CN116333302A - 一种稳定持久抗氧化纳米点及其在二型糖尿病中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种稳定持久抗氧化纳米点及其在二型糖尿病中的应用，属于纳米药物技术领域。解决现有技术中常规含硒纳米粒子通常含有零价硒，在生理条件下不稳定，可直接被氧化而释放出高水平的可溶性硒，导致强烈的毒副作用的技术问题。本发明的稳定持久抗氧化纳米点，是采用L‑硒代半胱氨酸在碱性条件下聚合反应制备得到，具有类似石墨烯的片状结构和较小的尺寸，超强的抗氧化活性和硒的缓慢释放特性。本发明的抗氧化纳米点能够在维持含硒纳米粒子生物相容性的前提下，有效保持其在生理条件下的稳定性。

Description

一种稳定持久抗氧化纳米点及其在二型糖尿病中的应用
技术领域
本发明涉及纳米药物技术领域，具体涉及一种稳定持久抗氧化纳米点及其在二型糖尿病中的应用。
背景技术
二型糖尿病(T2DM)是一种慢性代谢性疾病，主要表现为胰岛素抵抗和胰岛β细胞损伤引发的高血糖。二型糖尿病影响全球约4.37亿人，并且显著增加心血管疾病、肾脏疾病、肝病、癌症和感染的风险。近些年多种临床药物用于提高糖尿病护理和自我护理质量，然而很少有药物关注胰岛β细胞破坏的潜在病理过程去恢复胰岛β细胞自身质量。
胰岛β细胞功能受损及数量减少与过量的活性氧(ROS)水平密切相关。一方面，高血糖下导致的糖代谢通路改变和慢性炎症协同作用促使胰岛β细胞“ROS风暴”的发生；另一方面，基于胰岛素分泌的需要，胰岛β细胞天生具有较低的抗氧化能力，这使得胰岛β细胞非常容易受到高水平ROS的影响，从而导致线粒体功能障碍、内质网应激、胰岛素分泌不足和死亡。因此，β细胞靶向抗氧化剂在二型糖尿病的治疗中极具应用前景。T2DM是一种长期的、进行性的慢性疾病，因此必须持久消除胰岛β细胞中的ROS才能够起到较好的治疗效果。然而，目前很少有抗氧化药物能满足如此严格的要求。
硒和硒蛋白因其抗氧化作用而对人体健康至关重要，并在控制蛋白质折叠、氧化还原信号传导、免疫调节等方面发挥作用，已广泛应用于癌症治疗、抗菌、抗炎和抗氧化等生物医学领域。此外，β细胞内抗氧化酶谷胱甘肽过氧化物酶1(GPX1)是典型的硒蛋白酶，因此适量补充硒元素除了直接清除ROS之外，还能够促进GPX1的表达，进而发挥稳定持久的抗氧化效果。然而常规含硒纳米粒子通常含有零价硒，在生理条件下不稳定，可直接被氧化而释放出高水平的可溶性硒，导致强烈的毒副作用。
发明内容
本发明要解决现有技术中常规含硒纳米粒子因含有的零价硒在生理条件下不稳定，可直接被氧化而释放出高水平的可溶性硒，导致强烈的毒副作用的技术问题，进而提供一种基于硒元素的稳定持久抗氧化纳米点及其在二型糖尿病中的应用，本发明采用多种硒酶活性中心所必需的硒代半胱氨酸制备得到抗氧化纳米点，能够在维持含硒纳米粒子生物相容性的前提下，有效保持其在生理条件下的稳定性。
为了解决上述技术问题，本发明的技术方案具体如下：
一种稳定持久抗氧化纳米点，其是采用L-硒代半胱氨酸在碱性条件下聚合反应制备得到。
在上述技术方案中，优选的是，所述稳定持久抗氧化纳米点具有类似石墨烯的片状结构，粒径在30～50nm之间。
在上述技术方案中，优选的是，所述稳定持久抗氧化纳米点，其是由以下方法制备得到：
步骤(1)合成
将L-硒代半胱氨酸在超纯水中溶解，加入氢氧化钠创造碱性环境并在搅拌条件下，进行聚合反应；
步骤(2)纯化
取步骤(1)所得样品离心取上清液，并将上清液透析除去未反应杂质；
步骤(3)干燥
取步骤(2)所得样品进行冷冻干燥得到稳定持久抗氧化纳米点粉末。
在上述技术方案中，进一步优选的是，步骤(1)中所述L-硒代半胱氨酸的质量为50～150mg。
在上述技术方案中，进一步优选的是，步骤(1)中反应体系为pH＝8～10的碱性缓冲溶液。
在上述技术方案中，进一步优选的是，步骤(1)中反应搅拌时长为12～36小时，温度为60℃。
在上述技术方案中，进一步优选的是，步骤(2)中透析时长为24小时，每6小时换超纯水一次；离心为12000r下离心10分钟。
在上述技术方案中，进一步优选的是，步骤(3)中冷冻干燥的温度为-50～-40℃，时长为72～76小时。
本发明还提供一种稳定持久抗氧化纳米点在制备治疗二型糖尿病药物中的应用。
进一步的，所述应用为稳定持久抗氧化纳米点在制备治疗二型糖尿病的胰岛β细胞功能受损药物中的应用。
本发明的有益效果是：
本发明提供的稳定持久抗氧化纳米点，是采用简单、绿色的合成方法，得到的一种稳定持久的抗氧化纳米点，所采用的原料价格低廉易得，合成方法简单。
本发明提供的稳定持久抗氧化纳米点，是采用L-硒代半胱氨酸在碱性条件下聚合反应制备得到的，具有类似石墨烯的片状结构和较小的尺寸(图1)，超强的抗氧化活性(图2)和硒的缓慢释放特性(图3)。
本发明提供的稳定持久抗氧化纳米点，能显著增加抗氧化酶GPX1的活性及其mRNA表达水平(图4)。
本发明提供的稳定持久抗氧化纳米点，能有效改善β细胞中线粒体自噬(图5)。
本发明提供的稳定持久抗氧化纳米点，能显著缓解内质网应激，改善内质网形态和功能(图6)。
本发明提供的稳定持久抗氧化纳米点，能够显著促进β细胞中的胰岛素颗粒合成(图7)。
本发明提供的稳定持久抗氧化纳米点，具有良好的生活相容性，在本发明涉及的给药浓度下对大鼠胰岛细胞瘤细胞(INS-1细胞)无毒(图8)，且长期给药对正常小鼠的心、肝、脾、胰、肾均无影响(图9)。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明。
图1为实施例5制备的含硒纳米点的透射电镜图。
图2为实施例5制备的含硒纳米点的抗氧化作用图。
图3为实施例5制备的含硒纳米点中硒的缓慢释放图。
图4为不同浓度的实施例5制备的含硒纳米点对于GPX1活性及mRNA含量的影响图。
图5为正常小鼠，二型糖尿病小鼠和注射实施例5制备的含硒纳米点后二型糖尿病小鼠胰腺组织中PARKIN、PINK1、p62、LC3BⅠ/Ⅱ蛋白的WB图。
图6为正常小鼠，二型糖尿病小鼠和注射实施例5制备的含硒纳米点后二型糖尿病小鼠胰腺β细胞的TEM图。
图7为正常小鼠，二型糖尿病小鼠和注射实施例5制备的含硒纳米点后二型糖尿病小鼠胰腺β细胞的TEM图。
图8为不同浓度实施例5制备的含硒纳米点处理对INS-1细胞活力的影响图。
图9为正常小鼠连续30天静脉注射实施例5制备的含硒纳米点后主要脏器的H&E染色图。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明的技术方案，进行清楚、完整的描述，但是应该理解的是，以下实施例并不对本发明的保护范围构成限制。
实施例1
(1)含硒纳米点的合成
取50mg L-硒代半胱氨酸加入70mL超纯水中，然后加入1mol/L NaOH溶液将pH调节至9，将溶液倒入150mL圆底烧瓶中并加入磁转子。随后将圆底烧瓶置于水浴锅中，60℃下进行磁力搅拌反应12小时。
(2)纯化
取步骤(1)所得样品通过在12000r下离心10分钟来去除沉淀物。将上清液置于透析袋中，而后将透析袋置于2L超纯水中，在磁力搅拌下进行透析，每6小时换一次超纯水，共透析24小时以去除未反应杂质。
(3)干燥
取步骤(2)所得样品，分装于50mL离心管中(每管15mL样品)，随后置于-20℃冰箱预冻2小时。2小时后将样品置于冷冻干燥机中，真空条件下-50℃冻干72小时，得到含硒纳米点粉末称为含硒纳米点1。
实施例2
(1)含硒纳米点的合成
取50mg L-硒代半胱氨酸加入70mL超纯水中，然后加入1mol/L NaOH溶液将pH调节至9，将溶液倒入150mL圆底烧瓶中并加入磁转子。随后将圆底烧瓶置于水浴锅中，60℃下进行磁力搅拌反应24小时。
(2)纯化同实施例1。
(3)干燥同实施例1，得到的含硒纳米点粉末称为含硒纳米点2。
实施例3
(1)含硒纳米点的合成
取50mg L-硒代半胱氨酸加入70mL超纯水中，然后加入1mol/L NaOH溶液将pH调节至9，将溶液倒入150mL圆底烧瓶中并加入磁转子。随后将圆底烧瓶置于水浴锅中，60℃下进行磁力搅拌反应36小时。
(2)纯化同实施例1。
(3)干燥同实施例1，得到的含硒纳米点粉末称为含硒纳米点3。
实施例4
(1)含硒纳米点的合成
取100mg L-硒代半胱氨酸加入70mL超纯水中，然后加入1mol/L NaOH溶液将pH调节至9，将溶液倒入150mL圆底烧瓶中并加入磁转子。随后将圆底烧瓶置于水浴锅中，60℃下进行磁力搅拌反应12小时。
(2)纯化同实施例1。
(3)干燥同实施例1，得到的含硒纳米点粉末称为含硒纳米点4。
实施例5
(1)含硒纳米点的合成
取100mg L-硒代半胱氨酸加入70mL超纯水中，然后加入1mol/L NaOH溶液将pH调节至9，将溶液倒入150mL圆底烧瓶中并加入磁转子。随后将圆底烧瓶置于水浴锅中，60℃下进行磁力搅拌反应24小时。
(2)纯化同实施例1。
(3)干燥同实施例1，得到的含硒纳米点粉末称为含硒纳米点5。
实施例6
(1)含硒纳米点的合成
取100mg L-硒代半胱氨酸加入70mL超纯水中，然后加入1mol/L NaOH溶液将pH调节至9，将溶液倒入150mL圆底烧瓶中并加入磁转子。随后将圆底烧瓶置于水浴锅中，60℃下进行磁力搅拌反应36小时。
(2)纯化同实施例1。
(3)干燥同实施例1，得到的含硒纳米点粉末称为含硒纳米点6。
实施例7
(1)含硒纳米点的合成
取150mg L-硒代半胱氨酸加入70mL超纯水中，然后加入1mol/L NaOH溶液将pH调节至9，将溶液倒入150mL圆底烧瓶中并加入磁转子。随后将圆底烧瓶置于水浴锅中，60℃下进行磁力搅拌反应12小时。
(2)纯化同实施例1。
(3)干燥同实施例1，得到的含硒纳米点粉末称为含硒纳米点7。
实施例8
(1)含硒纳米点的合成
取150mg L-硒代半胱氨酸加入70mL超纯水中，然后加入1mol/L NaOH溶液将pH调节至9，将溶液倒入150mL圆底烧瓶中并加入磁转子。随后将圆底烧瓶置于水浴锅中，60℃下进行磁力搅拌反应24小时。
(2)纯化同实施例1。
(3)干燥同实施例1，得到的含硒纳米点粉末称为含硒纳米点8。
实施例9
(1)含硒纳米点的合成
取150mg L-硒代半胱氨酸加入70mL超纯水中，然后加入1mol/L NaOH溶液将pH调节至9，将溶液倒入150mL圆底烧瓶中并加入磁转子。随后将圆底烧瓶置于水浴锅中，60℃下进行磁力搅拌反应36小时。
(2)纯化同实施例1。
(3)干燥同实施例1，得到的含硒纳米点粉末称为含硒纳米点9。
以上实施例中的反应体系pH值、冷冻干燥的温度和时间分别还可以是前述限定范围内的任意数值，这里不再一一举例。
以下对实施例5合成的含硒纳米点进行结构、性能表征，说明书附图中实施例5合成的含硒纳米点均使用SENDs表示。
实施例10
以实施例5中合成的含硒纳米点(含硒纳米点5)为例，探究其粒径、体外自由基清除活性及粒子中硒的释放程度。具体步骤如下：
(1)透射电镜表征：为含硒纳米点进行冷冻电镜表征，用TECNAI G2高分辨率透射电镜拍摄透射电镜图像。结果如图1所示，含硒纳米点在水中具有良好的分散性、较小的尺寸及石墨片层结构。
(2)自由基清除能力评估：
采用四唑蓝(NBT)法检测含硒纳米点对超氧阴离子的清除能力。将不同浓度的含硒纳米点(15,30,60,120,240μg/mL)、甲硫氨酸(50μM)、核黄素(2μM)、NBT(1mM)、PBS(100mM,pH＝7.4)和去离子水混合后加到比色皿中，然后将比色皿暴露在紫外灯下照射5分钟，于560nm波长处测定吸光度。
采用荧光分光光度法检测含硒纳米点对羟基自由基的清除能力。将不同浓度SENDs(1,2,4,8,16,32μg/mL)与苯二甲酸(0.1mmol/L)，硫酸亚铁(0.05mmol/L)，H2O2(1mmol/L)和PBS(0.01mol/L，PH 7.4)混合。放置6分钟后，将混合物转移到比色皿中，在320nm的激发波长下扫描相应的荧光强度。
用紫外-可见分光光度法检测含硒纳米点对过氧化氢的清除能力。将SENDs(60μg/mL)和不同浓度(0、1、2、4、8、16mM)的H2O2混合，然后在黑暗中孵育12小时。通过检测在425nm处的紫外线吸收来确定H2O2的清除率。
体外自由基清除实验结果如图2所示，含硒纳米点能高效清除各种活性氧，如超氧阴离子(图2A)，羟自由基(图2B)，过氧化氢(图2C)。
(3)使用Thermo/Jarrell Ash Advantage Atomscan电感耦合氩等离子体光谱仪测量添加或不添加H2O2的硒纳米点中硒的释放程度(图3)，由图可知含硒纳米点中硒具有缓慢释放特性。
实施例11
C57BL/6小鼠(雄性，8周，23-25g)在24±2℃、12小时光/暗循环的清洁环境中用标准饮食和水喂养7天，再用高脂饮食(HFD)喂养4周，接着连续5天腹膜内注射链脲佐菌素(STZ，60mg/kg)，构建HFD-STZ诱导的二型糖尿病模型(48只)。每隔3天5mg/kg SENDs尾静脉注射给药一次，连续治疗一个月，治疗结束5天后将小鼠安乐死并收集血液。
以实施例5中合成的含硒纳米点(含硒纳米点5)为例，收集小鼠血清并用GPX1检测试剂盒确定其活性变化情况；使用TRIzo从冷冻胰腺组织中提取总RNA，并逆转录以获得cDNA。使用Applied Biosystems Step One Plus仪器和TB Green Premix Ex TaqTM(TliRNaseH Plus)进行定量实时PCR。以β-肌动蛋白为参考基因，通过比较Ct法评估基因表达。用于定量实时PCR的引物：目标基因-GPX1，引物及序列(5′-3′)：正-ACAGTCCACCGTGTATGCCTTC；反-CTCTTCATTCTTGCCATTCTCCTG。
结果如图4所示，本发明所制备的稳定持久抗氧化纳米点能够有效恢复二型糖尿病小鼠胰腺组织中的GPX1的活性及mRNA表达情况。
实施例12
以实施例5中合成的含硒纳米点(含硒纳米点5)为例，使用Western Blot法定量正常小鼠、二型糖尿病小鼠和含硒纳米点治疗后二型糖尿病小鼠胰腺组织中线粒体自噬相关蛋白PARKIN、PINK1、p62、LC3BⅠ/Ⅱ的蛋白含量，评估含硒纳米点对二型糖尿病小鼠胰岛β细胞中线粒体自噬的改善作用。具体步骤如下：
小鼠造模给药及取材过程同实施例11，使用含有PMSF和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液从胰腺组织或细胞中提取蛋白质。混合物的上清液通过在4℃，并使用BCA蛋白质测定试剂盒进一步测定其总蛋白质浓度。蛋白质提取物在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳上分离，并在PVDF膜上印迹。用无脂牛奶封闭后，将膜浸泡于一抗(PARKIN，PINK1，p62，LC3B)中4℃孵育过夜。用辣根过氧化物酶(HRP)偶联的IgG检测结合的抗体，并用增强化学发光检测试剂观察。使用Image J软件评估蛋白质条带。
结果如图5所示，含硒纳米点静脉注射后，能通过PINK/PARKIN途径有效改善二型糖尿病小鼠的线粒体自噬。
实施例13
以实施例5中合成的含硒纳米点(含硒纳米点5)为例，拍摄正常小鼠、二型糖尿病小鼠和含硒纳米点治疗后二型糖尿病小鼠胰岛β细胞的TEM图像，评估含硒纳米点对二型糖尿病小鼠胰岛β细胞中内质网的保护作用。
小鼠造模给药及取材过程同实施例11，将胰腺组织固定在新鲜的电镜固定液中，然后用0.1M PBS(pH 7.4)洗涤3次，每次15分钟。将组织在室温下固定在0.1M PB(pH 7.4)中的1％ OsO4中2小时，避光。去除OsO4后，将组织在0.1M PB(pH 7.4)中漂洗3次，每次15分钟。组织在室温下脱水后用树脂渗透包埋和聚合。在超微切片机上将树脂块切成60-80nm薄，并将组织捞到具有formvar膜的150目铜网格上。首先用2％乙酸铀酰在饱和乙醇溶液中避光染色8分钟，用70％乙醇漂洗3次，然后用超纯水漂洗3次。接下来，2.6％的柠檬酸铅孵育8分钟，然后用超纯水冲洗3次。用滤纸干燥后，将铜格栅放入格栅板中，并在室温下干燥过夜。最后，在TEM(HITACHI HT7800/HT77000)下观察并拍摄铜栅格的图像。
结果如图6所示，健康的内质网结构由相互连接的小管和薄片的多边形网络组成，二型糖尿病组内质网膨大明显、受损严重，无清晰内质网特征结构。含硒纳米点治疗后内质网形态得到有效恢复，特征结构明显，较健康组略有扩张，呈轻度应激形态。
实施例14
以实施例5中合成的含硒纳米点(含硒纳米点5)为例，拍摄正常小鼠、二型糖尿病小鼠和含硒纳米点治疗后二型糖尿病小鼠胰岛β细胞的TEM图像，评估含硒纳米点对二型糖尿病小鼠胰岛β细胞中胰岛素颗粒的合成的促进作用。小鼠造模给药及取材过程同实施例11，TEM拍摄过程同实施例13。
如图7结果显示，含硒纳米点治疗后二型糖尿病小鼠胰岛β细胞的胰岛素颗粒明显增多。
实施例15
以实施例5中合成的含硒纳米点(含硒纳米点5)为例，分别在细胞水平和动物水平评估含硒纳米点的生物相容性。具体步骤如下：
细胞水平：将INS-1细胞接种到96孔板中孵育24小时。将含硒纳米点分散在培养基中配置成不同浓度的细胞培养液(分别为0、10.00、20.00、25.00、50.00、100.00、200.00、300.00、400.00和500.00ng/mL)。在INS-1细胞中加入上述细胞培养液再孵育24小时，然后每孔加入10μL CCK-8试剂进行细胞染色，在450nm下通过测量吸光度检测细胞活力。
动物水平：健康的C57BL/6小鼠每天尾静脉注射100μL含硒纳米点(10mg/kg溶于1×PBS)，持续30天后将小鼠安乐死并采集主要器官(心、肝、脾、胰和肾)。将各组小鼠的各个组织切小块置于4％多聚甲醛溶液中固定，随后将各个组织放入包埋盒中，流水冲洗去留在组织内的固定液。将包埋盒浸没在梯度乙醇中脱水，再将包埋盒浸没在二甲苯中使组织与包埋介质相溶而浸渗。将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温过夜。浸蜡后的组织材料放在装有蜡液的金属包埋框正中，滴蜡后移植冰上，待蜡液表层凝固，镊子夹住预包埋组织，调整组织方向，插入蜡液中，将无盖包埋盒平放于模具表面盖住，滴加蜡液没过模具，轻轻按压，放在凝固区至蜡块完全凝固住。0℃冷却30分钟左右，将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成4微米厚薄片。切下的薄片放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放65℃恒温箱中烘干，随后将切片然后放入二甲苯中进行脱蜡。切片脱蜡后将苏木素染液滴加至组织上，确保完全覆盖住组织，染色10-15分钟。流水冲洗，将多余染液洗去。1％盐酸酒精溶液分化，泡水返蓝2分钟，伊红染液滴加在组织上染色10s左右，伊红染色结束，立即浸入无水乙醇中脱水2次(每次2分钟)。二甲苯浸泡2次(每次2分钟)，通风橱自然晾干10-30分钟，用中性树脂封片。
结果如图8所示，含硒纳米点对INS-1细胞几乎无毒，仅在400ng/mL时对INS-1细胞有轻微的抗增殖作用。此外，H&E染色结果显示正常小鼠连续30天静脉注射含硒纳米点后心、肝、脾、胰、肾均无明显损伤(图9)。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种稳定持久抗氧化纳米点，其特征在于，其是采用L-硒代半胱氨酸在碱性条件下聚合反应制备得到。
2.根据权利要求1所述的稳定持久抗氧化纳米点，其特征在于，其具有类似石墨烯的片状结构，粒径在30～50nm之间。
3.根据权利要求1所述的稳定持久抗氧化纳米点，其特征在于，其是由以下方法制备得到：
步骤(1)合成
将L-硒代半胱氨酸在超纯水中溶解，加入氢氧化钠创造碱性环境，并在搅拌条件下，进行聚合反应；
步骤(2)纯化
取步骤(1)所得样品离心取上清液，并将上清液透析除去未反应杂质；
步骤(3)干燥
取步骤(2)所得样品进行冷冻干燥得到稳定持久抗氧化纳米点粉末。
4.根据权利要求3所述的稳定持久抗氧化纳米点，其特征在于，步骤(1)中所述L-硒代半胱氨酸的质量为50～150mg。
5.根据权利要求3所述的稳定持久抗氧化纳米点，其特征在于，步骤(1)中反应体系为pH＝8～10的碱性缓冲溶液。
6.根据权利要求3所述的稳定持久抗氧化纳米点，其特征在于，步骤(1)中反应搅拌时长为12～36小时，温度为60℃。
7.根据权利要求3所述的稳定持久抗氧化纳米点，其特征在于，步骤(2)中透析时长为24小时，每6小时换超纯水一次；离心为12000r下离心10分钟。
8.根据权利要求3所述的稳定持久抗氧化纳米点，其特征在于，步骤(3)中冷冻干燥的温度为-50～-40℃，时长为72～76小时。
9.一种权利要求1-8任意一项所述的稳定持久抗氧化纳米点在制备治疗二型糖尿病药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述稳定持久抗氧化纳米点在制备治疗二型糖尿病的胰岛β细胞功能受损药物中的应用。
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Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1218043A (zh) * 1998-10-26 1999-06-02 董国臣 硒代蛋氨酸铬的制备和应用
US6303651B1 (en) * 1999-09-23 2001-10-16 Thione International, Inc. Synergistic antioxidant veterinary compositions
CN101289495A (zh) * 2008-05-23 2008-10-22 浙江大学 含硒五肽化合物及其应用
US20160113977A1 (en) * 2013-03-15 2016-04-28 Ronan Power Compositions comprising selenium and use of same for the treatment and prevention of disease or conditions associated with mitochondrial dysfunction
CN106075403A (zh) * 2016-06-12 2016-11-09 暨南大学 一种胰岛素口服硒纳米制剂及其制备方法
CN110763530A (zh) * 2018-07-27 2020-02-07 中国科学院上海有机化学研究所 对硒代半胱氨酸进行修饰的方法及其应用
CN112472815A (zh) * 2020-12-16 2021-03-12 国家纳米科学中心 一种硒肽及其制备方法和应用
CN113383960A (zh) * 2021-06-10 2021-09-14 广州大学 一种高稳定性的蛋白多肽-纳米硒及其制备方法与应用
CN114920357A (zh) * 2022-06-20 2022-08-19 杭州师范大学 一种短期内缓解厌氧氨氧化污泥光抑制的方法
CN115104629A (zh) * 2022-06-23 2022-09-27 华中农业大学 一种含硒元素的浸种剂及其在提高植物抗盐胁迫中的应用

Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1218043A (zh) * 1998-10-26 1999-06-02 董国臣 硒代蛋氨酸铬的制备和应用
US6303651B1 (en) * 1999-09-23 2001-10-16 Thione International, Inc. Synergistic antioxidant veterinary compositions
CN101289495A (zh) * 2008-05-23 2008-10-22 浙江大学 含硒五肽化合物及其应用
US20160113977A1 (en) * 2013-03-15 2016-04-28 Ronan Power Compositions comprising selenium and use of same for the treatment and prevention of disease or conditions associated with mitochondrial dysfunction
CN114533753A (zh) * 2013-03-15 2022-05-27 全技术公司 含硒组合物及其治疗和预防与线粒体功能障碍有关的疾病或病症的应用
CN106075403A (zh) * 2016-06-12 2016-11-09 暨南大学 一种胰岛素口服硒纳米制剂及其制备方法
CN110763530A (zh) * 2018-07-27 2020-02-07 中国科学院上海有机化学研究所 对硒代半胱氨酸进行修饰的方法及其应用
CN112472815A (zh) * 2020-12-16 2021-03-12 国家纳米科学中心 一种硒肽及其制备方法和应用
CN113383960A (zh) * 2021-06-10 2021-09-14 广州大学 一种高稳定性的蛋白多肽-纳米硒及其制备方法与应用
CN114920357A (zh) * 2022-06-20 2022-08-19 杭州师范大学 一种短期内缓解厌氧氨氧化污泥光抑制的方法
CN115104629A (zh) * 2022-06-23 2022-09-27 华中农业大学 一种含硒元素的浸种剂及其在提高植物抗盐胁迫中的应用

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HUAPING XU, ET AL.: "Selenium-Doped Carbon Quantum Dots for Free-Radical Scavenging", ANGEW. CHEM. INT. ED., vol. 56, 31 December 2017 (2017-12-31), pages 9910 - 9914 *
WENQI LUO, ET AL.: "Selenium-Doped Carbon Quantum Dots Efficiently Ameliorate Secondary Spinal Cord Injury via Scavenging Reactive Oxygen Species", INTERNATIONAL JOURNAL OF NANOMEDICINE, vol. 15, 31 December 2020 (2020-12-31), pages 10113 *
ZACHARY T. ROSENKRANS, ET AL.: "Selenium-Doped Carbon Quantum Dots Act as Broad-Spectrum Antioxidants for Acute Kidney Injury Management", ADV. SCI., vol. 7, 31 December 2020 (2020-12-31), pages 1 - 11 *
欧燕珍: "硒掺杂碳量子点的体外抗氧化及抗炎性能研究", 中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑, no. 1, 15 January 2023 (2023-01-15), pages 074 - 92 *
苏日娜: "碳基纳米点发光材料制备过程强化及性能研究", 中国博士学位论文全文数据库 工程科技I辑, no. 3, 15 March 2022 (2022-03-15), pages 020 - 120 *
黄燕燕;林友辉;蒲芳;任劲松;曲晓刚;: "纳米酶在疾病治疗中的最新进展", 生物化学与生物物理进展, no. 02, 7 February 2018 (2018-02-07), pages 256 *

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