CN116327916A - 对淋巴细胞中抑制途径的中和 - Google Patents
对淋巴细胞中抑制途径的中和 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116327916A CN116327916A CN202210915090.1A CN202210915090A CN116327916A CN 116327916 A CN116327916 A CN 116327916A CN 202210915090 A CN202210915090 A CN 202210915090A CN 116327916 A CN116327916 A CN 116327916A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antibody
- cells
- nkg2a
- tumor
- nkg
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims abstract description 105
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 title abstract description 34
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 title abstract description 13
- 230000037361 pathway Effects 0.000 title abstract description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 298
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 117
- 102100022682 NKG2-A/NKG2-B type II integral membrane protein Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 101150069255 KLRC1 gene Proteins 0.000 claims abstract 7
- 101100404845 Macaca mulatta NKG2A gene Proteins 0.000 claims abstract 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 200
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims description 128
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 100
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 98
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 97
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 64
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 53
- 101001109508 Homo sapiens NKG2-A/NKG2-B type II integral membrane protein Proteins 0.000 claims description 39
- 102000057310 human KLRC1 Human genes 0.000 claims description 29
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 21
- 208000000102 Squamous Cell Carcinoma of Head and Neck Diseases 0.000 claims description 15
- 201000000459 head and neck squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 15
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 10
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 10
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 claims description 7
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 claims description 7
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000012270 PD-1 inhibitor Substances 0.000 claims description 3
- 239000012668 PD-1-inhibitor Substances 0.000 claims description 3
- 229940121655 pd-1 inhibitor Drugs 0.000 claims description 3
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000005178 buccal mucosa Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000001983 hard palate Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000000615 hard palate cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000004959 laryngeal benign neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010023841 laryngeal neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000018066 neoplasm of oropharynx Diseases 0.000 claims description 2
- 239000012271 PD-L1 inhibitor Substances 0.000 claims 2
- 229940121656 pd-l1 inhibitor Drugs 0.000 claims 2
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 claims 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 claims 1
- 101100519207 Mus musculus Pdcd1 gene Proteins 0.000 description 183
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 158
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 117
- 238000000034 method Methods 0.000 description 75
- 101000611936 Homo sapiens Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 67
- 230000004044 response Effects 0.000 description 57
- 101000971513 Homo sapiens Natural killer cells antigen CD94 Proteins 0.000 description 56
- 102100021462 Natural killer cells antigen CD94 Human genes 0.000 description 56
- 102100028970 HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain E Human genes 0.000 description 55
- 101000986085 Homo sapiens HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain E Proteins 0.000 description 55
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 51
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 50
- 102000048362 human PDCD1 Human genes 0.000 description 46
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 42
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 38
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 36
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 34
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 32
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 32
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 31
- 229960002621 pembrolizumab Drugs 0.000 description 31
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 30
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 27
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 27
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 26
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 26
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 22
- 101000834898 Homo sapiens Alpha-synuclein Proteins 0.000 description 21
- 101000652359 Homo sapiens Spermatogenesis-associated protein 2 Proteins 0.000 description 21
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 21
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 21
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 21
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 20
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 19
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 19
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 19
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 18
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 18
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 description 18
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 17
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 17
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 17
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 16
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 16
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 14
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 13
- 102000000834 NK Cell Lectin-Like Receptor Subfamily C Human genes 0.000 description 12
- 108010001880 NK Cell Lectin-Like Receptor Subfamily C Proteins 0.000 description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 12
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 12
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 12
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 12
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 11
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 11
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 11
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 11
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 11
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 description 11
- 101001109503 Homo sapiens NKG2-C type II integral membrane protein Proteins 0.000 description 10
- 108091008042 inhibitory receptors Proteins 0.000 description 10
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 10
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 9
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 9
- 102100022683 NKG2-C type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 9
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 9
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 9
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 9
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 9
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 9
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 8
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 8
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 8
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 8
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 8
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 8
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 8
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 8
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 7
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 101100127356 Homo sapiens KLRD1 gene Proteins 0.000 description 6
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 6
- 210000000662 T-lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 6
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 6
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 6
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 6
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 6
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 6
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 6
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 6
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 6
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 5
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 4
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 4
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 4
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 4
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 4
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 4
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 4
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 4
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- -1 sivori et al Chemical compound 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 101100463133 Caenorhabditis elegans pdl-1 gene Proteins 0.000 description 3
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 206010066476 Haematological malignancy Diseases 0.000 description 3
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 3
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 3
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 3
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 3
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 3
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 3
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000019691 hematopoietic and lymphoid cell neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 3
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 3
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 3
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 3
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 208000036764 Adenocarcinoma of the esophagus Diseases 0.000 description 2
- 206010052747 Adenocarcinoma pancreas Diseases 0.000 description 2
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 102100029822 B- and T-lymphocyte attenuator Human genes 0.000 description 2
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 2
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 2
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 2
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 2
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 description 2
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 101000864344 Homo sapiens B- and T-lymphocyte attenuator Proteins 0.000 description 2
- 101000917826 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Proteins 0.000 description 2
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 2
- 101001117317 Homo sapiens Programmed cell death 1 ligand 1 Proteins 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 241000282842 Lama glama Species 0.000 description 2
- 102100029204 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Human genes 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 230000006051 NK cell activation Effects 0.000 description 2
- 102100032870 Natural cytotoxicity triggering receptor 1 Human genes 0.000 description 2
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 2
- 206010030137 Oesophageal adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 101150066681 Rae1 gene Proteins 0.000 description 2
- 208000007660 Residual Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 201000010208 Seminoma Diseases 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 2
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 2
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 2
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000007402 cytotoxic response Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 229950009791 durvalumab Drugs 0.000 description 2
- 208000028653 esophageal adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000017188 evasion or tolerance of host immune response Effects 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 2
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 2
- VYNDHICBIRRPFP-UHFFFAOYSA-N pacific blue Chemical compound FC1=C(O)C(F)=C2OC(=O)C(C(=O)O)=CC2=C1 VYNDHICBIRRPFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000002094 pancreatic adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 2
- 208000016691 refractory malignant neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 201000009410 rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000003153 stable transfection Methods 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011285 therapeutic regimen Methods 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 2
- 230000036269 ulceration Effects 0.000 description 2
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 2
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- RTQWWZBSTRGEAV-PKHIMPSTSA-N 2-[[(2s)-2-[bis(carboxymethyl)amino]-3-[4-(methylcarbamoylamino)phenyl]propyl]-[2-[bis(carboxymethyl)amino]propyl]amino]acetic acid Chemical compound CNC(=O)NC1=CC=C(C[C@@H](CN(CC(C)N(CC(O)=O)CC(O)=O)CC(O)=O)N(CC(O)=O)CC(O)=O)C=C1 RTQWWZBSTRGEAV-PKHIMPSTSA-N 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000036762 Acute promyelocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010003571 Astrocytoma Diseases 0.000 description 1
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 1
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 1
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N Betaine Natural products C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 239000002053 C09CA06 - Candesartan Substances 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 208000004463 Follicular Adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 101150074628 HLA-E gene Proteins 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000589305 Homo sapiens Natural cytotoxicity triggering receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000946860 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain Proteins 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- 108010043610 KIR Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000002698 KIR Receptors Human genes 0.000 description 1
- 101150074862 KLRC3 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000001126 Keratosis Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 101100407308 Mus musculus Pdcd1lg2 gene Proteins 0.000 description 1
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O N,N,N-trimethylglycinium Chemical compound C[N+](C)(C)CC(O)=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 102100022701 NKG2-E type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 1
- 101150110881 NKG2A gene Proteins 0.000 description 1
- 108010004217 Natural Cytotoxicity Triggering Receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010004222 Natural Cytotoxicity Triggering Receptor 3 Proteins 0.000 description 1
- 102100032851 Natural cytotoxicity triggering receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100032852 Natural cytotoxicity triggering receptor 3 Human genes 0.000 description 1
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 108700030875 Programmed Cell Death 1 Ligand 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100024213 Programmed cell death 1 ligand 2 Human genes 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 206010038111 Recurrent cancer Diseases 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 102100035794 T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain Human genes 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010162 Tukey test Methods 0.000 description 1
- 241000618809 Vitales Species 0.000 description 1
- 201000006083 Xeroderma Pigmentosum Diseases 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 206010059394 acanthoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 229960000548 alemtuzumab Drugs 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000006023 anti-tumor response Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 210000004900 c-terminal fragment Anatomy 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- SGZAIDDFHDDFJU-UHFFFAOYSA-N candesartan Chemical compound CCOC1=NC2=CC=CC(C(O)=O)=C2N1CC(C=C1)=CC=C1C1=CC=CC=C1C1=NN=N[N]1 SGZAIDDFHDDFJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000932 candesartan Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 201000007455 central nervous system cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000025997 central nervous system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000009614 chemical analysis method Methods 0.000 description 1
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000011087 fumaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 description 1
- 229940022353 herceptin Drugs 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000005745 host immune response Effects 0.000 description 1
- 102000048776 human CD274 Human genes 0.000 description 1
- 102000053350 human FCGR3B Human genes 0.000 description 1
- 102000057658 human KLRC2 Human genes 0.000 description 1
- 229960001001 ibritumomab tiuxetan Drugs 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000037451 immune surveillance Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006525 intracellular process Effects 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000000207 lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012931 lyophilized formulation Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000013178 mathematical model Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 102000042628 natural cytotoxicity receptor (NCR) family Human genes 0.000 description 1
- 108091053394 natural cytotoxicity receptor (NCR) family Proteins 0.000 description 1
- 210000003739 neck Anatomy 0.000 description 1
- 208000007538 neurilemmoma Diseases 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 201000005528 peripheral nervous system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 229950010773 pidilizumab Drugs 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 229960000999 sodium citrate dihydrate Drugs 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 1
- 208000001608 teratocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229940126622 therapeutic monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 208000030901 thyroid gland follicular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000008181 tonicity modifier Substances 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 1
- 238000007492 two-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
- A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
Abstract
本发明涉及对淋巴细胞中抑制途径的中和。具体地，本发明涉及NKG2A中和剂用于治疗对PD‑1中和剂应答不良的癌症的用途，并且涉及NKG2A中和剂和PD‑1中和剂用于治疗癌症的联合用途。
Description
本申请是申请日为2017年1月20日、发明名称为“对淋巴细胞中抑制途径的中和”的中国专利申请号201780007833.2的分案申请。
相关申请的交叉引用
本申请要求2016年1月21日提交的美国临时申请号62/281,217的权益，该申请通过引用以其全文(包括任何附图)并入本文。
序列表的引用
本申请是连同电子格式的序列表提交的。序列表被提供为题为“NKG2A-PD1b_ST25”的文件，创建于2017年1月19日，大小是38KB。将在电子格式的序列表中的信息通过引用以其全文并入本文。
技术领域
本发明涉及NKG2A中和剂用于治疗对PD-1中和剂应答不良的癌症的用途，以及NKG2A中和剂和PD-1中和剂用于治疗癌症的联合用途。
背景技术
NK细胞的活性通过一种既涉及活化信号又涉及抑制性信号的复杂机制进行调节。已经鉴定了多种不同的NK特异性受体，这些受体在NK细胞介导的缺乏HLA I类的靶细胞的识别和杀灭中起着重要的作用。自然细胞毒性受体(NCR)是指一类活化受体蛋白和表达它们的基因，这些基因在NK细胞中特异性表达。NCR的实例包括NKp30、NKp44和NKp46(参见，例如，Lanier(2001)Nat Immunol[自然免疫学]2:23-27，Pende等人(1999)J Exp Med.[实验医学杂志]190:1505-1516，Cantoni等人.(1999)J Exp Med.[实验医学杂志]189:787-796，Sivori等人(1997)J.Exp.Med.[实验医学杂志]186:1129-1136，Pessino等人(1998)J ExpMed.[实验医学杂志]188(5):953-60；Mandelboim等人(2001)Nature[自然]409:1055-1060，将其全部披露内容通过引用并入本文)。这些受体是免疫球蛋白超家族的成员，并且他们通过特异性的mAb诱导的交联导致强的NK细胞活化以及针对许多类型的靶细胞的NK细胞毒性的活化，该强的NK细胞活化导致细胞内的Ca++水平增加，触发细胞毒性和淋巴因子释放。
CD94/NKG2A是在淋巴细胞亚群上发现的抑制性受体。CD94/NKG2A限制某些淋巴细胞对表达CD94/NKG2A-配体HLA-E的细胞的细胞因子释放和细胞毒性应答(参见，例如，WO99/28748)。还已经发现HLA-E通过某些肿瘤细胞(Derre等人，J Immunol[免疫学杂志]2006；177:3100-7)和活化的内皮细胞以可溶的形式分泌(Coupel等人，Blood[血液]2007；109:2806-14)。抑制CD94/NKG2A信号传导的抗体可增加淋巴细胞针对HLA-E阳性靶细胞的细胞因子释放和细胞溶解活性，例如CD94/NKG2A阳性NK细胞针对表达HLA-E的肿瘤细胞或病毒感染细胞的反应。因此，抑制CD94/NKG2A但不引起杀死表达CD94/NKG2A的细胞的治疗性抗体(即，非耗竭性抗体)可诱导对癌症患者中的肿瘤生长的控制。
PD-1是CD28家族受体的抑制性成员，该家族还包括CD28、CTLA-4、ICOS和BTLA。PD-1在活化的B细胞、T细胞和骨髓细胞上表达(Okazaki等人(2002)Curr.Opin.Immunol.[免疫学新观点]14:391779-82；Bennett等人(2003)J Immunol[免疫学杂志]170:711-8)。已经鉴定了PD-1的两种配体(PD-L1和PD-L2)，这两种配体已经显示在结合至PD-1后下调T细胞活化(Freeman等人(2000)J Exp Med[实验医学杂志]192:1027-34；Latchman等人(2001)NatImmunol[自然免疫学]2:261-8；Carter等人(2002)Eur J Immunol[欧洲免疫学杂志]32:634-43)。多种人类癌症中存在丰富的PD-L1(Dong等人(2002)Nat.Med.[自然医学]8:787-9)。PD-1和PD-L1之间的相互作用导致肿瘤浸润性淋巴细胞的减少、T细胞受体介导的增殖的减少和癌性细胞的免疫逃避。通过抑制PD-1与PD-L1的局部相互作用，可以逆转免疫抑制，并且当PD-1与PD-L2的相互作用也被阻断时，该效果是累加的。
PD-1阻断已在许多临床试验中产生了令人印象深刻的抗肿瘤反应。然而，在很多癌症中(例如，肺癌)并非所有患者都对抗肿瘤反应的治疗有应答，并且此外一些患者患有在治疗后复发的癌症。因此，在本领域中存在着对于用PD-1轴线抑制剂治疗的患者的改进益处的需要。
发明内容
在一个方面，本发明提供了在用PD1中和剂(例如抗PD-1或抗PD-L1抗体)治疗的不良应答的个体中引发抗肿瘤免疫应答的改进方法，其中用中和抑制性受体NKG2A的试剂处理个体。PD-1不良应答者中的肿瘤浸润性淋巴细胞在用PD-1中和抗体处理后可表达抑制性受体NKG2A。在PD-1不良应答者中，尽管用PD-1中和剂治疗，肿瘤仍可进展或逃避免疫监视，因为TIL受抑制性NKG2A受体的限制。PD-1抗性的鼠淋巴瘤模型显示用NKG2A中和剂治疗诱导大多数个体完全缓解。
因此，在一个实施例中，提供了一种用中和PD-1的抑制性活性的试剂治疗或预防作为不良应答者或患有不良应答的癌症(例如，被观察为不良应答者或不良应答，或预测为不良应答者或不良应答)的个体的癌症的方法，该方法包含给予个体治疗活性量的抑制人类NKG2A多肽的化合物。在一个实施例中，抑制人类NKG2A多肽的化合物与抑制人类PD-1多肽的化合物联合给予。在另一个实施例中，给予抑制人类NKG2A多肽的化合物，而不与抑制人类PD-1多肽的化合物联合治疗。在一个实施例中，抑制人类NKG2A多肽的化合物在用抑制人类PD-1多肽的化合物的治疗过程结束期间(联合)或治疗过程结束(之后)给予，任选地进一步，其中个体在使用抑制人类PD-1多肽的化合物(例如，在没有用抑制人类NKG2A多肽的化合物治疗的情况下)治疗期间或治疗之后(例如，在第一疗程或治疗周期后)经历不完全应答(或未经历完全应答)、癌症复发或癌症进展，任选地其中该个体在NK细胞和/或CD8 T细胞上具有(例如确定具有)可检测的和/或升高数量的表达NKG2A的NK细胞和/或CD8T细胞和/或升高水平的NKG2A。在一个实施例中，所述癌症是血液肿瘤，任选地是淋巴瘤或白血病。在一个实施例中，所述癌症是恶性肿瘤。在一个实施例中，个体在NK细胞和/或CD8 T细胞上具有可检测的和/或升高数量的表达NKG2A的NK细胞和/或CD8 T细胞和/或升高水平的NKG2A。
在一个实施例中，提供了用于在个体中治疗或预防癌症的方法，该方法包括：
(a)给予个体中和PD-1抑制性活性的试剂(例如，给予试剂一个周期或疗程)；和
(b)如果确定步骤(a)中个体的癌症对中和PD-1抑制性活性的试剂应答不良(例如，正在进展，尚未完全应答或消退，则无应答)，则给予个体治疗活性量的抑制人类NKG2A多肽的化合物(任选地与中和PD-1的抑制性活性的试剂联合)。
在一个实施例中，抑制人类NKG2A多肽的化合物是中和NKG2A的抑制性活性的抗体。在一个实施例中，抑制人类PD-1多肽的化合物是中和PD-1的抑制性活性的抗PD-1或抗PDL-1抗体。该个体可被指定为人类。
在一个实施例中，提供了一种活化患有癌症的个体中CD8+肿瘤浸润性T细胞的方法，所述患有癌症的个体对用中和PD-1的抑制性活性的试剂治疗有不良应答(例如，正在进展，尚未完全应答或消退，则无应答),该方法包含给予个体治疗活性量的抑制人类NKG2A多肽的化合物。
在本文任何实施例的一个方面，患有对用中和PD-1的抑制性活性的试剂治疗有不良应答的癌症的个体是经历或预测具有高度可能性的个体(例如，基于一种或多种预后因素)在用中和PD-1的抑制性活性的试剂治疗之后(期间或之后)经历不完全应答、缺乏治疗应答、可检测的、复发或残留癌症和/或进行性疾病。在一个实施例中，不良应答的癌症是尽管(例如在期间或之后)用中和PD-1抑制性活性的试剂治疗，但未应答、未完全应答、保持可检测或残留、或已经复发或进展的癌症，或尽管用中和PD-1的抑制性活性试剂治疗，预测(例如基于一种或多种预后因素)具有很高的可能性不应答、不完全应答、保持可检测或残留、或者复发或进展的癌症。在一个实施例中，作为不良应答者或具有不良应答的癌症的个体是用中和PD-1抑制性活性的试剂治疗时(期间或之后)经历不完全应答(例如，未经历完全应答(CR))的个体。在一个实施例中，作为不良应答者或具有不良应答的癌症的个体是用中和PD-1抑制性活性的试剂治疗时(期间或之后)经历至少部分应答(PR)，但癌症保持可检测的、已经复发或进展的个体。
在一个实施例中，作为不良应答者个体或具有不良应答的癌症的个体是用中和PD-1的抑制性活性的试剂治疗的不良疾病预后的个体(例如，在没有使用中和NKG2A抑制性活性的试剂治疗的情况下；作为单一疗法)。例如，基于一种或多种预测因素，可以确定具有不良疾病预后的个体具有高或更高的癌症进展风险(例如，与具有良好疾病预后的个体相比)。在一个实施例中，预测因素包含在NK细胞和/或CD8 T细胞上存在可检测的和/或升高数量的NKG2A表达的NK细胞和/或CD8 T细胞和/或升高水平的NKG2A。在一个实施例中，预测因素包含在一个或多个基因中存在或不存在突变。在一个实施例中，突变定义由T细胞识别的新表位。在一个实施例中，预测因素包含肿瘤细胞中一种或多种基因或蛋白质的表达水平，例如，PD-L1，肿瘤细胞上PD-L1降低或升高的水平。在一个实施例中，预测因素包含周期中或肿瘤环境中的NK细胞和/或CD8 T细胞中一种或多种基因或蛋白质的表达水平，例如PD-1。在一个实施例中，预测因素包含肿瘤细胞中的突变负荷，例如每个外显子组的非同义突变的数量。
在一个实施例中，作为不良应答者个体或具有不良应答的癌症的个体是患有已知对用抑制人类PD-1多肽的化合物治疗有不良应答的癌症的个体，任选地实体瘤、任选地血液恶性病、任选地头颈部鳞状细胞癌。
在一个方面，提供了一种组合物，该组合物包含抑制人类NKG2A多肽的抗体，所述抗体用于治疗或预防对用抑制人类PD-1多肽的化合物(例如在用抑制人类PD-1多肽的化合物治疗后已经进展或预测进展)，任选地其中癌症是实体癌(例如肺癌)、任选地其中癌症是鳞状细胞癌(例如，HNSCC)、任选地其中癌症是血液恶性病(例如淋巴瘤)。
在一个方面，提供了中和人类NKG2A的抑制性活性以与中和人类PD-1的抑制性活性的试剂联合使用的试剂，用于治疗对用中和人类PD-1抑制性活性的试剂治疗具有不良应答的癌症。在一个方面，提供了在治疗患有肺癌、黑色素瘤或鳞状细胞癌(例如，HNSCC)的个体时中和人类NKG2A的抑制性活性的试剂，该治疗包含给予个体每个有效量的：(a)一种试剂，任选地中和人类NKG2A抑制性活性的抗体，和(b)一种试剂，任选地中和人类PD-1抑制性活性的抗体。
在一个方面，提供了一种包含抑制人类NKG2A多肽的抗体的组合物，所述抗体用于治疗或预防已经接受或正在经受抑制人类PD-1多肽的化合物治疗的个体的癌症，其中所述个体在肿瘤环境中具有可检测的，增加的和/或升高数量的表达NKG2A的NK细胞和/或CD8 T细胞，和/或在肿瘤环境中在NK细胞和/或CD8 T细胞上NKG2A的表达水平增加。在一个实施例中，与在用抑制人类PD-1多肽的化合物治疗之前观察到的数量相比，个体在周期中或在肿瘤环境中具有增加的NK细胞和/或CD8 T细胞的数量，和/或与参考值相比增加(例如，细胞数量对应于在抑制人类PD-1多肽的化合物经历不良应答的患者中观察到的值)。在一个实施例中，与用抑制人类PD-1多肽的化合物治疗之前观察到的水平相比和/或与参考值相比，个体在肿瘤环境中在NK细胞和/或CD8 T细胞上具有增加的NKG2A表达水平(例如，水平对应于在抑制人类PD-1多肽的化合物经历不良应答的患者中观察到的值)。在一个实施例中，以导致人类患者(体内)中人类CD94/NKG2A的抑制性活性发生中和的量(例如以导致人类CD94/NKG2A对人类患者中CD8 T细胞和NK细胞的抑制性活性进行中和的量)给予个体该抗NKG2A抗体。在一个实施例中，导致人类患者中人类CD94/NKG2A的抑制性活性发生中和的量为使NKG2A受体在NKG2A+细胞表面上实质上饱和所需的最小浓度(例如，在结合测定中，其中在PBMC上滴定抗体)的至少10倍(例如，10倍-20倍、10倍-50倍、10倍-100倍、20倍-50倍、20倍-100倍、30倍-100倍、50倍-100倍)，任选地至少50倍、60倍、80倍或100倍。在一个实施例中，该抗NKG2A抗体与HLA-E竞争结合人类NKG2A。
在一个方面，本文显示与抗NKGA抗体和抗PD-1抗体或与抗NKG2A抗体和抗PD-L1抗体的联合治疗在治疗癌症中特别有效。本文还显示用抗PD1的治疗可以引起肿瘤浸润性淋巴细胞上的NKG2A受体的上调，这样使得NKG2A可以限制阻断PD1轴线的试剂的疗效。由于这些受体都可以限制肿瘤浸润性淋巴细胞的细胞毒性活性，因此这两种受体的抑制性活性的中和通过抗体使得NKG2A+PD1+淋巴细胞有效地消除癌细胞。在一个实施例中，NKG2A+PD1+淋巴细胞是细胞毒性淋巴细胞，任选地是CD8+T细胞或NK细胞。
在一个方面，本发明提供了通过抑制性受体NKG2A和PD-1的联合中和(例如，经由使用抗体)来增强抗肿瘤免疫应答的改进方法。不管他们是否对PD-1的抑制性活性有不良应答，联合治疗可用于治疗患有癌症的个体(例如已知对中和PD-1、非小细胞肺癌(NSCLC)、肾癌、胃肠癌、胰腺或食道癌、乳腺癌、肾细胞癌(RCC)、黑色素瘤、结肠直肠癌或卵巢癌的试剂有不良应答的癌症)，且因此包括例如用中和PD-1的抑制性活性的试剂治疗的应答不良者个体，和用中和PD-1的抑制性活性的试剂治疗的良好应答者个体。
因此，在一个实施例中，提供了治疗或预防对用抑制人类PD-1多肽的化合物治疗有不良应答的癌症的方法，该方法包含给予患有癌症的个体：(a)治疗活性量的抑制人类NKG2A多肽的化合物，和(b)治疗活性量的抑制人类PD-1多肽的化合物。在一个实施例中，癌症是实体瘤，任选地包含浸润性NK细胞和/或CD8 T细胞的实体瘤，任选地其中NK细胞和/或CD8 T细胞表达NKG2A，任选地其中至少10％、20％、30％、40％或50％的NK细胞在其表面表达NKG2A。在一个实施例中，抑制人类NKG2A多肽的化合物是中和NKG2A的抑制性活性的抗体。在一个实施例中，抑制人类PD-1多肽的化合物是中和PD-1的抑制性活性的抗PD-1或抗PDL-1抗体。该个体可被指定为人类。
在一个实施例中，提供了活化或增强个体中的CD8+肿瘤浸润性T细胞的活性的方法，该方法包含向个体给予：(a)治疗活性量的抑制人类NKG2A多肽的化合物，和(b)治疗活性量的抑制人类PD-1多肽的化合物。在一个实施例中，提供了活化或增强个体中的肿瘤浸润性NK细胞的活性的方法，该方法包含向个体给予：(a)治疗活性量的抑制人类NKG2A多肽的化合物，和(b)治疗活性量的抑制人类PD-1多肽的化合物。在一个实施例中，该癌症是实体瘤。任选地，在任何实施例中，个体患有对用抑制人类PD-1多肽的化合物治疗有不良应答的癌症。
在个一方面，本发明提供了治疗，该治疗包括给予中和NKG2A的抑制性活性的抗体与中和PD-1的抑制性活性的抗体的联合。在本文任何实施例的一个方面，提供了包含抑制人类NKG2A多肽的抗体和结合PDL1或PD1并中和人类PD-1多肽的抑制性活性的抗体的组合物。在一个方面，该组合物用于治疗或预防癌症。
在一个方面，中和NKG2A的抑制性活性的抗体和中和PD-1的抑制性活性的抗体联合用于治疗或预防已知对用抑制人类PD-1多肽的化合物治疗有不良应答的癌症，任选地是实体瘤，任选地是血液恶性病。在一个实施例中，已知有不良应答的癌症是鳞状细胞癌，任选地是头颈部鳞状细胞癌。
在本文的任何实施例中，抑制人类PD-1多肽的化合物或试剂包含防止PD-L1诱导的PD-1信号传导的多肽(例如抗体、与Fc结构域融合的多肽、免疫黏附素等)，例如通过阻断PD-1与其天然配体PD-L1之间的相互作用(并任选地进一步阻断PD-1和PD-L2之间的相互作用)。在一个方面，多肽是结合PD-1的抗体(抗PD-1抗体)；这样的抗体可以阻断PD-1和PD-L1之间和/或PD-1和PD-L2之间的相互作用。在另一方面中，该多肽是结合PD-L1(抗PD-L1抗体)并阻断PD-1和PD-L1之间的相互作用的抗体。在一个实施例中，以导致人类患者(体内)中人类PD-1的抑制性活性发生中和的量(例如以导致人类PD-1对人类患者中CD8 T细胞和NK细胞的抑制性活性进行中和的量)给予/已经给予中和人类PD-1多肽的抗体。在一个方面，根据特定的临床剂量方案，尤其是以特定的剂量并根据具体的给药方案，给予该抗体(或用于给予)。
在本文任何实施例的一个方面，中和抑制性受体NKG2A的化合物或试剂是抗体。在一方面中，中和NKG2A的抗体是非耗竭性抗体(例如，不杀死、消除、裂解或诱导这样的杀伤、消除或裂解的抗体)，以便负面影响样品或受试者中存在的表达NKG2A的细胞的数量。在个一方面，中和NKG2A的抗体是非耗竭性抗体。非耗竭性抗体可以例如缺少Fc结构域或具有对一个或多个Fcγ受体(例如CD16)具有最小结合或无结合的Fc结构域。实例包括具有来自人类IgG4同种型抗体的恒定域的抗体、具有经修饰以降低或消除与一个或多个Fcγ受体(例如CD16、CD32A、CD32B和/或CD64)的结合的恒定域的任何同种型(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)的抗体。
在本文任何实施例的一个方面，该抗NKG2A抗体被给予至少一个给予周期，该给予周期包含该抗NKG2A抗体的至少第一次和第二次(和任选地第3次、第4次、第5次、第6次、第7次和/或第8次或更多次)给予，其中在第一次和第二次(和任选地更多次)给予之间以有效实现至少为10μg/ml(或任选地至少20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml或50μg/ml)的抗NKG2A抗体的连续(最小)血液浓度的量给予该抗NKG2A抗体。实现或保持指定的连续血液浓度意味着，在指定时间段的持续时间内(例如在抗体的两次给予之间，数周)，血液浓度实质上不下降到指定的血液浓度以下，即尽管血液浓度在指定时间段期间可以变化，但指定的血液浓度仍表示最小或“谷”浓度。
在一个实施例中，以在给予后(例如在给予的1或2天内)有效实现约或至少约50μg/ml、60μg/ml、70μg/ml或80μg/ml(任选地至少约100μg/ml)的峰血液浓度的量给予该抗NKG2A抗体。
在一个实施例中，以有效实现约或至少约10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、60μg/ml、70μg/ml或80μg/ml(任选地至少约100μg/ml)的抗NKG2A抗体的连续(最小)血液浓度的量给予该抗NKG2A抗体持续至少一周或至少两周，随后给予该抗体。
在一个实施例中，在两次连续给予之间以有效实现约或至少约50μg/ml、60μg/ml、70μg/ml或80μg/ml(任选地至少约100μg/ml)的抗NKG2A抗体的连续(最小)血液浓度的量给予该抗NKG2A抗体。在一个实施例中，第一次和第二次给予在时间上间隔约两周，任选地约一周。
可以任选地以有效的量，并且根据达到如给予周期的整个持续时间中所指定的连续(最小)血液浓度的频率来给予该抗NKG2A抗体。
在一个实施例中，抑制人类NKG2A多肽的抗体在治疗过程之后给予(治疗过程可以完全完成或在完成之前停止)，或者在治疗过程起始之后(例如，在不完全应答、肿瘤进展等情况下)在包含至少两次给予抗NKG2A抗体的给予周期中，用抗体中和人类PD-1多肽的抗体。在另一个实施例中，抑制人类NKG2A多肽的抗体在给予周期中与中和人类PD-1多肽的抗体联合给予，其中给予周期包含至少两次给予抗NKG2A抗体。在一个实施例中，以有效实现血管外组织(例如，在肿瘤环境中)中为至少4μg/ml(在两个连续给予期间任选地至少10μg/ml)的连续(最小)浓度的量给予该抗NKG2A抗体。任选地，以有效实现血管外组织(例如，在肿瘤环境中)中为至少4μg/ml(任选至少10μg/ml)的连续(最小)浓度的量给予该抗NKG2A抗体，保持给予周期的整个持续时间。在一个实施例中，抗NKG2A抗体以在两次连续给予之间或对于给予周期的持续时间有效实现至少40μg/ml、任选地至少100μg/ml的抗NKG2A抗体的连续(最小)血液浓度的量给予。
在一个实施例中，该癌症是血液癌。在一个非限制性实施例中，癌症是淋巴瘤或白血病。在一个实施例中，该癌症是晚期和/或难治性实体瘤。在一个非限制性实施例中，该癌症(例如晚期难治性实体瘤)选自下组，该组由以下组成：非小细胞肺癌(NSCLC)、肾癌、胃肠癌、胰腺癌或食管腺癌、乳腺癌、肾细胞癌(RCC)、黑色素瘤、结肠直肠癌、以及卵巢癌。
抑制NKG2A多肽的化合物(抗NKG2A试剂)是提高表达NKG2A的NK和/或T细胞引起表达HLA-E的细胞死亡的能力的化合物。任选地，该抑制NKG2A多肽的化合物是多肽，任选地是结合NKG2A多肽的抗体(例如单克隆抗体)。
在一个实施例中，抗NKG2A试剂通过阻断其配体HLA-E的结合来降低NKG2A的抑制性活性，即抗NKG2A试剂干扰HLA-E对NKG2A的结合。具有SEQ ID NO:4-SEQ ID NO:8中任一个的重链和SEQ ID NO:9的轻链的抗体是这种抗体的实例。在一个实施例中，抗NKG2A试剂降低NKG2A的抑制性活性而不阻断其配体HLA-E的结合，即抗NKG2A试剂是非竞争性拮抗剂，并且不干扰NKG2A与HLA-E的结合。具有SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11的重链和轻链可变区的抗体分别是这种抗体的实例。
在一个实施例中，抗NKG2A试剂是以比对一种或多种活化NKG2受体显著更高的亲和力结合NKG2A的抗体。例如，在一个实施例中，该试剂是以比对NKG2C显著更高的亲和力结合NKG2A的抗体。在另外的或可替代的实施例中，该试剂是以比NKG2E显著更高的亲和力结合NKG2A的抗体。在另外的或可替代的实施例中，该试剂是以比NKG2H显著更高的亲和力结合NKG2A的抗体。
在一个实施例中，该抗NKG2A试剂与分别具有SEQ ID NO:4-8和9的重链和轻链的抗体或分别具有SEQ ID NO:10和11的重链和轻链可变区的抗体竞争与CD94/NKG2A的结合。该试剂可以是例如人或人源化抗NKG2A抗体。
在一个实施例中，该抗NKG2A抗体是分别具有SEQ ID NO:4-8中任一个的任意重链的重链CDR和SEQ ID NO:9的轻链的轻链CDR的人源化抗体。在一个实施例中，该抗NKG2A抗体是分别具有SEQ ID NO:4-8中任一个的任意重链的重链可变区和SEQ ID NO:9的轻链的轻链可变区的人源化抗体。提供了具有改进的性质(如，例如较低的免疫原性、改善的抗原结合或其他功能性质)、和/或改善的物理化学性质(如，例如更好的稳定性)的这类人源化抗体的框架区(FR)中的示例性互补决定区(CDR)残基或序列和/或氨基酸取代位点。
在某些任选的方面，提供了一种鉴定患有癌症的个体的方法，所述个体是用中和人类PD-1的抑制性活性的试剂治疗的不良应答者，该方法包含：
a)确定已经用中和人类PD-1的抑制性活性(例如，已接受至少一次试剂给予的人)的试剂治疗的个体中NK细胞和/或CD8 T细胞上的NKG2A+(且任选地另外的PD-1)的表达水平和/或NK细胞和/或CD8 T细胞中NKG2A(任选地NKG2A+PD1+)的数量；和
b)在确定个体在NK细胞和/或CD8 T细胞(任选地在表达PD-1的NK细胞或T细胞上)上NKG2A表达水平增加和/或NKG2A+(任选地NKG2A+PD1+)NK细胞和/或CD8 T细胞数量增加(例如与参考值相比、与参考值相比增加、与用试剂处理之前观察到的值相比增加)时，将个体鉴定为用中和人类PD-1的抑制性试剂治疗的不良应答者。
在某些任选方面中，通过评估NK细胞和/或CD8+ T细胞上NKG2A表达的肿瘤样品(例如，肿瘤组织和/或肿瘤相邻组织)中的存在，可以鉴定患者用抗NKG2A试剂治疗。在本文的任何治疗用途或癌症治疗或预防方法的一个实施例中，个体中癌症的治疗或预防包含：
a)确定已经或正在用中和PD-1的抑制性活性的试剂治疗的患有癌症的个体中NK细胞和/或CD8 T细胞上的NKG2A的表达水平和/或表达NKG2A的NK细胞和/或CD8 T细胞的数量，以及
b)在确定个体在NK细胞和/或CD8 T细胞上具有增加的NKG2A表达水平和/或增加数量的表达NKG2A的NK细胞和/或CD8 T细胞时，向个体给予中和人类NKG2A多肽的抑制性活性的化合物。
在任何方法的一个实施例中，确定NKG2A表达和/或NKG2A+NK细胞和/或CD8 T细胞数量的水平包含确定NKG2A核酸或多肽在NK细胞和/或CD8 T细胞上的表达水平和/或确定生物样品中NKG2A+NK细胞和/或CD8 T细胞的数量，并将该水平与参考水平(例如，值、弱或强细胞表面染色等)进行比较。例如，参考水平可以对应于健康个体、对应于使用抑制人类PD-1多肽的试剂治疗的应答或不良应答的个体、对应于从使用抗NKG2A抗体治疗中获得无/低临床益处的个体、或对应于从使用抗NKG2A抗体(任选地与抑制人类PD-1多肽的试剂联合)治疗获得实质的临床益处的个体。确定生物样品包含增加数量的表达NKG2A的NK细胞和/或CD8 T细胞(例如，与从使用抑制人类PD-1多肽的试剂治疗无法获得足够临床益处的个体相对应的数量，与从使用抗NKG2A抗体治疗获得实质的临床益处的个体相对应的数量)指示患有癌症的个体可以用抗NKG2A抗体进行治疗(例如根据本文所述的治疗方法)。生物样品以增加的水平(例如，高的值、强的表面染色、对应于使用抑制人类PD-1多肽的试剂治疗无法获得足够临床益处的个体的水平、对应于使用抗NKG2A的抗体治疗从个体获得实质的临床益处的水平、比对应于个体从用抗NKG2A抗体的治疗没有获得/获得低的临床益处的水平更高的水平，等等)表达NKG2A核酸或多肽的确定指示该个体患有可用抗NKG2A抗体治疗的癌症，例如根据本文所述的治疗方法。
在一个实施例中，CD8 T细胞是肿瘤浸润性CD8 T细胞。在一个实施例中，NK细胞是肿瘤浸润性NK细胞。在一个实施例中，至少15％、20％、25％或30％的NK细胞和/或CD8 T细胞是PD1+NKG2A+。
在一个实施例中，所述个体患有包含在其表面表达HLA-E多肽的恶性细胞的癌症。在一个实施例中，治疗方法进一步包含确定患有癌症的个体内的恶性细胞(例如肿瘤细胞)的HLA-E多肽状态，其中确定恶性细胞表达HLA-E核酸或多肽指示该个体患有可用抑制NKG2A的试剂治疗的癌症。
在其他实施例中，提供了药物组合物和试剂盒，以及使用他们的方法。在一个实施例中，提供了药物组合物，其包含中和人类NKG2A多肽的抑制性活性的化合物。在一个实施例中，提供了试剂盒，其包含中和人类NKG2A多肽的抑制性活性的化合物和能够检测NK细胞和/或CD8 T细胞表面上NKG2A表达的试剂(例如抗体或其他NKG2A结合剂与可检测部分结合)。
这些方面将在本文提供的本发明的描述中更加完全地描述，并且另外的方面、特征和优点将是明显的。
附图说明
图1A和1B示出PD-L1+Qa-1+RMA-S Qa-1 Qdm B2m和A20肿瘤细胞被表达NKG2A的NK细胞和表达NKG2A和/或PD-1的CD8 T细胞浸润，当肿荷瘤体积约为500mm3时，处死RMA-SQa-1 Qdm B2m(顶行)和A20(底行)荷瘤小鼠。肿瘤细胞(图1A)和肿瘤浸润性淋巴细胞-TIL-(图1B)分别通过流式细胞术分析肿瘤细胞的Qa-1和PDL-1以及NKG2A/C/E和PD-1的表达。MFI：荧光强度的中位数。
图2示出小鼠中NKG2A和PD-1在NK细胞和T细胞亚群上的分布。淋巴细胞取自脾、肿瘤引流淋巴结、以及实体瘤块内。在来自脾和淋巴结的所有细胞亚群中PD-1表达不频繁或不存在，然而在肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)中，所有细胞亚群具有相对高百分比的表达PD-1的细胞。另一方面，NKG2A在NK细胞上发现，但未在脾和淋巴结中的T细胞亚群上发现，但在显著百分比的TIL中发现肿瘤，平均超过30％的NK细胞和超过19％的CD8 T细胞对NKG2A和PD-1是双阳性的。
图3A和图3B示出在荷瘤小鼠中的NKG2A和PD-1表达。当肿瘤分别达到500mm3、2000mm3和800mm3的体积时，处死RMA Rae1(顶行)、MC38(中间行)和RMA(底行)荷瘤小鼠。通过流式细胞术在脾、肿瘤引流淋巴结(LN)和肿瘤中分析NK细胞(图3A)和CD8 T细胞(图3B)，用于NKG2A/C/E和PD-1表达。
图4示出用抗PD-1 mAb治疗小鼠增加了MC38肿瘤中表达NKG2A的TCD8细胞的频率。在细胞植入后第11天、14天和17天，用200μg大鼠IgG2a同种型对照(IC)或抗小鼠PD-1抗体处理MC38荷瘤小鼠。在第31天处死小鼠，并通过流式细胞术在脾、肿瘤引流淋巴结(LN)和肿瘤中表征CD8 T细胞。
图5示出在第11天、第14天和第18天用同种型对照、抗小鼠NKG2A mAb(200μg，iv)、抗小鼠PD-L1 mAb(200μg，ip)或抗mNKG2A/mPDL-1联合处理的小鼠中的中位数肿瘤体积随时间的变化。虽然与该模型中的同种型对照相比，抗NKG2A仅产生适度的抗肿瘤效应，并且抗PD-L1产生实质性抗肿瘤效应但肿瘤体积随着接近第28天而增加，用抗NKG2A和抗PD-L1组合治疗完全消除肿瘤生长，在第28天观察到肿瘤体积没有显著生长。
图6示出在用同种型对照或中和抗小鼠PD-L1 mAb或抗小鼠PD-1处理的携荷PD-1/-L1抗性A20淋巴瘤小鼠时中位数肿瘤体积随时间的变化。同种型对照、抗PD1或抗PD-L1抗体均不能有效控制肿瘤生长。
图7示出在用同种型对照或中和抗小鼠PD-1 mAb或抗小鼠PD-1与中和抗小鼠NKG2A联合处理的荷A20淋巴瘤小鼠时中位数肿瘤体积随时间的变化。同种型对照或抗PD1抗体均不能有效控制肿瘤生长，但是当加添加抗NKG2A抗体治疗时，在大多数动物中观察到完全肿瘤消退(7/10)。
图8示出在用同种型对照或中和抗小鼠PD-L1 mAb或抗小鼠PD-L1与中和抗小鼠NKG2A联合处理的荷A20淋巴瘤小鼠时中位数肿瘤体积随时间的变化。当将抗NKG2A抗体治疗添加抗PD-L1治疗时，在大多数动物中观察到完全肿瘤消退(9/11)。
具体实施方式
定义
如说明书中所使用的，“一个”或“一个”可以意指一个或多个。如在权利要求中使用的，当与词“包含(comprising)”结合使用时，这些词“一种/一个(a或an)”可以意指一种/一个或多于一种/一个。如在此所使用的，“另一个”可以意指至少第二个或更多个。
当使用“包括”时，这可以任选地被“基本上由……组成”或通过“由……组成”代替。
NKG2A(OMIM 161555，将其全部公开内容通过引用结合在此)是NKG2转录物组的成员(Houchins等人(1991)J.Exp.Med.[实验医学杂志]173:1017-1020)。NKG2A由跨越25kb的7个外显子编码，显示出一些差别剪接。NKG2A与CD94一起形成在NK细胞、α/βT细胞、γ/δT细胞、和NKT细胞的亚群的表面上发现的异源二聚体抑制性受体CD94/NKG2A。与抑制性KIR受体类似，它在其胞质结构域中具有ITIM。如本文所使用的，“NKG2A”是指NKG2A基因或编码蛋白的任何变体、衍生物或同种型。人类NKG2A在3个结构域中包含233个氨基酸，其中是包含残基1-70的胞质结构域，包含残基71-93的跨膜区，以及包含残基94-233的胞外区，其具有以下序列：
MDNQGVIYSDLNLPPNPKRQQRKPKGNKSSILATEQEITYAELNLQKASQDFQGNDKTYHCKDLPSAPEKLIVGILGIICLILMASVVTIVVIPSTLIQRHNNSSLNTRTQKARHCGHCPEEWITYSNSCYYIGKERRTWEESLLACTSKNSSLLSIDNEEEMKFLSIISPSSWIGVFRNSSHHPWVTMNGLAFKHEIKDSDNAELNCAVLQVNRLKSAQCGSSIIYHCKHKL(SEQ ID NO:1)。
NKG2C(OMIM 602891，其全部披露内容通过引用并入本文)和NKG2E(OMIM 602892，其全部披露内容通过引用并入本文)是NKG2转录物组的另外两个成员(Gilenke等人(1998)Immunogenetics[免疫遗传学]48:163-173)。CD94/NKG2C和CD94/NKG2E受体是在淋巴细胞亚群表面上发现的活化受体，例如NK细胞和T细胞。
HLA-E(OMIM 143010，将其全部公开内容通过引用并入本文)是在细胞表面上表达并受肽的结合调节的非经典MHC分子，例如衍生自其他MHC I类分子的信号序列的片段。还已经鉴定了HLA-E的可溶性形式。除了其T细胞受体结合性质，HLA-E通过特异性结合CD94/NKG2A、CD94/NKG2B、和CD94/NKG2C而结合自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T细胞(NKT)和T细胞(α/β和γ/δ)的亚组(参见例如Braud等人(1998)Nature[自然]391:795-799，其全部披露内容通过引用在此结合)。HLA-E的表面表达通过CD94/NKG2A+NK细胞、T细胞、或NKT细胞克隆保护靶细胞免于裂解。如在此所使用的，“HLA-E”是指HLA-E基因或编码的蛋白质的任何变体、衍生物或同种型。
在本发明的上下文中，“NKG2A”或“CD94/NKG2A阳性淋巴细胞”是指在细胞表面上表达CD94/NKG2A的淋巴谱系细胞(例如NK细胞、NKT细胞和T细胞)，其可以通过例如使用特异性识别CD94和NKG2A上的联合表位或单独NKG2A上的表位的抗体进行流式细胞术检测。“NKG2A阳性淋巴细胞”还包括淋巴来源的无限增殖细胞系(例如NKL，NK-92)。
在本发明的上下文中，“降低NKG2A的抑制性活性”、“中和NKG2A”或“中和NKG2A的抑制性活性”是指CD94/NKG2A对胞内过程产生负面影响的能力受到抑制，导致淋巴细胞应答，例如细胞因子释放和细胞毒性应答的过程。这可以例如在基于NK细胞或T细胞的细胞毒性测定中测量，其中测量治疗化合物刺激CD94/NKG2A阳性淋巴细胞杀死HLA-E阳性细胞的能力。在一个实施例中，抗体制剂引起CD94/NKG2A限制性淋巴细胞的细胞毒性至少增加10％、任选地至少增加40％或50％的淋巴细胞细胞毒性、任选地至少增加70％的NK细胞毒性，并参考所述的细胞毒性测定。如果抗NKG2A抗体减少或阻断CD94/NKG2A与HLA-E的相互作用，它可能增加CD94/NKG2A限制性淋巴细胞的细胞毒性。这可以例如在标准的4小时体外细胞毒性测定中评价，使用例如表达CD94/NKG2A的NK细胞和表达HLA-E的靶细胞。此类NK细胞不能有效杀死表达HLA-E的靶标，因为CD94/NKG2A识别HLA-E，导致防止淋巴细胞介导的细胞溶解的抑制性信号传导的起始和传播。这种体外细胞毒性测定可以通过本领域熟知的标准方法进行，例如在Coligan等人编辑，Current Protocols in Immunology[当前免疫学方案]，格林尼出版协会(Greene Publishing Assoc.)和威力出版公司(WileyInterscience)，纽约，(1992,1993)的实例中所描述的。评估抗体刺激淋巴细胞杀死靶细胞(例如P815、K562细胞或合适的肿瘤细胞)的能力的铬释放和/或其他参数也被披露于Sivori等人，J.Exp.Med.[实验医学杂志]1997；186:1129-1136；Vitale等人，J Exp Med.[实验医学杂志]1998；187:2065-2072；Pessino等人，J Exp Med.[实验医学杂志]1998；188:953-960；Neri等人，Clin.Diag.Lab.Immun.[临床与诊断实验室免疫学]2001；8:1131-1135；Pende等人，J Exp Med.[实验医学杂志]1999；190:1505-1516中，每个全部披露内容通过引用并入本文。在添加NK细胞之前用51Cr标记靶细胞，然后估计杀死与51Cr从细胞到培养基的释放成比例，这是杀死的结果。添加防止CD94/NKG2A与HLA-E结合的抗体导致经由CD94/NKG2A的抑制性信号传导的启动和传播的预防。因此，添加此类试剂导致淋巴细胞介导的靶细胞杀伤的增加。该步骤由此鉴定为试剂，该试剂通过例如阻断配体结合来阻止CD94/NKG2A诱导的负信号传导。在特别的51Cr释放细胞毒性测试中，表达CD94/NKG2A的NK效应细胞可杀死HLA-E阴性LCL 721.221靶细胞，但较少能杀死表达HLA-E的LCL 721.221-Cw3对照细胞。相反地，缺少CD94/NKG2A的YTS效应细胞有效杀死两种细胞系。因此，由于HLA-E诱导的经由CD94/NKG2A的抑制性信号，NK效应细胞更低效地杀死HLA-E+LCL721.221-Cw3细胞。当在这此类51Cr释放细胞毒性测定中，NK细胞与根据本发明的封闭抗CD94/NKG2A抗体预孵育时，以抗体浓度依赖性方式更有效地杀死表达HLA-E的LCL 721.221-Cw3细胞。抗NKG2A抗体的抑制性活性(即细胞毒性增强潜力)也可以通过许多其他方式中的任何一种来评估，例如，通过其对胞内游离钙的效应，例如Sivori等人，J Exp Med.[实验医学杂志]1997；186:1129-1136中所述的，其披露内容通过引用并入本文。。可以例如通过测量细胞因子产生(例如IFN-γ产生)或细胞毒性标志物(例如CD107或CD137动员)的增加来评估NK细胞细胞毒性的活化。在一个示例性方案中，通过细胞表面和胞质内染色以及在培养4天后通过流式细胞术的分析来评估来自PBMC的IFN-γ产生。简而言之，在培养物的最后4小时以5μg/ml的最终浓度添加布雷非德菌素A(西格玛奥德里奇公司(Sigma Aldrich))。然后在透化(IntraPrepTM；贝克曼库尔特公司(Beckman Coulter))之前将细胞与抗CD3和抗CD56 mAb一起孵育，并用PE-抗-IFN-γ或PE-IgG1(Pharmingen公司)染色。使用ELISA(GM-CSF：DuoSet Elisa，R&D系统公司，明尼阿波里斯，明尼苏达州，IFN-γ：OptElA set，Pharmingen)在上清液中测量来自多克隆激活的NK细胞的GM-CSF和IFN-γ产生。
如本文所用，术语“PD-1”是指蛋白质程序性死亡1(PD-1)(也称为“程序性细胞死亡1”)，CD28受体家族的抑制成员，其还包括CD28、CTLA-4、ICOS和BTLA。完整的人类PD-1序列可以在基因库登录号U64863下找到，如下所示：
MQIPQAPWPVVWAVLQLGWRPGWFLDSPDRPWNPPTFFPALLVVTEGDNATFTCSFSNTSESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTQLPNGRDFHMSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQTLVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSRAARGTIGARRTGQPLKEDPSAVPVFSVDYGELDFQWREKTPEPPVPCVPEQTEYATIVFPSGMGTSSPARRGSADGPRSAQPLRPEDGHCSWPL(SEQ IDNO:2)。
“PD-1”还包括PD-1基因或编码蛋白的任何变体，衍生物或同种型。PD-1在活化的B细胞、T细胞和骨髓细胞上表达(Okazaki等人(2002)Curr.Opin.Immunol.[免疫学新观点]14:391779-82；Bennett等人(2003)J Immunol[免疫学杂志]170:711-8)。该家族的起始成员CD28和ICOS是通过添加单克隆抗体后增加T细胞增殖的功能性效应而发现的(Hutloff等人(1999)Nature[自然]397:263-266；Hansen等人(1980)Immunogenics[免疫遗传学]10:247-260)。已经鉴定了PD-1的两种配体，PD-L1和PD-L2，其已显示在与PD-1结合后下调T细胞活化(Freeman等人(2000)J Exp Med.[实验医学杂志]192:1027-34；Latchman等人(2001)Nat Immunol[自然免疫学]2:261-8；Carter等人(2002)Eur J Immunol[欧洲免疫学杂志]32:634-43)。PD-L1和PD-L2都是结合PD-1但不结合其他CD28家族成员的B7同源物。
完整的人类PD-L1序列可以在UniProtKB/Swiss-Prot下找到，编号Q9NZQ7-1，如下所示：
MRIFAVFIFM TYWHLLNAFT VTVPKDLYVV EYGSNMTIEC KFPVEKQLDL AALIVYWEMEDKNIIQFVHG EEDLKVQHSS YRQRARLLKD QLSLGNAALQ ITDVKLQDAG VYRCMISYGG ADYKRITVKVNAPYNKINQR ILVVDPVTSE HELTCQAEGY PKAEVIWTSS DHQVLSGKTT TTNSKREEKL FNVTSTLRINTTTNEIFYCT FRRLDPEENH TAELVIPELP LAHPPNERTH LVILGAILLC LGVALTFIFR LRKGRMMDVKKCGIQDTNSK KQSDTHLEET(SEQ ID NO:3)。
PD-L1在多种人类癌症中丰富存在(Dong等人(2002)Nat.Med.[自然医学]8:787-9)。PD-1和PD-L1之间的相互作用导致肿瘤浸润性淋巴细胞的减少、T细胞受体介导的增殖的减少和癌性细胞的免疫逃避(Dong等人(2003)J Exp Med.[实验医学杂志]81:281-7；Blank等人(2005)Cancer Immunol.Immunother.[癌症免疫学免疫疗法]54:307-314；Konishi等人(2004)Clin.Cancer Res.[临床癌症研究]10:5094-100)。通过抑制PD-1与PD-L1的局部相互作用，可以逆转免疫抑制，并且当PD-1与PD-L2的相互作用也被阻断时，该效果是累加的。
在本发明的上下文中，“降低人类PD-1的抑制性活性”、“中和PD-1”或“中和人类PD-1的抑制性活性”是指PD-1被抑制的过程，其信号转导能力是由PD-1与其一种或多种结合配偶体例如PD-L1或PD-L2的相互作用产生的。中和PD-1的抑制性活性的试剂降低、阻断、抑制、消除或干扰由PD-1与其一种或多种结合配偶体(例如PD-L1、PD-L2)的相互作用产生的信号转导。因此，此类试剂可以减少通过或经由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白介导的阴性共刺激信号，以便增强T细胞效应子功能(例如增殖、细胞因子产生和/或细胞毒性)。
每当参考抗NKG2A结合剂(例如抗体)提及“癌症治疗”等时，包含：(a)一种治疗癌症的方法，所述方法包含给予(至少一次治疗)NKG2A结合剂(例如，在药学上可接受的载体材料中一起或各自分开)给个体、哺乳动物、尤其是人类，需要这种治疗的，需要以允许治疗癌症的剂量(治疗有效量)，任选地以本文说明的剂量(量)；(b)使用抗NKG2A结合剂用于治疗癌症，或使用抗NKG2A结合剂用于所述治疗(尤其在人中)；(c)使用抗NKG2A结合剂用于制造用于治疗癌症的药物制剂，使用抗NKG2A结合剂用于制造用于治疗癌症的药物制剂(包括混合抗NKG2A结合剂与药学上可接受的载体)或包含有效剂量的适用于治疗癌症的抗NKG2A结合剂的药物制剂的方法；或(d)a)、b)、以及c)的任何组合，这是根据本主题，本主题允许在提交本申请的国家取得专利权。
如在此所使用的术语“活检样品”被定义为去除组织用于检查例如以建立诊断的目的。活组织检查的类型的实例包括通过应用吸取，例如通过连接到注射器的针；通过仪器去除组织的片段；通过用适当的仪器通过内窥镜去除；通过手术切除例如整个病损；等等。
如在此所使用，术语“抗体”是指多克隆和单克隆抗体。根据重链中恒定区的类型，抗体被分配到五个主要类别之一：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。其中一些进一步分为亚类或同种型，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4等。一种示例性的免疫球蛋白(抗体)结构单元包括一种四聚物。每个四聚体由两对相同的多肽链构成，每对具有一条“轻”链(约25kDa)和一条“重”链(约50kDa-70kDa)。每个链的N端定义了具有约100至110个或更多个氨基酸的一个可变区，主要负责抗原识别。术语可变轻链(VL)和可变重链(VH)分别指这些轻链和重链。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别被命名为“α”、“δ”、“ε”、“γ”和“μ”。不同类别的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是熟知的。IgG是在此使用的示例性抗体类别，因为它们是生理状况下最常见的抗体且在实验室条件下最容易制备。任选地，该抗体是单克隆抗体。抗体的具体实例是人源化的、嵌合的、人的或其他适合人的抗体。“抗体”还包括任何本文所述抗体的任何片段或衍生物。
术语“特异性结合”意指抗体可以优选地在竞争性结合测定中与结合配偶体(例如，NKG2A、PD-1、PD-L1)进行结合，，如使用重组形式的蛋白质，或其中的表位或存在于分离的靶细胞表面上的天然蛋白质进行评估。竞争性结合测定和用于确定特异性结合的其他方法是本领域熟知的。例如，可以经由放射性标记、物理方法如质谱法、或使用例如细胞荧光分析(例如FACScan)检测的直接或间接荧光标记来检测结合。结合在对照所见的量之上，非特异性试剂指示该试剂与靶标结合。特异性结合NKG2A的试剂可以单独地结合NKG2A或作为与CD94的二聚体结合NKG2A。
当抗体被称为与特定单克隆抗体“竞争”时，这意指抗体在结合测定中与单克隆抗体竞争使用重组分子(例如，NKG2A、PD-1、PD-L1)或表面表达的分子(例如，NKG2A、PD-1、PD-L1)。例如，如果测试抗体在结合测定中降低具有SEQ ID NO:4-8中任一个的重链和SEQ IDNO:9的轻链的抗体与NKG2A多肽或表达NKG2A的细胞的结合，则该抗体被称为分别与这类抗体“竞争”。
如在此使用的术语“亲和力”意指一种抗体与一种表位结合的强度。一种抗体的亲和性通过解离常数Kd(定义为[Ab]x[Ag]/[Ab-Ag])给出，其中[Ab-Ag]是抗体-抗原复合体的摩尔浓度，[Ab]是未结合的抗体的摩尔浓度，并且[Ag]是未结合的抗原的摩尔浓度。亲和力常数Ka由1/Kd定义。确定mAb亲和力的方法可参见Harlow等人，Antibodies:ALaboratory Manual[抗体：实验室手册]，冷泉港实验室出版社(Cold Spring HarborLaboratory Press)，冷泉港，纽约，1988)，Coligan等人编辑，Current Protocols inImmunology[当前免疫学方案]，格林尼出版协会(Greene Publishing Assoc.)和威力出版公司(Wiley Interscience)，纽约，(1992,1993)，和Muller,Meth.Enzymol.[酶学方法]92:589-601(1983)，通过引用以其全文并入本文。本领域中熟知的用于确定mAb亲和力的一种标准的方法是使用表面等离子体共振(SPR)筛选(例如通过用BIAcoreTM SPR分析装置分析)。
在本文的上下文中，“决定簇”指明多肽上相互作用或结合的位点。
术语“表位”是指一种抗原决定簇，并且是在抗原上与抗体结合的面积或区域。蛋白质表位可包含直接涉及结合的氨基酸残基以及被特异性抗原结合抗体或肽有效阻断的氨基酸残基，即抗体“足迹”内的氨基酸残基。它是复杂抗原分子上最简单的形式或最小的结构区域，可以与例如抗体或受体联合。表位可以是直链或构象性的/结构性的。术语“线性表位”被定义为一种由在氨基酸的线性序列(一级结构)上连续的氨基酸残基构成的表位。术语“构象或结构表位”被定义为一种由并非都是连续的氨基酸残基构成的表位，并且因此代表通过分子的折叠(二级、三级和/或四级结构)彼此进入接近状态的氨基酸的线性序列的分开的部分。构象表位依赖于三维结构。因此，术语“构象的”经常与“结构的”互换使用。
在此使用术语“试剂”来表示化合物、化合物混合物、生物大分子、或由生物学材料制备的提取物。术语“治疗剂”是指具有生物活性的试剂。
出于本文的目的，“人源化”或“人”抗体是指一种抗体，其中一种或多种人免疫球蛋白的恒定和可变框架区与动物免疫球蛋白的结合区(例如CDR)相融合。这类抗体被设计成保持衍生出这些结合区的非人类抗体的结合特异性，但是却要避免对抗非人类抗体的免疫反应。此类抗体可获自转基因小鼠或其他动物，所述动物已经被“工程化”以产生响应于抗原激发的特异性人类抗体(参见，例如，Green等人(1994)Nature Genet[自然遗传学]7:13；Lonberg等人(1994)Nature[自然]368:856；Taylor等人(1994)Int Immun[国际免疫学]6:579，将其全部传授内容通过引用结合在此)。完全的人抗体还可通过基因或染色体转染法连同噬菌体展示技术来构建，这些技术在本领域中已知(参见，例如McCafferty等人(1990)Nature[自然]348:552-553)。人类抗体也可以通过体外活化的B细胞产生(参见，例如，美国专利号5,567,610和5,229,275，通过引用以其全文并入本文)。
“嵌合抗体”是一种抗体分子，其中(a)恒定区或其一部份被改变、替换或交换，这样使得抗原结合位点(可变区)被连接至不同的或改变的类别、效应子功能和/或种类的恒定区，或连接至赋予该嵌合抗体新特性的完全不同的分子，例如酶、毒素、激素、生长因子、药物等；或者(b)可变区或其一部份被具有不同的或改变的抗原特异性的可变区改变、替换或交换。
术语“Fc结构域”、“Fc部分”以及“Fc区域”是指抗体重链的C端片段，例如人类γ(伽马)重链的从氨基酸约(aa)230至约aa 450或它在其他类型的抗体重链(例如针对人类抗体的α、δ、ε和μ)中的对应序列，或其天然发生的同种异型。除非另外说明，否则贯穿本披露使用了针对免疫球蛋白通常所接受的Kabat氨基酸编号((参见Kabat等人，1991，Sequences of Proteins of Immunological Interest[免疫学目的蛋白质序列]，第5版，美国国立卫生研究院，公共卫生署(United States Public Health Service,NationalInstitute of Health)，马里兰州贝塞斯达(Bethesda,MD))。
术语“分离的”、“纯化的”或“生物学纯的”是指实质上或基本上不含在天然状态下发现的通常伴随其的组分的物质。纯度和均质性典型地是使用分析化学技术(例如聚丙烯酰胺凝胶电泳或高效液相色谱法)来确定的。制剂中存在的主要种类的蛋白实质上是纯化的。
术语“多肽”、“肽”以及“蛋白”在此可互换地使用，是指氨基酸残基的聚合物。这些术语应用到氨基酸聚合物上，其中一个或多个氨基酸残基是对应的天然发生氨基酸的一种人工化学模拟物，并且应用到天然发生的氨基酸聚合物以及非天然发生的氨基酸聚合物上。
术语“重组”当用于指例如一种细胞、核酸、蛋白或载体时表明该细胞、核酸、蛋白或载体已经通过导入异源核酸或蛋白或者改变天然的核酸或蛋白进行修饰，或者表明该细胞衍生自这样修饰的细胞。因此，例如，重组细胞表达在天然(非重组)形式的细胞内部找不到的基因，或表达天然基因然而却异常表达、低表达或根本不表达。
在此上下文中，“结合”多肽的或表位的术语抗体指定一种结合所述具有特异性和/或亲和性决定簇的抗体。
术语“一致性”或“一致的”当用于两种或更多种多肽的序列之间的关系时，是指多肽之间的序列关联程度，如通过两个或更多个氨基酸残基链之间匹配的数目来确定的。“一致性”使用由具体数学模型或计算机程序(即，“算法”)解决的空位比对(如果有的话)测量两个或更多个序列中较短序列之间的一致匹配的百分比。相关多肽的一致性可以通过已知方法容易地计算出。这样的方法包括但不限于在以下文献中描述的那些：ComputationalMolecular Biology[计算分子生物学]，Lesk,A.M.，编辑，牛津大学出版社(OxfordUniversity Press)，纽约，1988；Biocomputing:Informatics and Genome Projects[生物计算：信息学和基因组项目]，Smith,D.W.，编辑，学术出版社(Academic Press)，纽约，1993；Computer Analysis of Sequence Data[序列数据的计算机分析]，第1部分，Griffin,A.M.,和Griffin,H.G.，编辑，胡玛纳出版社(Humana Press)，新泽西州，1994；Sequence Analysis in Molecular Biology[分子生物学的序列分析]，von Heinje,G.，学术出版社(Academic Press)，1987；Sequence Analysis Primer[序列分析引物]，Gribskov,M.和Devereux,J.，编辑，斯托克顿出版社(M.Stockton Press)，纽约，1991；以及Carillo等人，SIAM J.Applied Math.[工业和应用数学学会应用数学杂志]48,1073(1988)。
用于确定一致性的方法被设计为在测试的序列之间给出最大的匹配。确定一致性的方法描述于可公开获得的计算机程序中。用于确定在两个序列之间的一致性的计算机程序方法包括GCG程序包，包括GAP(Devereux等人，Nucl.Acid.Res.[核酸研究]12,387(1984)；遗传学电脑集团(Genetics Computer Group)，威斯康辛大学(University ofWisconsin)，威斯康辛州麦迪逊市(Madison,Wis.))、BLASTP、BLASTN、以及FASTA(Altschul等人，J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]215,403-410(1990))。BLASTX程序可以公开地获自美国国家生物技术信息中心(NCBI)以及其他来源(BLAST Manual[BLAST手册]，Altschul等人.NCB/NLM/NIH贝塞斯达，马里兰州20894；Altschul等人，同上)。公知的Smith Waterman算法也可以用来确定一致性。
NKG2A中和治疗剂
抗NKG2A试剂结合人CD94/NKG2A受体的细胞外部分，并降低在CD94/NKG2A阳性淋巴细胞表面上表达的人CD94/NKG2A受体的抑制性活性。在一个实施例中，试剂与HLA-E竞争结合CD94/NKG2A，即该试剂阻断CD94/NKG2A与其配体HLA-E之间的相互作用。在另一个实施例中，试剂不与HLA-E竞争结合CD94/NKG2A；即该试剂能够与HLA-E同时结合CD94/NKG2A。抗体可以结合CD94和NKG2A上的联合表位或单独NKG2A上的表位。
在一个方面，该抗NKG2A试剂是选自完全人类抗体、人源化抗体和嵌合抗体的抗体。在一个方面，该试剂包含衍生自人类IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体的恒定区。在一个方面，该试剂是选自以下抗体的片段：IgA、IgD、IgG、IgE和IgM抗体。在一个方面，该试剂是选自以下的抗体片段：Fab片段、Fab'片段、Fab'-SH片段、F(ab)2片段、F(ab')2片段、Fv片段、重链Ig(美洲驼或骆驼Ig)、VHH片段、单结构域FV和单链抗体片段。在一个方面，该试剂是选自以下的合成的或半合成的抗体衍生的分子：scFV、dsFV、微小抗体、双抗体、三抗体、κ体、IgNAR、以及多特异性抗体。
任选地，抗NKG2A抗体不证明与人类Fcγ受体(例如CD16)的实质的特异性结合。任选地，抗NKG2A抗体缺乏实质的特异性结合或与人类CD16、CD32A、CD32B或CD64中的一种或多种或全部具有低或降低的特异性结合。示例性抗体可包含已知的各种重链的恒定区，其不与或与Fcγ受体低结合。一个这样的实例是人类IgG4恒定区。在一个实施例中，IgG4抗体包含修饰以阻止体内半抗体的形成(fab臂交换)，例如，该抗体包含在残基241(对应于根据EU索引的位置228)中包含丝氨酸至脯氨酸突变的IgG4重链(Kabat等人，“Sequences ofproteins of immunological interest[免疫学目的蛋白质序列]”，第5版，NIH，贝塞斯达，马里兰州，1991)。如此修饰的IgG4抗体将会在体内保持完整并且保持与NKG2A结合的二价(高亲和力)，与将在体内经历fab臂交换的天然IgG4相反，使得他们以可以改变结合亲和力的单价方式来结合NKG2A。可替代地，不包含恒定区的抗体片段(例如Fab或F(ab')2片段)可用于避免Fc受体结合。可以根据本领域已知的方法来评估Fc受体结合，包括例如在BIACORE测定中测试抗体与Fc受体蛋白的结合。此外，可以使用任何人抗体类型(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)，其中Fc部分被修饰以最小化或消除与Fc受体的结合(参见例如WO 03101485，将其披露内容通过引用结合在此)。用于评估Fc受体结合的测定(例如基于细胞的测定)是本领域熟知的，并且描述于例如WO 03101485中。
因此，本发明涉及结合NKG2A的抗体或其他试剂。在一方面中，该抗体以低于与人类NKG2C和/或NKG2E至少100倍的KD结合NKG2A。
在本发明的一方面中，该试剂通过干扰CD94/NKG2A信号传导(例如通过干扰NKG2A与HLA-E的结合、阻止或诱导CD94/NKG2A受体的构像变化、和/或影响CD94/NKG2A受体的二聚化和/或聚集)来降低CD94/NKG2A介导的对表达CD94/NKG2A的淋巴细胞的抑制。
在本发明的一方面中，该试剂以比与NKG2C低至少100倍的KD结合NKG2A的细胞外部分。在另一个优选的方面中，该试剂以比与NKG2C低至少150、200、300、400、或10,000倍的KD结合NKG2A的细胞外部分。在本发明的另一方面中，该试剂以比与NKG2C、NKG2E和/或NKG2H分子低至少100倍的KD结合NKG2A的细胞外部分。在另一个优选的方面中，该试剂以比与NKG2C、NKG2C和/或NKG2H分子低至少150、200、300、400、或10,000倍的KD结合NKG2A的细胞外部分。这可以例如在BiaCore实验中进行测量，其中测量试剂结合固定化的CD94/NKG2A的细胞外部分(例如，从表达CD94/NKG2的细胞中纯化的或在生物系统中产生的)的能力，并与在相同测定中试剂与类似产生的CD94/NKG2C和/或其他CD94/NKG2变体的结合进行比较。可替代地，可以测量试剂与天然表达或过表达(例如在瞬时转染或稳定转染后)CD94/NKG2A的细胞的结合，并与表达CD94/NKG2C和/或其他CD94/NKG2变体的细胞的结合进行比较。抗NKG2A抗体可任选地结合NKG2B，该NKG2B是与CD94一起形成抑制性受体的NKG2A剪接变体。在一个实施例中，可以使用在美国专利号8,206,709中披露的方法测量亲和力，例如通过如在美国专利号8,206,709的实例8中所示的Biacore评估与共价固定的NKG2A-CD94-Fc融合蛋白的结合，将其披露内容通过引用结合在此。
抗NKG2A抗体可以是人源化抗体，例如包含来自选自例如VH1_18、VH5_a、VH5_51、VH1_f、和VH1_46的人受体序列的VH人受体框架，和JH6J-区段，或其他本领域中已知的人类种系VH框架序列。VL区人类受体序列可以是例如VKI_O2/JK4。
在一个实施例中，抗体是基于抗体Z270的人源化抗体。不同的人源化Z270VH链示出于SEQ ID NO:4-SEQ ID NO:8(可变区结构域氨基酸已加下划线)中。HumZ270VH6(SEQ IDNO:4)是基于VH5_51；HumZ270VH1(SEQ ID NO:5)是基于VH1_18；humZ270VH5(SEQ ID NO:6)是基于VH5_a；humZ270VH7(SEQ ID NO:7)是基于VH1_f；以及humZ270VH8(SEQ ID NO:8)是基于VH1_46；全部具有JH6 J区段。这些抗体中的每一个保持与NKG2A的高亲和力结合，具有低的对该抗体的宿主免疫应答的可能性，因为每一个人源化构建体的Kabat CDR-H2的6个C-末端氨基酸残基与人受体构架相同。使用比对程序VectorNTI，获得humZ270VH1和humZ270VH5、humZ270VH6、humZ270VH7和humZ270VH8之间的以下序列一致性：78.2％(VH1对VH5)、79.0％(VH1对VH6)、88.7％(VH1对VH7)和96.0％(VH1对VH8)。
在一个方面，该试剂包含(i)SEQ ID NO:4-SEQ ID NO:8中任一个、或与其具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％一致性的氨基酸序列的重链可变区，和(ii)SEQ ID NO:9、或与其具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％一致性的氨基酸序列的轻链可变区。在一个方面，该试剂包含(i)含有SEQ ID NO:4-8中任一个的氨基酸序列、或与其具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％一致的氨基酸序列的重链，和(ii)含有SEQ ID NO:9的氨基酸序列、或与其具有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％一致的氨基酸序列的轻链。具有SEQ ID NO:4-SEQ ID NO:8中任一个的重链和SEQ ID NO:9的轻链的抗体中和NKG2A的抑制性活性，但实质上不结合活化受体NKG2C、NKGE或NKG2H。T此抗体还与HLA-E竞争结合细胞表面上的NKG2A。在一方面中，该试剂包含HCDR1、HCDR2和/或HCDR3序列，这些序列来源于具有SEQ ID NO:4-8中任一个的氨基酸序列的重链。在本发明的一方面中，该试剂包含LCDR1、LCDR2和/或LCDR3序列，这些序列来源于具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的轻链。
重链
VH6：
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWMNWVRQMPGKGLEWMGRIDPYDSETHYSPSFQGQVT ISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGGYDFDVGTLYWFFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
(SEQ ID NO:4)
VH1：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMNWVRQAPGQGLEWMGRIDPYDSETHYAQKLQGRV TMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARGGYDFDVGTLYWFFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ ID NO:5)
VH5：
EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYSFTSYWMNWVRQMPGKGLEWMGRIDPYDSETHYSPSFQGHV TISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGGYDFDVGTLYWFFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ ID NO:6)
VH7：
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKVSGYTFTSYWMNWVQQAPGKGLEWMGRIDPYDSETHYAEKFQGRV TITADTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCATGGYDFDVGTLYWFFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ ID NO:7)
VH8：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMNWVRQAPGQGLEWMGRIDPYDSETHYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGYDFDVGTLYWFFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ ID NO:8)
轻链
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENIYSYLAWYQQKPGKAPKLLIYNAKTLAEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYGTPRTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQG LSSPVTKSFNRGEC(SEQID NO:9)
在一方面中，该抗NKG2A抗体是包含以下的抗体：对应于SEQ ID NO:4-SEQ ID NO:8的残基31-35的CDR-H1、对应于SEQ ID NO:4-SEQ ID NO:8的残基50-60(任选地是50-66，当包括人类来源的氨基酸时)的CDR-H2、以及对应于SEQ ID NO:4-SEQ ID NO:8的残基99-114(根据Kabat的95-102)的CDR-H3。在一个实施例中,该CDR-H2对应于SEQ ID NO:4-SEQID NO:8的残基50-66。任选地，CDR可以包含一个、两个、三个、四个或更多个氨基酸取代。
在一个方面，该抗NKG2A抗体是包含以下的抗体：对应于SEQ ID NO:9的残基24-34的CDR-L1、对应于SEQ ID NO:9的残基50-56的CDR-L2、以及对应于SEQ ID NO:9的残基89-97的CDR-L3。任选地，CDR可以包含一个、两个、三个、四个或更多个氨基酸取代。
在一个方面，抗NKG2A抗体是包含以下的抗体：对应于SEQ ID NO:4-SEQ ID NO:8中的残基31-35的CDR-H1、对应于SEQ ID NO:4-SEQ ID NO:8的残基50-60(任选地50-66)的CDR-H2、对应于SEQ ID NO:4-SEQ ID NO:8中的残基99-114(95-102，根据Kabat)的残基CDR-H3、对应于SEQ ID NO:9的残基24-34的CDR-L1、对应于SEQ ID NO:9的残基50-56的CDR-L2、以及对应于SEQ ID NO:9残基89-97的CDR-L3。
在一方面中，该试剂包含HCDR1、HCDR2和/或HCDR3序列，这些序列来源于具有SEQID NO:10的氨基酸序列的VH。在本发明的一方面中，该试剂包含LCDR1、LCDR2和/或LCDR3序列，这些序列衍生自具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的VL。在一个方面，试剂包含衍生自具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的VH的HCDR1、HCDR2和/或HCDR3序列，以及衍生自具有SEQID NO:11的氨基酸序列的VH的LCDR1、LCDR2和/或LCDR3序列。具有SEQ ID NO:10的重链和SEQ ID NO:11的轻链的抗体中和NKG2A的抑制性活性，并且还结合活化受体NKG2C、NKG2E或NKG2H。抗体不与HLA-E竞争结合细胞表面上的NKG2A(即它是NKG2A的非竞争性拮抗剂)。
EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYAMSWVRQSPEKRLEWVAEISSGGSYTYYPDTVTGRFTISRDNAKNTLYLEISSLRSEDTAMYYCTRHGDYPRFFDVWGAGTTVTVSS(SEQ ID NO:10)
QIVLTQSPALMSASPGEKVTMTCSASSSVSYIYWYQQKPRSSPKPWIYLTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSGNPYTFGGGTKLEIKR(SEQ ID NO:11)
在一个方面，试剂包括可变重链(VH)结构域(SEQ ID NO:10)的氨基酸残基31-35、50-60、62、64、66和99-108，以及可变轻链(VL)结构域(SEQ ID NO:11)的氨基酸残基24-33、49-55和88-96，任选地具有一个、两个、三个、四个或更多个氨基酸取代。
在一个方面，试剂是针对任何上述抗体结合的CD94/NKG2A表位产生的完全人抗体。
应当理解的是，尽管可以使用上述抗体，但是其他抗体可以识别并且针对NKG2A多肽的任何部分产生，只要该抗体导致NKG2A的抑制性活性的中和。例如，NKG2A的任何片段(优选但不排他地是人类NKG2A)或NKG2A片段的任何组合，可以用作免疫原以产生抗体，并且这些抗体可以识别在NKG2A多肽之内的任何位置的表位，只要它们能在如此处描述的表达NKG2A的NK细胞上这样做。任选地，该表位是由具有SEQ ID NO:4-SEQ ID NO:8的重链和SEQ ID NO:9的轻链的抗体特异性识别的表位。
在一个方面，试剂与美国专利号8,206,709(将其披露内容通过引用结合在此)中披露的humZ270抗体竞争结合人类CD94/NKG2A受体的细胞外部分。竞争性结合可以例如在BiaCore实验中进行测量，其中测量试剂结合固定化的用humZ270饱和的CD94/NKG2A受体的细胞外部分(例如从表达CD94/NKG2的细胞纯化的，或在生物系统中产生的)的能力。可替代地，测量试剂与天然表达或过表达(例如在瞬时转染或稳定转染后)CD94/NKG2A受体并且已经用饱和剂量的Z270预孵育的细胞的结合。在一个实施例中，可以使用美国专利号8,206,709中披露的方法测量竞争性结合，例如通过如美国专利号8,206,709的实例15中所示的流式细胞术评估与Ba/F3-CD94-NKG2A细胞的结合，将其披露内容通过引用结合在此。
PD-1中和治疗剂
目前在市场上或在临床评价中存在至少六种阻断PD-1/PD-L1途径的试剂。一种试剂是BMS-936558(纳武单抗(Nivolumab)/ONO-4538，百时美施贵宝公司(Bristol-MyersSquibb)；以前是MDX-1106)。纳武单抗，(商品名
)是FDA批准的完全人类IgG4抗PD-L1 mAb，其抑制PD-L1配体与PD-1和CD80两者的结合，并且在WO 2006/121168中被描述为抗体5C4，通过引用以其披露内容并入本文。对于黑色素瘤患者，在3mg/kg的剂量下观察到最显著的OR，而对于其他癌症类型，其为10mg/kg。纳武单抗通常以10mg/kg每3周一次给药，直到癌症进展。
MK-3475(来自默克公司(Merck)的人类IgG4抗PD1 mAb)，也称为拉立珠单抗(lambrolizumab)或派姆单抗(pembrolizumab)(商品名
)，已被FDA批准用于治疗黑色素瘤并正在其他癌症中进行测试。派姆单抗以2mg/kg或10mg/kg每2周或每3周测试直至疾病进展。编码人源化抗体h409All的重链和轻链的可变区的DNA构建体已经保藏在美国典型培养物保藏中心专利储存库(维吉尼亚州马纳萨斯市大学大道10801号(10801University Blvd.,Manassas,VA))。含有编码h409A-l 1重链的DNA的质粒于2008年6月9日储存并鉴定为081469_SPD-H，并且含有编码h409Al 1轻链的DNA的质粒于2008年6月9日储存并鉴定为0801470_SPD-L-I 1。MK-3475，也称为Merck 3745或SCH-900475，也描述于WO 2009/114335中。
MPDL3280A/RG7446(来自罗氏公司(Roche)/基因技术公司(Genentech)的抗PD-L1)是包含工程化的Fc结构域的人类抗PD-L1 Ab，其通过最小化FcγR结合和随后的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)而优化功效和安全性。每3周一次给予≤1mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、和25mg/kg MPDL3280A的剂量长达1年。在3期试验中，在NSCLC中每三周一次通过静脉内输注以1200mg给予MPDL3280A。
AMP-224(阿帕里免疫公司(Amplimmune)和GSK公司)是包含融合到Fc结构域的PD-L2胞外结构域的免疫黏附素。中和PD-1的试剂的其他实例可以包括结合PD-L2(抗PD-L2抗体)并阻断PD-1和PD-L2之间的相互作用的抗体。
皮立珠单抗(Pidilizumab)(CT-011；CureTech)(来自CureTech/Teva的人源化IgG1抗PD1 mAb)，皮立珠单抗(CT-011；CureTech)(参见，例如WO 2009/101611)，用3mg/kg静脉内的CT-011每4周进行4次输注，与每周375mg/m2的利妥昔单抗联合治疗三十名患有利妥昔单抗(rituximab)敏感的复发性FL的患者4周，开始于第一次输注CT-011后的2周。
进一步已知的PD-1抗体和其他PD-1抑制剂包括：AMP-224(GSK许可的B7-DC/IgG1融合蛋白)、描述于WO 2012/145493中的AMP514、描述于WO 2011/066389和US 2013/034559中的抗体MEDI-4736(由阿斯利康公司(AstraZeneca)/医学免疫公司(Medimmune)研发的抗PD-L1)，描述于WO 2010/077634中的抗体YW243.55.S70(抗PD-L1)、MDX-1105(也称作BMS-936559，由百时美施贵宝公司(Bristol-Myers Squibb)研发并描述于WO 2007/005874中的抗PD-L1抗体)、以及描述于WO 2006/121168、WO 2009/014708、WO 2009/114335和WO 2013/019906中的抗体和抑制剂，将其披露内容通过引用并入本文。抗PD1抗体的另外的实例披露于WO 2015/085847(上海恒瑞药业有限公司(Shanghai Hengrui PharmaceuticalCo.Ltd.))中，例如分别具有SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和/或SEQ ID NO:8的轻链可变结构域CDR1、CDR2和CDR3的抗体、以及分别具有SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5的重链可变结构域CDR1、CDR2和CDR3的抗体，其中SEQ ID NO参照是根据WO 2015/085847进行编号的，将其披露内容通过引用并入本文。也可以使用与这些抗体中的任一种竞争结合PD-1或PD-L1的抗体。
示例性抗PD-1抗体是派姆单抗(pembrolizumab)(参见，例如WO 2009/114335，将其披露内容通过引用并入本文)。抗PD-1抗体可以是WO 2008/156712中的抗体h409Al 1，其包含由在ATCC中作为081469_SPD-H保藏的DNA编码的重链可变区和由在ATCC中作为0801470_SPD-L-l 1保藏的DNA编码的轻链可变区。在其他实施例中，该抗体包含重链和轻链CDR或派姆单抗(pembrolizumab)的可变区。因此，在一个实施例中，该抗体包含由在ATCC中作为081469_SPD-H保藏的DNA编码的派姆单抗的VH的CDR1、CDR2、和CDR3结构域，以及由在ATCC中作为0801470_SPD-L-I 1保藏的DNA编码的派姆单抗的VL的CDR1、CDR2和CDR3结构域。
在一些实施例中，该PD-1中和剂是抑制PD-L1与PD-1结合的抗PD-L1 mAb。在一些实施例中，该PD-1中和剂是抑制PD-1与PD-L1结合的抗PD1 mAb。在一些实施例中，该PD-1中和剂是免疫粘附素(例如，包含与恒定区(例如，免疫球蛋白序列的Fc区)融合的PD-L1或PD-L2的细胞外结合部分或PD-1结合部分的免疫粘附素)。
另一个示例性抗PD-1抗体是包含具有SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13示出的各自序列或者具有与其至少50％、60％、70％、80％、90％、95％，98％或99％一致性的各自氨基酸序列的重链和轻链的纳武单抗，或其抗原结合片段以及变体。在其他实施例中，该抗体包含纳武单抗的重链和轻链CDR或可变区。因此，在一个实施例中,该抗体包含具有SEQ IDNO:12示出的序列的纳武单抗的重链的CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及具有SEQ ID NO:13所示序列的纳武单抗的轻链的CDR1、CDR2和CDR3结构域。
QVQLVESGGGWQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVrWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTTYTCNVDHKPSNTKVDRVESYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWYYDGVEVHNATKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPEKNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ ID NO:12)。
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIRTVAAPSVFIFPPSDEQLSGTASVVCLLNNFYPREAVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSDSTYSLSSTLLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTSFNRGEC(SEQ ID NO:13)。
示例性抗PD-L1抗体包含具有SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15示出的各自序列或者具有与其至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％一致性的各自氨基酸序列的重链和轻链可变区，或其抗原结合片段以及变体。在其他实施例中，该抗体包含MPDL3280A的重链和轻链CDR或可变区。因此，在一个实施例中,该抗体包含具有SEQ ID NO:14示出的序列的重链的CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及具有SEQ ID NO:15示出的序列的轻链的CDR1、CDR2和CDR3结构域。
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWG QGTLVTVSS(SEQ ID NO:14)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:15)
抗PD-1或抗PD-L1抗体可以选自完全人抗体、人源化抗体和嵌合抗体。在本发明的一方面中，该试剂包含衍生自人类IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体的恒定区。在本发明的一方面中，该试剂是选自IgA、IgD、IgG、IgE和IgM抗体的抗体的片段。在本发明的一个方面，该试剂是选自以下的抗体片段：Fab片段、Fab'片段、Fab'-SH片段、F(ab)2片段、F(ab')2片段、Fv片段、重链Ig(美洲驼或骆驼Ig)、VHH片段、单结构域FV和单链抗体片段。在本发明的一个方面，该试剂是选自以下的合成的或半合成的抗体衍生的分子：scFV、dsFV、微小抗体、双抗体、三抗体、κ体、IgNAR；以及多特异性抗体。
该抗PD-1或抗PD-L1抗体可以缺乏与Fcγ受体(例如，CD16)的实质的特异性结合。这类抗体可以包含已知不结合Fc受体的各种重链的恒定区。一个此类实例是IgG4恒定区。可替代地，不包含恒定区的IgG4抗体片段(例如Fab或F(ab')2片段)可用于避免Fc受体结合。可以根据本领域已知的方法来评估Fc受体结合，包括例如在BIACORE测定中测试抗体与Fc受体蛋白的结合。此外，可以使用任何人类抗体类型(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)，其中Fc部分被修饰以最小化或消除与Fcγ受体的结合。因此，该抗PD-1或抗PDL1抗体，所述抗体通常具有降低的或最小的效应子功能。在一方面中，最小效应子功能来自原核细胞中的产生。在一方面中，最小效应子功能源自“效应子减少的Fc突变”或无糖基化。在另一个实施例中，效应子减少的Fc突变是恒定区中的N297A或D265A/N297A取代。
可以将抗NKG2A或抗PD-1或抗PD-L1试剂(例如抗体)并入药物配制品中，该药物配制品包的浓度从1mg/ml至500mg/ml，其中所述配制品具有从2.0至10.0的pH。该配制品可以进一步包含缓冲体系、一种或多种防腐剂、一种或多种张度剂、一种或多种螯合剂、稳定剂和表面活性剂。在一个实施例中，该药物配制品是水性溶液，即包含水的配制品。此类配制品典型地是溶液或悬浮液。在另外的实施例中，该药物配制品是水性溶液。术语“水性溶液”定义为包含至少50％w/w水的配制品。同样，术语“水性溶液”定义为包含至少50％w/w水的溶液，并且术语“水性悬浮液”定义为包含至少50％w/w水的悬浮液。
在另一个实施例中，该药物配制品是冷冻干燥的配制品，医生或患者在使用前添加溶剂和/或稀释剂。
在另一个实施例中，该药物配制品是干燥配制品(例如冷冻干燥的或喷雾干燥的)，可立即使用而不经任何预先溶解。
在另外的方面，该药物配制品包含此类抗体的水性溶液和缓冲液，其中抗体以1mg/ml或以上的浓度存在，并且其中所述配制品的pH从约2.0至约10.0。
在另一个实施例中，该配制品的pH是在选自以下列表的范围内，该列表由以下组成：从约2.0至约10.0、约3.0至约9.0、约4.0至约8.5、约5.0至约8.0、以及约5.5至约7.5。
在另一个实施例中，所述缓冲剂选自下组，该组由以下组成：乙酸钠、碳酸钠、柠檬酸盐、甘氨酰甘氨酸、组氨酸、甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸钠、以及三(羟甲基)-氨基甲烷、二甘氨酸、曲辛、苹果酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、天冬氨酸或其混合物。这些特定缓冲剂中的每一种构成本发明的可替代实施例。
在另一个实施例中，该配制品进一步包含药学上可接受的防腐剂。在另一个实施例中，该配制品进一步包含等渗剂。在另一个实施例中，该配制品进一步包含螯合剂。在本发明的另一个实施例中，该配制品进一步包含稳定剂。在另一个实施例中，该配制品进一步包含表面活性剂。为了方便，参考Remington:The Science and Practice of Pharmacy[雷明顿：药物科学与实践]，第19版，1995。
可能的是其他成分可以存在于本发明的药物配制品中。此类另外的成分可以包括润湿剂、乳化剂、抗氧化剂、填充剂、张力调节剂、螯合剂、金属离子、油质载体、蛋白质(例如人血清白蛋白、明胶或蛋白质)和两性离子(例如氨基酸如甜菜碱、牛磺酸、精氨酸、甘氨酸、赖氨酸和组氨酸)。当然，此类另外的成分不应不利地影响本发明的药物配制品的总体稳定性。
根据本发明的药物组合物的给药可以通过若干种给药途径(例如静脉内给药)。还可以通过检查其他已经研发的治疗性单克隆抗体的经验来确定适合的抗体配制品。在临床方面，数种单克隆抗体已经显示是有效的，例如美罗华(利妥昔单抗)、赫赛汀(曲妥珠单抗)、艾克斯莱尔(xolair)(奥巴佐单抗)、托西莫(托西莫单抗)、坎帕斯(阿伦单抗)、泽娃灵(Zevalin)、Oncolym，并且类似的配制品可以与本发明的化合物一起使用。例如，可以在100mg(10mL)或500mg(50mL)一次性使用的小瓶中以10mg/mL的浓度提供单克隆抗体，配制用于在9.0mg/mL氯化钠、7.35mg/mL柠檬酸钠二水合物、0.7mg/mL聚山梨酯80和无菌注射用水中的IV给予。将pH调整至6.5。在另一个实施例中，在约6.0的pH下，将抗体以包含约20mM柠檬酸钠、约150mM NaCl的配制品提供。
还提供了包括适应用于上述方法的治疗有效量的一种药物组合物的试剂盒，该药物组合物含有抗NKG2A抗体、和任选地另外的抗PD-1或抗PD-L1抗体、以及药学上可接受的载体。这些试剂盒还可以任选地包括说明书，例如，包括给药计划，以允许专业人员(例如，医师、护士或患者)将其中含有的组合物给予患有癌症(例如，实体瘤)的患者。所述试剂盒还可以包括注射器。
任选地，这些试剂盒包括单剂量药物组合物的多个包装，每种药物组合物含有用于根据上文提供的方法单次给药的有效量的抗NKG2A、和任选地另外的抗PD-1或抗PD-L1抗体。给予该一种或多种药物组合物所必要的仪器或装置也可以被包括在这些试剂盒中。例如，试剂盒可以提供一个或多个预填充的注射器，这些注射器含有一定量的抗NKG2A、抗PD-1或抗PD-L1抗体。
在一个实施例中，本发明提供了用于治疗人类患者抗PD-1/PD-L1抗体抗性癌症的试剂盒，该试剂盒包含：
(a)抗NKG2A抗体的剂量，该抗NKG2A抗体包含具有SEQ ID NO:4-8中任一个所示的序列的重链的CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及具有SEQ ID NO:9所示的序列的轻链的CDR1、CDR2和CDR3结构域；
(b)任选地，抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体的剂量；和
(c)任选地，在本文所述的任何方法中使用抗NKG2A抗体(和任选地抗PD-1或抗PD-L1抗体)的说明书。
恶性肿瘤的诊断、预后、以及治疗
描述了用于诊断、预后、监测、治疗和防止具有中和NKG2A活性的试剂的个体的癌症的方法，任选地进一步与中和PD-1活性的试剂联合，例如，抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体。个体可以任选地是用中和PD-1抑制性活性的试剂治疗的不良应答者，例如，是经历或预测具有高度可能性的个体(例如，基于一种或多种预后因素)在用中和PD-1的抑制性活性的试剂治疗之后(期间或之后)经历不完全应答、缺乏治疗应答、可检测的或残留癌症和/或进行性疾病。在一个实施例中，个体的癌症未经历完全应答或预测具有在中和PD-1的抑制性活性的试剂治疗之后(期间或之后)不经历完全应答的可能性(例如高可能性)。在一个实施例中，个体的癌症在用中和PD-1的抑制性活性的试剂治疗(期间或之后)进展(例如进行性疾病)。在一个实施例中，个体的癌症已经部分应答或稳定(部分应答或稳定的疾病)，但预测有可能在用中和PD-1的抑制性活性的试剂治疗之后(期间或之后)进展。
在一个实例中，个体患有已知对用中和PD-1的抑制性活性的试剂治疗不良应答的癌症(例如在单一疗法中)。在一个实例中，个体患有癌症，已知癌症的特征在于用中和PD-1的抑制性活性的试剂(例如在单一疗法中)治疗后，肿瘤浸润性、表达NKG2A的CD8+细胞或NK细胞。在一个实例中，个体患有已知的癌症，其特征在于用中和PD-1的抑制性活性的试剂(例如在单一疗法中)治疗后癌细胞上HLA-E的表达(或增加的表达)。任选地，癌症是头颈部鳞状细胞癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、肾癌、胃肠癌、胰腺或食道腺癌、乳腺癌、肾细胞癌(RCC)、黑色素瘤，结肠直肠癌或卵巢癌。这种个体可以有利地用中和NKG2A的抑制性活性的试剂与中和PD-1的抑制性活性的试剂联合治疗。
例如，个体可能具有不良应答(或抗性或无应答)的癌症，例如尽管(例如在期间或之后)使用中和PD-1的抑制性活性的试剂治疗而复发或进展的癌症。在一个实施例中，用抗NKG2A试剂治疗的个体在用中和PD-1的抑制性活性的试剂治疗(期间或之后)时经历了不完全应答(未经历完全应答(CR))(例如，作为单一疗法或与中和NKG2A的试剂以外的试剂联合治疗)，或在用中和PD-1抑制性活性的试剂治疗期间(期间或之后)至少经历过部分应答(PR)，但其癌症已复发或进展。在本文的任何实施例中，可以根据熟知的标准定义和/或评估治疗应答，例如标准实体瘤的反应评价标准(Response Evaluation Criteria In SolidTumors(RECIST))，例如版本1.1，参见Eisenhauer等人(2009)Eur.J.Cancer[欧洲癌症杂志]45:228-247，或免疫相关的应答标准(Immune-Related Response Criteria(irRC))，参见Wolchock等人(2009)Clinical Cancer Research[临床癌症研究]15:7412-7420。
在一个实施例中，作为不良应答者个体(或具有不良应答的癌症的个体)是用中和PD-1的抑制性活性的试剂治疗的不良疾病预后的个体。例如，基于一种或多种预测因素，可以确定具有不良疾病预后的个体具有高或更高的癌症进展风险(例如，与具有良好疾病预后的个体相比)。在一个实施例中，预测因素包含NKG2A表达的NK细胞和/或CD8 T细胞数量增加和/或NK细胞和/或CD8 T细胞上NKG2A水平升高，可指示对用中和PD-1的抗体治疗的应答具有不良预后的个体。在一个实施例中，预测因素包含在一个或多个基因中存在或不存在突变。在一个实施例中，突变定义由T细胞识别的新表位。在一个实施例中，预测因素包含肿瘤细胞中一种或多种基因或蛋白质的表达水平，例如，PD-L1，肿瘤细胞上PD-L1降低或升高的水平。在一个实施例中，预测因素包含周期中或肿瘤环境中的NK细胞和/或CD8 T细胞中一种或多种基因或蛋白质的表达水平，例如PD-1。在一个实施例中，预测因素包含癌细胞中的突变负荷，例如每个外显子组的非同义突变的数量。
本文所述的治疗方案和方法可以与检测获得自个体(例如包含癌细胞、癌组织或癌症相邻组织的生物样品)的生物样品中的细胞上表达PD-L1的之前步骤一起使用或不与之一起使用。在另一个实施例中，本披露内容提供了用于在对其有需要的个体中治疗或预防癌症的方法，该方法包含：
a)在表达PD-L1的个体样品中检测细胞(例如肿瘤细胞、肿瘤浸润性免疫细胞、肿瘤浸润性巨噬细胞)，和
b)在确定表达PD-L1的细胞包含在样品中时，任选地在对应于个体不良应答的参考水平和/或不从中和PD-1的抑制性活性的试剂中获得实质的益处，给予个体中和NKG2A抑制性活性的试剂，任选地与中和PD-1抑制性活性的试剂联合使用。PD-L1参考水平可以通过任何合适的常规使用的参考水平来表征。例如，如果1％或更少、任选地5％或更少、任选地10％或更少、任选地50％或更少的肿瘤细胞或来自肿瘤组织样品的表达PD-L1的细胞(例如使用基于免疫组织化学的测定)，可以确定样品对应于个体不良应答和/或不从中和PD-1抑制性活性的试剂获得实质的益处。此类测定的实例包括来自丹麦达科公司(Dako DenmarkA/S)的pharmDx的PD-L1 IHC 22C3测定。在该测定中，使用肿瘤比例得分(TPS)测量PD-L1表达水平，肿瘤细胞PD-L1染色的百分比(0％至100％)。任选地，参考水平是非高PD-L1表达的水平，任选地其中少于50％的肿瘤细胞表达PD-L1(例如，患者的TPS少于50％)。
本文所述的治疗方案和方法可用于治疗实体瘤和血液癌。本发明的方法和组合物用于例如治疗多种癌症和其他增生性疾病，包括但不限于：鳞状上皮细胞癌、恶性肿瘤(包括膀胱、乳腺、结肠、肾、肝、肺、卵巢、头颈、前列腺、胰腺、胃、宫颈、甲状腺和皮肤)；淋巴系造血肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性成淋巴细胞白血病、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛状细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤、以及多发性骨髓瘤；髓系造血肿瘤，包括急性和慢性骨髓性白血病、早幼粒细胞性白血病和骨髓增生异常综合征；间充质起源肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；其他肿瘤，包括黑色素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、成神经细胞瘤和神经胶质瘤；中枢和周围神经系统肿瘤，包括星形细胞瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；间充质起源肿瘤，包括纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和骨肉瘤；以及其他肿瘤，包括黑色素瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、精原细胞瘤、和甲状腺滤泡性癌。
在一个实施例中，癌症是头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)。在一个实施例中，HNSCC是口咽肿瘤、喉肿瘤、口腔肿瘤、或喉咽肿瘤。在一个实施例中，HNSCC是口腔SCC(OCSCC)。OCSCC包含唇、舌的前2/3、口底、颊黏膜、齿龈、硬腭和磨牙后三角的鳞状细胞癌。在一个实施例中，该HNSCC是转移性癌症。
当治疗患有实体瘤的个体时，可以有利地根据本文所述的治疗方案，向没有接受手术以除去癌细胞或在当前期间没有接受这样的手术的患有癌症的个体给予中和人类NKG2A多肽的抑制性活性的化合物(例如抗体)。然而，应当领会的是，还可以向已经接受或正在进行手术以除去癌细胞的患者给予该化合物。在向还未接受外科手术以除去癌细胞(例如以除去HNSCC细胞)的个体给予抗NKG2A化合物的情况下，NKG2A结合化合物可以例如在手术前大约1至8周给予。在一个实施例中，在手术前给予用抗NKG2A化合物治疗的至少一个(例如一个、两个、三个或更多个)完全给予周期。在一个实施例中，该给予周期在2周和8周之间。
用于治疗本文提供的PD-1/PD-L1不良应答癌症的疗法涉及给予中和抗NKG2A抗体，任选地在不存在或任选地与PD-1中和剂(例如抗PD-1中和剂、抗PD-L1抗体)联合治疗患有癌症的受试者(例如，晚期难治性瘤或进展实体瘤或血液肿瘤)。在一个实施例中，本发明提供抗NKG2A抗体和任选地另外的抗PD-1抗体联合用于治疗患有实体瘤(例如实体瘤、晚期难治性实体瘤)或患有血液肿瘤的受试者。在一个具体的实施例中，该抗NKG2A抗体包含SEQID NO:4-8中任一个的重链和SEQ ID NO:9的轻链。在一个实施例中，中和PD-1的抑制性活性的抗体选自下组，该组由以下组成：派姆单抗、纳武单抗、AMP-514、MEDI-4736、CT-011和MPDL3280A。
如在此所使用，辅助或联合给药(共同给药)包括呈相同或不同剂量形式的化合物的同时给药，或化合物的分开给药(例如，顺序给药)。因此，抗NKG2A和抗PD-1或抗PD-L1抗体可以在单个配制品中同时给予。可替代地，抗NKG2A和抗PD-1或抗PD-L1抗体可以配制用于单独施用，以及同时地或顺序地施用。
在一个实施例中，用本文披露的方法治疗的癌症是一种特征在于NK细胞和/或在其表面NKG2A表达的CD8 T细胞浸润的癌症。在一个实施例中，用本文披露的方法治疗的癌症是一种特征在于NK细胞浸润(其中至少20％、30％、40％、50％的NK细胞在其表面NKG2A表达)的癌症。
在一个实施例中，用本文披露的方法治疗的癌症是一种特征在于高HLA-E水平的癌症。在一个实施例中，该癌症选自下组，该组由以下组成：肺癌(例如非小细胞肺癌(NSCLC))、肾细胞癌(RCC)、黑色素瘤、头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)、结肠直肠癌、以及卵巢癌。应理解的是，可以在有或没有预先检测步骤的情况下用抗NKG2A试剂治疗患有癌症的患者，以评估HLA-E在肿瘤细胞表面上的表达。有利地，治疗方法可以包含在来自个体的肿瘤的生物样品中(例如在肿瘤细胞上)检测HLA-E核酸或多肽的步骤。生物样品的实例包括任何合适的生物流体(例如血清、淋巴液、血液)、细胞样品或组织样品。例如，组织样品可以是肿瘤组织或肿瘤相邻组织的样品。任选地，在恶性细胞的表面上检测HLA-E多肽。生物样品表达HLA-E(例如，与参考相比，显著表达；以高水平表达HLA-E，用抗HLA-E抗体进行高强度染色)的确定表明个体患有可能从用抑制NKG2A的药剂的治疗中强烈受益的癌症。在一个实施例中，该方法包括在生物样品中确定HLA-E核酸或多肽的表达水平并且将该水平与对应于健康个体的参考水平(例如一个值、弱的细胞表面染色等)进行比较。生物样品以与参考水平相比增加的水平表达HLA-E核酸或多肽的确定可能指示个体患有可以用抑制NKG2A的试剂治疗的癌症。
在一个实施例中，生物样品(例如，包含肿瘤细胞、肿瘤组织和/或肿瘤相邻组织的样品)显著表达HLA-E核酸或多肽的确定表明个体患有可用抑制NKG2A的试剂治疗的癌症。当提及HLA-E多肽时，“显著地表达”意指HLA-E多肽在从给定个体中获取的实质的肿瘤细胞中表达。然而术语“显著表达”的定义不限于精确的百分率值，在一些实例中，称为“显著表达”的受体将存在于至少30％、40％、50％、60％、70％、80％或更多的取自患者(样品中的)的肿瘤细胞上。
确定个体是否具有表达HLA-E多肽的癌症细胞可以例如包括从包含癌症细胞的个体获得生物样品(例如通过进行活组织检查)，使所述细胞与结合HLA-E多肽的抗体接触，并且检测这些细胞是否在其表面上表达HLA-E。任选地，确定个体是否具有表达HLA-E的细胞包括进行免疫组织化学测定。任选地，确定个体是否具有表达HLA-E的细胞包括进行流式细胞术测定。
在这些治疗方法中，当抗NKG2A抗体和抗PD-1或抗PD-L1抗体联合给予，抗NKG2A抗体和抗PD-1或抗PD-L1抗体可以单独地、一起或顺序地、或以组合物给予。在一些实施例中，在给予该抗PD-1或抗PD-L1抗体之前给予抗NKG2A。例如，可以在给予该抗PD-1或抗PD-L1抗体之前约0至30天给予该抗NKG2A抗体。在一些实施例中，在给予该抗PD-1或抗PD-L1抗体之前从大约30分钟至大约2周、从大约30分钟至大约1周、从大约1小时至大约2小时、从大约2小时至大约4小时、从大约4小时至大约6小时、从大约6小时至大约8小时、从大约8小时至1天、或从大约1天至5天给予抗NKG2A抗体。在一些实施例中，与给予该抗PD-1或抗PD-L1抗体同时给予抗NKG2A抗体。在一些实施例中，在给予该抗PD-1或抗PD-L1抗体之后给予抗NKG2A抗体。例如，可以在给予该抗PD-1或抗PD-L1抗体之后约0至30天给予抗NKG2A抗体。在一些实施例中，在给予该抗PD-1或抗PD-L1抗体之后从大约30分钟至大约2周、从大约30分钟至大约1周、从大约1小时至大约2小时、从大约2小时至大约4小时、从大约4小时至大约6小时、从大约6小时至大约8小时、从大约8小时至1天、或从大约1天至5天给予抗NKG2A抗体。
用抗NKG2A抗体治疗人类的示例性治疗方案包括，例如，给予患者有效量的每种抑制NKG2A的抗体，其中该方法包含至少一个给予周期，其中至少一个剂量的抗NKG2A抗体以1mg/kg-10mg/kg体重的剂量给予。在一个实施例中，该给予周期在2周和8周之间。
用抗NKG2A抗体治疗人类的示例性的治疗方案包括，例如，向患者给予有效量的每种抑制NKG2A的抗体与中和人类PD-1的抑制性活性的抗体，其中该方法包含至少一个给予周期，其中以1mg/kg-10mg/kg体重的剂量给予至少一个剂量的抗NKG2A抗体，并且以1mg/kg-20mg/kg体重的剂量给予至少一个剂量的抗PD-1或抗PD-L1抗体。在一个实施例中，该给予周期在2周和8周之间。
在一个实施例中，该方法包含至少一个给予周期，其中该周期是八周或更短的时间，其中对于该至少一个周期中的每一个，以1mg/kg-10mg/kg体重的剂量给予两个、三个或四个剂量的抗NKG2A抗体。在一个实施例中，每个周期进一步包含以1mg/kg-20mg/kg体重的剂量给予两种，三种或四种剂量的抗PD-1或抗PD-L1抗体。
该抗NKG2A抗体可有利地以实现循环中浓度高于基本上完全(例如90％、95％)受体饱和所需浓度(如通过在表达NKG2A的细胞(例如在PBMC中)上滴定抗NKG2A抗体所评估的)至少10倍、20倍或30倍的量给予，或任选地以实现在血管外组织(例如肿瘤组织或环境)中的浓度高于基本上完全受体饱和所需浓度(如通过在表达NKG2A的细胞(例如在PBMC中)上滴定抗NKG2A抗体所评估的)至少10倍、20倍或30倍的量给予。
可以使用表达NKG2A的NK细胞对表达HLA-E的靶细胞的细胞毒性活性的合适测定来评估NKG2A+NK细胞应答。实例包括基于NK细胞活化的标记物的测定，例如CD107或CD137表达。本文实例中使用的阻断抗NKG2A抗体humZ270(例如，具有SEQ ID NO:4-SEQ ID NO:8中任一个的重链和SEQ ID NO:9的轻链)的NKG2A+NK细胞应答的EC50(例如，如在CD107转移测定中所评估的)为约4μg/ml，并且EC100为约10μg/ml。因此，给予一定量的抗NKG2A抗体以保持至少4μg/ml的连续(最小)血液浓度。有利地，可给予一定量的抗NKG2A抗体以达到和/或保持至少10μg/ml的连续(最小)血液浓度。例如，要达到和/或保持的血液浓度可以在10μg/ml-12μg/ml、10μg/ml-15μg/ml、10μg/ml-20μg/ml、10μg/ml-30μg/ml、10μg/ml-40μg/ml、10μg/ml-50μg/ml、10μg/ml-70μg/ml、10μg/ml-100μg/ml、10μg/ml-150μg/ml或10μg/ml-200μg/ml之间。当脉管系统外部的组织被靶向(例如在实体瘤的治疗中)时，给予一定量的抗NKG2A抗体以实现和/或保持至少10μg/ml的组织浓度；例如，给予一定量的抗NKG2A抗体以实现至少100μg/ml的血液浓度，预期将实现至少10μg/ml的组织浓度。例如，为了在组织中达到/保持10μg/ml，所要达到和/或保持的血液浓度可以在100μg/ml-110μg/ml、100μg/ml-120μg/ml、100μg/ml-130μg/ml、100μg/ml-140μg/ml、100μg/ml-150μg/ml、100μg/ml-200μg/ml、100μg/ml-250μg/ml或100μg/ml-300μg/ml之间。
在一些实施例中，给予一定量的抗NKG2A抗体以获得对应于至少NKG2A+淋巴细胞应答(例如，NKG2A+NK细胞应答)的EC50的(任选地约为或至少约为)EC100在血液(例如，血清)中的浓度。关于NKG2A+细胞应答(例如NK细胞应答)，“EC50”(或“EC100”)是指抗NKG2A抗体的有效浓度，其关于这种NKG2A+细胞应答(例如，NK细胞应答)产生其最大应答或效应的50％(或100％，当提及EC100时)。在一些实施例中，特别是为了治疗实体瘤，设计达到的浓度以导致组织中(在脉管系统外部，例如在肿瘤环境中)的浓度，该组织中的浓度对应于NKG2A+NK细胞应答的至少EC50(任选地约为或至少约为)、NKG2A+NK细胞应答的EC100。
针对本文实例中使用的具有约10μg/ml的NKG2A+NK细胞应答的EC100的抗NKG2A抗体(如humZ270)的示例性的治疗方案包含至少一个给予周期，其中至少一个剂量的抗NKG2A抗体以以下剂量给予：2mg/kg-10mg/kg、任选地4mg/kg-10mg/kg、任选地6mg/kg-10mg/kg、任选地2mg/kg-6mg/kg、任选地2mg/kg-8mg/kg、或任选地2mg/kg-4mg/kg体重。任选地，给予至少2、3、4、5、6、7或8个剂量的抗NKG2A抗体。在一个实施例中，该给予周期在2周和8周之间。在一个实施例中，给予周期是8周。在一个实施例中，该给予周期是8周，并且包括每两周给予一个剂量的抗NKG2A抗体(即，总共四个剂量)。
在本文任何实施例的一个方面，抗NKG2A抗体约每两周给予一次。
与抗NKG2A抗体一起使用，特别是用于治疗造血系统肿瘤的示例性治疗方案包括例如，以有效保持抗NKG2A抗体的连续血液浓度为至少10μg/ml的量每月两次向患者给予抗NKG2A抗体，至少两次连续给予抗NKG2A抗体之间的连续血液浓度为2mg/kg-10mg/kg、任选地2mg/kg-8mg/kg、任选地2mg/kg-6mg/kg、任选地2mg/kg-4mg/kg、任选地约4mg/kg体重。可以任选地给予这些剂量，以便在整个治疗周期中提供至少10μg/ml的抗NKG2A抗体的连续血液浓度。达到10μg/ml的抗NKG2A抗体的血液浓度对应于抗体(如人源化Z270)的EC100。
与抗NKG2A抗体一起使用，特别是用于治疗实体瘤(其中在血管外组织中(例如，在肿瘤或肿瘤环境中)寻求抗NKG2A抗体EC50浓度)的示例性治疗方案包括例如，以有效维持抗NKG2A抗体的连续血液浓度为至少40μg/ml的量每月两次向患者给予抗NKG2A抗体，至少两次连续给予抗NKG2A抗体之间的连续血液浓度为2mg/kg-10mg/kg、任选地2mg/kg-6mg/kg、任选地2mg/kg-4mg/kg、任选地约4mg/kg体重。可以任选地给予这些剂量，以便在整个治疗周期中提供至少40μg/ml的抗NKG2A抗体的连续血液浓度。达到40μg/ml的抗NKG2A抗体的血液浓度被预期提供约4μg/ml的组织(例如，血管外组织、肿瘤环境)浓度，进而对应于抗体(如，人源化Z270)的EC50。
与抗NKG2A抗体一起使用，特别是用于治疗实体瘤(其中在血管外组织中(例如，在肿瘤或肿瘤环境中)寻求抗NKG2A抗体EC50浓度)的示例性的治疗方案包括例如向患者给予有效量的抗NKG2A抗体，其中每月2次并且以有效保持抗NKG2A抗体的连续血液浓度为至少100μg/ml的量给予该抗体，至少两次连续给予抗NKG2A抗体之间的连续血液浓度为4mg/kg-10mg/kg、任选地4mg/kg-6mg/kg、任选地4mg/kg-8mg/kg、任选地约4mg/kg、任选地约6mg/kg、、任选地约8mg/kg、或任选地约10mg/kg。可以任选地给予这些剂量，以便在整个治疗周期中提供至少100μg/ml的抗NKG2A抗体的连续血液浓度。达到100μg/ml的抗NKG2A抗体的血液浓度被预期提供约10μg/ml的组织(例如，血管外、肿瘤环境)浓度，进而对应于抗体(如，人源化Z270)的EC100。
与抗NKG2A抗体一起使用的另外的示例性的治疗方案包括采用具有更高剂量的负荷期、然后是保持期的方案。例如，负荷期可以包括向患者给予有效量的抗NKG2A抗体，其中该抗体以有效保持至少100μg/ml的抗NKG2A抗体的连续血液浓度的量给予一次或多次，直到在保持方案中第一次给予抗NKG2A抗体。例如，当给予一次时，可以给予10mg/kg的抗NKG2A抗体的负荷剂量，其中在保持方案中第一次给予抗NKG2A抗体发生在负荷剂量后约两周(或更少)。然后保持方案可以采用更低剂量和/或更低频率的给予，以在保持方案中的连续给予之间保持至少100μg/ml的抗NKG2A抗体的连续血液浓度。例如，维持方案可以包括每两周一次给予抗NKG2A抗体，剂量为在2mg/kg-10mg/kg之间、任选地4mg/kg-10mg/kg、任选地2mg/kg-4mg/kg、任选地4mg/kg-6mg/kg、任选地4mg/kg-8mg/kg、任选地约4mg/kg、任选地约6mg/kg、任选地约8mg/kg。
在某些实施例中，以4mg/kg、6mg/kg、8mg/kg或10mg/kg给予该抗NKG2A抗体的剂量(例如每个剂量)。在某些实施例中，以1mg/kg-20mg/kg，任选地以10mg/kg给予抗PD-1抗体的剂量(例如每个剂量)。在某些实施例中，以10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg或25mg/kg，任选地以1200mg总剂量给予抗PD-L1抗体的剂量(例如每个剂量)。在某些实施例中，联合治疗允许以较低剂量给予抗PD-1或PD-L1抗体；在一个实施例中，以2mg/kg或3mg/kg给予每剂量的抗PD-1抗体。
在一个实施例中，以下列剂量给予该抗NKG2A抗体和抗PD-1或抗PD-L1抗体：
(a)1mg/kg-10mg/kg抗NKG2A抗体，和(i)1mg/kg-10mg/kg的抗PD-1抗体，或(ii)1mg/kg-20mg/kg的抗PD-L1抗体；
(b)4mg/kg、6mg/kg、8mg/kg或10mg/kg抗NKG2A抗体和10mg/kg的抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体；
(c)4mg/kg、6mg/kg、8mg/kg或10mg/kg抗NKG2A抗体和3mg/kg的抗PD-1抗体；或者
(d)4mg/kg、6mg/kg、8mg/kg或10mg/kg抗NKG2A抗体和2mg/kg的抗PD-1抗体。
在本文任何实施例的一个方面，抗NKG2A抗体约每两周给予一次。在本文任何实施例的一个方面，抗PD-1或抗PD-L1抗体约每三周给予一次。在本文任何实施例的一个方面，抗PD-1或抗PD-L1抗体约每两周给予一次。在本文任何实施例的一个方面，抗PD-1或抗PD-L1抗体约每四周给予一次。
在一个实施例中，通过静脉内给予该抗PD-1和/或抗PD-L1抗体以及抗NKG2A抗体。在一个实施例中，在同一天、任选地进一步约每两周一次、任选地进一步通过静脉内给予该抗PD-1或抗PD-L1抗体和/或抗NKG2A抗体。
在其他方面中，提供了用于鉴定NKG2A+PD1+NK细胞和/或T细胞的方法。评估NKG2A和PD-1在NK细胞和/或T细胞上的共表达可用于诊断的或预后的方法中。例如，可以从个体(例如来自从癌症患者获得的肿瘤或肿瘤相邻组织)获得生物样品，并分析NKG2A+PD1+NK细胞和/或T细胞的存在。NKG2A和PD-1两者在这些细胞上的表达可以例如用于鉴定具有肿瘤浸润性NK和/或T细胞的个体，这些肿瘤浸润性NK细胞和/或T细胞被NKG2A多肽(和任选地进一步通过PD1多肽)抑制。该方法可以例如用作针对用中和NKG2A的试剂治疗的响应的预后，用作针对用中和PD1的试剂治疗的响应的预后，或用作针对用中和NKG2A的试剂与中和PD1的试剂组合治疗的响应的预后。
在一个实施例中，提供了用于评估个体是否适于用抑制NKG2A的试剂与中和人类PD-1的抑制性活性的试剂治疗的方法，该方法包含在来自个体的生物样品中检测表达NKG2A核酸或多肽以及PD-1核酸或多肽两者的淋巴细胞群(例如，CD8+ T细胞、NK细胞)。确定个体具有表达NKG2A核酸或多肽以及PD-1核酸或多肽两者的淋巴细胞群表明了，患者患有癌症，该癌症可以用抑制NKG2A的试剂组合中和人类PD-1的抑制性活性的试剂进行治疗。
在其他方面中，提供了用于鉴定NKG2A+PD1+NK细胞和/或T细胞的方法。肿瘤浸润性效应淋巴细胞可以表达抑制性受体NKG2A和PD-1两者的发现产生了改进的治疗方法以及检测可用于诊断和预后的这些双重限制/抑制的效应细胞的方法。
例如，可以从个体(例如来自从癌症患者获得的肿瘤或肿瘤相邻组织)获得生物样品，并分析NKG2A+PD1+NK细胞和/或T细胞的存在。NKG2A和PD-1两者在这些细胞上的表达可以例如用于鉴定具有肿瘤浸润性NK和/或T细胞的个体，这些肿瘤浸润性NK和/或T细胞被NKG2A和PD1多肽两者抑制。该方法可以例如用作针对用中和NKG2A的试剂治疗的响应的预后，用作针对用中和PD1的试剂治疗的响应的预后，或用作针对用中和NKG2A的试剂与中和PD1的试剂组合治疗的响应的预后。
检测生物样品内的NKG2A限制性和PD-1限制性NK细胞和/或CD8T细胞可以更通常地具有用于研究、评估、诊断、预后和/或病理学预测的优势，其中NK细胞和/或CD8 T细胞的表征是感兴趣的。例如，可以通过评估肿瘤或肿瘤相邻组织是否通过表达NKG2A和PD-1两者的浸润性NK和/或CD8 T细胞来表征而做出有利或不利的癌症预后。
例如，可以使用抗NKG2A和抗PD1抗体来表征或评估患者中的癌症，以评估肿瘤浸润性NK细胞和/或CD8 T细胞是否是NKG2A+PD1+，包括这些NK细胞和/或CD8 T细胞是否存在于肿瘤外周(在肿瘤相邻组织中)。这些方法可用于确定患者是否具有由NK细胞和/或CD8 T细胞表征的病理学，所述病理学可以适于通过直接作用于这样的NK细胞和/或CD8 T细胞(例如通过结合NKG2A和/或PD-1、或它们各自的配体HLA-E或PD-L1)或间接作用于这样的NK细胞和/或CD8 T细胞(例如，通过产生可调节NK细胞和/或CD8 T细胞活性的细胞因子或其他信号分子)的治疗剂调节。任选地，在任何实施例中，已经用中和PD-1的试剂治疗该患者。本文所述的方法可任选地进一步包含：如果确定个体具有可以适于通过作用于肿瘤浸润NK细胞和/或CD8 T细胞的治疗剂调节的病理学，则向个体给予此类治疗剂。
在一个方面，诸位发明人提供了用于检测NKG2A+PD-1+淋巴细胞(任选地NK细胞或CD8+ T细胞)的体外方法，该方法包含提供包含肿瘤浸润性淋巴细胞的生物样品，并确定这些淋巴细胞是否表达NKG2A和PD-1。
在一个实施例中，提供了用于评估个体是否适于用抑制NKG2A的试剂(和任选地进一步用与中和人类PD-1的抑制性活性的试剂)治疗的方法，该方法包括在来自个体的生物样品中检测表达NKG2A核酸或多肽以及PD-1核酸或多肽两者的淋巴细胞群(例如，CD8+ T细胞)。确定个体具有表达NKG2A核酸或多肽以及PD-1核酸或多肽两者的淋巴细胞群可以指示患者患有癌症，该癌症可以用抑制NKG2A的试剂联合中和人类PD-1的抑制性活性的试剂进行治疗。
在其他方面，提供了用于评估患有癌症的个体是否对用中和PD-1的试剂治疗的不良应答的方法，其中评估NKG2A+和/或NKG2A+PD1+NK细胞和/或T细胞的存在和/或数量。评估NKG2A的表达(和/或NKG2A和PD-1的共表达)可以涉及例如从个体(例如从癌症患者获得的癌症或癌症相邻组织)获得生物样品并分析样品中存在NKG2A+NK细胞和/或CD8 T细胞。NKG2A(和任选地另外的PD-1)的表达升高和/或此类NKG2A+和/或NKG2A+PD-1+细胞的数量可以鉴定具有被NKG2A和PD1多肽抑制的肿瘤浸润性NK细胞和/或T细胞的个体。任选地，在向个体给予中和PD-1的试剂后检测NKG2A(和任选的另外的PD-1)的表达和此类NKG2A+和/或NKG2A+PD-1+细胞的数量的增加(与例如参考值，或与用中和PD-1的试剂治疗前的值比较)。具有升高或增加的NKG2A(和任选地另外的PD-1)表达的个体和此类NKG2A+和/或NKG2A+PD-1+细胞的数量可被确定为对中和PD-1活性的试剂的不良应答者。该方法可以例如用作针对用中和NKG2A的试剂治疗的响应的预后，用作针对用中和PD1的试剂治疗的响应的预后，或用作针对用中和NKG2A的试剂与中和PD1的试剂组合治疗的响应的预后。
在本文的任何方法中，检测T细胞和/或NK细胞上的NKG2A和/或PD1可以包含检测组织浸润性人类CD8 T细胞和/或NK细胞上表达的NKG2A和/或PD1，所述方法包含提供来自个体的肿瘤样品(例如样品或肿瘤组织或肿瘤相邻组织)，并使用特异性结合人类NKG2A多肽的单克隆抗体和特异性结合人类PD-1多肽的单克隆抗体检测所述样品中组织浸润性CD8T细胞和/或NK细胞。任选地，在任何实施例中，已经用中和PD-1的试剂治疗该患者。在一个实施例中，该样品包括肿瘤细胞、肿瘤组织或肿瘤相邻组织。在一个实施例中，使用免疫组织化学方法鉴定CD8 T细胞和/或NK细胞。在一个实施例中，该样品是石蜡包埋的样品；任选地将石蜡包埋的样品固定，包埋在石蜡中，切片，脱蜡，并在与单克隆抗体接触之前转移到载玻片上。在一个实施例中,使用流式细胞术方法鉴定CD8 T细胞和/或NK细胞。
实施例
实例1-RMA-S和A20肿瘤细胞被表达NKG2A的NK细胞和表达NKG2A和/或PD-1的CD8T细胞浸润
通常发现淋巴细胞不共表达NKG2A和PD-1。为了研究这些受体在肿瘤浸润淋巴细胞上的表达，研究了NKG2A和PD-1在来自小鼠的肿瘤中的NK和T细胞亚群上的分布。淋巴细胞取自脾、肿瘤引流淋巴结、以及实体瘤内。
将C57/BL6小鼠用PDL-1+Qa-1+RMA-S细胞(Qa-1、Qdm、B2m)或用A20肿瘤细胞进行移植(sc)。当肿瘤体积为约500mm3时，处死RMA-S Qa-1 Qdm B2m(顶行)和A20(底行)荷瘤小鼠。
结果示出于图1A和1B中。通过流式细胞术分别针对肿瘤细胞的Qa-1和PDL-1的表达以及TIL的NKG2A和PD-1的表达来分析肿瘤细胞(图1A)和肿瘤浸润性淋巴细胞-TIL-(图1B)。示出了3只中的一只代表性小鼠。MFI：荧光强度的中位数。
来自两种肿瘤类型的超过一半的浸润性NK细胞表达NKG2A，这表明肿瘤浸润NK细胞被NKG2A抑制。NKG2A+NK细胞通常不表达显著量的PD-1。然而，发现了对于NKG2A和PD-1都是阳性的CD8 T细胞，这表明CD8 T细胞可能受到抑制性受体NKG2A和PD-1两者的限制。
实例2-来自荷有rma-rae1肿瘤的小鼠的NK细胞亚群和T细胞亚群能够共表达NKG2A和PD-1
为了进一步研究受体NKG2A和PD-1的表达，研究了NKG2A和PD-1在小鼠中的NK和T细胞亚群上的分布。淋巴细胞取自脾、肿瘤引流淋巴结、以及实体瘤内。
用RMA-Rae克隆6(200万个细胞)移植(皮下(sc))C57/BL6小鼠。这些肿瘤细胞表达CD94/NKG2A配体(Qa-1)。在第12天处死小鼠，其中平均肿瘤体积：723mm3；SD：161mm3；n＝4。在从脾、LN和肿瘤制备细胞悬浮液后，将细胞如下进行染色：CD3e PerCP Cy5.5、NKP46Alexa 647、NKG2A/C/E FITC、PD1 PE、CD8太平洋蓝(Pacific Blue)。
结果示于图2和表1-3中。
在NK细胞亚群中，引流淋巴结和脾两者中的细胞约为一半NKG2A阳性和一半NKG2A阴性，然而在这两种情况下均没有PD1的显著表达。来自淋巴结的NK细胞是NKG2A+PD-1-(49.2％)和NKG2A-PD-1-(49.5％)，并且少于1％(平均值)的NK细胞是NKG2A+PD-1+。来自脾的NK细胞是NKG2A+PD-1-(44.1％)和NKG2A-PD-1-(55.7％)，并且平均0.1％(平均值)的NK细胞是NKG2A+PD-1+。
在T细胞亚群中，大多数细胞是NKG2A阴性的(淋巴结中仅1.1％和脾中4.7％是NKG2A+)，并且一小部分细胞是PD-1+(淋巴结中3.5％和脾中10％是PD-1+NKG2A-)，没有显著的双阳性NKG2A PD-1细胞。淋巴结中的仅0.1％(平均值)的T细胞是NKG2A+PD-1+，并且脾中的仅0.4％(平均值)的T细胞是NKG2A+PD-1+。来自淋巴结的95.1％的T细胞是双阴性的并且来自脾的85.6％的T细胞是双阴性的。
在CD8 T细胞亚群中，大多数细胞是NKG2A阴性的(淋巴结中仅1.6％和脾中3.9％是NKG2A+)，并且一小部分细胞是PD-1+(淋巴结中1.1％和脾中2.5％是PD-1+NKG2A-)，没有显著的双阳性NKG2A PD-1细胞。淋巴结中的仅0.2％(平均值)的T细胞是NKG2A+PD-1+，并且脾中的仅0.3％(平均值)的T细胞是NKG2A+PD-1+。来自淋巴结的97.3％的T细胞是双阴性的并且来自脾的93.6％的T细胞是双阴性的。
然而，在肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)中，所有细胞亚群具有表达PD-1的细胞。在肿瘤中观察到之前在表达PD-1的显著百分比中未曾发现的NK细胞是PD-1阳性的，包括在NKG2A+亚群内，31.8％(平均值)的NK细胞是NKG2A+PD-1+。尽管肿瘤外几乎无CD8 T细胞具有NKG2A表达，但表达PD-1的CD8 T细胞在肿瘤中是常见的(肿瘤浸润CD8 T细胞亚群具有26.3％NKG2A+阳性细胞的平均值)。此外，在该NKG2A阳性CD8 T细胞亚群中，大多数细胞是NKG2A+PD-1+(19.4％(平均值))。然而，在CD8 T细胞亚群中，在TIL和脾或淋巴结细胞之间观察到的NKG2A表达几乎没有差异，因为肿瘤中仅有5.1％的T细胞表达NKG2A，并且仅3.6％的T细胞是双阳性NKG2A PD-1。
表1：脾
表2：肿瘤引流淋巴结
表3：肿瘤浸润性淋巴细胞
实例3-荷瘤小鼠中的NKG2A和PD-1表达
为了进一步研究荷瘤小鼠中的NKG2A和PD-1表达，用不同的肿瘤细胞(RMA-Rae1、MC38或RMA细胞系)移植C57/BL6小鼠。为了评价肿瘤体积的影响，当小鼠的肿瘤分别达到500mm3、2000mm3和800mm3的体积时处死小鼠。
结果示于图3A和图3B中，其中RMA Rae1(顶行)，MC38(中行)和RMA(底行)。通过流式细胞术在脾、肿瘤引流淋巴结(LN)和肿瘤中针对NKG2A和PD-1表达来分析NK细胞(图3A)和CD8 T细胞(图3B)。示出了2至4只中的一只代表性小鼠。
在NK细胞亚群中，肿瘤、淋巴结和脾中的细胞为约一半NKG2A阳性和一半NKG2A阴性。来自引流淋巴结或脾的NK细胞(不管他们的NKG2A表达)都不显示PD1的任何显著表达。然而，来自RMA-Rae1和RMA的肿瘤浸润性NK细胞表达了显著水平的NKG2A和PD1两者。特别大体积(2000mm3)下被处死的来自肿瘤系MC38的肿瘤浸润性NK细胞表达NKG2A(50％)但不显著表达PD1(3％)。
与在大约一半群体中表达NKG2A的NK细胞不同，来自脾和淋巴结的CD8 T细胞通常既不表达NKG2A也不表达PD1。然而，在肿瘤中，大比例的CD8 T细胞表达NKG2A和PD1两者(RMA-Rae1中28％、MC38的43％和RMA的40％是双阳性的)。结果再次表明，肿瘤浸润CD8 T细胞以及NK细胞可以能够受抑制性受体NKG2A和PD1两者的限制，进一步受跨不同类型的肿瘤细胞的限制。
实例4-在对PD-1治疗有抗性的小鼠中NKG2A表达增加的肿瘤浸润性CD8 T细胞
为了评价用抗PD1抗体的治疗对CD8 T细胞的效应，在细胞植入后的第11天、第14天和第17天用200μg的大鼠IgG2a同种型对照(IC)或中和抗小鼠PD-1的单克隆抗体处理MC38荷瘤小鼠。在第31天处死小鼠(n＝3/组)，并通过流式细胞术在脾、肿瘤引流淋巴结(LN)和肿瘤中表征CD8 T细胞。表示了CD8 T细胞中CD8 NKG2A+的百分比的平均值+/-SD(n＝3)。P<0.005(***)，P<0.0005(****)，用双向ANOVA进行统计分析，然后进行Tukey多重比较检验。
结果示出于图4中。类似于在其他实验中观察到的，来自脾或淋巴结的CD8 T细胞不显著表达NKG2A。给予抗PD1抗体不引起脾或淋巴结T细胞中NKG2A表达水平的任何变化。然而，在肿瘤浸润CD8 T细胞群中，给予抗PD1抗体导致表达NKG2A的CD8 T细胞增加超过50％。结果表明，与用同种型对照mAb处理的小鼠相比，在无应答小鼠中表达NKG2A的CD8 T细胞显著增加。因此，NKG2A受体可能对抗PD1的不良应答者中对肿瘤的CD8 T细胞应答的抑制作用增加。因此，NKG2A的中和可用于逆转对用中和PD-1轴线的试剂(例如抗PD1或抗PDL1抗体)处理的个体中的NKG2A限制性T细胞的抑制。
实例5-联合的抗NKG2A/抗PD1阻断抑制肿瘤生长
为了评价用中和抗PD1的抗体与中和抗NKG2A的抗体的联合治疗的效果，用RMA-SQa-1 Qdm B2m肿瘤细胞移植(sc)C57BL/6小鼠，并用中和抗PD1试剂(中和抗PD-L1的抗体)与中和抗NKG2A的抗体处理。
简言之，在第11天，当RMA-S Qa-1 Qdm B2m肿瘤体积为约85mm3(n＝8只小鼠/组)时，将C57BL/6小鼠进行随机试验，并在第11天、第14天和第18天用同种型对照、抗小鼠NKG2A mAb(200μg，静脉)、抗小鼠PD-L1 mAb(200μg，腹腔)或抗mNKG2A/mPDL-1组合进行处理。每周测量肿瘤体积两次；当肿瘤变大(体积>2000mm3)、溃疡或坏死时处死小鼠，并通过流式细胞术表征NK细胞和CD8 T细胞。
肿瘤体积中位数随时间的发展如图5所示。虽然与该模型中的同种型对照相比，抗NKG2A仅产生适度的抗肿瘤效应，并且抗PD-L1产生实质性抗肿瘤效应但肿瘤体积随着接近第28天而增加，用抗NKG2A和抗PD-L1组合治疗完全消除肿瘤生长，在第28天观察到肿瘤体积没有显著生长。
实例6-PD-1/-L1抗性癌症的体内模型
A20细胞系是表达PD-L1但不表达Qa-1b的小鼠B细胞淋巴瘤细胞系。在皮下注射到Balb/c小鼠中后，A20形成实体瘤，其中保留PD-L1表达并诱导Qa-1b表达。A20肿瘤生长受NK细胞和CD8 T细胞控制。
为了评价用中和抗PD1抗体或中和抗PDL1抗体的联合治疗的效果，将Balb/c小鼠(雌性，8周龄-10周龄)用A20肿瘤细胞(1x106个细胞)移植(sc)并用同种型对照(IC)或中和抗鼠PD-1抗体或中和抗鼠PD-L1抗体(200μg抗PD1或抗PD-L1，第13天、第17天和第20天后)治疗。每周测量肿瘤体积两次；当肿瘤变大(体积>2000mm3)、溃疡或坏死时处死小鼠，并通过流式细胞术表征NK细胞和CD8 T细胞。
个体肿瘤体积随时间的变化示出于图6。抗PD-L1和抗PD-1抗体均未产生实质的抗肿瘤效应。在用同种型对照(IC)治疗的9只小鼠中，未观察到部分消退、暂时完全消退或完全消退。在用抗PD-1抗体治疗的9只小鼠中，没有观察到小鼠具有部分消退或暂时完全消退，并且2只小鼠具有完全消退。在用抗PD-L1抗体治疗的10只小鼠中，未观察到部分消退或暂时完全消退，并且2只小鼠经历完全消退。
尽管PD-1在许多免疫浸润性细胞中高表达，并且PD-L1在肿瘤细胞上高表达，但使用抗PD-1或-PD-L1 mAb的单一疗法仅导致肿瘤生长的适度减少。有趣的是，超过50％的A20肿瘤浸润性NK细胞和约10％的CD8 T细胞表达CD94/NKG2A。The NKG2A+CD8 T细胞群也共表达PD-1。Qa-1b表达不仅在肿瘤细胞表面诱导，而且在体内浸润性免疫细胞诱导。
实例7-抗NKG2A抗体和抗PD1抗体导致PD-1/-L1抗性A20肿瘤中的完全肿瘤消退
当A20肿瘤细胞共表达PD-L1和Qa-1b时，荷A20肿瘤的小鼠接受中和抗PD-1抗体(参见实例6)，然后用中和抗NKG2A抗体另外处理。
将Balb/c小鼠(雌性，8周龄-10周龄)用A20肿瘤细胞(1x106个细胞)移植(sc)并用同种型对照(IC)、中和抗鼠PD-1抗体、或抗PD-1和中和抗NKG2A抗体处理(200μg，第10天、第13天和第17天)。每周用卡尺测量肿瘤体积两次。当肿瘤变大(体积>2000mm3)时，将动物进行安乐死，溃烂或坏死。数据表示每次实验的个体肿瘤体积。
个体肿瘤体积随时间的变化示出于图7。与实例6中观察到的类似，肿瘤对抗PD-1抗体或同种型对照(IC)具有抗性。在用同种型对照(IC)治疗的10只小鼠中，没有观察到部分消退，一次暂时完全消退和一次完全消退，而单独使用抗NKG2A时，观察到一个部分消退，没有临时完全消退和一个完全消退。在用抗PD-1抗体治疗的9只小鼠中，没有小鼠具有部分消退，观察到1只暂时完全消退，并且观察到3只完全消退。然而，当添加抗NKG2A抗体(图7中标记为联合)时，在用添加抗NKG2A抗体处理的10只小鼠中，观察到7个完全消退(没有部分消退或暂时完全消退)。因此，抗NKG2A抗体在治疗对使用抗PD-1或抗PD-L1抗体的疗法具有抗性的癌症中具有有希望的治疗潜力。
实例8-抗NKG2A抗体和抗PD-L1抗体导致抗PD1/-L1抗性A20肿瘤中的完全肿瘤消退
将Balb/c小鼠(雌性，8周龄，n＝11/组)皮下移植A20肿瘤细胞(5x106个细胞)，并在第11天将小鼠随机化(肿瘤体积约50mm3)并用同种型对照(IC)处理，中和抗PD-L1抗体(50μg，第11天、第14天、第18天、第21天、第25天、第28天后)，阻断抗NKG2A mAb(200μg，第11天、第14天和第18天后)或两种mAb联合。每周用卡尺测量肿瘤体积两次。当肿瘤体积超过2000mm3，溃疡或坏死时，使动物安乐死。数据代表个体肿瘤曲线。PR：部分消退，CR：完全消退
个体肿瘤体积随时间的变化示出于图8。与实例6中观察到的类似，肿瘤对抗PD-L1抗体或同种型对照(IC)具有抗性。在用同种型对照(IC)治疗的11只小鼠中，未观察到部分消退和两只完全消退(18％)，而仅用抗NKG2A观察到四只完全消退。在仅用抗PD-L1抗体治疗的11只小鼠中，没有观察到小鼠具有部分消退和6只完全消退。然而，当添加抗NKG2A抗体时，在添加抗NKG2A抗体处理的11只小鼠中，观察到9只完全消退。因此，结果表明抗NKG2A抗体在治疗对使用抗PD-L1抗体的疗法具有抗性的癌症中具有有希望的治疗潜力。
本文所引用的所有参考文献(包括出版物、专利申请、和专利)均通过引用以其全文特此结合，并且引用的程度如同每个参考文献被个别地并且明确地指示通过引用结合并且以其全文在本文中阐述(至法律允许的最大程度)，而不考虑本文其他地方做出的具体文件的任何单独提供的结合。
除非在此另外指示或与上下文明显矛盾，否则在描述本发明的上下文中，术语“一个/种”和“该”以及类似指称对象的使用应解释为包括单数和复数二者。
除非另有说明，所有在此提供的精确值均代表相应的近似值(例如，所有精确的示例值是相对于具体因子提供的，或者测量可以视为还包括提供相应的近似测量，在适当时由“大约”修饰)。其中“约”与数字结合使用，这可以被指定为包括对应于指定数字的+/-10％的值。
除非另外陈述或与上下文明显矛盾，否则在此对于使用了涉及一种或多种要素的术语如“包含”、“具有”、“包括”或“含有”的本发明的任何方面或实施例的描述，旨在提供对“由那一种或多种特定要素组成”、“基本上由那一种或多种特定要素组成”或“基本上包含那一种或多种特定要素”的本发明的类似方面或实施例的支持(例如，除非另外陈述或与上下文明显矛盾，否则在此所述的包含特定要素的组合物应理解为也描述由那个要素组成的组合物)。
本文提供的任何和所有实例或示例性语言(如“例如”)的应用仅旨在更好地说明本发明，而不对另外要求保护的本发明范围做出限制。说明书中的语言不应当被解释为指示任何未要求保护的要素为实践本发明所必需的。
Claims (12)
1.中和人类NKG2A的抑制性活性的抗体在制备用于治疗患有复发性或转移性头颈部鳞状细胞癌的人类个体的药物中的用途，其中所述人类之前已经接受PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂的治疗，其中头颈部鳞状细胞癌在之前的PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂治疗后已经进展，其中中和NKG2A的抑制性活性的所述抗体包含SEQ ID NO:4-8中任一个所示的序列的重链的CDR1、CDR2和CDR3结构域，以及SEQ ID NO:9所示的序列的轻链的CDR1、CDR2和CDR3结构域。
2.如权利要求1所述的用途，其中所述个体具有升高数量的表达NKG2A的NK细胞和/或CD8 T细胞。
3.如权利要求1所述的用途，其中所述个体在NK细胞和/或CD8 T细胞中具有升高的NKG2A多肽表达水平。
4.如权利要求1所述的用途，其中所述中和人类NKG2A的抑制性活性的抗体是结合NKG2A的抗体。
5.如权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述头颈部鳞状细胞癌包括口咽肿瘤、喉肿瘤、口腔肿瘤或喉咽肿瘤。
6.如权利要求5所述的用途，其中所述口腔肿瘤包括唇、舌的前2/3、口底、颊黏膜、齿龈、硬腭和磨牙后三角的鳞状细胞癌。
7.如权利要求1-4中任一项所述的用途，其中中和NKG2A的抑制性活性的所述抗体是非耗竭性抗体。
8.如权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述抗体是IgG4抗体。
9.如权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述抗体缺少Fc结构域或包含Fc结构域，所述Fc结构域经修饰以降低Fc结构域与Fcγ受体之间的结合。
10.如权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述抗体是抗体片段。
11.如权利要求10所述的用途，其中所述抗体片段选自：Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv、双抗体、单链抗体片段、或包含多种不同抗体片段的多特异性的抗体。
12.如权利要求1所述的用途，其中中和NKG2A的抑制性活性的抗体以有效中和NKG2A对NK细胞和/或CD8 T细胞的抑制性活性的量给予所述个体。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201662281217P | 2016-01-21 | 2016-01-21 | |
| US62/281,217 | 2016-01-21 | ||
| PCT/EP2017/051153 WO2017125532A1 (en) | 2016-01-21 | 2017-01-20 | Neutralization of inhibitory pathways in lymphocytes |
| CN201780007833.2A CN108884163B (zh) | 2016-01-21 | 2017-01-20 | 对淋巴细胞中抑制途径的中和 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201780007833.2A Division CN108884163B (zh) | 2016-01-21 | 2017-01-20 | 对淋巴细胞中抑制途径的中和 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116327916A true CN116327916A (zh) | 2023-06-27 |
Family
ID=57944387
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210915090.1A Pending CN116327916A (zh) | 2016-01-21 | 2017-01-20 | 对淋巴细胞中抑制途径的中和 |
| CN201780007833.2A Active CN108884163B (zh) | 2016-01-21 | 2017-01-20 | 对淋巴细胞中抑制途径的中和 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201780007833.2A Active CN108884163B (zh) | 2016-01-21 | 2017-01-20 | 对淋巴细胞中抑制途径的中和 |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US10870700B2 (zh) |
| EP (2) | EP3405495B1 (zh) |
| JP (2) | JP7301538B2 (zh) |
| KR (1) | KR20180101549A (zh) |
| CN (2) | CN116327916A (zh) |
| AU (1) | AU2017208554B2 (zh) |
| CA (1) | CA3012055A1 (zh) |
| CY (1) | CY1124212T1 (zh) |
| DK (1) | DK3405495T3 (zh) |
| ES (1) | ES2871112T3 (zh) |
| HR (1) | HRP20210778T1 (zh) |
| HU (1) | HUE054356T2 (zh) |
| IL (1) | IL260464B (zh) |
| LT (1) | LT3405495T (zh) |
| PL (1) | PL3405495T3 (zh) |
| PT (1) | PT3405495T (zh) |
| RS (1) | RS61901B1 (zh) |
| RU (1) | RU2769569C2 (zh) |
| SG (2) | SG11201805831RA (zh) |
| SI (1) | SI3405495T1 (zh) |
| WO (1) | WO2017125532A1 (zh) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3409289B1 (en) | 2010-02-26 | 2020-09-30 | Novo Nordisk A/S | Stable antibody containing compositions |
| AU2012268939B2 (en) | 2011-06-17 | 2017-05-04 | Novo Nordisk A/S | Selective elimination of erosive cells |
| US10441654B2 (en) | 2014-01-24 | 2019-10-15 | Children's Hospital Of Eastern Ontario Research Institute Inc. | SMC combination therapy for the treatment of cancer |
| JP2017538660A (ja) | 2014-09-16 | 2017-12-28 | イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニムＩｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｐｈａｒｍａ Ｓ．Ａ． | 抗ｎｋｇ２ａ抗体を使用した治療計画 |
| DK3193931T3 (da) | 2014-09-16 | 2020-10-19 | Innate Pharma | Neutralisering af hæmmende veje i lymfocytter |
| SG11201701388UA (en) | 2014-10-23 | 2017-03-30 | Innate Pharma | Treatment of cancers using anti-nkg2a agents |
| AU2016299166B2 (en) | 2015-07-24 | 2022-03-31 | Innate Pharma | Methods for detecting tissue infiltrating NK cells |
| CN112004828A (zh) | 2018-03-13 | 2020-11-27 | 依奈特制药公司 | 头颈癌的治疗 |
| WO2019191764A1 (en) | 2018-03-28 | 2019-10-03 | Ensemble Group Holdings | Methods of treating cancer in subjects having dysregulated lymphatic systems |
| US20210253694A1 (en) * | 2018-05-15 | 2021-08-19 | Medimmune Limited | Treatment of cancer |
| JP2022509942A (ja) * | 2018-11-16 | 2022-01-25 | ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー | 抗ｎｋｇ２ａ抗体およびその使用 |
| CN114901689A (zh) * | 2019-10-14 | 2022-08-12 | 先天制药公司 | 用ilt-2抑制剂治疗癌症 |
| AU2021325430A1 (en) * | 2020-08-12 | 2023-04-20 | Biond Biologics Ltd. | Antibodies against ILT2 and use thereof |
Family Cites Families (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5567610A (en) | 1986-09-04 | 1996-10-22 | Bioinvent International Ab | Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor |
| US5229275A (en) | 1990-04-26 | 1993-07-20 | Akzo N.V. | In-vitro method for producing antigen-specific human monoclonal antibodies |
| GB9725764D0 (en) | 1997-12-04 | 1998-02-04 | Isis Innovation | HLA-E binding |
| DE60334453D1 (de) | 2002-05-30 | 2010-11-18 | Macrogenics Inc | Cd16a bindungsproteine und verwendung zur behandlung von immunkrankheiten |
| DK1831258T4 (en) * | 2004-12-28 | 2023-08-28 | Innate Pharma Sa | Monoklonale antistoffer mod NKG2A |
| CA2607147C (en) | 2005-05-09 | 2018-07-17 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics |
| JP5252635B2 (ja) | 2005-07-01 | 2013-07-31 | メダレックス インコーポレーティッド | プログラム死リガンド１（ｐｄ−ｌ１）に対するヒトモノクローナル抗体 |
| BRPI0712953B8 (pt) * | 2006-06-30 | 2021-05-25 | Novo Nordisk As | anticorpos anti-nkg2a, seu uso, e composição farmacêutica |
| CN104945508B (zh) | 2007-06-18 | 2019-02-22 | 默沙东有限责任公司 | 针对人程序性死亡受体pd-1的抗体 |
| US20090028857A1 (en) | 2007-07-23 | 2009-01-29 | Cell Genesys, Inc. | Pd-1 antibodies in combination with a cytokine-secreting cell and methods of use thereof |
| JP5774312B2 (ja) | 2008-01-24 | 2015-09-09 | ノボ・ノルデイスク・エー／エス | ヒト化抗ヒトｎｋｇ２ａモノクローナル抗体 |
| CN104548091A (zh) | 2008-02-11 | 2015-04-29 | 治疗科技公司 | 用于肿瘤治疗的单克隆抗体 |
| US8168757B2 (en) | 2008-03-12 | 2012-05-01 | Merck Sharp & Dohme Corp. | PD-1 binding proteins |
| LT4209510T (lt) | 2008-12-09 | 2024-03-12 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anti-pd-l1 antikūnai ir jų panaudojimas t ląstelių funkcijos pagerinimui |
| PT2504364T (pt) | 2009-11-24 | 2017-11-14 | Medimmune Ltd | Agentes de ligação direcionados contra b7-h1 |
| EP3409289B1 (en) | 2010-02-26 | 2020-09-30 | Novo Nordisk A/S | Stable antibody containing compositions |
| CA2833636A1 (en) | 2011-04-20 | 2012-10-26 | Amplimmune, Inc. | Antibodies and other molecules that bind b7-h1 and pd-1 |
| AU2012268939B2 (en) | 2011-06-17 | 2017-05-04 | Novo Nordisk A/S | Selective elimination of erosive cells |
| WO2013019906A1 (en) | 2011-08-01 | 2013-02-07 | Genentech, Inc. | Methods of treating cancer using pd-1 axis binding antagonists and mek inhibitors |
| US10344090B2 (en) | 2013-12-12 | 2019-07-09 | Shanghai Hangrui Pharmaceutical Co., Ltd. | PD-1 antibody, antigen-binding fragment thereof, and medical application thereof |
| EP3186282A1 (en) | 2014-08-28 | 2017-07-05 | Academisch Ziekenhuis Leiden h.o.d.n. LUMC | Cd94/nkg2a and/or cd94/nkg2b antibody, vaccine combinations |
| JP2017538660A (ja) | 2014-09-16 | 2017-12-28 | イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニムＩｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｐｈａｒｍａ Ｓ．Ａ． | 抗ｎｋｇ２ａ抗体を使用した治療計画 |
| DK3193931T3 (da) * | 2014-09-16 | 2020-10-19 | Innate Pharma | Neutralisering af hæmmende veje i lymfocytter |
| SG11201701388UA (en) | 2014-10-23 | 2017-03-30 | Innate Pharma | Treatment of cancers using anti-nkg2a agents |
-
2017
- 2017-01-20 CA CA3012055A patent/CA3012055A1/en active Pending
- 2017-01-20 JP JP2018537834A patent/JP7301538B2/ja active Active
- 2017-01-20 SI SI201730735T patent/SI3405495T1/sl unknown
- 2017-01-20 RS RS20210534A patent/RS61901B1/sr unknown
- 2017-01-20 PT PT177023157T patent/PT3405495T/pt unknown
- 2017-01-20 CN CN202210915090.1A patent/CN116327916A/zh active Pending
- 2017-01-20 AU AU2017208554A patent/AU2017208554B2/en active Active
- 2017-01-20 SG SG11201805831RA patent/SG11201805831RA/en unknown
- 2017-01-20 RU RU2018125490A patent/RU2769569C2/ru active
- 2017-01-20 DK DK17702315.7T patent/DK3405495T3/da active
- 2017-01-20 ES ES17702315T patent/ES2871112T3/es active Active
- 2017-01-20 EP EP17702315.7A patent/EP3405495B1/en active Active
- 2017-01-20 LT LTEP17702315.7T patent/LT3405495T/lt unknown
- 2017-01-20 SG SG10202000645SA patent/SG10202000645SA/en unknown
- 2017-01-20 WO PCT/EP2017/051153 patent/WO2017125532A1/en active Application Filing
- 2017-01-20 CN CN201780007833.2A patent/CN108884163B/zh active Active
- 2017-01-20 US US16/071,499 patent/US10870700B2/en active Active
- 2017-01-20 KR KR1020187023541A patent/KR20180101549A/ko active Search and Examination
- 2017-01-20 EP EP21158066.7A patent/EP3868787A1/en active Pending
- 2017-01-20 PL PL17702315T patent/PL3405495T3/pl unknown
- 2017-01-20 HU HUE17702315A patent/HUE054356T2/hu unknown
-
2018
- 2018-07-08 IL IL260464A patent/IL260464B/en unknown
-
2020
- 2020-12-21 US US17/128,241 patent/US20210122821A1/en not_active Abandoned
-
2021
- 2021-05-11 CY CY20211100401T patent/CY1124212T1/el unknown
- 2021-05-14 HR HRP20210778TT patent/HRP20210778T1/hr unknown
-
2023
- 2023-06-09 US US18/331,966 patent/US20230303691A1/en active Pending
- 2023-06-21 JP JP2023101829A patent/JP2023134490A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP3868787A1 (en) | 2021-08-25 |
| HUE054356T2 (hu) | 2021-09-28 |
| AU2017208554A1 (en) | 2018-08-09 |
| LT3405495T (lt) | 2021-08-10 |
| EP3405495A1 (en) | 2018-11-28 |
| JP7301538B2 (ja) | 2023-07-03 |
| RS61901B1 (sr) | 2021-06-30 |
| SG10202000645SA (en) | 2020-03-30 |
| CY1124212T1 (el) | 2022-05-27 |
| PL3405495T3 (pl) | 2021-10-11 |
| US20210122821A1 (en) | 2021-04-29 |
| DK3405495T3 (da) | 2021-05-17 |
| KR20180101549A (ko) | 2018-09-12 |
| CN108884163B (zh) | 2022-08-16 |
| CA3012055A1 (en) | 2017-07-27 |
| HRP20210778T1 (hr) | 2021-07-23 |
| ES2871112T3 (es) | 2021-10-28 |
| IL260464B (en) | 2022-02-01 |
| PT3405495T (pt) | 2021-05-14 |
| SI3405495T1 (sl) | 2021-08-31 |
| JP2023134490A (ja) | 2023-09-27 |
| AU2017208554B2 (en) | 2024-02-15 |
| WO2017125532A1 (en) | 2017-07-27 |
| US20190031755A1 (en) | 2019-01-31 |
| RU2018125490A (ru) | 2020-02-21 |
| EP3405495B1 (en) | 2021-02-24 |
| JP2019506391A (ja) | 2019-03-07 |
| RU2018125490A3 (zh) | 2020-06-26 |
| SG11201805831RA (en) | 2018-08-30 |
| RU2769569C2 (ru) | 2022-04-04 |
| US10870700B2 (en) | 2020-12-22 |
| CN108884163A (zh) | 2018-11-23 |
| US20230303691A1 (en) | 2023-09-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11572410B2 (en) | Neutralization of inhibitory pathways in lymphocytes | |
| US20230303691A1 (en) | Neutralization of inhibitory pathways in lymphocytes | |
| KR20170068458A (ko) | 항-ｎｋｇ2ａ 항체를 사용한 치료 요법 | |
| AU2018348429A1 (en) | Multispecific antibody | |
| US20210253694A1 (en) | Treatment of cancer | |
| CA3092522A1 (en) | Treatment of head and neck cancer | |
| NZ729207B2 (en) | Neutralization of inhibitory pathways in lymphocytes |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: DE Ref document number: 40091504 Country of ref document: HK |