CN116437931A - 与严重急性呼吸综合征冠状病毒2的核衣壳蛋白特异性结合的抗体或其片段、及其用途 - Google Patents

与严重急性呼吸综合征冠状病毒2的核衣壳蛋白特异性结合的抗体或其片段、及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN116437931A
CN116437931A CN202180074073.3A CN202180074073A CN116437931A CN 116437931 A CN116437931 A CN 116437931A CN 202180074073 A CN202180074073 A CN 202180074073A CN 116437931 A CN116437931 A CN 116437931A
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
amino acid
acid sequence
antibody
group
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202180074073.3A
Other languages
English (en)
Inventor
川畑隆司
枡屋宇洋
柚原光佑
西村研吾
北泽宏明
黑板敏弘
矶部正治
黑泽信幸
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Toyobo Co Ltd
University of Toyama NUC
Original Assignee
Toyobo Co Ltd
University of Toyama NUC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Toyobo Co Ltd, University of Toyama NUC filed Critical Toyobo Co Ltd
Publication of CN116437931A publication Critical patent/CN116437931A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1002—Coronaviridae
    • C07K16/1003—Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 [SARS‐CoV‐2 or Covid-19]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/20011—Coronaviridae
    • C12N2770/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/20011—Coronaviridae
    • C12N2770/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/165—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
    • G01N2469/10—Detection of antigens from microorganism in sample from host

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

提供与SARS CoV2的N蛋白的NTD或CTD特异性结合的抗体或其片段、及其用途。公开了与序列号1或2所示的氨基酸序列特异性结合的抗体或其片段。

Description

与严重急性呼吸综合征冠状病毒2的核衣壳蛋白特异性结合 的抗体或其片段、及其用途
技术领域
提供与严重急性呼吸综合征(Severe Acute Respiratory Syndrome)冠状病毒2(SARS CoV2)的核衣壳蛋白特异性结合的抗体或其片段、及其用途的关联技术。
背景技术
SARS CoV2为新型冠状病毒感染症(COVID-19)的致病病毒，从2020年初开始在世界范围内迅速流行。SARS CoV2与通常的冠状病毒同样地由核衣壳和包裹该核衣壳的包膜构成，前述核衣壳中包含病毒基因组(RNA)和与该病毒基因组结合的核衣壳蛋白(N蛋白)，前述包膜包含脂质和与该脂质结合的刺突蛋白(S蛋白)、膜蛋白(M蛋白)和包膜蛋白(E蛋白)。
N蛋白为参与病毒核心的形成、以及病毒基因组的包装和转录等的蛋白，具有N末端结构域(NTD)和C末端结构域(CTD)借助具有富含丝氨酸(S)/精氨酸(R)区域的接头而结合的结构。非专利文献1中记载N蛋白被广泛磷酸化，并示出了磷酸化部位图。N蛋白的氨基酸序列在毒株间保守，因此N蛋白可用作诊断标记物等。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献1:Klann et al.,Molecular Cell,80(1),2020,pp.164-174
发明内容
发明要解决的问题
本发明人们发现，SARS CoV2的N蛋白的具有富含S/R区域(广泛磷酸化部位)的接头可被诱导凋亡的巯基蛋白酶(例如胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶6)切断或因为自分解作用而被切断，因此即使使用与SARS CoV2的N蛋白特异性结合的抗体，根据结合部位也存在该抗体检测不到SARS CoV2的N蛋白的可能性。
因此，本发明的第1目的在于，提供与SARS CoV2的N蛋白的NTD或CTD特异性结合的抗体或其片段、及其用途。
另外，本发明人们发现，在通过使SARS CoV2的N蛋白和与该N蛋白特异性结合的2种抗体形成夹心结构而进行检测的方法中，例如使用与NTD特异性结合的抗体和与CTD特异性结合的抗体作为2种抗体时，一旦具有富含S/R区域的接头被切断，则无法形成夹心结构，因此SARS CoV2的N蛋白的检测灵敏度降低。
因此，本发明的第2目的在于，提供能够以高灵敏度检测SARS CoV2的N蛋白的试剂盒和方法。
用于解决问题的方案
本发明人们为了达到上述目的进行了深入研究，结果发现了与SARS CoV2的N蛋白的NTD或CTD特异性结合的多种抗体或其片段。另外，本发明人们发现，通过使用与NTD特异性结合且识别NTD中各不相同的表位的2种以上的抗体或其片段、和/或与CTD特异性结合且识别CTD中各不相同的表位的2种以上的抗体或其片段，能够以高灵敏度检测N蛋白。本发明是基于这些发现并且进一步反复进行深入研究而完成的。
本发明包括以下方式。
项1.
与序列号1或2所示的氨基酸序列特异性结合的抗体或其片段(抗原结合片段)。
项2.
一种抗体或其片段(抗原结合片段)，其包含：
由下述式(A-1)或(A-2)所示的氨基酸序列构成的重链CDR1，
GFX A31X A41X A51X A61X A71X A81(A-1)
[式中，
X A31为T或S，
X A41为F、L或I，
X A51为D、S、N或T，
X A61为D、N、S、I或T，
X A71为Y、F或N，
X A81为G、W、Y、S或T]
GFX A33X A43X A53X A63X A73X A83X A93X A103(A-2)
[式中，
X A33为T或S，
X A43为F、L或I，
X A53为D、S、N或T，
X A63为D、N、S或T，
X A73为N或S，
X A83为G或Y，
X A93为Y、F或N，
X A103为T、G、W或Y]；
由下述式(B-1)或(B-2)所示的氨基酸序列构成的重链CDR2，IX B21X B31X B41X B51XB61X B71X B81(B-1)
[式中，
X B21为S、N、D、W或H，
X B31为Y、G、P或S，
X B41为S、D或G，
X B51为G、S、T或A，
X B61为G、D、T、N或R，
X B71为R、K、T、S、N、G、Y或D，
X B81为T、I或M]
IX B23X B33X B43X B53X B63X B73(B-2)
[式中，
X B23为S、N、D、W或H，
X B33为Y、G、P或S，
X B43为S、D或G，
X B53为G、S、T或A，
X B63为R、K、T、S、N、G、Y或D，
X B73为T、I或M]；
由下述式(C-1)～(C-8)中的任一者所示的氨基酸序列构成的重链CDR3，
X C11X C21X C31X C41X C51X C61X C71X C81X C91X C101X C111X C121X C131X C141X C151(C-1)
[式中，
X C11为A或S，
X C21为R、T或K，
X C31为D、N、S或Y，
X C41为G、S或Y，
X C51为G、I或D，
X C61为S或I，
X C71为Y、V或A，
X C81为Y、H、S、T、K或E，
X C91为S、I或D，
X C101为P或Y，
X C111为I、Y、G、P、T、A或V，
X C121为N、S、Y、P、G或F，
X C131为F、C、M或L，
X C141为Q或D，
X C151为F、Y、V或S]
X C13X C23X C33X C43X C53X C63X C73X C83(C-2)
[式中，
X C13为A或S，
X C23为R、T或K，
X C33为D、N、S或Y，
X C43为I、Y、G、P、T、A或V，
X C53为N、S、Y、P、G或F，
X C63为F、C、M或L，
X C73为Q或D，
X C83为F、Y、V或S]
X C15X C25X C35X C45X C55X C65X C75X C85X C95TIFTFX C155X C165X C175X C185X C195(C-3)
[式中，
X C15为A或S，
X C25为R、T或K，
X C35为G、S或Y，
X C45为G、I或D，
X C55为S或I，
X C65为Y、V或A，
X C75为Y、H、S、T、K或E，
X C85为S、I或D，
X C95为P或Y，
X C155为I、Y、G、P、T、A或V，
X C165为N、S、Y、P、G或F，
X C175为F、C、M或L，
X C185为Q或D，
X C195为F、Y、V或S]
ARLWSGYALDI(C-4)
X C16X C26X C36X C46X C56X C66X C76X C86X C96X C106X C116X C126X C136(C-5)[式中，
X C16为A或S，
X C26为R、T或K，
X C36为D、N、S或Y，
X C46为G、S或Y，
X C56为G、I或D，
X C66为Y、H、S、T、K或E，
X C76为S、I或D，
X C86为P或Y，
X C96为I、Y、G、P、T、A或V，
X C106为N、S、Y、P、G或F，
X C116为F、C、M或L，
X C126为Q或D，
X C136为F、Y、V或S]
VX C27PLLVX C77HGX C107X C117X C127X C137X C147(C-6)
[式中，
X C27为S或K，
X C77为V、Y或L，
X C107为I、Y、G、P、T、A或V，
X C117为N、S、Y、P、G或F，
X C127为F、C、M或L，
X C137为Q或D，
X C147为F、Y、V或S]
VSPSX C58X C68X C78X C88X C98X C108(C-7)
[式中，
X C58为G或A，
X C68为I、Y、G、P、T、A或V，
X C78为N、S、Y、P、G或F，
X C88为F、C、M或L，
X C98为Q或D，
X C108为F、Y、V或S]
SPSX C49X C59X C69X C79X C89X C99(C-8)
[式中，
X C49为G或A，
X C59为I、Y、G、P、T、A或V，
X C69为N、S、Y、P、G或F，
X C79为F、C、M或L，
X C89为Q或D，
X C99为F、Y、V或S]；
由下述式(D-1)～(D-3)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1，SX D21XD31X D41X D51X D61X D71(D-1)
[式中，
X D21为E、D、Q或G，
X D31为H、Y、G或S，
X D41为R、S、I、K或L，
X D51为S、H、N或F，
X D61为Y或K，
X D71为Y、S、W或N]
SX D23X D33X D43X D53X D63X D73GKNKDL(D-2)
[式中，
X D23为E、D、Q或G，
X D33为H、Y、G或S，
X D43为R、S、I、K或L，
X D53为S、H、N或F，
X D63为Y或K，
X D73为Y、S、W或N]
NIGGKT(D-3)；
由下述式(E-1)～(E-3)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2，X E11XE21SX E41GSX E71(E-1)
[式中，
X E11为L、V或I，
X E21为K、N或E，
X E41为D、Y或K，
X E71为H或L]
VGTSDIVG(E-2)
X E12X E22X E32(E-3)
[式中，
X E12为K、S或W，
X E22为A或H，
X E32为N或S]；和
由下述式(F-1)～(F-7)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3，GX F21XF31X F41X F51X F61X F71X F81X F91X F101(F-1)
[式中，
X F21为V或A，
X F31为S、D、N、G或K，
X F41为Y、F、V、L或H，
X F51为S、K或N，
X F61为G或N，
X F71为G、A、E或K，
X F81为H、S、Y或V，
X F91为N、G或S，
X F101为I、V、L或Y]
GX F23X F33X F43X F53X F63X F73X F83X F93YX F113(F-2)
[式中，
X F23为V或A，
X F33为S、D、N或G，
X F43为Y、F、V、L或H，
X F53为S、K或N，
X F63为G或N，
X F73为G、A、E或K，
X F83为H、S或Y，
X F93为N、G或S，
X F113为I、V、L或Y]
GX F24X F34X F44X F54IX F74X F84X F94YX F114YX F134(F-3)[式中，
X F24为V或A，
X F34为S、D、N或G，
X F44为Y、F、V、L或H，
X F54为S、K或N，
X F74为G或N，
X F84为G、A、E或K，
X F94为H、S或Y，
X F114为N、G或S，
X F134为I、V、L或Y]
GX F25X F35X F45X F55X F65X F75X F85X F95(F-4)
[式中，
XF25为V或A，
XF35为S、D、N、G或K，
XF45为Y、F、V、L或H，
XF55为S、K或N，
XF65为G或N，
XF75为G、A、E或K，
XF85为H、S、Y或V，
XF105为I、V、L或Y]
QYDSTPPLT(F-5)
QVWDSYTYV(F-6)
QFINGPLT(F-7)。
项3.
根据项2所述的抗体或其片段，其包含：
由式(A-1)所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、
由式(B-1)或(B-2)所示的氨基酸序列构成的重链CDR2、由式(C-1)、(C-2)、(C-4)和(C-6)～(C-8)中的任一者所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、
由式(D-1)所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、
由式(E-1)～(E-3)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2、和
由式(F-1)～(F-5)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3。
项4.
一种抗体或其片段(抗原结合片段)，其包含：
由下述式(A-1-1)所示的氨基酸序列构成的重链CDR1，
GFXA32XA42XA52XA62XA72XA82(A-1-1)
[式中，
XA32为T或S，
XA42为F或L，
X A52为D、S、N或T，
X A62为D、S或N，
X A72为Y或F，
X A82为G、W、S或Y]；
由下述式(B-1-1)和(B-2-1)中的任一者所示的氨基酸序列构成的重链CDR2，
IX B22X B32X B42X B52X B62X B72X B82(B-1-1)
[式中，
X B22为S、N、D或H，
X B32为Y、G或P，
X B42为S或D，
X B52为G或S，
X B62为G、D、T或N，
X B72为R、K、T、S、G或Y，
X B82为T或I]
IWX B34X B44X B54X B64X B74(B-2-1)
[式中，
X B34为Y或S，
X B44为D或G，
X B54为G或A，
X B64为R或D，
X B74为T或I]；
由下述式(C-1-1)、(C-2-1)、(C-6-1)、(C-7-1)和(C-8-1)中的任一者所示的氨基酸序列构成的重链CDR3，
X C12RDGGSYX C82SPIX C122X C132QX C152(C-1-1)
[式中，
X C12为A或S，
X C82为Y、H或S，
X C122为N或S，
X C132为F或C，
X C152为F或Y]
ATX C34X C44X C54X C64X C74X C84(C-2-1)
[式中，
X C34为N或S，
X C44为Y或G，
X C54为N或P，
X C64为F或M，
X C74为Q或D，
X C84为Y或V]
VSPLLVVHGPFFQY(C-6-1)
VSPSGAGLDV(C-7-1)
SPSAVGFDV(C-8-1)；
由下述式(D-1-1)～(D-1-7)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1，
SEYKHYN(D-1-1)
SEHRSYY(D-1-2)
SDYSHYS(D-1-3)
SQGINKW(D-1-4)
SGHSSYY(D-1-5)
SEHSSYY(D-1-6)
SDHSSYY(D-1-7)；
由下述式(E-1-1)、(E-2)和(E-3-1)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2，
X E12X E22SDGSX E72(E-1-1)
[式中，
X E12为L、V或I，
X E22为K或E，
X E72为H或L]
VGTSDIVG(E-2)
KAN(E-3-1)；和
由下述式(F-1-1)、(F-2-1)、(F-3-1)、(F-4-1)和(F-5)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3，
GVSX F42SGGHX F92X F102(F-1-1)
[式中，
X F42为Y或F，
X F92为N或G，
X F102为I或V]
GADYSGASSYV(F-2-1)
GANHNIGESYGYV(F-3-1)
GVX F36YX F56X F66X F76X F86X F96(F-4-1)
[式中，
X F36为S、G或K，
X F56为S或N，
X F66为G或N，
X F76为G或K，
X F86为Y或V，
X F96为V或Y]
QYDSTPPLT(F-5)。
项5.
根据项2所述的抗体或其片段，其包含：
由序列号3～11中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的重链CDR1、
由序列号12～25中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的重链CDR2、
由序列号26～41中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的重链CDR3、
由序列号42～50中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的轻链CDR1、
由序列号51～58中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列、或者KAN、SHN或WAS中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2、和
由序列号59～73中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的轻链CDR3。
项5a.
根据项2所述的抗体或其片段，其包含：
由序列号3～9中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的重链CDR1、
由序列号12～19和25中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的重链CDR2、
由序列号26～29、32、33、37、40和41中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的重链CDR3、
由序列号42～48中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的轻链CDR1、
由序列号51～54和57中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列、或者KAN所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2、和
由序列号59～61、64～68和71中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的轻链CDR3。
项6.
根据项5所述的抗体或其片段，其中，前述变异为保守性置换。
项6a.
根据项5a所述的抗体或其片段，其中，前述变异为保守性置换。
项7.
根据项2～6中任一项所述的抗体或其片段，其与序列号1所示的氨基酸序列特异性结合。
项7a.
根据项5a或6a所述的抗体或其片段，其与序列号1所示的氨基酸序列特异性结合。
项8.
一种抗体或其片段(抗原结合片段)，其包含：
由下述式(G-1)或(G-2)所示的氨基酸序列构成的重链CDR1，
GX G21X G31X G41X G51X G61X G71X G81(G-1)
[式中，
X G21为F或L，
X G31为I、T、S或F，
X G41为F或L，
X G51为S、N、T、R或D，
X G61为N、T或D，
X G71为Y、S或H，
X G81为F、T、Y、W或G]
KLSERY(G-2)；
由下述式(H-1)～(H-3)中的任一者所示的氨基酸序列构成的重链CDR2，
IX H21X H31X H41X H51X H61X H71X H81(H-1)
[式中，
X H21为S、G、K或N，
X H31为G、N、S、Y、T或P，
X H41为D、S、T或A，
X H51为S、G或D，
X H61为T、S、A、G或R，
X H71为Y、K、N、T、I或S，
X H81为I、T、P或V]
MWSDGDT(H-2)
NDS(H-3)；
由下述式(I-1)～(I-11)中的任一者所示的氨基酸序列构成的重链CDR3，X I11XI21X I31X I41X I51X I61X I71(I-1)
[式中，
X I11为S或T，
X I21为I或T，
X I31为N、L、D或T，
X I41为W或G，
X I51为G、V、F或N，
X I61为D、G、F或N，
X I71为V或L]
ARTSRIVADLVTMGYALDF(I-2)
ARDVVKTGTTGLPFDL(I-3)
AREGVITVGTWGDV(I-4)
ATSEY(I-5)
TTATDV(I-6)
TPATDV(I-7)
SPMTIHGLDT(I-8)
GSGWV(I-9)
GSGWY(I-10)
LSSESDDARV(I-11)；
由下述式(J-1)～(J-3)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1，X J11LXJ31X J41X J51Y(J-1)
[式中，
X J11为K或A，
X J31为S或P，
X J41为N、E、K、T或D，
X J51为Q、R、K或E]
SX J23SLX J53X J63X J73DGX J103TX J123(J-2)
[式中，
X J23为E或Q，
X J53为L或V，
X J63为H、D或Y，
X J73为S或G，
X J103为N、K或Y，
X J123为Y或F]
NIGGKA(J-3)；
由下述式(K-1)所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2，
X K11X K21X K31(K-1)
[式中，
X K11为K、N、L或E，
X K21为D、G、V或I，
X K31为S、N或D]；和
由下述式(L-1)～(L-6)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3，LSX L31XL41X L51X L61X L71X L81X L91X L101X L111(L-1)
[式中，
X L31为R、S、A或G，
X L41为Q、E或D，
X L51为S或G，
X L61为D、S或N，
X L71为D、G或T，
X L81为A、T或Y，
X L91为A、T或Y，
X L101为S、R或W，
X L111为V、L或Y]
LSX L33X L43X L53X L63X L73X L83X L93X L103(L-2)[式中，
X L33为R、S、A或G，
X L43为Q、E或D，
X L53为S或G，
X L63为D、S或N，
X L73为D、G或T，
X L83为A、T或Y，
X L93为S、R或W，
X L103为V、L或Y]
X L14QX L34X L44X L54X L64PX L84X L94(L-3)
[式中，
X L14为L或V，
X L34为A或T，
X L44为T或S，
X L54为H或N，
X L64为D、N或V，
X L84为Y、V、I或L，
X L94为T或S]
QX L27X L37X L47X L57PX L77X L87(L-4)
[式中，
X L27为A或T，
X L37为T或S，
X L47为H或N，
X L57为D、N或V，
X L77为Y、V、I或L，
X L87为T或S]
QVYDSSSFV(L-5)
WQGTDFPR(L-6)。
项9.
根据项8所述的抗体或其片段，其包含：
由式(G-1)所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、
由式(H-1)或(H-2)所示的氨基酸序列构成的重链CDR2、
由式(I-1)～(I-3)和(I-5)～(I-9)中的任一者所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、
由式(J-1)～(J-3)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、
由式(K-1)所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2、和
由式(L-1)～(L-3)、(L-5)和(L-6)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3。
项10.
一种抗体或其片段(抗原结合片段)，其包含：
由下述式(G-1-1)所示的氨基酸序列构成的重链CDR1，
GX G22X G32X G42X G52X G62X G72X G82(G-1-1)
[式中，
X G22为F或L，
X G32为I、T或S，
X G42为F或L，
X G52为S、N、T或R，
X G62为N或T，
X G72为Y、S或H，
X G82为F、T、Y或W]；
由下述式(H-1-1)或(H-2)所示的氨基酸序列构成的重链CDR2，
IX H22X H32X H42X H52X H62X H72X H82(H-1-1)
[式中，
X H22为S、G、K或N，
X H32为G、N、S、T或P，
X H42为D、S或A，
X H52为S、G或D，
X H62为T、S、G或R，
X H72为Y、K、N、T、I或S，
X H82为I、T、P或V]
MWSDGDT(H-2)；
由下述式(I-1-1)、(I-2)、(I-3)和(I-5)～(I-9)中的任一者所示的氨基酸序列构成的重链CDR3，
X I12X I22X I32X I42X I52X I62X I72(I-1-1)
[式中，
X I12为S或T，
X I22为I或T，
X I32为N、L或T，
X I42为W或G，
X I52为G、V、F或N，
X I62为D、F或G，
X I72为V或L]
ARTSRIVADLVTMGYALDF(I-2)
ARDVVKTGTTGLPFDL(I-3)
ATSEY(I-5)
TTATDV(I-6)
TPATDV(I-7)
SPMTIHGLDT(I-8)
GSGWV(I-9)；
由下述式(J-1-1)、(J-2-1)和(J-3)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1，
KLSX J42X J52Y(J-1-1)
[式中，
X J42为N、E或K，
X J52为Q、R或E]
SX J24SLX J54X J64SDGX J104TX J124(J-2-1)
[式中，
X J24为E或Q，
X J54为L或V，
X J64为H、D或Y，
X J104为N、K或Y，
X J124为Y或F]
NIGGKA(J-3)；
由下述式(K-1-1)～(K-1-7)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2，
NDD(K-1-1)
KDS(K-1-2)
NGN(K-1-3)
NDS(K-1-4)
KVS(K-1-5)
LIS(K-1-6)
EVS(K-1-7)；和
由下述式(L-1-1)、(L-2-1)、(L-3-1)、(L-5)和(L-6)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3，
LSX L32X L42SX L62DAAX L102V(L-1-1)
[式中，
X L32为R或S，
X L42为Q或E，
X L62为D或N，
X L102为S、R或W]
LSGESDDAWV(L-2-1)
X L15QX L35THDPYT(L-3-1)
[式中，
X L15为L或V，
X L35为A或T]
QVYDSSSFV(L-5)
WQGTDFPR(L-6)。
项11.
根据项8所述的抗体或其片段，其包含：
由序列号74～84中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的重链CDR1、
由序列号85～101中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列、或者NDS所示的氨基酸序列构成的重链CDR2、
由序列号102～118中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的重链CDR3、
由序列号119～133中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的轻链CDR1、
由NDD、KDS、NGN、NDS、KVS、LIS或EVS中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2、和
由序列号134～149中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的轻链CDR3。
项11a.
根据项8所述的抗体或其片段，其包含：
由序列号74～81中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的重链CDR1、
由序列号85～90、92～95和101中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的重链CDR2、由序列号102～106、109、110和112～116中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的重链CDR3、
由序列号119～121、125～129和133中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的轻链CDR1、
由NDD、KDS、NGN、NDS、KVS、LIS或EVS中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2、和
由序列号134～136、140～142、148和149中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的轻链CDR3。
项12.
根据项11所述的抗体或其片段，其中，前述变异为保守性置换。
项12a.
根据项11a所述的抗体或其片段，其中，前述变异为保守性置换。
项13.
根据项8～12中任一项所述的抗体或其片段，其与序列号2所示的氨基酸序列特异性结合。
项13a.
根据项11a或12a所述的抗体或其片段，其与序列号2所示的氨基酸序列特异性结合。
项14.
一种抗体或其片段(抗原结合片段)，其为针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS CoV2)的核衣壳蛋白的抗体或其片段，其表位存在于前述核衣壳蛋白上的由序列号150～152中任一者所示的氨基酸序列构成的区域。
项15.
根据项1～14中任一项所述的抗体或其片段，其中，前述抗体为单克隆抗体。
项15a.
根据项5a、6a、11a和12a中任一项所述的抗体或其片段，其中，前述抗体为单克隆抗体。
项16.
一种多核苷酸，其包含项1～15中任一项所述的抗体或其片段的编码序列。
项16a.
一种多核苷酸，其包含项5a、6a、11a、12a和15a中任一项所述的抗体或其片段的编码序列。
项17.
一种细胞，其包含项16所述的多核苷酸。
项17a.
一种细胞，其包含项16a所述的多核苷酸。
项18.
一种试剂或药物，其包含项1～15中任一项所述的抗体或其片段、项16所述的多核苷酸或项17所述的细胞。
项18a.
一种试剂或药物，其包含项5a、6a、11a、12a和15a中任一项所述的抗体或其片段、项16a所述的多核苷酸或项17a所述的细胞。
项19.
一种用于检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS CoV2)的核衣壳蛋白的试剂盒，其包含项1～15中任一项所述的抗体或其片段。
项19a.
一种用于检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS CoV2)的核衣壳蛋白的试剂盒，其包含项5a、6a、11a、12a和15a中任一项所述的抗体或其片段。
项20.
一种用于检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS CoV2)的核衣壳蛋白的试剂盒，其包含：
分别识别序列号1所示的氨基酸序列中的不同的表位的、与序列号1所示的氨基酸序列特异性结合的2种以上的抗体或其片段、和/或
分别识别序列号2所示的氨基酸序列中的不同的表位的、与序列号2所示的氨基酸序列特异性结合的2种以上的抗体或其片段。
项21.
根据项20所述的试剂盒，其中，
前述与序列号1所示的氨基酸序列特异性结合的2种以上的抗体或其片段为项2～7中任一项所述的抗体或其片段、或者由相对于该抗体或其片段的氨基酸序列具有90％以上的序列同一性的氨基酸序列构成的抗体或其片段，
前述与序列号2所示的氨基酸序列特异性结合的2种以上的抗体或其片段为项8～14中任一项所述的抗体或其片段、或者由相对于该抗体或其片段的氨基酸序列具有90％以上的序列同一性的氨基酸序列构成的抗体或其片段。
项21a.
根据项20所述的试剂盒，其中，前述与序列号1所示的氨基酸序列特异性结合的2种以上的抗体或其片段为项5a或6a所述的抗体或其片段，
前述与序列号2所示的氨基酸序列特异性结合的2种以上的抗体或其片段为项11a或12a所述的抗体或其片段。
项22.
根据项19～21中任一项所述的试剂盒，其通过免疫层析法、酶联免疫吸附测定法、化学发光免疫测定法、化学发光酶联免疫吸附测定法、放射免疫测定法、电化学发光免疫测定法、免疫比浊法或胶乳凝集法来检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS CoV2)的核衣壳蛋白。
项22a.
根据项19a或21a所述的试剂盒，其通过免疫层析法、酶联免疫吸附测定法、化学发光免疫测定法、化学发光酶联免疫吸附测定法、放射免疫测定法、电化学发光免疫测定法、免疫比浊法或胶乳凝集法来检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS CoV2)的核衣壳蛋白。
项23.
根据项19～22中任一项所述的试剂盒，其中，前述与序列号1或2所示的氨基酸序列特异性结合的2种以上的抗体或其片段的一部分进行了固相化，剩余部分进行了标记化。
项23a.
根据项19a、21a和22a中任一项所述的试剂盒，其中，前述与序列号1或2所示的氨基酸序列特异性结合的2种以上的抗体或其片段的一部分进行了固相化，剩余部分进行了标记化。
项24.
一种检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS CoV2)的核衣壳蛋白的方法，其包括下述工序(1)～(3)：
(1)将与序列号1或2所示的氨基酸序列特异性结合的第1抗体或其片段固定化于固相的工序；
(2)对前述固相应用与SARS CoV2的核衣壳蛋白和序列号1或2所示的氨基酸序列特异性结合的第2抗体或其片段(在此，第2抗体或其片段识别第1抗体或其片段所特异性结合的氨基酸序列中的不同表位、并且用标记物质进行了标记化)的工序；和
(3)检测来自借助前述核衣壳蛋白结合于前述固相的第2抗体或其片段的标记物质的标记的工序。
项25.
根据项24所述的方法，其中，第1抗体或其片段和第2抗体或其片段选自由下述抗体或其片段构成的组：项2～15中任一项所述的抗体或其片段、和由相对于该抗体或其片段的氨基酸序列具有90％以上的序列同一性的氨基酸序列构成的抗体或其片段。
项25a.
根据项24所述的方法，其中，第1抗体或其片段和第2抗体或其片段选自由下述抗体或其片段构成的组：项5a、6a、11a、12a和15a中任一项所述的抗体或其片段、和由相对于该抗体或其片段的氨基酸序列具有90％以上的序列同一性的氨基酸序列构成的抗体或其片段。
发明的效果
根据本发明，提供与SARS CoV2的N蛋白的NTD或CTD特异性结合的抗体或其片段。另外，根据本发明，提供以高灵敏度检测SARS CoV2的N蛋白的试剂盒和方法。
具体实施方式
1.定义等
本说明书中，氨基酸可以是天然氨基酸，也可以是非天然氨基酸。作为非天然氨基酸，可列举例如瓜氨酸、鸟氨酸、ε-乙酰基-赖氨酸、β-丙氨酸、氨基苯甲酸、6-氨基己酸、氨基丁酸、羟脯氨酸、巯基丙酸、3-硝基酪氨酸、正亮氨酸、焦谷氨酸等，但是不限于这些。另外，氨基酸例如可以为L-氨基酸、D-氨基酸或DL-氨基酸。
本说明书中，氨基酸序列的同一性是指：使作为比较对象的2个以上氨基酸序列进行最适比对时的、氨基酸的一致程度。氨基酸序列的同一性可以使用市售的或可通过电信线路(因特网)来利用的分析工具来计算，例如，可以使用市售的软件GENETYX(株式会社GENETYX公司)或使用美国国家生物技术信息中心(NCBI)的同源性算法BLAST(Basic localalignment search tool)(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)中的默认(初始设定)参数来计算。
关于本说明书中公开的氨基酸序列，只要不抑制对SARS CoV2的N蛋白的结合性则也可以使序列中的1个以上(例如1、2或3个)氨基酸缺失、对其进行置换或修饰，也可以在序列中插入或添加1个以上(例如1、2或3个)氨基酸。
氨基酸的置换优选为与结构和/或性质相似的其它氨基酸的置换(保守性置换)。保守性置换可列举例如表1所示的组内的置换。
[表1]
Figure BDA0004205567320000281
作为氨基酸的修饰，可列举例如氨基、羧基、羟基、巯(SH)基等官能团的修饰。前述官能团的修饰可以是例如：糖基化；甲基化；酯化；酰胺化；PEG化；磷酸化；羟基化；与叔丁氧羰(Boc)基、9-芴基甲氧基羰(Fmoc)基等保护基结合；生物素化；与异硫氰酸荧光素(FITC)等荧光色素结合；与过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(ALP)等酶结合；等。
本说明书中，抗体可以是单克隆抗体，也可以是多克隆抗体，优选单克隆抗体。抗体可以为任意的同种型，例如IgG、IgA、IgD、IgE、IgM等。抗体可以是人抗体，也可以是非人抗体。作为非人抗体，可列举例如小鼠抗体、大鼠抗体、豚鼠抗体等，但是不限于这些。抗体可以是小鼠-人嵌合抗体等嵌合抗体。抗体可以是部分人源化抗体或完全人源化抗体。
本说明书中，作为抗体的片段，只要包含重链CDR1～3和轻链CDR1～3则没有特别限制，可列举例如Fv、Fab、Fab’、(Fab’)2、scFv、scFv-Fc、双特异性抗体、三特异性抗体、四特异性抗体、小抗体等。抗体的片段优选为具有抗原结合能力的片段(抗原结合片段)。
本说明书中，重链CDR1～3和轻链CDR1～3基于IMGT法来定义。
本说明书中，DNA、RNA等核苷酸可以以下所例示那样实施了公知的化学修饰。为了防止核酸酶等水解酶所引起的分解，可以将各核苷酸的磷酸残基(磷酸酯)置换为例如硫代磷酸酯(PS)、甲基膦酸酯、二硫代磷酸酯等化学修饰磷酸残基。另外，可以将各核糖核苷酸的糖(核糖)的2位羟基取代为-OR(R表示例如-CH 3、-CH 2CH 2OCH 3、-CH 2CH 2NHC(NH)NH2、-CH 2CONHCH 3、-CH 2CH 2CN等)。另外，也可以对碱基部分(嘧啶、嘌呤)实施化学修饰，例如，可列举向嘧啶碱基的5位导入甲基、阳离子性官能团或将嘧啶碱基的2位的羰基取代为硫羰基等。另外，可列举磷酸部分、羟基部分被例如生物素、氨基、低级烷基胺基、乙酰基等修饰者等，但是不限于这些。
本说明书中，SARS CoV2的N蛋白(抗原)具有GenBank登录号(MN908947)所公开的氨基酸序列。需要说明的是，SARS CoV的N蛋白具有GenBank登录号(AY278741)所公开的氨基酸序列。
2.与SARS CoV2的N蛋白的NTD特异性结合的抗体或其片段
SARS CoV2的N蛋白的NTD(有时简单记作NTD)是指该N蛋白的N末端起第1～172位的氨基酸区域，具有下述的氨基酸序列：
MSDNGPQNQRNAPRITFGGPSDSTGSNQNGERSGARSKQRRPQGLPNNTASWFTALTQHGKEDLKFPRGQGVPINTNSSPDDQIGYYRRATRRIRGGDGKMKDLSPRWYFYYLGTGPEAGLPYGANKDGIIWVATEGALNTPKDHIGTRNPANNAAIVLQLPQGTTLPKGFY(序列号1)。
与SARS CoV2的NTD特异性结合的抗体或其片段优选不与SARS CoV的NTD结合或与SARS CoV的NTD的结合性低。序列号1所示的氨基酸序列中，例如第63位的D、第65位的K、第79位的S、第94位的I、第103位的D、第120位的G、第128位的D、第131位的I、第152位的A和第157位的I分别与SARS CoV的NTD的对应氨基酸不同。与SARS CoV2的NTD特异性结合的抗体或其片段优选与序列号1中包含选自由第63位的D、第65位的K、第79位的S、第94位的I、第103位的D、第120位的G、第128位的D、第131位的I、第152位的A和第157位的I组成的组中的1个以上氨基酸的区域(或表位)结合。
一个实施方式中，与SARS CoV2的NTD特异性结合的抗体或其片段可以与N蛋白的N末端起第1～180位的氨基酸区域结合，优选与NTD的RNA结合结构域结合，优选与N蛋白的N末端起第44～180位或第44～172位的氨基酸区域结合。
与SARS CoV2的NTD特异性结合的抗体或其片段可以通过将公知方法组合来制造，例如，可以通过包括下述工序(P1)～(P6)的方法来制造：
(P1)使用利用对内质网的染色选择性高于对内质网以外的细胞器的染色选择性的荧光标记进行了标记的SARS CoV2的N蛋白，由用SARS CoV2的N蛋白免疫的动物的抗体产生细胞得到产生与SARS CoV2的N蛋白特异性结合的抗体的细胞的工序；
(P2)由前述工序(P1)中得到的细胞得到抗体可变区基因片段的工序；
(P3)由前述工序(P2)中得到的抗体可变区基因片段得到基因表达单元的工序；
(P4)将前述工序(P3)中得到的基因表达单元导入细胞而表达与SARS CoV2的N蛋白结合的抗体的工序；
(P5)回收前述工序(P4)中表达的抗体的工序；和
(P6)从前述工序(P5)中回收的抗体中得到与NTD特异性结合的抗体的工序。
工序(P1)例如可以基于美国专利申请公开2013/0029325号(其整体通过参照而整合于说明书)中记载的方法(ERIAA法)来实施。
工序(P2)例如可以基于文献(Rapid production of antigen-specificmonoclonal antibodies from a variety of animals,BMC Biology 2012,10:80)中记载的方法(MAGrahd法)来实施。
工序(P3)例如可以基于美国专利申请公开第2013/0023009号(其整体通过参照而整合于说明书)中记载的方法(TS-jPCT法)来实施。
工序(P4)可以通过公知的基因导入法、例如磷酸钙法、脂质体法、DEAE葡聚糖法、电穿孔法、显微注射法等来实施。作为要导入基因表达单元的细胞，只要能够瞬时表达抗体则没有特别限制，可列举例如CHO细胞、HEK293细胞、Expi293细胞、293F细胞、293T细胞、293FT细胞等哺乳动物细胞。
工序(P6)可以通过利用公知的筛选法、例如酶联免疫吸附测定法(ELISA)、免疫印迹法、免疫染色法等选择与NTD特异性结合的抗体来实施。
需要说明的是，抗体可以根据需要通过公知的方法进行纯化，所述方法为例如：使用硫酸铵、硫酸钠等的盐析法；使用蛋白A等的亲和层析法；使用DEAE纤维素等的离子交换色谱法；凝胶过滤；使用His-tag、FLAG-tag等的纯化法；等。
通过包括工序(P1)～(P6)的方法，可以得到与SARS CoV2的NTD特异性结合的多种抗体或其片段(在此，各抗体或其片段彼此之间重链CDR1～3和轻链CDR1～3中的至少1个CDR的氨基酸序列不同)。
一个实施方式中，与SARS CoV2的NTD特异性结合的抗体或其片段的重链CDR1优选由下述的氨基酸序列构成：
·表2示出的式(A-1)和(A-2)中的任一者所示的氨基酸序列；
·相对于该氨基酸序列具有90％以上(优选为95％以上)的同一性的氨基酸序列；或
·该氨基酸序列中的1～3个(优选为1或2个、进一步优选为1个)氨基酸发生了变异(优选为保守性置换)的氨基酸序列。
[表2]
Figure BDA0004205567320000321
式(A-1)中，X A41优选为F或L，X A51优选为D、S、N或T，X A61优选为D、N、S或I，进一步优选为D、N或S，X A71优选为Y或F，X A81优选为G、W、S或Y。
式(A-1)优选为式(A-1-1)或选自由式(A-1-2)～(A-1-9)组成的组中的1种，进一步优选为选自由式(A-1-2)～(A-1-8)组成的组中的1种。
式(A-2)中，X A33优选为S，X A43优选为I，X A53优选为T，X A63优选为T，X A73优选为N或S，X A83优选为G或Y，X A93优选为Y或F，进一步优选为Y，X A103优选为T、G或W，进一步优选为T或G。
式(A-2)优选为式(A-2-1)，进一步优选为式(A-2-2)。
与SARS CoV2的NTD特异性结合的抗体或其片段的重链CDR1优选由式(A-1)的氨基酸序列构成、更优选由式(A-1-1)或选自由式(A-1-2)～(A-1-9)组成的组中的氨基酸序列构成、进一步优选由选自由式(A-1-2)～(A-1-8)组成的组中的氨基酸序列构成、或者由相对于该氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列构成。前述同一性优选为91％以上、92％以上、93％以上、94％以上或95％以上。
一个实施方式中，与SARS CoV2的NTD特异性结合的抗体或其片段的重链CDR2优选由下述的氨基酸序列构成：
·表3示出的式(B-1)和(B-2)中的任一者所示的氨基酸序列；
·相对于该氨基酸序列具有90％以上(优选为95％以上)的同一性的氨基酸序列；或
·该氨基酸序列中的1～3个(优选为1或2个、进一步优选为1个)氨基酸发生了变异(优选为保守性置换)的氨基酸序列。
[表3]
Figure BDA0004205567320000341
式(B-1)中，X B21优选为S、N、D或H，X B31优选为Y、G或P，X B41优选为S或D，X B51优选为G或S，X B61优选为G、D、T或N，X B71优选为R、K、T、S、G或Y，X B81优选为T或I。
式(B-1)优选为式(B-1-1)或选自由式(B-1-2)～(B-1-13)组成的组中的1种，更优选为选自由式(B-1-2)～(B-1-10)组成的组中的1种，进一步优选为选自由式(B-1-2)～(B-1-9)组成的组中的1种。
式(B-2)中，X B23优选为S、N、D或W，进一步优选为W，X B33优选为Y、G或S，进一步优选为Y或S，X B43优选为D或G，X B53优选为G、S或A，进一步优选为G或A，X B63优选为R、K、T或D，进一步优选为R或D，X B73优选为T或I。
式(B-2)优选为式(B-2-1)，更优选为式(B-2-2)或(B-2-3)，进一步优选为式(B-2-3)。
与SARS CoV2的NTD特异性结合的抗体或其片段的重链CDR2优选由选自由式(B-1-1)和(B-2-1)组成的组中的氨基酸序列或选自由式(B-1-2)～(B-1-13)、(B-2-2)和(B-2-3)组成的组中的氨基酸序列构成、进一步优选由选自由式(B-1-2)～(B-1-10)、(B-2-2)和(B-2-3)组成的组中的氨基酸序列构成、特别优选由选自由式(B-1-2)～(B-1-9)和(B-2-3)组成的组中的氨基酸序列构成、或者由相对于该氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列构成。前述同一性优选为91％以上、92％以上、93％以上、94％以上或95％以上。
一个实施方式中，与SARS CoV2的NTD特异性结合的抗体或其片段的重链CDR3优选由下述的氨基酸序列构成：
·表4示出的式(C-1)～(C-8)中的任一者所示的氨基酸序列；
·相对于该氨基酸序列具有90％以上(优选为95％以上)的同一性的氨基酸序列；或
·该氨基酸序列中的1～3个(优选为1或2个、进一步优选为1个)氨基酸发生了变异(优选为保守性置换)的氨基酸序列。
[表4]
Figure BDA0004205567320000361
/>
Figure BDA0004205567320000371
式(C-1)中，X C21优选为R，X C31优选为D，X C41优选为G，X C51优选为G，X C61优选为S，X C71优选为Y或V，进一步优选为Y，X C81优选为Y、H、S、T或K，进一步优选为Y、H或S，X C91优选为S，X C101优选为P，X C111优选为I，X C121优选为N、S或Y，进一步优选为N或S，X C131优选为F或C，X C141优选为Q，X C151优选为F、Y或V，进一步优选为F或Y。
式(C-1)优选为式(C-1-1)或选自由式(C-1-2)～(C-1-7)组成的组中的1种，进一步优选为选自由式(C-1-2)～(C-1-4)组成的组中的1种。
式(C-2)中，X C13优选为A，X C23优选为T，X C33优选为N或S，X C43优选为Y或G，X C53优选为N、S或P，进一步优选为N或P，X C63优选为F、C或M，进一步优选为F或M，X C73优选为Q或D，X C83优选为F、Y或V，进一步优选为Y或V。
式(C-2)优选为式(C-2-1)，进一步优选为式(C-2-2)或(C-2-3)。
式(C-3)中，X C15优选为A，X C25优选为R，X C35优选为S，X C45优选为I，X C55优选为I，X C65优选为A，X C75优选为E，X C85优选为I，X C95优选为P，X C155优选为P，X C165优选为N、S或P，进一步优选为P，X C175优选为F、C或M，进一步优选为F，X C185优选为Q或D，进一步优选为D，X C195优选为F、Y或V，进一步优选为V。
式(C-3)优选为式(C-3-1)。
式(C-5)中，X C16优选为A，X C26优选为K，X C36优选为Y，X C46优选为Y，X C56优选为D，X C66优选为Y，X C76优选为D，X C86优选为Y，X C96优选为T，X C106优选为G，X C116优选为F、C或M，进一步优选为F，X C126优选为Q或D，进一步优选为D，X C136优选为F、Y或V，进一步优选为V。
式(C-5)优选为式(C-5-1)。
式(C-6)中，X C107优选为P，X C117优选为F，X C127优选为F、C或M，进一步优选为F，XC137优选为Q或D，进一步优选为Q，X C147优选为Y或S。
式(C-6)优选为选自由式(C-6-1)～(C-6-3)组成的组中的1种。
式(C-7)中，X C58优选为G，X C68优选为A，X C78优选为G，X C88优选为L，X C98优选为Q或D，进一步优选为D，X C108优选为F、Y或V，进一步优选为V。
式(C-7)优选为式(C-7-1)。
式(C-8)中，X C49优选为A，X C59优选为V，X C69优选为G，X C79优选为F、C或M，进一步优选为F，X C89优选为Q或D，进一步优选为D，X C99优选为F、Y或V，进一步优选为V。
式(C-8)优选为式(C-8-1)。
与SARS CoV2的NTD特异性结合的抗体或其片段的重链CDR3优选由选自由式(C-1)、(C-2)、(C-4)和(C-6)～(C-8)组成的组中的氨基酸序列构成、更优选由选自由式(C-1-1)、(C-2-1)和(C-6)～(C-8)组成的组或选自由式(C-1-2)～(C-1-7)、(C-2-2)、(C-2-3)、(C-4)、(C-6-1)～(C-6-3)、(C-7-1)和(C-8-1)组成的组中的氨基酸序列构成、进一步优选由选自由式(C-1-2)～(C-1-5)、(C-2-2)、(C-2-3)、(C-4)、(C-6-1)、(C-7-1)和(C-8-1)组成的组中的氨基酸序列构成、或者由相对于该氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列构成。前述同一性优选为91％以上、92％以上、93％以上、94％以上或95％以上。
一个实施方式中，与SARS CoV2的NTD特异性结合的抗体或其片段的轻链CDR1优选由下述的氨基酸序列构成：
·表5示出的式(D-1)～(D-3)中的任一者所示的氨基酸序列；
·相对于该氨基酸序列具有90％以上(优选为95％以上)的同一性的氨基酸序列；或
·该氨基酸序列中的1～3个(优选为1或2个、进一步优选为1个)氨基酸发生了变异(优选为保守性置换)的氨基酸序列。
[表5]
Figure BDA0004205567320000401
式(D-1)优选为选自由式(D-1-1)～(D-1-7)组成的组中的1种。
式(D-2)中，X D23优选为Q，X D33优选为S，X D43优选为L，X D53优选为F，X D63优选为Y或K，进一步优选为Y，X D73优选为Y、S或W，进一步优选为S。
式(D-2)优选为式(D-2-1)。
与SARS CoV2的NTD特异性结合的抗体或其片段的轻链CDR1优选由式(D-1)的氨基酸序列构成、进一步优选由选自由式(D-1-1)～(D-1-7)组成的组中的氨基酸序列构成、或者由相对于该氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列构成。前述同一性优选为91％以上、92％以上、93％以上、94％以上或95％以上。
一个实施方式中，与SARS CoV2的NTD特异性结合的抗体或其片段的轻链CDR2优选由下述的氨基酸序列构成：
·表6示出的式(E-1)～(E-3)中的任一者所示的氨基酸序列；
·相对于该氨基酸序列具有90％以上(优选为95％以上)的同一性的氨基酸序列；或
·该氨基酸序列中的1～3个(优选为1或2个、进一步优选为1个)氨基酸发生了变异(优选为保守性置换)的氨基酸序列。
[表6]
Figure BDA0004205567320000411
式(E-1)中，X E21优选为K或E，X E41优选为D。
式(E-1)优选为式(E-1-1)或选自由式(E-1-2)～(E-1-8)组成的组中的1种，进一步优选为选自由式(E-1-2)～(E-1-5)组成的组中的1种。
式(E-3)中，X E13优选为K，X E23优选为A，X E33优选为N。
式(E-3)优选为选自由式(E-3-1)～(E-3-3)组成的组中的1种，进一步优选为式(E-3-1)。
与SARS CoV2的NTD特异性结合的抗体或其片段的轻链CDR2优选由选自由式(E-1-1)、(E-2)和(E-3)组成的组中的氨基酸序列或选自由式(E-1-2)～(E-1-8)、(E-2)和(E-3-1)～(E-3-3)组成的组中的氨基酸序列构成、进一步优选由选自由式(E-1-2)～(E-1-5)、(E-2)和(E-3-1)组成的组中的氨基酸序列构成、或者由相对于该氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列构成。前述同一性优选为91％以上、92％以上、93％以上、94％以上或95％以上。
一个实施方式中，与SARS CoV2的NTD特异性结合的抗体或其片段的轻链CDR3优选由下述的氨基酸序列构成：
·表7示出的式(F-1)～(F-7)中的任一者所示的氨基酸序列；
·相对于该氨基酸序列具有90％以上(优选为95％以上)的同一性的氨基酸序列；或
·该氨基酸序列中的1～3个(优选为1或2个、进一步优选为1个)氨基酸发生了变异(优选为保守性置换)的氨基酸序列。
[表7]
Figure BDA0004205567320000431
式(F-1)中，X F21优选为V，X F31优选为S，X F41优选为Y、F、V或L，进一步优选为Y或F，X F51优选为S或K，进一步优选为S，X F61优选为G，X F71优选为G，X F81优选为H，X F91优选为N或G，X F101优选为I、V或L，进一步优选为I或V。
式(F-1)优选为式(F-1-1)或选自由式(F-1-2)～(F-1-6)组成的组中的1种，进一步优选为式(F-1-2)～(F-1-4)。
式(F-2)中，X F23优选为A，X F33优选为S或D，进一步优选为D，X F43优选为Y、F、V或L，更优选为Y或F，进一步优选为Y，X F53优选为S或K，进一步优选为S，X F63优选为G，X F73优选为G或A，进一步优选为A，X F83优选为H或S，优选为S，X F93优选为S，X F113优选为I、V或L，更优选为I或V，进一步优选为V。
式(F-2)优选为式(F-2-1)。
式(F-3)中，X F24优选为A，X F34优选为S、D或N，进一步优选为N，X F44优选为Y、F或H，进一步优选为H，X F54优选为S或N，进一步优选为N，X F74优选为G，X F84优选为G或E，进一步优选为E，X F94优选为H或S，优选为S，X F114优选为G，X F134优选为I、V或L，更优选为I或V，进一步优选为V。
式(F-3)优选为式(F-3-1)。
式(F-4)中，X F25优选为V，X F35优选为S、G或K，X F45优选为Y，X F55优选为S或N，XF65优选为G或N，X F75优选为G或K，X F85优选为Y或V，X F95优选为V或Y。
式(F-4)优选为式(F-4-1)，更优选为选自由式(F-4-2)～(F-4-6)组成的组中的1种，进一步优选为选自由式(F-4-2)～(F-4-4)组成的组中的1种。
与SARS CoV2的NTD特异性结合的抗体或其片段的轻链CDR3优选由选自由式(F-1)～(F-5)组成的组中的氨基酸序列构成、更优选由选自由式(F-1-1)、(F-2-1)、(F-3-1)、(F-4-1)和(F-5)组成的组中的氨基酸序列构成、进一步优选由选自由式(F-1-2)～(F-1-6)、(F-2-1)、(F-3-1)、(F-4-2)～(F-4-6)和(F-5)组成的组中的氨基酸序列构成、特别优选由选自由式(F-1-2)～(F-1-4)、(F-2-1)、(F-3-1)、(F-4-2)～(F-4-4)和(F-5)组成的组中的氨基酸序列构成、或者由相对于该氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列构成。前述同一性优选为91％以上、92％以上、93％以上、94％以上或95％以上。
将与SARS CoV2的NTD特异性结合的抗体或其片段的重链CDR1～3和轻链CDR1～3的组合的优选例示于表8。
[表8]
Figure BDA0004205567320000461
在组合N-3～N-14中，优选重链CDR1～3和轻链CDR1～3中的至少1个CDR的氨基酸序列中有1～3个氨基酸发生了变异(优选为保守性置换)。
3.与SARS CoV2的N蛋白的CTD特异性结合的抗体或其片段
SARS CoV2的N蛋白的CTD(有时简单记作CTD)是指该N蛋白的N末端起第247～419位的氨基酸区域，具有下述的氨基酸序列，
TKKSAAEASKKPRQKRTATKAYNVTQAFGRRGPEQTQGNFGDQELIRQGTDYKHWPQIAQFAPSASAFFGMSRIGMEVTPSGTWLTYTAAIKLDDKDPNFKDQVILLNKHIDAYKTFPPTEPKKDKKKKADETQALPQRQKKQQTVTLLPAADLDDFSKQLQQSMSSADSTQA(序列号2)。
与SARS CoV2的CTD特异性结合的抗体或其片段优选与SARS CoV的CTD不结合或与SARS CoV的CTD的结合性低。序列号2所示的氨基酸序列中，例如，N蛋白的N末端起第267位的A、第290位的E、第334位的T、第345位的N和第349位的Q分别与SARS CoV的CTD的对应氨基酸不同。针对SARS CoV2的N蛋白的抗体或其片段(特别是与SARS CoV2的CTD特异性结合的抗体或其片段)优选与序列号2中包含选自由N蛋白的N末端起第267位的A、第290位的E、第334位的T、第345位的N和第349位的Q组成的组中的1个以上氨基酸的区域(或表位)结合。
一个实施方式中，针对SARS CoV2的N蛋白的抗体或其片段(特别是与SARS CoV2的CTD特异性结合的抗体或其片段)可以与N蛋白的N末端起第247～419位的氨基酸区域结合，优选与CTD的二聚体化结构域结合，优选与N蛋白的N末端起第247～364位或第256～364位的氨基酸区域结合。
一个实施方式中，针对SARS CoV2的N蛋白的抗体或其片段(特别是与SARS CoV2的CTD特异性结合的抗体或其片段)优选与N蛋白的N末端起第250～257位、第374～382位或第394～405位的氨基酸区域结合、即表位存在于N蛋白上的由序列号150～152中任一者所示的氨基酸序列构成的区域。
与SARS CoV2的CTD特异性结合的抗体或其片段可以通过将公知方法组合来制造，例如，可以通过包括上述工序(P1)～(P5)和下述工序(P6’)的方法来制造。
(P6’)从前述工序(P5)中回收的抗体中得到与CTD特异性结合的抗体的工序。
工序(P6’)与工序(P6)同样地可以通过利用公知的筛选法、例如酶联免疫吸附测定法(ELISA法)、免疫印迹法、免疫染色法等选择与CTD特异性结合的抗体来实施。
通过包括工序(P1)～(P5)和(P6’)的方法，可以得到与SARS CoV2的CTD特异性结合的多种抗体或其片段(在此，各抗体或其片段彼此之间重链CDR1～3和轻链CDR1～3中的至少1个CDR的氨基酸序列不同)。
一个实施方式中，与SARS CoV2的CTD特异性结合的抗体或其片段的重链CDR1优选由下述的氨基酸序列构成：
·表9示出的式(G-1)和(G-2)中的任一者所示的氨基酸序列；
·相对于该氨基酸序列具有90％以上(优选为95％以上)的同一性的氨基酸序列；或
·该氨基酸序列中的1～3个(优选为1或2个、进一步优选为1个)氨基酸发生了变异(优选为保守性置换)的氨基酸序列。
[表9]
Figure BDA0004205567320000481
式(G-1)中，X G31优选为I、T或S，X G51优选为S、N、T或R，X G61优选为N或T，X G71优选为Y、S或H，X G81优选为F、T、Y或W。
式(G-1)优选为式(G-1-1)，更优选为选自由式(G-1-2)～(G-1-11)组成的组中的1种，进一步优选为选自由式(G-1-2)～(G-1-9)组成的组中的1种。
与SARS CoV2的CTD特异性结合的抗体或其片段的重链CDR1优选由式(G-1-1)的氨基酸序列构成、更优选由选自由式(G-1-2)～(G-1-11)组成的组中的氨基酸序列构成、进一步优选由选自由式(G-1-2)～(G-1-9)组成的组中的氨基酸序列构成、或者由相对于该氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列构成。前述同一性优选为91％以上、92％以上、93％以上、94％以上或95％以上。
一个实施方式中，与SARS CoV2的CTD特异性结合的抗体或其片段的重链CDR2优选由下述的氨基酸序列构成：
·表10示出的式(H-1)～(H-3)中的任一者所示的氨基酸序列；
·相对于该氨基酸序列具有90％以上(优选为95％以上)的同一性的氨基酸序列；或
·该氨基酸序列中的1～3个(优选为1或2个、进一步优选为1个)氨基酸发生了变异(优选为保守性置换)的氨基酸序列。
[表10]
Figure BDA0004205567320000501
式(H-1)中，X H31优选为G、N、S、T或P，X H41优选为D、S或A，X H61优选为T、S、G或R。
式(H-1)优选为式(H-1-1)或选自由式(H-1-2)～(H-1-17)组成的组中的1种，更优选为选自由式(H-1-2)～(H-1-15)组成的组中的1种，进一步优选为选自由式(H-1-2)～(H-1-7)和(H-1-9)～(H-1-12)组成的组中的1种。
与SARS CoV2的CTD特异性结合的抗体或其片段的重链CDR2优选由选自由式(H-1)和(H-2)组成的组中的氨基酸序列构成、更优选由选自由式(H-1-1)和(H-2)组成的组或选自由式(H-1-2)～(H-1-17)和(H-2)组成的组中的氨基酸序列构成、进一步优选由选自由式(H-1-2)～(H-1-15)和(H-2)组成的组中的氨基酸序列构成、特别优选由选自由式(H-1-2)～(H-1-7)、(H-1-9)～(H-1-12)和(H-2)组成的组中的氨基酸序列构成、或者由相对于该氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列构成。前述同一性优选为91％以上、92％以上、93％以上、94％以上或95％以上。
一个实施方式中，与SARS CoV2的CTD特异性结合的抗体或其片段的重链CDR3优选由下述的氨基酸序列构成：
·表11示出的式(I-1)～(I-11)中的任一者所示的氨基酸序列；
·相对于该氨基酸序列具有90％以上(优选为95％以上)的同一性的氨基酸序列；或
·该氨基酸序列中的1～3个(优选为1或2个、进一步优选为1个)氨基酸发生了变异(优选为保守性置换)的氨基酸序列。
[表11]
Figure BDA0004205567320000511
式(I-1)中，X I31优选为N、L或T，X I61优选为D、F或G。
式(I-1)优选为选自由式(I-1-1)或式(I-1-2)～(I-1-8)组成的组中的1种，更优选为式(I-1-2)～(I-1-7)组成的组中的1种，进一步优选为选自由式(I-1-2)～(I-1-6)组成的组中的1种。
与SARS CoV2的CTD特异性结合的抗体或其片段的重链CDR3优选由选自由式(I-1)～(I-3)和(I-5)～(I-9)组成的组中的氨基酸序列构成、更优选由选自由式(I-1-1)、(I-2)、(I-3)和(I-5)～(I-9)组成的组或选自由式(I-1-2)～(I-1-8)、(I-2)、(I-3)和(I-5)～(I-9)组成的组中的氨基酸序列构成、进一步优选由选自由式(I-1-2)～(I-1-7)、(I-2)、(I-3)和(I-5)～(I-9)组成的组中的氨基酸序列构成、特别优选由选自由式(I-1-2)～(I-1-6)、(I-2)、(I-3)和(I-5)～(I-9)组成的组中的氨基酸序列构成、或者由相对于该氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列构成。前述同一性优选为91％以上、92％以上、93％以上、94％以上或95％以上。
一个实施方式中，与SARS CoV2的CTD特异性结合的抗体或其片段的轻链CDR1优选由下述的氨基酸序列构成：
·表12示出的式(J-1)～(J-3)中的任一者所示的氨基酸序列；
·相对于该氨基酸序列具有90％以上(优选为95％以上)的同一性的氨基酸序列；或
·该氨基酸序列中的1～3个(优选为1或2个、进一步优选为1个)氨基酸发生了变异(优选为保守性置换)的氨基酸序列。
[表12]
Figure BDA0004205567320000531
式(J-1)中，X J11优选为K，X J31优选为S，X J41优选为N、E或K，X J51优选为Q、R或E。
式(J-1)优选为式(J-1-1)或选自由式(J-1-2)～(I-1-7)组成的组中的1种，进一步优选为选自由式(J-1-2)～(J-1-4)组成的组中的1种。
式(J-2)中，X J73优选为S。
式(J-2)优选为式(J-2-1)或选自由式(J-2-2)～(J-2-9)组成的组中的1种，更优选为选自由式(J-2-2)～(J-2-8)组成的组中的1种，进一步优选为选自由式(J-2-2)～(J-2-6)组成的组中的1种。
与SARS CoV2的CTD特异性结合的抗体或其片段的重链CDR3优选由选自由式(J-1-1)、(J-2-1)和(J-3)组成的组或选自由式(J-1-2)～(J-1-7)、(J-2-2)～(J-2-9)和(J-3)组成的组中的氨基酸序列构成、进一步优选由选自由式(J-1-2)～(J-1-4)、(J-2-2)～(J-2-6)和(J-3)组成的组中的氨基酸序列构成、或者由相对于该氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列构成。前述同一性优选为91％以上、92％以上、93％以上、94％以上或95％以上。
一个实施方式中，与SARS CoV2的CTD特异性结合的抗体或其片段的轻链CDR2优选由下述的氨基酸序列构成：
·表13示出的式(K-1)所示的氨基酸序列；
·相对于该氨基酸序列具有90％以上(优选为95％以上)的同一性的氨基酸序列；或
·该氨基酸序列中的1～3个(优选为1或2个、进一步优选为1个)氨基酸发生了变异(优选为保守性置换)的氨基酸序列。
[表13]
Figure BDA0004205567320000541
式(K-1)优选为选自由式(K-1-1)～(K-1-7)组成的组中的1种。
与SARS CoV2的CTD特异性结合的抗体或其片段的轻链CDR2优选由选自由式(K-1-1)～(K-1-7)组成的组中的氨基酸序列构成、或者由相对于该氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列构成。前述同一性优选为91％以上、92％以上、93％以上、94％以上或95％以上。
一个实施方式中，与SARS CoV2的CTD特异性结合的抗体或其片段的轻链CDR3优选由下述的氨基酸序列构成：
·表14示出的式(L-1)～(L-6)中的任一者所示的氨基酸序列；
·相对于该氨基酸序列具有90％以上(优选为95％以上)的同一性的氨基酸序列；或
·该氨基酸序列中的1～3个(优选为1或2个、进一步优选为1个)氨基酸发生了变异(优选为保守性置换)的氨基酸序列。
[表14]
Figure BDA0004205567320000551
式(L-1)中，X L31优选为R或S，X L41优选为Q或E，X L51优选为S，X L61优选为D或N，XL71优选为D，X L81优选为A，X L91优选为A，X L101优选为S、R或W，X L111优选为V。
式(L-1)优选为式(L-1-1)或选自由式(L-1-2)～(L-1-7)组成的组中的1种，进一步优选为选自由式(L-1-2)～(L-1-4)组成的组中的1种。
式(L-2)中，X L33优选为R、S或G，进一步优选为G，X L43优选为Q或E，进一步优选为E，X L53优选为S，X L63优选为D，X L73优选为D，X L83优选为A，X L93优选为W，X L103优选为V。
式(L-2)优选为式(L-2-1)。
式(L-3)中，X L54优选为H，X L64优选为D或N、或者D或V，X L84优选为Y、V或I、或者Y或L。
式(L-3)优选为式(L-3-1)或选自由式(L-3-2)～(L-3-7)组成的组中的1种，进一步优选为式(L-3-2)或(L-3-3)。
式(L-4)中，X L27优选为T，X L37优选为T，X L47优选为N，X L57优选为D，X L77优选为Y，X L87优选为T。
式(L-4)优选为式(L-4-1)。
与SARS CoV2的CTD特异性结合的抗体或其片段的轻链CDR3优选由选自由式(L-1)～(L-3)、(L-5)和(L-6)组成的组中的氨基酸序列构成、更优选由选自由式(L-1-1)、(L-2-1)、(L-3-1)、(L-5)和(L-6)组成的组或选自由(L-1-2)～(L-1-7)、(L-2-1)、(L-3-2)、(L-3-3)、(L-5)和(L-6)组成的组中的氨基酸序列构成、进一步优选由选自由式(L-1-2)～(L-1-4)、(L-2-1)、(L-3-2)、(L-3-3)、(L-5)和(L-6)组成的组中的氨基酸序列构成、或者由相对于该氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列构成。前述同一性优选为91％以上、92％以上、93％以上、94％以上或95％以上。
将与SARS CoV2的CTD特异性结合的抗体或其片段的重链CDR1～3和轻链CDR1～3的组合的优选例示于表15。
[表15]
Figure BDA0004205567320000571
组合C-3～C-8中，优选重链CDR1～3和轻链CDR1～3中的至少1个CDR的氨基酸序列中有1～3个氨基酸发生了变异(优选为保守性置换)。
重链CDR1～3和轻链CDR1～3以外的区域只要是可用于抗体的就没有特别限制，可以设为任意的氨基酸序列。作为恒定区，可以使用例如IgG1、IgG2、IgG3、IgA1、IgA2、IgM的恒定区等，但是不限于这些。
与SARS CoV2的NTD或CTD特异性结合的抗体或其片段对SARS CoV2的N蛋白的结合性高，以通过后述的实施例中记载的酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定的吸光度为指标，例如为0.2以上、优选为0.3以上、更优选为0.4以上、进一步优选为0.5以上。
与SARS CoV2的NTD或CTD特异性结合的抗体或其片段对SARS CoV2的N蛋白的结合亲和性(Kd)例如为50nM以下、优选为10nM以下，例如为1pM以上。Kd可以使用Biacore(商标)T200(Cytiva公司)测定。具体而言，通过利用N’-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(NHS)与N-羟基琥珀酰亚胺(EDC)的胺偶联反应，将抗豚鼠IgG抗体以共价键固定化于传感器芯片CM5的羧甲基葡聚糖上，将与SARS CoV2的NTD或CTD特异性结合的抗体或其片段注入传感器芯片而进行结合，再将SARS CoV2的N蛋白注入传感器芯片，并且使其与SARS CoV2的NTD或CTD特异性结合的抗体或其片段反应，通过分析反应信号可以计算Kd。
4.多核苷酸
本发明的多核苷酸优选包含与SARS CoV2的NTD或CTD特异性结合的抗体或其片段的编码序列。作为该编码序列，可列举例如编码上述3中记载的包含重链CDR1～3和轻链CDR1～3的抗体或其片段的碱基序列，但是不限于此。
一个实施方式中，本发明的多核苷酸优选包含与SARS CoV2的NTD或CTD特异性结合的抗体或其片段的表达盒。该表达盒只要能够在宿主细胞内进行表达则没有特别限制，例如包含启动子和在被配置为受该启动子控制的编码序列。
作为启动子，没有特别限制，可根据宿主细胞的种类适宜选择。作为启动子，例如可以使用各种pol II系启动子。作为pol II系启动子，没有特别限制，可列举例如CMV启动子、EF1启动子、SV40启动子、MSCV启动子等。此外，作为启动子，可列举例如：trc、tac等色氨酸启动子；lac启动子；T7启动子；T5启动子；T3启动子；SP6启动子；阿拉伯糖诱导启动子；冷休克启动子；四环素诱导性启动子等。
表达盒可以根据需要包含其它元件。作为其它元件，可列举例如多克隆位点(MCS)、药剂抗性基因、复制起点、增强子序列、阻遏子序列、绝缘子序列、报告蛋白编码序列、药剂抗性基因编码序列等。这些可以为单独1种，也可以为2种以上的组合。
本发明的多核苷酸例如可以为载体的形态。可以根据使用目的、宿主细胞的种类等来选择适当的载体。例如，作为以大肠杆菌为宿主的载体，可例示：M13噬菌体或其变体、λ噬菌体或其变体、pBR322或其变体(例如pB325、pAT153、pUC8)等；作为以酵母为宿主的载体，可例示pYepSec1、pMFa、pYES2、pPIC3.5K等；作为以昆虫细胞为宿主的载体，可例示pAc、pVL等；作为以哺乳动物细胞为宿主的载体，可例示pcDNA、pCDM8、pMT2PC等。
5.细胞
本发明的细胞优选包含上述4中记载的多核苷酸。作为细胞，可列举例如大肠杆菌(Escherichia coli)K12等大肠杆菌、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)MI114等芽孢杆菌属细菌、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)AH22等酵母、来自草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)的Sf细胞系或来自粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)的HighFive细胞系、嗅神经细胞等昆虫细胞、动物细胞等。作为动物细胞，优选来自哺乳动物的培养细胞，具体可列举COS7细胞、CHO细胞、HEK293细胞、Expi293细胞、293F细胞、293T细胞、293FT细胞、Hela细胞、PC12细胞、N1E-115细胞、SH-SY5Y细胞等。
一个实施方式中，本发明的细胞优选表达与SARS CoV2的NTD或CTD特异性结合的抗体或其片段。
一个实施方式中，本发明的细胞优选分泌或在细胞表面上具有与SARS CoV2的NTD或CTD特异性结合的抗体或其片段。
6.试剂或药物
本发明的试剂或药物优选包含：与SARS CoV2的NTD或CTD特异性结合的抗体或其片段、包含该抗体或其片段的编码序列的多核苷酸、或者包含该多核苷酸的细胞。本发明的试剂或药物优选还包含药学上可接受的赋形剂或载体、和/或添加剂。
作为前述赋形剂或载体，可列举例如淀粉、乳糖、结晶纤维素、山梨醇、磷酸氢钙、水、乙醇、(聚)乙二醇、(聚)丙二醇、甘油、植物油等。这些可以单独使用1种或将2种以上组合使用。
作为前述添加剂，可列举例如缓冲剂、等渗剂、增稠剂、螯合剂、乳化剂、着色剂、保存剂等。这些可以单独使用1种或将2种以上组合使用。
本发明的试剂或药物可以为将与SARS CoV2的NTD或CTD特异性结合的抗体或其片段溶解或分散于溶剂而成的物质，也可以为冷冻干燥物。
7.用于检测SARSCoV2的N蛋白的试剂盒
本发明的用于检测SARS CoV2的N蛋白的试剂盒优选包含与SARS CoV2的NTD或CTD特异性结合的抗体或其片段。该抗体或其片段例如可以为上述6中记载的试剂的形态。
该试剂盒优选包含：
·分别识别NTD的不同表位的、与SARS CoV2的NTD特异性结合的2种以上的抗体或其片段；和/或
·分别识别CTD的不同表位的、与SARS CoV2的CTD特异性结合的2种以上的抗体或其片段。
与NTD特异性结合的2种以上的抗体或其片段优选重链CDR1～3和轻链CDR1～3中至少1个CDR的氨基酸序列各不相同。一个实施方式中，优选与NTD特异性结合的2种以上的抗体或其片段的一部分(以下称为“第1抗NTD抗体或其片段”)被固相化，剩余部分(以下称为“第2抗NTD抗体或其片段”)进行了标记化。作为固相化第1抗NTD抗体或其片段的固相，可列举例如珠、孔、芯片、条状物等，但是不限于这些。作为使第1抗NTD抗体或其片段固相化的方法，没有特别限制，可列举例如使生物素化的第1抗NTD抗体或其片段与具有亲和素的固相表面接触的方法等。作为用于标记第2抗NTD抗体或其片段的标记物质，没有特别限制，可列举例如过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(ALP)等酶。
第1和第2抗NTD抗体或其片段例如可以从上述2中记载的抗体或其片段中选择，可以优选从表8的N-1中选择，可以更优选从表8的N-2中选择，可以进一步优选从表8的N-3中选择，可以特别优选从表8的N-4与N-5的组合、N-4与N-6的组合、N-4与N-7的组合、N-5与N-6的组合、N-5与N-7的组合、N-6与N-7的组合、N-6与N-13的组合、N-10与N-12的组合、N-5与N-8的组合、以及N-9与N-10的组合(在此，N-4～N-10、N-12和N-13的重链CDR1～3和轻链CDR1～3的氨基酸序列可以为相对于该氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列，也可以为该氨基酸序列中的1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列)中选择。
与CTD特异性结合的2种以上的抗体或其片段优选重链CDR1～3和轻链CDR1～3中的至少1个CDR的氨基酸序列各不相同。一个实施方式中，优选与CTD特异性结合的2种以上的抗体或其片段的一部分(以下称为“第1抗CTD抗体或其片段”)被固相化、剩余部分(以下称为“第2抗CTD抗体或其片段”)进行了标记化。作为固相化第1抗CTD抗体或其片段的固相，可列举例如珠、孔、芯片、条状物等，但是不限于这些。作为使第1抗CTD抗体或其片段固相化的方法，没有特别限制，可列举例如使生物素化的第1抗CTD抗体或其片段与具有亲和素的固相表面接触的方法等。作为用于标记第2抗CTD抗体或其片段的标记物质，没有特别限制，可列举例如过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(ALP)等酶。
第1和第2抗CTD抗体或其片段例如可以从上述3中记载的抗体或其片段中选择，可以优选从表15的C-1中选择，可以更优选从表15的C-2中选择，可以进一步优选从表15的C-3中选择，可以特别优选从表15的C-4与C-5的组合、C-4与C-6的组合、C-4与C-7的组合、C-5与C-6的组合、C-5与C-7的组合、C-6与C-7的组合、C-4与C-12的组合、C-9与C-11的组合、C-7与C-16的组合(在此，C-4～C-7、C-9、C-11、C-12和C-16的重链CDR1～3和轻链CDR1～3的氨基酸序列可以为相对于该氨基酸序列具有90％以上的同一性的氨基酸序列，也可以为该氨基酸序列中的1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列)中选择。
该试剂盒优选为用于检测待检试样中的SARS CoV2的N蛋白的试剂盒。待检试样可以为生物试样，也可以为非生物试样。待检试样不仅包括保持原采集状态的试样，还包括对该试样实施了杂质去除等前处理而得的物质。
作为生物试样，可列举例如血液、血清、血浆、骨髓液、淋巴液、泪液、鼻涕、鼻腔清洗液、鼻腔擦拭液、唾液、漱口液、喀痰、咽拭液、汗、气管抽吸液、支气管灌洗液、胸水、腹水、羊水、肠管灌洗液、尿、粪便、细胞提取液、组织提取液、器官提取液等，但是不限于这些。
作为非生物试样，可列举例如从水龙头、把手、扶手、吊环、开关、墙壁、地板、桌子、椅子、马桶座等的环境表面采集的试样，但是不限于这些。
作为使用该试剂盒检测SARS CoV2的N蛋白的方法，没有特别限制，可列举例如免疫层析法、酶联免疫吸附测定法、化学发光免疫测定法、化学发光酶联免疫吸附测定法、放射免疫测定法、电化学发光免疫测定法、免疫比浊法、胶乳凝集法等。
该试剂盒可以根据待检试样的制备方法、SARS CoV2的N蛋白的检测方法等进一步包含其它物质(例如缓冲液、酶液、稀释用溶液、二抗等)、使用器具、使用说明书等。
8.检测SARS CoV2的N蛋白的方法
检测SARS CoV2的N蛋白的方法优选包括下述的工序(1)～(3)：
(1)将与NTD或CTD特异性结合的第1抗体或其片段固定化于固相的工序；
(2)对前述固相应用与SARS CoV2的N蛋白和序列号1或2所示的氨基酸序列特异性结合的第2抗体或其片段(在此，第2抗体或其片段识别第1抗体或其片段所特异性结合的氨基酸序列中的不同的表位，并且用标记物质进行了标记化)的工序；和
(3)检测来自借助前述核衣壳蛋白结合于前述固相的第2抗体或其片段的标记物质的标记的工序。
第1和第2抗体或其片段优选为上述7中记载的第1和第2抗NTD抗体或其片段、和/或、第1和第2抗CTD抗体或其片段。
作为固相和标记物质，例如，可以从上述7中记载的固相和标记物质中选择。
实施例
(通过动物免疫来取得抗体产生细胞)
作为初次免疫，将悬浮于PBS的195μg的SARS-CoV2 N蛋白与作为佐剂的TiterMAXGold(Funakoshi株式会社)混合，给予到豚鼠的左右后肢肌肉内。初次免疫起14天后，将悬浮于PBS的100μg的SARS-CoV2 N蛋白与TiterMAX Gold混合，对豚鼠的左右后肢肌肉内进行追加免疫。进一步地，在追加免疫起31天后，将悬浮于PBS的100μg的SARS-CoV2 N蛋白再次追加免疫到豚鼠的左右后肢肌肉内。第2次追加免疫起8天后，将2只豚鼠在麻醉下采全血和安乐死后，摘出腰部淋巴节。
(产生抗SARS-CoV2 N蛋白抗体的浆细胞的分选)
基于“浆细胞鉴定和分离用荧光探针、以及使用该探针的浆细胞的鉴定或分离方法”(美国专利申请公开2013/0029325号)中的方法(ERIAA法)来实施。
将从摘出的腰部淋巴节获得的细胞用甲醛PBS溶液在冰上固定10分钟。将经固定处理的细胞利用Dylight488标记SARS-CoV2 N蛋白、Dylight550标记SARS-CoV N蛋白、Dylight650标记抗豚鼠IgG抗体、和DAPI(4’,6-二脒基-2-苯基吲哚)染色，通过流式细胞术分选显示出SARS-CoV2 N蛋白强阳性且SARS-CoV N蛋白阴性且抗豚鼠IgG强阳性的浆细胞。
(抗体可变区基因片段的合成)
对于通过分选获得的各细胞，基于Kurosawa等的方法(MAGrahd法)进行了mRNA提取、cDNA合成和抗体可变区基因片段的扩增(Rapid production of antigen-specificmonoclonal antibodies from a variety of animals,BMC Biology2012,10:80)。
(抗体基因表达单元的制作)
由扩增出的抗体可变区基因片段，基于“包含靶基因来源序列的连接DNA片段的特异性制作方法”(美国专利申请公开第2013/0023009号)中的方法(TS-jPCR法)制作抗体基因表达单元。
(抗体在293FT细胞中的瞬时表达)
将制作的抗体基因表达单元与FuGene HD Transfection Reagent(商标)与Opti-MEM(商标)以1：1：50的液量比混合，常温下放置20分钟后添加到用10％(w/v)FBS/IMDM培养基悬浮的293FT细胞中，由此导入抗体基因表达单元。将导入了抗体基因表达单元的293FT细胞接种于24孔板，在37℃、8％(v/v)CO 2环境下孵育2天，然后回收培养上清。利用释放到培养上清中的抗体实施此后的筛选。
(利用ELISA的抗体筛选)
通过利用ELISA评价各抗体与SARS-CoV2 N蛋白的反应强度来进行筛选。ELISA中，以15ng/孔的方式将SARS-CoV2 N蛋白固相化于96孔板底面，加入瞬时表达抗体的293FT细胞的培养上清100μL，在室温下进行2小时抗原抗体反应。利用结合有辣根过氧化物酶的山羊抗豚鼠抗体检测结合到抗原上的豚鼠抗体，使用酶标仪测定450nm的吸光度。
(利用免疫染色实施的、抗体的反应性评价筛选)
为了确认所获得的抗体是否识别SARS-CoV2 N蛋白的N末端区域(NTD)和C末端区域(CTD)中的任意者，在293FT细胞中瞬时表达分别编码NTD和CTD的DNA片段，添加所获得的抗体进行免疫染色，由此评价抗体与分别编码NTD和CTD的DNA片段的反应性。
NTD和CTD的氨基酸序列如表16所示。
[表16]
Figure BDA0004205567320000651
以包含SARS-CoV2 N蛋白的ORF区域的质粒为模板，通过PCR制作分别编码NTD和CTD的DNA片段。将制作的DNA片段(50ng/μL)与FuGene HD Transfection Reagent(商标)(普洛麦格公司)与Opti-MEM(商标)(赛默飞世尔公司)以1：1：50的液量比混合，在常温下放置20分钟后，添加到用10％(w/v)FBS/IMDM培养基悬浮的293FT细胞中。
将导入了DNA片段的293FT细胞接种于实施了胶原包被的96孔板，在37℃、8％(v/v)CO 2环境下孵育2天。然后除去培养基并用PBS洗涤，以100μL/孔添加3％(w/v)甲醛PBS溶液，在常温下静置20分钟而对细胞进行固定，再以200μL/孔添加0.1％(w/v)Triton PBS溶液，在室温下静置5分钟，进行细胞膜透过处理。除去孔中的溶液后，添加瞬时表达抗体的293FT细胞的培养上清100μL，在室温下静置反应3小时。除去前述培养上清并用PBS洗涤后，添加Dylight594标记抗豚鼠IgG抗体，在遮光下室温下静置1小时而进行反应。进一步用PBS洗涤后，用含有DAPI的PBS对核进行染色。
通过以上方法观察固相化SARS-CoV2 N蛋白(全长)与抗体的反应性、以及表达分别编码NTD和CTD的DNA片段的细胞与抗体的反应性，由此判定各抗体是NTD反应性还是CTD反应性。
(Expi293细胞中的抗体的瞬时表达和纯化)
对于利用ELISA进行评价的结果是反应性良好的抗体，将制作的基因表达单元转染到Expi293细胞中，由此制作抗体。转染时，利用Expi293Expression Medium(GIBCO公司)和Expi Fectamine 293Transfection Kit(GIBCO公司)。在每个E250培养瓶中混合所制作的各抗体的基因表达单元50μg与OptiMEM I 3mL与Expi Fectamine 293 0.16mL并静置10分钟后，添加到Expi293细胞中，由此进行基因导入。培养1天后，进行Expi Fectamine 293转染增强剂的补料添加，进一步培养4天后，回收上清，用蛋白A柱纯化，由此获得抗体。
对于获得的260个抗体克隆进行筛选，对所得到的抗体中的、与NTD特异性结合的抗体16个克隆(N1～N16)以及与CTD特异性结合的抗体27个克隆(C1～C27)，分别在表17和表18中示出重链CDR1～3和轻链CDR1～3的氨基酸序列(基于IMGT法)。
[表17]
Figure BDA0004205567320000661
[表18]
Figure BDA0004205567320000671
之后使用与NTD或CTD具有反应性的一些克隆来说明本发明的效果，但是本发明不限于这些克隆。将代表性的克隆的免疫染色和ELISA的结果示于表19。使用其它克隆也可以发挥同样的作用效果。
[表19]
Figure BDA0004205567320000681
(发生了分解的NP抗原的夹心ELISA)
将进行了生物素标记的各克隆(固相化抗体)用TBS稀释为5μg/mL，以50μL/孔加入到96孔微孔板中，在室温下包被2小时。用1％(w/v)BSA-TBS-T封闭，用TBS-T洗涤后，以50μL/孔添加0.25μg/mL的进行了碱性磷酸酶标记的各克隆(检测抗体)和10ng/mL抗原溶液(1％(w/v)TBS-T稀释)，在室温下反应2小时。需要说明的是，作为抗原溶液，除了使用全长的SARS-CoV2 N蛋白的试样1以外，还使用了将SARS-CoV2 N蛋白的总量替换为等摩尔量的NTD和CTD的试样2以模拟SARS-CoV2 N蛋白发生了分解的待检体。用TBS-T洗涤后，以100μL/孔添加作为显色底物的pNPP，在室温下反应15分钟后，用酶标仪测定405nm的吸光度。将结果示于表20。需要说明的是，表20的％表示相对于试样1的吸光度测定值的相对吸光度值。
[表20]
Figure BDA0004205567320000691
组合了2种识别NTD的抗体的情况下和组合了2种识别CTD的抗体的情况下，模拟SARS-CoV2 N蛋白发生分解的待检体的试样2中，抗原片段的立体结构发生了变化，推测与抗原片段的反应性会下降，观察到吸光度测定值下降，但是其下降水平小。另一方面，组合NTD识别抗体和CTD识别抗体时，对于试样2～4确认到吸光度测定值的大幅下降。
(使用寡克隆抗体的夹心ELISA)
将使进行了生物素标记的多个克隆混合而得的固相化抗体用TBS稀释成5μg/mL，以50μL/孔加入到96孔微孔板中，在室温下包被2小时。用1％(w/v)BSA-TBS-T封闭，用TBS-T洗涤后，以50μL/孔添加将进行了碱性磷酸酶标记的多个克隆混合而成的0.25μg/mL检测抗体和10ng/mL抗原溶液(1％(w/v)TBS-T稀释)，在室温下反应2小时。需要说明的是，使用2种固相化抗体时，以各固相化抗体的添加量变更为1/2、使总量为50μL/孔的方式进行添加。使用2种检测抗体时也同样。作为抗原溶液，除了使用全长的SARS-CoV2 N蛋白的试样1以外，还使用了将SARS-CoV2 N蛋白的总量替换为等摩尔量的NTD和CTD的试样2，以模拟SARS-CoV2 N蛋白发生了分解的待检体。用TBS-T洗涤后，以100uL/孔添加作为显色底物的pNPP，在室温下反应15分钟后，使用酶标仪测定405nm的吸光度。将结果示于表21。
[表21]
Figure BDA0004205567320000701
可确认，作为固相化抗体和检测抗体，与使用单独的抗体时相比，组合多种抗体时可提高检测灵敏度。
(抗体的表位作图)
表位作图使用PEPperPRINT公司的Conformational Epitope Mappings服务来确定。在肽阵列上，以每次移动1个氨基酸、从而分别有6、9、12个氨基酸重复的方式合成SARSCoV 2的N蛋白的N末端起第200～419位的氨基酸区域内的由7、10、13个氨基酸构成的肽，通过抗体的反应性、即检测信号确定哪个肽为抗体所结合的表位。
(结果)
通过单克隆抗体的表位作图确认：表18所示的克隆中，3个克隆的表位分别位于序列号150：LLPAADLDDFSK(SARS CoV 2的N蛋白的N末端起第394～405位)、序列号151：KKADETQAL(SARS CoV 2的N蛋白的N末端起第374～382位)、序列号152：SAAEASKK(SARS CoV2的N蛋白的N末端起第250～257位)的区域。
序列表
<110> 东洋纺株式会社（TOYOBO CO., LTD）
国立大学法人富山大学（NATIONAL UNIVERSITY CORPORATION UNIVERSITY OFTOYAMA）
<120> 与严重急性呼吸综合征冠状病毒2的核衣壳蛋白特异性结合的抗体或其片段、及其用途
<130> P21-084WO
<150> JP 2020-183273
<151> 2020-10-30
<160> 152
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 172
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 1
Met Ser Asp Asn Gly Pro Gln Asn Gln Arg Asn Ala Pro Arg Ile Thr
1 5 10 15
Phe Gly Gly Pro Ser Asp Ser Thr Gly Ser Asn Gln Asn Gly Glu Arg
20 25 30
Ser Gly Ala Arg Ser Lys Gln Arg Arg Pro Gln Gly Leu Pro Asn Asn
35 40 45
Thr Ala Ser Trp Phe Thr Ala Leu Thr Gln His Gly Lys Glu Asp Leu
50 55 60
Lys Phe Pro Arg Gly Gln Gly Val Pro Ile Asn Thr Asn Ser Ser Pro
65 70 75 80
Asp Asp Gln Ile Gly Tyr Tyr Arg Arg Ala Thr Arg Arg Ile Arg Gly
85 90 95
Gly Asp Gly Lys Met Lys Asp Leu Ser Pro Arg Trp Tyr Phe Tyr Tyr
100 105 110
Leu Gly Thr Gly Pro Glu Ala Gly Leu Pro Tyr Gly Ala Asn Lys Asp
115 120 125
Gly Ile Ile Trp Val Ala Thr Glu Gly Ala Leu Asn Thr Pro Lys Asp
130 135 140
His Ile Gly Thr Arg Asn Pro Ala Asn Asn Ala Ala Ile Val Leu Gln
145 150 155 160
Leu Pro Gln Gly Thr Thr Leu Pro Lys Gly Phe Tyr
165 170
<210> 2
<211> 173
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 2
Thr Lys Lys Ser Ala Ala Glu Ala Ser Lys Lys Pro Arg Gln Lys Arg
1 5 10 15
Thr Ala Thr Lys Ala Tyr Asn Val Thr Gln Ala Phe Gly Arg Arg Gly
20 25 30
Pro Glu Gln Thr Gln Gly Asn Phe Gly Asp Gln Glu Leu Ile Arg Gln
35 40 45
Gly Thr Asp Tyr Lys His Trp Pro Gln Ile Ala Gln Phe Ala Pro Ser
50 55 60
Ala Ser Ala Phe Phe Gly Met Ser Arg Ile Gly Met Glu Val Thr Pro
65 70 75 80
Ser Gly Thr Trp Leu Thr Tyr Thr Ala Ala Ile Lys Leu Asp Asp Lys
85 90 95
Asp Pro Asn Phe Lys Asp Gln Val Ile Leu Leu Asn Lys His Ile Asp
100 105 110
Ala Tyr Lys Thr Phe Pro Pro Thr Glu Pro Lys Lys Asp Lys Lys Lys
115 120 125
Lys Ala Asp Glu Thr Gln Ala Leu Pro Gln Arg Gln Lys Lys Gln Gln
130 135 140
Thr Val Thr Leu Leu Pro Ala Ala Asp Leu Asp Asp Phe Ser Lys Gln
145 150 155 160
Leu Gln Gln Ser Met Ser Ser Ala Asp Ser Thr Gln Ala
165 170
<210> 3
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 3
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Gly
1 5
<210> 4
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 4
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Phe Trp
1 5
<210> 5
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 5
Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr Trp
1 5
<210> 6
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 6
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Phe Gly
1 5
<210> 7
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 7
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Tyr
1 5
<210> 8
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 8
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Trp
1 5
<210> 9
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 9
Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr Ser
1 5
<210> 10
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 10
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Thr
1 5
<210> 11
<211> 10
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 11
Gly Phe Ser Ile Thr Thr Asn Gly Tyr Thr
1 5 10
<210> 12
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 12
Ile Ser Tyr Ser Gly Gly Arg Thr
1 5
<210> 13
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 13
Ile Asn Tyr Asp Gly Asp Arg Thr
1 5
<210> 14
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 14
Ile Asn Gly Asp Ser Thr Lys Ile
1 5
<210> 15
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 15
Ile Asp Tyr Ser Gly Gly Thr Thr
1 5
<210> 16
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 16
Ile Ser Tyr Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 17
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 17
Ile Ser Gly Asp Ser Asn Tyr Ile
1 5
<210> 18
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 18
Ile His Pro Asp Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 19
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 19
Ile Ser Pro Asp Gly Gly Gly Thr
1 5
<210> 20
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 20
Ile Ser Pro Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 21
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 21
Ile Ser Tyr Ser Gly Gly Asn Thr
1 5
<210> 22
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 22
Ile Trp Tyr Asp Gly Thr Lys Met
1 5
<210> 23
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 23
Ile Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Ile
1 5
<210> 24
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 24
Ile Trp Tyr Asp Ala Asp Thr
1 5
<210> 25
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 25
Ile Trp Ser Gly Gly Arg Ile
1 5
<210> 26
<211> 15
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 26
Ala Arg Asp Gly Gly Ser Tyr Tyr Ser Pro Ile Asn Phe Gln Phe
1 5 10 15
<210> 27
<211> 15
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 27
Ser Arg Asp Gly Gly Ser Tyr His Ser Pro Ile Ser Cys Gln Tyr
1 5 10 15
<210> 28
<211> 15
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 28
Ala Arg Asp Gly Gly Ser Tyr Ser Ser Pro Ile Asn Phe Gln Tyr
1 5 10 15
<210> 29
<211> 15
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 29
Ser Arg Asp Gly Gly Ser Tyr Ser Ser Pro Ile Asn Phe Gln Tyr
1 5 10 15
<210> 30
<211> 15
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 30
Ala Arg Asp Gly Gly Ser Val Thr Ser Pro Ile Tyr Phe Gln Val
1 5 10 15
<210> 31
<211> 15
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 31
Ala Arg Asp Gly Gly Ser Val Lys Ser Pro Ile Tyr Phe Gln Tyr
1 5 10 15
<210> 32
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 32
Ala Thr Asn Tyr Asn Phe Gln Tyr
1 5
<210> 33
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 33
Ala Thr Ser Gly Pro Met Asp Val
1 5
<210> 34
<211> 19
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 34
Ala Arg Ser Ile Ile Ala Glu Ile Pro Thr Ile Phe Thr Phe Pro Pro
1 5 10 15
Phe Asp Val
<210> 35
<211> 11
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 35
Ala Arg Leu Trp Ser Gly Tyr Ala Leu Asp Ile
1 5 10
<210> 36
<211> 13
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 36
Ala Lys Tyr Tyr Asp Tyr Asp Tyr Thr Gly Phe Asp Val
1 5 10
<210> 37
<211> 14
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 37
Val Ser Pro Leu Leu Val Val His Gly Pro Phe Phe Gln Tyr
1 5 10
<210> 38
<211> 14
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 38
Val Ser Pro Leu Leu Val Tyr His Gly Pro Phe Phe Gln Tyr
1 5 10
<210> 39
<211> 14
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 39
Val Lys Pro Leu Leu Val Leu His Gly Pro Phe Phe Gln Ser
1 5 10
<210> 40
<211> 10
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 40
Val Ser Pro Ser Gly Ala Gly Leu Asp Val
1 5 10
<210> 41
<211> 9
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 41
Ser Pro Ser Ala Val Gly Phe Asp Val
1 5
<210> 42
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 42
Ser Glu Tyr Lys His Tyr Asn
1 5
<210> 43
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 43
Ser Glu His Arg Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 44
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 44
Ser Asp Tyr Ser His Tyr Ser
1 5
<210> 45
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 45
Ser Gln Gly Ile Asn Lys Trp
1 5
<210> 46
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 46
Ser Gly His Ser Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 47
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 47
Ser Glu His Ser Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 48
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 48
Ser Asp His Ser Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 49
<211> 13
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 49
Ser Gln Ser Leu Phe Tyr Ser Gly Lys Asn Lys Asp Leu
1 5 10
<210> 50
<211> 6
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 50
Asn Ile Gly Gly Lys Thr
1 5
<210> 51
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 51
Leu Lys Ser Asp Gly Ser His
1 5
<210> 52
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 52
Val Lys Ser Asp Gly Ser His
1 5
<210> 53
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 53
Ile Glu Ser Asp Gly Ser His
1 5
<210> 54
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 54
Val Lys Ser Asp Gly Ser Leu
1 5
<210> 55
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 55
Leu Asn Ser Tyr Gly Ser His
1 5
<210> 56
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 56
Leu Asn Ser Lys Gly Ser His
1 5
<210> 57
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 57
Ile Glu Ser Lys Gly Ser His
1 5
<210> 58
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 58
Val Gly Thr Ser Asp Ile Val Gly
1 5
<210> 59
<211> 10
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 59
Gly Val Ser Tyr Ser Gly Gly His Asn Ile
1 5 10
<210> 60
<211> 10
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 60
Gly Val Ser Phe Ser Gly Gly His Gly Val
1 5 10
<210> 61
<211> 10
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 61
Gly Val Ser Tyr Ser Gly Gly His Asn Val
1 5 10
<210> 62
<211> 10
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 62
Gly Val Ser Val Ser Gly Gly His Asn Leu
1 5 10
<210> 63
<211> 10
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 63
Gly Val Ser Leu Lys Gly Gly His Asn Leu
1 5 10
<210> 64
<211> 11
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 64
Gly Ala Asp Tyr Ser Gly Ala Ser Ser Tyr Val
1 5 10
<210> 65
<211> 13
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 65
Gly Ala Asn His Asn Ile Gly Glu Ser Tyr Gly Tyr Val
1 5 10
<210> 66
<211> 9
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 66
Gly Val Gly Tyr Asn Asn Lys Tyr Val
1 5
<210> 67
<211> 9
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 67
Gly Val Gly Tyr Ser Gly Gly Tyr Val
1 5
<210> 68
<211> 9
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 68
Gly Val Ser Tyr Ser Gly Gly Tyr Val
1 5
<210> 69
<211> 9
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 69
Gly Val Lys Tyr Ser Gly Gly Val Val
1 5
<210> 70
<211> 9
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 70
Gly Val Ser Tyr Ser Gly Gly Tyr Tyr
1 5
<210> 71
<211> 9
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 71
Gln Tyr Asp Ser Thr Pro Pro Leu Thr
1 5
<210> 72
<211> 9
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 72
Gln Val Trp Asp Ser Tyr Thr Tyr Val
1 5
<210> 73
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 73
Gln Phe Ile Asn Gly Pro Leu Thr
1 5
<210> 74
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 74
Gly Phe Ile Phe Ser Asn Tyr Phe
1 5
<210> 75
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 75
Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Thr
1 5
<210> 76
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 76
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Tyr
1 5
<210> 77
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 77
Gly Leu Ser Leu Thr Asn Tyr Thr
1 5
<210> 78
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 78
Gly Phe Ser Phe Ser Asn Ser Trp
1 5
<210> 79
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 79
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Trp
1 5
<210> 80
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 80
Gly Phe Thr Phe Arg Asn His Trp
1 5
<210> 81
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 81
Gly Phe Thr Phe Ser Asn His Trp
1 5
<210> 82
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 82
Gly Phe Phe Phe Ser Asn Ser Trp
1 5
<210> 83
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 83
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Gly
1 5
<210> 84
<211> 6
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 84
Lys Leu Ser Glu Arg Tyr
1 5
<210> 85
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 85
Ile Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Ile
1 5
<210> 86
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 86
Ile Gly Asn Ser Gly Ser Lys Thr
1 5
<210> 87
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 87
Ile Ser Gly Asp Gly Ser Asn Ile
1 5
<210> 88
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 88
Ile Ser Gly Asp Ser Ser Asn Ile
1 5
<210> 89
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 89
Ile Lys Gly Asp Ser Ser Ile Ile
1 5
<210> 90
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 90
Ile Asn Pro Asp Asp Gly Ser Pro
1 5
<210> 91
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 91
Ile Lys Gly Asp Ser Ser Ile Thr
1 5
<210> 92
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 92
Ile Asn Ser Asp Gly Ser Asn Thr
1 5
<210> 93
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 93
Ile Asn Thr Asp Gly Ser Ser Thr
1 5
<210> 94
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 94
Ile Lys Gly Asp Ser Arg Thr Ile
1 5
<210> 95
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 95
Ile Ser Gly Ala Ser Ser Asn Ile
1 5
<210> 96
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 96
Ile Ser Gly Asp Ser Ser Asn Val
1 5
<210> 97
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 97
Ile Lys Gly Asp Ser Ser Thr Ile
1 5
<210> 98
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 98
Ile Asn Ser Asp Gly Ser Ser Thr
1 5
<210> 99
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 99
Ile Gly Tyr Ser Gly Ala Ser Ile
1 5
<210> 100
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 100
Ile Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile
1 5
<210> 101
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 101
Met Trp Ser Asp Gly Asp Thr
1 5
<210> 102
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 102
Thr Ile Asn Trp Gly Asp Val
1 5
<210> 103
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 103
Ser Thr Leu Gly Val Gly Val
1 5
<210> 104
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 104
Thr Thr Leu Gly Val Gly Val
1 5
<210> 105
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 105
Ser Thr Thr Gly Phe Asp Val
1 5
<210> 106
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 106
Ser Thr Leu Gly Asn Phe Leu
1 5
<210> 107
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 107
Thr Ile Thr Trp Gly Asp Val
1 5
<210> 108
<211> 7
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 108
Thr Ile Asp Trp Gly Asn Val
1 5
<210> 109
<211> 19
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 109
Ala Arg Thr Ser Arg Ile Val Ala Asp Leu Val Thr Met Gly Tyr Ala
1 5 10 15
Leu Asp Phe
<210> 110
<211> 16
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 110
Ala Arg Asp Val Val Lys Thr Gly Thr Thr Gly Leu Pro Phe Asp Leu
1 5 10 15
<210> 111
<211> 14
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 111
Ala Arg Glu Gly Val Ile Thr Val Gly Thr Trp Gly Asp Val
1 5 10
<210> 112
<211> 5
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 112
Ala Thr Ser Glu Tyr
1 5
<210> 113
<211> 6
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 113
Thr Thr Ala Thr Asp Val
1 5
<210> 114
<211> 6
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 114
Thr Pro Ala Thr Asp Val
1 5
<210> 115
<211> 10
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 115
Ser Pro Met Thr Ile His Gly Leu Asp Thr
1 5 10
<210> 116
<211> 5
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 116
Gly Ser Gly Trp Val
1 5
<210> 117
<211> 5
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 117
Gly Ser Gly Trp Tyr
1 5
<210> 118
<211> 10
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 118
Leu Ser Ser Glu Ser Asp Asp Ala Arg Val
1 5 10
<210> 119
<211> 6
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 119
Lys Leu Ser Asn Gln Tyr
1 5
<210> 120
<211> 6
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 120
Lys Leu Ser Glu Arg Tyr
1 5
<210> 121
<211> 6
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 121
Lys Leu Ser Lys Glu Tyr
1 5
<210> 122
<211> 6
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 122
Ala Leu Pro Lys Lys Tyr
1 5
<210> 123
<211> 6
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 123
Lys Leu Ser Thr Gln Tyr
1 5
<210> 124
<211> 6
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 124
Lys Leu Ser Asp Gln Tyr
1 5
<210> 125
<211> 12
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 125
Ser Glu Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 126
<211> 12
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 126
Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Lys Thr Tyr
1 5 10
<210> 127
<211> 12
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 127
Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Lys Thr Tyr
1 5 10
<210> 128
<211> 12
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 128
Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Tyr Thr Tyr
1 5 10
<210> 129
<211> 12
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 129
Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asp Gly Tyr Thr Tyr
1 5 10
<210> 130
<211> 12
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 130
Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asp Gly Tyr Thr Phe
1 5 10
<210> 131
<211> 12
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 131
Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 132
<211> 12
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 132
Ser Gln Ser Leu Leu His Gly Asp Gly Lys Thr Tyr
1 5 10
<210> 133
<211> 6
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 133
Asn Ile Gly Gly Lys Ala
1 5
<210> 134
<211> 11
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 134
Leu Ser Arg Gln Ser Asp Asp Ala Ala Ser Val
1 5 10
<210> 135
<211> 11
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 135
Leu Ser Ser Glu Ser Asp Asp Ala Ala Arg Val
1 5 10
<210> 136
<211> 11
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 136
Leu Ser Arg Glu Ser Asn Asp Ala Ala Trp Val
1 5 10
<210> 137
<211> 11
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 137
Leu Ser Ala Asp Ser Ser Gly Thr Tyr Arg Val
1 5 10
<210> 138
<211> 11
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 138
Leu Ser Arg Gln Ser Asp Thr Ala Ala Ser Leu
1 5 10
<210> 139
<211> 11
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 139
Leu Ser Arg Gln Gly Asp Thr Ala Ala Ser Tyr
1 5 10
<210> 140
<211> 10
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 140
Leu Ser Gly Glu Ser Asp Asp Ala Trp Val
1 5 10
<210> 141
<211> 9
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 141
Leu Gln Ala Thr His Asp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 142
<211> 9
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 142
Val Gln Thr Thr His Asp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 143
<211> 9
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 143
Leu Gln Ala Thr His Asn Pro Val Ser
1 5
<210> 144
<211> 9
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 144
Leu Gln Ala Thr His Asp Pro Ile Thr
1 5
<210> 145
<211> 9
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 145
Val Gln Thr Ser His Val Pro Leu Thr
1 5
<210> 146
<211> 9
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 146
Val Gln Thr Thr His Val Pro Leu Thr
1 5
<210> 147
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 147
Gln Thr Thr Asn Asp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 148
<211> 9
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 148
Gln Val Tyr Asp Ser Ser Ser Phe Val
1 5
<210> 149
<211> 8
<212> PRT
<213> 豚鼠（ Guinea pig）
<400> 149
Trp Gln Gly Thr Asp Phe Pro Arg
1 5
<210> 150
<211> 12
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 150
Leu Leu Pro Ala Ala Asp Leu Asp Asp Phe Ser Lys
1 5 10
<210> 151
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 151
Lys Lys Ala Asp Glu Thr Gln Ala Leu
1 5
<210> 152
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 152
Ser Ala Ala Glu Ala Ser Lys Lys
1 5

Claims (25)

1.与序列号1或2所示的氨基酸序列特异性结合的抗体或其片段。
2.一种抗体或其片段，其包含：
由下述式(A-1)或(A-2)所示的氨基酸序列构成的重链CDR1，
GFXA31XA41XA51XA61XA71XA81 (A-1)
式中，
XA31为T或S，
XA41为F、L或I，
XA51为D、S、N或T，
XA61为D、N、S、I或T，
XA71为Y、F或N，
XA81为G、W、Y、S或T，
GFXA33XA43XA53XA63XA73XA83XA93XA103 (A-2)
式中，
XA33为T或S，
XA43为F、L或I，
XA53为D、S、N或T，
XA63为D、N、S或T，
XA73为N或S，
XA83为G或Y，
XA93为Y、F或N，
XA103为T、G、W或Y；
由下述式(B-1)或(B-2)所示的氨基酸序列构成的重链CDR2，
IXB21XB31XB41XB51XB61XB71XB81 (B-1)
式中，
XB21为S、N、D、W或H，
XB31为Y、G、P或S，
XB41为S、D或G，
XB51为G、S、T或A，
XB61为G、D、T、N或R，
XB71为R、K、T、S、N、G、Y或D，
XB81为T、I或M，
IXB23XB33XB43XB53XB63XB73 (B-2)
式中，
XB23为S、N、D、W或H，
XB33为Y、G、P或S，
XB43为S、D或G，
XB53为G、S、T或A，
XB63为R、K、T、S、N、G、Y或D，
XB73为T、I或M；
由下述式(C-1)～(C-8)中的任一者所示的氨基酸序列构成的重链CDR3，
XC11XC21XC31XC41XC51XC61XC71XC81XC91XC101XC111XC121XC131XC141XC151 (C-1)
式中，
XC11为A或S，
XC21为R、T或K，
XC31为D、N、S或Y，
XC41为G、S或Y，
XC51为G、I或D，
XC61为S或I，
XC71为Y、V或A，
XC81为Y、H、S、T、K或E，
XC91为S、I或D，
XC101为P或Y，
XC111为I、Y、G、P、T、A或V，
XC121为N、S、Y、P、G或F，
XC131为F、C、M或L，
XC141为Q或D，
XC151为F、Y、V或S，
XC13XC23XC33XC43XC53XC63XC73XC83(C-2)
式中，
XC13为A或S，
XC23为R、T或K，
XC33为D、N、S或Y，
XC43为I、Y、G、P、T、A或V，
XC53为N、S、Y、P、G或F，
XC63为F、C、M或L，
XC73为Q或D，
XC83为F、Y、V或S，
XC15XC25XC35XC45XC55XC65XC75XC85XC95TIFTFXC155XC165XC175XC185XC195(C-3)
式中，
XC15为A或S，
XC25为R、T或K，
XC35为G、S或Y，
XC45为G、I或D，
XC55为S或I，
XC65为Y、V或A，
XC75为Y、H、S、T、K或E，
XC85为S、I或D，
XC95为P或Y，
XC155为I、Y、G、P、T、A或V，
XC165为N、S、Y、P、G或F，
XC175为F、C、M或L，
XC185为Q或D，
XC195为F、Y、V或S，
ARLWSGYALDI(C-4)
XC16XC26XC36XC46XC56XC66XC76XC86XC96XC106XC116XC126XC136(C-5)式中，
XC16为A或S，
XC26为R、T或K，
XC36为D、N、S或Y，
XC46为G、S或Y，
XC56为G、I或D，
XC66为Y、H、S、T、K或E，
XC76为S、I或D，
XC86为P或Y，
XC96为I、Y、G、P、T、A或V，
XC106为N、S、Y、P、G或F，
XC116为F、C、M或L，
XC126为Q或D，
XC136为F、Y、V或S，
VXC27PLLVXC77HGXC107XC117XC127XC137XC147(C-6)
式中，
XC27为S或K，
XC77为V、Y或L，
XC107为I、Y、G、P、T、A或V，
XC117为N、S、Y、P、G或F，
XC127为F、C、M或L，
XC137为Q或D，
XC147为F、Y、V或S，
VSPSXC58XC68XC78XC88XC98XC108(C-7)
式中，
XC58为G或A，
XC68为I、Y、G、P、T、A或V，
XC78为N、S、Y、P、G或F，
XC88为F、C、M或L，
XC98为Q或D，
XC108为F、Y、V或S，
SPSXC49XC59XC69XC79XC89XC99(C-8)
式中，
XC49为G或A，
XC59为I、Y、G、P、T、A或V，
XC69为N、S、Y、P、G或F，
XC79为F、C、M或L，
XC89为Q或D，
XC99为F、Y、V或S；
由下述式(D-1)～(D-3)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1，SXD21XD31XD41XD51XD61XD71(D-1)
式中，
XD21为E、D、Q或G，
XD31为H、Y、G或S，
XD41为R、S、I、K或L，
XD51为S、H、N或F，
XD61为Y或K，
XD71为Y、S、W或N，
SXD23XD33XD43XD53XD63XD73GKNKDL(D-2)
式中，
XD23为E、D、Q或G，
XD33为H、Y、G或S，
XD43为R、S、I、K或L，
XD53为S、H、N或F，
XD63为Y或K，
XD73为Y、S、W或N，
NIGGKT(D-3)；
由下述式(E-1)～(E-3)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2，XE11XE21SXE41GSXE71(E-1)
式中，
XE11为L、V或I，
XE21为K、N或E，
XE41为D、Y或K，
XE71为H或L，
VGTSDIVG(E-2)
XE12XE22XE32(E-3)
式中，
XE12为K、S或W，
XE22为A或H，
XE32为N或S；和
由下述式(F-1)～(F-7)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3，GXF21XF31XF41XF 51XF61XF71XF81XF91XF101(F-1)
式中，
XF21为V或A，
XF31为S、D、N、G或K，
XF41为Y、F、V、L或H，
XF51为S、K或N，
XF61为G或N，
XF71为G、A、E或K，
XF81为H、S、Y或V，
XF91为N、G或S，
XF101为I、V、L或Y，
GXF23XF33XF43XF53XF63XF73XF83XF93YXF113(F-2)式中，
XF23为V或A，
XF33为S、D、N或G，
XF43为Y、F、V、L或H，
XF53为S、K或N，
XF63为G或N，
XF73为G、A、E或K，
XF83为H、S或Y，
XF93为N、G或S，
XF113为I、V、L或Y，
GXF24XF34XF44XF54IXF74XF84XF94YXF114YXF134(F-3)式中，
XF24为V或A，
XF34为S、D、N或G，
XF44为Y、F、V、L或H，
XF54为S、K或N，
XF74为G或N，
XF84为G、A、E或K，
XF94为H、S或Y，
XF114为N、G或S，
XF134为I、V、L或Y，
GXF25XF35XF45XF55XF65XF75XF85XF95(F-4)
式中，
XF25为V或A，
XF35为S、D、N、G或K，
XF45为Y、F、V、L或H，
XF5为S、K或N，
XF65为G或N，
XF75为G、A、E或K，
XF85为H、S、Y或V，
XF105为I、V、L或Y，
QYDSTPPLT(F-5)
QVWDSYTYV(F-6)
QFINGPLT(F-7)。
3.根据权利要求2所述的抗体或其片段，其包含：
由式(A-1)所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、
由式(B-1)或(B-2)所示的氨基酸序列构成的重链CDR2、
由式(C-1)、(C-2)、(C-4)和(C-6)～(C-8)中的任一者所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、
由式(D-1)所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、
由式(E-1)～(E-3)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2、和由式(F-1)～(F-5)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3。
4.一种抗体或其片段，其包含：
由下述式(A-1-1)所示的氨基酸序列构成的重链CDR1，
GFXA32XA42XA52XA62XA72XA82(A-1-1)
式中，
XA32为T或S，
XA42为F或L，
XA52为D、S、N或T，
XA62为D、S或N，
XA72为Y或F，
XA82为G、W、S或Y；
由下述式(B-1-1)和(B-2-1)中的任一者所示的氨基酸序列构成的重链CDR2，
IXB22XB32XB42XB52XB62XB72XB82(B-1-1)
式中，
XB22为S、N、D或H，
XB32为Y、G或P，
XB42为S或D，
XB52为G或S，
XB62为G、D、T或N，
XB72为R、K、T、S、G或Y，
XB82为T或I，
IWXB34XB44XB54XB64XB74(B-2-1)
式中，
XB34为Y或S，
XB44为D或G，
XB54为G或A，
XB64为R或D，
XB74为T或I；
由下述式(C-1-1)、(C-2-1)、(C-6-1)、(C-7-1)和(C-8-1)中的任一者所示的氨基酸序列构成的重链CDR3，
XC12RDGGSYXC82SPIXC122XC132QXC152(C-1-1)
式中，
XC12为A或S，
XC82为Y、H或S，
XC122为N或S，
XC132为F或C，
XC152为F或Y，
ATXC34XC44XC54XC64XC74XC84(C-2-1)
式中，
XC34为N或S，
XC44为Y或G，
XC54为N或P，
XC64为F或M，
XC74为Q或D，
XC84为Y或V，
VSPLLVVHGPFFQY(C-6-1)
VSPSGAGLDV(C-7-1)
SPSAVGFDV(C-8-1)；
由下述式(D-1-1)～(D-1-7)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1，
SEYKHYN(D-1-1)
SEHRSYY(D-1-2)
SDYSHYS(D-1-3)
SQGINKW(D-1-4)
SGHSSYY(D-1-5)
SEHSSYY(D-1-6)
SDHSSYY(D-1-7)；
由下述式(E-1-1)、(E-2)和(E-3-1)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2，
XE12XE22SDGSXE72(E-1-1)
式中，
XE12为L、V或I，
XE22为K或E，
XE72为H或L，
VGTSDIVG(E-2)
KAN(E-3-1)；和
由下述式(F-1-1)、(F-2-1)、(F-3-1)、(F-4-1)和(F-5)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3，
GVSXF42SGGHXF92XF102(F-1-1)
式中，
XF42为Y或F，
XF92为N或G，
XF102为I或V，
GADYSGASSYV(F-2-1)
GANHNIGESYGYV(F-3-1)
GVXF36YXF56XF66XF76XF86XF96(F-4-1)
式中，
XF36为S、G或K，
XF56为S或N，
XF66为G或N，
XF76为G或K，
XF86为Y或V，
XF96为V或Y，
QYDSTPPLT(F-5)。
5.根据权利要求2所述的抗体或其片段，其包含：
由序列号3～11中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的重链CDR1、
由序列号12～25中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的重链CDR2、
由序列号26～41中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的重链CDR3、
由序列号42～50中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的轻链CDR1、
由序列号51～58中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列、或者KAN、SHN或WAS中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2、和
由序列号59～73中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的轻链CDR3。
6.根据权利要求5所述的抗体或其片段，其中，所述变异为保守性置换。
7.根据权利要求2～6中任一项所述的抗体或其片段，其与序列号1所示的氨基酸序列特异性结合。
8.一种抗体或其片段，其包含：
由下述式(G-1)或(G-2)所示的氨基酸序列构成的重链CDR1，
GXG21XG31XG41XG51XG61XG71XG81(G-1)
式中，
XG21为F或L，
XG31为I、T、S或F，
XG41为F或L，
XG51为S、N、T、R或D，
XG61为N、T或D，
XG71为Y、S或H，
XG81为F、T、Y、W或G，
KLSERY(G-2)；
由下述式(H-1)～(H-3)中的任一者所示的氨基酸序列构成的重链CDR2，
IXH21XH31XH41XH51XH61XH71XH81(H-1)
式中，
XH21为S、G、K或N，
XH31为G、N、S、Y、T或P，
XH41为D、S、T或A，
XH51为S、G或D，
XH61为T、S、A、G或R，
XH71为Y、K、N、T、I或S，
XH81为I、T、P或V，
MWSDGDT(H-2)
NDS(H-3)；
由下述式(I-1)～(I-11)中的任一者所示的氨基酸序列构成的重链CDR3，
XI11XI21XI31XI41XI51XI61XI71(I-1)
式中，
XI11为S或T，
XI21为I或T，
XI31为N、L、D或T，
XI41为W或G，
XI51为G、V、F或N，
XI61为D、G、F或N，
XI71为V或L，
ARTSRIVADLVTMGYALDF(I-2)
ARDVVKTGTTGLPFDL(I-3)
AREGVITVGTWGDV(I-4)
ATSEY(I-5)
TTATDV(I-6)
TPATDV(I-7)
SPMTIHGLDT(I-8)
GSGWV(I-9)
GSGWY(I-10)
LSSESDDARV(I-11)；
由下述式(J-1)～(J-3)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1，XJ11LXJ31XJ41XJ51Y(J-1)
式中，
XJ11为K或A，
XJ31为S或P，
XJ41为N、E、K、T或D，
XJ51为Q、R、K或E，
SXJ23SLXJ53XJ63XJ73DGXJ103TXJ123(J-2)
式中，
XJ23为E或Q，
XJ53为L或V，
XJ63为H、D或Y，
XJ73为S或G，
XJ103为N、K或Y，
XJ123为Y或F，
NIGGKA(J-3)；
由下述式(K-1)所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2，XK11XK21XK31(K-1)
式中，
XK11为K、N、L或E，
XK21为D、G、V或I，
XK31为S、N或D；和
由下述式(L-1)～(L-6)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3，LSXL31XL41XL51XL61XL71XL81XL91XL101XL111(L-1)
式中，
XL31为R、S、A或G，
XL41为Q、E或D，
XL51为S或G，
XL61为D、S或N，
XL71为D、G或T，
XL81为A、T或Y，
XL91为A、T或Y，
XL101为S、R或W，
XL111为V、L或Y，
LSXL33XL43XL53XL63XL73XL83XL93XL103(L-2)
式中，
XL33为R、S、A或G，
XL43为Q、E或D，
XL53为S或G，
XL63为D、S或N，
XL73为D、G或T，
XL83为A、T或Y，
XL93为S、R或W，
XL103为V、L或Y，
XL14QXL34XL44XL54XL64PXL84XL94(L-3)
式中，
XL14为L或V，
XL34为A或T，
XL44为T或S，
XL54为H或N，
XL64为D、N或V，
XL84为Y、V、I或L，
XL94为T或S，
QXL27XL37XL47XL57PXL77XL87(L-4)
式中，
XL27为A或T，
XL37为T或S，
XL47为H或N，
XL57为D、N或V，
XL77为Y、V、I或L，
XL87为T或S，
QVYDSSSFV(L-5)
WQGTDFPR(L-6)。
9.根据权利要求8所述的抗体或其片段，其包含：
由式(G-1)所示的氨基酸序列构成的重链CDR1、
由式(H-1)或(H-2)所示的氨基酸序列构成的重链CDR2、
由式(I-1)～(I-3)和(I-5)～(I-9)中的任一者所示的氨基酸序列构成的重链CDR3、
由式(J-1)～(J-3)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1、
由式(K-1)所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2、和
由式(L-1)～(L-3)、(L-5)和(L-6)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3。
10.一种抗体或其片段，其包含：
由下述式(G-1-1)所示的氨基酸序列构成的重链CDR1，
GXG22XG32XG42XG52XG62XG72XG82(G-1-1)
式中，
XG22为F或L，
XG32为I、T或S，
XG42为F或L，
XG52为S、N、T或R，
XG62为N或T，
XG72为Y、S或H，
XG82为F、T、Y或W；
由下述式(H-1-1)或(H-2)所示的氨基酸序列构成的重链CDR2，
IXH22XH32XH42XH52XH62XH72XH82(H-1-1)
式中，
XH22为S、G、K或N，
XH32为G、N、S、T或P，
XH42为D、S或A，
XH52为S、G或D，
XH62为T、S、G或R，
XH72为Y、K、N、T、I或S，
XH82为I、T、P或V，
MWSDGDT(H-2)；
由下述式(I-1-1)、(I-2)、(I-3)和(I-5)～(I-9)中的任一者所示的氨基酸序列构成的重链CDR3，
XI12XI22XI32XI42XI52XI62XI72(I-1-1)
式中，
XI12为S或T，
XI22为I或T，
XI32为N、L或T，
XI42为W或G，
XI52为G、V、F或N，
XI62为D、F或G，
XI72为V或L，
ARTSRIVADLVTMGYALDF(I-2)
ARDVVKTGTTGLPFDL(I-3)
ATSEY(I-5)
TTATDV(I-6)
TPATDV(I-7)
SPMTIHGLDT(I-8)
GSGWV(I-9)；
由下述式(J-1-1)、(J-2-1)和(J-3)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR1，
KLSXJ42XJ52Y(J-1-1)
式中，
XJ42为N、E或K，
XJ52为Q、R或E，
SXJ24SLXJ54XJ64SDGXJ104TXJ124(J-2-1)
式中，
XJ24为E或Q，
XJ54为L或V，
XJ64为H、D或Y，
XJ104为N、K或Y，
XJ124为Y或F，
NIGGKA(J-3)；
由下述式(K-1-1)～(K-1-7)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2，
NDD(K-1-1)
KDS(K-1-2)
NGN(K-1-3)
NDS(K-1-4)
KVS(K-1-5)
LIS(K-1-6)
EVS(K-1-7)；和
由下述式(L-1-1)、(L-2-1)、(L-3-1)、(L-5)和(L-6)中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR3，
LSXL32XL42SXL62DAAXL102V(L-1-1)
式中，
XL32为R或S，
XL42为Q或E，
XL62为D或N，
XL102为S、R或W，
LSGESDDAWV(L-2-1)
XL15QXL35THDPYT(L-3-1)
式中，
XL15为L或V，
XL35为A或T，
QVYDSSSFV(L-5)
WQGTDFPR(L-6)。
11.根据权利要求8所述的抗体或其片段，其包含：
由序列号74～84中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的重链CDR1、
由序列号85～101中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列、或者NDS所示的氨基酸序列构成的重链CDR2、
由序列号102～118中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的重链CDR3、
由序列号119～133中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的轻链CDR1、
由NDD、KDS、NGN、NDS、KVS、LIS或EVS中的任一者所示的氨基酸序列构成的轻链CDR2、和
由序列号134～149中任一者所示的氨基酸序列或这些氨基酸序列中1～3个氨基酸发生了变异的氨基酸序列构成的轻链CDR3。
12.根据权利要求11所述的抗体或其片段，其中，所述变异为保守性置换。
13.根据权利要求8～12中任一项所述的抗体或其片段，其与序列号2所示的氨基酸序列特异性结合。
14.一种抗体或其片段，其为针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS CoV2)的核衣壳蛋白的抗体或其片段，其表位存在于所述核衣壳蛋白上的由序列号150～152中任一者所示的氨基酸序列构成的区域。
15.根据权利要求1～14中任一项所述的抗体或其片段，其中，所述抗体为单克隆抗体。
16.一种多核苷酸，其包含权利要求1～15中任一项所述的抗体或其片段的编码序列。
17.一种细胞，其包含权利要求16所述的多核苷酸。
18.一种试剂或药物，其包含权利要求1～15中任一项所述的抗体或其片段、权利要求16所述的多核苷酸或权利要求17所述的细胞。
19.一种用于检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARSCoV2)的核衣壳蛋白的试剂盒，其包含权利要求1～15中任一项所述的抗体或其片段。
20.一种用于检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS CoV2)的核衣壳蛋白的试剂盒，其包含：
分别识别序列号1所示的氨基酸序列中的不同的表位的、与序列号1所示的氨基酸序列特异性结合的2种以上的抗体或其片段、和/或
分别识别序列号2所示的氨基酸序列中的不同的表位的、与序列号2所示的氨基酸序列特异性结合的2种以上的抗体或其片段。
21.根据权利要求20所述的试剂盒，其中，
所述与序列号1所示的氨基酸序列特异性结合的2种以上的抗体或其片段为权利要求2～7中任一项所述的抗体或其片段、或者由相对于该抗体或其片段的氨基酸序列具有90％以上的序列同一性的氨基酸序列构成的抗体或其片段，
所述与序列号2所示的氨基酸序列特异性结合的2种以上的抗体或其片段为权利要求8～14中任一项所述的抗体或其片段、或者由相对于该抗体或其片段的氨基酸序列具有90％以上的序列同一性的氨基酸序列构成的抗体或其片段。
22.根据权利要求19～21中任一项所述的试剂盒，其通过免疫层析法、酶联免疫吸附测定法、化学发光免疫测定法、化学发光酶联免疫吸附测定法、放射免疫测定法、电化学发光免疫测定法、免疫比浊法或胶乳凝集法来检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS CoV2)的核衣壳蛋白。
23.根据权利要求19～22中任一项所述的试剂盒，其中，所述与序列号1或2所示的氨基酸序列特异性结合的2种以上的抗体或其片段的一部分进行了固相化，剩余部分进行了标记化。
24.一种检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS CoV2)的核衣壳蛋白的方法，其包括下述工序(1)～(3)：
(1)将与序列号1或2所示的氨基酸序列特异性结合的第1抗体或其片段固定化于固相的工序；
(2)对所述固相应用与SARS CoV2的核衣壳蛋白和序列号1或2所示的氨基酸序列特异性结合的第2抗体或其片段的工序，在此，第2抗体或其片段识别第1抗体或其片段所特异性结合的氨基酸序列中的不同表位、并且用标记物质进行了标记化；和
(3)检测来自借助所述核衣壳蛋白结合于所述固相的第2抗体或其片段的标记物质的标记的工序。
25.根据权利要求24所述的方法，其中，第1抗体或其片段和第2抗体或其片段选自由下述抗体或其片段构成的组：权利要求2～15中任一项所述的抗体或其片段、和由相对于该抗体或其片段的氨基酸序列具有90％以上的序列同一性的氨基酸序列构成的抗体或其片段。
CN202180074073.3A 2020-10-30 2021-10-28 与严重急性呼吸综合征冠状病毒2的核衣壳蛋白特异性结合的抗体或其片段、及其用途 Pending CN116437931A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2020183273 2020-10-30
JP2020-183273 2020-10-30
PCT/JP2021/039754 WO2022092181A1 (ja) 2020-10-30 2021-10-28 重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２のヌクレオカプシドタンパク質に特異的に結合する抗体又はその断片、及びその用途

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116437931A true CN116437931A (zh) 2023-07-14

Family

ID=81381499

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202180074073.3A Pending CN116437931A (zh) 2020-10-30 2021-10-28 与严重急性呼吸综合征冠状病毒2的核衣壳蛋白特异性结合的抗体或其片段、及其用途

Country Status (4)

Country Link
EP (1) EP4239068A1 (zh)
JP (1) JPWO2022092181A1 (zh)
CN (1) CN116437931A (zh)
WO (1) WO2022092181A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2023128698A (ja) * 2022-03-04 2023-09-14 公立大学法人横浜市立大学 変異株を含む、体液中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原に対する抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗体、該抗体を用いてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する方法、および該抗体を含むキット

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2010290426B2 (en) 2009-09-04 2014-12-11 National University Corporation University Of Toyama Method for specifically producing a joined DNA fragment comprising a sequence derived from a target gene
KR20130079362A (ko) 2010-03-25 2013-07-10 내셔날 유니버시티 코포레이션 유니버시티 오브 토야마 형질 세포 동정 및 단리용 형광 프로브 및 이 프로브를 이용한 형질 세포의 동정 또는 단리방법
CN111458520B (zh) * 2020-04-10 2023-09-15 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 新型冠状病毒AlphaLISA抗原快速检测试剂盒
CN111733141B (zh) * 2020-06-19 2022-02-18 清华大学深圳国际研究生院 一种可分泌抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞、单克隆抗体及应用

Also Published As

Publication number Publication date
EP4239068A1 (en) 2023-09-06
WO2022092181A1 (ja) 2022-05-05
JPWO2022092181A1 (zh) 2022-05-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111303279B (zh) 一种针对新型冠状病毒的单域抗体及其应用
JP6476170B2 (ja) 抗ｍｕｃ１抗体又はその抗原結合性断片及びその用途
JP2010536886A5 (zh)
US9453070B2 (en) Methods for detecting Th1 cells
Tanaka et al. Six-transmembrane epithelial antigen of prostate4 (STEAP4) is a tumor necrosis factor alpha-induced protein that regulates IL-6, IL-8, and cell proliferation in synovium from patients with rheumatoid arthritis
WO2000007023A1 (fr) Procede pour la determination de l&#39;hepatite a virus de type c
CN116437931A (zh) 与严重急性呼吸综合征冠状病毒2的核衣壳蛋白特异性结合的抗体或其片段、及其用途
EP2949675A1 (en) Humanized anti-hmgb1 antibody or antigen-binding fragment thereof
Szykowska et al. Selection and structural characterization of anti-TREM2 scFvs that reduce levels of shed ectodomain
US10429394B2 (en) Monoclonal antibodies against KIR2DS1
JP2023527771A (ja) 抗ヒトｌａｇ－３抗体および免疫組織化学（ｉｈｃ）でのその使用
KR101969696B1 (ko) 메르스 코로나 바이러스 스파이크 s2 단백질에 특이적으로 결합하는 단클론 항체
KR101374758B1 (ko) 항-사이토케라틴 8/18 복합체 자가면역항체를 포함하는 암 진단 마커 및 이의 항원을 포함하는 암 진단용 조성물
WO2012165926A2 (ko) 항-ａｔｉｃ 자가면역항체를 포함하는 간암 진단 마커 및 이의 항원을 포함하는 간암 진단용 조성물
EP3068431A2 (en) Methods and compositions for the treatment of hcmv
CN110655580B (zh) 一种杂交瘤细胞株及其用途
CN114316040A (zh) 一种抗新型冠状病毒的全人源单克隆抗体及其用途
CN107860925B (zh) 用于检测血清中HuA21抗体的ELISA检测试剂盒
KR102007161B1 (ko) 메르스 코로나 바이러스 스파이크 s1 단백질에 특이적으로 결합하는 단클론 항체
KR100456790B1 (ko) 미토콘드리아 아데닐레이트 인산화 효소 이소자임3에 특이적인 단클론 항체
WO2013007667A1 (en) An antibody specifically binding to neuropilin-1
WO2017082254A1 (ja) 抗リン酸化Ｂａｃｈ２抗体及び抗腫瘍免疫活性化剤のスクリーニング方法
EP4206221A1 (en) Viral infection determination method
CN114002440B (zh) 一种用于人磷酸化血管扩张刺激蛋白的酶联免疫检测试剂盒及其检测方法
CA3215594A1 (en) Mageb2 binding constructs

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination