CN116367858A - 用于治疗心肌梗塞的治疗方法和试剂 - Google Patents

Abstract

本公开一般涉及用于治疗心肌梗塞的方法和试剂。更具体地，本公开涉及CD14拮抗剂抗体用于治疗心肌梗塞的用途。

Description

用于治疗心肌梗塞的治疗方法和试剂

本申请要求提交于2020年9月10日的澳大利亚临时申请第2020903245号的优先权，题为“用于治疗心肌梗塞的治疗方法和试剂”，其内容通过引用全文并入本文。

技术领域

本公开总体上涉及用于治疗心肌梗塞的方法和试剂。更具体地，本公开涉及CD14拮抗剂抗体用于治疗心肌梗塞的用途。

背景技术

心脏病，尤其是心肌梗塞(MI)在世界范围内是致死率和发病率的重要因素。举例来说，美国每年大约发生一百万例心肌梗塞事件，造成三十万到四十万人的死亡。对于MI幸存者来说，它会导致长期的心脏损伤，从而降低预期寿命和生活质量。

MI是指心脏肌肉(heart muscle)或心肌因局部缺血而导致的组织死亡(即，梗塞)。当心脏的血液供应不能满足肌肉的氧气需求时，就会发生心肌梗塞。这通常是冠状动脉闭塞(或堵塞)的结果，如在易损的动脉粥样硬化斑块破裂和印迹凝块(blot clot)形成之后。其他不太常见的原因包括冠状动脉栓塞、可卡因引起的局部缺血、冠状动脉夹层和冠状动脉痉挛。

出于治疗的目的，MI可以分为两类：非ST段抬高性MI(NSTEMI)和ST段抬高性MI(STEMI)。STEMI最常见于血栓形成导致心外膜主要冠状血管完全闭塞，是最严重的形式，是一种危及生命、时间紧迫的紧急情况，必须及时诊断和治疗。对于STEMI，紧急再灌注是通过以下实现：经皮冠状动脉介入治疗(PCI，例如，血管成形术或支架置入术)、纤维蛋白溶解药物(例如，链激酶、阿尼普酶(anistreplase)或组织型纤溶酶原激活剂(tPA；例如，替奈普酶(tenecteplase)、瑞替普酶(reteplase)或阿替普酶(alteplase)))，或偶尔使用冠状动脉旁路移植术。对于NSTEMI，再灌注是通过经皮介入治疗或冠状动脉旁路移植术；纤溶疗法不用于NSTEMI。所有MI患者通常接受β阻滞剂、高强度他汀类药物、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂和/或血小板抑制剂(例如，阿司匹林和/或P2Y12抑制剂，如噻氯匹定(ticlopidine)、氯吡格雷(clopidogrel)、替格瑞洛(ticagrelor)和普拉格雷(prasugrel))。

尽管采取了这些介入治疗，许多MI患者的心脏仍存在永久性损伤。心肌损伤导致固定(stereotyped)的炎症级联反应的激活，包括早期中性粒细胞进入，之后是单核细胞/巨噬细胞浸润。在MI后的第3至5天之间，会出现从炎症到修复的过渡，伴随着成纤维细胞的激活和进行性瘢痕沉积。随着时间的推移，会发生病理性重塑，心室几何形状发生变化、心壁变薄、缺血性二尖瓣反流和心肌细胞进一步的丢失。MI后瘢痕组织和心室重塑的发展使患者面临着潜在的危及生命的心律失常和心脏衰竭风险。事实上，至少5％-10％的MI幸存者在MI后的前12个月内死亡，并且接近50％的幸存者在同一年内需要住院治疗。患有MI的患者的总体预后取决于MI后肌肉损伤的程度以及与该损伤相关的不利重塑。尽管在接受早期PCI或纤溶疗法的患者中可以看到更好的结局，但仍然需要其他用于治疗MI的试剂和方法，以进一步减少肌肉损伤、有害的纤维化并改进结局。

发明内容

本发明部分源于令人惊讶的确定，即靶向分化簇14(CD14)，如通过施用抗CD14拮抗剂抗体，可以减少或改善由MI导致的心脏损伤。特别地，本文首次证明，与未施用抗体相比，在STEMI(MI的最严重的形式)之后施用CD14拮抗剂抗体提高了心脏的收缩功能、收缩特性和血液动力学功能(例如，增加了每搏输出量、心搏出量、射血分数、每搏作功和dV/dt最大值、以及减少了dV/dt最小值)以及减小了梗塞尺寸和减少了纤维化。对于任何一种试剂，特别是对于抗CD14试剂而言，多种MI参数的这种明显提高(代表心脏效率和功能的显著提高)都是出人意料地，考虑到之前的发现表明，靶向CD14对于预防或改善MI梗塞尺寸或收缩特性的有害后果没有作用(参见，例如，Arslan等人，Impact of CD14 deficiency onischemia reperfusion injury,Immunotherapy@Brisbane 2017，Brisbane，澳大利亚，2017年5月10-12日)。

损伤相关的分子模式(DAMP)分子在MI期间由受损的心肌细胞释放，并导致驻留的促炎性巨噬细胞从血液中吸引循环的白细胞(主要是中性粒细胞)。在损伤和坏死细胞被吞噬后，这些嗜中性粒细胞发生凋亡，从而促进组织修复的消退期。CD14是许多模式识别受体的重要辅因子，其在多种细胞类型(包括循环性和浸润性的单核细胞和巨噬细胞)中促进DAMP驱动的炎症。不受理论的束缚，建议靶向CD14以减少与MI相关的过度炎症，以及减轻心脏中的后续损伤、纤维化和重塑。在本公开的一些实施方案中，仅在急性期(即，MI后达72至96小时)靶向CD14。不受理论的束缚，建议这样做以靶向促炎性的“M1”单核细胞/巨噬细胞，并减少其在急性期的作用，同时允许修复性的、抗炎性的“M2”单核细胞/巨噬细胞在后期在组织修复中起作用。

因此，在一个方面，提供一种用于治疗受试者的心肌梗塞(MI)的方法，包括向受试者施用有效量的CD14拮抗剂抗体、由或基本上由其组成。在另一个方面，提供了CD14拮抗剂抗体在制备用于治疗MI的药物中的用途。

在一些实施方案中，CD14拮抗剂抗体在MI后或MI诊断后达72小时(例如，MI后或MI诊断后达12、18、24、36或48小时)施用至受试者。在一些示例中，CD14拮抗剂抗体以1、2、3或更多剂施用至受试者。在一个实施方案中，CD14拮抗剂抗体是全身施用。

在一些实施方案中，MI是ST段抬高性MI(STEMI)。在其他实施方案中，MI是非ST段抬高性MI(NSTEMI)。

在一个示例中，CD14拮抗剂抗体选自：

(i)抗体，其包含：a)抗体VL结构域或其抗原结合片段，其含有L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3，其中：L-CDR1包含序列RASESVDSFGNSFMH[SEQ ID NO:7](3C10 L-CDR1)；L-CDR2包含序列RAANLES[SEQ ID NO:8](3C10 L-CDR2)；以及L-CDR3包含序列QQSYEDPWT[SEQ ID NO:9](3C10 L-CDR3)；以及b)抗体VH结构域或其抗原结合片段，其含有H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3，其中：H-CDR1包含序列SYAMS[SEQ ID NO:10](3C10 H-CDR1)；H-CDR2包含序列SISSGGTTYYPDNVKG[SEQ ID NO:11](3C10 H-CDR2)；以及H-CDR3包含序列GYYDYHY[SEQ IDNO:12](3C10 H-CDR3)；

(ii)抗体，其包含：a)抗体VL结构域或其抗原结合片段，其含有L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3，其中：L-CDR1包含序列RASESVDSYVNSFLH[SEQ ID NO:13](28C5 L-CDR1)；L-CDR2包含序列RASNLQS[SEQ ID NO:14](28C5L-CDR2)；以及L-CDR3包含序列QQSNEDPTT[SEQ IDNO:15](28C5 L-CDR3)；以及b)抗体VH结构域或其抗原结合片段，其含有H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3，其中：H-CDR1包含序列SDSAWN[SEQ ID NO:16](28C5 H-CDR1)；H-CDR2包含序列YISYSGSTSYNPSLKS[SEQ ID NO:17](28C5 H-CDR2)；以及H-CDR3包含序列GLRFAY[SEQ IDNO:18](28C5 H-CDR3)；

(iii)抗体，其包含：a)抗体VL结构域或其抗原结合片段，其含有L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3，其中：L-CDR1包含序列RASESVDSYVNSFLH[SEQ ID NO:13](IC14 L-CDR1)；L-CDR2包含序列RASNLQS[SEQ ID NO:14](IC14L-CDR2)；以及L-CDR3包含序列QQSNEDPYT[SEQ IDNO:27](IC14 L-CDR3)；以及b)抗体VH结构域或其抗原结合片段，其含有H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3，其中：H-CDR1包含序列SDSAWN[SEQ ID NO:16](IC14 H-CDR1)；H-CDR2包含序列YISYSGSTSYNPSLKS[SEQ ID NO:17](IC14 H-CDR2)；以及H-CDR3包含序列GLRFAY[SEQ IDNO:18](IC14 H-CDR3)；以及

(iv)抗体，其包含：a)抗体VL结构域或其抗原结合片段，其含有L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3，其中：L-CDR1包含序列RASQDIKNYLN[SEQ ID NO:19](18E12 L-CDR1)；L-CDR2包含序列YTSRLHS[SEQ ID NO:20](18E12L-CDR2)；以及L-CDR3包含序列QRGDTLPWT[SEQ ID NO:21](18E12L-CDR3)；以及b)抗体VH结构域或其抗原结合片段，其含有H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3，其中：H-CDR1包含序列NYDIS[SEQ ID NO:22](18E12 H-CDR1)；H-CDR2包含序列VIWTSGGTNYNSAFMS[SEQ ID NO:23](18E12 H-CDR2)；以及H-CDR3包含序列GDGNFYLYNFDY[SEQ ID NO:24](18E12 H-CDR3)。

在一个具体示例中，CD14拮抗剂抗体选自：

(i)抗体，其包含：VL结构域，其包含以下序列、由或基本上由以下序列组成：

以及VH结构域，其包含以下序列、由或基本上由以下序列组成：

(ii)抗体，其包含：VL结构域，其包含以下序列、由或基本上由以下序列组成：

以及VH结构域，其包含以下序列、由或基本上由以下序列组成：

(iii)抗体，其包含：VL结构域，其包含以下序列、由或基本上由以下序列组成：

以及VH结构域，其包含以下序列、由或基本上由以下序列组成：

和

(iv)抗体，其包含：VL结构域，其包含以下序列、由或基本上由以下序列组成：

以及VH结构域，其包含以下序列、由或基本上由以下序列组成：

在一些实施方案中，CD14拮抗剂抗体是人源化的或嵌合的。

在一个具体示例中，CD14拮抗剂抗体包含：轻链，其含有氨基酸序列

以及重链，其含有氨基酸序列

在具体实施方案中，CD14拮抗剂抗体是IC14。

CD14拮抗剂抗体可以与辅助剂联合(例如同时或依次)施用或与辅助剂一起配制。辅助剂可以，例如，选自纤维蛋白溶解剂、β阻滞剂、高强度他汀类药物、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂和血小板抑制剂。在一些示例中，纤维蛋白溶解剂选自链激酶、阿尼普酶和组织型纤溶酶原激活剂(例如，替奈普酶、瑞替普酶或阿替普酶)。在进一步的示例中，β阻滞剂选自醋丁洛尔(acebutolol)、阿替洛尔(atenolol)、异丙洛尔(isoprolol)、美托洛尔(metoprolol)、纳多洛尔(nadolol)、奈比洛尔(nebivolol)和普萘洛尔(propranolol)。在更进一步的示例中，血小板抑制剂选自阿司匹林、P2Y12抑制剂(例如，噻氯匹定(ticlopidine)、氯吡格雷(clopidogrel)、替格瑞洛(ticagrelor)或普拉格雷(prasugrel))和糖蛋白IIb/IIIa受体拮抗剂。

在一些实施方案中，对受试者进行PCI。在此类示例中，CD14拮抗剂抗体可以在，例如PCI的72小时内施用。

附图说明

在此仅通过非限制性示例的方式参考以下附图描述了本公开的实施方案。

图1是在术后7天，收缩功能超声心动描记术评估的图形表示。(A)面积变化。(B)射血分数。*p<0.05。平均值±SE

图2是来自用LPS和IFNγ刺激的iPSC衍生的M0(M0)中的IL-1β、TNFα、IL-6和IL-8水平的图形表示。用浓度为0.01ug/ml至1ug/ml的IC14 mAb或同种型对照mAb处理培养物。通过qPCR(M1)测量IL-1β、TNFα、IL-6和IL-8转录本的水平。将任意单位的每种mRNA相对β-肌动蛋白进行归一化，并绘制为相对于M0细胞的表达。用浓度为0.01至1ug/ml的IC14 mAb或同种型对照mAb处理培养物。(A)IL-1β。(B)TNFα。(C)IL-6。(D)IL-8。

图3是在术后7天，收缩功能的超声心动描记术评估的图形表示。面积变化(A)和射血分数(B)。*p<0.05，**p<0.01，***P<0.001。平均值±SEM。(组：A：同种型，B：3×剂的抗CD14抗体，C：盐水，D：2×剂的抗CD14抗体)。

图4是在术后7天，收缩功能的超声心动描记术评估的图形表示，其中组合的对照组(A：同种型+C：盐水)和抗CD14抗体组(B：3×剂的抗CD14抗体+D：2×剂的抗CD14抗体)。

图5是在术后7天，每搏输出量(A)和心搏出量(B)的超声心动描记术评估的图形表示，*p<0.05，**p<0.01，***P<0.001。平均值±SEM。(组：A：同种型，B：3×剂的抗CD14抗体，C：盐水，D：2×剂的抗CD14抗体)。

图6是在术后7天，左心室和动脉压的血液动力学评估的图形表示。(组：A：同种型，B：3×剂的抗CD14抗体，C：盐水，D：2×剂的抗CD14抗体)。Tx＝处理组(即，B+D)。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。平均值±SEM。

图7是在手术后7天，代表性的左心室(LV)压力容积环的图形表示。每个环表示在一个完整的心动周期中的容积和压力测量。(A)来自同种型对照组的代表性LV压力容积环。(B)来自3×剂的抗CD14组的代表性LV压力容积环。(C)来自盐水对照组的代表性LV压力容积环。(D)来自2×剂的抗CD14组的代表性LV压力容积环。

图8是在术后7天，在心室中部明场切片中测量的非病变面积(A)和病变尺寸(B)的图形表示，*p<0.05。平均值±SEM。(组：A：同种型，B：3×剂的抗CD14抗体，C：盐水，D：2×剂的抗CD14抗体)。

图9显示了用天狼猩红(Picrosirius Red)(Pic Red)染色的心脏左心室的代表性切片，其中胶原蛋白显示为深灰色，心肌显示为浅灰色。(A)同种型对照组。(B)3×剂的抗CD14组。(C)盐水对照组。(D)2×剂的抗CD14组。

图10是从心室中部免疫荧光染色的切片测量的CD68阳性率的图形表示。*p<0.05。平均值±SEM。(A)每组的CD68阳性率。(B)A+C组与B+D组的CD68阳性率。(组：A：同种型，B：3×剂的抗CD14抗体，C：盐水，D：2×剂的抗CD14抗体)。

具体实施方式

定义

除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。虽然，与本文描述的那些类似或等同的任何方法和材料都可以用于本发明的实践或测试中，描述了优选的方法和材料。出于本发明的目的，以下术语如下定义。

本文使用的冠词“一(a)”和“一个(an)”指的是该冠词的语法对象的一个或多于一个(即，指至少一个)。举例而言，“一种元素”指的是一种元素或多于一种元素。

如本文所用，“和/或”是指并涵盖一个或多个相关列出的项目的任何和所有可能组合，以及当解释为可替选的(或)时缺少组合。

术语“活性剂”和“治疗剂”在本文中可互换地使用，指预防、减少或改善疾病或病症的至少一种症状的试剂。

术语“同时施用(administration concurrently)”或“同时施用的(administering concurrently)”或“共同施用(co-administering)”等是指施用含有两种或更多种试剂的单一组合物，或将每种试剂作为分开的组合物施用、和/或通过分开的途径在足够短的时间段内同期(contemporaneously)、或同时或顺序地递送，使得有效结果等同于当所有这些试剂作为单一组合物施用时获得的结果。“同时的”是指试剂基本上在同一时间施用，最佳是在同一制剂中一起施用。“同期的”是指试剂在时间上紧邻施用，例如，一种试剂在另一种试剂施用之前或之后在约一分钟内至约一天内施用。任何同期的时间都是有用的。然而，通常的情况是，当不同时施用时，试剂将在约一分钟至约八小时内施用，并且合适地在小于约一小时至约四小时内施用。当同期施用时，试剂适当的在受试者的相同位点施用。术语“相同位点”包括确切定位，但可以在约0.5至约15厘米内，优选地在约0.5至约5厘米内。如本文所用，术语“分开的”是指间隔施用试剂，例如，以约一天至数周或数月的间隔施用试剂。试剂可以以任一顺序施用。如本文所用的术语“顺序地”指按顺序施用试剂，例如，以几分钟、几小时之间、几天或几周的时间间隔施用试剂。如果合适的话，可以以规律的重复周期施用试剂。

术语“拮抗剂抗体”以最广义使用，包括抑制或降低与抗体结合的抗原(例如，CD14)的生物活性的抗体。例如，拮抗剂抗体可以部分或完全阻断受体(例如，CD14)和配体(例如，DAMP或PAMP)之间的相互作用，或者可以由于受体的三级结构改变或下调受体而实际上降低相互作用。因此，CD14拮抗剂抗体涵盖结合CD14并在任何有意义的程度上阻断、抑制、无效、拮抗、抑制、降低或减少(包括显著地)CD14激动剂活性的抗体，包括活化下游通路(如，Toll样受体(TLR)信号传导通路(例如，TLR4信号传导通路)以及含有TIR结构域的适体诱导的IFN-β(TRIF)通路)，或通过CD14配体(例如，DAMP或PAMP)与CD14结合以引发细胞反应(例如，产生促炎介质，包括促炎细胞因子)。在一些示例中，抗体是单价的，仅结合CD14。在其他示例中，抗体是二价的，结合CD14和另一种抗原。

本文中的术语“抗体”以最广义使用，具体涵盖天然存在的抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、抗体片段或任何其他的抗原结合分子(只要其表现出期望的免疫相互作用)。天然存在的“抗体”在其范围内包括免疫球蛋白，其包含通过二硫键相互连接的至少两条重链(H)和两条轻链(L)。每条重链包含重链可变区(本文缩写为VH)和重链恒定区。重链恒定区包含具体的CH结构域(例如，CH1、CH2和CH3)。每条轻链包含轻链可变区(本文缩写为VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域CL。VH和VL区可进一步细分为高变区(称为互补决定区(CDR))，其间散布有更保守的区(称为框架区(FR))。每个VH和VL由3个CDR和4个FR组成，按以下顺序从氨基末端至羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)。抗体可以是任何同种型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)、子类或其修饰形式(例如，IgG1同种型，其携带L234A和L235A双突变(IgG1-LALA))。抗体可以是任何物种的、嵌合的、人源化的或人的。在其他实施方案中，抗体是同源化的重链抗体(例如，骆驼化抗体)，其缺少第一个恒定区结构域(CHl)但除此之外保留完整的重链，并且能够通过抗原结合结构域结合抗原。抗体-模块识别结构域(MRD)融合物中重链和轻链的可变区将包含与目标抗原相互作用的功能性结合结构域。

如本文所用，“可变结构域”(轻链的可变结构域(VL)、重链的可变结构域(VH))表示直接参与抗体与抗原结合的轻链和重链结构域对中的每一个。可变轻链和重链结构域具有相同的一般结构，每个结构域包含由三个CDR或“高变区”连接的四个FR，其序列是广泛保守的。FR采用β折叠构象，CDR可以形成连接β折叠结构的环。每条链中的CDR由FR保持在其三维结构中，并与来自另一条链的CDR一起形成抗原结合位点。

当在本文中使用时，术语“抗原结合部分”是指通常负责抗原结合的抗体的氨基酸残基，其通常包含来自CDR的氨基酸残基。因此，“CDR”或“互补决定区”(也称为“高变区”)在本文中可互换使用，指抗体的轻链和重链中形成三维环结构、并有助于形成抗原结合位点的氨基酸序列。在重链和轻链的每个可变区中存在三个CDR，对于每个可变区，其被指定为“CDR1”、“CDR2”和“CDR3”。如本文所用，术语“CDR集”指存在于结合抗原的单个可变区中的一组三个CDR。这些CDR的确切边界已根据不同的系统进行了不同的定义。Kabat描述的系统(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest(NationalInstitutes of Health，Bethesda，Md.(1987)和(1991))，不仅提供了适用于任何抗体的可变区的明确残基编号系统，而且还提供了定义三个CDR的精确残基边界。这些CDR可称为“Kabat CDR”。Chothia和同事(Chothia和Lesk，1987.J.Mol.Biol.196:901-917；Chothia等人，1989.Nature 342:877-883)发现Kabat CDR中的某些子部分采用几乎相同的肽骨架构象，尽管在氨基酸序列水平上具有很大的多样性。这些子部分被指定为“L1”、“L2”和“L3”，或“H1”、“H2”和“H3”，其中“L”和“H”分别指轻链和重链区域。这些区域可称为“ChothiaCDR”，其边界与Kabat CDR重叠。其他的定义与Kabat CDR重叠的CDR的边界描述见于Padlan(1995.FASEB J.9:133-139)和MacCallum(1996.J.Mol.Biol.262(5):732-745)。还有其他CDR边界定义可以不严格遵循这些系统之一，但仍然会与Kabat CDR有重叠，虽然根据预测或实验发现特定残基或残基组、甚至整个CDR并不显著影响抗原结合，其可以会缩短或延长。

如本文所用，术语“框架区”或“FR”是指可变区除去CDR的剩余序列。因此，抗体的轻链和重链可变结构域从N末端到C末端包含结构域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。CDR和FR通常根据Kabat,E.A.等人，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD.(1991)的标准定义来确定和/或来自“超变环”的那些残基。

如本文所用，术语“轻链可变区”(“VL”)和“重链可变区”(VH)分别指轻链和重链N末端部分的区或结构域，其对于每个抗体具有可变的一级氨基酸序列。抗体的可变区通常由轻链和重链的氨基末端结构域组成，因为它们折叠在一起形成针对抗原的三维结合位点。基于结构相似性，已经定义了VH和VL的几种亚型，例如，Kabat数据库中所列的。

术语“嵌合抗体”是指包含来自一个物种的重链和轻链可变区序列以及来自另一物种的恒定区序列的抗体，如，具有与人恒定区连接的鼠重链和轻链可变区的抗体。

非人(例如，啮齿动物)抗体的“人源化”形式是包含源自非人免疫球蛋白的最少序列的嵌合抗体。在大多数情况下，人源化抗体是人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体的高变区的残基被替换为来自非人物种(供体抗体)(例如，小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物)的具有所需特异性、亲和力和能力的高变区的残基。在一些情况下，人免疫球蛋白的框架区(FR)残基被相应的非人残基替换。因此，人源化抗体的FR和CDR不必精确地对应于亲代(即，供体)序列，例如，可以通过取代、插入和/或删除至少一个氨基酸残基以使供体抗体CDR或共有框架突变，从而使该位点的CDR或FR既不对应供体抗体也不对应共有框架。然而，通常地，这样的突变不是广泛的并且通常会避免涉及与抗原结合的“关键残基”。通常地，至少80％，优选至少85％，更优选至少90％，最优选至少95％的人源化抗体残基将对应于亲代FR和CDR序列的残基。如本文所用，术语“共有框架”是指在共有免疫球蛋白序列中的框架区。如本文所用，术语“共有免疫球蛋白序列”是指由相关免疫球蛋白序列家族中最常出现的氨基酸(或核苷酸)形成的序列(参见，例如，Winnaker,From Genes to Clones(Verlagsgesellschaft，Weinheim，1987))。因此，“共有免疫球蛋白序列”可以包含“共有框架区”和/或“共有CDR”。在免疫球蛋白家族中，共有序列中的每个位置都被该家族中该位置出现频率最高的氨基酸占据。如果两个氨基酸出现的频率相同，则任何一个都可以包含在共有序列中。通常，人源化抗体将包含至少一个、以及通常是两个可变结构域的基本上全部，其中全部或基本上全部的高变环对应于非人免疫球蛋白的高变环，以及全部或基本上全部的FR是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗体一般还任选地包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的至少一部分。有关详细信息，参见Jones等人(1986.Nature 321:522-525)，Riechmann等人(1988.Nature 332:323-329)和Presta(1992.Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596)。人源化抗体可以选自免疫球蛋白的任何类别，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE，以及任何同种型，包括而不限于IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。人源化抗体可以包含来自多于一种类别或同种型的序列，可以选择特定的恒定结构域以使用本领域已知的技术优化期望的效应子功能。如本文所用，术语“关键残基”是指可变区内的某些残基，其对抗体，特别是人源化抗体的结合特异性和/或亲和力具有更大影响。关键残基包括，但不限于以下一种或多种：与CDR相邻的残基、潜在的糖基化位点(可以是N-或O-糖基化位点)、稀有残基、能够与抗原相互作用的残基、能够与CDR相互作用的残基、规范(canonical)的残基、在重链可变区和轻链可变区之间的接触残基、在Vernier区内的残基以及在Chothia定义的可变重链CDR1和Kabat定义的第一个重链框架之间的重叠区中的残基。

如本文所用，“Vernier”区是指框架残基的子集，其可以调节CDR结构并微调与抗原配合的，如Foote和Winter(1992.J.Mol.Biol.224:487-499)。Vernier区残基形成CDR的下层，可以影响CDR的结构以及抗体的亲和力。

如本文所用，术语“规范”残基是指CDR或框架中定义特定规范CDR结构的残基，如Chothia等人所定义。(1987.J.Mol.Biol.196:901-917；1992.J.Mol.Biol.227:799-817)，两者都通过参考并入本文。根据Chothia等人，许多抗体的CDR的关键部分具有几乎相同的肽骨架确认，尽管在氨基酸序列水平上存在很大差异。每个规范结构主要指为形成环的连续氨基酸残基段指定一组肽骨架扭转角。

如本文所用，术语“供体”和“供体抗体”指为“接受体抗体”提供一个或多个CDR的抗体。在一些实施方案中，供体抗体是来自于从中获得FR或衍生FR的抗体不同物种的抗体。在人源化抗体的上下文中，术语“供体抗体”是指提供一个或多个CDR的非人抗体。

如本文所用，术语“接受体”和“接受体抗体”指提供一个或多个FR的至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的氨基酸序列的抗体。在一些实施方案中，术语“接受体”是指提供恒定区的抗体氨基酸序列。在其他实施方案中，术语“接受体”是指提供一个或多个FR和恒定区的抗体氨基酸序列。在具体实施方案中，术语“接受体”指提供一个或多个FR的至少80％、优选至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％的氨基酸序列的人抗体氨基酸序列。根据该实施方案，接受体可以包含不会(没有)存在于人抗体的一个或多个特异性位置的至少1、至少2、至少3、至少4、至少5、或至少10个氨基酸残基。接受体框架区和/或接受体恒定区可以是，例如源自或获自种系抗体基因、成熟抗体基因、功能性抗体(例如，本领域公知的抗体、开发中的抗体或市售抗体)。

如本文所用，术语“人抗体”旨在包括具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本发明的人抗体可以包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或定点诱变、或通过体内体细胞突变引入的突变)，例如在CDR中以及特别是在CDR3中。然而，如本文所用，术语“人抗体”不旨在包括这样的抗体，其中衍生自另一哺乳动物物种(如小鼠)的种系的CDR序列已被移植至人框架序列。

术语“重链可变区CDR1”和“H-CDR1”可互换地使用，如术语“重链可变区CDR2”和“H-CDR2”、术语“重链可变区CDR3”和“H-CDR3”、术语“轻链可变区CDR1”和“L-CDR1”；术语“轻链可变区CDR2”和“L-CDR2”以及术语“轻链可变区CDR3”和“L-CDR3”抗体片段可互换地使用。在整个说明书中，互补决定区(“CDR”)根据Kabat定义定义，除非另有说明。Kabat定义是对抗体中的残基进行编号的标准，其通常用于识别CDR区(Kabat等人，(1991)，第5版，NIH出版第91-3242号)。

抗原结合可以通过完整抗体的“片段”或“抗原结合片段”进行。在此，两个术语可互换使用。抗体的术语“抗体片段”中涵盖的结合片段的示例包括Fab片段，其是由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；F(ab')2片段，一种二价片段，其包含由铰链区的二硫桥连接的两个Fab片段；由VH和CH1结构域组成的Fd片段；由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；由VH结构域组成的单结构域抗体(dAb)片段(Ward等人，1989.Nature 341:544-546)；以及分离的互补决定区(CDR)。在一个具体实施方案中，本公开的抗体是缺少全部或部分Fc区的抗原结合片段。

“单链可变片段(scFv)”是单一蛋白链，其中VL和VH区配对形成单价分子(称为单链Fv(scFv)；参见，例如，Bird等人，1988.Science 242:423-426；和Huston等人，1988.Proc.Natl.Acad.Sci.85:5879-5883)。尽管VL和VH这两个结构域由分开的基因编码，但可以使用重组方法通过人工肽接头将VL和VH连接起来，从而使其成为单一蛋白链。此类单链抗体包括一个或多个抗原结合部分。这些抗体片段是使用本领域技术人员已知的常规技术获得的，并且以与完整抗体相同的方式筛选片段的实用性。

如本文所用，术语“单克隆抗体”和缩略语“MAb”和“mAb”是指从实质上均质的抗体群体中获得的抗体，即，包含个体抗体的群体是相同的(除了可以少量存在的可能天然存在的突变之外)。单克隆抗体是针对单一抗原高度特异性的。此外，与通常包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，每个mAb针对抗原上的单一决定簇。修饰词“单克隆的”不应解释为需要通过任何特定方法生产抗体。单克隆抗体可以由，例如产生抗体的细胞的单个克隆(包括杂交瘤)产生。术语“杂交瘤”通常是指培养的肿瘤淋巴细胞与原发的B或T淋巴细胞之间的细胞融合的产物，其表达亲代细胞的特异性免疫能力。

“结合”目的抗原(例如，CD14)的抗体是以足够的亲和力结合抗原的抗体，以使得该抗体作为靶向表达该抗原的细胞或组织的治疗剂，而不与其他蛋白发生显著的交叉反应。在此类实施方案中，相较于抗体、寡肽或其它有机分子与其特定靶标蛋白的结合，抗体与“非靶标”蛋白的结合程度将小于约10％，例如，通过荧光激活细胞分选(FACS)分析、酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫沉淀或放射免疫沉淀法(RIA)所测定。因此，拮抗CD14的抗体适当地抑制或降低促炎介质，包括促炎细胞因子/趋化因子的产生。关于抗体与靶分子的结合，术语“特异性结合”、或“特异性结合至”、或“特异于”特定多肽或特定多肽靶标上的表位，指可测量出与非特异性相互作用不同的结合。可以测量特异性结合，例如，通过将分子的结合与对照分子的结合相比较以确定，所述对照分子通常是不具有结合活性的具有相似结构的分子。例如，可以通过与靶标相似的对照分子(例如，过量的未标记靶标)进行竞争以确定特异性结合。在这种情况下，如果过量的未标记的靶标竞争性地抑制了标记的靶标与探针的结合，则表明是特异性结合。结合抗体的抗原特异性区通常称为“表位”。术语“表位”广泛地包括被抗体或T细胞受体特异性识别、或以其他方式与分子相互作用的在抗原上的位点。通常，表位由分子的活性表面基团(如氨基酸、或碳水化合物或糖侧链)组成，通常可以具有特异性的三维结构特征以及特异性的电荷特征。正如本领域技术人员所理解的，实际上任何可以被抗体特异性结合的都可以是表位。

在该说明书中，除非上下文需要，否则词语“包括(comprise)”、“包含(comprises)”和“含有(comprising)”将被理解为指包括所陈述的步骤或元素、或者步骤或元素的组，而不排除任何其它的步骤或元素、或者步骤或元素的组。因此，术语“包含”等的使用表示所列元素是必需的或强制性的，但其他元素是任选的并且可以存在也可以不存在。“由……组成”是指包括并限于短语“由……组成”之后的任何内容。因此，短语“由……组成”表示所列要素是必需的或强制性的，并且不得存在其他要素。通过“基本上由……组成”，意为包括短语后列出的任何元素，并且限于不干扰或有助于列出的元素在公开内容中指定的活性或作用的其他元素。因此，短语“基本上由……组成”表明列出的元素是必须的或强制的，而其它的元素是任选的，并且根据它们是否极大地影响列出的元素的活性或作用而可以或不可以出现。

在治疗疾病或病症的上下文中，“有效量”是指将一定量的试剂或组合物(以单剂或作为系列的一部分)施用至需要这种治疗或预防的个体，用于有效地预防出现该病症的症状、控制此类症状和/或治疗现有症状。有效量将根据待治疗个体的年龄、健康和身体状况以及疾病症状是否明显、待治疗个体的分类群、组合物的制剂、医学状况的评估以及其他相关因素而不同。可通过测量受试者体内的药物积累计算最佳给药方案。最佳剂量可以根据在个体受试者中的相对效力而变化，通常可以基于在体外和体内动物模型中发现有效的EC50值进行估计。普通技术人员可以容易地确定最佳剂量、给药方法学和重复率。预计该量将落在一个相对较宽的范围内，可以通过常规试验确定。

与收缩功能(或心室功能)相关的术语“增加(increase)”或“增加的(increasing)”等，是指相较于患有MI的但未施用抗CD14拮抗剂抗体的受试者而言，患有MI的受试者在施用抗CD14拮抗剂抗体之后，该受试者的收缩功能至少具有小的但可测量到的增加。通常，增加是统计学上显著的增加。在一些实施方案中，收缩功能增加至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％或更多。相反，与收缩功能障碍(或心室功能障碍)相关的“降低(decrease)”、“降低的(decreasing)”、“减少(reduce)”或“减少的(reducing)”等是指，相较于患有MI的但未施用抗CD14拮抗剂抗体的受试者而言，患有MI的受试者在施用抗CD14拮抗剂抗体之后，该受试者的收缩功能至少具有虽然小，但可测量到的降低或减少。通常，降低是统计学上显著的降低。在一些实施方案中，收缩功能降低至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或更多。可以使用本领域已知的任何方法评估收缩功能(或功能障碍)。在一个示例中，收缩功能通过超声心动描记术评估，其中一个或多个2维或3维参数(例如，舒张末期面积、收缩末期面积、面积变化、纵向缩短分数、舒张末期容积、收缩末期容积、每搏输出量、心搏出量和/或射血分数)用作收缩功能的指标，如以下实施例所证明。

通过“分离的”，意指材料基本上或实质上不含在其天然状态中通常伴随其的组分。

如本文所用，术语“配体”是指能够结合受体的任何分子。

术语“心肌梗塞”或MI是指心脏肌肉或心肌因局部缺血而导致的组织死亡(即，梗塞)。MI可以由本领域技术人员基于公认的标准进行诊断，例如在心肌梗塞的第四个通用定义(Fourth Universal Definition of Myocardial Infarction)所示(Thygesen等人，2018,Circulation,138:e618–e651)。例如，当通过异常心脏生物标记物检测到急性心肌损伤的存在(例如，心肌钙蛋白I(cTnI)和T(cTnT)，当cTn的血液水平升高到参考上限(URL)的99百分位值以上时，定义心肌损伤的存在)，并伴有急性心肌缺血的证据时(例如，ECG提示或出现缺血症状，如在运动或休息期间的胸部、上肢、下颌骨或上腹不适，或缺血等同事件，如呼吸困难或疲劳)，可以在临床环境中诊断出MI。

MI可根据病因和情况分为以下类型：1型：由以下造成的自发性MI：原发性冠状动脉事件导致的局部缺血(例如，斑块破裂、侵蚀或裂隙；冠状动脉夹层)；2型：由于需氧量增加(例如，高血压)或供应降低(例如，冠状动脉痉挛或栓塞、心律失常、低血压)导致的局部缺血；3型：与不可预料的心源性猝死有关；4a型：与经皮冠状动脉介入治疗相关(心肌梗塞的体征和症状，cTn值>5×99百分位数的URL)；4b型：与有记录的支架内血栓形成相关；以及5型：与冠状动脉旁路移植术相关(心肌梗塞的体征和症状，cTn值>10×99百分位数的URL)。

根据ECG上是否存在ST段抬高或Q波，MI也可以分类为ST段抬高性心肌梗塞(STEMI)或非ST段抬高性心肌梗塞(非STEMI)。

提及时间段的术语“MI后”指的是MI的第一个症状发作后(例如，胸部压力或紧绷感；胸部、背部、下巴和其他上半身的区域疼痛；呼吸急促)的时间段。因此，例如，提及“MI后12小时”是指MI症状发作后的12个小时。

提及时间段的术语“MI诊断后”指的是MI诊断后的时间段，如由医院或其他医疗机构的执业医师诊断为MI之后的时间段。因此，例如，提及“MI诊断后12小时”是指诊断为MI之后的12个小时。

“药学上可接受的载体”是指药物载剂，其包含不是生物学上或其他方面不可取的材料，即，该材料可以与选择的活性剂一起施用至受试者，而不会引起任何或实质性的不良反应。载体可以包括赋形剂和其他添加剂，如稀释剂、洗涤剂、着色剂、润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂、防腐剂、转染剂等。

类似地，本文提供的化合物的“药理学上可接受的”盐、酯、酰胺、前药或衍生物不是在生物学上或其他方面不可取的盐、酯、酰胺、前药或衍生物。

术语“多核苷酸”、“遗传物质”、“遗传形式”、“核酸”和“核苷酸序列”包括RNA、cDNA、基因组DNA、合成形式和混合聚合物，包括有义链和反义链，并且可以是化学或生物化学修饰的或可以包含非天然或衍生的核苷酸碱基，如本领域技术人员将容易理解的那样。

术语“促炎介质”是指有利于炎症的免疫调节剂。此类试剂包括细胞因子，如趋化因子、白介素(IL)、淋巴因子和肿瘤坏死因子(TNF)以及生长因子。在具体实施方案中，促炎介质是“促炎细胞因子”。通常，促炎细胞因子包括IL-1α、IL-1β、IL-6和TNF-α，其主要负责早期反应。其他促炎介质包括LIF、IFN-γ、IFN-β、IFN-α、OSM、CNTF、TGF-β、GM-CSF、TWEAK、IL-11、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-8、IL-16、IL-22、IL-23、IL-31和IL-32(Tato等人，2008.Cell132:900；Cell 132:500，Cell 132:324)。促炎介质可以作为内源性热原(IL-1、IL-6、IL-17、TNF-α)，通过巨噬细胞和间充质细胞(包括成纤维细胞、上皮和内皮细胞)上调二级介质和促炎细胞因子的合成、刺激急性期蛋白的产生或吸引炎性细胞。在具体实施方案中，术语“促炎细胞因子”涉及TNF-α、IL-1α、IL-6、IFNβ、IL-1β、IL-8、IL-17和IL-18。

本文提及“单剂”的CD14拮抗剂抗体是指在MI之后仅向受试者施用一剂的抗体，例如，一次弹丸注射或一次离散输注抗体。在受试者患有再一次MI的情况下，可以为该再一次的MI向受试者施用单剂的抗体。因此，提及单剂意味着，对于每次MI，受试者仅接受一剂抗体。

如本文所用，术语“全身施用(systemic administration)”或“全身施用地(administered systemically)”或“全身施用的(systemically administered)”是指将试剂引入受试者的中枢神经系统之外。全身施用包括除直接施用至脊髓或脑以外的任何施用途径。因此，很明显，鞘内和硬膜外施用以及颅内注射或植入不在术语“全身施用”或“全身施用地”或“全身施用的”的范围内。本文所述的试剂(例如，抗体)或药物组合物可以以任何可接受的形式全身施用，如片剂、液体、胶囊、粉末等；通过静脉内、腹膜内、肌内、皮下或肠胃外注射；通过透皮扩散或电泳；以及通过微型泵或其他植入的延长释放装置或制剂施用。根据一些实施方案，全身施用通过选自腹膜内、静脉内、皮下和鼻内施用及其组合的途径进行。

在本文中可互换使用的术语“受试者”、“患者”和“个体”是指任何受试者，特别是脊椎动物受试者，甚至更特别是患有MI的哺乳动物受试者(例如，人)。

如本文所用，术语“治疗(treatment)”、“治疗的(treating)”等是指在需要治疗的受试者(即患有MI的受试者)中获得期望的药理和/或生理作用。“治疗”是指改善或预防MI的一种或多种症状或影响(例如，后果)。在具体示例中，治疗包括改善或预防对心脏肌肉的损伤(例如，心肌；例如，限制梗塞尺寸、限制或预防纤维化)，和/或改善或预防心脏功能的降低(例如，收缩功能、收缩特性、血液动力学功能等)。提及“治疗(treatment)”、“治疗(treat)”或“治疗的(treating)”并不一定意味着逆转或预防MI的任何或所有症状或影响。例如，受试者可以最终患有一种或多种症状或受到一种或多种影响，但与没有治疗相比，症状或影响的数量和/或严重性减少，和/或心脏的功能提高或生活质量提高。

除非另有具体说明，否则本文描述的每个实施方案将被比照适用于每个和每一个实施方案。

2.CD14拮抗剂抗体

本公开提供包含CD14拮抗剂抗体的方法、用途和组合物，用于治疗受试者的MI。本公开还提供用于治疗MI的包含CD14拮抗剂抗体的方法、用途和组合物。

本公开考虑任何CD14拮抗剂抗体，其结合CD14(如，人CD14(例如，人mCD14或sCD14))并阻断DAMP或PAMP与CD14结合，和/或结合CD14并抑制或降低CD14激动剂介导的导致促炎介质产生(包括促炎细胞因子产生)的反应。此类CD14拮抗剂抗体是本领域公知的，任一个都可以用于本公开的方法和用途。在一些实施方案中，本发明的CD14拮抗剂抗体抑制CD14激动剂(合适地为DAMP或PAMP)与CD14的结合，从而抑制或降低促炎细胞因子的产生。在这种类型的说明性示例中，CD14拮抗剂抗体选自3C10抗体，其结合包含在人CD14的氨基酸7至氨基酸14的区的至少一部分中的表位(van Voohris等人，1983.J.Exp.Med.158:126-145；Juan等人，1995.J.Biol.Chem.270(29):17237-17242)；MEM-18抗体，其结合包含在CD14的氨基酸57至氨基酸64的区的至少一部分中的表位(Bazil等人，1986.Eur.J.Immunol.16(12):1583-1589；Juan等人，1995.J.Biol.Chem.270(10):5219-5224)；4C1抗体(Adachi等人，1999.J.Endotoxin Res.5:139–146；Tasaka等人，2003.Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol.；2003.29(2)：252-258)，以及抑制LPS结合和压制促炎细胞因子产生的28C5和23G4抗体；以及部分抑制LPS结合和压制促炎细胞因子产生的18E12抗体(Leturcq等人的美国专利第5,820,858、6,444,206和7,326,569号)。在一些实施方案中，本公开的CD14拮抗剂抗体抑制CD14与TLR(如TLR4)的结合，从而阻断CD14激动剂介导的反应，其示例性示例包括国际公布WO2002/42333中公开的F1024抗体。其他CD14拮抗剂抗体包括单链抗体scFv2F9和相关的人鼠嵌合抗体Hm2F9(Tang等人，2007,ImmunopharmacolImmunotoxicol 29,375–386；和Shen等人，2014,DNA Cell Biol.33(9):599-604)。CD14拮抗剂抗体的其他示例包括抗人CD14 18D11 IgG1 mAb、18D11 IgG1 F(ab)’2片段和嵌合的r18D11抗体(IgG2/4)(参见，例如Lau等人，2013,J Immunol 191:4769-4777)。上述与CD14拮抗剂抗体相关的每篇参考文献均通过引用整体并入本文。CD14拮抗剂抗体可以是全长免疫球蛋白抗体、或完整抗体的抗原结合片段，其代表性示例包括Fab片段、F(ab')2片段、由VH和CH1结构域组成的Fd片段、由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段，单结构域抗体(dAb)片段(Ward等人，1989.Nature 341:544-546),其由VH结构域组成；和分离的CDR。合适地，CD14拮抗剂抗体是嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。

在一些实施方案中，CD14拮抗剂抗体包含美国专利第5,820,858号公开的抗体的VH和VL：

(1)抗体，其包含：VL结构域，其包含以下序列、由或基本上由以下序列组成：

以及VH结构域，其包含以下序列、由或基本上由以下序列组成：

(2)抗体，其包含：VL结构域，其包含以下序列、由或基本上由以下序列组成：

以及VH结构域，其包含以下序列、由或基本上由以下序列组成：

和/>

(3)抗体，其包含：VL结构域，其包含以下序列、由或基本上由以下序列组成：

以及VH结构域，其包含以下序列、由或基本上由以下序列组成：

还考虑了包含上述抗体和相关抗体的VL和VH CDR序列的抗体，其代表性实施方案包括：

(1)抗体，其包含：a)抗体VL结构域或其抗原结合片段，其含有L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3，其中：L-CDR1包含序列RASESVDSFGNSFMH[SEQ ID NO:7](3C10 L-CDR1)；L-CDR2包含序列RAANLES[SEQ ID NO:8](3C10 L-CDR2)；以及L-CDR3包含序列QQSYEDPWT[SEQ ID NO:9](3C10 L-CDR3)；以及b)抗体VH结构域或其抗原结合片段，其含有H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3，其中：H-CDR1包含序列SYAMS[SEQ ID NO:10](3C10 H-CDR1)；H-CDR2包含序列SISSGGTTYYPDNVKG[SEQ ID NO:11](3C10 H-CDR2)；以及H-CDR3包含序列GYYDYHY[SEQ IDNO:12](3C10 H-CDR3)；

(2)抗体，其包含：a)抗体VL结构域或其抗原结合片段，其含有L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3，其中：L-CDR1包含序列RASESVDSYVNSFLH[SEQ ID NO:13](28C5 L-CDR1)；L-CDR2包含序列RASNLQS[SEQ ID NO:14](28C5L-CDR2)；以及L-CDR3包含序列QQSNEDPTT[SEQ ID NO:15](28C5 L-CDR3)；以及b)抗体VH结构域或其抗原结合片段，其含有H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3，其中：H-CDR1包含序列SDSAWN[SEQ ID NO:16](28C5 H-CDR1)；H-CDR2包含序列YISYSGSTSYNPSLKS[SEQ ID NO:17](28C5 H-CDR2)；以及H-CDR3包含序列GLRFAY[SEQ IDNO:18](28C5 H-CDR3)；

(3)抗体，其包含：a)抗体VL结构域或其抗原结合片段，其含有L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3，其中：L-CDR1包含序列RASESVDSYVNSFLH[SEQ ID NO:13](IC14 L-CDR1)；L-CDR2包含序列RASNLQS[SEQ ID NO:14](IC14L-CDR2)；以及L-CDR3包含序列QQSNEDPYT[SEQ ID NO:27](IC14 L-CDR3)；以及b)抗体VH结构域或其抗原结合片段，其含有H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3，其中：H-CDR1包含序列SDSAWN[SEQ ID NO:16](IC14 H-CDR1)；H-CDR2包含序列YISYSGSTSYNPSLKS[SEQ ID NO:17](IC14 H-CDR2)；以及H-CDR3包含序列GLRFAY[SEQ IDNO:18](IC14 H-CDR3)；以及

(4)抗体，其包含：a)抗体VL结构域或其抗原结合片段，其含有L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3，其中：L-CDR1包含序列RASQDIKNYLN[SEQ ID NO:19](18E12 L-CDR1)；L-CDR2包含序列YTSRLHS[SEQ ID NO:20](18E12L-CDR2)；以及L-CDR3包含序列QRGDTLPWT[SEQ ID NO:21](18E12L-CDR3)；以及b)抗体VH结构域或其抗原结合片段，其含有H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3，其中：H-CDR1包含序列NYDIS[SEQ ID NO:22](18E12 H-CDR1)；H-CDR2包含序列VIWTSGGTNYNSAFMS[SEQ ID NO:23](18E12 H-CDR2)；以及H-CDR3包含序列GDGNFYLYNFDY[SEQ ID NO:24](18E12 H-CDR3)。

在一些实施方案中，CD14拮抗剂抗体是人源化的。在这种类型的说明性示例中，人源化CD14拮抗剂抗体适当地包含与CD14拮抗剂抗体(例如，上述CD14拮抗剂抗体之一)对应的供体CDR集以及人接受体框架。人接受体框架可以包含相对于人种系接受体框架在关键残基中的至少一个氨基酸取代，所述关键残基选自：与CDR相邻的残基；糖基化位点残基；稀有残基；规范残基；在重链可变区和轻链可变区之间的接触残基；在Vernier区内的残基；以及在Chothia定义的VH CDR1和Kabat定义的第一重链框架之间的重叠区中的残基。用于生产人源化的mAb的技术是本领域公知的(参见，例如，Jones等人，1986.Nature 321:522-525；Riechmann等人1988.Nature 332:323-329；Verhoeyen等人，1988.Science 239:1534-1536；Carter等人，1992.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:4285-4289；Sandhu,JS.,1992.Crit.Rev.Biotech.12:437-462和Singer等人，1993.J.Immunol.150:2844-2857)。可以将来自小鼠免疫球蛋白的重链和轻链可变链中的小鼠CDR转移到人抗体的相应可变结构域中，以人源化嵌合或鼠单克隆抗体。嵌合单克隆抗体中的小鼠框架区(FR)也被替换为人FR序列。由于简单地将小鼠CDR转移到人FR中通常会导致抗体亲和力减少甚至丧失，因此可能需要进行额外的修饰才能恢复鼠抗体的原始亲和力。这可以通过以下实现：将FR区中的一个或多个人残基替换为其鼠对应物，以获得对其表位具有良好结合亲和力的抗体。参见，例如，Tempest等人(1991.Biotechnology 9:266-271)和Verhoeyen等人(1988同上)。通常，那些不同于其鼠对应物并且位于靠近或接触一个或多个CDR氨基酸残基的人FR氨基酸残基将是替换的候选物。

在一个实施方案中，CD14拮抗剂抗体是IC14抗体(Axtelle等人，2001.J.Endotoxin Res.7:310-314；和美国专利申请第2006/0121574号，其通过引用整体并入本文)或其抗原结合片段。IC14抗体是嵌合(鼠/人)单克隆抗体，其特异性地结合人CD14。IC14衍生自上述鼠28C5，并包含IgG4重链(参见Leturcq等人的专利第5,820,858、6,444,206和7,326,569号，以及Leturcq等人，1996.J.Clin.Invest.98:1533-1538)。因此，在一个示例中，CD14拮抗剂抗体包含如上所述的IC14重链和轻链CDR。在另一个示例中，CD14拮抗剂抗体包含VL结构域和VH结构域，其中：

VL结构域包含氨基酸序列：

和

VH结构域包含氨基酸序列：

或者

VL结构域包含氨基酸序列：

和

VH结构域包含氨基酸序列：

在另一个示例中，CD14拮抗剂抗体包含IC14的轻链和重链，其中：

轻链包含氨基酸序列：

以及

重链包含氨基酸序列：

或者

轻链包含氨基酸序列：

以及

重链包含氨基酸序列：

适用于本文方法的其他CD14的拮抗剂抗体可以通过本领域技术人员公知的方法识别。这些方法通常包括确定抗体是否能够直接拮抗CD14。例如，该方法可以包括确定抗体是否能够抑制或降低CD14的量或激动剂活性，其中抑制或降低CD14的量或激动剂活性的能力表明该抗体可以适用于治疗MI。在一些实施方案中，抗体与CD14、或在其表面表达CD14的细胞、或表达CD14的核酸序列接触，适当地在CD14激动剂(如DAMP或PAMP)的存在下，当与对照相比时，其中在激动剂存在下，CD14的量或激动剂活性降低表示抗体结合CD14并直接拮抗CD14。CD14激动剂活性的降低或抑制包括，例如抑制或降低下游通路(如TLR信号传导通路(例如，TLR4信号传导通路)和TRIF通路)的激活，或引起细胞反应(例如，产生促炎介质，包括促炎细胞因子)。

这些方法可以在体内、离体或体外进行。特别地，使抗体与CD14、或使抗体与在其表面表达CD14的细胞(例如，免疫细胞)接触的步骤可以在体内、离体或体外进行。该方法可以在基于细胞的系统或无细胞的系统中进行。例如，该方法可以包括将在其表面表达CD14的细胞与抗体接触的步骤，以及确定细胞与抗体的接触是否导致CD14的量降低、或激动剂活性降低的步骤。在这种基于细胞的测定中，CD14和/或抗体可以是宿主细胞内源性的、可以被引入宿主细胞或组织中、可以通过引起或允许表达构建体或载体的表达被引入宿主细胞或组织中、或可以通过刺激或激活细胞中内源基因的表达而被引入宿主细胞。在这种基于细胞的方法中，可以在存在或不存在抗体的情况下评估CD14的活性量，以确定该试剂是否正在改变细胞中CD14的量，如通过调节细胞中的CD14表达、或通过细胞内CD14蛋白的去稳定化、或改变细胞的CD14激动剂活性。在存在抗体的情况下，存在降低的CD14激动剂活性或细胞表面降低的CD14量，表明该抗体可以是用于根据本公开的适合的CD14的拮抗剂。

在一些示例中，进一步确定该抗体是否缺乏与另一种细胞成分的实质性或可检测的结合，适当地是CD14的结合伴侣，如分泌的(例如，MD2)或位于细胞膜上的CD14结合伴侣(例如，TLR4)，从而确定该抗体是CD14的特异性拮抗剂。在这种类型的非限制性示例中，在CD14激动剂(如DAMP或PAMP)存在的情况下，(1)抗体接触在其表面表达CD14的野生型细胞(例如，免疫细胞，如巨噬细胞)；以及(2)抗体接触CD14阴性细胞(例如，与(1)相同但CD14基因功能丧失的免疫细胞)。如果该抗体抑制野生型细胞而非CD14阴性细胞的CD14激动剂活性，则表明该抗体是CD14特异性拮抗剂。这种类型的细胞可以使用常规方法或动物来构建。

在其他示例中，潜在的CD14拮抗剂抗体在体内评估，如在动物模型中。在这样的体内模型中，可以评估抗体在循环(例如，血液)、或心脏、或在其他器官(例如肺、肝、肾或脑)中的作用。在具体示例中，MI模型用于评估抗体的活性。

与没有抗体的情况相比，示例性的CD14拮抗剂抗体使CD14活性或水平降低至少5％、至少10％、至少25％、至少50％、至少60％、至少75％、或至少85％或更多。在一些示例中，该抗体可以导致CD14激动剂活性或水平降低，使得CD14的激动剂活性或水平在该抗体存在下不再可检测到。这种降低可以在受测试的样本中看到，或者例如，在执行该方法的动物模型中看到。

优选地，抗体是如上所述的CD14的特异性拮抗剂。然而，这并不意味着特异性的CD14拮抗剂完全没有脱靶拮抗剂活性。在这方面，CD14的特异性拮抗剂对其他细胞成分的直接结合和影响可以忽略不计或很小，因此，相较于该试剂对CD14的活性、信号传导或表达的直接结合和影响，该试剂对非CD14细胞成分的活性、信号传导或表达的拮抗作用低于小于15％、小于10％、小于5％、小于1％或小于0.1％。

CD14的水平或量可以通过评估CD14基因的表达来测量。可以通过观察mRNA产生或水平、或蛋白产生或水平以评估基因表达。可以通过本领域已知的方法识别或定量表达产物，如mRNA和蛋白。此类方法可利用杂交以特异性识别感兴趣的mRNA。例如，此类方法可以涉及PCR或实时PCR方法。识别或定量感兴趣的蛋白的方法可以涉及使用结合该蛋白的抗体。例如，此类方法可以涉及蛋白印迹。可以在存在和不存在抗体的情况下，比较CD14基因表达的调节。因此，与不存在抗体时所见的水平相比，可以识别出来使CD14基因表达降低的抗体。根据本公开，此类抗体可以是合适的CD14拮抗剂。

用于识别根据本公开使用的合适的拮抗剂抗体的方法可以评估CD14的激动剂活性。例如，这种方法可以使用外周血单核细胞进行。此类细胞将产生细胞因子，如IL-1α、IL-6、TNF-α、IFN-β、IL-1β、IL-17和IL-8，以响应用例如LPS的刺激。因此，方法可以包括将外周血单核细胞与抗体或载剂结合并添加LPS。然后，可以将细胞孵育一定时间(例如，24小时)以允许产生促炎介质，如细胞因子。然后，可以评估细胞在该时间段内产生的细胞因子的水平，如IL-1α、IL-6、TNF-α、IFN-β、IL-1β、IL-17和IL-8。如果抗体具有抗CD14特性，则与载剂处理的细胞相比，此类细胞因子的产生应该减少。

3.辅助剂和介入治疗

CD14拮抗剂抗体可以单独施用，或与其他活性剂(也称为“辅助剂”)、或其他介入治疗(如用于治疗MI的试剂和介入治疗)联合施用。

适用于本公开目的的辅助剂包括，例如，纤维蛋白溶解剂、β阻滞剂、高强度他汀类药物(例如，阿托伐他汀(atorvastatin)或瑞舒伐他汀(rosuvastatin))、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂和血小板抑制剂。

在一个示例中，辅助剂是β阻滞剂(或β-肾上腺素受体拮抗剂)。合适的β阻滞剂可以是非选择性的或β-1选择性的。非选择性试剂与β-1和β-2受体结合，通过这两种受体诱导拮抗作用。非选择性β阻滞剂的非限制性示例包括普萘洛尔(propranolol)、卡维地洛(carvedilol)、索他洛尔(Sotalol)和拉贝洛尔(labetalol)。β-1受体选择性阻滞剂仅与β-1受体结合，包括，例如阿替洛尔(atenolol)、比索洛尔(bisoprolol)、美托洛尔(metoprolol)和艾司洛尔(esmolol)。

在其他示例中，辅助剂是纤维蛋白溶解剂，如，例如链激酶、阿尼普酶或组织型纤溶酶原激活剂(例如，替奈普酶、瑞替普酶或阿替普酶)。

在进一步的示例中，辅助剂是血小板抑制剂，如阿司匹林、P2Y12抑制剂(例如，噻氯匹定、氯吡格雷、替格瑞洛或普拉格雷)或糖蛋白IIb/IIIa受体拮抗剂。

在另一个示例中，辅助剂是ACE抑制剂。ACE抑制剂的非限制性示例包括贝那普利(benazepril)、卡托普利(captopril)、依那普利(enalapril)、福辛普利(fosinopril)、赖诺普利(Lisinopril)、莫昔普利(moexipril)、培哚普利(perindopril)、喹那普利(quinapril)、雷米普利(Ramipril)和群多普利(trandolapril)。

在另一个示例中，抗体的施用与介入治疗结合，如经皮冠状动脉介入治疗(PCI；也称为冠状动脉血管成形术)或冠状动脉旁路移植术(CABG)。优选地，PCI在MI症状出现后12-24小时内进行。

当期望联合治疗时，CD14拮抗剂抗体与一种或多种辅助剂或介入治疗分开、同时或顺序地施用。在一些实施方案中，这可以通过施用，如全身地施用包括两种类型的试剂的单一组合物或药理学制剂，或通过同时施用两种单独的组合物或制剂来实现联合治疗，其中一种组合物包括CD14拮抗剂抗体和另一种辅助剂。在其他实施方案中，用CD14拮抗剂抗体治疗可以在用辅助剂治疗之前或之后，以几分钟至几小时，或者甚至几天或几周的间隔进行。

在一些情况下，抗体和辅助剂在彼此约1-12小时内，或彼此约2-6小时内施用。然而，在其他情况下，可以期望显著延长治疗的时间段，其中在各施用之间间隔一天或多天(例如，1、2、3、4、5、6、7或8天)。在辅助剂与CD14拮抗剂抗体分开施用的实施方案中，应当理解，可以通过与CD14拮抗剂抗体使用的施用方法不同的方法施用辅助剂。在进一步的实施方案中，当对受试者进行介入治疗(例如，PCI)时，抗体在PCI的72小时内施用至受试者，如在介入治疗时、或介入治疗的12、24、36或48小时内。

当将两种或更多种试剂“结合”或“同时”施用至受试者时，它们可以在单一组合物中同时施用，或在不同组合物中同时施用，或在分开的时间在分开组合物中施用。

4.组合物

如本文所述，使用CD14拮抗剂抗体，无论是单独使用还是与辅助剂联合，都可以治疗MI。CD14拮抗剂抗体和任选的辅助剂可以单独施用，或与药学上可接受的载体一起施用。因此，本文还提供了用于治疗MI的包含CD14拮抗剂抗体的组合物。

可以使用一种或多种药学上可接受的载体、稳定剂或赋形剂(载剂)以常规方式配制CD14拮抗剂抗体，以形成本领域已知的药物组合物，特别是关于蛋白活性剂。在与组合物的其他成分相容并且对其受体(例如，患者)无害的意义上，载体是“可接受的”。合适的载体通常包括生理盐水或乙醇多元醇，如甘油或丙二醇。

抗体可以配制成中性或盐形式。药学上可接受的盐包括酸加成盐(与游离氨基形成)，其与无机酸(如盐酸或磷酸)、或有机酸(如乙酸、草酸、酒石酸和马来酸)形成。与游离羧基形成的盐也可以源自无机碱，如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙或氢氧化铁，以及源自有机碱，如异丙胺、三甲胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸和普鲁卡因。

组合物可以适当配制用于全身施用，包括静脉内、肌肉内、皮下或腹膜内施用，并且合宜地包含抗体的无菌水溶液，其优选与受体的血液等渗。此类制剂通常通过以下制备：将固体活性成分溶解在含有生理学相容物质(如氯化钠、甘氨酸等)以及具有与生理条件相容的缓冲pH的水中，以产生水溶液，并使所述溶液无菌。这些可以在单位或多剂量容器中制备，例如，密封的安瓿或小瓶。

该组合物可以掺入稳定剂，如，例如聚乙二醇、蛋白、糖类(例如，海藻糖)、氨基酸、无机酸及其混合物。稳定剂以适当的浓度和pH值用于水溶液中。调节水溶液的pH值在5.0-9.0范围内，优选在6-8范围内。在配制抗体时，可以使用抗吸附剂。其他合适的赋形剂通常可以包括抗氧化剂，如抗坏血酸。组合物可以配制为控释制剂，这可以通过使用聚合物以复合或吸附蛋白来实现。用于控释制剂的合适聚合物包括，例如聚酯、聚氨基酸、聚乙烯、吡咯酮烷、乙烯乙酸乙烯酯和甲基纤维素。另一种可能的控释方法是将抗体掺入聚合物材料的颗粒中，如聚酯、聚氨基酸、水凝胶、聚(乳酸)或乙烯乙酸乙烯酯共聚物。可选择的，不是将这些试剂掺入聚合物颗粒中，而是有可能将这些材料包入制备的微胶囊中，所述微胶囊通过以下制备，例如通过凝聚技术或通过界面聚合(例如，分别为羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)制备，或者在胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊)或在粗乳液中制备。

CD14拮抗剂抗体和任选的辅助剂也可以气雾剂的形式直接施用至气道。对于用作气溶胶，本发明的抑制剂溶液或悬浮液可以与合适的推进剂一起包装在加压气溶胶容器中，例如，烃类推进剂，如丙烷、丁烷或异丁烷与常规助剂。本发明的材料也可以非加压形式施用，如在喷雾器或雾化器中。

本领域技术人员将认识到制剂是根据它们的预期用途，即施用途径常规设计的。

5.治疗方法

本公开提供治疗患有MI的受试者的治疗方法。在一些示例中，MI是STEMI。在其他示例中，MI是NSTEMI。在进一步的示例中，MI是1型、2型、3型、4a型、4b型或5型MI。

在一些实施方案中，本公开的方法可以包括评估受试者是否患有MI，特别是是否患有NSTEMI或STEMI，和/或1型、2型、3型、4a型、4b型或5型MI，治疗在受试者确实患有MI的基础上进行(任选地是上述类型之一)。

因此，本文考虑了通过向受试者施用CD14拮抗剂抗体，以及任选施用辅助剂或进行介入治疗(例如，PCI)，以治疗受试者的MI的方法。CD14拮抗剂抗体，以及任选的辅助剂(在本文中统称为“治疗剂”)将以“有效量”施用，以实现受试者的预期目的，如减少或预防MI的一种或多种症状或后果，例如，减少或预防心脏损伤，和/或减少或预防心脏功能丧失(例如，减少或预防收缩功能障碍)。施用至患者的治疗剂的剂量应足以在受试者中实现有益反应。在一些示例中，与未施用抗体时相比，施用抗体(任选地与辅助剂一起)导致收缩功能障碍(或心室功能障碍)减少(即，与未施用抗体时相比，收缩功能或心室功能增加)。

待施用的治疗剂的数量或剂量频率可以取决于待治疗的受试者，包括其诊断(例如，MI的类型或受试者呈现的症状)、年龄、性别、体重和其一般健康状况。在这方面，用于施用的治疗剂的精确量将取决于执业医师的判断。通过常规实验，本领域技术人员将能够确定有效、无毒量的CD14拮抗剂抗体，以及任选的本文所述的辅助剂，用于施用至受试者。在具体示例中，施用至受试者的CD14拮抗剂抗体的量在0.1mg/kg至50mg/kg之间、在0.5mg/kg至40mg/kg之间、在2mg/kg至20mg/kg之间或在5mg/kg至10mg/kg之间。在具体示例中，施用至受试者的CD14拮抗剂抗体的量是(或是约)0.2、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50mg/kg。

CD14拮抗剂抗体可以作为单剂或多剂施用至受试者。在具体实施方案中，CD14拮抗剂抗体作为单剂施用(例如，单次弹丸注射或单次离散输注)。在CD14拮抗剂抗体以多剂施用的实施方案中，优选施用不超过3剂，并且这些在彼此施用的约6小时、12小时、18小时、24小时、36小时、48小时、60小时或72小时内施用。在具体实施方案中，仅施用1、2或3剂的CD14拮抗剂抗体。

在一些实施方案中，CD14拮抗剂抗体在MI后或MI诊断后达4天的任意时间施用至受试者。在一个示例中，CD14拮抗剂抗体在MI后或MI诊断后达6、8、10、12、18、24、36、48、60、72、84或96小时施用至受试者。例如，CD14拮抗剂抗体可以在MI后或MI诊断后达6、8、10、12、18、24、36、48、60、72、84或96小时以单剂施用至受试者。在另一个示例中，CD14拮抗剂抗体在MI后或MI诊断后达6、8、10、12、18、24、36、48、60、72、84或96小时以两个或更多剂施用至受试者。例如，第一剂可以在MI后或MI诊断后达24小时施用，第二剂可以在之后的24-48小时施用。

在具体示例中，CD14拮抗剂抗体在MI后的在2至96小时之间、在4至96小时之间、在6至96小时之间、在2至72小时之间、在4至72小时之间、在6至72小时之间、在2至48小时之间、在4至48小时之间、在6至48小时之间、在2至24小时之间、在4至24小时之间、在6至24小时之间、在2至18小时之间、在4至18小时之间、在6至18小时之间、在2至12小时之间、在4至12小时或在6至12小时之间施用至受试者。

在受试者接受介入治疗(如PCI)的情况下，可以在PCI时和/或PCI之后施用CD14拮抗剂抗体，例如，在PCI的6、8、10、12、18、24、36、48、60、72、84或96小时内。

为了使本发明易于理解和付诸实践，现通过以下非限制性示例来描述特定的优选的实施方案。

实施例

实施例1

在STEMI之后，抗CD14处理的效果的评估(研究1)

进行研究以评估，抗CD14拮抗剂抗体的两种不同剂的操作方案对在STEMI之后7天的小鼠心脏的影响。研究中使用的活性剂是biG53 F(ab')2抗体，其以剂量依赖的方式在功能上抑制PAMP依赖性细胞因子的产生，类似于目前用于人类研究的抗人CD14 mAb IC14中观察到的(国际专利申请第PCT/US2020/043619号)。简而言之，就在STEMI手术之前进行术前超声心动描记术，其中包括通过结扎进行55分钟的心室闭塞。在手术后1小时，通过松开结扎线进行再灌注。在再灌注之前，将biG53 F(Ab’)2以5μg/g体重(即，约150μg/30g小鼠)的剂量向小鼠施用(静脉内(i.v.)剂)，和/或在手术后24小时向小鼠施用(腹膜内(i.p)剂)，以便施用单剂或两剂。研究中包括以下小鼠组：

对照：I/R，载剂I.V.，在1小时+载剂I.P，在24小时(n＝8)

单剂：I/R，抗CD14 I.V.，在1小时，载剂I.P，在24小时(n＝8)

两剂：I/R，抗CD14 I.V.在1小时+抗CD14 I.P.在24小时(n＝8)

该研究的主要终点是STEMI手术后第7天的收缩功能的超声心动描记术检查。还研究了心肌纤维化和CD68+细胞浸润的循环促炎标记物和组织学。

A.方法

随机化和盲法

该研究是随机的、盲法研究。

心肌梗塞手术

总共33只雄性的野生型C57Bl6小鼠(2批次，分别为n＝15和n＝18)在8.5-9.5WOA下接受缺血再灌注手术。简而言之，在手术部位剃毛和插管之前，用氯胺酮(80-100mg/kg)、甲苯噻嗪(10-20mg/kg)和阿托品(1-2mg/kg)混合物麻醉小鼠。将小鼠在无菌加热垫上进行通气(0.2-0.3ml，每分钟100-140次呼吸)，制备手术部位(左胸)，皮内施用无菌布比卡因(2mg/kg)，然后使用无菌器械进行左侧开胸术。在左心耳下方约2mm，使用7-0无菌缝合线结扎左前降支冠状动脉，使用无菌环可逆地系结，在手术用6-0缝合线缝合闭合(内部肋间，外部皮肤)期间，使无菌环外露。

小鼠被转移到加热的生命体征监测站，在那里观察心电描记术(ECG)和直肠温度，同时保持通气。然后，在恢复自主呼吸后，将小鼠拔管并放回恢复笼中(将底部的一半区域加热以鼓励运动，通过行为自动调节温度)。在左前降支冠状动脉闭塞的55分钟之后，恢复的小鼠接受静脉注射biG53 F(ab’)2或载剂，然后在1小时时即刻进行再灌注(结扎释放)。

两只小鼠在手术恢复前死亡。在手术后的前5天，每天对所有剩余的小鼠进行2-3次监测。所有剩余的小鼠在24小时内完全恢复(恢复正常行为，疼痛/不适监测的基线评分)(n＝31，94％的手术小鼠)。

在24小时通过超声心动描记术筛查STEMI模型：相对组织移位

手术后24小时，剩余的全部31只小鼠都接受超声心动描记术以评估风险区域。简而言之，用异氟醚(诱导：在室内空气中3-4.5％，维持：在室内空气中1-2％)麻醉小鼠，并放置在加热的铰接式ECG平台上。使用

2100系统(Visualsonics，Fujifilm，加拿大)通过超高频超声探头(MS-550D)获得门控(EKG)的和非门控的胸骨旁长轴的影像回放(long-axis cine loop)。所有小鼠均按预期恢复。使用制造商的VevoLAB软件进行分析，以区分长轴上的非活动和活动的相对径向组织移位。不活动/零相对组织移位为缺血面积/梗塞尺寸提供了严格的替代指标，用于排除具有小的/不规则梗塞的小鼠(例如，由于冠状动脉的遗漏结扎或侧枝分支造成的)。/>

本研究仅包括左心室组织移位为45±10％的小鼠(n＝13，第1批；n＝13，第2批)。总共26只(84％)手术恢复的小鼠被纳入研究以进行所有评估(A组：n＝10；B组，n＝8；C组：n＝8)。额外的预定排除标准适用于该项目(即，技术不充分的数据)，但是没有额外的数据需要排除。

在第7天，收缩功能的超声心动描记术分析

如上所述，进行左心室超声心动描记术成像以获得左胸骨旁长轴环。在心内膜边界追踪左心室舒张末期和收缩末期面积。从这些面积，舒张末期、收缩末期和每搏输出量；心搏出量和射血分数是根据软件(VevoLAB 3.2.5，Visualsonics，Fujifilm，加拿大)中的公式计算的。

在第7天进行的尸检

在手术后第7天，进行超声心动描记术检查后，用氯胺酮、甲苯噻嗪和阿托品麻醉小鼠，然后再进行心脏穿刺和二次安乐死(颈椎脱位)。从每只小鼠身上平均采集1.1±0.1ml全血，并进行全面尸检。

组织收集(第7天)和组织学

切除整个心脏，使用手术显微镜(ZEISS OPMI Pico，Carl Zeiss Meditec AG，德国)拍照，然后解剖四个腔室。测量左心室(LV)的长度，并在其纵向中点处进行横向切片，固定在10％的中性缓冲的福尔马林中。

固定48-72小时后，将每个LV包埋在石蜡中并进行切片。简而言之，将石蜡块修剪成全部为切面的组织，在5×玻片上收集5×4μm的切片。将石蜡块再次修剪为250μm，将5×4μm切片与第一次的切片一起收集(在同样的5个玻片中)。重复这种250μm修剪和5×4μm切片，直到组织消耗完、或在每张玻片上收集5个切片。

在明场扫描之前，在每个LV的一张玻片上进行Masson的三色染色。在暗视野扫描之前，使用针对CD68(Abcam，Ab125212)、肌钙蛋白I(Invitrogen，MA5-12960)和DAPI的抗体对来自每个LV的另一张玻片进行免疫荧光染色。对每个LV使用相同的设置执行所有明场扫描，对每个LV使用相同的设置执行所有暗场扫描。

Masson的三色和免疫荧光图像分析是使用自动化(宏观)方法进行的。简而言之，对于Masson的三色分析，通过分开红色和蓝色通道，将纯蓝色区域(阳性)与红色/蓝色区域(阴性)划分开来，对解剖学上等同的心室中部切片(在乳头肌水平上)进行分析。阳性阈值设置为0-100或0-130，总组织阈值设置为0-230。

对于免疫荧光(CD68+细胞)分析，使用DAPI染色的细胞核(通道1)进行细胞水洗，分析CD68抗体(通道2)的共定位，平均强度阈值为0-750，肌钙蛋白T(通道3)总组织阈值为150。

B.结果

心肌梗塞的急性评估：缺血后第一个24小时

术后心电描记术

本试验研究中包括的所有26只小鼠均被证实在心肌梗塞手术后出现ST段抬高/中断。注意到，在每组之间ECG记录在形态学上相似。

相对壁移位的超声心动描记术评估

在24小时，对相对组织移位的超声心动描记术评估再次确认每个心脏(左心室)的连续(successful)梗塞。相对组织移位的分析显示三组小鼠之间没有差异(分别为44±5、47±4、44±4；平均值±SD，p>0.05)。

心肌梗塞的亚急性评估：缺血后第7天

左心室容积和功能的超声心动描记术评估

在STEMI手术后第7天，在超声心动描记术时在各组之间的心率相似(表1，p>0.05)。通过超声心动描记术评估，两剂组具有提高的收缩功能，左心室面积变化(LVAC；21±4vs.16±3％，对照，p<0.05)和纵向缩短分数(8.3±1.4vs.6.4±1.1％对照，p<0.05)(图1和表1)。在单剂组中观察到非显著的中度的变化(p>0.05)。

在两剂组中观察到，射血分数相关但非显著的绝对增加6％(29±7与对照组中的23±5，p>0.05)，收缩功能相对增加约25％的趋势，对应于在LVAC中观察到的约30％的显著的相对提高。

表1.

在对照组和两剂组之间*p<0.05。NSD—无显著差异

尸检生物统计学

在尸检时，观察到在各组之间所有器官重量参数相似(表2)。在尸检时发现，对照组中的一只小鼠患有心房血栓，但在任一处理组中均未发现。通常在STEMI小鼠模型中观察到心力衰竭。

血清分析

通过多重分析(R&D Systems，Mulitplex Tool)分析来自每组的代表性样本，以确定用于随后的ELISA分析的分析物的范围。多重测定返回的所有值均小于检测限(未检测到；N.D.)。随后使用针对TNF-α和IL-1β的高灵敏度ELISA试剂盒(Invitrogen，88-7013-22)，标准曲线扩展到较低的检测限～2pg/ml(制造商推荐的限度8pg/ml)。尽管ELISA具有高灵敏度范围，并成功建立了用于内插的标准曲线，但两种分析物的所有样本值均低于可检测范围。

组织学

对每组小鼠的心室中部进行Masson三色明场成像，以可视化间质和斑块纤维化，并将该区域与非纤维化组织区分开来，从而提供纤维化面积的半定量分析(以总面积的百分比表示)。虽然在每组中都观察到纤维化，但组间的纤维化百分比没有统计学差异(表2)。

表2

	对照	单剂	两剂	差异
					n	8	8	10
总计(所有10个切片)
					总面积(mm2)	40.9±7.9	39.6±6.3	41.5±5.6	NSD
阳性面积(mm2)	6.5±1.4	5.5±2.1	6.5±2.2	NSD
					纤维化(占总面积的百分比)	16±2	14±3	16±4	NSD
心室中部切片(单个切片)
					总面积(mm2)	4.3±1.0	3.9±1.0	3.7±0.5	NSD
阳性面积(mm2)	0.7±0.3	0.8±0.3	0.7±0.1	NSD
					纤维化(占总面积的百分比)	17±3	19±5	20±4	NSD

平均值±SD。NSD—无显著差异

对心室中部切片进行免疫荧光成像以可视化CD68+细胞，提供CD68+细胞占总细胞百分比的半定量分析。虽然在心肌中观察到显著的梗塞周围的CD68+细胞浸润，但各组之间没有差异(表3)。

表3

平均值±SD。NSD—无显著差异

C.讨论

STEMI和随后的经皮冠状动脉介入治疗(再灌注)在急性/亚急性期引起过度的心脏炎症和工作心肌细胞的损失。这引起了纤维化和心脏重塑的进行性过程，导致心力衰竭发展。

在STEMI的整个急性和亚急性期，巨大的双期(bi-phasic)炎性反应驱动疾病，然后进行修复。迄今为止的研究一直集中在用“钝性”药理学试剂以抑制这种炎症。然而，这些抗炎药可以通过非选择性抑制所有白细胞的活性(包括参与损伤消退和组织修复的活性)，破坏了修复过程。因此，选择性地抑制损伤(同时保留修复的抗炎性)细胞和过程的介入治疗，可以减少急性损伤以及与STEMI后心力衰竭相关的心脏重塑和功能丧失的程度。

损伤相关的分子模式(DAMP)分子是在急性STEMI期间由损伤的心肌细胞释放，导致驻留的促炎性巨噬细胞从血液中吸引循环白细胞(主要是中性粒细胞)。在损伤和坏死细胞被吞噬后，这些嗜中性粒细胞发生凋亡，从而促进组织修复的消退期。CD14是许多模式识别受体的重要辅因子，其在多种细胞类型中促进DAMP驱动的炎症。抑制CD14减少了促炎细胞因子，但没有减少抗炎细胞因子。

进行本研究以确定，CD14的作用是否可以使其成为在STEMI相关炎症的急性环境中的良好治疗靶点。据推测，短期抑制CD14可以减少与心肌梗塞相关的过度炎症，并减轻小鼠心脏的后续损伤、纤维化和重塑。该研究表明，靶向CD14确实对MI具有治疗作用。

超声心动描记术-以高置信度观察到，两剂的抗CD14处理在左心室面积变化和纵向缩短分数方面均有约30％的显著的相对提高。所有采集和分析均采用盲法进行，折回的(replicate)观察者间相关性达到行业领先标准(斜率＝1.0-1.1，r＝0.94)。此外，舒张末期与整个心脏重量的相关性进一步支持这些发现的可信度(r＝0.9)。

血清分析和组织学——在7天终点时，多重或高灵敏度ELISA测定均未检测到促炎细胞因子。这很可能与具有M1样特征的蛋白水解巨噬细胞的暂时性阶段性急性浸润有关，在小鼠中在心肌梗塞后的前1至3天内伴随促炎细胞因子的释放，这在心肌梗塞后4至14天的亚急性“消退期”期间缓慢(bluntly)减少。

在没有循环促炎生物标记物的情况下，在第7天观察到的梗塞的小鼠心脏的心肌中CD68+细胞的显著浸润表明，这些巨噬细胞主要具有M2样特征，并参与损伤心肌的消退。这也表明抗CD14的两剂操作方案处理不会抑制M2样巨噬细胞的浸润。

总的来说，这项研究首次提供了体内证据：在STEMI之后，用抗CD14抗体处理小鼠有亚急性心脏保护作用。在两剂组(在再灌注时和再灌注后24小时均施用了5μg/g的抗CD14抗体)中，最清楚地观察到这种心脏保护作用(在第7天时保持收缩功能)，然而在单剂组中观察到较少程度的这种心脏保护作用。

实施例2

评估CD14在M1/M2分化中的作用

之前的研究表明，在MI之后使用抗CD14处理不会抑制M2样巨噬细胞的浸润。为了进一步评估靶向CD14对M1分化的影响，使用iPSC衍生的巨噬细胞进行研究以评价IC14(特异于人CD14的临床级抗体)阻断M1通路分化的能力。

A.材料和方法

来自健康供体的诱导多能干细胞(iPSC)是从Cedars-Sinai医疗中心理事会再生医学研究所的iPSC中心获得的。根据Yanagimachi等人(PLoS One,2013 8,1–9)的操作方案，使得iPSC分化为M0巨噬细胞。简而言之，在36天内，使用5个连续培养步骤对iPSC进行处理，首先使用BMP4诱导原条样细胞，然后使用VEGF、SCF和基础FGF产生KDR+CD34+成血管细胞样细胞，使用造血细胞因子随后产生造血细胞，使用Flt-3配体、GM-CSF和M-CSF将造血细胞分化为单核细胞谱系，最后使用M-CSF、IFN-γ和IL-4将单核细胞谱系分化为M0巨噬细胞。

通过将衍生的M0细胞以每孔50,000个细胞的浓度接种到96孔板中，并在2ng/mlIFNγ(eBioscience)和1ng/ml LPS(Sigma)的存在下，培养在含有10％ FBS的200μl RPMI1640中，使得iPSC沿着M1谱系分化。60分钟后，用浓度范围为0.01至1ug/ml的IC14(Implicit Bioscience)或人IgG4对照抗体(Biolegend)处理培养物。再过3小时后，收集细胞用于使用Trizol试剂，然后使用Direct-zol RNA MiniPrep试剂盒(Zymo Research)提取RNA。使用带有SYBR Green的一步式RT-PCR试剂盒进行定量RTPCR(qRT-PCR)实验，并使用Bio-Rad iQ5多色实时PCR检测系统运行。

B.结果

已经分化为M0细胞的iPSC，可以通过用LPS和IFNγ处理进一步诱导为M1巨噬细胞。诱导后，M1巨噬细胞表达IL-1β、TNFα、IL-6和IL-8转录本(图2)。LPS和IFNβ刺激导致这些转录本水平迅速升高，如刺激后4小时测量的那样。这项研究表明，M1分化具有CD14依赖性组分；在刺激后1小时，在这些培养物中加入IC14导致产生的IL-1β、TNFα、IL-6和IL-8降低。使用同种型对照抗体未观察到这种抑制，表明这是用IC14阻断mCD14的直接后果(图2)。

C.讨论

巨噬细胞在启动炎性过程和炎性过程消退中发挥重要作用，在促炎性和抗炎性上都起作用。这些截然不同且相反的过程导致提议巨噬细胞可以被分配到两种表型之一；经典的激活(炎性)巨噬细胞(指定为M1)或可选择的激活(或伤口愈合的)巨噬细胞(M2)。这种最初分为两个相反功能状态的分类可能过于简单，无法反映状态本身的复杂性和极化过程的可塑性。相反，将巨噬细胞极化视为是功能状态的连续体可能更加合适。现在公认巨噬细胞极化是多因素过程，其中多个因素相互作用以产生不同的激活状态。这些激活状态本身是可塑的，可以根据不断变化的环境影响进行修改。

M1和M2表型之间的平衡改变与许多疾病相关。例如，在癌症中，肿瘤内存在M2巨噬细胞和M1/M2比率降低与预后不良有关。相反，炎症和自身免疫性疾病与M1/M2比率增加有关。

尽管体内巨噬细胞极化被认为是多因素过程，但可以通过IFNγ和LPS的刺激在体外再现M1分化，这两种刺激物复制了细胞因子和TLR激动剂在炎症部位发现的激活。在这项研究中，评估了IC14阻断使用iPSC衍生的巨噬细胞沿着M1通路分化的能力。该研究表明，在M1分化的过程中，IC14可以降低所有四种关键炎症介质TNFα、IL-1β、IL-6和IL-8的产生。阻断M1巨噬细胞的发育或促进其沿可选择的保护性(M2)通路的极化，可以保护免于MI之后的病理性炎症。

实施例3

在STEMI之后，抗CD14处理的效果的评估(随访研究)

进行随访研究以评价，在STEMI之后7天，抗CD14拮抗剂抗体的两种其他剂量的操作方案对小鼠心脏的影响。研究中使用的抗CD14拮抗剂抗体是biG53抗小鼠抗CD14 mAb(即，实施例1中使用的biG53 F(ab')2的完整抗体形式)。该小鼠抗体是实施例2中描述的临床抗体(IC14)的代表性替代品。简而言之，在STEMI手术之前即刻进行术前超声心动图，其中包括通过结扎进行55分钟的心室闭塞。在手术后1小时，通过松开结扎线进行再灌注。在再灌注之前，将biG53mAb以7μg/g体重的剂量向小鼠施用(静脉内(i.v.)剂)，和/或在手术后8-12小时向小鼠施用(腹膜内i.p剂)，和/或在手术后24小时向小鼠施用(腹膜内i.p剂)，以便施用两剂或三剂。研究中包括以下小鼠组：

第1组，I/R，载剂I.V.在1小时+载剂I.P.在8至12小时+载剂I.P.在24小时(盐水对照)

第2组，I/R，1×同种型I.V.在1小时+载剂I.P.在8至12小时+同种型I.P.在24小时(2×7mg/kg剂)(同种型对照)

第3组，I/R，1×抗CD14 I.V.在1小时+载剂I.P.在8至12小时+抗CD14 I.P.在24小时(2×7mg/kg剂)

第4组，I/R，1×抗CD14 I.V.在1小时+抗CD14 I.P.在8至12小时+抗CD14I.P.在24小时(3×7mg/kg剂)

该研究的主要终点是STEMI手术后第7天的收缩功能的超声心动描记术检查。在第7天，还研究了心肌纤维化和CD68+细胞浸润的血清促炎标记物(细胞因子)和组织学，以及心脏导管插入术血液动力学测量。

A.方法

随机化和盲法

该研究是随机的、盲法研究。

使用再灌注的ST段抬高性心肌梗塞(MI)的模型

进行左前降支冠状动脉结扎以诱导1小时局部缺血，随后进行再灌注导致ST段抬高性的心肌梗塞。

心电图(ECG)

将3导联ECG导联放置在皮肤下以记录长达5分钟的ECG追踪，以确认MI后即刻和终点导管插入术期间的ST段抬高。

超声心动描记术(24小时，MI后第7天(D7))

用异氟烷麻醉小鼠(4.0％诱导，1.6-1.8％维持)，使用Vevo2100系统(Visualsonics，Fujifilm)对左心室(LV)收缩功能进行综合超声心动描记术研究。通过我们平台验证的组织移位映射技术分析24小时的超声心动描记术，以确认缺血区域同质性，这是用于筛选MI模型同质性的新兴金标准。超高频胸骨旁长轴环路(用于24小时壁移位映射的门控EKV)的所有分析均离线进行，并进行了验证。

血液采样和分析(MI后第7天)

进行心脏穿刺(用于血液采集)，并通过商用的多重免疫测定试剂盒(Bio-PlexPro，Bio-Rad Laboratories，Inc.)进行血清分析加工。

尸检和组织收集(在MI后第7天)

对所有小鼠进行全面尸检，包括心腔、肺、肾、肝和脾的重量。一旦进行心脏解剖，左心室的心室中部的横向环被用于组织学，心尖/梗塞的心室被储存在-20℃以供将来研究。

左心室组织学(MI后第7天)

进行复合切片以产生左(中)心室切片的复制玻片。组织由盲法人员加工、包埋、染色、成像和分析。染色操作方案包括苏木精和伊红(H&E)、Masson三色、天狼猩红和使用针对CD68、肌钙蛋白T和DAPI抗体的免疫荧光。

心导管插入术和血液动力学评估(MI后第7天)

小鼠用异氟烷麻醉(4.0％诱导，1.6-1.8％维持)，心内导管通过右颈动脉进入升主动脉以测量动脉压力，然后进入左心室以测量左心室压力和传导。收缩末期和舒张末期压力-容积关系通过肝下间隙压迫腹主动脉来观察。在心脏穿刺之前，使用高渗盐水输注到右颈静脉(5-10μl)以校正平行电导。然后，使用血液在已知容积的校准比色皿孔中构建电导标准曲线。离线进行综合血液动力学分析，并进行验证。

统计分析

所有数据均使用GraphPad Prism(V 7.0)使用单向ANOVA以及Tukey多重比较事后检验进行分析。使用Brown-Forsythe检验，以及在适合之处使用Kruskal-Wallis(非参数)检验，评估所有报告参数的方差同质性。所有数据在文本/表格中均以平均值±SD表示，在图中以平均值±SEM表示，以供比较。

排除标准

与手术(模型)或终点技术的不充分性相关的因素被前瞻性地定义为排除的唯一理由：

动物：未观察到ST段抬高(MI手术后即刻)和/或相对负壁移位<35或>55％(24小时回波)

终点：技术上不足以进行分析的成像/记录，例如，导管插入不成功，组织学切片/染色不成功

手术未存活没有进行再灌注(处理)的小鼠也被排除在分析之外。注意：所有死亡(n＝9)都发生在再灌注之前，即没有动物在处理后过早死亡。

B.结果

揭盲

这些组在数据收集和分析后被揭盲。这些组被识别如下：

A.同种型对照

B.3×剂的抗CD14抗体

C.盐水对照

D.2×剂的抗CD14抗体

局部缺血损伤的评估：术后第一个24小时

术后心电图

本研究中包括的所有60只小鼠(每组15只)均被证实在心肌梗塞手术后出现ST段抬高。

相对壁移位的超声心动描记术评估

在24小时，负相对壁移位的超声心动描记术评估再次确认每个心脏(左心室)的连续透壁梗塞。负移位<35％或>55％的小鼠被排除在研究之外。在组之间未观察到差异。

在手术后第7天，左心室容积和功能的超声心动描记术评估

在基线时，在一只小鼠中观察到超声心动描记术异常，未进行手术。在STEMI手术后7天，在终点超声心动描记术时，在各组之间的心率相似(数据未显示，ANOVA p＝0.371)。通过在胸骨旁长轴上追踪心内膜边界以测量舒张期和收缩期的左心室面积。基于左心室形态的双平面假设计算容积值。观察到施用抗CD14抗体的小鼠和对照小鼠之间的纵向缩短分数(数据未显示)；LV面积变化(这反映心脏的收缩功能)和射血分数(这反映从左心室泵出的血液百分比)的差异(图3和图4)。这证实了实施例1中描述的研究结果，两项研究均显示接受抗CD14抗体的小鼠中的射血分数增加约25％。在接受抗CD14抗体的小鼠中也观察到增加的每搏输出量(这反映每次心跳射出的血液量)和心搏出量(这反映每分钟泵出的血液量)(图5)。

在术后7天，左心室和动脉压的血液动力学评估

在STEMI后7天，通过导管进行血液动力学评估时，各组之间的心率相似(超声心动描记术方法之后立即进行，数据未显示，ANOVA p＝0.989)。如图6和图7所示，观察到在对照组和施用抗CD14抗体的组之间LV容积随时间变化(dV/dt最小值；反映收缩期间的峰值左心室射血率)、dV/dt最大值(反映松弛期间LV充盈率峰值)和动脉弹性(Ea)(数据未显示)；和每搏作功(其是平均主动脉压×每搏输出量的函数)的差异，表明接受抗CD14抗体的小鼠在发生STEMI后心脏功能更有效。没有观察到动脉舒张压、收缩压或脉压的差异(数据未显示)。

手术时(D0)和术后7天的生物统计

所有组在手术时(D0)的年龄相似，并且在终点(D7)时具有相似的胫骨长度。与B组和D组(抗CD14抗体组；数据未显示)相比，C组(盐水对照组)手术时的体重减轻4％-6％。在终点(D7)，也观察到这种虽小但具有统计学意义的差异。D组是唯一一个在术后7天体重显著增加的组(1.9±2.3％vs D0，P<0.01)。

在尸检时观察到，同种型对照和抗CD14抗体组(A组、B组和D组)具有相似的器官重量。与B组和/或D组相比，观察到C组具有更小的心脏、左/右心室和肾脏重量。对于在第7天测量的所有尺寸/容积参数，针对手术时的体重进行调整。

术后第7天的组织学

明场组织学：在尸检时解剖的心脏，在心室中部被切成切片。为了进行分析，使用天狼猩红染色切片评估损伤(瘢痕，包括游离壁)和非损伤(远端组织，包括室间隔)区域，以定量总切片、损伤和非损伤的阳性率。在C组(盐水对照)和D组(2×剂的抗CD14抗体)之间观察到总切片阳性率的差异。在A组和C组(对照组)以及B组和D组(抗CD14抗体组)之间，观察到非病变面积和病变尺寸(表示梗塞尺寸)的差异(图8和图9)。该组织学分析清楚地表明，与对照小鼠相比，接受抗CD14抗体的小鼠的心脏中纤维化减少(图9；其中深灰色代表胶原蛋白(染成红色)，浅灰色代表心肌(染成黄色))。

免疫荧光组织学

在整个左心室中部切片中，总细胞计数或CD68+细胞计数之间未观察到差异(数据未显示)。然而，在CD68阳性率上(CD68+细胞计数占总细胞计数的百分比)，观察到在A组和C组(对照组)相对D组(2×剂的抗CD14抗体)之间的差异，接受抗CD14抗体的小鼠显示减少的CD68阳性率(图10)。

术后7天的血清分析

通过多重分析(Bio-Plex Pro小鼠细胞因子多重测定和Bio-Plex Pro TGF-β3重测定，Bio-Rad实验室)对来自每组的随机样本子集(n＝10)进行分析。表4显示了术后7天的血清分析结果：TNF-α—肿瘤坏死因子α，IL—白介素，MCP—单核细胞趋化蛋白，TGF–肿瘤生长因子。§—值超出制造商推荐的检测限。F—方差检验的同质性失败，使用非参数分析。ND—未检测到。平均值±SD。对于任何分析物，各组之间均未观察到显著差异。这可能是由于相对较晚的时间点，在MI的前几天内更有可能看到差异，并且差异更多地局限于心脏组织本身而不是体循环。

表4

C.讨论

该研究清楚地证实，在STEMI后施用CD14拮抗剂抗体具有心脏保护作用。这在两剂组和三剂组中都观察到了。该研究的重要观察结果包括：

·与盐水对照相比，同种型对照在第7天时对左心室收缩功能没有影响；

·在任何评估中，与两剂抗CD14抗体操作方案相比，第三剂抗CD14抗体没有额外租用；

·与同种型和盐水对照相比，两剂抗CD14抗体处理导致在第7天时的左心室收缩功能(面积变化和射血分数[％])得到提高；

·与同种型对照相比，在第7天，三剂抗CD14抗体处理导致与两剂抗CD14抗体相似的左心室收缩功能提高(面积变化和射血分数[％])；

·与两个对照相比，两剂和三剂操作方案均提高了第7天时的每搏输出量和心搏出量；

·与盐水对照相比，两剂和三剂操作方案均减少了损伤尺寸(％)、纤维化和dV/dt最小值(左心室射血率)，增加了每搏作功(压力-容积环面积)；以及

·与两种对照相比，两剂抗CD14抗体减少第7天时的心肌CD68+细胞浸润。

本文引用的每篇参考文献、专利、专利申请和出版物的公开内容均通过引用其整体并入本文。

本文对任何参考文献的引用不应被解释为承认此类参考文献可作为本申请的“现有技术”。

在整个说明书中，目的是描述本发明的优选实施方案，而不将本发明限制于任何一个实施方案或特异性的特征集合。因此，本领域的技术人员将理解，根据本发明的公开，在不脱离本发明的范围的情况下，可以对所示例的具体实施方案进行各种修改和变化。所有这样的修改和变化旨在包括在所附权利要求的范围内。

序列表

<110> 隐式生物科技有限公司

<120> 用于治疗心肌梗塞的治疗方法和试剂

<130> 35565773-TKU

<150> 2020903245

<151> 2020-09-10

<160> 33

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

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<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 23

Val Ile Trp Thr Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Phe Met Ser

1 5 10 15

<210> 24

<211> 12

<212> PRT

<213> 小家鼠

<400> 24

Gly Asp Gly Asn Phe Tyr Leu Tyr Asn Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 25

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IC14 VL（短）

<400> 25

Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile

1 5 10 15

Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Val Asn Ser Phe Leu

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Arg Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Pro Val Glu Ala Asp

65 70 75 80

Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Tyr Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 26

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IC14 VH（短）

<400> 26

Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Ser Leu Ser

1 5 10 15

Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Ser Ala Trp

20 25 30

Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Arg Leu Glu Trp Met Gly Tyr

35 40 45

Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg

50 55 60

Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe Leu Gln Leu

65 70 75 80

Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Val Arg Gly

85 90 95

Leu Arg Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

100 105 110

<210> 27

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IC14 L-CDR3

<400> 27

Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Tyr Thr

1 5

<210> 28

<211> 213

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IC14轻链（短）

<400> 28

Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile

1 5 10 15

Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Val Asn Ser Phe Leu

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Arg Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Pro Val Glu Ala Asp

65 70 75 80

Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Tyr Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 29

<211> 439

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IC14重链（短）

<400> 29

Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln Ser Leu Ser

1 5 10 15

Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Ser Ala Trp

20 25 30

Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Arg Leu Glu Trp Met Gly Tyr

35 40 45

Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg

50 55 60

Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe Leu Gln Leu

65 70 75 80

Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Val Arg Gly

85 90 95

Leu Arg Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

100 105 110

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

115 120 125

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

130 135 140

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

145 150 155 160

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

165 170 175

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

180 185 190

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

195 200 205

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro

210 215 220

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

225 230 235 240

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

245 250 255

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

260 265 270

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

275 280 285

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

290 295 300

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

305 310 315 320

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

325 330 335

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

340 345 350

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

355 360 365

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

370 375 380

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

385 390 395 400

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

405 410 415

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

420 425 430

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435

<210> 30

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IC14 VL（全长）

<400> 30

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr

20 25 30

Val Asn Ser Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn

65 70 75 80

Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn

85 90 95

Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 31

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IC14 VH（全长）

<400> 31

Asp Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Arg Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe

65 70 75 80

Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Gly Leu Arg Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 32

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IC14轻链（全长）

<400> 32

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr

20 25 30

Val Asn Ser Phe Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn

65 70 75 80

Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn

85 90 95

Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 33

<211> 442

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IC14重链（全长）

<400> 33

Asp Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Ser Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Arg Leu Glu Trp

35 40 45

Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe

65 70 75 80

Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Gly Leu Arg Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro

115 120 125

Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val

130 135 140

Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala

145 150 155 160

Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly

165 170 175

Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly

180 185 190

Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys

195 200 205

Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys

210 215 220

Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

225 230 235 240

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

245 250 255

Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp

260 265 270

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

275 280 285

Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

290 295 300

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

305 310 315 320

Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

325 330 335

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu

340 345 350

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

355 360 365

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

370 375 380

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

385 390 395 400

Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn

405 410 415

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

420 425 430

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440

Claims (20)

1.一种用于治疗受试者的心肌梗塞(MI)的方法，其包括向受试者施用有效量的CD14拮抗剂抗体、由或基本上由其组成。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述CD14拮抗剂抗体在MI后达72小时施用至所述受试者。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述CD14拮抗剂抗体在MI后达12、18、24、36或48小时施用至所述受试者。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述CD14拮抗剂抗体以1、2、3或更多剂施用至所述受试者。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述CD14拮抗剂抗体是全身施用。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述MI是ST段抬高性MI(STEMI)。

7.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述MI是非ST段抬高性MI(NSTEMI)。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述CD14拮抗剂抗体选自：

(i)抗体，其包含：a)抗体VL结构域或其抗原结合片段，其含有L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3，其中：L-CDR1包含序列RASESVDSFGNSFMH[SEQ ID NO:7](3C10 L-CDR1)；L-CDR2包含序列RAANLES[SEQ ID NO:8](3C10 L-CDR2)；以及L-CDR3包含序列QQSYEDPWT[SEQ ID NO:9](3C10 L-CDR3)；以及b)抗体VH结构域或其抗原结合片段，其含有H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3，其中：H-CDR1包含序列SYAMS[SEQ ID NO:10](3C10 H-CDR1)；H-CDR2包含序列SISSGGTTYYPDNVKG[SEQ ID NO:11](3C10 H-CDR2)；以及H-CDR3包含序列GYYDYHY[SEQ IDNO:12](3C10 H-CDR3)；

(ii)抗体，其包含：a)抗体VL结构域或其抗原结合片段，其含有L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3，其中：L-CDR1包含序列RASESVDSYVNSFLH[SEQ ID NO:13](28C5 L-CDR1)；L-CDR2包含序列RASNLQS[SEQ ID NO:14](28C5L-CDR2)；以及L-CDR3包含序列QQSNEDPTT[SEQ ID NO:15](28C5 L-CDR3)；以及b)抗体VH结构域或其抗原结合片段，其含有H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3，其中：H-CDR1包含序列SDSAWN[SEQ ID NO:16](28C5 H-CDR1)；H-CDR2包含序列YISYSGSTSYNPSLKS[SEQ ID NO:17](28C5 H-CDR2)；以及H-CDR3包含序列GLRFAY[SEQ IDNO:18](28C5 H-CDR3)；

(iii)抗体，其包含：a)抗体VL结构域或其抗原结合片段，其含有L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3，其中：L-CDR1包含序列RASESVDSYVNSFLH[SEQ ID NO:13](IC14 L-CDR1)；L-CDR2包含序列RASNLQS[SEQ ID NO:14](IC14L-CDR2)；以及L-CDR3包含序列QQSNEDPYT[SEQ ID NO:27](IC14 L-CDR3)；以及b)抗体VH结构域或其抗原结合片段，其含有H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3，其中：H-CDR1包含序列SDSAWN[SEQ ID NO:16](IC14 H-CDR1)；H-CDR2包含序列YISYSGSTSYNPSLKS[SEQ ID NO:17](IC14 H-CDR2)；以及H-CDR3包含序列GLRFAY[SEQ IDNO:18](IC14 H-CDR3)；以及

(iv)抗体，其包含：a)抗体VL结构域或其抗原结合片段，其含有L-CDR1、L-CDR2和L-CDR3，其中：L-CDR1包含序列RASQDIKNYLN[SEQ ID NO:19](18E12 L-CDR1)；L-CDR2包含序列YTSRLHS[SEQ ID NO:20](18E12L-CDR2)；以及L-CDR3包含序列QRGDTLPWT[SEQ ID NO:21](18E12L-CDR3)；以及b)抗体VH结构域或其抗原结合片段，其含有H-CDR1、H-CDR2和H-CDR3，其中：H-CDR1包含序列NYDIS[SEQ ID NO:22](18E12 H-CDR1)；H-CDR2包含序列VIWTSGGTNYNSAFMS[SEQ ID NO:23](18E12 H-CDR2)；以及H-CDR3包含序列GDGNFYLYNFDY[SEQ ID NO:24](18E12 H-CDR3)。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述CD14拮抗剂抗体选自：

(i)抗体，其含有：

包含以下序列、由或基本上由以下序列组成的VL结构域：

和

包含以下序列、由或基本上由以下序列组成的VH结构域：

(ii)抗体，其含有：

包含以下序列、由或基本上由以下序列组成的VL结构域：

和

包含以下序列、由或基本上由以下序列组成的VH结构域：

(iii)抗体，其含有：

包含以下序列、由或基本上由以下序列组成的VL结构域：

和

包含以下序列、由或基本上由以下序列组成的VH结构域：

和

(iv)抗体，其含有：

包含以下序列、由或基本上由以下序列组成的VL结构域：

和

包含以下序列、由或基本上由以下序列组成的VH结构域：

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述CD14拮抗剂抗体是人源化的或嵌合的。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述CD14拮抗剂抗体包含：

轻链，其含有氨基酸序列

重链，其含有氨基酸序列

12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述CD14拮抗剂抗体与辅助剂联合施用。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述CD14拮抗剂抗体和所述辅助剂同时或顺序施用。

14.根据权利要求12或13所述的方法，其中所述辅助剂选自纤维蛋白溶解剂、β阻滞剂、高强度他汀类药物、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂和血小板抑制剂。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述纤维蛋白溶解剂选自链激酶、阿尼普酶和组织型纤溶酶原激活剂(例如，替奈普酶、瑞替普酶或阿替普酶)。

16.根据权利要求14所述的方法，其中所述β阻滞剂选自醋丁洛尔、阿替洛尔、异丙洛尔、美托洛尔、纳多洛尔、奈比洛尔和普萘洛尔。

17.根据权利要求14所述的方法，其中所述血小板抑制剂选自阿司匹林、P2Y12抑制剂(例如，噻氯匹定、氯吡格雷、替格瑞洛或普拉格雷)和糖蛋白IIb/IIIa受体拮抗剂。

18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中在受试者上进行PCI。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述CD14拮抗剂抗体在PCI的72小时内施用。

20.CD14拮抗剂抗体在制备用于治疗人受试者的受试者中心肌梗塞(MI)的药物中的用途。

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