CN116370488A - 一种防治鱼类细菌性烂鳃病的中草药小分子组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种防治鱼类细菌性烂鳃病的中草药小分子组合物，包括以下组分：积雪草皂苷45‑55wt％、齐墩果酸15‑25wt％、熊果酮酸10‑20wt％、柴胡皂苷A 5‑15wt％、甘草次酸3‑7wt％。本发明将积雪草皂苷、齐墩果酸、熊果酮酸、柴胡皂苷A和甘草次酸配合协同起到高效杀菌、免疫调节、伤口修复等作用，可以实现鱼类细菌性烂鳃病的高效防治，在细菌性烂鳃病的防治中具有重要的推广应用价值。

Description

一种防治鱼类细菌性烂鳃病的中草药小分子组合物

技术领域

本发明涉及中草药技术领域，具体涉及一种防治鱼类细菌性烂鳃病的中草药小分子组合物。

背景技术

柱状黄杆菌(Flavobacterium columnare)是一种常见的革兰氏阴性需氧型水生生物病原菌，广泛分布于世界各地的淡水水域中，其感染宿主范围极其广泛，可感染包括鲈科(Percoidea)、鲤科(Cyprinidae)、鲶科(Siluridae)、鲑科(Salmonidae)等多个科属的淡水鱼类。柱状黄杆菌引发的疾病被称为细菌性烂鳃病，又称为柱形病，主要症状表现为鳃丝、体表与鳍条溃烂并出现黄色坏死组织区域，是我国淡水性鱼类发病频率最高的细菌性疾病之一，该病感染性强，传播性广，感染率、死亡率都极高，给经济性鱼类养殖业造成了巨大的经济损失。

目前，针对细菌性烂鳃病主要采用抗生素、化学药剂治疗与接种疫苗等防治方式，但上述防治细菌性烂鳃病的方式也正在面临日益严峻的挑战。柱状黄杆菌在感染定植阶段形成的生物膜极大程度上保护了菌体免受外界化学刺激的损伤，这使得化学试剂效果往往不如预期或用量极大，且化学药剂使用标准难以规范，容易造成使用效果差、污染周边环境等弊端。此外，近年来，由于临床上抗生素药物的滥用，越来越多的常见致病菌通过染色体突变、水平漂移等方式获得耐药基因从而表现出耐药性。接种疫苗则成本高昂，技术难以掌握。因此，我国柱状黄杆菌的防治现状依旧严峻，并且迫切需要新型抗菌药物的研发与应用。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述不足，本发明的目的是提供一种防治鱼类细菌性烂鳃病的中草药小分子组合物，从而实现对鱼类细菌性烂鳃病的高效防治。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：提供一种防治鱼类细菌性烂鳃病的中草药小分子组合物，包括以下组分：

积雪草皂苷45-55wt％、齐墩果酸15-25wt％、熊果酮酸10-20wt％、柴胡皂苷A 5-15wt％、甘草次酸3-7wt％。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进：

进一步，一种防治鱼类细菌性烂鳃病的中草药小分子组合物，包括以下组分：

积雪草皂苷50wt％、齐墩果酸20wt％、熊果酮酸15wt％、柴胡皂苷A10wt％、甘草次酸5wt％。

进一步，一种防治鱼类细菌性烂鳃病的中草药小分子组合物，包括以下组分：

积雪草皂苷55wt％、齐墩果酸15wt％、熊果酮酸15wt％、柴胡皂苷A12wt％、甘草次酸3wt％。

进一步，一种防治鱼类细菌性烂鳃病的中草药小分子组合物，包括以下组分：

积雪草皂苷46wt％、齐墩果酸22wt％、熊果酮酸12wt％、柴胡皂苷A13wt％、甘草次酸7wt％。

上述防治鱼类细菌性烂鳃病的中草药小分子组合物在制备防治鱼类细菌性烂鳃病药物中的应用。

上述中草药小分子组合物可以直接混合作为防治鱼类细菌性烂鳃病药物用于防治鱼类细菌性烂鳃病，或者将其制成其他制剂，如颗粒、粉末、胶囊、片剂等剂型。

本发明具有以下有益效果：

本发明将积雪草皂苷、齐墩果酸、熊果酮酸、柴胡皂苷A和甘草次酸配合协同起到高效杀菌、免疫调节、伤口修复等作用，可以实现鱼类细菌性烂鳃病的高效防治，在细菌性烂鳃病的防治中具有重要的推广应用价值。

具体实施方式

以下所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施例1：

一种防治鱼类细菌性烂鳃病的中草药小分子组合物，包括以下组分：

积雪草皂苷50wt％、齐墩果酸20wt％、熊果酮酸15wt％、柴胡皂苷A10wt％、甘草次酸5wt％。

实施例2：

一种防治鱼类细菌性烂鳃病的中草药小分子组合物，包括以下组分：

积雪草皂苷55wt％、齐墩果酸15wt％、熊果酮酸15wt％、柴胡皂苷A12wt％、甘草次酸3wt％。

实施例3：

一种防治鱼类细菌性烂鳃病的中草药小分子组合物，包括以下组分：

积雪草皂苷46wt％、齐墩果酸22wt％、熊果酮酸12wt％、柴胡皂苷A13wt％、甘草次酸7wt％。

表1实施例1-3中各组分及用量

成分	实施例1	实施例2	实施例3
				积雪草皂苷	50wt％	55％	46％
齐墩果酸	20％	15％	22％
				熊果酮酸	15％	15％	12％
柴胡皂苷A	10％	12％	13％
				甘草次酸	5％	3％	7％

实施例1-3提供的防治鱼类细菌性烂鳃病的中草药小分子组合物用于治疗鱼类细菌性烂鳃病，其效果无明显差异，现主要以实施例1为例来说明其效果，具体如下：

试验例1细菌性烂鳃病治疗实验

一、实验原理

取市场上两类水产常用抗生素药物即盐酸多西环素和氟苯尼考与本发明中草药小分子组合物进行药效对比。用绝对定量的方法，取人工感染患病活体鳃组织进行细菌水平定量，以培养的菌液作为对照，若等量鳃组织中细菌DNA片段的拷贝数降低则说明药物产生杀菌效果。给患病鱼体以一定浓度的药物，通过检测柱状黄杆菌在鳃组织上的DNA片段拷贝数及表体症状、成活的状态、摄食情况来判断药物的药效。

二、实验材料

健康大口黑鲈300尾，规格大小一致，约6±0.5cm。

三、实验步骤

将300条鱼平均分5份并分组，通过人工浸泡在3×10⁶CFU/mL柱状黄杆菌悬液中4h完成感染。5组分别为对照组(空白组，未进行人工感染柱状黄杆菌病原体处理)、感染组、感染治疗甲组(感染24h后给药，药物为实施例1中所配)、感染治疗乙组(感染24h后给药，药物为盐酸多西环素)和感染治疗丙组(感染24h后给药，药物为氟苯尼考)。甲组药品在每立方米水体加入8g进行药浴，药浴时间2h，药浴完成后进行换水处理，每天药浴重复操作7天。乙组与丙组使用商业标准用量每天药浴2h，药浴完成后进行换水处理，每天药浴重复操作7天。实验过程中保证养殖箱中氧气充足且pH适宜。实验7天后采集鳃组织进行检测，期间每天记录每组死亡率、临床症状。

四、实验结果与分析

经7天后观察五组大口黑鲈的状态表现，治疗甲组明显比其他三组实验组的生长状态好，统计各组7天内死亡率与体表症状、设施情况可得出如下表2数据：

表2治疗实验中死亡率与临床症状

在实验7天后取各组鱼的鳃组织，使用绝对定量的方法检测柱状黄杆菌在各组鳃组织上的平均DNA片段拷贝数以反映出组织细菌载量，得出如下表3数据：

表3治疗实验中鳃组织细菌载量

由上述结果可知，使用三种药物治疗后病鱼在死亡率、体表症状、摄食情况等大体指标上均有好转，相较于使用盐酸多西环素与氟苯尼考，使用实施例1的中草药小分子组合物表现出更好的治疗效果。此外，使用实施例1的中草药小分子组合物使得鳃组织上的细菌DNA片段拷贝数在三种药物治疗组中最少，因此，实施例1的中草药小分子组合物比盐酸多西环素与氟苯尼考的在体杀菌效果更为优异。

试验例2细菌性烂鳃病预防实验

一、试验动物饲养

试验动物选择6±0.5cm左右的大口黑鲈200条，使用在正常饲料中添加有0.3g/kg实施例1中所配的中草药小分子组合物的饲料进行饲喂，每日早晚饲喂两次，每次投喂量按鱼体重3％计算，饲喂期间每天换水1/3，保持自然光照周期与溶氧充足，连续饲喂21天。同时设置另外三组，对照组饲喂正常饲料，其他两组分别饲喂添加等量盐酸多西环素和氟苯尼考的正常饲料。

二、对柱状黄杆菌感染预防效果的测定

饲喂21天后通过人工浸泡感染的方式使大口黑鲈感染柱状黄杆菌，感染后7天内每天记录每组死亡率、临床症状。7天后采集各组鳃组织通过绝对定量的方式检测鳃组织上柱状黄杆菌的定植情况。

三、实验结果与分析

经7天后观察四组大口黑鲈的状态发现，实施例1组明显比其他两组实验组的生长状态好，统计各组7天内死亡率与体表症状、摄食情况可得出如下表4数据：

表4预防实验中死亡率与临床症状

在实验7天后取各组鱼的鳃组织，使用绝对定量的方法检测柱状黄杆菌在各组鳃组织上的平均DNA片段拷贝数以反映出组织细菌载量，得出如下表5数据：

表5预防实验中鳃组织细菌载量

由上可知，使用三种药物饲喂后进行感染，实施例1组的病鱼在死亡率、体表症状、摄食情况等大体指标上均有好转，相较于使用盐酸多西环素与氟苯尼考，使用实施例1的中草药小分子组合物表现出更好的预防效果。此外，使用实施例1的中草药小分子组合物使得鳃组织上的细菌DNA片段拷贝数在三种药物预防组中最少，因此，实施例1的中草药小分子组合物比盐酸多西环素与氟苯尼考的在体预防效果更为优异。

试验例3内服与外用联合用药效果实验

一、试验动物饲养

将400条约6±0.5cm左右的大口黑鲈平均分成4份并分组。其中甲组与乙组按照试验例2的方式饲喂添加有实施例1中草药小分子组合物的正常饲料，丙组与丁组饲喂正常饲料。

二、防治细菌性烂鳃病的效果评估

饲喂21天后通过人工浸泡感染的方式使各组大口黑鲈感染柱状黄杆菌。甲组和丙组在感染24h后按照试验例1中对应的甲组和乙组的方式进行治疗，乙组和丁组在感染后不做处理。感染后7天内每天记录每组死亡率、临床症状。7天后采集各组鳃组织通过绝对定量的方式检测鳃组织上柱状黄杆菌的定植情况。

三、实验结果与分析

经7天后观察四组大口黑鲈的状态发现，甲组明显比其他两组实验组的生长状态好，统计各组7d内死亡率与体表症状、摄食情况可得出如下表6数据：

表6联合用药中死亡率与临床症状

在实验7天后取各组鱼的鳃组织，使用绝对定量的方法检测柱状黄杆菌在各组鳃组织上的平均DNA片段拷贝数以反映出组织细菌载量，得出如下表7数据：

表7联合用药中鳃组织细菌载量

由上可知，联合用药的甲组病鱼在死亡率、体表症状、摄食情况等大体指标上相较于单独使用实施例1治疗与预防的乙组和丙组表现出更好的治疗效果。此外，甲组鱼的鳃组织上的细菌DNA片段拷贝数在三个实验组中最少，因此，内服与外用联合用药的抗菌效果更好。

试验例4安全实验

一、安全评估

将300条约6±0.5cm左右的大口黑鲈平均分成6份并分组。其中甲1组与甲2组分别使用实施例1的中草药小分子组合物进行为期7天的浸泡与21天的饲料添加喂养；乙1组与乙2组分别使用实施例2的中草药小分子组合物进行为期7天的浸泡与21天的饲料添加喂养；丙1组与丙2组分别使用实施例3的中草药小分子组合物进行为期7天的浸泡与21天的饲料添加喂养，浸泡与喂养参照试验例1与试验例2。实验期间记录各组实验鱼的死亡情况。

二、实验结果

经实验后观察各组大口黑鲈的状态发现，所有组的大口黑鲈并未出现死亡情况，实验数据如下表8所示：

表8安全性实验中各组大口黑鲈死亡率

甲1

甲2

乙1

乙2

丙1

丙2

死亡率

0％

0％

0％

0％

0％

0％

经前述药效试验、专门的安全试验，证实本发明提供的中草药小分子组合物安全可靠。

对比例1

对比例1与实施例1不同之处在于，将药物组合物中积雪草皂苷替换为等量的磷酸氢二钠。

采用与试验例1与试验例2相同的验证方法进行治疗与预防效果验证，各处理组结果如表9所示：

表9对比例1中死亡率与细菌载量

由表9可知，当将本发明中草药小分子组合物中的积雪草皂苷替换为等量的磷酸氢二钠后，病鱼的死亡率相比替换前有所增加，鱼的鳃组织上的细菌DNA片段拷贝数也较高，说明将积雪草皂苷替换为等量的磷酸氢二钠后会影响预防和治疗鱼类细菌性烂鳃病的效果。

对比例2

对比例2与实施例1不同之处在于，将药物组合物中齐墩果酸替换为等量磷酸氢二钠。

采用与试验例1与试验例2相同的验证方法进行治疗与预防效果验证，各处理组结果如表10所示：

表10对比例2中死亡率与细菌载量

由表10可知，当将本发明中草药小分子组合物中的齐墩果酸替换为等量的磷酸氢二钠后，病鱼的死亡率相比替换前有所增加，鱼的鳃组织上的细菌DNA片段拷贝数也较高，说明将齐墩果酸替换为等量的磷酸氢二钠后会影响预防和治疗鱼类细菌性烂鳃病的效果。

对比例3

对比例3与实施例1不同之处在于，将药物组合物中熊果酮酸替换为等量磷酸氢二钠。

采用与试验例1与试验例2相同的验证方法进行治疗与预防效果验证，各处理组结果如表11所示：

表11对比例3中死亡率与细菌载量

由表11可知，当将本发明中草药小分子组合物中的熊果酮酸替换为等量的磷酸氢二钠后，病鱼的死亡率相比替换前有所增加，鱼的鳃组织上的细菌DNA片段拷贝数也较高，说明将熊果酮酸替换为等量的磷酸氢二钠后会影响预防和治疗鱼类细菌性烂鳃病的效果。

对比例4

对比例4与实施例1不同之处在于，将药物组合物中柴胡皂苷A替换为等量磷酸氢二钠。

采用与试验例1与试验例2相同的验证方法进行治疗与预防效果验证，各处理组结果如表12所示：

表12对比例4中死亡率与细菌载量

由表12可知，当将本发明中草药小分子组合物中的柴胡皂苷A替换为等量的磷酸氢二钠后，病鱼的死亡率相比替换前有所增加，鱼的鳃组织上的细菌DNA片段拷贝数也较高，说明将柴胡皂苷A替换为等量的磷酸氢二钠后会影响预防和治疗鱼类细菌性烂鳃病的效果。

对比例5

对比例5与实施例1不同之处在于，将药物组合物中甘草次酸替换为等量磷酸氢二钠。

采用与试验例1与试验例2相同的验证方法进行治疗与预防效果验证，各处理组结果如表13所示：

表13对比例5中死亡率与细菌载量

由表13可知，当将本发明中草药小分子组合物中的甘草次酸替换为等量的磷酸氢二钠后，病鱼的死亡率相比替换前有所增加，鱼的鳃组织上的细菌DNA片段拷贝数也较高，说明将甘草次酸替换为等量的磷酸氢二钠后会影响预防和治疗鱼类细菌性烂鳃病的效果。

对比例6

对比例6与实施例1不同之处在于，将药物组合物中积雪草皂苷替换为等量丝兰皂苷。

采用与试验例1与试验例2相同的验证方法进行治疗与预防效果验证，各处理组结果如表14所示：

表14对比例6中死亡率与细菌载量

由表13可知，当将本发明中草药小分子组合物中的积雪草皂苷替换为等量丝兰皂苷后，病鱼的死亡率和鱼的鳃组织上的细菌DNA片段拷贝数相比替换前有所增加，但明显低于感染组，说明将积雪草皂苷替换为等量丝兰皂苷后会降低预防和治疗鱼类细菌性烂鳃病的效果，只有本发明中草药小分子组合物协调作用才能很好的起到预防和治疗鱼类细菌性烂鳃病的效果。

对比例7

对比例7与实施例1不同之处在于，将药物组合物中积雪草皂苷和柴胡皂苷A替换为两者物质等量的丝兰皂苷。

采用与试验例1与试验例2相同的验证方法进行治疗与预防效果验证，各处理组结果如表15所示：

表15对比例7中死亡率与细菌载量

由表13可知，当将本发明中草药小分子组合物中的积雪草皂苷和柴胡皂苷A替换为两者物质等量的丝兰皂苷后，病鱼的死亡率和鱼的鳃组织上的细菌DNA片段拷贝数相比替换前有所增加，但明显低于感染组，说明将积雪草皂苷和柴胡皂苷A替换为两者物质等量的丝兰皂苷后会降低预防和治疗鱼类细菌性烂鳃病的效果，只有本发明中草药小分子组合物协调作用才能很好的起到预防和治疗鱼类细菌性烂鳃病的效果。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种防治鱼类细菌性烂鳃病的中草药小分子组合物，其特征在于，包括以下组分：

积雪草皂苷45-55wt％、齐墩果酸15-25wt％、熊果酮酸10-20wt％、柴胡皂苷A 5-15wt％、甘草次酸3-7wt％。

2.根据权利要求1所述的防治鱼类细菌性烂鳃病的中草药小分子组合物，其特征在于，包括以下组分：

积雪草皂苷50wt％、齐墩果酸20wt％、熊果酮酸15wt％、柴胡皂苷A10wt％、甘草次酸5wt％。

3.根据权利要求1所述的防治鱼类细菌性烂鳃病的中草药小分子组合物，其特征在于，包括以下组分：

积雪草皂苷55wt％、齐墩果酸15wt％、熊果酮酸15wt％、柴胡皂苷A12wt％、甘草次酸3wt％。

4.根据权利要求1所述的防治鱼类细菌性烂鳃病的中草药小分子组合物，其特征在于，包括以下组分：

积雪草皂苷46wt％、齐墩果酸22wt％、熊果酮酸12wt％、柴胡皂苷A13wt％、甘草次酸7wt％。

5.权利要求1-4所述的防治鱼类细菌性烂鳃病的中草药小分子组合物在制备防治鱼类细菌性烂鳃病药物中的应用。