CN116218874A - 盐生草Hg50329基因在排钠离子中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了盐生草Hg50329基因及其调控Na+外排与K+吸收方面的应用，通过克隆盐生草Hg50329基因，构建亚细胞定位载体和酵母缺陷型遗传转化验证该基因功能。发现盐生草Hg50329基因能够促进Na+外排与K+吸收，显著提高植株耐盐性。这将为挖掘调控耐盐相关的重要基因，解析植物调控耐盐途径提供有效支撑，对创制耐盐优质作物种质资源与解决土壤盐渍化问题具有重要作用。

Description

盐生草Hg50329基因在排钠离子中的应用
技术领域
本发明属于植物生物工程和转基因技术领域，具体涉及盐生植物盐生草耐盐基因Hg50329及其调控Na+外排方面的应用。
背景技术
土壤盐渍化已成为限制全球粮食生产的主要因素之一。据估计，全世界5.2亿hm2的旱作耕地中就有3.6亿hm2正在遭受水土流失、土壤退化和盐渍化的危害，50％的可灌溉耕地(2.3亿hm2)同样受到盐渍化影响[1]。全球每年农业生产中因土壤盐渍化造成的损失高达120亿美元，我国当前盐渍化土壤面积约3600多万hm2，且呈现出不断增长的趋势[2]。
盐胁迫抑制植物生长有两个阶段：首先，盐离子逐渐积累不仅对叶片的生长产生抑制作用，同时根系伸长区与成熟区的细胞分裂与分化会受到严重影响，进而抑制植物根系的生长[3]，在植物生长的早期阶段植物根系受渗透效应的影响，使植物体内缺水形成生理干旱，阻碍根系吸水，抑制根系生长、细胞伸长及叶片正常发育[4]；其次，植物体内积累的盐离子过多会对植物产生毒害作用，通过蒸腾流运输到地上部的盐离子使植物体内Na+和Cl-浓度升高，过高的Na+和Cl-造成植物叶片死亡[5]。植物依据在盐渍环境下的生长发育特性可分为两大类别：盐生植物(耐土壤盐渍化)和甜土植物(不耐土壤盐渍化)，而大多数粮食作物属于甜土植物。盐生植物的存在增加了盐碱地的植被覆盖率，在减少漏光、增加光能利用、减少水分蒸发等方面发挥着重要的作用，同时，在固定土壤、提高土壤有机质含量、改善土壤的含砂量、松软程度及酸碱度等方面具有重要作用。
在盐胁迫下，盐生植物为了更好地生长，会在生理上发生一些变化以适应环境，这些变化受植物体内相关基因调控。盐胁迫诱导或抑制许多具有重要功能基因的表达，近年来，盐生耐盐基因及基因的表达调控已成为植物耐盐研究的热点[6]。盐生植物盐生草(Halogeton glomeratus)是改良盐碱地的先锋植物，其自身具有很强的耐盐抗旱能力，含有大量耐盐基因，研究这些盐诱导表达基因及其编码蛋白的性质及功能，能够促进对蛋白结构和基因功能的认识，为提高植物耐盐抗旱能力奠定基础，也为耐盐植物新品种的选育提供依据。同时也对盐碱地修复，解决土壤盐渍化问题具有重要意义。
现有技术存在的问题：现有技术中未报道关于盐生草基因Hg50329调控盐生草耐盐性方面的功能和应用。
发明内容
本发明要解决的关键技术问题在于提供盐生草基因Hg50329及其调控耐盐性方面的应用。为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
1.盐生草Hg50329基因，所述Hg50329基因转录本序列如序列表SEQ No.1所示，所述Hg50329基因发挥抗盐功能的片段如序列表SEQ No.2所示。
2.一种载体，所述载体包含如序列表SEQ No.1或SEQ No.2所示核苷酸片段。
3.供盐生草Hg50329基因克隆和载体构建方法，包括：(1)植株材料和试剂选择，(2)RNA提取与反转录，(3)引物设计和基因克隆，(4)构建亚细胞定位载体、过表达载体及酵母表达载体。
4.盐生草Hg50329基因在农杆菌与酵母中的转化方法，包括：(1)转化农杆菌，(2)载体转化酵母缺陷型菌株。
5.盐生草Hg50329基因功能验证方法，包括：(1)亚细胞定位、拟南芥遗传转化和酵母缺陷型遗传转化；(2)转基因拟南芥获得及表型分析；(3)转缺陷型酵母表型分析及钠离子含量测定。
6.盐生草Hg50329基因在Na+外排与K+吸收方面的应用，所述盐生草Hg50329基因发挥功能的片段如序列表SEQ No.2所示。
7.盐生草Hg50329基因增强拟南芥抗盐性的应用，所述盐生草Hg50329基因发挥功能的片段如序列表SEQ No.2所示。
8.盐生草Hg50329基因在烟草细胞核上表达的应用，所述盐生草Hg50329基因发挥功能的片段如序列表SEQ No.2所示。
有益效果：本发明利用基因克隆的方式，成功克隆Hg50329基因。并构建亚细胞定位载体、过表达载体和酵母表达载体，在烟草中亚细胞定位发现Hg50329主要在细胞核上表达；成功转化拟南芥后，对T1代30天苗进行200mM NaCl盐胁迫，发现转基因苗较野生型拟南芥长势好，说明Hg.41242提升了其耐盐性；随培养基中Na+的增加，转化空载体pYES2的Na+敏感型酵母菌株AXT3体内Na+的含量升高，而转化Hg50329的Na+敏感型酵母菌株AXT3体内Na+的含量均降低，且显著低于转化空载体pYES2的酵母菌株体内Na+的含量，表明在酵母异源表达系统中，Hg50329参与Na+的外排。在含有100mM钾离子的培养基上，转化pYES2-Hg50329较空载体pYES2的CY162酵母菌株长势好；在含有1mM、0.2mM钾离子以及不含钾离子的AP培养基上，转化空载体pYES2没有生长，而转化pYES2-Hg50329的酵母菌株CY162却能够正常生长，且长势较好(图8C)；酵母菌株体内K+含量分析表明，随培养基中K+的升高，转化Hg50329和空载体pYES2的酵母菌株体内K+含量均显著升高，其中在低于7mM的培养基中，转化Hg50329的酵母菌株CY162体内K+含量显著高于转化空载体的菌株体内K+含量(图8D)，表明基因Hg50329具有恢复钾离子缺陷型酵母菌株CY162对K+的吸收能力，参与酵母中CY162对K+的吸收。
附图说明
图1为亚细胞定位载体pBI121-eGFP结构图。
图中，Hg50329基因连接位置为XbaI与SmaI两个酶切位点之间。
图2为过表达载体pBI121-GUS结构图。
图中，Hg50329基因连接位置为XbaI与SmaI两个酶切位点之间。
图3为酵母表达载体pYES2结构图。
图中，Hg50329基因连接位置为EcoR I与XbaI两个酶切位点之间。
图4为RNA琼脂糖凝胶电泳图。
图中，M：D15000Marker。
图5为PCR扩增目的基因。
图中，M：D15000Marker；1-3为Hg50329基因PCR产物。
图6为基因的亚细胞定位分析图。
图中，边缘及内部较亮(实际为绿色)。
图7为转基因T0代种子抗性筛选与T1代苗盐胁迫表型分析图
图中，A：转基因T0代种子抗性苗筛选(阳性株无影响，非阳性株黄化)；B：野生型拟南芥WT与转Hg50329拟南芥T1代在200Mm NaCl胁迫0d与14d的表型对比。
图8为转化Hg50329和空载体(pYES2)的酵母菌株AXT3在AP培养基上的长势及钠离子含量及转化Hg50329和空载体(pYES2)的酵母菌株CY162在AP培养基上的长势及钾离子含量。
图中，1、10–1、10–2、10–3分别代表稀释1、10、100、1 000倍的酵母菌液，A：转化Hg50329和空载体(pYES2)的酵母菌株AXT3在含有1mM KCl同时含有不同浓度NaCl(0,10,30,50mM)的AP培养基上的长势；B：转基因酵母中的Na+含量；C：转化Hg50329和空载体(pYES2)的酵母菌株CY162在含有0,0.2,1,100mM KCl的AP培养基上的长势；D：转基因酵母中的K+含量。
图9为Hg50329基因和有效片段结构示意图。图中粗体为有效片段。
具体实施方法
本发明专利下述实施例中使用方法和装置，如无特殊说明，均为常规方法和装置；所用器材、试剂均为试剂公司购买的常规器材和试剂。为使本发明专利的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合具体实施例对本发明专利的具体实施方式进行详细说明。这些优选实施方式的示例在具体实施例中进行了例示。在此，还需要说明的是，为了避免因不必要的细节而模糊了本发明专利的技术方案，在实施例中仅仅示出了与根据本发明专利的方案密切相关的技术方案和/或处理步骤，而省略了关系不大的其他细节。
实施例1
本实施例提供盐生草Hg50329基因序列，所述Hg50329基因转录本序列如序列表SEQ No.1所示，所述Hg50329基因发挥抗盐功能的片段如序列表SEQ No.2所示(如图9)。
实施例2
本实施例提供盐生草Hg50329基因克隆和载体构建方法，包括：
1.植株材料和试剂选择
本发明所使用的盐生草和烟草皆由本实验室保存，种植于实验室植物培养间和人工气候培养箱。本发明采用多糖多酚植物总RNA提取试剂盒、快速质粒小提试剂盒、通用型DNA纯化回收试剂盒均购自天根生化科技有限公司。反转录试剂盒TranscriptorFirstStrand cDNA Synthesis Kit和荧光定量试剂盒FastStart Essential DNA GreenMaster购买自罗氏公司。抗生素购自索莱宝公司。限制酶购自宝日医生物技术有限公司。Taq预混液购自艾科瑞公司。
Na+敏感型酵母菌株AXT3(由于菌株中质膜Na+-ATPases ScENA1-4、质膜Na+，K+/H+逆向转运蛋白ScENA1和液泡膜Na+，K+/H+逆向转运蛋白ScEHX1的缺失，导致酵母菌株AXT3对和高浓度的盐敏感)、K+吸收缺陷型酵母菌株CY162(菌株中TRK1和TRK2的缺失导致该菌株缺乏钾离子吸收能力，在钾离子低于7mM的条件下，酵母菌株CY162不能生长)、亚细胞定位载体pBI121-eGFP(图1)和过表达载体pBI121-GUS(图2)由甘肃农业大学农学院麦类课题组提供，克隆载体pMD19-T vector，大肠杆菌Trans-T1感受态细胞以及酵母表达载体pYES2(图3)购自北京全式金生物技术有限公司。
2.RNA提取与反转录
于盐生草六叶期时采集根系，使用天根多糖多酚植物总RNA提取试剂盒提取RNA后，使用罗氏反转录试剂盒Transcriptor FirstStrand cDNA Synthesis Kit将RNA反转录为cDNA，步骤详见其说明书。
结果显示：提取盐生草六叶期根系RNA，通过超微量紫外分光光度计检测显示，各RNA 260/280均在1.9～2.1之间，纯度较好。使用1.2％琼脂糖凝胶，150V电泳15min，条带结果显示RNA质量较好，可用于后续实验(图4)。
3.引物设计和基因克隆
使用NCBI Primer-BLAST(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/)设计克隆引物、亚细胞定位引物、过表达引物(同亚细胞定位引物)和酵母表达引物，结果见表1。
表1 Hg50329克隆引物、亚细胞定位(含酶切位点及保护碱基)和酵母表达引物(含酶切位点及保护碱基)
Figure BDA0004079578810000041
Figure BDA0004079578810000051
使用艾科瑞Taq预混液PCR扩增目的基因，利用天根通用型DNA纯化回收试剂盒回收目标片段，连接目的基因片段与克隆载体，并转化大肠杆菌感受态Trans-T1进行蓝白斑筛选，最终使用天根快速质粒小提试剂盒提取阳性克隆质粒后送生工生物工程有限公司测序。具体步骤见各试剂盒说明书。
结果显示：以盐生草的cDNA为模板，使用克隆引物，通过PCR扩增目的基因，将扩增产物于1.5％的琼脂糖凝胶，100V电泳30min(图5)。利用天根通用型琼脂糖凝胶回收试剂盒回收扩增产物后，16℃过夜连接回收的目的基因扩增产物和pMD19-T vector载体。第二d将过夜连接的产物转化Trans-T1大肠杆菌，12～16h后进行蓝白斑筛选，将白斑挑至5ml含有卡纳青霉素(Kan)的LB液体培养基中，37℃，150rpm，12h后进行菌液PCR。同时提取质粒送测序。对检测合适的菌液送公司测序，测序合适后保存于-80℃冰箱，备用。
PCR扩增体系及反应程序如下，PCR扩增体系：
试剂 使用量
Premix Taq 12.5μL
ddH2O 9.5μL
Primer-F 1.0μL
Primer-R 1.0μL
cDNA 1μL
PCR反应程序：
Figure BDA0004079578810000052
4.构建亚细胞定位载体、过表达载体及酵母表达载体
设计亚细胞定位引物、过表达引物和酵母表达引物，并在引物5’端加上保护碱基和酶切位点(表1)。以1.2.3中的阳性质粒为模板，PCR扩增目的基因。按如下体系分别双酶切扩增产物、亚细胞定位载体pBI121-eGFP、过表达载体pBI121-GUS和酵母表达载体pYES2：在已灭菌的PCR管中依次加入10μL目的基因和pBI121-eGFP或pBI121-GUS载体质粒，2μL10x T Buffer，2μL BSA，1μL XbaI，1μL SmaI，4μL ddH2O；在已灭菌的PCR管中分别加入10μL的目的基因和pYES2载体质粒，4μL 10x M Buffer，1μL XbaI，1μL EcoRI及4μLddH2O。瞬时离心，封口膜封口，置于37℃水浴锅中过夜酶切，每份质粒做6管双酶切。第二天用1％的琼脂糖凝胶电泳检测。凝胶回收目的基因小片段和载体大片段。使用天根通用型DNA纯化回收试剂盒回收酶切产物，将目的基因分别与亚细胞定位载体pBI121-eGFP、过表达载体pBI121-GUS和酵母表达载体pYES2连接，并送测序。然后转化Trans-T1，筛选蓝白斑，菌液PCR检测，测序，测序合适后提取质粒。
结果显示：以阳性克隆载体质粒为模板，分别使用亚细胞定位引物、过表达引物和酵母表达引物扩增目的基因，使用天根通用型DNA琼脂糖凝胶回收试剂盒回收扩增产物。在37℃条件下双酶切目的基因、亚细胞定位载体、过表达载体和酵母表达载体。然后用T4 DNA连接酶16℃将目的基因分别连接亚细胞定位载体、过表达载体和酵母表达载体。
实施例3
本实施例提供盐生草Hg50329基因在农杆菌与酵母中的转化，包括：
1.转化农杆菌
成功获得亚细胞定位载体和过表达载体后，采用冻融法将亚细胞定位载体和过表达载体转入农杆菌GV3101，具体步骤为：将农杆菌感受态分装于已灭菌的1.5mL离心管中，每管分装50uL；加入10uL质粒，用枪头吹打混匀，冰浴5min，立即置于液氮中5min，37℃水浴5min后置于冰上静置5min。加入700uL不含抗生素的LB液体培养基，28℃、200rpm振荡培养2-3h。6000rpm离心1min，弃掉500uL上清，将剩余上清与菌体沉淀混匀。吸取150uL涂布于含Kan与Rif的LB固体培养基上，封口，28℃倒置培养48-72h，至长出菌斑。挑取单克隆于含相应抗生素的LB液体培养基中，28℃、200rpm振荡培养2-3天，进行菌液PCR检测与测序，将测序成功的阳性菌株保存于-80℃冰箱。
2.载体转化酵母缺陷型菌株
采用醋酸锂转化法将酵母表达载体转入缺陷型菌株，具体步骤为：将Ura固体选择培养基加热至完全融化后分装于培养皿中，凝固冷却后备用；在1.5mL无菌离心管中分别分装CY162和AXT3感受态细胞，每管分装50μL，每个感受态细胞分装4管，并在离心管上做好标记；向上述离心管中顺次加入240μL 50％ PEG、36μL 1M LiAc、65μL无菌水、5μL鲑鱼精DNA、空载体质粒及重组质粒各2μL，瞬时离心；剧烈振荡每个离心管大约1min，使加入的样品完全混合，封口后置于28℃培养箱保温30min，42℃热激20min，取出后10000rpm离心1min，倒掉上清液；吸取无菌水500μL加入离心管中，用1000mL移液枪轻轻吹打混匀，10000rpm离心1min；弃上清，重复前一步骤，吸去部分上清，使管内体积为50μL；吸取30μL转化混合液，均匀地涂在Ura固体培养基上，封口，置于28℃培养箱中，倒置培养3d；待长出单菌斑后，在10mL Ura液体选择培养基中挑取单个菌斑，扩大培养，并进行菌液PCR验证，验证合适的菌液用于后续实验。
实施例3
本实施例提供盐生草Hg50329基因在Na+外排方面的应用，包括：
1.运用注射渗透法将农杆菌菌液瞬时转化烟草叶片，具体步骤为：注射前一天将-80℃保存的农杆菌菌液取出,置于冰上融化；向10mL含有Kan与Rif的LB液体培养基中加入20uL农杆菌菌液，28℃、220rpm振荡培养16h以上；向50mL LB液体培养基中加入相应抗生素以及5mL 10mM的MES和400uL 20umol的ACE，然后加入4mL活化后的菌液，28℃、220rpm避光振荡培养，其间测定菌液OD值；当菌液OD值达到0.5左右后，分装于已灭菌的50mL离心管中，4000rpm冷冻离心15min，弃上清，收集菌体沉淀；向50mL 1％的MS液体培养基中加入5mL10mM的MES、3mL 150umol的ACE和1mL 10mM的MgCl,用其重悬菌体沉淀，待OD600＝0.5左右，冰浴2h，即可侵染烟草；选取长势较好，叶片大小适宜的烟草植株，用2.5mL注射器(去掉针头)从烟草叶片背面注射菌液，注射时尽量避开主叶脉。以空载体GFP作对照，并做好标记；将注射后的烟草植株避光培养2天，在激光扫描共聚焦显微镜(LSM800)下观察荧光信号分布情况。
2.浸花法转化拟南芥：从-80C冰箱取出农杆菌菌液，吸取20μl加入到含Rif和Kan的10mlLB液体培养基中，28C，200rpm，暗培养18h以上，直至菌液摇成浑浊的橘黄色；吸取100μL活化后的菌液于100mL含Rif和Kan的.LB液体培养基中，28℃、200rpm黑暗条件下振荡培养至菌液成浑浊的橘黄色，每个基因的菌液做两个重复；将.上述菌液分装到50mL无菌离心管中，4000rpm离心15min，倒掉上清液，收集菌体沉淀，然后加入200mL 5％的蔗糖溶液，用移液枪吹打，冲悬沉淀；再次以4000rpm离心15min，倒掉上清液，用5％的蔗糖溶液重悬菌体沉淀，使最终的0D600为0.5-0.8；避光，加入0.04％silwet-77；侵染时，花序浸没于浸染液中1min，套上黑色塑料袋，暗培养24h后揭开塑料袋正常培养。根据植株长势情况，可在一周后再次侵染。当角果变黄或棕色时，套袋并停止浇水。待植株枯死或大部分果夹开裂时统一收种。除去叶片等杂质后将转基因T0代种子置于4℃冰箱1周左右，春化后播种在含有50mg·L-1Kan的MS培养基上，将消毒后的种子铺在含Kan的MS培养基上，放在光照/黑暗为16/8h，22-24℃条件下，使种子萌发，待幼苗第一对真叶展开且生根后进行抗性筛选：抗性苗在长出真叶的同时根系也能够生长，幼苗生长较好，叶片呈绿色；非抗性苗叶片黄化，生长受到抑制甚至枯死。将阳性苗移栽到混合蛭石、营养土和椰糠的育苗土中。待基本确定抗性苗可以正常开花收种，分别随机选取植株叶片，做好标记，用植物基因组DNA提取试剂盒提取转基因拟南芥和野生型拟南芥DNA，具体步骤参照说明书。用表1中的引物进行PCR扩增，PCR扩增方法同上，并用1％的琼脂糖凝胶电泳检测。将阳性株收取的T1代种子消毒后点播于MS培养基，待长出三片真叶后移栽育苗盘，在放在光照/黑暗为16/8h，22-24℃条件下培育30天，然后以200mM NaCl进行盐胁迫，分别在胁迫0，7，14天观察表型并拍照。
3.在10mL Ura液体选择培养基中吸取50μL上述培养成功的菌液，28℃，200rpm培养至菌液OD600为0.5，然后将菌液分别稀释1、10、100和1000倍，吸取5μL稀释后的菌液，点到含有不同浓度Na+或K+的AP培养基上，具体为：在含有1mM KCl并添加了0、10、30、50mMNaCl的AP培养基上从上往下依次点转化pYES2空载体、pYES2-Hg50329的AXT3；在含有0、0.2、1、100mM KCl的AP培养基上，从上往下依次点转化pYES2空载体、pYES2-Hg50329的CY162，晾至菌斑干燥后封口，倒置于28℃培养箱培养48小时后观察酵母生长情况。同时在含有10和50mM NaCl与0.2和100mM KCl的100mL液体AP培养基中加入OD600为0.5的1mL菌液，8℃、220rpm避光振荡培养3天，离心菌液，去上清，3次悬浮清洗沉淀，电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定酵母中钠钾离子含量。
结果显示：Hg50329可能定位在细胞膜和细胞质上(图6)；在盐胁迫后，野生型拟南芥表现出黄化萎焉症状，而转基因拟南芥长势明显优于野生型拟南芥，说明Hg50329提高了植株的耐盐性(图7)；在Na+浓度为0mM时所有菌株长势基本一致，且长势较好。随着培养基中Na+浓度的升高，与转化空载体pYES2的菌株相比，转化pYES2-Hg50329的AXT3酵母菌株生长基本一致，无明显区别(图8A)；进一步分析转化空载体pYES2与Hg50329的酵母菌株体内Na+含量，发现随培养基中Na+的增加，转化空载体pYES2的酵母菌株体内Na+的含量升高，而转化Hg50329的酵母菌株体内Na+的含量降低，且显著低于转化空载体pYES2的酵母菌株体内Na+的含量(图8B)，表明在酵母异源表达系统中，Hg50329参与Na+的外排。在含有100mM钾离子的培养基上，转化pYES2-Hg50329较空载体pYES2的CY162酵母菌株长势好；在含有1mM、0.2mM钾离子以及不含钾离子的AP培养基上，转化空载体pYES2没有生长，而转化pYES2-Hg50329的酵母菌株CY162却能够正常生长，且长势较好(图8C)；酵母菌株体内K+含量分析表明，随培养基中K+的升高，转化Hg50329和空载体pYES2的酵母菌株体内K+含量均显著升高，其中在低于7mM的培养基中，转化Hg50329的酵母菌株CY162体内K+含量显著高于转化空载体的菌株体内K+含量(图8D)，表明基因Hg50329具有恢复钾离子缺陷型酵母菌株CY162对K+的吸收能力，参与酵母中CY162对K+的吸收。
以上所述仅是本申请的具体实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本申请的保护范围。
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Claims (8)

1.盐生草Hg50329基因，其特征在于所述Hg50329基因转录本序列如序列表SEQ No.1所示，所述Hg50329基因发挥抗盐功能的片段如序列表SEQ No.2所示。
2.一种载体，其特征在于所述载体包含如序列表SEQ No.1或SEQ No.2所示核苷酸片段。
3.供盐生草Hg50329基因克隆和载体构建方法，其特征在于所述方法包括：(1)植株材料和试剂选择，(2)RNA提取与反转录，(3)引物设计和基因克隆，(4)构建亚细胞定位载体、过表达载体及酵母表达载体。
4.盐生草Hg50329基因在农杆菌与酵母中的转化方法，其特征在于所述方法包括：(1)转化农杆菌，(2)载体转化酵母缺陷型菌株。
5.盐生草Hg50329基因功能验证方法，其特征在于所述方法包括：(1)亚细胞定位、拟南芥遗传转化和酵母缺陷型遗传转化；(2)转基因拟南芥获得及表型分析；(3)转缺陷型酵母表型分析及钠离子含量测定。
6.盐生草Hg50329基因在Na+外排与K+吸收方面的应用，其特征在于所述盐生草Hg50329基因发挥功能的片段如序列表SEQ No.2所示。
7.盐生草Hg50329基因增强拟南芥抗盐性的应用，其特征在于所述盐生草Hg50329基因发挥功能的片段如序列表SEQ No.2所示。
8.盐生草Hg50329基因在烟草细胞核上表达的应用，其特征在于所述盐生草Hg50329基因发挥功能的片段如序列表SEQ No.2所示。
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