CN116449025A - 尿液蛋白作为原发性胆汁性胆管炎诊断标志物的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及尿液蛋白作为原发性胆汁性胆管炎诊断标志物的应用，所述尿液蛋白包括骨桥蛋白(OPN)、受体活性修饰蛋白3(RAMP3)、钙结合蛋白(S100A8)中的一种或几种的组合。本申请以在尿液为检测样品，具有无创性，与血液相比在采集上更易被患者接受，对于PBC患者的早期无创诊断具有非常重要的意义。
Description
技术领域
本发明涉及无创诊断技术领域，尤其涉及尿液蛋白作为原发性胆汁性胆管炎诊断标志物的应用。
背景技术
原发性胆汁性胆管炎(Primary biliary cholangitis，PBC)是一种免疫介导的慢性胆汁淤积性肝病，组织学上表现为肝内中小胆管上皮细胞非化脓性破坏，可逐渐进展为肝硬化甚至肝衰竭。PBC是一种多因素疾病，其发病与环境、遗传变异、免疫等相关。在过去几十年，PBC在全球呈上升趋势。但由于PBC患者早期临床表现不典型，现有临床诊断标准存在一定局限性，很多患者处于临床终末期才被确诊，导致治疗延误，因此PBC患者早诊早治十分重要。
在影像学检查排除肝外胆道梗阻的情况下，目前PBC的诊断标准主要基于以下任意两项：(1)反应胆汁淤积的生化指标，如碱性磷酸酶(ALP)升高大于正常上限的1.5倍和/或谷氨酰转移酶(GGT)持续升高大于正常上限的3倍；(2)反应免疫异常的血清抗线粒体抗体(AMA)阳性或AMA－M2型阳性(滴度＞1:40)；(3)肝脏组织病理学证据符合PBC(非化脓性胆管炎)。然而上述实验室指标存在着一定的局限性，例如GGT易受酒精、药物、肥胖等因素影响。而AMA虽然是PBC的高度特异性血清学抗体，在约95％的PBC患者中可检测到，但AMA滴度与PBC病情活动及严重程度无相关性。除此之外，最近一项研究还发现，在血清ALP水平未升高的AMA患者中超过80％出现PBC的组织学特征，这表明AMA阳性但ALP水平正常的患者中存在部分未诊断的PBC患者。
目前，确诊PBC的金标准仍然是肝组织活检，然而这是一项有创性操作，存在着穿刺点出血、肝脏损伤、腹腔感染等风险，不易被患者接受，故通常在AMA阴性或患者有非典型PBC生化特征时，肝脏组织学检查才作为诊断的必要条件。
综上，对于PBC的早期诊断，临床上需要筛选其它准确率高、易于推广且无创的标志物。除了血液以外，尿液作为血浆滤过成分，不仅包含来自泌尿系统的信息，还包含通过血浆滤过后其他器官的信息，因此尿液也能够在一定程度上积累和反映机体的一系列变化，利用蛋白质组学技术高通量系统性地分析和鉴定尿液中的蛋白质分子可以研究其生物学功能。健康人尿液中有超过1500种蛋白质，故而尿液的定量和定性变化可能对疾病诊断有重要意义，并且尿液与血液相比存在以下几个优点：1)样本采集简单、无创、容易连续获得，可以作为临床的低成本检测；2)某些蛋白或者多肽代谢物入血后很快经肾脏代谢入尿，这时在血液中可能检测不到，但在尿液中却可能检测得到；3)与血液相比，尿液中的蛋白质及肽段更为稳定、不易降解，易于运输及储存；4)血液及组织液中蛋白复杂，数量多，尿液更容易观察其中的低丰度蛋白变化，更适合做质谱分析。
发明内容
本申请为了解决上述技术问题提供尿液蛋白作为原发性胆汁性胆管炎诊断标志物的应用。
本申请通过下述技术方案实现：
本申请涉及尿液蛋白的检测产品在制备用于诊断原发性胆汁性胆管炎的产品中的应用。
发明人首先经过液质联用质谱分析法发现共有194种尿液蛋白质在PBC患者与正常对照间存在显著差异表达。其中109种尿液蛋白质在PBC患者中表达上调，85种尿液蛋白质在PBC患者中表达下调。
其次，结合GO分析和信号通路富集，筛选出10个与免疫反应相关的差异蛋白，分别是：骨桥蛋白(OPN)、受体活性修饰蛋白3(RAMP3)、CD44、激活素受体1B型蛋白(ACVR1B)、趋化因子CXCL12蛋白、CD74、Wnt1诱导的信号通路蛋白(CCN4)、钙结合蛋白(S100A8)、溶酶体关联膜蛋白3(LAMP3)、磷酸肌醇-3-激酶催化亚基δ肽(PIK3Cd)。
最后，结合蛋白组学分析和相关性分析，发现OPN、RAMP3、S100A8与ALT、AST、ALP、GGT、TBA、IgM、IgG、AMA等临床参数的相关性最为显著；经过实验论证，在原发性胆汁性胆管炎患者的尿液中，OPN、RAMP3、S100A8三种蛋白水平显著高于健康人。
值得说明的是，用检测产品制备用于诊断原发性胆汁性胆管炎的产品时，检测产品检测的尿液蛋白包括OPN、RAMP3、S100A8中的一种或几种的组合。
OPN、RAMP3、S100A8均存在与尿液中，选择尿液作为检测样本，不具有侵入性，还具有简易、易获取等优点。
可选的，所述用于诊断原发性胆汁性胆管炎的产品包括试剂盒。
本申请提供的诊断原发性胆汁性胆管炎的产品，包含尿液蛋白的检测剂，所述尿液蛋白包括OPN、RAMP3、S100A8中的一种或几种的组合。
与现有技术相比，本申请具有以下有益效果：
本申请以在尿液为检测样品，具有无创性，与血液相比在采集上更易被患者接受，对于PBC患者的早期无创诊断具有非常重要的意义。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本申请实施方式的进一步理解，构成本申请的一部分，并不构成对本发明实施方式的限定。
图1是实施例中在尿液中开展PBC患者生物标志物研究的流程图；
图2是实施例中PBC患者与健康对照组尿液蛋白主成分分析图；
图3是实施例中PBC患者与健康对照组尿蛋白鉴定火山图；
图4是实施例中GO生物学功能分析差异尿蛋白质主要参与的生物过程图表；
图5是实施例中GO生物学功能分析差异尿蛋白质主要所处的细胞位置图表；
图6是实施例中GO生物学功能分析差异尿蛋白质主要分子功能图表；
图7是实施例中差异蛋白的KEGG分析图；
图8是实施例中差异蛋白的相关性分析图；
图9是实施例中ELISA实验检测尿液中OPN蛋白浓度图，其中A是OPN标准曲线，B是OPN蛋白在正常组和PBC患者尿液中的表达示意图；
图10是实施例中ELISA实验检测尿液中RAMP3蛋白浓度图，其中A是RAMP3标准曲线，B是RAMP3蛋白在正常组和PBC患者尿液中的表达示意图；
图11是实施例中ELISA实验检测尿液中S100A8蛋白浓度图，其中A是S100A8标准曲线，B是S100A8蛋白在正常组和PBC患者尿液中的表达示意图。
具体实施方式
为使本申请的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合实施方式中的附图，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施方式是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。因此，以下对在附图中提供的本发明的实施方式的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。
需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施方式及实施方式中的特征可以相互组合。需要说明的是，本说明书中的各个实施例均采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似的部分互相参见即可。
尿蛋白质组学在生物标志物方面的研究主要包括两个阶段：1)发现阶段：通过样品制备，进入液相色谱分离串联质谱(LC-MS)仪，经数据分析发现可能的目的蛋白；2)验证阶段:酶联免疫吸附试验(ELISA)是常用的验证方法。LC-MS的原理是根据不同分子量蛋白在液相色谱柱中保留时间的不同对其进行层析分离，将肽段离子碎片按质荷比分开得到谱图。随后使用统计学方法筛选出一定的差异蛋白后，通过生物信息学分析，选择其中显著性影响信号通路、分子功能、生物学过程的部分目的蛋白，应用ELISA进行验证。
本实施例通过收集PBC患者与健康人群的尿液样本，采用尿液蛋白质组学技术分析PBC患者与健康人群尿液蛋白组学的差异，从而确定PBC患者疾病诊断相关的尿液生物标志物。
1，研究对象
1.1本实施例共纳入2022年1月至2022年12月于四川大学华西医院住院或门诊就诊的患者，满足PBC诊断标准的患者30例，其中经肝脏穿刺活检术确诊的患者共9例；同期通过体检中心纳入健康对照20例。
1.2诊断标准
①胆汁淤积伴ALP、GGT升高的生化依据，且影像学检查排除了肝外或肝内大胆管梗阻；②血清AMA/AMA-M2阳性；③慢性非化脓性破坏性胆管炎和小叶间胆管破坏改变的组织病理学证据。符合上述标准中的两项即可诊断。
1.3纳入标准及排除标准
纳入标准：①满足PBC诊断标准；②肝穿刺组织学符合PBC病理特点；③一般资料及实验室数据、病理资料完整者。
排除标准：①存在自身免疫性肝炎、原发性硬化性胆管炎，其他非免疫性肝损伤，如药物性肝炎，酒精性肝病，遗传代谢性肝等；②存在其他重要脏器功能衰竭的继发肝功能损害患者；存在严重肾功能不全或大量蛋白尿患者。
2、样本收集
2.1临床数据收集
通过四川大学华西医院HIS系统收集患者的基本信息(如姓名、性别、年龄等)，完善的临床及实验室资料，例如：既往史、家族史、血清谷丙转氨酶(ALT)、血清谷草转氨酶(AST)、血清碱性磷酸酶(ALP)、血清谷氨酰转移酶(GGT)、总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TBiL)、白蛋白(ALB)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、抗线粒体抗体(AMA)、抗gp210抗体、抗sp100抗体、肝穿刺活检病理等检查结果。
2.2临床样本收集与保存
所有符合纳入标准的患者或正常人均于入院后第一天或就诊当天采集清洁中断尿放入尿杯，然后3000rpm/min离心10分钟，收集上层清夜至洁净EP管，等量分装标记后放入-80℃冰箱保存。检测前将己标记好的尿液样品取出融解并充分混匀。
2.3尿液样本前处理(蛋白质提取、浓度测定及干燥)
选取具有肝穿病理的PBC患者尿液样本(9例)作为蛋白质谱实验组，选取含有完整临床资料的健康人尿液样本(7例)作为蛋白质谱的对照组，首先对尿液进行前处理提取尿液蛋白，具体步骤为：
①将提前分装好的尿液样品在37℃下快速复温，并以800g离心5分钟；
②取100μl样本加入8M尿素补足至500μl；
③加入100μl 100mM DTT溶液混匀，37℃孵育4h；
④加入30μl 1M IAM溶液混匀，37℃孵育30min；
⑤加入30k FASP置换溶液400μl，离心后取滤液，重复三次；
⑥加入100μl尿素至超滤管，离心后取滤液，重复两次；
⑦加入50mM碳酸氢铵，离心后取滤液；
⑧每个样本加入Trypsin 2μg，37℃酶解16h。
⑨离心取滤液，然后使用试剂盒测定肽段浓度。
⑩使用C18脱盐小柱进行肽段干燥纯化。
3.技术路线
3.1尿液蛋白组学纳入对象的基线资料
通过尿液蛋白组学分析，通过SPSS统计分析实验组和对照组基线资料。
PBC患者中，男性患者1例，女性患者8例，平均年龄(51.33±11.39)岁。实验室检测指标分别为ALP(361.67±240.00)U/L，GGT(460.22±354.11)U/L，TB(15.34±4.91)umol/L，DB(7.46±3.60)umol/L，TBA(26.12±24.48)umol/L，ALT(77.33±62.37)U/L，AST(90.33±57.98)U/L，ALB(46.74±15.77)g/L，Cr(58.89±10.42)umol/L，IgM(4973.33±3395.99)mg/L，IgG(18.11±6.83)g/L。
正常对照组中，男性2例，女性5例，平均年龄(34.71±6.85)岁，实验室检测指标分别为ALP(58.57±9.71)U/L，GGT(19.70±10.08)U/L，TB(9.67±4.63)umol/L，DB(5.24±2.36)umol/L，TBA(2.77±1.85)umol/L，ALT(19.13±372.21)U/L，AST(23.00±6.85)U/L，
ALB(48.31±6.05)g/L，Cr(56.40±7.43)umol/L，IgM(807.14±48.21)mg/L，IgG(9.39±1.25)g/L。两组间性别、年龄、TBA、ALB和Cr指标差异没有统计学意义(P≥0.05)。两组间ALP、GGT、TB、DB、ALT、AST、IgM、IgG差异有统计学意义(P＜0.05)，见表1。
表1：基线资料
3.2尿液蛋白质谱及数据处理
提取上述实验组和对照组的尿液蛋白并进行蛋白质谱分析，使用Spectronautversion 14.8搜库软件得到蛋白定性和定量数据。统计每个样本和每个蛋白中的缺失值情况。将数据进行中位数标准化，然后取log2的对数，把缺失值大于50％的数据筛除并进行填充，计算变异系数，并将变异系数波动较大(＞30％)的数据进行剔除。最终得到可用于后续分析统计的尿液蛋白质谱标准化数据。
其中，高效液相色谱-电喷雾-离子阱质谱分析，步骤如下：
①样品装入填充柱(2cm*150μm)上，用毛细管柱(15cm*150μm)分离，均用C18反相颗粒(1.9μm)填充。
②干燥后的肽段用流动相A液进行复溶；
③再经流动相B梯度液进行洗脱分离，流速为600nL/min，120min；
④液相分离梯度如下：10min 6％ B→15min 9-14％B→50min14-30％B→30min30-40％B→3min 40-95％B→7min 95％B→1min95-6％B→4min 6％B；
⑤通过接口离子化后，经串联质谱的Orbitrap质量分析器将离子碎片按质荷比分开，经检测器得到质谱图。
3.3生物信息学分析差异蛋白
通过生物信息学方法对蛋白质矩阵数据进行主成分分析。可应用Panther数据库对尿蛋白进行鉴定分析，利用DAVID Bioinformatics Resources对所得蛋白质进行主成分分析并绘制火山图，筛选出在PBC患者尿液中差异具体统计学意义显著上调和下调的蛋白质。
本实施例发现组内重复性和两组间差异性较好，如图2所示。运用Limma软件包对两组间数据进行假设检验，使用BH方法对p值进行校正，校正后的P值又称为FDR。以两组间定量比值FC(Fold Change)求取log2对数为后为横坐标，以FDR的负对数-log10为纵坐标，即可得火山图，如图3所示。图3中，UP(红色)代表上调，NoChange(灰色)代表不显著，DOWN(蓝色)代表下调。
本实施例选取倍数变化为2倍，校正后p值＜0.01为筛选条件，得到具有统计学意义且差异表达的尿液蛋白质共有194个，其中显著上调的蛋白质有109个，显著下调的蛋白质有85个，文中各列举出了前50项上调和下调表达的蛋白，见表2、表3。
表2：表达上调的差异蛋白(前50项)
表3：表达下调的差异蛋白(前50项)
3.4前50项显著上调的差异蛋白GO分析
Gene Ontology分析用于进行分子功能(Molecular Function)、所处的细胞位置(Cellular Component)、参与的生物过程(Biological Process)的描述。
本实施例对差异上调的前50各基因进行GO分析，主要包括细胞成分(CC)、分子功能(MF)和生物过程(BP)这三个独立的本体。
GO生物学功能分析发现有意义的差异尿蛋白质主要参与的生物过程(BP)包括：receptor-mediated endocytosis(受体介导的内吞作用)、immune response(免疫反应)、complement activation，classical pathway(补体激活经典途径)、regulation ofimmune response(免疫反应的调节)、Fc-gamma receptor signaling pathway involvedin phagocytosis(Fc-γ受体信号通路参与吞噬作用)、innate immune response(先天免疫反应)、Fc-epsilon receptor signaling pathway(Fc-epsilon受体信号通路)、complement activation(补体激活)、signal transduction(信号转导)、retinahomeostasis(视网膜内稳态)、B cell receptor signaling pathway(B细胞受体信号通路)、protein phosphorylation(蛋白质磷酸化)、phagocytosis，recognition(吞噬作用，识别)、phagocytosis，engulfment(吞噬作用，吞没)、inflammatory response(炎症反应)，如图4所示。
GO生物学功能分析发现有意义的差异尿蛋白质主要所处的细胞位置(CC)有：extracellular exosome(细胞外泌体)、plasma membrane(质膜)、extracellular region(细胞外区域)、extracellular space(细胞外间隙)、membrane(膜)、blood microparticle(血液微粒)、cytosol(胞液)、nucleus(细胞核)、cell surface(细胞表面)、integralcomponent of plasma membrane(质膜组成成分)、Golgi membrane(高尔基体膜)、external side of plasma membrane(质膜外侧面)、cytoplasm(细胞质)、Golgiapparatus(高尔基体)、endoplasmic reticulum(内质网)，如图5所示。
GO生物学功能分析发现有意义的差异尿蛋白质主要分子功能(MF)有：antigenbinding(抗原结合)、ATP binding(ATP结合)、serine-type endopeptidase activity(丝氨酸型内肽酶活性)、ubiquitin protein ligase binding(泛素蛋白连接酶结合)、identical protein binding(相同蛋白结合)、endopeptidase inhibitor activity(内肽酶抑制剂活性)、cysteine-type endopeptidase inhibitor activity(半胱氨酸型内肽酶抑制剂活性)、zinc ion binding(锌离子结合)、signaling receptor binding(信号受体结合)、serine-type endopeptidase inhibitor activity(丝氨酸型内肽酶抑制剂活性)、protein serine/threonine kinase activity(蛋白质丝氨酸/苏氨酸激酶活性)、kinaseactivity(激酶活性)、drug binding(药物结合)、calcium ion binding(钙离子结合)、amyloid-beta binding(淀粉样β蛋白绑定)，如图6所示。
3.5前50项显著上调的差异蛋白Pathway代谢通路注释
对生物体内的蛋白进行Pathway分析处理，可以很好的阐明其功能作用机制，能够确定它们在生理活动中起重要作用的代谢通路与信号通路。可利用KEGG Pathway筛选出与免疫相关的蛋白质，使用Cluster3.0软件进行聚类分析且应用JAVA Treeview软件生成富集图。
本实施例将显著表达上调的尿液差异蛋白质中的前50项进行KEGG分析和富集，将较为重要的通路结果描述如下：Regulation of actin cytoskeleton(肌动蛋白细胞骨架的调节)、Focaladhesion(细胞黏附)、Signaling pathways regulating pluripotency ofstem cells Focal adhesion(调控干细胞黏附多能性的信号通路)、Wnt signalingpathway(Wnt信号通路)、Rap1 signaling pathway(Rap1信号通路)、PI3K-Aktsignalingpathway(PI3K-Akt信号通路)、ECM-receptorinteraction(细胞外基质-受体相互作用)、VEGF signaling pathway(VEGF信号通路)、Notch signaling pathway(Notch信号通路)、Hedgehog signaling pathway(Hedgehog信号通路)、ErbB signaling pathway(ErbB信号通路)、Metabolic pathway(代谢通路)、Leukocytetransendothelialmigration(白细胞跨内皮迁移)、Toll-like receptor signaling pathway(toll样受体信号通路)、Thyroid hormone signaling pathway(甲状腺激素信号通路)、Chemokine signalingpathway(趋化因子信号通路)，如图7所示。
既往研究提示，免疫反应与PBC的发生发展密切相关，本实施例从上述通路所共同富集的蛋白以及图6各分组下富集数量靠前，同时与免疫反应相关的蛋白中进行筛选，挑选出10个感兴趣的蛋白来进行下一步相关性分析。这10个蛋白分别是：骨桥蛋白(OPN)，又称为分泌型磷蛋白1(SPP1)、受体活性修饰蛋白3(RAMP3)、CD44、激活素受体1B型蛋白(ACVR1B)、趋化因子CXCL12蛋白、CD74、Wnt1诱导的信号通路蛋白(CCN4)、钙结合蛋白(S100A8)、溶酶体关联膜蛋白3(LAMP3)、磷酸肌醇-3-激酶催化亚基δ肽(PIK3Cd)。
3.6差异蛋白相关性分析
为进一步研究尿液蛋白与临床指标的相关性，本实施例再次将骨桥蛋白(OPN)、受体活性修饰蛋白3(RAMP3)、CD44、激活素受体1B型蛋白(ACVR1B)、趋化因子CXCL12蛋白、CD74、Wnt1诱导的信号通路蛋白(CCN4)、钙结合蛋白(S100A8)、溶酶体关联膜蛋白3(LAMP3)、磷酸肌醇-3-激酶催化亚基δ肽(PIK3Cd)进行Pearson相关性分析，分析结果发现其中有3种蛋白质与ALT、AST、ALP、GGT、TBA、IgM、IgG、AMA等临床参数的相关性最为显著，如图8所示。3种蛋白质分别为骨桥蛋白(OPN)、受体活性修饰蛋白3(RAMP3)和钙结合蛋白(S100A8)。因此初步提示这三种蛋白可能具有PBC临床诊断的生物标志物潜力。
3.7ELSA实验结果及分析
(1)进一步扩大样本进行尿液蛋白ELISA验证。其中收集PBC患者尿液30例，正常对照20例。验证队列实验对象一般资料对比：PBC患病组与正常对照组之间的一般资料(年龄、性别)无统计学差异，见表4。
表4：ELISA实验中的尿液样本
(2)ELISA验证：通过ELISA试剂盒分别检测PBC患者和健康人群的尿液蛋白中的OPN、RAMP3和S100A8的蛋白表达；采用SPSS 23.0软件进行统计学分析，对数据进行正态性检验，所有符合正态分布的连续性变量采用均数±标准差表示，偏态分布的以中位数和四分位间距表示，分类变量以频数或百分比描述。组间比较采用t检验或Mann-Whitney U检验；相关性检验使用Pearson；采用GraphPad prism8软件进行制图。
结果提示：PBC患病组OPN(如图9所示)、RAMP3(如图10所示)和S100A8(如图11所示)的相对表达量明显高于正常对照组(p＜0.01)，与质谱结果表达趋势基本一致。
其中，ELISA检测步骤如下：
(1)按试剂盒说明书稀释标准品，分别设定标准孔、空白孔和样本孔，白孔不加样品及酶标试剂。
(2)S100A8和OPN的检测流程为：
a.在各孔中加入标准品或样品各100μl，37℃孵育90分钟。
b.倒去孔内液体，加入100μl生物素化抗体/抗原工作液，37℃孵育60分钟。
c.甩净孔内溶液，加洗涤液洗涤，静置30秒后弃悬液，如此重复3次，吸水纸拍干。
d.加入100μl酶结合物工作液，37℃孵育30分钟后洗涤5次。
e.加入90μl底物溶液，37℃孵育15分钟作左右。
f.加入50μl终止液，立即于450nm波长处测量OD值，绘制标准曲线，通过样品OD值计算样品中目的蛋白含量，分析数据。
(3)RAMP3的检测流程为：
a.在各孔中加入标准品或样品各50μl，37℃孵育30分钟。
b.洗涤5次，加入酶标试剂50μl，37℃孵育30分钟。
c.洗涤5次，先后加入显色液A、B各50μl，37℃显色10分钟。
d.加入50μl终止液，立即于450nm波长处测量OD值，绘制标准曲线，通过样品OD值计算样品中目的蛋白含量，分析数据。
本实施例运用蛋白质组学技术，在尿液中开展PBC患者生物标志物的研究，与血液相比在采集上更易被患者接受。本实施例除掉干扰检测的高丰度蛋白，尽可能富集了更多的低丰度蛋白，获得了较为全面的尿蛋白组信息；最后结合蛋白组学分析和相关文献研究，确定了3个新的尿蛋白标志物，对于PBC患者的早期无创诊断具有非常重要的意义。
以上的具体实施方式，对本申请的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.尿液蛋白的检测产品在制备用于诊断原发性胆汁性胆管炎的产品中的应用，其特征在于：所述尿液蛋白包括OPN、RAMP3、S100A8中的一种或几种的组合。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述用于诊断原发性胆汁性胆管炎的产品包括试剂盒。
3.诊断原发性胆汁性胆管炎的产品，其特征在于：包含尿液蛋白的检测剂，所述尿液蛋白包括OPN、RAMP3、S100A8中的一种或几种的组合。
4.根据权利要求3所述的产品，其特征在于：所述产品为试剂盒。
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| CN202310415820.6A CN116449025A (zh) | 2023-04-18 | 2023-04-18 | 尿液蛋白作为原发性胆汁性胆管炎诊断标志物的应用 |
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN118010601A (zh) * | 2024-04-07 | 2024-05-10 | 中国医学科学院北京协和医院 | 一种用于诊断原发性胆汁性胆管炎的系统 |
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2023
- 2023-04-18 CN CN202310415820.6A patent/CN116449025A/zh active Pending
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