链免疫球蛋白的DNA可以从目标鼠杂交瘤中获得,并且使用标准分子生物学技术进行工程改造以包含非鼠(例如人)免疫球蛋白序列。
在一些实施方案中,本发明所述的嵌合DKK1抗体,可使用本领域已知的方法将杂交瘤来源的免疫球蛋白重链和轻链可变区与人IgG恒定区有效连接(参见例如属于Cabilly等人的美国专利No.4,816,567),获得嵌合型重链和嵌合型轻链。在一些实施方案中,本发明的嵌合抗体包含的恒定区可选自人IgG任何亚型,如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4,优选IgG4。
在一些实施方案中,本发明的嵌合DKK1抗体可由一种嵌合型轻链与一种嵌合型重链表达质粒“混合和匹配”转染表达细胞获得,此类“混合和匹配”的抗体的DKK1结合可使用上述结合测定和其它常规结合测定(例如,ELISA)来进行测试。
本发明的所述抗体的可变区CDR的精确氨基酸序列边界可使用许多公知的方案的任何方案来确定,包括基于抗体的三维结构和CDR环的拓扑学的Chothia(Chothia等人.(1989)Nature 342:877-883,Al-Lazikani等人,“Standard conformations for thecanonical structures of immunoglobμLins”,Journal of MolecμLar Biology,273,927-948(1997))基于抗体序列可变性的Kabat(Kabat等人,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,第4版,U.S.Department of Health and Human Services,National Institutes of Health(1987)),AbM(University of Bath),Contact(University College London),国际ImMunoGeneTics database(IMGT)(1999NucleicAcids Research,27,209-212),以及基于利用大量晶体结构的近邻传播聚类(affinitypropagation clustering)的North CDR定义。本发明抗体的CDR可以由本领域的技术人员根据本领域的任何方案(例如不同的指派系统或组合)确定边界。
应该注意,基于不同的指派系统获得的同一抗体的可变区的CDR的边界可能有所差异。即不同指派系统下定义的同一抗体可变区的CDR序列有所不同。因此,在涉及用本发明定义的具体CDR序列限定抗体时,所述抗体的范围还涵盖了这样的抗体,其可变区序列包含所述的具体CDR序列,但是由于应用了不同的方案(例如不同的指派系统或组合)而导致其所声称的CDR边界与本发明所定义的具体CDR边界不同。
具有不同特异性(即,针对不同抗原的不同结合位点)的抗体具有不同的CDR。然而,尽管CDR在抗体与抗体之间是不同的,但是CDR内只有有限数量的氨基酸位置直接参与抗原结合。使用Kabat、Chothia、AbM、Contact和North方法中的至少两种,可以确定最小重叠区域,从而提供用于抗原结合的“最小结合单位”。最小结合单位可以是CDR的一个子部分。正如本领域技术人员明了,通过抗体的结构和蛋白折叠,可以确定CDR序列其余部分的残基。因此,本发明也考虑本文所给出的任何CDR的变体。例如,在一个CDR的变体中,最小结合单位的氨基酸残基可以保持不变,而根据Kabat或Chothia定义的其余CDR残基可以被保守氨基酸残基替代。
本发明所述的人源化抗体,可以使用本领域已知的方法将鼠源CDR区插入人种系框架区。参见Winter等人的美国专利No.5,225,539及Queen等人的美国专利No.5,530,101、5,585,089、5,693,762和6,180,370。简言之,发明人藉由NCBI(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/)网站中的人类免疫球蛋白基因数据库搜寻与鼠源抗体可变区的cDNA序列同源的人类种系IgG基因,原则上藉由选定的CDR嫁接实现人源化。然而,CDR环交换仍不能均匀产生具有与起始抗体相同的结合性质的抗体。在人源化抗体中,常常还需要构架残基(FR)(参与CDR环支持的残基)改变以保持抗原结合亲和力。简言之,人源化改造过程涉及以下步骤:A、把各候选抗体的基因序列与人胚胎系抗体基因序列进行比对,找出同源性高的序列;B、分析考察HLA-DR亲和性,选出亲和力低的人胚胎系框架序列;C、利用计算机模拟技术,应用分子对接分析可变区及其周边的框架氨基酸序列,考察其空间立体结合方式。通过计算静电力,范德华力,亲疏水性和熵值,分析各候选的抗体基因序列中可与DKK1作用以及维护空间构架的关键氨基酸个体,将其嫁接回已经选择的人胚胎系基因框架,并在此基础上标配出必须保留的框架区氨基酸位点,合成人源化抗体。
在一些实施方式中,可在本文中所提供抗体的Fc区中引入一个或多个氨基酸修饰,以此产生Fc区变体。Fc区变体可包含在一或多个氨基酸位置处包含氨基酸修饰(例如取代)的人Fc区序列(例如人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc区)。
在一些实施方式中,可能需要产生经半胱氨酸工程改造的抗体,例如“硫代MAb”,其中抗体的一或多个残基经半胱氨酸残基取代。
在一些实施方式中,本文中所提供的抗体可进一步经修饰为含有本领域中已知且轻易获得的其他非蛋白质部分。适合抗体衍生作用的部分包括,但不限于,水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例包括,但不限于,聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二烷、聚-1,3,6-三烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或无规共聚物)、及葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/氧化乙烯共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇、及其混合物。
在一些实施方案中,本发明所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段具有以下特性中的一种或多种:(1)特异性结合人DKK1蛋白;(2)与食蟹猴DKK1交叉反应;(3)抑制DKK1与LRP5或LRP6结合;(4)抑制由DKK1介导的活性信号转导;(5)能显著抑制肿瘤的生长。
在一些实施方案中,本发明所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段具有下列性质中的至少一种:
(1)以至少约5nM、至少约1nM、至少约0.1nM、至少约0.01nM、至少约0.001nM的KD与人DKK1结合;
(2)与食蟹猴DKK1交叉反应。
本发明还涉及用于产生本发明所述抗体或其抗原结合片段的方法。此类方法包括提供一种编码本发明的抗体或抗原结合片段的分离的核酸分子,或包含此类核酸的表达载体,特别是用于在宿主细胞中重组产生本发明所述的抗体或其抗原结合片段的载体。
本发明还涉及包含一种或多种上述重组载体或表达载体的宿主细胞以及用于产生本发明所述抗体或包含其抗原结合片段的方法,所述方法包括培养所述宿主细胞、纯化和回收所述抗体或其抗原结合片段。
本发明还提供一种产生上述抗体或其抗原结合片段的方法,包括培养上述的宿主细胞,并从培养物中回收所述抗体或其抗原结合片段。
本发明还涉及治疗受试者癌症的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文所述的任何抗DKK1抗体或其抗原结合片段或其药物组合物。
在一种实施方式中,还涉及本发明所述的任何抗DKK1抗体或其抗原结合片段在制备用于在受试者中治疗癌症的药物的用途。
本发明还提供了上述的抗体或其抗原结合片段、核酸分子、载体、宿主细胞或药物组合物在制备用于治疗和/或预防DKK1介导的疾病或病症的药物中的用途;优选地,所述疾病或病症是癌症。
本发明还涉及向癌症受试者联合施用一种或多种疗法(例如治疗方式和/或其它抗肿瘤药物)。在一些实施方案中,上述疗法包括向所述受试者施用有效量的本发明任一实施方案所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段或其药物组合物。在一些实施方案中,治疗方式包括手术治疗和放射疗法。在一些实施方案中,上述其它抗肿瘤药物包含化疗药物和/或免疫检查点抑制剂,其中化疗药物选自微管蛋白抑制剂/或抗血管生成剂;其中化疗药物优选微管蛋白抑制剂。
本发明还涉及本文所述的任何抗DKK1抗体或其抗原结合片段与微管蛋白抑制剂组合在制备用于在受试者中治疗癌症的药物中的用途。
本发明还涉及检测样品中DKK1的方法,所述方法包括:a)将样品与本文所述的任何抗DKK1抗体或其片段接触;和b)检测抗DKK1抗体或其片段和DKK1间的复合物的形成。在一个实施方案中,抗DKK1抗体是被可检测地标记的。
在一些实施方案中,本发明涉及试剂盒或制品,其包含本文所述的任何抗DKK1抗体或其片段。在一些实施方案中,所述试剂盒或制品包含本文所述的抗DKK1抗体或其片段与任选的可药用辅料,以及任选地一种或多种其它抗肿瘤药物(例如免疫检查点抑制剂、微管蛋白抑制剂、抗血管生成剂或其他化疗药物)。
本发明还涵盖本文所述的任何实施方案的任意组合。本文所述的任何实施方案或其任何组合适用于本文所述的发明的任何和所有抗DKK1抗体或其片段、方法和用途。
在一些实施方案中,本发明所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段以约l nM-2pM的KD或更高亲和力特异性结合DKK1,优选地其以1nM、100pM、10pM或2pM的KD或亲和力特异性结合DKK1。在一个实施方案中,特异性结合人DKK1的本发明抗体还与食蟹猴DKK1交叉反应。本文所述的“交叉反应性”是指抗体与来自其它物种的同源蛋白反应的能力。抗体是否特异性结合人DKK1可使用本领域中已知的任何测定法确定。本领域中已知测定结合亲和力的分析的实例包括表面等离子共振(例如,BIACORE)或类似技术(例如,ForteBio)。
在一些实施方案中,本发明所述的DKK1抗体或其抗原结合片段具有抑制活性,例如抑制DKK1的表达(如抑制细胞表面DKK1的表达)、活性和/或信号传递,或干扰DKK1和LRP5或LRP6之间的相互作用。本发明提供的DKK1抗体在结合DKK1(如人DKK1)或与其相互作用后完全或部分地降低或调节DKK1的表达或活性。在抗体与人DKK1多肽和/或肽之间相互作用后,DKK1生物学功能的降低或调节是完全、显著或部分的。当与不存在同本文所述的抗体相互作用(如结合)时DKK1的表达或活性水平相比,存在抗体时DKK1的表达或活性水平降低了至少95%(例如降低了96%、97%、98%、99%或100%)时,所述抗体被认为能够完全抑制DKK1的表达或活性。与不存在同本文所述的DKK1抗体结合时DKK1的表达或活性水平相比,存在DKK1抗体时DKK1的表达或活性水平降低了至少50%(例如降低了55%、60%、75%、80%、85%或90%),此时所述DKK1抗体被认为能够显著抑制DKK1的表达或活性。与不存在同本文所述的抗体相互作用(如结合)时DKK1的表达或活性水平相比,存在抗体时DKK1的表达或活性水平降低了少于95%(例如降低了10%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、75%、80%、85%或90%),此时所述抗体被认为能够部分抑制DKK1的表达或活性。
抗体表达
在一个方面,本发明涉及包含一种或多种表达载体的宿主细胞以及用于产生本发明的任何抗体或其片段的方法,所述方法包括培养所述宿主细胞、纯化和回收所述抗体或抗原结合片段。
在一个方面,本发明提供了编码以上任何抗DKK1抗体或其片段的核酸。所述核酸可以包含编码抗体的轻链可变区和/或重链可变区的氨基酸序列的核酸,或包含编码抗体的轻链和/或重链的氨基酸序列的核酸。
在一些实施方案中,提供包含所述核酸的一个或多个载体。在一个实施方案中,载体是表达载体。
本发明提供用于表达本发明的重组抗体的哺乳动物宿主细胞,包括可获自美国典型培养物保藏中心(ATCC)的许多永生化细胞系。这些尤其包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、NS0、SP2/0细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝细胞癌细胞、A549细胞、293T细胞和许多其它细胞系。哺乳动物宿主细胞包括人、小鼠、大鼠、狗、猴、猪、山羊、牛、马和仓鼠细胞。通过测定哪种细胞系具有高表达水平来选择特别优选的细胞系。
在一个实施方案中,本发明提供制备抗DKK1抗体的方法,其中所述方法包括,将表达载体导入哺乳动物宿主细胞中,将宿主细胞培养足够的一段时间,以允许抗体在宿主细胞中表达,或者更优选允许抗体分泌到宿主细胞生长的培养基中,从而产生抗体。可采用标准蛋白质纯化方法从培养基中回收抗体。
很可能由不同细胞系表达或在转基因动物中表达的抗体彼此具有不同的糖基化。然而,由本文提供的核酸分子编码的或包含本文提供的氨基酸序列的所有抗体是本发明的组成部分,而不论抗体的糖基化如何。同样,在某些实施方式中,非岩藻糖基化抗体是有利的,因为它们通常在体外和体内具有比其岩藻糖基化对应物更强力的功效,并且不可能是免疫原性的,因为它们的糖结构是天然人血清IgG的正常组分。
药物组合物和药物制剂
本发明提供了包含一种或多种结合DKK1的抗体或其抗原结合片段的药物组合物,其包含如前文任一项所述的抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载体或赋形剂的组合物。
应理解,本发明提供的抗DKK1抗体或其抗原结合片段或其药物组合物可以整合制剂中合适的运载体、赋形剂和其他试剂以联合给药,从而提供改善的转移、递送、耐受等。
术语“药物组合物”指这样的制剂,其允许包含在其中的活性成分的生物学活性以有效的形式存在,并且不包含对施用所述制剂的受试者具有不可接受的毒性的另外的成分。
可以通过将具有所需纯度的本发明的抗DKK1抗体或其抗原结合片段与一种或多种任选的药用辅料(Remington's Pharmaceutical Sciences,第16版,Osol,A.编(1980))混合来制备包含本文所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段的药物制剂,优选地,所述药物制剂为水溶液或冻干制剂的形式。
本发明的药物组合物或制剂还可以包含一种或多种其它活性成分,所述活性成分是被治疗的特定适应证所需的,优选具有不会不利地影响彼此的互补活性的那些活性成分。在一些实施方式中,其它的活性成分为化疗药物、微管蛋白抑制剂、免疫检查点抑制剂、生长抑制剂、抗生素或已知的各种抗肿瘤或抗癌剂,所述活性成分以对于目的用途有效的量合适地组合存在。在一些实施方式中,本发明的药物组合物还包含编码抗DKK1抗体或其抗原结合片段的多核苷酸的组合物。
抗体的医药用途
在一个方面,本发明涉及向受试者施用有效量的本文所述的任何抗DKK1抗体或其抗原结合片段,或包含所述抗体或其抗原结合片段的免疫辍合物,或药物组合物的方法,用于诱导T细胞或NK细胞介导的抗肿瘤活性、促进经典Wnt通路相关的抑癌活性或增强机体的免疫应答。
在又一个方面,本发明涉及向受试者施用有效量的本文所述的任何抗DKK1抗体或其抗原结合片段,或包含所述抗体或抗原结合片段的免疫辍合物,或药物组合物的方法,用于治疗或延缓各种癌症、免疫相关疾病和T细胞功能障碍性疾病。
在又一个方面,本发明提供治疗或预防受试者癌症的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的如前文任一项所述的抗体或其抗原结合片段、或如前文任一项所述的药物组合物的步骤。在一些实施方式中,如前文所述的方法,其还包括向所述受试者联合施用一种或多种疗法的步骤,所述疗法包括手术治疗和/或放射疗法和/或施用一种或多种其它抗肿瘤药物,所述的其它抗肿瘤药物选自化疗药物或免疫检查点抑制剂。所述化疗药物选自烷化剂类(alkylating agents)、磺酸烷基酯类(alkyl sulfonates)、氮丙啶类(aziridines)、乙撑亚胺类(ethylenimines)和甲基蜜胺类(methylamelamines)、番荔枝内酯类(acetogenin)、δ-9-四氢大麻酚(tetrahydrocannabinol)、β-拉帕醌(lapachone)、拉帕醇(lapachol)、秋水仙素类(colchicines)、白桦脂酸(betulinic acid)、喜树碱(camptothecin)、苔藓抑素(bryostatin)、培美曲塞(pemetrexed)、鬼臼毒素(podophyllotoxin)、鬼臼酸(podophyllinic acid)、替尼泊苷(teniposide)、隐藻素类(cryptophycins)、多拉司他汀(dolastatin)、艾榴塞洛素(eleutherobin)、海绵抑素(spongistatin)、氮芥类(nitrogen mustards)、胆磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法仑(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)、亚硝脲类(nitrosoureas)、抗生素类、地托比星(detorubicin)、6-二氮-5-氧-L-正亮氨酸、多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素类(mitomycins)、抗代谢物类、叶酸类似物、嘌呤类似物、嘧啶类似物、c-Kit抑制剂、抗肾上腺类、醋葡醛内酯(aceglatone)、醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)、氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)、恩尿嘧啶(eniluracil)、安吖啶(amsacrine)、bestrabucil、比生群(bisantrene)、依达曲沙(edatraxate)、地磷酰胺(defofamine)、地美可辛(demecolcine)、地吖醌(diaziquone)、elfornithine、依利醋铵(elliptinium acetate)、依托格鲁(etoglucid)、硝酸镓、羟脲(hydroxyurea)、香菇多糖(lentinan)、氯尼达明(lonidainine)、美登木素生物碱类(maytansinoids)、莫哌达醇(mopidanmol)、二胺硝吖啶(nitraerine)、喷司他丁(pentostatin)、蛋氨氮芥(phenamet)、吡柔比星(pirarubicin)、洛索蒽醌(losoxantrone)、2-乙基酰肼(ethylhydrazide)、丙卡巴肼(procarbazine)、雷佐生(razoxane)、根霉素(rhizoxin)、西索菲兰(sizofiran)、螺旋锗(spirogermanium)、细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)、三亚胺醌(triaziquone)、2,2',2″-三氯三乙胺、单端孢菌素类(trichothecenes)、乌拉坦(urethan)、长春地辛(vindesine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、甘露醇氮芥(mannomustine)、二溴甘露醇(mitobronitol)、二溴卫矛醇(mitolactol)、哌泊溴烷(pipobroman)、gacytosine、阿糖胞苷(arabinoside)、塞替派(thiotepa)、类紫杉醇(taxoids)、苯丁酸氮芥(chloranbucil)、6-硫鸟嘌呤(thioguanine)、巯基嘌呤(mercaptopurine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、铂类似物、依托泊苷(etoposide)(VP-16)、异环磷酰胺(ifosfamide)、米托蒽醌(mitoxantrone)、长春新碱(vincristine)、奥沙利铂(oxaliplatin)、亚叶酸(leucovovin)、长春瑞滨(vinorelbine)、能灭瘤(novantrone)、依达曲沙(edatrexate)、道诺霉素(daunomycin)、氨基蝶呤(aminopterin)、伊本膦酸盐(ibandronate)、二氟甲基鸟氨酸(DMFO)、类维A酸(retinoids)、任何上述物质的药学可接受盐、酸或衍生物、以及两种或更多种上述物质的组合,诸如CHOP(环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松龙联合疗法的缩写)和FOLFOX(奥沙利铂(ELOXATINTM)联合5-FU和亚叶酸的治疗方案的缩写)。优选地,所述化疗药物包括紫杉醇。在本发明的一些实施方式中,本发明提供的如前述治疗或预防癌症的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的如前文任一项所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段、或如前文任一项所述的药物组合物。在一些实施方式中,如前文所述的方法,其还包括向所述受试者联合施用一种或多种疗法,所述疗法包括施用紫杉醇。在本发明的一些实施方式中,如前文所述治疗或预防癌症的方法中,抗DKK1抗体或其抗原结合片段可与紫杉醇同时或不同时施用;在本发明的一些实施方式中,如前文所述治疗或预防癌症的方法中,抗DKK1抗体或其抗原结合片段可与紫杉醇同时或不同时施用;在本发明的一些实施方式中,如前文所述治疗或预防癌症的方法中,抗DKK1抗体或其抗原结合片段为每周1次或每周2次施用;在本发明的一些实施方式中,如前文所述治疗或预防癌症的方法中,紫杉醇为每周1次或每周2次施用。
在又一个方面,本发明提供本文所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段在生产或制备药物中的用途,所述药物用于治疗上文提及的相关疾病或病症。
在又一个方面,本发明提供本文所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段与微管蛋白抑制剂的组合在制备用于在受试者中治疗癌症的药物中的用途。
用于诊断和检测的方法
在某些实施方案中,本文中提供的任何抗DKK1抗体或其抗原结合片段可以用于检测DKK1在生物样品中的存在。术语“检测”用于本文中时,包括定量或定性检测。在某些实施方案中,生物样品是血、血清或生物来源的其他液体样品。在某些实施方案中,生物样品包含细胞或组织。
本发明包括所叙述特定实施方式的所有组合。本发明的进一步实施方式及可应用性的完整范畴将自下文所提供的详细描述变得显而易见。然而,应理解,尽管详细描述及特定实施例指示本发明的优选实施方式,但仅以说明的方式提供这些描述及实施例,因为本发明的精神及范畴内的各种改变及修改将自此详细描述对熟悉此项技术者变得显而易见。出于所有目的,包括引文在内的本文所引用的所有公开物、专利及专利申请将以引用的方式全部并入本文。
在本发明中,如果没有特别说明,所述“第一”(例如,第一产品、第一抗体、第一蛋白功能区等)和“第二”(例如,第二产品、第二抗体、第二蛋白功能区等))是为了指代上的区分或表述上的清楚,并不具有典型的次序上的含义。
本发明中,术语“其它抗肿瘤药物”是指除了本发明的抗DKK1抗体或其抗原结合片段以及本发明的偶联物之外的抗肿瘤药物;优选地,所述其它抗肿瘤药物为化疗药物或免疫检查点抑制剂;优选地,所述化疗药物为微管蛋白抑制剂;优选地,所述化疗药物为紫杉醇。
本发明采用下述缩略词:
CD CHO培养基(chemically defined medium for China hamster ovary cell)代表化学成分确定的CHO培养基;
PEI(Polyethylenimine)代表聚乙烯亚胺;
BSA(Bovine serum albumin)代表牛血清白蛋白。
具体实施方式
DKN-01的重链和轻链的氨基酸序列分布如SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:109所示;
BHQ-880的重链和轻链的氨基酸序列分布如SEQ ID NO:110和SEQ ID NO:111所示。
实施例1:重组抗原蛋白DKK1-hFC的制备和检测
进行动物免疫的抗原为human DKK1和human IgG1 Fc的融合蛋白,将设计好的序列交给金唯智生物科技有限公司进行基因合成并将合成的质粒转化至top10菌种中。将菌种按照1:100的比例接到LB培养基中进行培养,18h收集,弃上清,用控内毒质粒抽提试剂盒(天根)提取质粒。
用CD CHO培养基对CHO-K1细胞(经过基因组水平的改造使细胞适用于瞬转表达)进行传代扩增,转染前一天将细胞密度稀释至1.5-2.0×106/mL,次日当细胞密度达到约3.5×106/mL时用于转染。先加入十分之一转染体积的培养基,再加入1-2μg/mL转染体积的上述合成质粒,最后加入3-14μg/mL转染体积的PEI,混匀后室温孵育不超过30分钟后,将转染混合物缓慢加入细胞中,将细胞放入摇床培养,培养条件为36.5℃,120rpm,7%CO2。培养周期为转染后6-10天,每两天补料一次。
培养结束后,1000g离心10min弃去沉淀,然后12000g离心30min收集细胞上清。细胞上清进行无菌过滤后,用AKTA Avant纯化仪进行纯化。先用0.1M NaOH对装填mabselectsure LX柱子进行CIP 15-20min,然后用3-5柱体积的PBS缓冲液平衡后再上样,上样完成后用亲和层析淋洗缓冲液进行淋洗,最后用pH 3.6的醋酸-醋酸钠缓冲液洗脱目的蛋白,并用1M Tris缓冲液中和样品。经SDS-PAGE方法鉴定蛋白的大小和纯度,所制备的抗原质量检测合格。
实施例2:杂交瘤细胞的制备、筛选及测序
2.1动物免疫
采用两侧脚垫免疫的方式,将实施例1中制得的抗原DKK1-hFc融合蛋白用于免疫5只BALB/c雌性小鼠。初次免疫的剂量为50μg/只,6次冲击免疫的剂量为25μg/只,每隔一周进行一次冲击免疫。
2.2细胞融合
在最后一针加强免疫后,取小鼠腹股沟淋巴结,腘窝淋巴结和脾脏,在生理盐水中碾磨后取富含淋巴细胞的悬浮液,按常规电转方法将其与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合。将融合产物在含1:50HAT(Hypoxanthine,Aminopterin and Thymidine)的DMEM完全培养基中培养5天以筛选成功融合的细胞,然后换成含1:50HT的DMEM完全培养基培养直至筛选结束。DMEM完全培养基配比是:15%FBS+1:50L-谷氨酰胺+100U/mL青链霉素+1:100OPI(Oxaloacetate,Pyruvate,and Insulin),培养箱参数条件是8%CO2,37℃。
2.3杂交瘤细胞的筛选
在11520株不同的多克隆杂交瘤细胞中,通过竞争ELISA,筛选出15株多克隆分泌抗体可与LPR6竞争结合DKK1,其中3株有弱的阻断效果,12株有强阻断效果。将15株抗体进行亚克隆,并通过竞争ELISA筛选,得到了7株单克隆抗体(图1)。
用过表达LRP5/6以及荧光素酶报告基因系统的靶细胞293TOP和重组Wnt3a(R&Dsystems,cat#5036-WN)以及人DKK1(义翘神州,cat#10170-H08H)蛋白,来检测DKK1抗体细胞生物学活性。即将靶细胞293TOP按每孔50,000个细胞接种到96孔平底白板(corning,cat#3917)中培养过夜,然后弃上清并且加入梯度稀释的待测抗体并于37℃预孵育0.5h;预孵育结束后,向含细胞和抗体的混合物中加入稀释的工作浓度分别为0.05μg/ml和为0.1μg/ml的Wnt3a(R&D systems,cat#5036-WN)和人DKK1蛋白,并于37℃共孵育6-8h。最后,加入荧光素酶底物One-Lite(Vazyme,cat#DD1203-03-AB)并检测各杂交瘤抗体对应的化学发光值。通过荧光素酶报告基因法,检测到其中7株抗体对Wnt信号通路均具有不同程度的回复作用(图2A和图2B)。
将7株杂交瘤细胞送至南京金斯瑞生物科技有限公司进行测序,其中两株细胞序列完全一致,最终得到6株杂交瘤抗体,分别命名为7M2.6,11I18.4,17F14.3,18E24.6,18J21.1和19O15.6。
2.4候选抗体可变区序列的获得(Kabat定义方案)
用基于简并引物PCR的方法,测定由候选杂交瘤细胞表达的小鼠抗体可变区的DNA序列。简言之,将杂交瘤细胞株分别扩大培养,1000rpm离心收集细胞,并以Trizol提取总RNA。以此为模板,合成第一链cDNA后,以第一链cDNA为后续模板PCR扩增对应的可变区DNA序列,所用PCR引物基于Ig-引物组。回收纯化PCR产物,将扩增产物测序后,得到候选杂交瘤抗体重链可变区和轻链可变区的编码序列,由此得到杂交瘤抗体重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列。如下面的表1所示。
表1:杂交瘤抗体可变区的氨基酸序列
用NCBI Ig-Blast(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/igblast/)在种系和重排Ig可变区序列数据库中搜索共有序列。基于Kabat(Wu,T.T及Kabat,E.A.1970J.Exp.Med.,132:211-250)及IMGT系统(Lefranc M.-P.等人,1999Nucleic AcidsResearch,27,209-212),藉由序列批注及藉由基于因 特 网 的序列 分析 (http://www.Imgt.org/IMGT_vquest/share/textes/index.html 与http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/)鉴定互补决定区(CDR)。如下面的表2所示。
表2:杂交瘤抗体CDR区的氨基酸序列(Kabat定义方案)
/>
实施例3:嵌合抗体的设计、构建与表达
根据实施例2的测序结果,选取抗huDKK1鼠源抗体7M2.6,11I18.4,17F14.3,18E24.6,18J21.1和19O15.6的轻链可变区和重链可变区(序列如下表3),重链可变区构建到hIgG4重链恒定区(重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:112所示),轻链可变区构建到hIgκ链(其中轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:113所示),嵌合重轻链可变区再随机组合成36株嵌合抗体,如下面的表3所示。
表3:嵌合抗体的编号(chi1-chi36)及其重链可变区和轻链可变区的组合
1VL | 2VL | 3VL | 5VL | 6VL | 7VL | |
1VH | chi-1 | chi-7 | chi-13 | chi-19 | chi-25 | chi-31 |
2VH | chi-2 | chi-8 | chi-14 | chi-20 | chi-26 | chi-32 |
3VH | chi-3 | chi-9 | chi-15 | chi-21 | chi-27 | chi-33 |
5VH | chi-4 | chi-10 | chi-16 | chi-22 | chi-28 | chi-34 |
6VH | chi-5 | chi-11 | chi-17 | chi-23 | chi-29 | chi-35 |
7VH | chi-6 | chi-12 | chi-18 | chi-24 | chi-30 | chi-36 |
用CD CHO培养基对CHO-K1细胞(经过基因组水平的改造使细胞适用于瞬转表达)进行传代扩增,转染前一天将细胞密度稀释至1.5-2.0×106/mL,次日当细胞密度达到约3.5×106/mL时用于转染。先加入十分之一转染体积的培养基,再分别加入1-2μg/mL转染体积的编码嵌合抗体的质粒,最后加入3-14μg/mL转染体积的PEI,混匀后室温孵育不超过30分钟后,将转染混合物缓慢加入细胞中,将细胞放入摇床培养,培养条件为36.5℃,120rpm,7%CO2。培养周期为转染后6-10天,每两天补料一次。
培养结束后,1000g离心10min弃去沉淀,然后12000g离心30min收集细胞上清。细胞上清进行无菌过滤后,用AKTA Avant纯化仪进行纯化。先用0.1M NaOH对装填mabselectsure LX柱子进行CIP 15-20min,然后用3-5柱体积的PBS缓冲液平衡后再上样,上样完成后用亲和层析淋洗缓冲液进行淋洗,最后用pH 3.6的醋酸-醋酸钠缓冲液洗脱目的蛋白,并用1M Tris缓冲液中和样品。经SDS-PAGE方法鉴定蛋白的大小和纯度,所制备的嵌合抗体质量检测合格。
实施例4:嵌合抗体的筛选
4.1蛋白水平的筛选
ELISA法检测嵌合抗体与人DKK1的结合活性:用人DKK1抗原2.0μg/mL(SinoBiological,10170-H08H)包板90min,2%BSA封闭90min后,加入梯度稀释的抗DKK1嵌合抗体及阳性对照抗体DKN-01(1μg/ml起始,2.5倍梯度稀释至1.64ng/mL,共8个浓度),孵育60min,洗板后孵育5000倍稀释的HRP偶联的羊抗人IgG(Fc特异性)(Sigma,A0170)二抗,然后用0.1mg/ml TMB(Sigma,T2885)显色,最后用2M盐酸溶液终止反应,使用ThermoScientific的酶标仪,在450nm/620nm下读板,使用四参数对数回归(4PL)模型拟合得到各嵌合抗体的EC50(图3),并比较各嵌合抗体的相对结合活性,选取活性较优的chi-1,chi-8,chi-15分子的VH和VL用于后续人源化抗体的构建。
ELISA法检测嵌合抗体抑制LRP6(629-1244)与DKK1的结合:用人DKK1抗原5.0μg/mL(Sino Biological,10170-H08H)包板90min,2%BSA封闭90min,用人LRP6 mFc(629-1244)(苏州君盟)稀释抗DKK1嵌合抗体及阳性对照抗体DKN-01(10μg/ml起始,2.5倍梯度稀释至16.38ng/mL,共8个浓度),加样后孵育60min,洗板后加入5000倍稀释的HRP偶联的羊抗鼠IgG(Fc特异性)(Sigma,A2554)孵育30min,洗板后每孔加入100μL 0.1mg/ml TMB(Sigma,T2885)显色10min,最后每孔加入2M盐酸溶液终止反应,在450nm/620nm下读板。使用四参数对数回归(4PL)模型拟合各嵌合抗体的IC50(图4A至图4B),并比较各个嵌合抗体的相对竞争抑制活性。
4.2细胞水平筛选
chi1上清和chi15上清为发酵液上清,未经纯化;chi1、chi8、chi15和chi21为纯化后得到的蛋白样品,发酵液上清和蛋白样品的制备参照前面的实施例3。
利用过表达LRP5/6以及荧光素酶报告基因系统的靶细胞293TOP和重组Wnt3a(R&Dsystems,cat#5036-WN)以及人DKK1(义翘神州,cat#10170-H08H)蛋白,来检测hDKK1嵌合抗体的细胞生物学活性。
将靶细胞293TOP按每孔50,000个细胞接种到96孔平底白板(corning,cat#3917)中培养过夜,然后弃上清并分别加入梯度稀释的待测抗体,于37℃预孵育0.5h;预孵育结束后,向含细胞和抗体的混合物中加入稀释的工作浓度分别为0.05μg/ml和为0.1μg/ml的Wnt3a(R&Dsystems,cat#5036-WN)和人DKK1蛋白,并于37℃共孵育6-8h。最后,加入荧光素酶底物One-Lite(Vazyme,cat#DD1203-03-AB)并检测各嵌合抗体对应的化学发光值(图5A至图5C)。
通过实施例4嵌合抗体的筛选得到了3个体外活性最好的抗体chi1、chi8和chi15,用于后续的人源化改造。
实施例5:嵌合抗体的人源化
首先在NCBI(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/)网站中的人类免疫球蛋白基因数据库搜寻与鼠源抗体可变区的DNA序列同源的人类种系IgG基因。再通过Kabat编号系统或IMGT编号系统定义可变区中的CDR的氨基酸序列。原则上将与鼠源抗体可变区具有高同源性的人类IGHV(免疫球蛋白重链恒定区)及IGKV(免疫球蛋白轻链恒定区)选为人源化模板,通过CDR嫁接实施抗体可变区的人源化。
嵌合抗体人源化的具体步骤如下:1、将各杂交瘤细胞分泌的抗体的基因序列与人胚胎系抗体基因序列进行比对,找出同源性高的序列;2、分析考察HLA-DR亲和性,选出亲和力低的人胚胎系框架区序列;3、利用计算机模拟技术,应用分子对接分析可变区及其周边的框架区氨基酸序列,考察其空间立体结合方式。通过计算静电力、范德华力、亲疏水性和熵值,分析各杂交瘤细胞分泌的抗体的基因序列中与huDKK1作用以及维护空间架构的关键氨基酸,将其嫁接到所选择的人胚胎系基因框架区中,并在此基础上标示必须保留的框架区氨基酸位点;4、以鼠源抗体的三维结构为基础,对包埋残基、与CDR区有直接相互作用的残基,以及对VL和VH的构象有重要影响的残基进行回复突变,并优化导致抗体CDR区化学不稳定的氨基酸残基。
最终1号嵌合抗体分子(chi-1)人源化改造得到了5条重链和4条轻链(人源化后HCDR3由SEQ ID NO:78突变为SEQ ID NO:3),2号嵌合抗体分子(chi-8)人源化改造得到了5条重链和5条轻链,3号嵌合抗体分子(chi-15)人源化改造得到了6条重链和4条轻链。3个分子内重轻链随机组合一共得到69株人源化分子(CDR序列为Kabat定义方案),其组合分别见下面的表4a至4c和5a至5c。
表4a:基于chi-1的人源化抗体的编号及其重链可变区和轻链可变区的组合
表4b:基于chi-8的人源化抗体的编号及其重链可变区和轻链可变区的组合
/>
表4c:基于chi-15的人源化抗体的编号及其重链可变区和轻链可变区的组合
表5a:基于chi-1的人源化抗体的编号及其重链和轻链的组合
/>
表5b:基于chi-8的人源化抗体的编号及其重链和轻链的组合
表5c:基于chi-15的人源化抗体的编号及其重链和轻链的组合
/>
实施例6:人源化抗体的制备
将编码69个人源化抗体hu1-hu69的重链和轻链的质粒委托南京金斯瑞生物科技有限公司进行基因合成,收到合成的质粒和菌种后,将菌种转接到LB培养基进行过夜培养,用天根质粒大抽试剂盒进行质粒抽提。
用CD CHO培养基对CHO-K1细胞(经过基因组水平的改造使细胞适用于瞬转表达)进行传代扩增,转染前一天将细胞密度稀释至1.5-2.0×106/mL,次日当细胞密度达到约3.5×106/mL时用于转染。先加入十分之一转染体积的培养基,再分别加入1-2μg/mL转染体积的编码嵌合抗体的质粒,最后加入3-14μg/mL转染体积的PEI,混匀后室温孵育不超过30分钟后,将转染混合物缓慢加入细胞中,终体积约为40mL。将细胞放入摇床培养,培养条件为36.5℃,120rpm,7%CO2。培养周期为转染后6-10天,每两天补料一次。
培养结束后,1000g离心10min弃去沉淀,然后12000g离心30min收集细胞上清并进行无菌过滤。采用同实施例1中对杂交瘤抗体的纯化方法,对69株人源化抗体进行纯化。纯化后采用SDS-PAGE鉴定抗体蛋白的大小和纯度,并采用HPLC-SEC检测蛋白的纯度。用于后面的实验。
实施例7:人源化抗体的筛选
7.1蛋白水平的筛选
ELISA法检测人源化抗体与DKK1的结合:用人DKK1抗原2.0μg/mL(SinoBiological,10170-H08H)包板90min,然后2%BSA封闭90min,洗板后加入梯度稀释的抗DKK1人源化抗体(1μg/ml起始,10倍梯度稀释至1ng/mL,共4个浓度),孵育60min,洗板后孵育5000倍稀释的HRP偶联的羊抗人IgG(Fc特异性)(Sigma,A0170)二抗30min,然后每孔加入100μL 0.1mg/mL TMB(Sigma,T2885)显色10min,最后每孔加入50μL 2M盐酸溶液终止反应,使用Thermo Scientific的酶标仪,在450nm/620nm下读板。使用四参数对数回归(4PL)模型拟合各人源化抗体的EC50,相比嵌合抗体chi-15,得到的部分人源化抗体与人DKK1结合能力提高(图6)。
ELISA法检测人源化抗体抑制LRP6(629-1244)与DKK1的结合:用人DKK1抗原5.0μg/mL(Sino Biological,10170-H08H)包板90min,然后2%BSA封闭90min,洗板后用10μg/mL人LRP6 mFc(629-1244)(苏州君盟)稀释DKK1抗体人源化抗体及抗DKK1嵌合抗体(10μg/ml起始,10倍梯度稀释至10ng/mL,共4个浓度),加样后孵育60min。洗板加入5000倍稀释的HRP偶联的羊抗鼠IgG(Fc特异性)(Sigma,A2554)每孔加入100μL,孵育30min,洗板后每孔加入100μL 0.1mg/ml TMB(Sigma,T2885)显色10min,最后每孔加入50μL 2M盐酸溶液终止反应,使用Thermo Scientific的酶标仪,在450nm/620nm下读板。使用四参数对数回归(4PL)模型拟合各人源化抗体的IC50,相比嵌合抗体chi-15,得到的部分人源化抗体抑制DKK1与LRP6结合的能力提高(图7)。
7.2细胞水平的筛选
利用过表达LRP5/6以及荧光素酶报告基因系统的靶细胞293TOP和重组Wnt3a(R&Dsystems,cat#5036-WN)以及人DKK1(义翘神州,cat#10170-H08H)蛋白,来检测DKK1抗体细胞生物学活性。将靶细胞293TOP按每孔50,000个细胞接种到96孔平底白板(corning,cat#3917)中培养过夜,然后弃上清并且加入梯度稀释的待测抗体并于37℃预孵育0.5h;预孵育结束后,向含细胞和抗体的混合物中加入稀释的工作浓度分别为0.05μg/ml和为0.1μg/ml的Wnt3a(R&D systems,cat#5036-WN)和人DKK1蛋白,并于37℃共孵育6-8h。最后,加入荧光素酶底物One-Lite(Vazyme,cat#DD1203-03-AB)并检测各人源化抗体对应的化学发光值,相比嵌合抗体chi-15,得到的部分人源化抗体抗体使Wnt3a通路的表达的恢复程度提高(图8)。
细胞水平的筛选结果显示,活性较优的分子为hu3、hu2、hu64、hu52和hu50。
经过对人源化抗体蛋白和细胞水平的筛选(图7,图8),将两轮筛选中效果较好的分子用于体内药效的研究。
实施例8:人源化抗DKK1抗体抑制小鼠体内肿瘤生长
实验动物为CB17/SCID雌性小鼠,向小鼠皮下接种A549细胞(5×106),建立皮下移植肿瘤模型。试验分为抗KLH IgG4(5mg/kg)组、DKN-01(5mg/kg)组、hu3(5mg/kg)组、紫杉醇(20mg/kg)组、DKN-01(5mg/kg)+紫杉醇(20mg/kg)组、DKN-01(5mg/kg)+hu3(5mg/kg)组,DKN-01为阳性对照抗体,抗KLH IgG4为阴性对照抗体。每组6只动物,各组均为腹腔注射给药,阴性对照、阳性对照、抗DKK1抗体hu3均为每周给药1次,共给药4周;紫杉醇为每周给药2次,共给药4周,根据相对肿瘤抑制率(TGI)进行疗效评价(图9)。
实验结果显示在接种肿瘤后第35天时,按TGI效果递减排序,依次为DKN-01(5mg/kg)+hu3(5mg/kg)组,紫杉醇(20mg/kg)组,DKN-01(5mg/kg)+紫杉醇(20mg/kg)组,hu3组,DKN-01组和抗KLH IgG4组,数值分别为74.48%,60.48%,60.04%,35.29%,23.27%和0%。结果显示hu3在5mg/kg剂量表现明显的肿瘤抑制作用(p=0.013),效果优于阳性对照DKN-01;此外,在前述浓度下,抗DKK1抗体hu3与紫杉醇联用组合的肿瘤抑制效果明显优于hu3和紫杉醇两组分分别单用,同时效果明显优于相同浓度下阳性对照与紫杉醇的联用组合。
实施例9:人源化抗DKK1抗体抑制小鼠体内肿瘤生长
实验动物为CB17/SCID雄性小鼠,向小鼠的右后背皮下接种PC-3细胞(10×106),建立皮下移植肿瘤模型。试验分为抗KLH IgG4(10mg/kg)组、hu3(5mg/kg)组、hu3(10mg/kg)组、hu3(20mg/kg)组、紫杉醇(7.5mg/kg)组、hu3(5mg/kg)+紫杉醇(7.5mg/kg)组、hu3(10mg/kg)+紫杉醇(7.5mg/kg)组、hu3(20mg/kg)+紫杉醇(7.5mg/kg)组,抗KLH IgG4为阴性对照抗体。每组8只动物,各组均为腹腔注射给药,阴性对照抗KLH IgG4、紫杉醇、抗DKK1抗体hu3,均为每周给药2次,共给药3周,根据相对肿瘤抑制率(TGI)进行疗效评价(图10)。
实验结果显示在接种肿瘤后第21天时,按TGI效果递减排序,依次为hu3(20mg/kg)+紫杉醇(7.5mg/kg)组,hu3(10mg/kg)+紫杉醇(7.5mg/kg)组,hu3(5mg/kg)+紫杉醇(7.5mg/kg)组,紫杉醇(7.5mg/kg)组,hu3(20mg/kg)组,hu3(10mg/kg)组,hu3(5mg/kg)组,抗KLHIgG4(10mg/kg)组,数值分别为88.4%,88.3%,81.5%,71.8%,56.4%,48.8%,30.7%和0%。结果显示,hu3在5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg的剂量下均表现出明显的肿瘤抑制作用,且剂量越高TGI越高。此外,在前述三个浓度剂量下,hu3分别与7.5mg/kg紫杉醇联用,肿瘤抑制效果明显优于对应浓度下hu3和紫杉醇两组分分别单用,说明抗DKK1抗体hu3和紫杉醇联合施用能够起到协同的抗肿瘤效果。
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述,本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导,可以对那些细节进行各种修改和替换,这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。
Claims (23)
1.抗DKK1抗体或其抗原结合片段,
其中,所述抗DKK1抗体包含重链可变区和轻链可变区,所述重链可变区包含HCDR1至HCDR3,所述轻链可变区包含LCDR1至LCDR3,
其中,
HCDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:7、SEQ IDNO:13、SEQ ID NO:19、SEQID NO:25和SEQ ID NO:31;
HCDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:14、SEQ ID NO:20、SEQID NO:26和SEQ ID NO:32;
HCDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:9、SEQ IDNO:15、SEQ ID NO:21、SEQID NO:27、SEQ ID NO:33和SEQ ID NO:78;
LCDR1的氨基酸序列选自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10、SEQ IDNO:16、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:28和SEQ ID NO:34;
LCDR2的氨基酸序列选自SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:17、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:35;
LCDR3的氨基酸序列选自SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:18、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:36。
2.根据权利要求1所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,其中,所述抗DKK1抗体包含重链可变区和轻链可变区,所述重链可变区包含HCDR1至HCDR3,所述轻链可变区包含LCDR1至LCDR3,
其中,
所述抗体的重链可变区,其中,
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示,
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:78所示,
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示,
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示,
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示,
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:25所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:26所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:27所示,或者
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:31所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:32所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:33所示;并且
所述抗体的轻链可变区,其中,
LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示,
LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示,
LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示,
LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:23所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示,
LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:28所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示,或者
LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:34所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:35所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:36所示。
3.根据权利要求1至2中任一权利要求所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,其中,
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示;
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:78所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示;
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示;
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示;
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:23所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示;
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:25所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:26所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:27所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:28所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示;或者
HCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:31所示、HCDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:32所示、HCDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:33所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:34所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:35所示、LCDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:36所示。
4.根据权利要求1至3中任一权利要求所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,其中,
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:37、SEQ IDNO:39、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47、SEQ ID NOs:49-53、SEQ ID NOs:58-62和SEQ ID NOs:68-73;并且
所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ IDNO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77。
5.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,其中,
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:37所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:39所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:41所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:43所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:45所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:47所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:49所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:50所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:51所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:52所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:53所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:58所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:59所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:60所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:61所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:62所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:68所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:69所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:70所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:71所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:72所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77;
或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示,轻链可变区的氨基酸序列选自SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:48、SEQ ID NOs:54-57、SEQ ID NOs:63-67和SEQ ID NOs:74-77。
6.根据权利要求1至5中任一权利要求所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,其中,
所述抗体的重链的氨基酸序列选自SEQ ID NOs:79-83、SEQ ID NOs:88-92和SEQ IDNOs:98-103;并且
所述抗体的轻链的氨基酸序列选自SEQ ID NOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ IDNOs:104-107。
7.根据权利要求1至6中任一权利要求所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,其中,
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:79所示,轻链的氨基酸序列选自SEQ IDNOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:80所示,轻链的氨基酸序列选自SEQ IDNOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:81所示,轻链的氨基酸序列选自SEQ IDNOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:82所示,轻链的氨基酸序列选自SEQ IDNOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:83所示,轻链的氨基酸序列选自SEQ IDNOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:88所示,轻链的氨基酸序列选自SEQ IDNOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:89所示,轻链的氨基酸序列选自SEQ IDNOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:90所示,轻链的氨基酸序列选自SEQ IDNOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:91所示,轻链的氨基酸序列选自SEQ IDNOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:92所示,轻链的氨基酸序列选自SEQ IDNOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:98所示,轻链的氨基酸序列选自SEQ IDNOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:99所示,轻链的氨基酸序列选自SEQ IDNOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:100所示,轻链的氨基酸序列选自SEQ IDNOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:101所示,轻链的氨基酸序列选自SEQ IDNOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:102所示,轻链的氨基酸序列选自SEQ IDNOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107;
或者
所述抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:103所示,轻链的氨基酸序列选自SEQ IDNOs:84-87、SEQ ID NOs:93-97和SEQ ID NOs:104-107。
8.根据权利要求1至7中任一权利要求所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,其中,所述抗DKK1抗体或其抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、dAb、互补决定区片段、单链抗体、人源化抗体、嵌合抗体或双抗体。
9.一种抗DKK1的抗体或其抗原结合片段,其具有如下特征:
(a)与权利要求1-8中任一项所述的抗体或抗原结合片段结合相同的、或完全重叠的、或部分重叠的人DKK1蛋白的表位;或
(b)与权利要求1-8任一项所述的抗体或抗原结合片段竞争性结合人DKK1蛋白的表位。
10.根据权利要求1至9中任一权利要求所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,其中,
所述的抗体包括非-CDR区,且所述非-CDR区来自不是鼠类的物种,例如来自人抗体。
11.根据权利要求1至10中任一权利要求所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,其中,所述抗体的重链恒定区为Ig gamma-1chain C region(例如NCBI ACCESSION:P01857)或Iggamma-4chain C region(例如NCBIACCESSION:P01861.1);轻链恒定区为Ig kappa chainC region(例如NCBIACCESSION:P01834);
优选地,所述抗体的重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:112所示,所述抗体的轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:113所示。
12.分离的核酸分子,其编码权利要求1至11中任一权利要求所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段。
13.一种重组载体,其包含权利要求12所述的分离的核酸分子。
14.一种宿主细胞,其包含权利要求12所述的分离的核酸分子,或者权利要求13所述的重组载体。
15.偶联物,其包括抗体以及偶联部分,其中,所述抗体为权利要求1至11中任一权利要求所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,所述偶联部分为可检测的标记;优选地,所述偶联部分为细胞毒素、免疫调节剂、放射性同位素、荧光物质、发光物质、有色物质或酶。
16.试剂盒,其包括权利要求1至11中任一权利要求所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,或者包括权利要求15所述的偶联物;
优选地,所述试剂盒还包括第二抗体,其特异性识别所述抗体;任选地,所述第二抗体还包括可检测的标记,例如细胞毒素、免疫调节剂、放射性同位素、荧光物质、发光物质、有色物质或酶。
17.一种双特异性抗体,其包括第一蛋白功能区和第二蛋白功能区,其中:
所述第一蛋白功能区靶向DKK1,
所述第二蛋白功能区靶向不同于DKK1的靶点,
其中,所述第一蛋白功能区为权利要求1至11中任一权利要求所述的抗体或抗原结合片段。
18.根据权利要求17所述的双特异性抗体,其中,所述第一蛋白功能区和第二蛋白功能区直接连接或者通过连接片段连接。
19.根据权利要求17至18中任一权利要求所述的双特异性抗体,其中,所述第一蛋白功能区和第二蛋白功能区独立地为1个、2个或者2个以上。
20.根据权利要求17至19中任一权利要求所述的双特异性抗体,其中,所述单链抗体分别连接在免疫球蛋白形式的抗体的两条重链的C末端。
21.一种药物组合物,其包含权利要求1至11中任一权利要求所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,或者包含权利要求15所述的偶联物,或者包含权利要求17至20中任一权利要求所述的双特异性抗体;
可选地,所述药物组合物还包含一种或多种其它抗肿瘤药物;优选地,所述其它抗肿瘤药物为化疗药物或抗体药物;优选地,所述化疗药物为微管蛋白抑制剂;优选地,所述抗体药物为免疫检查点抑制剂;优选地,所述化疗药物为紫杉醇;
可选地,所述药物组合物还包括一种或多种药学上可接受的辅料。
22.一种组合产品,其包含独立包装的第一产品和第二产品,其中,
所述第一产品包含其包含权利要求1至11中任一权利要求所述的抗DKK1抗体或其抗原结合片段,或者包含权利要求15所述的偶联物,或者包含权利要求17至20中任一权利要求所述的双特异性抗体;
所述第二产品包含一种或多种其它抗肿瘤药物;优选地,所述其它抗肿瘤药物为化疗药物或抗体药物;优选地,所述化疗药物为微管蛋白抑制剂;优选地,所述抗体药物为免疫检查点抑制剂;优选地,所述化疗药物为紫杉醇;
优选地,所述第一产品和所述第二产品还独立地包含一种或多种药学上可接受的辅料;
优选地,所述组合产品还包含产品说明书。
23.权利要求1至11中任一权利要求所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求15所述的偶联物、权利要求17至20中任一权利要求所述的双特异性抗体或者权利要求21所述的药物组合物在制备治疗和/或预防DKK1介导的疾病的药物中的用途;优选地,所述DKK1介导的疾病为肿瘤。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2022101080506 | 2022-01-28 | ||
CN202210108050 | 2022-01-28 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN116514966A true CN116514966A (zh) | 2023-08-01 |
Family
ID=87401802
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202310094332.XA Pending CN116514966A (zh) | 2022-01-28 | 2023-01-20 | 抗dkk1抗体、其药物组合物及用途 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN116514966A (zh) |
WO (1) | WO2023143444A1 (zh) |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AR060017A1 (es) * | 2006-01-13 | 2008-05-21 | Novartis Ag | Composiciones y metodos de uso para anticuerpos de dickkopf -1 |
EP2632951B1 (en) * | 2010-10-27 | 2017-08-02 | Amgen Inc. | Dkk1 antibodies and methods of use |
-
2023
- 2023-01-20 WO PCT/CN2023/073335 patent/WO2023143444A1/zh unknown
- 2023-01-20 CN CN202310094332.XA patent/CN116514966A/zh active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2023143444A1 (zh) | 2023-08-03 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US8933202B2 (en) | AXL antibodies | |
RU2571224C2 (ru) | Гуманизированные антитела против axl | |
CN109071666A (zh) | 人脊髓灰质炎病毒受体(pvr)特异性抗体 | |
CN108473569A (zh) | 针对人白介素-2的免疫刺激性人源化单克隆抗体及其融合蛋白 | |
CN103298489A (zh) | 新型egfr结合分子及其免疫偶联物 | |
CN104955838A (zh) | 双特异性EGFR/c-Met抗体 | |
TW201231066A (en) | Pan-HER antibody composition | |
CN112703013B (zh) | Cd3抗原结合片段及其应用 | |
CN102325549A (zh) | 用人源化抗-EGFR IgG1抗体和伊立替康治疗癌症 | |
CN114269782B (zh) | 抗tigit抗体及其应用 | |
WO2021115303A1 (zh) | 一种抗Claudin18.2单克隆抗体、其制备方法及用途 | |
AU2013254690B2 (en) | Anti-PDGF-C antibodies | |
WO2020259550A1 (zh) | 抗cea抗体及其应用 | |
TW202128773A (zh) | 抗人Trop-2抗體及其應用 | |
CN115812081A (zh) | 抗ctla-4抗体及其用途 | |
CN114502591A (zh) | 靶向bcma的抗体、双特异性抗体及其用途 | |
CN117264068A (zh) | 抗TrkA抗体或其抗原结合片段、其制备方法和应用 | |
US11117977B2 (en) | Anti-fibulin-3 antibodies and uses thereof | |
WO2023143444A1 (zh) | 抗dkk1抗体、其药物组合物及用途 | |
EP4180457A1 (en) | Anti-cldn-18.2 antibody and use thereof | |
WO2022068809A1 (zh) | 抗cd3抗体以及其用途 | |
US20150152193A1 (en) | Axl antibodies | |
CN116333134A (zh) | 抗bcma抗体及其用途 | |
CN116059391A (zh) | 抗cldn-18.2抗体药物偶联物及其用途 | |
TW201711702A (zh) | 使用針對纖維母細胞生長因子受體3(fgfr3)之化合物的療法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |