CN116406595A - 一种皱木耳菌株zjzme001及其栽培方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种皱木耳菌株ZJZME001（中菌皱木耳1号）及其栽培方法，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日：2022年12月14日；保藏编号为CGMCC NO.40367。其栽培方法首先是将活化的皱木耳菌株ZJZME001接种到固体原种培养基中，24‑27℃培养28‑32天得到固体原种；再将固体原种接种到栽培袋中，接种量为8‑10g/袋，封好口，置于培养室24‑27℃下恒温避光培养，培养42‑45天后，菌丝长满菌袋，进行出菇管理。本发明提供的皱木耳菌株ZJZME001具有发菌快，污染少，菌丝壮、栽培周期短、商品性好、产量高，能实现规模化栽培等优点，具有优异的商品特性和产业化利用价值。
Description
技术领域
本发明属于食用菌栽培技术领域，具体涉及一种皱木耳菌株ZJZME001及其栽培方法。
背景技术
皱木耳（Auricularia delicata）是一种珍稀食药用菌，隶属于担子菌门、蘑菇纲、木耳目、木耳科、木耳属，中文别名：脆木耳、多皱木耳、粗木耳、羊肚耳、砂耳、素肚耳。主要分布于亚洲的中国、印度、东南亚及非洲的刚果、科特迪瓦等地。
中国是世界上最早栽培木耳的国家，在我国人工栽培已有1000多年的历史。目前，随着食用菌产业的蓬勃发展，木耳属真菌在我国已广泛栽培，创造了极大的经济价值和社会价值。在我国广泛栽培的木耳包括黑木耳A. heimer 和毛木耳 A. cornea，2020年，我国黑木耳总产量达到706.4万吨，毛木耳总产量达到189.2万吨。
皱木耳（Auricularia delicata）是一种珍稀食药用菌，隶属于担子菌门、蘑菇纲、木耳目、木耳科、木耳属，中文别名：脆木耳、多皱木耳、粗木耳、羊肚耳、砂耳、素肚耳。主要分布于亚洲的中国、印度、东南亚及非洲的刚果、科特迪瓦等地。
皱木耳子实体含有麦角甾醇、二氢麦角甾醇、卵磷脂、脑磷脂和鞘磷脂，还含有维生素A、维生素D2及维生素K等。其子实体全株药用，具有补气血、润肺、止血、强壮、通便之功效，并能治疗痔疮。但国内关于皱木耳的栽培价值研究较少，皱木耳的品种资源也较匮乏。因此针对国内的栽培环境选育优良的皱木耳新菌株及新品种，对利用其食用和药用价值，优化其种质资源的优化以及加强我国的种质资源自主建设是极其重要的。
发明内容
本发明的第一目的是提供一种皱木耳菌株ZJZME001，命名为“中菌皱木耳1号”，本发明的第二目的是提供皱木耳菌株ZJZME001的栽培方法。
本发明的第一目的是这样实现的，一种皱木耳菌株ZJZME001，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日为2022年12月14日，保藏编号为CGMCCNO.40367。
本发明的第二目的是这样实现的，皱木耳菌株ZJZME001的栽培方法按以下步骤实现：
A、固体原种制备
1)母种制备：以野生皱木耳子实体为材料，在加富的PDA培养基上于温度24-27℃培养10-12天得到母种（图2）；
2)原种制备：将母种接种到原种培养料上于温度24-27℃培养28-32天得到固体原种（图3）；
B、栽培种制备
将装有栽培种培养基的栽培袋（18×33×0.005cm）于121℃下灭菌2.5h，待冷却至25℃以下，将步骤A制备的固体原种进行接种，接种量为8-10g/袋， 封好口，置于培养室24-27℃下恒温避光培养，培养42-45天后，菌丝长满菌袋且成熟变淡黄色后，进行出菇管理。
C、出菇管理
待菌丝满袋后8-10天进行打孔，打孔前打孔机和菌袋表面用75%酒精进行消毒。打孔位置距地面3-4cm，避免流耳烂耳。每个菌袋打孔200-240个，将完成打孔的菌袋按编号码好，进行催蕾管理。催蕾最适的温度为20-26℃，避免阳光直射，散射光有助于原基的形成。加强通风、供氧，并保证袋温控制在 26℃以下，保持湿度在 85%-95%之间，采用喷雾浇水，每5天将菌袋扭转一次。当原基分化成1 cm大小耳片时，停止浇水48 h，待耳片完全干后，再次浇水。耳片展开阶段，当温度低于19℃时停止浇水，当温度处于19-25℃之间时，每次浇水3min，每四个小时浇一次，以耳片全部湿透为标准。当耳片达 7-9成熟时采大留小，采收前停水 1天。
本发明的有益效果是：
1、采用本发明皱木耳菌株ZJZME001制作菌种，菌丝萌发快（1-2天菌丝即可萌发），污染率不到5%，菌丝壮。
2、本发明皱木耳菌株ZJZME001子实体耳片大，单菇重，一致性好。
3、本发明皱木耳菌株ZJZME001栽培周期短（整个培养周期约为85天）；产量高（以干品计算，每公斤培养料能产生105 g干皱木耳），能实现规模化栽培，具有优异的商品特性和产业化利用价值。
附图说明
图1为皱木耳野生子实体示意图；
图2为皱木耳菌株ZJZME001的母种图；
图3为皱木耳菌株ZJZME001的原种图；
图4中A、B为皱木耳菌株ZJZME001的出菇图；
图5为皱木耳菌株ZJZME001的子实体图；
图6为皱木耳菌株ZJZME001菌丝及子实体的系统发育树。
具体实施方式
下面结合附图与实施例对本发明作进一步的详细说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或改进，均落入本发明的保护范围。
本发明提供了一种皱木耳菌株ZJZME001，于2022年12月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.40367。
本发明还提供了所述皱木耳菌株ZJZME001的栽培方法，具体步骤如下：
A、固体原种制备
1)母种制备：以野生皱木耳子实体为材料，在加富的PDA培养基上于温度24-27℃培养10-12天得到母种（图2）；
2)原种制备：将母种接种到原种培养料上于温度24-27℃培养28-32天得到固体原种（图3）；
B、栽培种制备
将装有栽培种培养基的栽培袋（18×33×0.005cm）于121℃下灭菌2.5h，待冷却至25℃以下，将步骤A制备的固体原种进行接种，接种量为8-10g/袋， 封好口，置于培养室24-27℃下恒温避光培养，培养42-45天后，菌丝长满菌袋且成熟变淡黄色后，进行出菇管理。
C、出菇管理
待菌丝满袋后8-10天进行打孔，打孔前打孔机和菌袋表面用75%酒精进行消毒。打孔位置距地面3-4cm，避免流耳烂耳。每个菌袋打孔200-240个，将完成打孔的菌袋按编号码好，进行催蕾管理。催蕾最适的温度为20-26℃，避免阳光直射，散射光有助于原基的形成。加强通风、供氧，并保证袋温控制在 26℃以下，保持湿度在 85%-95%之间，采用喷雾浇水，每5天将菌袋扭转一次。当原基分化成1 cm大小耳片时，停止浇水48 h，待耳片完全干后，再次浇水。耳片展开阶段，当温度低于19℃时停止浇水，当温度处于19-25℃之间时，每次浇水3min，每四个小时浇一次，以耳片全部湿透为标准。当耳片达 7-9成熟时采大留小，采收前停水 1天。
步骤A中，所述原种培养基由以下重量份的原料组成：粗木屑65-70份，细木屑15-20份，麦麸18-20份，石灰1-2份，蔗糖1份；所述原种培养基的含水量为55-60%。
步骤B中，所述栽培种培养基由以下重量份的原料组成：粗木屑65-70份，细木屑15-20份，麦麸18-20份，石灰1-2份，蔗糖1份；所述栽培种培养基的含水量50%-55%，pH自然。
步骤C中，打孔位置距地面3-4cm。
本发明还提供了所述皱木耳菌株ZJZME001在食品或保健品中的应用。以下结合实施例对本发明做进一步说明。
实施例l 皱木耳菌株ZJZME001的获得
将2021年8月2日自临沧市永德县大雪山乡大平掌村（地理坐标：东经：99°32'51"，北纬：23°58'21"，海拔：2288m）采集的野生皱木耳子实体（图1）进行菌种分离并驯化栽培。
将所采集的新鲜皱木耳野生实体清除耳片表面杂质后置于通风干燥处，干燥至耳片含水量为10%。在超菌台内进行组织分离至加富PDA培养基斜面试管，25℃暗培养10天，挑选长势较好的试管，制作原种，25℃下培养，待长满原种瓶，制作菌袋栽培出耳；出耳后选取子实体性状较好的子实体组织分离菌种；通过多次不断的栽培出菇选育，最终获得一株栽培性状稳定的皱木耳菌株ZJZME001，命名为“中菌皱木耳1号”。
实施例2 皱木耳ZJZME001菌株形态及分子鉴定
1、形态学鉴定
皱木耳菌株ZJZME001的形态特征如下（图5）：子实体直径9.50-11.23cm，宽7.62-9.85cm，厚0.2-0.3cm，叠生或群生，盘状或耳状，新鲜时胶质，鲜重23.12-39.45g；菌盖黄棕色至红棕色，干后红棕色至棕黑色浅褐色，表面具细绒毛；子实层表面非光滑或有明显褶皱，具不规则网状棱纹；菌柄长0.4-0.6cm。
2、分子生物学鉴定：
将实施例1得到的ZJZME001菌株转接到马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基上，25℃培养10d后收集菌丝。用AxyPrep基因组DNA小量试剂盒分别提取ZJZME001菌丝及栽培出菇子实体基因组DNA，并以1%的琼脂糖凝胶电泳后经GelRed染色后进行检测；以提取到的总DNA为模板，采用Mix混合试剂（湖南擎科生物技术有限公司），以ITS4（5’—TCCTCCGCTTATTGATATGC—3’）和ITS5（5’—GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG—3’）为引物扩增Internal Transcribed Spacer (ITS)序列。PCR扩增体系为(25 μL)：2×Mix 12.5μl， 10μM引物各0.5 μL，ddH2O 11 μL，DNA模板0.5 μL。反应程序为：95℃预变性5 min，进入35个扩增循环：95℃变性 40 sec，50℃退火40 sec，72℃延伸1 min，然后72℃延伸10 min，4℃保藏；以1%的琼脂糖凝胶电泳后进行检测，送至擎科生物技术完成测序。
所得到的ZJZME001菌丝及栽培出菇子实体测序结果经过双向拼接后获得ZJJQG001菌丝体序列（见SEQ IDNo.1）和ZJZME001子实体序列（见SEQ IDNo.2）。
菌丝序列：
TGCGGAAGGATCATTAAAGATTTTGGGCTTTTAACCCGATCGCTCAGCTGTGCGCCCTCCGGGGCTGCACGCTGAATCAAGACCTCACCCCTGTGCACATTTTCGGTTGCGGCTTCGGTCGCTGCCGCTTTCAAATGCAACTACTCAGTCTCGAATGTCAACAAACTATAAAAAAAGTAACAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCATCTTGCGCTCCTTGGTATTCCATGGAGCATGCCTGTTTGAGTGTCACGTAAACCCTCACCCTTGCGATGTAACAGTCGCCCGCGGTGGACTTGGACTGTGCCGTAACCGGCTCGTCTTGAAATGCATTAGCTGGCGCTTTTAGAGTGCTGGGCGACGGTGTGATAATTATCTGCGCCAATGCCTTAGGCCTCTTCAGCGGTGCTGCTTACAGCCGTCCCTCTGTGGACACGCAATTTTAAAGCTTTGGCCTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAAGCATATC
子实体序列：CGCTCAGCTGTGCGCCCTCCGGGGCTGCACGCTGAATCAAGACCTCACCCCTGTGCACATTTTCGGTTGCGGCTTCGGTCGCTGCCGCTTTCAAATGCAACTACTCAGTCTCGAATGTCAACAAACTATAAAAAAAGTAACAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCGTCGAATCTTTGAACGCATCTTGCGCTCCTTGGTATTCCATGGAGCATGCCTGTTTGAGTGTCACGTAAACCCTCACCCTTGCGATGTAACAGTCGCCCGCGGTGGACTTGGACTGTGCCGTAACCGGCTCGTCTTGAAATGCATTAGCTGGCGCTTTTAGAGTGCTGGGCGACGGTGTGATAATTATCTGCGCCAATGCCTTAGGCCTCTTCAGCGGTGCTGCTTACAGCCGTCCCTCTGTGGACACGCAATTTTAAAGCTTTGGCCTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAAGCT
将两条序列提交GeneBank，应用BLAST（ww.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST）进行同源性搜索，与数据库中各菌株序列进行相似性分析，与数据库中已有的Auricularia delicata的各个菌株相应序列一致性（Identities）都达到97%-100%。从GeneBank数据库下载7个木耳属的物种和双孢蘑菇（Agaricus bisporus）的ITS序列，且使用MEGA7软件构建NJ系统发育树，使用默认参数，Bootstrap检验为1000次。
从系统发育树（图6）中可以看出ZJZME001的菌丝、子实体均与GeneBank数据库中的皱木耳同属物种聚为一枝，且与同属物种分支的支持率为97-100% 综合BLAST比对和系统发育树的结果，鉴定ZJZME001为一种新的皱木耳（Auricularia delicata）菌株。
实施例3 皱木耳ZJZME001栽培
将粗木屑65份，细木屑15份，麦麸18份，石灰1份，蔗糖1份加水混合，得到含水量为58%的原种培养基。将活化的皱木耳菌株ZJZME001接种到固体原种培养基中，25℃培养30天得到固体原种；
再将粗木屑65份，细木屑15份，麦麸18份，石灰1份，蔗糖1份加水混合，得到含水量为55%的栽培种培养基，调节至pH自然；在栽培袋内装入栽培种培养基，封口后于121℃下灭菌2.5h，待冷却至25℃以下，将固体原种进行接种，接种量为8-10g/袋，封好口，置于培养室25℃下恒温避光培养，培养42天后，菌丝长满菌袋后，进行出菇管理。
待菌丝满袋后8天进行打孔，打孔前打孔机和菌袋表面用75%酒精进行消毒。打孔位置距地面3cm，避免流耳烂耳。每个菌袋打孔200个，将完成打孔的菌袋按编号码好，进行催蕾管理。催蕾最适的温度为20-26℃，避免阳光直射，散射光有助于原基的形成。加强通风、供氧，并保证袋温控制在 26℃以下，增大湿度在 80%-90%之间，每5天将菌袋扭转一次。当原基分化成1 cm大小耳片时，停止浇水48 h，待耳片完全干后，再次浇水。耳片展开阶段，当温度低于19℃时停止浇水，当温度处于19-25℃之间时，每次浇水3min，每四个小时浇一次，以耳片全部湿透为标准。当耳片达 7-9成熟时采大留小，采收前停水 1天。本实施例方法以干品计算，每公斤培养料能产生105 g干皱木耳。
实施例4
本实施例基本方法与实施例3基本一致，其中，原种培养基由以下重量份的原料组成：粗木屑70份，细木屑20份，麦麸20份，石灰2份，蔗糖1份；所述原种培养基的含水量为60%。
栽培种培养基由以下重量份的原料组成：粗木屑70份，细木屑20份，麦麸20份，石灰2份，蔗糖1份；所述栽培种培养基的含水量50%，pH自然。
本实施例方法以干品计算，每公斤培养料能产生101 g干皱木耳。
实施例5
本实施例基本方法与实施例3基本一致，其中，原种培养基由以下重量份的原料组成：粗木屑68份，细木屑18份，麦麸19份，石灰2份，蔗糖1份；所述原种培养基的含水量为58%。
栽培种培养基由以下重量份的原料组成：粗木屑68份，细木屑19份，麦麸20份，石灰2份，蔗糖1份；所述栽培种培养基的含水量52%，pH自然。
本实施例方法以干品计算，每公斤培养料能产生98g干皱木耳。
Claims (7)
1.一种皱木耳菌株ZJZME001，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日为2022年12月14日，保藏编号为CGMCC NO.40367。
2.权利要求1所述皱木耳菌株ZJZME001的栽培方法，其特征在于按以下步骤实现：
A、固体原种制备
1)母种制备：以野生皱木耳子实体为材料，在加富PDA培养基上于温度24-27℃培养10-12天得到母种；
2)原种制备：将所述母种接种到原种培养基上于温度24-27℃培养28-32天得到固体原种；
B、栽培种制备
将装有栽培种培养基的栽培袋于121℃下灭菌2.5h，待冷却至25℃以下，将步骤A制备的固体原种进行接种，接种量为8-10g/袋， 封好口，置于培养室24-27℃下恒温避光培养，菌丝长满菌袋后，进行出菇管理；
C、出菇管理
待菌丝满袋后8-10天进行打孔，在20-26℃下进行催蕾管理：采用散光照射，加强通风、供氧，控制袋温为 26℃以下，保持湿度在 85%-95%之间，采用喷雾浇水，每5天将菌袋扭转一次；当原基分化成1cm大小耳片时，停止浇水，待耳片完全干后，再次浇水；耳片展开阶段，当温度低于19℃时停止浇水，当温度处于19-25℃之间时，每次浇水3min，每4小时浇一次，以耳片全部湿透为标准；当耳片达7-9成熟时采大留小，采收前停水 1天。
3.根据权利要求2所述栽培方法，其特征在于，步骤A中，所述原种培养基由以下重量份的原料组成：粗木屑65-70份，细木屑15-20份，麦麸18-20份，石灰1-2份，蔗糖1份，含水量为55-60%。
4.根据权利要求2所述栽培方法，其特征在于，步骤B中，所述栽培种培养基由以下重量份的原料组成：粗木屑65-70份，细木屑15-20份，麦麸18-20份，石灰1-2份，蔗糖1份，含水量为50%-55%，pH自然。
5.根据权利要求2所述栽培方法，其特征在于，步骤B中，栽培袋的规格为18×33×0.005cm。
6.根据权利要求2所述栽培方法，其特征在于，步骤C中，打孔位置距地面3-4cm，每个菌袋打孔200-240个。
7.权利要求1所述皱木耳菌株ZJZME001在食品或保健品中的应用。
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