CN116481879A - 一种免疫组化染色方法 - Google Patents
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Abstract
一种免疫组化染色方法,步骤包括:(1)首先向玻片和盖片构成的载玻片中添加清洗液,然后对清洗液进行抽风操作,将清洗液从载玻片中抽离;(2)将清洗液自载玻片中抽离后,向着载玻片中添加试剂,并使得所述的试剂布满盖片和玻片之间:(3)将布满试剂的载玻片进行孵育;本申请的技术方案具有能够避免试剂被稀释,从而不会导致染色强度不均或减弱的优点。
Description
技术领域
本申请涉及免疫组化染色工艺技术领域,具体的涉及一种免疫组化染色方法。
背景技术
免疫组化染色仪是一种用于基础医学领域的分析仪器,该仪器在染色过程,需要对载玻片中的组织切片进行染色,一般需要在仪器上通过清洗载玻片、添加试剂,然后添加清洗液将上一步骤的试剂清洗掉,以避免上一步骤残留的试剂对下一个步骤的试剂产生影响;其过程参考附图1大致如下:首先在玻片和盖片之间添加清洗液、清洗液会沿着载玻片长度方向布满载玻片,然后再继续在载玻片的一端添加试剂,添加完成后从载玻片的另一端进行抽风操作以排空清洗液,并使得试剂布满缝隙,后续进行孵育;但是这种操作由于清洗液和试剂在抽风过程会发生相互交融,从而使得试剂被清洗液稀释,而抗体试剂的稀释比例,直接决定了染色的强度。厂家出厂的试剂的抗体试剂,其中的抗体浓度都是经过验证的,如果在染色过程中被稀释,会导致染色强度不均或减弱,这必然会最终检测结果受到影响。
此外,上述这种操作方式,由于仅仅通过抽风的方式来使试剂分布在载玻片内,由于载玻片内部每处的抽风压力不均匀,很容易导致组织切片染色不均匀的现象发生,因此也会影响最终的检测结果。
发明内容
本申请针对现有技术的上述不足,提供一种能够避免试剂被稀释,从而不会导致染色强度不均或减弱的免疫组化染色方法。
为了解决上述技术问题,本申请采用的技术方案为:一种免疫组化染色方法,该方法的步骤包括:
(1)首先向玻片和盖片构成的载玻片中添加清洗液,然后对清洗液进行抽风操作,将清洗液从载玻片中抽离;
(2)将清洗液自载玻片中抽离后,向着载玻片中添加试剂,并使得所述的试剂布满盖片和玻片之间:
(3)将布满试剂的载玻片进行孵育。
进一步的,步骤(1)所述的抽风操作在抽风过程中同时将所述的玻片相对所述的盖片朝着清洗液抽出方向滑动;采用上述步骤,即一边抽风、一边拉出盖片,由于盖片、和玻片之间有较高的疏水性以及虹吸效应,液体会随着盖片的拉出,朝后移动即朝着盖片拉出的方向移动,同时抽风口把经过的液体都抽空,这样就实现了把几乎所有的清洗液有效清空的目的,降低其在载玻片内的残留,有效避免对后续添加试剂的造成稀释。
更进一步的,所述的盖片朝着清洗液抽出方向滑动的过程,所述的盖板始终与所述的玻片部分重叠;避免二者完全脱离。
进一步的,所述的抽风过程抽风口位于玻片长度方向的一端,且抽风口的延伸方向与玻片的厚度方向一致;采用该方案,可以将载玻片内的清洗液尽快的抽离,为后续试剂的添加提供更纯净的环境。
进一步的,所述的抽风口位于载玻片添加清洗液所在端的相对一端;采用该方案,可以通过抽风动作实现清洗液沿着载玻片长度方向整板的流动,从而实现对载玻片更加充分的清洗操作。
进一步的,所述的抽风口与风机连接口处于相对的两端;采用该结构,避免抽风机直接将废液也一并抽走,抽风机尽可能仅仅提供负压,为清洗液的抽离提供动力即可。
进一步的,所述的步骤(2)在添加完所述的试剂后还包括使得所述的盖片相对所述的玻片来回滑动的步骤;采用上述方式,可以将试剂在载玻片中有效的搅拌,实现试剂的均匀分布;而且该操作还可以将盖片和玻片之间或多或少局部残留的水替换。
进一步的,所述的盖片宽度方向的两侧设置有沿着其长度方向延伸的边框,所述的边框的端面高于盖片的同侧端面;当所述的盖片与所述的玻片盖合时,所述的边框与玻片抵靠在盖片和玻片之间形成高度方向的间隙;采用该结构,在盖片相对玻片滑动过程,不会对组织切片产生影响。
本申请的优点和有益效果:
1.本申请通过调整染色的工序步骤,通过先添加清洗液然后将清洗液先通过抽风去除,然后再添加试剂的方式进行染色,这种方式有效避免了现有技术清洗液和试剂同时存在下进行抽风而造成的彼此相互交融、导致的试剂被稀释的不足;因此,本申请的这种方法能够有效的避免试剂被稀释,从而不会导致染色强度不均或减弱。
2.本申请的技术方案,在对清洗液抽风过程中、同时使得载玻片中位于上方的盖片相对位于下方的玻片向着清洗液流动方向滑动,从而可以进一步带动清洗液更加完全、彻底的被抽离,为后续试剂的添加提供更加纯净的环境、避免残留的清洗液与试剂之间发生交融而稀释试剂。
3.本申请的技术方案,在添加试剂的过程,不需要再采用抽风操作,而是通过将盖片相对玻片前后滑动的操作,来实现试剂的有效搅拌,使得试剂在载玻片中分布的更加均匀,从而使得组装切片染色更加的均匀,防止假阴性检测结果的出现;而且该操作还可以将盖片和玻片之间或多或少局部残留的水替换。
4.本申请的技术方法,操作方法简单,仅仅通过调整清洗液抽离的时间,就可以有效的避免试剂被稀释的缺陷。
附图说明
图1为现有技术染色方法的流程图结构示意图。
图2为本申请盖片第一视图的结构示意图。
图3为本申请盖片第二视图的结构示意图。
图4为本申请盖片和玻片的结构示意图。
图5为本申请盖片和玻片叠合后的结构示意图。
图6为本申请染色方法的流程图结构示意图。
图7为本申请载玻片与抽风结构位置关系示意图。
图8为现有技术染色方法一种示例染色后的组织切片微观图。
图9为本申请染色方法一种示例染色后的组织切片微观图。
如附图所示:1.盖片,101.边框,2.玻片,3.清洗液,4.加样孔,5.容器,501.抽风口,502.连接口,503.废液导流管道,6.出液口。
具体实施方式
下面通过具体实施方式进一步详细描述本申请,但本申请不仅仅局限于以下实施例。
本申请以免疫组化染色过程为例,结合本申请的技术方案做详细的描述,其中处理好的具有组织切片的载玻片的获得均为免疫组化的常规处理,再次不再赘述。
如附图2-4所示,为载玻片结构,主要包括位于上部用于盖合的盖片1、位于下方用于承载组织切片的玻片2,二者相互盖合将组织固定、二者之间的间隙形成容置清洗液3或者其他试剂的空间;外部可以通过框架固定方便二者染色过程的操作处理;如附图4所示,其中所述的盖片1宽度方向的两侧设置有沿着长度方向延伸的边框101,所述的边框101的端面高于盖片1的同侧端面(即该边框的外端面略高于盖片本体的外表面,二者有一个高度差);所述的盖片1与所述的玻片2盖合时,所述的边框101与玻片2抵靠、在盖片1和玻片2之间形成高度方向的间隙(即盖片本体与玻片之间不接触、二者有一定的间距);该间隙的设置可以使得组织切片放置在玻片上之后,不会与盖片之间接触,可以避免盖片1相对玻片2滑动过程对组织切片造成影响。
如附图5、7所示,为本申请载玻片与抽风结构位置关系示意图,所述的抽风结构包括承载清洗废液的容器5,所述的容器5上设置有承接清洗废液的抽风口501、所述的抽风口501位于盖片1的出液口6(出液口6是将盖片和玻片相互叠合之后,在二者长度方向的一端形成一个错位,从而可以将二者之间的介质通过这个错位引流道抽风口位置、错位形成了出液口)位置,所述的容器5上还设置有连通抽风机的连接口502、所述的连接口502位于抽风口501的相对侧(即二者不能紧邻),以避免抽风风力过大而将废液一同抽吸走;容器的下部设置有废液导流管道503,以方便将抽吸的废液导走(容器和导流管道503之间可以设置一个电磁阀,方便对容器内的废液进行排放)。
实施例:
如附图6所示,为本申请染色方法的工艺流程图,具体染色方法和过程如下:
(1)向着处理好的具有组织切片的载玻片加一抗,加完一抗试剂后,孵育一段时间,让抗体与抗原结合;
(2)然后就是要把一抗清洗掉,附图2所示,盖片1和玻片2被封装固定在框架中,在载玻片的右侧位置设置有加样孔4,通过该加样孔4填加清洗液;
(3)然后在载玻片左侧的抽风口位置进行抽风操作,从而使得添加的清洗液在负压和抽气作用下朝下流走,总共加三轮清洗液和抽风,实现对一抗试剂的清洗;而其在抽风过程同时向着抽风口501的方向拉出盖片1,由于盖片1、玻片2之间有较高的疏水性以及虹吸效应,液体会随着盖片1的拉出朝后移动,同时抽风口501把经过的液体都抽空,这样,就实现了把所有的清洗液清空的效果;
(4)加二抗:然后在载玻片的加样孔4的位置加入二抗试剂、由于步骤(3)已经将载玻片中的溶剂吸附的比较干净、二抗试剂可以布满盖片和玻片之间,然后将盖片1相对玻片2来回的滑动,实现对二抗试剂的搅拌,使其直接布满盖片和玻片之间、分布更加的均匀,该过程不需要抽风;本申请所述的盖片1宽度方向的两侧设置有沿着长度方向延伸的边框101,所述的边框101的端面高于盖片1的同侧端面(即该边框的外端面略高于盖片的外表面,二者有一个高度差);当所述的盖片1与所述的玻片2盖合时,所述的边框101与玻片2抵靠、在盖片1和玻片2之间形成高度方向的间隙;这样组织切片放置在玻片上之后,不会与盖片之间接触,,用于存储组织切片、盖片2相对玻片1滑动过程就不会碰着组织切片;
(5)然后将盖片复位,载玻片进行孵育。
图1为本申请实施例详细过程和参数
表2实施例中采用的清洗液组分、试剂组分:
上述实施例中采用的免疫显色试剂组成:
过氧化酶阻断剂 |
一抗后试剂 |
聚合物 |
DAB |
DABBuffer(缓冲液1) |
DABBuffer(缓冲液2) |
苏木素 |
上述实施例中采用的一抗试剂:Ki-67抗体试剂/检测试剂盒(免疫组织化学)。
上述实施例获得组织切片信息:扁桃体石蜡切片,用Ki67染色,细胞核阳性,DAB显色;该切片组织染色操作后获得的微观图片,如附图9所示;同时与对比例比较,对比例与本申请上述实施例区别在于清洗液是和试剂都添加后进行抽风操作,并且盖片和玻片二者之间彼此固定,不会相互滑动的调节下,获得的切片组织染色操作后微观图片如附图8所示,通过两副不同的染色方法获得的组织切片微观染色效果对比可知,本申请的方法获得的切片其染色更加均匀,而且染色更加明显,而对比例方法的染色不均衡、部分区域染色弱。
Claims (8)
1.一种免疫组化染色方法,其特征在于:该方法的步骤包括:
(1)首先向玻片和盖片构成的载玻片中添加清洗液,然后对清洗液进行抽风操作,将清洗液从载玻片中抽离;
(2)将清洗液自载玻片中抽离后,向着载玻片中添加试剂,并使得所述的试剂布满盖片和玻片之间:
(3)将布满试剂的载玻片进行孵育。
2.根据权利要求1所述的免疫组化染色方法,其特征在于:步骤(1)所述的抽风操作在抽风过程中同时将所述的玻片相对所述的盖片朝着清洗液抽出方向滑动。
3.根据权利要求2所述的免疫组化染色方法,其特征在于:所述的盖片朝着清洗液抽出方向滑动的过程,所述的盖板始终与所述的玻片部分重叠。
4.根据权利要求1所述的免疫组化染色方法,其特征在于:所述的抽风过程抽风口位于玻片长度方向的一端,且抽风口的延伸方向与玻片的厚度方向一致。
5.根据权利要求4所述的免疫组化染色方法,其特征在于:所述的抽风口位于载玻片添加清洗液所在端的相对一端。
6.根据权利要求4所述的免疫组化染色方法,其特征在于:所述的抽风口与风机连接口处于相对的两端。
7.根据权利要求4所述的免疫组化染色方法,其特征在于:所述的步骤(2)在添加完所述的试剂后、还包括使得所述的盖片相对所述的玻片来回滑动的步骤。
8.根据权利要求4所述的免疫组化染色方法,其特征在于:所述的盖片宽度方向的两侧设置有沿着长度方向延伸的边框,所述的边框的端面高于盖片的同侧端面;当所述的盖片与所述的玻片盖合时,所述的边框与玻片抵靠在盖片和玻片之间形成高度方向的间隙。
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