CN116236561A - 一种胶原蛋白超分子体及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及超分子体技术领域，具体涉及一种胶原蛋白超分子体及其制备方法和应用，该胶原蛋白超分子体以胶原蛋白、稳定剂、醇类溶剂、甘油、离子液体以及水作为原料进行制备，所述胶原蛋白超分子体的制备方法简单易行、且制备得到的胶原蛋白超分子体的稳定性高。同时，在该胶原蛋白超分子体中，胶原蛋白不仅可以作为活性成分之一对皮肤状态起到改善效果，也可以作为负载活性成分的载体，提高包括胶原蛋白本身在内的各类活性成分的溶解性和透皮性能，以解决现有技术中存在的缺陷。

Description

一种胶原蛋白超分子体及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及超分子体技术领域，尤其涉及一种胶原蛋白超分子体及其制备方法和应用。

背景技术

胶原蛋白属于蛋白质的一种，由氨基酸排列组合而成，对于人类的生长代谢至关重要，是连接器官和肌肉的主要物质，也是组成细胞间质的重要成分。胶原蛋白的主要功能是维持组织、器官的生理功能和外形，也能修复损伤组织。皮肤是人体最大的器官，而胶原蛋白组成了其中的70％左右，且主要存在于真皮层中，构成了表皮层下的纤维组织结构以及真皮基质。胶原蛋白可以结合大量的水分，是维持皮肤张力和承受拉力的重要成分，也是维持皮肤饱满充盈的物质基础。随着年龄的增长及外界因素的作用，人体皮肤逐渐老化，当真皮层的胶原蛋白被氧化、断裂后，皮肤干燥，松弛出现皱纹，对表皮的支撑作用消失，产生皱纹。

胶原蛋白作为生物材料，具有良好的生物相容性，低免疫原性，能促进细胞生长和创伤修复等优点，因此，常作为外用护肤品的活性成分进行添加，但众所周知的是，该种胶原蛋白的分子量较大，难以直接到达真皮层对皮肤状态起到改善。同时，由于胶原蛋白的特殊结构和功能，胶原蛋白在作为活性成分的载体上也具有较大的潜力，目前的胶原蛋白载体，多被制备为胶原膜，胶原海绵、微球等形式，此类胶原蛋白微球等载体在制备中大都会用到化学交联剂将胶原蛋白固化，但交联剂如戊二醛、甲醛等对人体有非常大的毒副作用，因此，其作为口服产品的安全性和作为外用品的刺激性还有待验证和解决。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种胶原蛋白超分子体及其制备方法和应用，所述胶原蛋白超分子体的制备方法简单易行、且制备得到的胶原蛋白超分子体的稳定性高，同时，在该胶原蛋白超分子体中，胶原蛋白不仅可以作为活性成分之一对皮肤状态起到改善效果，也可以作为负载活性成分的载体，提高包括胶原蛋白本身在内的各类活性成分的溶解性和透皮性能，以解决现有技术中存在的缺陷。

为达到上述技术效果，本发明采用了以下技术方案：

一种胶原蛋白超分子体，由以下质量份数的原料制备得到：胶原蛋白0.5～10份、稳定剂0.1～10份、醇类溶剂5～25份、甘油2～10份、离子液体0.1～4份以及水7～1000份。

优选地，所述胶原蛋白超分子体还包括活性成分，且所述活性成分为护肤类活性成分或药用类活性成分中的任意一种或多种。

进一步优选地，所述护肤类活性成分选自抗坏血酸葡糖苷、甘油葡糖苷、抗坏血酸、四氢姜黄素、水杨酸、生育酚、阿魏酸、白藜芦醇、泛醇、谷胱甘肽、神经酰胺、熊果苷、虾青素、烟酰胺、4-丁基间苯二酚、根皮素、羟丙基四氢吡喃三醇、麦角硫因、依克多因、聚季铵盐-51、羟基频哪酮视黄酸酯、棕榈酰三肽-1、棕榈酰四肽-7、棕榈酰六肽-12、棕榈酰三肽-8、九肽-1以及棕榈酰五肽-4中的任意一种或多种。

进一步优选地，所述药用类活性成分可以是口服类活性成分或外用类活性成分，更进一步地，优选为外用类活性成分，且所述外用类活性成分优选自维A酸、异维A酸、他扎罗汀、阿达帕林、贝扎罗汀、莫匹罗星、夫西地酸、复方多粘菌素B、红霉素、氧氟沙星、克林霉素甲硝唑、过氧化苯甲酰中的任意一种或多种。

更优选地，所述活性成分的加入量为胶原蛋白质量的0.01～100％，优选为0.1～30％。

优选地，所述胶原蛋白超分子体，由以下质量份数的原料制备得到：胶原蛋白0.5～10份、稳定剂0.1～10份、醇类溶剂5～25份、甘油2～10份、离子液体0.1～4份以及水7～100份。

优选地，所述胶原蛋白为胶原、胶原提取物、水解胶原、可溶性胶原、鹿骨胶原蛋白、原胶原以及重组Ⅲ型人源胶原蛋白中的任意一种。

优选地，所述稳定剂为阳离子稳定剂，且优选自：肉豆蔻基三甲基溴化铵、硬脂基三甲基溴化铵、月桂基三甲基溴化铵、二椰油基二甲基氯化铵、PEG-15椰油基甲基氯化铵、PEG-2油基甲基氯化铵、PEG-5硬脂基氯化铵、PG-羟乙基纤维素椰油基二甲基氯化铵、PG-羟乙基纤维素硬脂基二甲基氯化铵、PPG-25二乙基甲基氯化铵、蓖麻醇酸酰胺丙基三甲基氯化铵、刺槐角豆胶羟丙基三甲基氯化铵、刺云实羟丙基三甲基氯化铵、大豆油基三甲基氯化铵、大豆油酰胺丙基苄基二甲基氯化铵、淀粉羟丙基三甲基氯化铵、二C12-15烷基二甲基氯化铵、二癸基二甲基氯化铵、二鲸蜡基二甲基氯化铵、二牛脂基二甲基氯化铵、二羟丙基PEG-5亚油基氯化铵、二十八烷基三甲基氯化铵、二硬脂基二甲基氯化铵、二硬脂酰氧乙基二甲基氯化铵、二棕榈酰氧乙基二甲基氯化铵、泛醇基羟丙基硬脂基二甲基氯化铵、瓜儿胶羟丙基三甲基氯化铵、鲸蜡硬脂基二甲基氯化铵、鲸蜡硬脂基三甲基氯化铵、聚甲基丙烯酰胺丙基三甲基氯化铵、决明胶羟丙基三甲基氯化铵、牛脂基三甲基氯化铵、葡聚糖羟丙基三甲基氯化铵、羟丙基瓜儿胶羟丙基三甲基氯化铵、羟丙基双-羟乙基二甲基氯化铵、羟丙基双硬脂基二甲基氯化铵、羟丙基氧化淀粉PG-三甲基氯化铵、羟鲸蜡基羟乙基二甲基氯化铵、羟乙基山萮酰胺丙基二甲基氯化铵、羟乙基油基二甲基氯化铵、人参羟丙基三甲基氯化铵、肉桂酰胺丙基三甲基氯化铵、乳酰胺丙基三甲基氯化铵、三鲸蜡基甲基氯化铵、山嵛基苄基二甲基氯化铵、山嵛基三甲基氯化铵、山嵛酰胺丙基PG-二甲基氯化铵、山嵛酰氧基PG-三甲基氯化铵、十二烷苄基三甲基氯化铵、十二烷十六烷基三甲基氯化铵、双羟乙基双羟丙基硬脂基氯化铵、辛基十二烷基三甲基氯化铵、椰油基三甲基氯化铵、椰油酰胺丙基PG-二甲基氯化铵、硬脂基三甲基氯化铵、硬脂酰胺丙基二甲基苄基氯化铵、硬脂氧丙基三甲基氯化铵、油基苄基二甲基氯化铵、油酰胺丙基PG-二甲基氯化铵、月桂基甲基葡糖醇聚醚-10羟丙基二甲基氯化铵、月桂基三甲基氯化铵、月桂酰PG-三甲基氯化铵、棕榈酰胺丙基三甲基氯化铵中的任意一种或多种，或是：氯化三甲基-2，3-二油烯氧基丙基铵(DOTMA)、溴化三甲基-2，3-二油酰氧基丙基铵(DOTAP)、三氟乙酸二甲基-2，3-二油烯氧基丙基-2-(2-精胺甲酰氨基)乙基铵(DOSPA)、溴化三甲基十二烷基铵(DTAB)、溴化三甲基十四烷基铵(TTAB)、溴化三甲基十六烷基铵(CTAB)、溴化二甲基双十八烷基铵(DDAB)、溴化二甲基-2-羟乙基-2，3-二油酰氧基丙基铵(DORI)、溴化二甲基-2-羟乙基-2，3-二油烯氧基丙基铵(DORIE)、溴化二甲基-3-羟丙基-2，3-二油烯氧基丙基铵(DORIE-HP)、溴化二甲基-4-羟丁基-2，3-二油烯氧基丙基铵(DORIE-HB)、溴化二甲基-5-羟戊基-2，3-二油烯氧基丙基铵(DORIE-HPc)、溴化二甲基-2-羟乙基-2，3-双十六烷氧基丙基铵(DPRIE)、溴化二甲基-2-羟乙基-2，3-双十八烷氧基丙基铵(DSRIE)、溴化二甲基-2-羟乙基-2，3-双十四烷氧基丙基铵(DMRIE)、N-(2-精胺甲酰基)-N’，N’-双十八烷基甘氨酰胺(DOGS)、1，2-二油酰-3-琥珀酰-sn-甘油胆碱酯(DOSC)中的任意一种或多种的组合。

更优选地，所述稳定剂选自肉豆蔻基三甲基溴化铵、硬脂基三甲基溴化铵、月桂基三甲基溴化铵、二椰油基二甲基氯化铵以及二硬脂基二甲基氯化铵中的任意一种或多种，或是：溴化三甲基十六烷基铵(CTAB)、溴化二甲基双十八烷基铵(DDAB)、氯化三甲基-2，3-二油烯氧基丙基铵(DOTMA)、溴化三甲基-2，3-二油酰氧基丙基铵(DOTAP)中的任意一种或多种的组合。

需要特别说明的是，在实施本发明时，可根据制备胶原蛋白超分子体的用途对所用稳定剂的种类进行选择，以使其符合相关法规要求。

优选地，所述醇类溶剂选自乙醇、丙二醇、丁二醇、戊二醇或己二醇中的任意一种或多种。

进一步优选地，所述醇类溶剂选自乙醇、1，2-丁二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇、1，4-丁二醇、2，3-丁二醇、1，2-戊二醇、1，5-戊二醇或1，6-己二醇中的任意一种或多种。

优选地，所述离子液体为苦参碱椰子油离子液体。

第二方面，本发明还提供一种胶原蛋白超分子体的制备方法，包括以下步骤：

S1：分别制备水相和油相，其中，油相包括醇类溶剂、稳定剂以及离子液体，水相包括胶原蛋白、甘油以及水；

S2：将上述水相和油相混合，通过高速剪切制备初乳；

S3：将上述初乳进行高压均质，以制备胶原蛋白超分子体溶液，所述胶原蛋白超分子体溶液中含有胶原蛋白超分子体。

优选地，在上述胶原蛋白超分子体的制备方法中，若需添加活性成分，可将上述活性成分选择性加入至S1中的水相和/或油相中。

优选地，所述水相和油相制备温度均为40～50℃。

优选地，S1中的高速剪切时间为1～5min，优选为1～4min；所述高速剪切转速为5000～12000rmp。

优选地，S2中的高压均质条件为：均质压力为300～800bar，均质循环次数为3～8次。

第三方面，本发明还提供一种上述第一方面提供的胶原蛋白超分子体，或采用第二方面提供的胶原蛋白超分子体的制备方法制备得到的胶原蛋白超分子体在制备食品、保健品、化妆品、护肤品、饲料或人或动物用药品中任意方面的应用，优选为在制备护肤品、化妆品或外用药品中任意方面的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

首先，本发明通过将胶原蛋白制备为纳米级的超分子体，使其可作为负载活性成分的载体，改善其他活性成分的吸收和渗透的同时，该胶原蛋白本身也可以作为活性成分之一，尤其是在用于外用药品、护肤品等方面的应用时，该种胶原蛋白超分子体相对于现有技术具有极大的技术优势。具体而言，当该胶原蛋白超分子体用于外用制品的制备时，该胶原蛋白超分子体可以作为载体用于携带至少一种或多种活性成分并其该活性成分与胶原蛋白一同透过表皮层，到达真皮层发挥功效，同时，本发明提供的胶原蛋白超分子体既可以促进胶原蛋白进入皮肤，发挥胶原蛋白的支撑功能，充盈肌肤，又可以协同载入多种活性成分，发挥抗皱、抗氧化、美白等功效，一举两得。

同时，上述胶原蛋白超分子体如果用于口服，由于可以有效改善活性成分的溶解性，因此，该种胶原蛋白超分子体在提高活性成分的生物利用度方面也具有巨大的应用价值。

此外，由于本发明提供的胶原蛋白超分子体能有效提高各类活性成分的透皮效果，因此，在实际应用时，可显著降低各类活性成分的使用剂量，利于降低过敏反应，提高安全性。同时，由于胶原蛋白超分子体具有生物相容性好、稳定性高等特点，可在多领域进行应用，尤其是在化妆品及护肤领域能够发挥巨大的作用，有效改善各类美容类活性成分的透皮吸收，具有极大的开发价值。

最后，根据本发明的制备方法制得的胶原蛋白超分子体稳定性好、粒径均一，且制备方法简单可行，易于控制，能够大规模生产且生产效率高。

附图说明

图1为本发明实施例1制备得到的空白胶原蛋白超分子体溶液的外观照片；

图2为本发明实施例1制备得到的空白胶原蛋白超分子体溶液的透射电镜下照片；

图3为本发明实施例1制备得到的一种空白胶原蛋白超分子体溶液的粒径测试结果；

图4为本发明实施例2制备得到的一种负载有四氢姜黄素的胶原蛋白超分子产品溶液的粒径测试结果；

图5为本发明实施例3制备得到的一种负载有水杨酸的胶原蛋白超分子产品溶液的粒径测试结果；

图6为本发明实施例4制备得到的一种负载有抗坏血酸葡糖苷的胶原蛋白超分子产品溶液的粒径测试结果；

图7为本发明实施例5制备得到的一种负载有棕榈酰三肽-1的胶原蛋白超分子产品溶液的粒径测试结果；

图8为本发明对比例2制备得到的一种胶原蛋白溶液的粒径测试结果；

图9为本发明对比例3制备得到的混合物溶液I的粒径测试结果；

图10为本发明对比例4制备得到的超分子溶液I的粒径测试结果；

图11为本发明实施例6提供的实施例1～实施例5的外观稳定性测试结果；

图12为本发明实施例6提供的实施例4包封率稳定性测试结果；

图13为本发明实施例6提供的对比例4包封率稳定性测试结果；

图14为本发明实施例6提供的实施例4的粒径稳定性测试结果；

图15为本发明实施例6提供的对比例4的粒径稳定性测试结果；

图16为本发明实施例6提供的实施例4与对比例1、2、4的皮肤滞留量对比结果。

具体实施方式

下面将结合附图对本发明技术方案的实施例进行详细地描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本发明的保护范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂或仪器未注明生产厂商者，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料，且实施例中未注明具体条件者，均按照常规条件或制造商建议的条件进行。

需要特别说明的是，以下实施例中的苦参碱椰子油离子液体均采购自深圳萱嘉生物科技有限公司，该苦参碱椰子油离子液体是以中草药苦参的提取物苦参碱为阳离子前驱体，以生物基椰子油脂肪酸为阴离子前驱体，制备而成的在室温下呈液态的离子型化合物。

实施例1

本实施例为本发明的第一制备实施例，本实施例提供一种胶原蛋白超分子体溶液的制备，上述胶原蛋白超分子体溶液中含有空白的胶原蛋白超分子体，该空白胶原蛋白超分子体未负载活性成分，此类空白的胶原蛋白超分子体可直接作为护肤品进行应用，从而以胶原蛋白作为唯一活性成分以起到改善皮肤状态的效果，同时，此类空白的胶原蛋白超分子体也可以作为用于负载活性成分的载体使用。

本实施例提供的一种胶原蛋白超分子体溶液按照以下步骤进行制备：

S1：分别制备水相和油相，具体为：

油相包括乙醇5份、肉豆蔻基三甲基溴化铵0.1份以及苦参碱椰子油离子液体0.1份，取上述质量份数原料加热至设定温度40℃，搅拌溶解充分混匀得到油相；

水相包括胶原0.5份、甘油2份、水(补足水相体系至100份)，称取上述质量份数的原料混合，加热至设定温度40℃，搅拌溶解充分混匀得到水相。

S2：上述所得的油相加入水相中高速剪切1min，转速5000rpm，得到胶原蛋白超分子体初乳；

S3：将上述所得的初乳于300bar下进行高压均质，循环3次，得到空白胶原蛋白超分子体溶液，所述胶原蛋白超分子体溶液中含有空白的胶原蛋白超分子体。

实施例2

本实施例为本发明的第二制备实施例，本实施例提供一种负载有四氢姜黄素的胶原蛋白超分子体溶液的制备，该负载有四氢姜黄素的胶原蛋白超分子体溶液可作为护肤品或化妆品原料进行添加。

四氢姜黄素，由姜科植物姜黄(curcuma longa)根茎中分离出的姜黄素(curcumin)氢化而来，是一种天然功能性美白原料。

本实施例提供的一种负载有四氢姜黄素的胶原蛋白超分子产品溶液按照以下步骤进行制备：

S1：分别制备水相和油相，具体为：

油相包括1，4-丁二醇25份、四氢姜黄素10份、硬脂基三甲基溴化铵2份以及苦参碱椰子油离子液体0.1份，取上述质量份数原料加热至设定温度60℃，搅拌溶解充分混匀得到油相；

水相包括水解胶原8份、甘油8份以及水(补足水相体系至100份)，称取上述质量份数的原料混合，加热至设定温度60℃，搅拌溶解充分混匀得到水相。

S2：上述所得的油相加入水相中高速剪切4min，转速6000rpm，得到胶原蛋白超分子体初乳；

S3：将上述所得的初乳于300bar下进行高压均质，循环8次，得到负载有四氢姜黄素的胶原蛋白超分子体溶液。

实施例3

本实施例为本发明的第三制备实施例，本实施例提供一种负载有水杨酸的胶原蛋白超分子体溶液的制备，该负载有水杨酸的胶原蛋白超分子体溶液可作为护肤品或化妆品原料进行添加。

水杨酸是一种β-羟基酸，属于脂溶性有机酸，能沿着皮脂腺渗入到毛孔的深层，溶解毛孔内堵塞的堆积物，具有溶解粉刺、收缩毛孔的作用，常作为功效类护肤品成分进行添加。

本实施例提供的一种负载有水杨酸的胶原蛋白超分子体溶液按照以下步骤进行制备：

S1：分别制备水相和油相，具体为：

油相包括1，2-戊二醇15份、水杨酸3份、月桂基三甲基溴化铵0.5份以及苦参碱椰子油离子液体4份，取上述质量份数原料加热至设定温度60℃，搅拌溶解充分混匀得到油相；

水相包括胶原提取物6份、甘油6份以及水(补足水相体系至100份)，称取上述质量份数的原料混合，加热至设定温度60℃，搅拌溶解充分混匀得到水相。

S2：上述所得的油相加入水相中高速剪切2min，转速8000rpm，得到胶原蛋白超分子体初乳；

S3：将上述所得的初乳于500bar下进行高压均质，循环6次，得到负载有水杨酸的胶原蛋白超分子产品溶液。

实施例4

本实施例为本发明的第四制备实施例，本实施例提供一种负载有抗坏血酸葡糖苷的胶原蛋白超分子体溶液的制备，该负载有抗坏血酸葡糖苷的胶原蛋白超分子体溶液可作为护肤品或化妆品原料进行添加。

抗坏血酸葡糖苷，英文名称：Ascorbyl Glucoside(简称AA2G)，俗名维生素C糖苷，是维生素C的衍生物，抗坏血酸葡糖苷主要能够达到抑制酪氨酸酶的活量，并且还能够抑制黑色素的生成，常用作美白类活性成分添加至护肤品中。

本实施例提供的一种负载有抗坏血酸葡糖苷的胶原蛋白超分子体溶液按照以下步骤进行制备：

S1：分别制备水相和油相，具体为：

油相包括1，3-丙二醇15份、二椰油基二甲基氯化铵1份以及苦参碱椰子油离子液体3份，取上述质量份数原料加热至设定温度60℃，搅拌溶解充分混匀得到油相；

水相包括可溶性胶原10份、抗坏血酸葡糖苷5份、甘油10份以及水(补足水相体系至100份)，称取上述质量份数的原料混合，加热至设定温度60℃，搅拌溶解充分混匀得到水相。

S2：上述所得的油相加入水相中高速剪切2min，转速12000rpm，得到胶原蛋白超分子体初乳；

S3：将上述所得的初乳于800bar下进行高压均质，循环5次，得到负载有抗坏血酸葡糖苷的胶原蛋白超分子体溶液。

实施例5

本实施例为本发明的第五制备实施例，实施例提供一种负载有棕榈酰三肽-1的胶原蛋白超分子体溶液的制备，该负载有棕榈酰三肽-1的胶原蛋白超分子体溶液可作为护肤品或化妆品原料进行添加。

棕榈酰三肽-1，为常用的化妆品原材料，相关的实验研究显示5ppm的棕榈酰三肽-1和0.05％维生素A在促进胶原蛋白和糖胺聚糖的合成能力上活性相当，具有较好的抗皱抗衰效果，可以作为护肤品原料使用。

本实施例提供的一种负载有棕榈酰三肽-1的胶原蛋白超分子体溶液按照以下步骤进行制备：

S1：分别制备水相和油相，具体为：

油相包括1，3-丁二醇13份、棕榈酰三肽-1 0.5份、二硬脂基二甲基氯化铵0.5份以及苦参碱椰子油离子液体1份，取上述质量份数原料加热至设定温度50℃，搅拌溶解充分混匀得到油相；

水相包括可溶性胶原7份、甘油8份以及水(补足水相体系至100份)，称取上述质量份数的原料混合，加热至设定温度50℃，搅拌溶解充分混匀得到水相。

S2：上述所得的油相加入水相中高速剪切1min，转速12000rpm，得到胶原蛋白超分子体初乳；

S3：将上述所得的初乳于600bar下进行高压均质，循环5次，得到负载有棕榈酰三肽-1的胶原蛋白超分子体溶液。

对比例1

本实施例为本发明第一对比例，本对比例提供一种按照常规方式制备的抗坏血酸葡糖苷溶液，其制备方法具体如下：

称取抗坏血酸葡糖苷、水，在60℃将抗坏血酸葡糖苷均匀分散于水中，以制备浓度为5％的抗坏血酸葡糖苷溶液。

对比例2

本实施例为本发明第二对比例，本对比例提供一种不含活性成分的胶原蛋白溶液的制备，其制备方法具体如下：

称取可溶性胶原，将其在60℃下均匀分散于水中以将其制备为浓度为10％的胶原蛋白溶液。

对比例3

本实施例为本发明第三对比例，本对比例提供一种未采用本发明方法进行制备的抗坏血酸葡糖苷胶原蛋白混合物溶液I，所述抗坏血酸葡糖苷胶原蛋白混合物溶液I采用以下方法进行制备：

称取1，3-丙二醇15份、二椰油基二甲基氯化铵1份，将其混合并加热至设定温度60℃，搅拌溶解充分混匀得到油相。

称取可溶性胶原10份、抗坏血酸葡糖苷5份、甘油10份、苦参碱椰子油离子液体3份以及水(补足水相体系至100份)，混合至设定温度60℃，搅拌溶解充分混匀得到水相。

将上述所得的油相加入水相中，60℃搅拌均匀即得所述混合物溶液I。

对比例4

本实施例为本发明第四对比例，本对比例提供一种未采用本发明方法进行制备的坏血酸葡糖苷胶原蛋白超分子溶液I，所述抗坏血酸葡糖苷胶原蛋白超分子溶液I采用以下方法进行制备：

称取氯仿15份、二椰油基二甲基氯化铵1份，将其混合并加热至设定温度60℃，搅拌溶解充分混匀得到油相。

称取可溶性胶原10份、抗坏血酸葡糖苷5份、甘油10份以及水(补足水相体系至100份)，混合至设定温度60℃，搅拌溶解充分混匀得到水相。

将上述所得的油相加入水相中高速剪切2min，转速12000rpm，得到胶原蛋白超分子载体初乳。将上述所得的初乳于800bar下进行高压均质，循环5次，得到超分子溶液I，该超分子溶液I中包含有负载有抗坏血酸葡糖苷的胶原蛋白超分子体。

实施例6

本实施例为本发明的测试实施例，包括：

6.1外观测试

对实施例1制得的空白胶原蛋白超分子体溶液进行拍照，如图1所示。

将实施例1所得的空白胶原蛋白超分子体溶液，用蒸馏水稀释后，用毛细管吸取样品吹于载网上，染色，清洗，待干燥后用透射电镜进行观察，拍照记录结果，结果如图2所示。

6.2将实施例1～5、对比例2～4制得的产品溶液进行稀释后，用纳米粒度zeta电位分析仪(安东帕有限公司，Litesizer 500)进行粒径测定。

该实施例1～实施例5、对比例2～对比例4制得的胶原蛋白超分子体的粒径的测试结果分别如图3～图7、图8～10所示，该实施例1～实施例5、对比例2～对比例4的测试数据如表1所示：

表1实施例1～5、对比例2～4的粒径测定结果

上述实验结果表明，实施例1～实施例5采用本发明原料和制备方法制备得到超分子载体的粒径均一，且均达到纳米级。而对比例2呈现无规律粒径，表明胶原蛋白原料自身呈现不规则形态；对比例3呈现无规律粒径，表明直接混合原辅料，未形成胶原蛋白超分子体；对比例4较实施例1～实施例5所形成的超分子体的粒径更大，表明在本发明制备方法的基础上，通过添加苦参碱椰子油离子液体有助于胶原蛋白超分子体粒径的优化。

6.3外观稳定性测试

将实施例1～5制得的胶原蛋白超分子体溶液，各分装四份并分别放置在4℃、常温光照(RT)、45℃、-25℃条件下储存，分别在制备当天(0表示)、30天拍照记录外观变化情况，测试结果如图11所示。

由结果可知，本发明的超分子载体在4℃、常温光照(RT)、45℃、-25℃条件下储存一个月的外观稳定性良好，在储存前后均为澄清透明状态，而对比例4制备得到的胶原蛋白超分子体溶液在常温储存30天后明显出现白色沉淀，其稳定性明显劣于通过本申请原料和制备方法制备得到的胶原蛋白超分子体，该实验结果进一步说明，通过在制备过程中加入苦参碱椰子油离子液体，可大幅度提高胶原蛋白超分子体热力学稳定性。

6.4包封率稳定性测定

6.4.1HPLC检测方法

测试仪器：液相色谱仪：安捷伦，1260InfinityⅡ；

色谱条件：Agilent TC-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为0.2％乙酸水溶液(pH＝3.1)：甲醇＝90:10；流速为1mL/min；检测波长为255nm；柱温为30℃；进样量为20μL。

标准曲线建立：称取适量抗坏血酸葡糖苷于棕色容量瓶，用纯水溶解，定容，稀释成浓度梯度的溶液，分别为1、2、5、10、20、50、100、200、500μg/ml，用HPLC进样检测。结果表明。线性拟合方程为y＝14.16x+2.3053(R²＝1)，在1～500μg/mL范围内线性关系良好。

6.4.2包封率测定

常法装Sephadex G50凝胶柱(1.5cm*30cm)，分别取样品溶液0.2ml上柱，以水洗脱，分段收集，并采用上述6.4.1提供的HPLC检测方法测定游离药物，按照(W_总-W_游离)/W_总*100％计算包封率。

样品溶液包括实施例4制备得到的胶原蛋白超分子体溶液以及对比例4制备得到的超分子溶液I，将上述两个样品溶液分别在4℃、常温光照(RT)、45℃、-25℃条件下储存30d，在储存前后，观察其包封率变化情况，实施例4的样品溶液测试结果如图12所示，对比例4的样品溶液测试结果如图13所示。

由以上结果可知，在制备当天，实施例4的包封率明显高于对比例4，且高温条件放置30天后包封率有降低；实施例4在高温条件下胶原蛋白超分子体的包封率略有下降，尤其是45℃条件下，包封率降至89.2％，但总体看来，本发明的胶原蛋白超分子体一个月包封率较稳定。

6.5粒径稳定性检测

将实施例4制备得到的胶原蛋白超分子体溶液、对比例4制备得到的超分子溶液I分别放置在4℃、常温光照(RT)、45℃、-25℃条件下，分别在制备当天(0表示)、30天测定其粒径变化情况，实施例4的样品溶液测试结果如图14所示，对比例4的样品溶液测试结果如图15所示。由以上实验结果可知，采用本发明方法制备得到的负载有活性成分的胶原蛋白超分子体的粒径在一个月内热力学稳定性良好，且优于对比例4。

6.6胶原蛋白超分子体的促渗效果检测

6.6.1皮肤滞留量检测方法

本实验设置一个实验组和三个对照组，实验组采用实施例4制备得到的负载有抗坏血酸葡糖苷的胶原蛋白超分子体溶液作为测试样品，而上述三个对照组分别采用对比例1制备得到的抗坏血酸葡糖苷溶液、对比例3制备得到的混合物溶液I、对比例4制备得到的超分子溶液I作为测试样品，上述实验组和对照组均设置三个重复，对实验结果取均值。

实验前用植皮刀制备厚度为300±50μm的猪皮模型，然后将其剪成接收池大小的圆形小块，放入生理盐水中备用。使用磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)作为接收介质。实验时将猪皮模型固定于释放池和接收池之间，使角质层的一侧朝向释放池，真皮层一侧朝向接收池，并且保证皮肤与接收液紧密贴合，两者之间不得有气泡出现。随后向猪皮模型表面加入一定量的测试样品，此过程控制接收池的温度维持在37±0.5℃，接收池内放入磁性搅拌子，实验过程中保持其在转速300rpm。

在体外经皮行为8h以后，将猪皮模型取下，将表面残留溶液用纯水清洗干净，取透皮处的皮肤，剪碎，加入1.5ml纯水匀浆，超声处理1h以浸取皮肤中的抗坏血酸葡糖苷，匀浆液转移至离心管中，涡旋混匀，12000rpm/min离心10min，残渣用1ml纯水重提一次，合并两次上清液，混匀取上清液，使用0.22μm滤膜过滤，按上述6.4.1提供的HPLC检测方法对上清液中所含的抗坏血酸葡糖苷含量进行分析，即可得到胶原蛋白抗坏血酸葡糖苷超分子溶液和抗坏血酸葡糖苷溶液的经皮滞留量。

6.5.2皮肤滞留量检测结果

实验结果如16所示，对比例1和对比例3对比，皮肤滞留量无明显差异，对比例4的滞留量是对比例1的2.6倍，说明在该对比例4中，通过形成AA2G胶原蛋白超分子体，其透皮效果较未形成胶原蛋白超分子体的对比1和对比例3的皮肤渗透效果更好。

此外，实施例4中的抗坏血酸葡糖苷皮肤滞留量是对比例1的4.0倍,对比例3的1.5倍，说明通过添加苦参碱椰子油离子液体制备得到的胶原蛋超分子体效果比未添加苦参碱椰子油离子液体制备得到的胶原蛋超分子体在促进活性成分渗透方面的效果更佳。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。本发明未详细描述的技术、形状、构造部分均为公知技术。

Claims (10)

1.一种胶原蛋白超分子体，其特征在于，由以下质量份数的原料制备得到：胶原蛋白0.5～10份、稳定剂0.1～10份、醇类溶剂5～25份、甘油2～10份、离子液体0.1～4份以及水7～1000份。

2.如权利要求1所述的一种胶原蛋白超分子体，其特征在于：所述胶原蛋白超分子体还包括活性成分。

3.如权利要求2所述的一种胶原蛋白超分子体，其特征在于：所述活性成分为护肤类活性成分或药用类活性成分中的任意一种或多种。

4.如权利要求1所述的一种胶原蛋白超分子体，其特征在于：所述胶原蛋白为胶原、胶原提取物、水解胶原、可溶性胶原、鹿骨胶原蛋白、原胶原以及重组Ⅲ型人源胶原蛋白中的任意一种。

5.如权利要求1所述的一种胶原蛋白超分子体，其特征在于：所述稳定剂选自肉豆蔻基三甲基溴化铵、硬脂基三甲基溴化铵、月桂基三甲基溴化铵、二椰油基二甲基氯化铵、PEG-15椰油基甲基氯化铵、PEG-2油基甲基氯化铵、PEG-5硬脂基氯化铵、PG-羟乙基纤维素椰油基二甲基氯化铵、PG-羟乙基纤维素硬脂基二甲基氯化铵、PPG-25二乙基甲基氯化铵、蓖麻醇酸酰胺丙基三甲基氯化铵、刺槐角豆胶羟丙基三甲基氯化铵、刺云实羟丙基三甲基氯化铵、大豆油基三甲基氯化铵、大豆油酰胺丙基苄基二甲基氯化铵、淀粉羟丙基三甲基氯化铵、二C12-15烷基二甲基氯化铵、二癸基二甲基氯化铵、二鲸蜡基二甲基氯化铵、二牛脂基二甲基氯化铵、二羟丙基PEG-5亚油基氯化铵、二十八烷基三甲基氯化铵、二硬脂基二甲基氯化铵、二硬脂酰氧乙基二甲基氯化铵、二棕榈酰氧乙基二甲基氯化铵、泛醇基羟丙基硬脂基二甲基氯化铵、瓜儿胶羟丙基三甲基氯化铵、鲸蜡硬脂基二甲基氯化铵、鲸蜡硬脂基三甲基氯化铵、聚甲基丙烯酰胺丙基三甲基氯化铵、决明胶羟丙基三甲基氯化铵、牛脂基三甲基氯化铵、葡聚糖羟丙基三甲基氯化铵、羟丙基瓜儿胶羟丙基三甲基氯化铵、羟丙基双-羟乙基二甲基氯化铵、羟丙基双硬脂基二甲基氯化铵、羟丙基氧化淀粉PG-三甲基氯化铵、羟鲸蜡基羟乙基二甲基氯化铵、羟乙基山萮酰胺丙基二甲基氯化铵、羟乙基油基二甲基氯化铵、人参羟丙基三甲基氯化铵、肉桂酰胺丙基三甲基氯化铵、乳酰胺丙基三甲基氯化铵、三鲸蜡基甲基氯化铵、山嵛基苄基二甲基氯化铵、山嵛基三甲基氯化铵、山嵛酰胺丙基PG-二甲基氯化铵、山嵛酰氧基PG-三甲基氯化铵、十二烷苄基三甲基氯化铵、十二烷十六烷基三甲基氯化铵、双羟乙基双羟丙基硬脂基氯化铵、辛基十二烷基三甲基氯化铵、椰油基三甲基氯化铵、椰油酰胺丙基PG-二甲基氯化铵、硬脂基三甲基氯化铵、硬脂酰胺丙基二甲基苄基氯化铵、硬脂氧丙基三甲基氯化铵、油基苄基二甲基氯化铵、油酰胺丙基PG-二甲基氯化铵、月桂基甲基葡糖醇聚醚-10羟丙基二甲基氯化铵、月桂基三甲基氯化铵、月桂酰PG-三甲基氯化铵、棕榈酰胺丙基三甲基氯化铵中的任意一种或多种。

6.如权利要求1所述的一种胶原蛋白超分子体，其特征在于：所述醇类溶剂选自乙醇、丙二醇、丁二醇、戊二醇或己二醇中的任意一种或多种。

7.如权利要求1所述的一种胶原蛋白超分子体，其特征在于：所述离子液体为苦参碱椰子油离子液体。

8.如权利要求1所述的一种胶原蛋白超分子体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：分别制备水相和油相，其中，油相包括醇类溶剂、稳定剂以及离子液体，水相包括胶原蛋白、甘油以及水；

S2：将上述水相和油相混合，通过高速剪切制备初乳；

S3：将上述初乳进行高压均质，以制备胶原蛋白超分子体溶液，所述胶原蛋白超分子体溶液中含有胶原蛋白超分子体。

9.如权利要求8所述的一种胶原蛋白超分子体的制备方法，其特征在于：所述高速剪切时间为1～5min，优选为1～4min；所述高速剪切转速为5000～12000rmp。

10.如权利要求1～6任意一项所述的一种胶原蛋白超分子体或采用权利要求7～9任意一项所述的一种胶原蛋白超分子体的制备方法制备得到的胶原蛋白超分子体在制备食品、保健品、化妆品、护肤品、饲料或人或动物用药品中任意方面的应用。

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