CN116254197B - 卡氏芽孢杆菌和液态农用生物制剂及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及植物病害生物防治技术领域，具体涉及卡氏芽孢杆菌和液态农用生物制剂及其应用。本发明提供的卡氏芽孢杆菌具有高效抗卵菌病害活性。本发明提供的卡氏芽孢杆菌及液态农用生物制剂均对于卵菌纲真菌造成的植物病害，尤其是植物疫病、霜霉病和白锈病具有良好的防治效果，共同使用时还具有协同增效作用，能够进一步提高对卵菌病害的防治效果。

Description

卡氏芽孢杆菌和液态农用生物制剂及其应用
技术领域
本发明涉及植物病害生物防治技术领域，具体涉及卡氏芽孢杆菌和液态农用生物制剂及其应用。
背景技术
随着农业产业结构调整和种植制度变革，经济作物种植业发展迅猛，但随之而来的卵菌病害问题也日益突出，严重影响产业的持续健康发展。特别是辣椒疫病、烟草疫病、莴苣霜霉病、大白菜霜霉病和大白菜白锈病等，这些病害田间一旦发生，作物将面临大面积绝收，给农户们造成无法挽回的损失。因此，研发有效的经济作物卵菌类病害防治措施对于我国和世界的经济作物安全生产都有着重要意义。
现代农业种植体系中，由于过度依赖化肥和化学农药，以及采用单一作物连作的生产模式，长期高量肥施用和不平衡施肥造成土壤污染和其他养分元素的不均衡，部分元素富营养化，土壤酸化加剧，致使土壤理化性质恶化，微生物群落结构失衡，最终土壤质量退化，植株抵抗力下降，从而导致卵菌病害爆发。然而，现有技术中，对于卵菌病害的防治方法比较单一，还在大面积使用化学药剂，有些药物的使用还可能对环境造成进一步破坏。可见，目前并没有可持续有效，并且经济、环保的防控卵菌病害的方法。因此，亟待开发一种新型的、绿色、经济并且能够持续有效防控卵菌病害的产品，实现经济作物种植产业可持续发展的方法。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术存在的没有可以有效持续防控卵菌病害方法的问题，提供卡氏芽孢杆菌和液态农用生物制剂及其应用。本发明提供的卡氏芽孢杆菌及液态农用生物制剂对于卵菌纲真菌造成的植物病害，尤其是植物疫病、霜霉病和白锈病具有良好的防治效果。
为了实现上述目的，本发明一方面提供一株卡氏芽孢杆菌(Bacilluscabrialesii)，所述卡氏芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO：M 20221660。
本发明第二方面提供一种液态农用生物制剂，该液态农用生物制剂包括：
(I)卡氏芽孢杆菌制剂；或者
(II)营养添加剂；或者
(III)卡氏芽孢杆菌制剂和营养添加剂；
其中，所述营养添加剂包括：
A组分：氨基酸、腐殖酸和海藻酸中的至少一种；
B组分：氨基寡糖素、小檗碱和大蒜素中的至少一种；以及
C组分：糖醇钙、络氨铜和流体镁中的至少一种。
本发明第三方面提供卡氏芽孢杆菌或第二方面所述的液态农用生物制剂在防治由卵菌纲(Oomycetes)微生物造成的植物病害中的应用。
本发明第四方面提供一种防治由卵菌纲(Oomycetes)微生物造成的植物病害的方法，所述方法包括将卡氏芽孢杆菌或第二方面所述的液态农用生物制剂施用于土壤中，和/或，将卡氏芽孢杆菌或第二方面所述的液态农用生物制剂与植株接触。
通过上述技术方案，本发明能够取得如下有益效果：
(1)本发明提供的卡氏芽孢杆菌对于卵菌纲真菌，尤其是其中易造成植物病害的真菌具有良好的抑制效果。将该卡氏芽孢杆菌施用于土壤或与作物接触，能更有效且持续地防治卵菌纲微生物导致的植物病害。
(2)本发明提供的液态农用生物制剂采用原料配制，对于卵菌病害具有良好且持续的防治效果，能够有效解决目前对于卵菌病害防治效果不佳或者无法实现持续防治的问题。
(3)本发明提供的防治卵菌病害的方法简单易行，施用的农用生物制剂选用安全环保的原料，不会对环境安全产生不利影响，能够促进农业生产可持续发展。
生物保藏
本发明提供的卡氏芽孢杆菌(Bacillus cabrialesii)，已于2022年10月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M 20221660。
附图说明
图1是实施例1中构建的卡氏芽孢杆菌N4471的系统发育树。
图2是实施例1中卡氏芽孢杆菌N4471和对照菌株CICC 20807的溶磷能力对比图。
图3是实施例1中卡氏芽孢杆菌N4471和对照菌株CICC 20807的固氮能力对比图。
图4是实施例1中卡氏芽孢杆菌N4471对烟草疫霉和辣椒疫苗的拮抗效果图。
图5是实施例1中对照菌株CICC 20807对烟草疫霉和辣椒疫苗的拮抗效果图。
具体实施方式
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
本发明中，卡氏芽孢杆菌N4471和卡氏芽孢杆菌CCTCC NO：M20221660是同一菌株，其二者意义相同，其名称(编号)可以互换使用。
卵菌纲(Oomycetes)是真菌中鞭毛菌亚门中的一纲，其因该纲中真菌有性生殖产生卵孢子得名。卵菌纲中有许多能够导致植物病害的真菌，例如辣椒疫霉、烟草疫霉、盘梗霜霉、寄生霜霉、白锈菌等，通常，由卵菌纲真菌导致的植物病害统称为(植物)卵菌病害。卵菌病害不仅降低作物产量甚至导致作物绝收，而且感染后会在土壤中长期存在并传播感染周边农作物，导致严重的土传病害问题。本发明的发明人在研究的过程中分离获得一株卡氏芽孢杆菌(Bacillus cabrialesii)，命名为N4471，于2022年10月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 20221660。经过进一步研究，发明人意外地发现，该卡氏芽孢杆菌能够有效抑制卵菌纲真菌，尤其是其中的一些容易导致植物病害的真菌。在将该卡氏芽孢杆菌施用于土壤中或与作物植株接触时，能够有效防治植物卵菌病害。另外，发明人在研究的过程中还发现，通过将一些可施用于作物的营养物质复配后制成生物制剂，并将该生物制剂施用于土壤中，对于卵菌病害也具有良好的防治效果。而在该生物制剂中适量添加前述卡氏芽孢杆菌时，防治效果能够得到进一步提高。
基于上述发现，本发明一方面提供一株卡氏芽孢杆菌(Bacillus cabrialesii)，所述卡氏芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO：M 20221660。
本发明第二方面提供一种液态农用生物制剂，该液态农用生物制剂包括：
(I)卡氏芽孢杆菌制剂；或者
(II)营养添加剂；或者
(III)卡氏芽孢杆菌制剂和营养添加剂；
其中，所述营养添加剂包括：
A组分：氨基酸、腐殖酸和海藻酸中的至少一种；
B组分：氨基寡糖素、小檗碱和大蒜素中的至少一种；以及
C组分：糖醇钙、络氨铜和流体镁中的至少一种。
本发明提供的液态农用生物制剂中，所述卡氏芽孢杆菌制剂是指采用卡氏芽孢杆菌制成的生物制剂，例如卡氏芽孢杆菌菌剂(例如将卡氏芽孢杆菌进行培养后获得的液体菌剂，或者将所述液体菌剂进行浓缩或干燥获得的半固体或固体菌剂等)、卡氏芽孢杆菌提取物或代谢物制剂等。
任意能够与造成卵菌病害的病原微生物(即卵菌纲病原微生物)形成拮抗作用或能够改善卵菌病害情况的卡氏芽孢杆菌均可适用于本发明提供的液态农用生物制剂。根据本发明的一种优选实施方式，其中，上述液态农用生物制剂(I)和(III)中，所述卡氏芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO：M 20221660。
对于上述液态农用生物制剂(III)，本发明对于其中的卡氏芽孢杆菌制剂的含量没有特别限制，只要能够获得对卵菌病害具有持久、良好的防治效果的生物制剂即可。根据本发明的一些优选实施方式，其中，液态农用生物制剂(III)中，所述卡氏芽孢杆菌制剂的用量为A组分总重的5-15重量％。优选为5-10重量％。
更优选地，所述卡氏芽孢杆菌制剂的用量使得所述液态农用生物制剂(III)中卡氏芽孢杆菌的含量不低于1×107CFU/g。优选为1×107-1×109CFU/g。更优选为1×108-1×109CFU/g。进一步优选为4×108-9×108CFU/g。按照1mL最终获得的液态农用生物制剂即为1g的比例换算液态农用生物制剂中的卡氏芽孢杆菌含量。
对于上述液态农用生物制剂(II)和(III)，本发明对于所述营养添加剂中的A、B、C组分的配比没有特别限制，只要配制获得的生物制剂能够有效防治卵菌病害即可。根据本发明的一些优选实施方式，其中，液态农用生物制剂(II)和(III)中，A组分、B组分和C组分的重量比为1-5∶0.5-2∶1。优选为2-5∶1-2∶1。更优选为2-2.5∶1-1.5∶1。进一步优选为2-2.2∶1.2-1.5∶1。
优选地，所述A组分为氨基酸、腐殖酸和海藻酸的混合物，且氨基酸、腐殖酸和海藻酸的重量比为1∶1-2∶1-2，优选为1∶1-1.2∶1-1.2。
优选地，所述B组分为氨基寡糖素、小檗碱和大蒜素的混合物，且氨基寡糖素、小檗碱和大蒜素的重量比为1∶2-4∶0.2-0.6，优选为1∶2-3∶0.3-0.5。
优选地，所述C组分为糖醇钙、络氨铜和流体镁的混合物，且糖醇钙、络氨铜和流体镁的重量比为1∶0.5-0.8∶0.8-1.5，优选为1∶0.5-0.6∶1-1.5。
本发明中，对于用作液态菌剂的原料(如前述A、B、C组分中的各组分原料等)没有特别限制，其可以是本领域任意能够用于农用生物制剂制备的相关产品，既可以是商购获得的相关产品，也可以是按照现有技术自行制备的相关产品。根据本发明的一些优选实施方式，其中，所述氨基酸为液体氨基酸，且其中游离氨基酸含量为20-30重量％(余量为水)。优选为25-30重量％。
本发明中，对于所述氨基酸的具体类型和来源没有特别限制，任意能够为液态农用生物制剂提供游离氨基酸的试剂均可适用于本发明。优选地，所述氨基酸可以选自采用植物源蛋白或动物源蛋白制备的氨基酸(溶液)。优选其中植物源蛋白可以由大豆、豆粕、玉米麸、花生麸中的至少一种的发酵产物提供，也可以由豆制品、味精、木材加工的下脚料等中的至少一种提供。动物源蛋白可以由动物毛发(例如羽毛、猪鬃等)、动物血液、内脏、皮骨、低脂鱼粉、蚕蛹、以及屠宰场废弃物等中的至少一种提供。所述氨基酸可以是直接购买获得的具有上述特征的相关产品，也可以是根据现有技术，采用以上原料自行制备获得的相关产品。
根据本发明的一些优选实施方式，其中，所述腐殖酸为液体腐殖酸，且其中腐殖酸含量为40-80重量％(余量为水)。优选为50-70重量％。更优选为60-70重量％。
根据本发明的一些优选实施方式，其中，所述海藻酸为液体海藻酸，且其中海藻酸含量为55-65重量％(余量为水)。优选为58-62重量％。
本发明第三方面提供卡氏芽孢杆菌或第二方面所述的液态农用生物制剂在防治由卵菌纲(Oomycetes)微生物造成的植物病害中的应用。
根据本发明的优选实施方式，其中，所述卡氏芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO：M20221660。
根据本发明的优选实施方式，其中，所述植物病害选自植物疫病、霜霉病和白锈病中的至少一种。
优选地，造成所述疫病的病原体包括辣椒疫霉(Phytophthora capsici)和/或烟草疫霉(Phytophthora parasitica)，优选为辣椒疫霉。
优选地，造成所述霜霉病的病原体包括盘梗霜霉(Bremia lactucae)和/或寄生霜霉(Peronospora parasitica)，优选为盘梗霜霉。
优选地，造成所述白锈病的病原体为白锈菌(Albuginaceae candida)。本发明的发明人在研究中发现，将前述液态农用生物制剂施用于土壤中，能够有效的调节土壤中微生物种群丰度，改善土壤微生物群落结构，提高土壤中有益菌种比例，减少和消除有害菌种数量和比例，提升土壤质量，增强植株免疫能力，从而提高其对卵菌病害的防控效果。而将该液态农用生物制剂直接与植株接触(例如将其喷洒或涂抹在植株表面)，也能够对卵菌病害起到较好的防治作用。
基于上述发现，本发明第四方面提供一种防治由卵菌纲(Oomycetes)微生物造成的植物病害的方法，其特征在于，所述方法包括将卡氏芽孢杆菌或第二方面所述的液态农用生物制剂施用于土壤中，和/或，将卡氏芽孢杆菌或第二方面所述的液态农用生物制剂与植株接触。
也即，上述方法可以包括以下几种方式：
(1)将卡氏芽孢杆菌施用于土壤中；
(2)将液态农用生物制剂施用于土壤中；
(3)将卡氏芽孢杆菌与植株接触；
(4)将液态农用生物制剂与植株接触。
本发明中，对于将卡氏芽孢杆菌与植株接触的方式没有特别限制，例如可以将卡氏芽孢杆菌接种至培养基(例如马铃薯葡萄糖培养基等适合卡氏芽孢杆菌生长繁殖的培养基)中进行扩培，而后将获得的培养液喷洒或涂抹至植株表面，或者将获得的培养液浇灌至植株根际。
本发明提供的方法所能防治的植物病害(及造成该植物病害的病原体)的特征如前所述，在此不再赘述。
本发明提供的方法中采用的卡氏芽孢杆菌及液态农用生物制剂的具体特征如前所述，在此不再赘述。
本发明中，对于卡氏芽孢杆菌以及液态农用生物制剂的具体用量没有特别限制，只要能够起到防治(前述)卵菌病害的作用即可。由于本发明提供的液态农用生物制剂中的组分与卡氏芽孢杆菌具有协同增效作用，因此，当单独使用卡氏芽孢杆菌(或其制剂)时，可适当提高用量，以确保防治效果。
根据本发明的一种优选实施方式，其中，所述卡氏芽孢杆菌(单独)施用于土壤中的用量为1×1013-3×1014CFU/株/次。优选为1×1013-2×1014CFU/株/次。更优选为5×1013-1×1014CFU/株/次。更优选为6×1013-9×1013CFU/株/次。
根据本发明的一种优选实施方式，其中，所述卡氏芽孢杆菌(单独)与植株接触的用量为1×1013-3×1014CFU/株/次。优选为1×1013-2×1014CFU/株/次。更优选为5×1013-1×1014CFU/株/次。更优选为6×1013-9×1013CFU/株/次。
根据本发明的一种优选实施方式，其中，所述液态农用生物制剂施用于土壤中的用量为100-500g/株/次。优选为200-400g/株/次。按照1mL所述液态农用生物制剂的重量为1g计算。
根据本发明的一种优选实施方式，其中，所述液态农用生物制剂与植株接触的用量为100-500g/株。优选为200-400g/株。按照1mL所述液态农用生物制剂的重量为1g计算。
当所述液态农用生物制剂中含有卡氏芽孢杆菌(制剂)时，优选地，所述液态农用生物制剂的用量使得卡氏芽孢杆菌的施用量为1×1012-1×1014CFU/株/次。优选为1×1013-5×1013CFU/株/次。更优选为1×1013-3×1013CFU/株/次。
优选地，所述卡氏芽孢杆菌或液态农用生物制剂的施用频率为每茬作物施用1-3次。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。应当能够理解的是，以下实施例仅用于进一步解释和说明本发明，而不用于限制本发明。
以下实施例中，未作特殊说明的情况下，采用的试剂和材料均为购自正规化学或生物试剂/材料供应商的商购产品，试剂的纯度均为分析纯度。
以下
实施例1
本实施例用于说明本发明提供的卡氏芽孢杆菌CCTCC NO：M 20221660的获得、特征和保藏。
(一)菌株分离和鉴定
菌株分离鉴定过程中采用的培养基配方为：淀粉0.5重量％、蛋白胨1.5重量％、酵母2.5重量％、氯化钠3重量％、硫酸镁0.1重量％。当需要采用固体培养基时，添加琼脂5重量％。
发明人在研究过程中，采用稀释涂布平板法从云南省昆明市长期轮作的健康蔬菜根际土壤中分离获得一株卡氏芽孢杆菌，命名为N4471。经研究发现，菌株N4471的最佳发酵工艺条件为：初始pH为7，培养温度28℃，培养时间为48h-72h。在最优条件下获得的培养液中菌株N4471的浓度约为8×109-6×1010个/mL。
参照《伯杰氏系统分类手册》和《常见细菌系统鉴定手册》对菌株N4471进行菌株形态学鉴定及生理生化特征检测。结果如下：菌株N4471为革兰氏阳性细菌，菌落中心呈乳白色，边缘半透明，不产色素，菌落形状不规则，边缘整齐，较规整，菌落表面粘稠，略微凸起；接触酶、蛋白酶、纤维素酶、淀粉水解、硝酸还原反应、吲哚反应、柠檬酸反应、精氨酸双水解、蔗糖发酵反应、葡萄糖发酵反应、解磷、固氮作用及明胶反应等均为阳性，分泌果胶酶、解钾及MR反应和尿素酶反应为阴性。
采用以下方法对菌株N4471进行分子生物学鉴定：将菌株N4471接种至纯化液体培养基中，37℃恒温摇床中180r/min振荡培养过夜，无菌条件下取样于紫外分光光度计下读取培养菌液OD600值，当OD600值近似于1(约1×109CFU/mL)时停止培养。采用TaKaRaMiniBEST Bacteria Genomic DNA Extraction Kit Ver.3.0试剂盒提取菌株基因组DNA。采用细菌16S rDNA通用引物27F(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)和1492R(5’-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3’)进行PCR扩增。PCR反应程序：94℃预变性5min；94℃变性60s；53℃退火60s；72℃延伸2min；35个循环；最后72℃延伸7min，4℃保存。反应结束后，取5μL反应产物，经1％琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像系统中观察。
扩增产物经琼脂糖凝胶电泳纯化回收后，送至北京擎科生物科技有限公司测序。测序结果经BLAST搜索(https：//blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)后与GenBank数据库中相关种属的基因序列进行比较分析，选用同源性较高的模式菌株序列作为参比对象，用Clustal X 1.8软件进行多序列比对，计算供试菌株与参比菌株序列的相似性。系统发育分析时排除碱基缺失位点，采用邻接法(Neighbor-joining analysis)用MEGA 7.0构建供试菌株与参比菌株之间的系统发育树。其中，Bootstrap值设定为1 000，其余均为默认值。
分子生物学鉴定鉴定结果如下：经NCBI Blast分析，菌株N4471的16S rDNA序列与卡氏芽孢杆菌TE3相似度为99.8％，利用邻接法构建的系统发育树如图1所示。
结合形态学和遗传学检测结果，菌株N4471鉴定为卡氏芽孢杆菌(Bacilluscabrialesii)。
(二)菌株特征研究
(1)解磷效果检测：将纯化的菌株N4471接种至溶无机磷细菌选择培养基(葡萄糖10g/L，硫酸铵0.5g/L，酵母浸粉0.5g/L，氯化钠0.3g/L，氯化钾0.3g/L，硫酸镁0.3g/L，硫酸亚铁0.03g/L，硫酸锰0.03g/L，磷酸钙5g/L，琼脂18g/L，pH 7-7.5)上，置于30℃培养箱中培养72h，观察记录溶磷圈产生情况。
采用上述溶磷检测方法，将其中的菌株替换为等量的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis，购自中国工业微生物菌种保藏中心，保藏编号为CICC 20807)作为对照。
结果详见图2。从图中能够看出菌株N4471具有较好的溶磷能力，溶磷圈平均直径为17.52mm；而对照菌株CICC 20807的溶磷圈平均直径仅为8.14mm。
(2)固氮活性检测：将纯化的菌株N4471接种至固氮菌选择培养基(KH2PO40.2g/L、MgSO40.2g/L、NaCl 0.2g/L、CaCO35g/L、甘露醇10g/L、CaSO40.1g/L、琼脂18g/L、pH 6.8-7)，置于30℃培养箱中培养72h，观察记录透明圈产生情况。
采用上述固氮活性检测方法，将其中的菌株替换为等量的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis，购自中国工业微生物菌种保藏中心，保藏编号为CICC 20807)作为对照。
结果详见图3。从图中能够看出菌株N4471可在固氮菌选择培养基上产生透明圈，且透明圈直径较大，说明菌株N4471具有较好的固氮活性；而对照菌株CICC 20807产生的透明圈较小，说明CICC 20807的固氮活性较差。
(3)病原物拮抗活性检测：采用平板对峙法进行检测，具体步骤包括在PDA培养基中心接种3mm的病原菌菌饼，并按照十字形在其距离其25mm处接种菌株N4471作为拮抗菌，未接种的平板作为对照，每个病原菌株3个重复，置于26±2℃的恒温培养箱黑暗条件培养5-7天后计算抑菌率。
采用上述拮抗活性检测方法，将其中的菌株替换为等量的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis，购自中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CICC 20807)作为对照。
结果如图4(菌株N4471)和图5(对照菌株)所示，从图中可以看出，卡氏芽孢杆菌N4471和对照菌株均对于烟草役霉和辣椒役霉具有拮抗活性，其中，卡氏芽孢杆菌N4471的抑菌率分别为89.54％和90.14％；而对照菌株CICC 20807的抑菌率较低，仅为75.57％和77.69％。
(三)菌株保藏
将前述分离获得的卡氏芽孢杆菌N4471于2022年10月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M20221660。
实施例2
本实施例用于说明本发明提供的液态农用生物制剂的制备。
按照表1中的相应液态农用生物制剂配方进行各组分的混合。
以下实施例中，液体氨基酸购自济南清海化工有限公司，其中游离氨基酸含量为27.19重量％(采用双指示剂甲醛滴定法测定)，余量为水。液体腐殖酸购自山东瑞兆源生物科技有限公司，其中腐殖酸含量为65.77重量％(采用焦磷酸钠碱液提取法测定)，余量为水。液体海藻酸购自山东海之星进出口有限公司，其中海藻酸含量为59.48重量％(含量采用咔唑硫酸分光光度法测定)，余量为水。卡氏芽孢杆菌菌剂为通过将菌株N4471扩培、干燥后制备的固体菌剂，其中卡氏芽孢杆菌含量为2×108CFU/g。
表1液态农用生物制剂配方
*表2中，1重量份为1kg，卡氏芽孢杆菌菌剂的用量为其占液体氨基酸、液体腐殖酸和液体海藻酸总重的百分比。
对比例1
(1)按照表1中A1的配方配制农用生物制剂，不同的是，将其中的氨基寡糖素替换为等重量(以干物质计)的香菇多糖(购自南阳神圣农化科技有限公司)，获得农用生物制剂D9。
(2)按照表1中A4的配方配制农用生物制剂，不同的是，将其中的小檗碱替换为等重量(以干物质计)的苦参碱(购自西安瑞林生物科技有限公司)，获得农用生物制剂D10。
(3)按照表1中A1的配方配制农用生物制剂，不同的是，将其中的卡氏芽孢杆菌菌剂替换为等量的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis，购自中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CICC 20807)，获得农用生物制剂D11。
测试例1
将上述实施例和对比例中的液态农用生物制剂按照表2中的用量施用于辣椒和大白菜根际土壤中，使用频率为每茬作物2次(分别于辣椒和大白菜种植后0天和20天时施用)。同时在施用本发明提供的液态农用生物制剂(处理组)和未施用该液态农用生物制剂(对照组)的农田中种植辣椒和大白菜(每个试验组种植40株)，于收获期调查发病情况，计算防治效果。
辣椒役病分级标准：
0级：全株无病。
1级：1/5以下的侧枝发病，或茎基部出现水渍状病斑。
2级：1/5-1/2侧枝发病，或茎基部出现腐烂病斑，但植株不萎蔫。
3级：1/2-3/4侧枝发病，或茎基部有腐烂病斑，植株有可恢复的萎蔫现象。
4级：全株3/4以上侧枝发病，部分枝条枯死，或植株呈不可恢复的萎蔫现象大白菜霜霉病调查分级标准。
5级：全株枯死。
大白菜霜霉病分级标准：
0级：全株无病。
1级：病叶占全株叶片的1/4以下，病斑上霜霉不明显。
2级：病叶占全株叶片的1/2，霜霉明显。
3级：病叶占全株叶片的1/2以上，病叶部分枯黄，但不影响包心。
4级：叶片大部分枯黄，不能包心。
大白菜白锈病分级标准：
0级：全株无病。
1级：病斑占叶面积1％-5％。
2级：病斑占叶面积6％-20％。
3级：病斑占叶面积21％-40％。
4级：病斑占叶面积41％-70％。
5级：病斑占叶面积71％以上。
防治效果的计算采用下列两公式：
病情指数＝[(∑(病级株数×代表级数))/(总株数×最高代表级值)]×100防治效果(％)＝[(对照组病情指数-处理组病情指数)/对照组病情指数]×100％
表2液态农用生物制剂对卵菌病害防治效果试验测试条件及结果
*表2中，按照1mL液态农用生物制剂的重量为1g计算施用量。
测试例2
采用马铃薯葡萄糖培养基(购自青岛高科技工业园海博生物技术有限公司，主要成分包括6％马铃薯浸出粉，20％葡萄糖)对卡氏芽孢杆菌CCTCC NO：M 20221660进行培养，获得活菌数约为3×1011CFU/mL的卡氏芽孢杆菌培养液。
按照以下方式对辣椒和大白菜进行处理，每个处理包含40株辣椒和大白菜：
实验组I：将卡氏芽孢杆菌培养液喷洒至辣椒和大白菜植株表面，每茬施用2次(分别于苗期和旺长期时施用)。
实验组II：将卡氏芽孢杆菌培养液浇淋至辣椒和大白菜植株根际，每茬施用2次(分别于播种后7天和14天时施用)。
实验组III：将卡氏芽孢杆菌菌剂(固体菌剂，活菌数约为3×1011cfu/g，制备方法同实施例2中采用的菌剂)施用于辣椒和大白菜根际土壤中，每茬施用2次(分别于播种后7天和14天时施用)。
实验组IV：将表1中的液态农用生物制剂A1、A2、A4、A5、A7、A8、A10和A11分别喷洒至辣椒和大白菜植株表面，每茬施用2次(分别于苗期和旺长期时施用)。
对照组：不喷洒卡氏芽孢杆菌培养液或液态农用生物制剂，也不在土壤中施用卡氏芽孢杆菌菌剂。
按照测试例1中的计算方法，对各组卵菌病害防治效果进行计算和对比，结果详见表3。
表3卡氏芽孢杆菌对卵菌病害防治效果试验测试条件及结果
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。

Claims (14)

1.一株卡氏芽孢杆菌（Bacillus cabrialesii），其特征在于，所述卡氏芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO：M 20221660。
2.一种液态农用生物制剂，其特征在于，该液态农用生物制剂包括：
（I）卡氏芽孢杆菌制剂；或者
（II）卡氏芽孢杆菌制剂和营养添加剂，其中所述卡氏芽孢杆菌制剂的用量使得所述液态农用生物制剂中卡氏芽孢杆菌的含量不低于1×107 CFU/g；
其中，所述卡氏芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO：M 20221660；
所述营养添加剂包括：
A组分：氨基酸、腐殖酸和海藻酸；
B组分：氨基寡糖素、小檗碱和大蒜素；以及
C组分：糖醇钙、络氨铜和流体镁；
A组分、B组分和C组分的重量比为1-5:0.5-2:1。
3.根据权利要求2所述的液态农用生物制剂，其中，液态农用生物制剂（II）中，所述卡氏芽孢杆菌制剂的用量为A组分总重的5-15重量％；
和/或，所述卡氏芽孢杆菌制剂的用量使得所述液态农用生物制剂（II）中卡氏芽孢杆菌的含量为1×107-1×109 CFU/g；
和/或，所述A组分中，氨基酸、腐殖酸和海藻酸的重量比为1:1-2:1-2；
和/或，所述B组分中，氨基寡糖素、小檗碱和大蒜素的重量比为1:2-4:0.2-0.6；
和/或，所述C组分中，糖醇钙、络氨铜和流体镁的重量比为1:0.5-0.8:0.8-1.5。
4.根据权利要求3所述的液态农用生物制剂，其中，所述A组中，氨基酸、腐殖酸和海藻酸的重量比为1:1-1.2:1-1.2；
和/或，所述B组分中，氨基寡糖素、小檗碱和大蒜素的重量比为1:2-3:0.3-0.5；
和/或，所述C组分中，糖醇钙、络氨铜和流体镁的重量比为为1:0.5-0.6:1-1.5。
5.根据权利要求2-4中任意一项所述的液态农用生物制剂，其中，所述氨基酸为液体氨基酸，且其中游离氨基酸含量为20-30重量％；
和/或，所述腐殖酸为液体腐殖酸，且其中腐殖酸含量为40-80重量%；
和/或，所述海藻酸为液体海藻酸，且其中海藻酸含量为55-65重量%。
6.保藏编号为CCTCC NO：M 20221660的卡氏芽孢杆菌或权利要求2-5中任意一项所述的液态农用生物制剂在防治由卵菌纲（Oomycetes）微生物造成的植物病害中的应用，其中，所述植物病害选自植物疫病、霜霉病和白锈病中的至少一种。
7.根据权利要求6所述的应用，其中，造成所述植物疫病的病原体包括辣椒疫霉（Phytophthora capsici）和/或烟草疫霉（Phytophthora parasitica）；
和/或，造成所述霜霉病的病原体包括盘梗霜霉（Bremia lactucae）和/或寄生霜霉（Peronospora parasitica）；
和/或，造成所述白锈病的病原体为白锈菌（Albuginaceae candida）。
8.根据权利要求7所述的应用，其中，造成所述植物疫病的病原体为辣椒疫霉；
和/或，造成所述霜霉病的病原体为盘梗霜霉。
9.一种防治由卵菌纲（Oomycetes）微生物造成的植物病害的方法，其特征在于，所述方法包括将保藏编号为CCTCC NO：M 20221660的卡氏芽孢杆菌或权利要求2-5中任意一项所述的液态农用生物制剂施用于土壤中，和/或，将保藏编号为CCTCC NO：M 20221660的卡氏芽孢杆菌或权利要求2-5中任意一项所述的液态农用生物制剂与植株接触，其中，所述植物病害选自植物疫病、霜霉病和白锈病中的至少一种。
10.根据权利要求9所述的方法，其中，造成所述疫病的病原体包括辣椒疫霉和/或烟草疫霉；
和/或，造成所述霜霉病的病原体包括盘梗霜霉和/或寄生霜霉；
和/或，造成所述白锈病的病原体为白锈菌。
11.根据权利要求10所述的方法，其中，造成所述疫病的病原体为辣椒疫霉；
和/或，造成所述霜霉病的病原体为盘梗霜霉。
12.根据权利要求9所述的方法，其中，所述卡氏芽孢杆菌施用于土壤中的用量为1×1013-3×1014CFU/株；
和/或，所述卡氏芽孢杆菌与植株接触的用量为1×1013-3×1014CFU/株/次；
和/或，所述液态农用生物制剂施用于土壤中的用量为100-500g/株/次；
和/或，所述液态农用生物制剂与植株接触的用量为100-500g/株/次。
13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述卡氏芽孢杆菌或液态农用生物制剂的施用频率为每茬作物施用1-3次。
14.根据权利要求9所述的方法，其中，所述接触的方式包括将所述卡氏芽孢杆菌或液态农用生物制剂喷淋在植株表面，或者，将所述卡氏芽孢杆菌或液态农用生物制剂浇淋在植株根际。
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