CN116270381A - 一种具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液及在化妆品中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液及在化妆品中的应用。该植物组合物发酵液由如下植物组分制成：苦参、连翘、人参、土茯苓、天门冬。本发明的植物组合物发酵液是以君臣佐使的中医组方理论为指导，通过多种植物协同作用，从控油与抑菌、抗炎、清除自由基、皮肤细胞修复、保湿等综合功效方面达到头皮健康护理的目的。本发明的制备方法采用了酶解、发酵、提纯相结合的方法，即将植物组合物进行酶解、发酵处理后，再经过滤、灭菌、离心分离得到植物组合物发酵液，效果更为显著。

Description

一种具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液及在化妆品 中的应用

技术领域

本发明属于化妆品领域，具体涉及一种具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液及在化妆品中的应用。

背景技术

随着人们的生活水平和生活品质的不断提高，消费者对日常生活必备的洗护发产品的要求越来越高，越来越注重“回归自然”，倾向于植物护发理念。

从目前公开的数据来看，我国60％以上的成年人的头皮都存在不同程度的健康问题。但人们对头皮健康护理的认知仍处于较低水平，市面上头皮健康护理产品仍较少。

健康的头皮生态环境由三大平衡维持：油脂、菌群、代谢平衡。如果三大平衡环境失衡，则头皮容易出油，变得油腻，有害菌将大量滋生，出现头痒现象，同时，头皮角质层代谢过快，形成头屑。此外，头皮是人体第二薄皮肤，其衰老速度比脸皮快6倍。头发的风吹日晒、染烫、热风吹干等都会导致头皮的干燥、易衰老、发炎等，也会使头发干燥、分叉掉发、毛鳞片受损、发质脆弱。因此，头皮健康护理的关键在于维护头皮油脂、菌群、代谢的三大平衡。

目前，用作头皮健康护理的活性物大多还是以化学合成的去屑剂为主，但很容易出现耐药性。采用一种绿色、环保健康的植物组合物发酵液来进行头皮健康护理是目前亟待解决的问题。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液，所述具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液采用了酶解技术、发酵技术与分离技术相结合的制备方法，即将植物组合物先进行酶解处理，然后发酵处理，再经过滤、灭菌、离心分离得到具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液。该植物组合物发酵液具有防脱、去屑、去头皮粉刺、止痒等功效。

本发明的第二目的在于提供一种具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液在化妆品中的应用，所述化妆品含有具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液。

本发明的首要目的通过下述技术方案实现：

一种具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液，由以下重量份数的植物组分制成：苦参5-45份，连翘5-45份，人参5-45份，土茯苓5-45份，天门冬5-45份；

所述具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液的制备方法，包括如下步骤：

(1)备料：将各植物组分原料除杂、清洗、烘干，粉碎至60-200目，混匀，得到植物组合物；配制浓度为10⁵-10⁸CFU/mL的发酵菌液，pH值调整为6.5-7.5；

(2)酶解：将步骤(1)中植物组合物和去离子水以质量比为1：(10-30)加入到发酵罐中，得到料液；将料液、纤维素酶和半纤维素酶按照质量比为(1-500)：(0.1-10)：0.1进行混合，酶解pH为4-7，酶解温度为40-60℃，转速为40-60rpm/min下酶解1-4h，随后在80-120℃下加热10-40min，得到植物水解液；

(3)发酵：将步骤(2)中植物水解液、发酵菌液、MRS肉汤培养基和去离子水按照质量体积用量比为(0.1-1000g)：(0.1-50mL)：(0.1-50g)：(0.1-1000g)混合，发酵温度为25-45℃下发酵10-120h，得到发酵液；

(4)提纯：将步骤(3)中发酵液在100-125℃下灭菌15-35min，然后在离心半径为10-18cm，转速为3000-5000rpm/min下，离心15-40min，取离心后的上清液，即为具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液。

优选地，所述发酵菌液由所述发酵菌液由浓度为10⁷CFU/mL红曲霉菌菌液和浓度为10⁷CFU/mL戊糖乳杆菌菌液按重量比为2：1配制而成。

优选地，步骤(1)中植物组分原料粉碎至100-200目。

优选地，步骤(2)中，植物组合物和去离子水质量比为1：(15-25)。

优选地，步骤(2)中，料液、纤维素酶和半纤维素酶按照质量比为(1-500)：(1-10)：0.1进行混合。

优选地，步骤(2)中，所述酶解pH为5-6，酶解温度为40-55℃，酶解时间为1.5-3h，加热温度为80-120℃，加热时间为10-40min；

优选地，步骤(3)中，所述植物水解液、发酵菌液、MRS肉汤培养基和去离子水按照质量体积用量比为(10-500g)：(1-10mL)：(1-10g)：(10-500g)混合，发酵温度为30-40℃。

优选地，步骤(3)中，发酵温度为30-40℃，发酵时间为24-72h。

优选地，步骤(4)中，发酵液在100-121℃下灭菌15-35min；离心半径为15-18cm，转速为4000-4500rpm/min下，离心20-30min。

优选地，所述具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液，由以下重量份数的植物组分制成：苦参10-40份，连翘10-40份，人参10-40份，土茯苓10-40份，天门冬10-40份。

优选地，所述具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液，由以下重量份数的植物组分制成：苦参25份，连翘20份，人参20份，土茯苓15份，天门冬20份。

优选地，所述具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液，由以下重量份数的植物组分制成：苦参30份，连翘18份，人参25份，土茯苓12份，天门冬15份。

优选地，所述具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液，由以下重量份数的植物组分制成：苦参30份，连翘20份，人参20份，土茯苓10份，天门冬20份。

本发明的第二目的通过下述技术方案实现：

一种具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液在化妆品中的应用。

优选地，所述化妆品中含有质量分数计为0.1-40％的具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液。

优选地，所述化妆品为洗护类、水剂、乳液类、膏霜类、啫喱类、粉类、喷雾类和精华类。

优选地，所述化妆品为具有头皮健康护理功效的洗发水，包括如下质量分数计的成分：

成分名称	质量分数/％
		去离子水	余量
月桂醇聚醚硫酸酯钠	15.0
		月桂醇硫酸酯铵	4.0
尿囊素	0.3
		乙二醇二硬脂酸酯	2.0
山嵛酰胺丙基二甲胺	0.5
		丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物	0.4
氢氧化钠	0.4
		椰油酰胺MEA	1.0
羟乙二磷酸	0.1
		氨端聚二甲基硅氧烷	2.0
聚季铵盐7	3.0
		椰油酰胺丙基甜菜碱	4.0
本发明所述的植物组合物发酵液	8.0
		氯化钠	0.5
去离子水	5.0
		凯松CG	0.1
香精	0.5

优选地，所述化妆品为具有头皮健康护理功效的护发素，包括如下质量分数计的成分：

本发明的机理是：

头皮问题主要表现为脱发、头屑、炎症、瘙痒等问题。导致这些问题的主要原因多为皮脂腺过于旺盛，油脂分泌过多，堵塞头皮毛孔，引起头皮产生粉刺、头皮发炎而导致脱发；油脂过氧化和滋生的有害菌均产生刺激头皮的成分，导致头皮瘙痒和过多头屑。由此可见，必须将控油与抑菌、抗炎、清除自由基、提升细胞增殖能力、保湿结合在一起才能实现头皮健康护理。

本发明所述的具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液就是以君臣佐使的中医组方理论为指导，经发明人大量的实验研究获得的，精选了苦参、连翘、土茯苓、人参、天门冬按照特定的比例进行配伍实验得到的最佳组方，并经反复优化的发酵提取试验获得的最佳制备方法。

本发明植物组合物以苦参为君药，苦参含有丰富的生物碱、黄酮、挥发油等活性成分，具有清热燥湿、杀虫止痒、凉血止血功效，具有显著的控油和抑制真菌作用；连翘和土茯苓为臣药，连翘含有丰富的苯乙醇苷、黄酮、挥发油和木脂素等活性成分，有显著的抑菌抗炎作用,可促进炎性屏障的形成,对皮脂腺分泌有良好的抑制作用；土茯苓含有丰富的甾醇、皂苷、挥发油、生物碱等活性成分，具有清热解毒、抑菌抗炎、消肿止痛等功效；人参为佐药，人参的主要成分为人参皂苷类、多肽类、多糖以及维生素等，能扩张皮肤的毛细血管，促进皮肤的血液循环，增强皮肤的营养，对于细胞增殖有显著促进作用；天门冬为使药，天门冬含有天冬酰胺(天门冬素)、p-固甾醇、甾体皂苷和丰富的氨基酸等活性成分，具有显著的保湿、抗氧化和良好的抗菌抗炎功效。本发明的植物组合物发酵液具有显著的控油与抑菌、抗炎、清除自由基、修复皮肤细胞、保湿等综合功效，添加于化妆品中，能够实现头皮健康护理。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

本发明以中医君臣佐使理论为指导进行组方，通过多种植物协同作用，从控油与抑菌、抗炎、清除自由基、皮肤细胞修复、保湿等综合功效方面达到头皮健康护理的目的。本发明的制备方法采用了酶解、发酵、提纯相结合的方法，即将植物组合物进行酶解、发酵处理后，再经过滤、灭菌、离心分离得到植物组合物发酵液，效果更为显著。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

下列实施例中未注明具体实验条件的试验方法，通常按照常规实验条件或按照制造厂所建议的实验条件。其中，红曲霉菌(GDMCC 3.438)购自广东省微生物菌种保藏中心，戊糖乳杆菌(CICC 22210)购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。

实施例1一种具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液(Ⅰ)

一种具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液，由以下重量份数的植物组分制成：苦参25份，连翘20份，人参20份，土茯苓15份，天门冬20份。

制备方法如下：

①菌液配制：混合菌液由红曲霉菌菌液(10⁷CFU/mL)和戊糖乳杆菌菌液(10⁷CFU/mL)按重量比为2：1配制而成；

②备料：将各植物原料除杂、清洗、烘干，粉碎至120目，混匀，得到植物组合物；

③酶解：将植物组合物和去离子水以料液质量比为1：25加入到发酵罐中，得到料液；将料液、纤维素酶和半纤维素酶按照质量比200：1.2：0.1进行混合，调节pH至6，于45℃、50rpm/min下酶解2h，随后在110℃下加热20min，得到植物水解液；

④发酵：将植物水解液、发酵菌液、MRS肉汤培养基和去离子水按照用量比为250g：10mL：10g：250g混合，32℃下发酵48h，得到发酵液；

⑤提纯：发酵结束后将发酵液在120℃下灭菌30min，然后在离心半径为15cm，转速为4000rpm/min下，离心30min，取离心后的上清液，即为具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液。

实施例2一种具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液(Ⅱ)

一种具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液，由以下重量份数的植物组分制成：苦参30份，连翘18份，人参25份，土茯苓12份，天门冬15份。

制备方法除了“将料液、纤维素酶和半纤维素酶按照质量比250：1.5：0.1进行混合”，“植物水解液、发酵菌液、MRS肉汤培养基和去离子水按照用量比为300g：15mL：12g：200g混合”外，其余与实施例1一致，制得本发明提供的具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液(Ⅱ)。

实施例3一种具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液(Ⅲ)

一种具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液，由以下重量份数的植物组分制成：苦参30份，连翘20份，人参20份，土茯苓10份，天门冬20份。

制备方法除了“将料液、纤维素酶和半纤维素酶按照质量比300：2：0.1进行混合”，“植物水解液、发酵菌液、MRS肉汤培养基和去离子水按照用量比为280g：12mL：15g：220g混合”外，其余与实施例1一致，制得本发明提供的具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液(Ⅲ)。

对比例1～5单种植物发酵液

分别称取植物苦参100份，连翘100份，人参100份，土茯苓100份，天门冬100份。按照实施例1所述的制备方法进行酶解、发酵和提纯，依次分别制得单种植物发酵液。

对比例6植物组合物提取液

按照与实施例1一致的植物组合物用量，即植物组合物由以下重量份数的植物组分制成：苦参25份，连翘20份，人参20份，土茯苓15份，天门冬20份。

制备方法：将各植物原料除杂、清洗、烘干，粉碎至120目，按料液质量比为1:25加入去离子水，调节pH至6，随后加热回流提取2h，然后在离心半径为15cm，转速为4000rpm/min下，离心30min，取离心后的上清液，用去离子水稀释到与实施例1相同体积，制得植物组合物提取液。

对比例7植物组合物水解液

一种头皮健康护理用植物组合物水解液，由以下重量份数的植物组分制成：苦参25份，连翘20份，人参20份，土茯苓15份，天门冬20份。

制备方法如下：

①备料：将各植物原料除杂、清洗、烘干，粉碎至120目，混匀，得到植物组合物；

②酶解：以料液质量比1：25将植物组合物和去离子水加入到发酵罐中，得到料液；将料液、纤维素酶和半纤维素酶按照质量比250：1.2：0.1进行混合，调节pH至6，于45℃、50rpm/min下酶解2h，随后在110℃下加热20min，然后在离心半径为15cm，转速为4000rpm/min下，离心30min，取离心后的上清液，用去离子水稀释到与实施例1相同体积，得到头皮健康护理用植物组合物水解液。

对比例8未酶解的植物组合物发酵液

一种未酶解的植物组合物发酵液，由以下重量份数的植物组分制成：苦参25份，连翘20份，人参20份，土茯苓15份，天门冬20份。

制备方法如下：

①菌液配制：混合菌液由红曲霉菌菌液(10⁷CFU/mL)和植物乳杆菌菌液(10⁷CFU/mL)按重量比为2：3配制而成；

②备料：将各植物原料除杂、清洗、烘干，粉碎至120目，混匀，得到植物组合物，以料液质量比1：25将植物组合物和去离子水加入到发酵罐中，得到料液；

③发酵：将料液、发酵菌液、MRS肉汤培养基和去离子水按照用量比为250g：10mL：10g：250g混合，32℃下发酵48h，得到发酵液；

④提纯：发酵结束后将发酵液在120℃下灭菌30min，然后在离心半径为15cm，转速为4000rpm/min下，离心30min，取离心后的上清液，用去离子水稀释到与实施例1相同体积，即为未酶解的植物组合物发酵液。

对比例9-10单种菌的植物组合物发酵液

对比例9的菌液为红曲霉菌菌液(10⁷CFU/mL)，其他与实施例1一致。

对比例10的菌液为戊糖乳杆菌菌液(10⁷CFU/mL)，其他与实施例1一致。

对比例11-14多种植物组合物发酵液

按下表所示进行任意植物组合，获得对比例11-14的植物组合物。

植物组分	对比例11	对比例12	对比例13	对比例14
					苦参	55	60	42	30
连翘	45	/	33	25
					土茯苓	/	40	25	20
人参	/	/	/	25

试验例1活性物含量测定

实施例1-3和对比例6-10制得的发酵液或提取液作为测试样品。

参照GB/T 5009.8-2008测定样品中多糖含量，参照GB/T 5009.124-2003测定样品总黄酮含量，参照GB/T 8313-2008测定样品总酚含量，结果见表1所示。

表1

待测样品	总黄酮/％	总皂苷/％	总生物碱/％
				实施例1	0.88	0.38	0.43
实施例2	0.91	0.36	0.43
				实施例3	0.87	0.36	0.45
对比例6	0.52	0.20	0.24
				对比例7	0.58	0.22	0.24
对比例8	0.64	0.27	0.32
				对比例9	0.75	0.30	0.35
对比例10	0.74	0.29	0.37

由表1可知，植物组合物经过酶解、发酵处理后的实施例1获得的发酵液的总黄酮、总皂苷、总生物碱含量均比未经酶解、发酵处理的对比例6，仅仅进行酶解处理的对比例7，仅仅进行发酵处理的对比例8，单种菌发酵处理的对比例9-10制备发酵液的总黄酮、总皂苷、总生物碱含量显著增加，说明本发明酶解、发酵相结合和两种菌协同发酵的方法可获得更高活性成分的提取物，是一种更科学有效的方法。

试验例2抑菌圈试验

测试方法为牛津杯法(也叫管碟法)，此方法是国内外测定抗生素效价通用方法，也是多国药典规定的方法。通过抑菌圈测试，判断待测样品对马拉色菌(糠秕马拉色菌(糠秕孢子菌)，拉丁文Malassezia furfur(Pityrosporum orbiculare)，购买单位：广东省微生物菌种保藏中心，GIM2.181)的抑制作用。

测试样品：实施例1-3和对比例1-10制得的发酵液或提取液，用去离子水稀释10倍的溶液。

以无菌操作，将经过高温灭菌的培养基倒入直径9cm的无菌培养皿中，使每个培养皿有15～20mL的培养基，冷却后，加入0.2mL马拉色菌悬液，用涂布棒将培养基表面涂布均匀，用镊子将牛津杯垂直放上相应培养基表面，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙，每个平板可放3支小管，分别向各小管中滴加0.1mL的各种待测样，并做好标记，勿使其外溢。马拉色菌：置37℃培养箱厌氧培养2～5天后，观察结果。

在培养时，一方面试验菌开始生长，另一方面待测样以牛津杯为原点向四周扩散，形成菌落不能生长的圆形区域，为“抑菌圈”。抑菌圈越大，祛痘效果越好。

药敏实验的结果，按抑菌圈直径大小判定敏感度高低，判断标准参考下表2。

表2药物敏感实验判定标准

抑菌圈直径(毫米)	敏感度
		20以上	极敏
15～20	高敏
		10～14	中敏
10以下	低敏
		0	不敏

测试结果，如表3所示。

表3抑菌圈试验测试结果

实施例	抑菌圈直径	实施例	抑菌圈直径
				实施例1	18.6mm	对比例7	13.5mm
实施例2	19.0mm	对比例8	14.8mm
				实施例3	18.9mm	对比例9	15.9mm
对比例1	14.2mm	对比例10	16.4mm
				对比例2	12.1mm	对比例11	15.8
对比例3	7.2mm	对比例12	16.3
				对比例4	12.8mm	对比例13	16.9
对比例5	9.3mm	对比例14	17.2
				对比例6	13.2mm

结果表明，本发明中的实施例1～3抑制马拉色菌效果非常显著，说明植物组合物发酵液具有非常好的抗菌去屑效果；而且均显著高于对比例1-14，说明植物组分间经复配后起到了协同增效作用，两种菌复合发酵具有协同作用，制备方法优于常规提取法、单独酶解法和单独发酵法。

试验例3清除自由基试验

1、试样的配制

实施例1-3和对比例1-10制得的发酵液或提取液，用去离子水稀释10倍的溶液。

2、对超氧阴离子自由基清除能力评价

取0.05mol/L pH＝8.2的Tris-HCl缓冲液4.5mL，于25℃水浴锅中预热20min。再加入1mL样品乙醇溶液和0.4mL 25mmol/L的邻苯三酚溶液，混匀后，于25℃水浴中反应5min，加入8mol/L的HCl 1.0mL终止反应。以Tris-HCl缓冲液作参比，在299nm处测吸光度值。空白对照用1mL样品乙醇溶液的溶剂来替代样品。

超氧阴离子自由基清除率(％)＝[1－(A2/A1)]×100％

式中A1为空白对照的吸光度值；A2为样品的吸光度值。

3、对羟自由基的清除能力评价

在25mL比色管中依次加入2mmol/L FeSO₄ 3mL，1mmol/L H₂O₂ 3mL，摇匀，接着加入6mmol/L水杨酸3mL，摇匀，于37℃水浴加热15min后取出，测其吸光度；分别加入一定浓度的待测液，摇匀，继续水浴加热15min，取出测其吸光度。下式为待测液对羟自由基(·OH)的清除率：

羟自由基清除率(％)＝[A3－A4－(A3－A5)]/A1×100％

式中A3为未加样品前反应体系的吸光度值；A4为样品清除·OH后体系的吸光度值；A5为空白对照清除·OH后体系的吸光度值。

4、样品抗自由基的对比测试

结果如表4所示。

表4自由基清除率功能评价结果

实验结果表明，植物组合物经过发酵处理后的实施例1-3获得的提取物对超氧阴离子清除率高达77％以上，对羟自由基清除率在79％以上，说明本发明的制备的一种具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液有显著的清除自由基效果。但对比例1-5制备的单种植物发酵液和对比例11-14制备的多种植物组合物发酵液对自由基的清除率均不如实施例1-3，说明本发明植物组分间的协同作用显著。而且实施例1发酵液清除自由基效果也比未经酶解、发酵处理的对比例6，仅仅进行酶解处理的对比例7，仅仅进行发酵处理的对比例8，单种菌发酵处理的对比例9-10效果好得多，说明本发明采用的酶解、发酵相结合和两种菌结合发酵的具有协同增效作用。

试验例4刺激性评价实验

红细胞溶血实验是兔眼刺激性实验(Draizetest)替代方法之一，基本原理是通过测定血红蛋白溶出量及变性程度来评价化学品对眼组织细胞的损伤。国际上主要将RBC实验用于评价化妆品及原料等化学品的眼刺激性研究。

以实施例1～3和对比例1～10制备的发酵液或提取液用去离子水稀释10倍作为样品进行红细胞溶血实验，本实验依照欧洲替代方法验证中心(ECVAM)的RBC实验测试方法及分级标准。其中HD50为50％红细胞发生溶血时的样品浓度，DI为蛋白质变性指数，L/D为HD50与DI的比值。评价标准见表5；评价结果见表6。

表5评价标准

L/D	分级
		L/D>100	无刺激性
10<L/D≤100	微刺激性
		1<L/D≤10	轻度刺激性
0.1<L/D≤1	中毒刺激性
		L/D≤0.1	重度刺激性

表6评价结果

实施例	分级	实施例	分级
				实施例1	无刺激性	对比例7	微刺激性
实施例2	无刺激性	对比例8	无刺激性
				实施例3	无刺激性	对比例9	无刺激性
对比例1	无刺激性	对比例10	无刺激性
				对比例2	无刺激性	对比例11	无刺激性
对比例3	无刺激性	对比例12	无刺激性
				对比例4	无刺激性	对比例13	无刺激性
对比例5	无刺激性	对比例14	无刺激性
				对比例6	轻度刺激性

表6结果表明，经过发酵处理的实施例1-3与对比例1-5、8-14制备的样品的刺激性比未经过发酵处理的对比例6-7制备的样品的刺激性小，说明经过发酵有利于刺激性降低。

试验例5细胞划痕测试

(1)试样的配制

以实施例1～3和对比例1～10制备的发酵液或提取液用DMEM培养基稀释成质量分数为1％的溶液，0.22μm无菌滤膜抽滤，即为试样。

(2)实验原理

细胞划痕实验是测定细胞迁移运动和修复能力的方法，类似于体外伤口愈合过程，在体外培养体系中，使用单层贴壁细胞，用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线，去除中央部分的细胞，然后继续培养细胞至实验设定的时间，取出细胞培养板，观察周边细胞的生长迁移能力，实验通常需设定正常对照组和实验组，实验组是加了某种处理因素或药物等的组别，通过不同分组之间细胞对于划痕区修复能力的不同，可以判断各组细胞的迁移与修复能力。

(3)实验方法

用标记笔在培养板背面标记划线，后培养角质形成细胞(HaCaT)，接种至6孔板中，待细胞长满后，使用枪头每孔均匀划线5条，PBS缓冲液清洗细胞3次，除去死细胞，加入样品处理细胞24h，后显微镜拍照，并统计划痕愈合比例(修复率)。对照组以去离子水代替样品作为添加。

(4)实验结果

实验结果如表7所示。

表7

实施例	修复率/％	实施例	修复率/％
				实施例1	77.1	对比例7	61.9
实施例2	77.4	对比例8	72.3
				实施例3	76.8	对比例9	74.4
对比例1	48.9	对比例10	75.2
				对比例2	50.2	对比例11	58.4
对比例3	70.1	对比例12	62.3
				对比例4	48.7	对比例13	65.6
对比例5	56.4	对比例14	72.1
				对比例6	59.7	对照组	39.8

由表7可知，植物组合物经过发酵处理后的实施例1-3制备的发酵液对角质细胞的修复愈合能力显著高于对比例1-14，说明通过植物复配后起到了协同增效作用，两种菌复合发酵具有协同作用，制备方法优于常规提取法、单独酶解法和单独发酵法。

试验例6控油效果功能评价

(1)评价样品：实施例1制得的发酵液，用去离子水稀释10倍的溶液。

(2)测试仪器：皮肤油脂含量的测试仪器是德国Courage+Khazaka公司(德国CK公司)制造的皮肤油脂含量Sebumeter测试探头。

(3)测试方法：皮肤油脂含量的测试方法是采用世界公认的SEBUMETER法，该方法如下：选取油性皮肤的志愿者30名，年龄在20～35岁，男女各半。志愿者于试验开始前30天不能使用任何控油产品，如化妆品或外用药品或内服保健品等。试验前，要求受试者清洗颜面部并在清洗后2小时进入温度22±1℃，湿度50±5％的恒温恒湿房间内静坐30min，并保持放松状态。实验中按随机选取志愿者的左右额头，取眉间中线与距上眉缘1cm平行线的交叉点为测试中点，然后在测试中点向左向右并列各测试一个位置，取3个值的平均值作为前额油脂的数据。测试结束后，志愿者需按要求每天早晚各1次进行额头的样品涂抹，空白例用去离子水替代，连续试用28天，并要求试验的第14天及第28天进行回访。

(4)评价结果：结果表明，使用14天后，志愿者的皮肤油脂平均下降29.6％；使用28天后，志愿者的皮肤油脂下降33.4％。这说明本发明具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液对皮肤油脂分泌有明显抑制效果，具有良好的控油作用。

应用实施例1头皮健康护理洗发水

一种含有所述的具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液的头皮健康护理洗发水，具体配方如表8所示：

表8

制备工艺：

①将A组分加热至85℃，搅拌均匀至溶解完全；

②保温消泡半小时，分别依次加入B、C组分各料，搅拌溶解完全；

③搅拌保温半小时，开始循环冷却，冷却至55℃，搅拌保温半小时；

④冷却至45℃，加入D组分，搅拌均匀；

⑤加入E组分，搅拌均匀；

⑥加G组分各料，搅拌均匀。F组分中的盐用水溶解后(调整洗发水稠度)，加入锅内，适当降低转速，搅拌均匀，检测合格后用200目过滤布过滤出料。

应用实施例2头皮健康护理护发素

一种含有所述的具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液的头皮健康护理护发素，具体配方如表9所示：

表9

制备方法：

①将A组分倒入乳化缸，升温至80-85℃均质至料体完全分散均匀；

②将第B组分用10倍冷纯水分散后加入到乳化缸，均质至料体完全分散均匀，保温30分钟；

③降温至40-45℃，加入C组分，搅拌至料体完全分散均匀；④D组分调节PH至4.5-5.5(1：9)；

⑤测合格后过滤出料。

应用对比例1普通洗发水

除了配方中的“实施例1所述的具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液(I)”用“去离子水”外，其他与应用实施例1一致。

应用对比例2普通护发素

除了配方中的“实施例2所述的具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液(II)”用“去离子水”外，其他与应用实施例2一致。

效果实施例1头皮效果评价

评价样品：应用实施例1-2和应用对比例1-2制备的产品。

评价方法：选取有头皮问题的受试者60人，男女各半，年龄在25～45岁，使用方法：30人使用应用实施例1制备的洗发水洗头后，用应用实施例2制备的护发素按摩头皮5分钟，清洗干净；另外30人则使用应用对比例1制备的洗发水洗头后，用应用对比例2制备的护发素按摩头皮5分钟，清洗干净。使用2个月后，从脱发改善度、头皮滋润度、头屑改进度、头皮粉刺改善度五个方面进行评价。

评价标准：1分-差，2分-较差，3分-一般，4分-较好，5分-很好。

评价结果：见表10所示。

表10评价结果

评价项目	应用实施例1-2	应用对比例1-2
			脱发改善度	4.5	2.1
头皮滋润度	4.3	2.5
			头屑改进度	4.4	1.8
头皮粉刺改善度	4.2	2.4

由表10结果可知，应用实施例1产品脱发改善度、对头皮的滋润度、头屑改进度、头皮粉刺改善度都明显优于应用对比例1。说明添加有本发明的植物组合物发酵液可以滋润头皮，改善脱发，改善头屑，改善头皮粉刺，同时不油腻，起到头皮健康护理的作用。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液，其特征在于，由以下重量份的植物组分制成：苦参5-45份，连翘5-45份，人参5-45份，土茯苓5-45份，天门冬5-45份；

所述具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液的制备方法，包括如下步骤：

(1)备料：将各植物组分原料除杂、清洗、烘干，粉碎至60-200目，混匀，得到植物组合物；配制浓度为10⁵-10⁸CFU/mL的发酵菌液，pH值调整为6.5-7.5；

(2)酶解：将步骤(1)中植物组合物和去离子水以质量比为1：(10-30)加入到发酵罐中，得到料液；将料液、纤维素酶和半纤维素酶按照质量比为(1-500)：(0.1-10)：0.1进行混合，酶解pH为4-7，酶解温度为40-60℃，转速为40-60rpm/min下酶解1-4h，随后在80-120℃下加热10-40min，得到植物水解液；

(3)发酵：将步骤(2)中植物水解液、发酵菌液、MRS肉汤培养基和去离子水按照质量体积用量比为(0.1-1000g)：(0.1-50mL)：(0.1-50g)：(0.1-1000g)混合，发酵温度为25-45℃下发酵10-120h，得到发酵液；

(4)提纯：将步骤(3)中发酵液在100-125℃下灭菌15-35min，然后在离心半径为10-18cm，转速为3000-5000rpm/min下，离心15-40min，取离心后的上清液，即为具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液。

2.根据权利要求1所述具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液，其特征在于，所述发酵菌液由浓度为10⁷CFU/mL红曲霉菌菌液和浓度为10⁷CFU/mL戊糖乳杆菌菌液按重量比为2：1配制而成。

3.根据权利要求1所述具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液，其特征在于，步骤(2)中，所述料液、纤维素酶和半纤维素酶按照质量比为(1-500)：(1-10)：0.1进行混合。

4.根据权利要求1所述具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液，其特征在于，步骤(2)中，所述酶解pH为5-6，酶解温度为40-55℃，酶解时间为1.5-3h，加热温度为80-120℃，加热时间为10-40min。

5.根据权利要求1所述具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液，其特征在于，步骤(3)中，所述植物水解液、发酵菌液、MRS肉汤培养基和去离子水按照质量体积用量比为(10-500g)：(1-10mL)：(1-10g)：(10-500g)混合，发酵温度为30-40℃。

6.根据权利要求1所述的具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液，其特征在于，由以下重量份数的植物组分制成：25份，连翘20份，人参20份，土茯苓15份，天门冬20份。

7.一种根据权利要求1至6任一项所述具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液在化妆品中的应用，其特征在于，所述化妆品含有质量分数计为0.1-40％的具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液。

8.根据权利要求7所述具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液在化妆品中的应用，其特征在于，所述化妆品为洗护类、水剂、乳液类、膏霜类、啫喱类、粉类、喷雾类和精华类。

9.根据权利要求7所述具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液在化妆品中的应用，其特征在于，所述化妆品为具有头皮健康护理功效的洗发水，包括如下质量分数计的成分：

10.根据权利要求7所述具有头皮健康护理功效的植物组合物发酵液在化妆品中的应用，其特征在于，所述化妆品为具有头皮健康护理功效的护发素，包括如下质量分数计的成分：