CN116217578A - 一类抑制mTOR同时降解GSPT1蛋白的双功能化合物 - Google Patents

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CN116217578A CN202211705219.2A CN202211705219A CN116217578A CN 116217578 A CN116217578 A CN 116217578A CN 202211705219 A CN202211705219 A CN 202211705219A CN 116217578 A CN116217578 A CN 116217578A
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Abstract

本公开涉及一种抑制mTOR同时降解GSPT1蛋白的双功能化合物及其制备方法和应用，所述化合物具有式(I)所示的结构，式中各基团定义详见说明书，本公开还涉及所述化合物的互变异构体、对映异构体、非对映异构体、对映异构体和非对映异构体的混合物、外消旋体、内消旋体、外消旋体和内消旋体的混合物、药学上可接受的水合物、药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物，所述化合物作为mTor和GSPT1蛋白的双功能抑制剂，具有活性高且选择性好。

Description

一类抑制mTOR同时降解GSPT1蛋白的双功能化合物
技术领域
本公开涉及药物化学领域，特别涉及一种抑制mTOR同时降解GSPT1蛋白的双功能化合物及其制备方法和应用。
背景技术
肿瘤靶向药物治疗以“治疗精准,有效率高,且副反应少”的巨大优势促进了肿瘤治疗的发展，很快出现的肿瘤靶向药物耐药性是肿瘤研究所面临的一个主要问题。传统小分子激酶抑制剂通过占据靶点酶活口袋抑制酶活功能产生作用，由于高浓度、长时间的占据活性位点，很容易引起靶点对传统小分子抑制剂的耐药，进而造成疾病复发。
小分子诱导蛋白降解技术是近年来蓬勃兴起并备受制药工业界关注的研究领域。小分子诱导降解整个蛋白是反复迭代的过程，具有催化性，因其引发靶蛋白泛素化之后即可解离并进入下一催化循环。所以降解剂可在非常低的剂量下发挥作用，在靶蛋白突变或过表达情况下会表现出更好的耐受性。同时，这种作用机制不需要较高的结合力，即使靶点突变情况下仍然能够降解靶蛋白而克服耐药问题。降解剂作为靶向蛋白降解技术的一种，其在药物发展上的前景更为广阔，因为降解剂可以克服耐药、靶向难成药靶点、消除蛋白非支架功能等优势。降解剂诱导靶蛋白与E3泛素连接酶之间形成三元复合物并介导两个蛋白之间相互作用这一过程是相当重要的，因此在设计降解剂药物时，首先需要实现靶蛋白和E3泛素连接酶之间的有效相互作用，同时又要保证降解剂分子的高成药性，因此增加了降解剂设计的难度。
为解决抑制剂耐药以及降解剂难设计的问题，发明人提出可将二者结合起来，设计成既保留抑制剂活性又能以降解剂的方式发挥作用的双功能分子，克服临床抑制剂耐药问题，为恶性肿瘤的治疗提供新的方向。
雷帕霉素哺乳动物靶标(mammalian target of rapamycin，mTOR)通过形成两个重要的复合物，即mTOR复合物1(mTORC1)和复合物2(mTORC2)，对细胞生长、代谢、存活和免疫反应等几个基本生物学功能进行关键调控。mTOR信号在癌症中经常失调，被认为是有吸引力的癌症治疗靶点。制药公司已经做出巨大努力来开发有效的mTOR抑制剂，特别是抑制mTORC1和mTORC2的激酶抑制剂；然而，尚未有靶向mTOR的激酶抑制剂批准上市。临床患者对以mTOR为靶点的癌症治疗不敏感或无反应的主要原因是出现的mTOR抑制剂耐药，如PI3K/Akt和MEK/ERK生存信号通路的诱导激活代偿了雷帕霉素引起的mTOR抑制。此外，mTOR也参与神经退行性疾病、代谢类疾病和衰老的调控。
G1到S期的转换1基因(G1 to S phase transition 1，GSPT1)最初被鉴定为细胞周期中G1期向S期转变的必要基因，后来更名为真核肽链释放因子3a(eukaryoticreleasing factor 3a，eRF3a)。eRF3a作为肽链释放因子中的关键成员参与多种生物学过程，包括终止蛋白质的翻译，调节细胞内mRNA的降解，调节细胞生长周期与凋亡、参与细胞骨架形成等。GSPT1功能异常与多种常见恶性肿瘤，如乳腺癌、胃癌、结直肠癌等的发生及演进密切相关。但GSPT1作为一种GTP酶，由于细胞内的GTP浓度很高且GTP结合袋与GTP酶结合强烈，针对该靶点，开发有竞争力的化合物存在很大难度，因此GSPT1一直以来被看作不可成药靶点。
目前还未有化合物能同时抑制mTOR并且降解GSPT1，难以两者兼顾。开发能选择mTOR抑制融合GSPT1降解的化合物具有重要的研究意义。
发明内容
本专利发明人选择mTOR抑制融合GSPT1降解作为克服mTOR抑制剂临床耐药问题的解决策略。本公开的目的在于提供一种抑制mTor同时降解GSPT1蛋白的双功能化合物及其制备方法和应用，所述化合物作为mTor和GSPT1蛋白的双功能抑制剂，具有活性高，选择性好且毒副作用低等优点。
具体地，本公开涉及式(I)所代表的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、对映异构体和非对映异构体的混合物、外消旋体、内消旋体、外消旋体和内消旋体的混合物、药学上可接受的水合物、药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物：
Figure BDA0004023952350000011
其中，
G通过Z1与L相连，G具有以下结构：
Figure BDA0004023952350000021
X1、X2、X10、X11、X12各自独立地选自CH、C或N。
R1选自氢、氨基或
Figure BDA0004023952350000022
R6、R7、R8、R9各自独立地选自氢、C1-6烷基，所述C1-6烷基任选地被一个或多个卤素所取代。
优选地，R6、R7、R8、R9各自独立地选自氢、甲基、乙基，所述甲基、乙基任选地被一个或多个氟所取代。
优选地，R6、R7、R8、R9各自独立地选自氢、甲基、乙基、三氟甲基、-CF2CH3、-CF2CF3、-CH2CF3。
优选地，R1选自氢、氨基、
Figure BDA0004023952350000023
/>
R2不存在或者为
Figure BDA0004023952350000024
R3不存在或者选自氢、卤素、
Figure BDA0004023952350000025
其中，n7选自1至5的整数。
R10选自羟基、氨基、卤素、C1-5烷氧基、C1-5烷胺基，所述C1-5烷氧基、C1-5烷胺基任选地被一个或多个氘或卤素所取代。
优选地，R10选自羟基、氘代甲胺基、氘代甲氧基，三氟甲氧基，二氟甲氧基。
A1选自氢、任意取代的C5-18芳基、5至18元杂芳基、5至18元杂环基、或-NH-R5，其中R5选自任意取代的C5-18芳基、5至18元杂芳基。
优选地，A1选自氢、C5-18芳基、5至18元杂芳基、5至18元杂环基、或-NH-R5，其中R5选自C5-18芳基、5至18元杂芳基，所述C5-18芳基、5至18元杂芳基、5至18元杂环基任选地被氨基、羟基、硝基、氰基、甲基、三氟甲基所取代。
优选地，A1选自氢、苯基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、吡啶基、嘧啶基、苯并吡唑基、吗啉基、哌嗪基、-NH-苯基、-NH-吡啶基、-NH-嘧啶基，所述苯基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、吡啶基、嘧啶基、苯并吡唑基、吗啉基、哌嗪基任选地被氨基、羟基、硝基、氰基、甲基、三氟甲基所取代。
优选地，A1选自氢、苯基、
Figure BDA0004023952350000026
Figure BDA0004023952350000027
Figure BDA0004023952350000031
优选地，G选自：
Figure BDA0004023952350000032
优选地，G选自
Figure BDA0004023952350000033
优选地，G选自/>
Figure BDA0004023952350000034
Z1选自直接键、-CH2-、/>
Figure BDA0004023952350000035
Figure BDA0004023952350000036
/>
Figure BDA0004023952350000041
优选地，Z1选自直接键、-CH2-、
Figure BDA0004023952350000042
Figure BDA0004023952350000043
L具有以下的结构：
Figure BDA0004023952350000044
其中，n1和n3各自独立地选自0或1；n2和n4各自独立地选自0至4的整数；
M选自O或H；J选自-O-或-NH-；
n2个R11彼此相同或不同，n4个R12彼此相同或不同，R11和R12各自独立地选自-O-、氨基、-C(O)-、C1-6烷基、C2-6炔基、C3-9环烷基、C5-12芳基、4-12元杂环烷基、5-9元杂芳基，所述C3-9环烷基、C5-12芳基、4-12元杂环烷基、5-9元杂芳基任选地被卤素、羟基、氨基、C1-6烷基、-(CH2)n5OH或-(CH2)n5COOH所取代，其中，n5为选自0至3的整数。
优选地，R11和R12各自独立地选自-O-、氨基、-C(O)-、-CH2-、-CH2CH2-、二价的叔丁基、乙炔基、环戊基、环己基、双环[1.1.1]戊烷基、苯基、萘基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噻吩基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、二氮杂螺庚烷基、二氮杂螺壬烷基、二氧六环基，所述环戊基、环己基、双环[1.1.1]戊烷基、苯基、萘基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噻吩基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、二氮杂螺庚烷基、二氮杂螺壬烷基、二氧六环基任选地被卤素、羟基、氨基、甲基、乙基、-(CH2)n5OH或-(CH2)n5COOH所取代，其中，n5为选自0至3的整数。
优选地，L选自单键、
Figure BDA0004023952350000051
Figure BDA0004023952350000052
优选地，L选自单键
Figure BDA0004023952350000053
Y选自
Figure BDA0004023952350000054
其中，K1选自氢、卤素、C1-5烷氧基，K2选自O或H。
优选地，Y选自
Figure BDA0004023952350000055
本公开涉及一系列化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、对映异构体和非对映异构体的混合物、外消旋体、内消旋体、外消旋体和内消旋体的混合物、药学上可接受的水合物、药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物，其包含式(IIa)或式(IIb)所示的化合物：
Figure BDA0004023952350000056
Figure BDA0004023952350000061
其中，X1、X2、R1、R7、R7a、A1、Z1、L的定义和前文中的定义一致。
本公开涉及一种化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、对映异构体和非对映异构体的混合物、外消旋体、内消旋体、外消旋体和内消旋体的混合物、药学上可接受的水合物、药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物，其中，包含式(IIIa1)、式(IIIa2)或(IIIb1)所示的化合物：
Figure BDA0004023952350000062
其中，A1、n5、L的定义和前文中的定义一致。
本公开涉及下列化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、对映异构体和非对映异构体的混合物、外消旋体、内消旋体、外消旋体和内消旋体的混合物、药学上可接受的水合物、药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物：
Figure BDA0004023952350000071
/>
Figure BDA0004023952350000081
本公开还涉及一种中间体化合物，其具有式(IVa)的结构，
Figure BDA0004023952350000082
其中，L、Y的定义和前文中的一致，U不存在或者选自卤素、羟基或者氢。
本公开前述的任一种化合物，具有mTOR抑制作用或GSPT1降解作用。
本公开前述的任一种化合物，同时具有mTOR抑制作用和GSPT1降解作用。
本公开还涉及一种药物组合物，所述药物组合物在生理上可接受的介质中包含前文所述的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、对映异构体和非对映异构体的混合物、外消旋体、内消旋体、外消旋体和内消旋体的混合物、药学上可接受的水合物、药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物。
本公开还涉及前文所述的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、对映异构体和非对映异构体的混合物、外消旋体、内消旋体、外消旋体和内消旋体的混合物、药学上可接受的水合物、药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物、所述的药物组合物在制备mTOR抑制或GSPT1降解的药物中的应用。
本公开还涉及前文所述的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、对映异构体和非对映异构体的混合物、外消旋体、内消旋体、外消旋体和内消旋体的混合物、药学上可接受的水合物、药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物、所述的药物组合物在制备mTOR抑制和GSPT1降解的药物中的应用。
本公开还涉及一种抑制有需要的患者中的mTOR或GSPT1的方法，其包含向所述患者施用前文中所述的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、对映异构体和非对映异构体的混合物、外消旋体、内消旋体、外消旋体和内消旋体的混合物、药学上可接受的水合物、药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物、前文所述的药物组合物。
本公开还涉及一种同时抑制有需要的患者中的mTOR并降解GSPT1的方法，其包含向所述患者施用前文中所述的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、对映异构体和非对映异构体的混合物、外消旋体、内消旋体、外消旋体和内消旋体的混合物、药学上可接受的水合物、药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物、前文所述的药物组合物。
本公开涉及一种抑制生物样品中的mTOR或GSPT1蛋白的方法，其包含使所述生物样品与前文所述的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、对映异构体和非对映异构体的混合物、外消旋体、内消旋体、外消旋体和内消旋体的混合物、药学上可接受的水合物、药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物、前文所述的药物组合物接触。
本公开涉及一种同时抑制生物样品中的mTOR并降解GSPT1蛋白的方法，其包含使所述生物样品与前文所述的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、对映异构体和非对映异构体的混合物、外消旋体、内消旋体、外消旋体和内消旋体的混合物、药学上可接受的水合物、盐、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物、前文所述的药物组合物接触。
本公开涉及一种通过抑制mTOR信号通路和/或降解GSPT1蛋白治疗恶性疾病的方法，其包含向所述患者施用前文所述的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、对映异构体和非对映异构体的混合物、外消旋体、内消旋体、外消旋体和内消旋体的混合物、药学上可接受的水合物、药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物、所述药物组合物。
本公开涉及前文所述的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、对映异构体和非对映异构体的混合物、外消旋体、内消旋体、外消旋体和内消旋体的混合物、药学上可接受的水合物、药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物、所述药物组合物在制备用于治疗mTOR信号通路和GSPT1蛋白各自或同时异常介导的疾病的药物中的应用。
所述的恶性疾病包括但不限于肿瘤疾病、白血病。
本公开涉及通过抑制mTOR信号通路和/或降解GSPT1蛋白治疗的病症，包括但不限于肿瘤疾病、白血病。
优选地，所述肿瘤包括结直肠癌、胰腺癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、肺癌、前列腺癌、淋巴癌等恶性肿瘤；优选地，所述白血病包括慢性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞性白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病中的一种或多种。
在本公开化合物的结构中，X作为mTOR结合基团，L作为连接基团，Y作为泛素连接酶结合基团。
本公开发明人通过实验验证了上述化合物的mTOR抑制作用和GSPT1降解的相互独立性，即，本公开的双功能化合物同时融合了抑制剂技术和降解剂技术。
本公开化合物在多种实体瘤如乳腺癌、肺癌、结直肠癌、胰腺癌、肝癌、脑胶质瘤等细胞和血液瘤细胞中可以同时抑制mTOR并降解GSPT1，并且高效地抑制肿瘤细胞的增殖。
附图说明
图1为效果例1中化合物2对mTOR蛋白激酶抑制、对GSPT1蛋白的降解的Westernblot图。
图2为效果例1中化合物2、7对mTOR蛋白激酶抑制、对GSPT1蛋白的降解的Westernblot图。
图3为效果例1中化合物1、9对mTOR蛋白激酶抑制、对GSPT1蛋白的降解的Westernblot图。
图4为效果例1中化合物5对mTOR蛋白激酶抑制、对GSPT1蛋白的降解的Westernblot图。
图5为效果例1中的蛋白质组学检测结果。
具体实施方式
I.定义
除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。
本公开化合物可以是不对称的，例如，具有一个或多个立体异构体。除非另有说明，所有立体异构体都包括，如对映异构体和非对映异构体。本公开的含有不对称碳原子的化合物可以以光学活性纯的形式或外消旋形式被分离出来。光学活性纯的形式可以从外消旋混合物拆分，或通过使用手性原料或手性试剂合成。外消旋体、非对映异构体、对映异构体都包括在本公开的范围之内。
在本公开中，
Figure BDA0004023952350000091
是指取代基键合的位置。需要说明的是，本公开所记载的结构片段(例如L或Z1)，其记载不并不必然代表由左到右的顺序连接相应基团，例如当L为
Figure BDA0004023952350000092
时，其既可以表示/>
Figure BDA0004023952350000093
也可以表示/>
Figure BDA0004023952350000094
在本公开中，数字范围是指给定范围中的各个整数。例如，“C1-6”是指该基团可具有1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子或6个碳原子；“C1-3”是指该基团可具有1个碳原子、2个碳原子或3个碳原子。
术语“任选”或“任选地”是指随后描述的事件或情况可能发生或可能不发生，该描述包括发生所述事件或情况和不发生所述事件或情况。
术语“被取代的”或“取代”是指特定原子或基团上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，只要特定原子或基团的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。
当任何变量(例如Rn)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被一个至三个R所取代，则所述基团可以任选地至多被三个R所取代，并且每种情况下的R都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
术语“烷基”指饱和的脂族烃基团，包括直链的或支链的饱和烃基，所述烃基具有所示出的碳原子数。如术语“C1-6烷基”包括C1烷基、C2烷基、C3烷基、C4烷基、C5烷基、C6烷基，实例包括，但不限于，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、正己基、2-己基、3-己基等。其可以是二价的，例如亚甲基、亚乙基。
术语“烷氧基”可以为直链、支化或环状的。其具体实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基(isopropoxy)、异丙基氧基(i-propyloxy)、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、新戊氧基、异戊氧基等，但不限于此。
在本公开中，术语“氘代”是指化合物的一个或多个氢原子被氘原子取代，氘代可以是一取代、二取代、多取代或全取代；术语“氘代化合物”是指含有氘原子的化合物。
在本公开中，卤素基团的实例可以包括氟、氯、溴或碘。
在本公开中，术语“环烷基”是指单环饱和烃体系，无杂原子和双键。例如，术语“C3-9环烷基”的实例包括，但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基。
在本公开中，术语“芳基”是指具有共轭的π电子体系的全碳单环或稠合多环的芳香环基团，其通过从母体芳香环体系的单一碳原子上除去一个氢原子而得到。其包括包含与饱和、部分不饱和的环，或芳香碳环稠合的芳环的双环基团。其具体实例包括苯基或萘基，但不限于此。
在本公开中，术语“杂环烷基”是指具有环碳原子和1至2个环杂原子的5-12元饱和非芳香体系。杂环基的具体实例包括哌啶基或四氢吡咯基，但不限于此。
在本公开中，术语“杂芳基”指包含至少一个独立地选自氮、氧和硫杂原子的一价芳基，杂芳基可为单环，也可以为多环体系，例如二环，其中两个或两个以上的环以并环、桥环或螺环形式存在，其中至少一个环含有一个或多个杂原子。杂芳基的具体实例包括吡啶基、噻吩基、咪唑基、嘧啶基、吡啶基、呋喃基、吡嗪基、噻唑基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、咪唑并吡啶基、苯并呋喃基、哒嗪基、异吲哚基、吡啶酮基，但不限于此。
术语“杂环”是指具有环碳原子和1至2个环杂原子的5-12元饱和非芳香体系，其中杂原子独立地选自氮、硫或氧原子。在含有一或多个氮原子的杂环基团中，连接点可为碳或氮原子，只要原子价容许。杂环可为单环或多环体系，例如二环，其中两个或两个以上的环以并环、桥环或螺环形式存在，其中至少一个环含有一个或多个杂原子。在螺环杂环基中，两个不同的环共有一个原子，螺环杂环基的一个实例是氮杂螺戊烷基，但不限于此。
术语“氮氧化物”是指当化合物含几个胺官能团时，可将1个或大于1个的氮原子氧化形成N-氧化物。N-氧化物的特殊实例是叔胺的N-氧化物或含氮杂环氮原子的N-氧化物。可用氧化剂，例如过氧化氢或过酸(例如过氧羧酸)处理相应的胺形成N-氧化物。
药物或药物组合物
术语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断的范围内适合用于与人类和动物的组织接触而没有，与合理利益/风险比相称的，过度毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
术语“药学上可接受的盐”是指保留了特定化合物的游离酸和碱的生物学效力而没有生物学不良作用的盐。例如酸(包括有机酸和无机酸)加成盐或碱加成盐(包括有机碱和无机碱)。
本公开的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。
本公开的药物或药物组合物可以经口地、局部地、肠胃外地或粘膜地(例如，含服地、通过吸入或直肠地)以包含常规的非-毒性药学可接受的载体的剂量单位配制剂施用。
对于以片剂或胶囊形式的口服给药，活性药物组分可以与非-毒性的、药学可接受的辅料如粘结剂(例如，预胶化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填料(例如，乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇、山梨糖醇和其它还原性和非-还原性糖类、微晶纤维素、硫酸钙或磷酸氢钙)；润滑剂(例如，硬脂酸镁、滑石粉或硅土、硬脂酸、硬脂基富马酸酯钠、甘油二十二烷酸酯、硬脂酸钙等)；崩解剂(例如，马铃薯淀粉或羟乙酸淀粉钠)；或润湿剂(例如，月桂基硫酸钠)、着色剂和调味剂、明胶、甜味剂、天然和合成的胶(如阿拉伯胶、黄蓍胶或藻朊酸盐)、缓冲盐、羧甲纤维素、聚乙二醇、蜡、等。对于以液体形式的口服给药，所述药物组分可以与非-毒性、药学可接受的惰性载体(例如，乙醇、甘油、水)、防沉降剂(例如，山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化的可食用脂肪)、乳化剂(例如，卵磷脂或阿拉伯胶)、非-水性载体(例如，扁桃油、油酯类、乙醇或经分馏的植物油)、保藏剂(例如，p-羟基苯甲酸甲酯或p-羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)等组合。还可以加入稳定剂如抗氧化剂(BHA、BHT、桔酸丙酯、抗坏血酸钠、柠檬酸)以稳定所述剂型。
包含作为活性化合物的片剂可以通过本领域熟知的方法包衣。包含作为活性化合物的式I化合物的本公开的所述组合物还可以引入小珠、微球或微胶囊，例如由聚乙醇酸/乳酸(PGLA)构建的。用于口服给药的液体的制剂可以采取例如溶液，糖浆剂，乳液或混悬液的形式或者它们可以呈现为在使用前用水或其它适宜的辅料重构的干产品。用于口服给药的制剂可以适宜地配制以使活性化合物受控或延迟地释放。
本公开的药物或药物组合物可以经肠胃外递送，即，通过静脉内(i.v.)、脑室内(i.c.v.)、皮下(s.c.)、腹膜内(i.p.)、肌内(i.m.)、皮下(s.d.)或皮内(i.d.)施用，通过直接注射，经例如快速浓注或连续输液。用于注射的配制剂可以单位剂型呈现，例如在具有添加的保藏剂的安瓿瓶或多-剂量容器中。所述组合物可以采用赋形剂(excipient)的形状，在油或水性载体中的混悬液、溶液或乳液的形式，并可以包含配制试剂如防沉降剂、稳定剂和/或分散剂。备选地，所述活性成分可以以粉末形式在使用前用适宜的载体(例如无菌无热原水)重构。
本公开的药物或药物组合物还可以配制用于直肠给药，例如呈栓剂或保留灌肠(例如，包含常规栓剂基质如可可油或其它甘油酯)。
术语“治疗”包括抑制、缓解、预防或消除与所治疗的疾病、病症或失调相关的一种或多种症状或副作用。术语“有效量”或“治疗有效量”是指足以治疗、抑制或减轻被治疗的疾病状态的一种或多种症状或以其它方式提供期望的药理学和/或生理学作用的剂量。精确的剂量将根据多种因素而变化，如受试者依赖的变量(例如，年龄、免疫系统健康等)、疾病或病，以及所施用的治疗。有效量的效果可以相对于对照。这些对照在本领域中是已知的并且在本文中讨论，并且可以是例如在药物或药物组合施用之前或没有施用时的受试者的状况，或在药物组合的情况下，可以将组合效果与仅施用一种药物的效果进行比较。
术语“药物组合物”意指包含本公开所述化合物或其药学上可接受的盐，以及依施用方式和剂型的性质而定的至少一种选自以下药学上可接受的成分的组合物，包括但不限于：载体、稀释剂、佐剂、赋形剂、防腐剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、悬浮剂、甜味剂、矫味剂、香味剂、抗菌剂、抗真菌剂、润滑剂、分散剂、温敏材料、温度调节剂、黏附剂、稳定剂、助悬剂等。
II.实施例
下面参照实施例进一步阐释本公开，对本公开的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本公开限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据本申请说明书的教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本公开的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本公开的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
Figure BDA0004023952350000111
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Figure BDA0004023952350000121
制备例1：中间体1的制备：
Figure BDA0004023952350000131
第一步：中间体1-1
将叔丁基4-甲酰基环己烷-1-羧酸酯(311mg，1.46mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，再加入醋酸(0.9mL)，5-氨基-2-(2,6-二羰基哌啶-3-基)异二氢吲哚-1,3-二酮(200mg，0.732mol)，并在室温下将混合物搅拌1小时。冰浴至0℃，加入氰基硼氢化钠(931mg，4.39mmol)，然后在室温下将混合物搅拌16小时。用水(20mL)稀释混合物，并用乙酸乙酯(20mL*3)萃取。用饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤合并的有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空浓缩。剩余物通过硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝0-100％)纯化，得到300mg中间体1-1，黄色油状物，收率82.9％。
第二步：中间体1
将中间体1-1(300mg，0.639mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(728mg，6.39mmol)。将混合物在25℃搅拌过夜。真空浓缩，残余物用反相制备液相色谱分离纯化(色谱柱型号：Gemini-C18 150x21.2mm,5μm，流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：20％-50％)，得到101.8mg中间体1，白色固体，收率约38.4％。LCMS(HCOOH),[M+H]+＝413.9。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.06(s,1H),11.06(s,1H),7.55(dd,J＝8.4,1.2Hz,1H),7.16(dd,J＝9.2,5.4Hz,1H),6.95(d,J＝1.6Hz,1H),6.86(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),5.03(dd,J＝12.8,5.4Hz,1H),3.04(dt,J＝12.1,6.2Hz,2H),2.87(ddd,J＝17.4,14.2,5.4Hz,1H),2.57(dd,J＝17.0,3.2Hz,1H),2.48–2.45(m,0.6H),2.15(tt,J＝12.1,3.4Hz,0.4H),2.02–1.82(m,4H),1.66–1.44(m,3H),1.32–1.21(m,2H),1.08–0.94(m,1H).
制备例2:中间体2的制备
Figure BDA0004023952350000132
将2-(2,6-二羰基哌啶-3-基)-5-氟异二氢吲哚-1,3-二酮(3.0g,10.86mmol)、反式-4-(氨基甲基)环己酸(3.4g,21.62mmol)溶于DMSO(90mL)中，加入DIEA(6.9g,53.39mmol)，氮气保护下加热至95℃反应3～4小时，冰水浴降温至室温，加入二氯甲烷(100mL)，加入2N盐酸调节pH至3～4，有机相用饱和食盐水(70mL)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空浓缩。残余物用硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5～0:1)，得1.31g黄色固体中间体2，收率29.2％。
LCMS(HCOOH),[M+H]+＝413.9。
制备例3:中间体3的制备
Figure BDA0004023952350000133
第一步：中间体3-1
将2-甲基-4-硝基苯甲酸甲酯(5.00g,0.0256mol)，N-溴琥珀酰亚胺(4.78g,0.0268mol)，偶氮二异丁腈(0.250g,0.00153mol)，四氯化碳(30mL)的混合溶液在70℃下搅拌16小时。将反应液过滤，得到的滤液旋干并由快速色谱法分离纯化(乙酸乙酯～石油醚＝0-5％)，得到6.50g淡黄色固体状产物中间体3-1，收率74％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(d,J＝2.2Hz,1H),8.22-8.19(m,1H),8.12(d,J＝8.6Hz,1H),4.98(s,2H),4.01(s,3H)。
第二步：中间体3-2
中间体3-1(6.50g,0.0237mol)，3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(5.82g,0.0355mol)，N,N-二异丙基乙胺(9.19g,0.0711mol)，乙腈(40mL)的混合物在80℃下搅拌16小时。将反应液过滤，滤饼经乙腈洗涤得到4.00g黑色固体状中间体3-2，收率50％。LC-MS(HCOOH),[M+H]+＝290.9。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.06(s,1H),8.54(d,J＝1.6Hz,1H),8.36(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),7.98(d,J＝8.4Hz,1H),5.17(dd,J＝13.2,5.0Hz,1H),4.61(d,J＝18.2Hz,2H),4.49(d,J＝18.2Hz,1H),2.97-2.86(m,1H),2.68-2.57(m,1H),2.43(dd,J＝13.0,4.4Hz,1H),2.06-2.03(m,1H)。
第三步：中间体3-3
中间体3-2(4.00g,13.8mmol)，钯碳(0.730g,6.90mmol)，甲醇(20mL)的混合物在氢气氛围下常温搅拌16小时。将反应液过滤，滤饼经甲醇洗涤得到1.60g蓝黑色固体状中间体3-3，收率36％。LC-MS(HCOOH),[M+H]+＝259.9。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.90(s,1H),7.31(d,J＝8.8Hz,1H),6.59-6.57(m,2H),5.79(s,2H),4.97(dd,J＝13.2,5.0Hz,1H),4.21(d,J＝16.6Hz,1H),4.07(d,J＝16.6Hz,1H),2.9-2.81(m,1H),2.59-2.49(m,1H),2.35-2.23(m,1H),1.93-1.86(m,1H)。
第四步：中间体3-4
将4-甲酰基环己烷-1-羧酸叔丁酯(328mg，1.543mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，再加入醋酸(0.62mL)，中间体3-3(200mg，0.771mol)，并在室温下将混合物搅拌1小时。冰浴至0℃，加入三乙酰氧基硼氢化钠(981mg，4.63mmol)，然后在室温下将混合物搅拌16小时。用水(20mL)稀释混合物，并用乙酸乙酯(20mL*3)萃取。用饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤合并的有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液真空浓缩。剩余物通过硅胶柱层析(乙酸乙酯:石油醚＝0-100％)纯化，得到220mg无色油状中间体3-4，收率59.5％。LCMS(HCOOH),[M+H]+＝456.0。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.93(s,1H),7.40–7.33(m,1H),6.69–6.58(m,2H),6.42(t,J＝5.5Hz,1H),5.01(dd,J＝13.2,5.0Hz,1H),4.26(d,J＝16.6Hz,1H),4.12(d,J＝16.6Hz,1H),2.98–2.84(m,3H),2.63–2.54(m,2H),2.45–2.05(m,1H),1.96–1.81(m,4H),1.69–1.48(m,3H),1.41–1.38(m,9H),1.29–1.21(m,2H),1.03–0.90(m,1H)。
第五步：中间体3
将中间体3-4(220mg，0.483mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入三氟乙酸(551mg，4.83mmol)。将混合物在25℃搅拌过夜。真空浓缩，残余物用制备液相色谱法分离(色谱柱型号：Gemini-C18 150x21.2mm,5μm,流动相：乙腈/水，0.1％FA，梯度：20％-50％)，得到56.8mg白色固体状中间体5，收率约29.5％。LCMS(HCOOH),[M+H]+＝400.0。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.05(s,1H),10.90(d,J＝8.6Hz,1H),7.34(t,J＝5.8Hz,1H),6.68–6.50(m,2H),6.38(q,J＝5.4Hz,1H),4.97(dd,J＝13.2,5.0Hz,1H),4.22(d,J＝16.8Hz,1H),4.09(d,J＝16.8Hz,1H),2.96–2.80(m,3H),2.65–2.50(m,2H),2.35–2.06(m,1H),1.87(dddd,J＝13.8,12.8,4.2,1.8Hz,4H),1.71–1.37(m,3H),1.30–1.17(m,2H),1.02–0.87(m,1H).
制备例4:中间体4的制备
Figure BDA0004023952350000141
第一步：中间体4-1
将5-溴苯[D]噁唑-2-胺(500mg，2.35mmol)以及联硼酸频那醇酯(715mg，2.82mmol)溶解于1，4-二氧六环，随后加入醋酸钾(690mg，7.05mmol)，氩气保护。反应液回流5小时，待反应结束并冷至室温后，用硅藻土过滤反应液，减压浓缩，薄层色谱柱层析分离纯化浓缩液(二氯甲烷：甲醇＝30：1)，得到中间体4-1。
第二步：中间体4-2
将中间体4-氨基吡唑并[3,4-d]嘧啶(1.35g，0.01mol)溶解于DMF中，随后加入N-溴代丁二酰亚胺(NBS)(1.87g，0.0105mol)。反应液于60度条件下搅拌3小时。反应结束后，冷却至室温，向反应液中加入乙醚，产物沉淀析出，抽滤反应液即得目标中间体4-2，无需纯化直接用于下一步反应。
第三步：中间体4-3
将中间体4-2(1.8g，8.4mmol)溶解于DMF中，随后加入4-溴哌啶-1-甲酸叔丁酯(2.83g，12.6mmol)和碳酸钾(3.5g，16.8mmol)，反应液于80℃条件下反应12小时，反应结束后，加入氯化钠水溶液，并用乙酸乙酯萃取，浓缩萃取液，薄层色谱柱层析分离纯化浓缩液(二氯甲烷：甲醇＝60：1)，即得中间体4-3。
第四步：中间体4
将中间体4-3(210mg，0.6mmol)和中间体4-1(200mg，0.78mmol)溶解于1，4-二氧六环中，随后加入碳酸钠(324mg，3.0mmol)和水，并于搅拌下加入四三苯基膦钯(55mg，0.048mmol)，并用氩气保护。反应液于110℃下反应3小时，反应结束后过滤反应液，减压浓缩反应液，并用薄层色谱柱层析分离纯化浓缩液得到目标化合物。随后加入三氟乙酸/二氯甲烷(1/9)的混合溶剂，室温下搅拌1h，反应结束后浓缩反应液得到中间体4，无需纯化直接进行下一步反应。LCMS(HCOOH),[M+H]+＝451.30。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.23(s,1H),7.54(s,2H),7.46(d,J＝7.2Hz,1H),7.40(s,1H),7.23(d,J＝8.0Hz,1H),4.89(s,1H),4.10(s,2H),3.17(s,1H),2.99(s,2H),2.02(d,J＝10.5Hz,2H),1.94(s,2H).
制备例5:中间体5的制备
Figure BDA0004023952350000151
第一步：中间体5-1
将4,6-二氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(2080mg，11.0mmol)，(S)-3-甲基吗啉(1100mg，11.0mmol)，三乙胺(2230mg，22.0mmol)溶于二氯甲烷溶液(30mL)中，在冰浴下反应半个小时后，将该混合物在室温下反应16小时。待反应完成后，过滤反应液，用水洗，将滤液旋干，最终得到2400mg黄色固体状中间体5-1，收率为85.7％。LC-MS(HCOOH),[M+H]+＝254.1.
第二步：中间体5-2
将中间体5-1(1500mg，5.90mmol)，叔丁基4-((甲磺酰)氧代)哌啶-1-羧酸酯(1651.7mg，5.90mmol)，碳酸钾(1634.4mg，11.8mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺溶液(15mL)中。在氮气保护下，将混合溶液在80℃下反应16小时。待反应完成后，向混合液中加入适量水，用乙酸乙酯溶液萃取，得到的有机相旋干，利用柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝5：1)分离纯化，最终得到786mg黄色透明油状中间体5-2，收率为28.9％。LC-MS(HCOOH),[M+H]+＝436.
第三步：中间体5-3
将中间体5-2(436mg，1.00mmol)，4-氟苯硼酸(279.3mg，2.00mmol)，碳酸钾(275.8mg，2.00mmol)溶于1,4-二氧六环(12mL))中。在氮气保护下，加入[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(121.3mg，0.150mmol)，将混合溶液在110℃下反应6小时。待反应完成后，将反应液旋干，利用柱层析(二氯甲烷：甲醇＝6：1)分离纯化，最终得到220mg淡黄色固体状中间体5-3，收率为42.1％。LC-MS(HCOOH),[M+H]+＝497.1.
第四步：中间体5
向叔丁基中间体5-3(220mg，0.400mmol)中加入氯化氢1，4-二氧六环溶液(1.1mL，4M，4.40mmol)，二氯甲烷溶液(5mL)，室温反应16小时。待反应完成后，将反应液旋干，最终得到164.7mg白色固体状中间体5，收率为85.5％。LC-MS(HCOOH),[M+H]+＝397.1。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.47(dd,J＝8.8,5.6Hz,2H),8.24(s,1H),7.20(t,J＝8.6Hz,2H),5.32–5.19(m,1H),4.62(s,1H),4.09(d,J＝7.8Hz,1H),3.89–3.78(m,2H),3.70–3.57(m,4H),3.34–3.31(m,3H),2.54–2.44(m,2H),2.32–2.24(m,2H),1.45(d,J＝6.8Hz,3H).
制备例6:中间体6的制备
Figure BDA0004023952350000152
第一步：中间体6-1
将中间体6-1(4.5g,17.74mmol)，4-氟苯硼酸(2.98g,21.29mmol),[1,1-Pd(dppf)Cl2CH2Cl2(4.35g,5.32mmol)和碳酸钠(3.76g,35.48mmol)溶于1,4-二氧六环(40mL)和水(20mL)的混合溶剂中，在氮气保护下，100℃搅拌12h。LCMS检测原料反应完毕。反应液旋干，粗品通过prep-HPLC分离得到1.64g黄色油状中间体6-1，收率29.51％。LCMS(HCOOH):m/z＝314.2(M+H).
第二步：中间体6-2
将中间体6-1(1g,3.19mmol)溶于DMF(10mL)，加入叔-丁基3-碘吖丁啶-1-甲酸基酯(1.99g,7.02mmol)和碳酸钾(882.18mg,6.38mmol)，80℃搅拌反应12h。LCMS检测原料反应完毕。反应液加水(10mL)稀释，乙酸乙酯萃取(3x10mL)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残余物用硅胶柱分离纯化(乙酸乙酯:石油醚＝0～100％)，得到1.18g白色固体中间体6-2，收率78.91％。LCMS(HCOOH):m/z＝469.2(M+H).
第三步：中间体6-3
将中间体6-2(1.18g,2.52mmol)溶于DCM(10mL)，加入TFA(3.08g,27.01mmol,2mL)。反应液30℃搅拌24h。LCMS检测原料反应完毕。反应液旋干得到1.22g无色油状中间体6-3(TFA盐)。LCMS(HCOOH):m/z＝369.1(M+H).
第四步：中间体6-4
将中间体6-3(610mg,1.26mmol,TFA盐)溶于DCE(5mL)中，加入TEA(127.95mg,1.26mmol,175.99uL)，20℃搅拌0.5小时。加入叔-丁基3-氧亚基吖丁啶-1-甲酸基酯(259.75mg,1.52mmol)和HOAc(75.93mg,1.26mmol),20℃搅拌0.5小时后再加入NaBH(OAc)3(401.98mg,1.90mmol)，反应液30℃搅拌11小时。LCMS检测原料反应完毕。反应液旋干，粗品通过prep-HPLC(column:Phenomenex luna C18 250*50mm*10um；mobile phase:[water(TFA)-ACN]；B％:30％-70％,10min)分离得到570mg白色固体中间体6-4，收率86.10％。LCMS(HCOOH):m/z＝524.2(M+H).
第五步：中间体6
将中间体6-4(570mg,1.09mmol)溶于DCE(10mL)中，加入TFA(3.08g,27.01mmol,2mL)。反应液30℃搅拌2小时。LCMS检测原料反应完毕。反应液旋干得到570mg白色固体中间体6，收率97.41％。LCMS(HCOOH):m/z＝424.1(M+H)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ9.0–9.2(m,2H),8.4–8.5(m,3H),7.33(t,2H,J＝8.8Hz),5.89(quin,1H,J＝7.3Hz),4.3-5.0(m,7H),4.22(br s,4H),4.05(br d,1H,J＝8.0Hz),3.8–3.9(m,1H),3.7–3.8(m,1H),3.4–3.7(m,2H),1.34(br d,3H,J＝6.3Hz)
制备例7:中间体7的制备
Figure BDA0004023952350000161
第一步：中间体7-1
将中间体6-3(610mg,1.26mmol)溶于DCE(5mL)中，加入三乙胺(127.95mg,1.26mmol)。反应液20℃搅拌0.5小时。加入N-叔丁氧羰基-4-氧哌啶(302.32mg,1.52mmol)和HOAc(75.93mg,1.26mmol)，20℃搅拌0.5小时，再加入NaBH(OAc)3(401.98mg,1.90mmol)，反应液30℃搅拌11小时。TLC检测原料反应完毕。反应液旋干，残余物通过prep-HPLC分离得到450mg白色固体中间体7-1，收率64.51％。
第二步：中间体7
将中间体7-1(450mg,815.73umol)溶于DCE(10mL)中，加入TFA(3.47g,30.39mmol)。反应液30℃搅拌12小时。LCMS检测原料反应完毕。反应液旋干得到432.6mg白色固体中间体7，收率93.77％。LCMS(HCOOH):m/z＝452.1(M+H)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.8–8.9(m,1H),8.5–8.7(m,1H),8.49(br dd,3H,J＝5.8,8.6Hz),7.34(t,2H,J＝8.8Hz),5.8–6.0(m,1H),4.7–4.8(m,2H),4.66(br d,2H,J＝7.0Hz),4.05(br d,1H,J＝8.0Hz),3.7–3.9(m,2H),3.6–3.7(m,2H),3.43(br s,3H),2.94(br d,2H,J＝9.5Hz),2.5–2.6(m,2H),2.2–2.3(m,2H),1.6–1.7(m,2H),1.34(br d,3H,J＝6.3Hz).
制备例8:中间体8的制备
Figure BDA0004023952350000162
第一步：中间体8-1
将中间体5(600mg,1.18mmol，TFA盐)溶于DCE(2mL)中，加入三乙胺(118.93mg,1.18mmol)，20℃搅拌0.5小时。加入N-叔丁氧羰基-3-氮杂环丁酮(301.82mg,1.76mmol)和HOAc(70.58mg,1.18mmol),反应液30℃搅拌0.5小时。加入NaBH(OAc)3(373.66mg,1.76mmol)，30℃搅拌11小时。TLC检测原料反应完毕。反应液旋干，残余物通过prep-HPLC分离得到375mg白色固体中间体8-1，收率57.84％。LCMS(HCOOH):m/z＝552.4(M+H).
第二步：中间体8
将中间体8-1(375mg,679.77umol)溶于DCM(5mL)，加入TFA(1.54g,13.51mmol)。反应液30℃搅拌2小时，LCMS检测原料反应完毕。反应液旋干得到306.6mg褐色油状中间体8。LCMS(HCOOH):m/z＝452.3(M+H)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.17–9.47(m,2H),8.43–8.52(m,2H),8.33(s,1H),7.32(t,J＝8.88Hz,2H),5.05–5.19(m,1H),4.37(br s,2H),4.20(br d,J＝7.88Hz,3H),4.03(br d,J＝8.13Hz,1H),3.68–3.86(m,2H)，3.39-3.64(m，4H)，3.05-3.26(m，2H)，2.49-2.52(m，2H)，2.31-2.46(m，2H)，2.20(br d，J＝13.01Hz，2H)，1.34(br d，J＝6.50Hz，3H).
制备例9：中间体9的制备
Figure BDA0004023952350000171
第一步：中间体9-1
将中间体4-3(4.00g，9.01mmol)溶于二氧六环(40ml)，加入亚硝酸叔丁酯(890mg，9.01mmol)，然后升温至100℃，并搅拌16h，LCMS监测反应完毕。反应液浓缩后加水(50ml)，然后用乙酸乙酯(80ml x 2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，残余物用硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝4∶1)得到1.20g中间体9-1，收率31.0％。LCMS(HCOOH)：m/z＝381.9(M+H).
第二步：中间体9-2
在0℃下，将中间体9-1(600mg，1.40mmol)、中间体4-1(434mg，1.67mmol)、四(三苯基磷)钯(323mg，0.280mmol)和碳酸钾(580mg，4.20mmol)溶于甲苯/乙醇/水(18mL，5∶5∶2)中，加热至90℃搅拌1h，LCMS监测反应基本完全。反应液浓缩后加水(30ml)稀释，然后用乙酸乙酯(50ml x 2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩。残余物用prep-HPLC分离得到35mg中间体9-2，收率5.74％。LCMS(HCOOH)：m/z＝436.1(M+H).
第三步：中间体9
将中间体9-2(35mg，0.08mmol)溶于二氯甲烷(0.5m1)，滴加盐酸的二氧六环溶液(0.1m1)，搅拌1h，LCMS监测反应完全，反应液浓缩，残余物用prep-HPLC分离，得到17mg白色固体中间体9，收率63.4％。LCMS(HCOOH)：m/z＝336.1(M+H)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.71(s，1H)，9.15-0.19(m，1H)，9.10(s，1H)，8.83(br，1H)，8.12(br，2H)，7.89-7.90(d，J＝1.6Hz，1H)，7.79-7.809(dd，J＝8.0，2.0Hz，1H)，7.56-7.58(d，J＝8.4Hz，1H)，5.22-5.27(m，1H)，3.34-3，49(m，2H)，3.20-3.28(m，2H)，2.43-2.47(m，2H)，2.21-2.23(m，2H).
制备例10：中间体10的制备
Figure BDA0004023952350000172
第一步：中间体10-1
将中间体5-2(500mg，1.14mmol)，对硝基苯硼酸(210.1mg，1.26mmol)，Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(93.4mg，114.43umol)，碳酸钠(242.6mg，2.29mmol)加入1，4-二氧六环(10mL)和水(1mL)的混合溶剂中，氮气保护下100℃搅拌12小时，LCMS检测测反应完全。反应液加入水(20mL)中，二氯甲烷萃取(10mL*3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残余物用硅胶柱分离纯化(乙酸乙酯：石油醚＝0～50％)，得到0.48g黄色油状中间体10-1，收率80.11％。LCMS(HCOOH)：m/z＝468.3(M+H-56)。
第二步：中间体10
将中间体10-1(0.48g，916.76umol)溶于二氯甲烷(10mL)中，缓慢加入三氟乙酸(1.05g，9.17mmol，2mL)，20℃下搅拌12小时，LCMS监测反应完全。反应液减压浓缩，残余物用硅胶柱分离纯化(乙酸乙酯：石油醚＝0～50％)得到183.6mg白色固体中间体10，收率46.82％。LCMS(NH4HCO3)：m/z＝424.2(M+H)。1HNMR(400MHz，Methanol-d4)δ8.71(d，J＝8.88Hz，2H)，8.31(d，J＝8.88Hz，2H)，8.24(s，1H)，5.23-5.35(m，1H)，4.12(br d，J＝7.88Hz，1H)，3.78-3.97(m，2H)，3.52-3.75(m，4H)，3.32-3.43(m，3H)，3.31(br s，1H)，2.46-2.59(m，2H)，2.31(br dd，J＝14.01，3.13Hz，2H)，1.46(d，J＝6.88Hz，3H).
实施例1：2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-5-(((反式-4-(4-(6-(4-氟苯基)-4-((S)-3-甲基吗啉代)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羰基)环己基)甲基)氨基)异二氢吲哚-1，3-二酮(化合物1)的制备
Figure BDA0004023952350000181
将中间体5(1equiv)，中间体2(1.05 equiv)，DIPEA(5 equiv)，HATU(20mg，0.0508mmol，1.3 equiv.)溶于DMF中，反应混合物在室温条件下搅拌4小时。向反应后体系中加水并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经硅胶柱层析(DCM：MeOH＝20：1)进一步纯化得到化合物1.1H NMR(400MHz，Methano1-d4)δ8.46-8.41(m，2H)，7.92(s，1H)，7.56(d，J＝8.3Hz，1H)，7.11(d，J＝8.7Hz，2H)，6.94(d，J＝2.2Hz，1H)，6.77-6.73(m，1H)，5.14-5.05(m，1H)，4.93-4.88(m，1H)，4.78-4.71(m，1H)，3.91-3.79(m，3H)，3.71-3.65(m，1H)，3.06(d，J＝6.7Hz，2H)，2.87-2.72(m，5H)，2.62-2.54(m，1H)，2.35-2.09(m，6H)，1.99-1.82(m，6H)，1.69-1.54(m，4H)，1.46(d，J＝6.8Hz，3H)，1.11-1.05(m，2H).LCMS[M+H]+＝792.5.
实施例2：5-(((4-(4-氨基-3-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羰基)环己基)甲基)氨基)-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(化合物2)的制备
Figure BDA0004023952350000182
/>
将中间体4(1 equiv)，中间体1(1.05 equiv)，DIPEA(5 equiv)，HATU(20mg，0.0508mmol，1.3 equiv)溶于DMF中，反应混合物在室温条件下搅拌4小时。向反应后体系中加水并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经硅胶柱层析(DCM：MeOH＝20∶1)进一步纯化得到以上化合物2。1H NMR(400MHz，DMSO)δ11.06(s，1H)，8.24(s，1H)，7.55(d，J＝6.1Hz，3H)，7.46(d，J＝8.1Hz，1H)，7.40(s，1H)，7.23(d，J＝8.1Hz，1H)，7.17(s，1H)，6.96(s，1H)，6.86(d，J＝8.5Hz，1H)，5.08-4.91(m，2H)，4.54(d，J＝12.6Hz，1H)，4.11(d，J＝13.7Hz，1H)，3.68-3.52(m，1H)，3.13(dd，J＝7.2，4.2Hz，1H)，3.03(s，2H)，2.93-2.74(m，3H)，2.01(m，3H)，1.86(d，J＝11.8Hz，2H)，1.74(d，J＝10.3Hz，2H)，1.57(m，2H)，1.38(dd，J＝24.2，11.4Hz，3H)，1.17-1.00(m，2H).LCMS[M+H]+＝746.50.
实施例3：3-(5-(((4-(4-(4-氨基-3-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羰基)环己基)甲基)氨基)-1-羰基异二氢吲哚-2-基)哌啶-2，6-二酮(化合物3)的制备
Figure BDA0004023952350000183
将中间体4(1 equiv.)，中间体3(1.05 equiv.)，DIPEA(5 equiv.)，HATU(20mg，0.0508mmol，1.3 equiv.)溶于DMF中，反应混合物在室温条件下搅拌4小时。向反应后体系中加水并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经硅胶柱层析(DCM：MeOH＝20∶1)进一步纯化得到以上化合物3。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.90(s，1H)，8.25(s，1H)，7.53(s，2H)，7.46(d，J＝8.1Hz，1H)，7.40(s，1H)，7.36(d，J＝8.3Hz，1H)，7.23(d，J＝8.1Hz，1H)，6.69-6.60(m，2H)，6.41(s，1H)，5.00(dd，J＝13.0，4.7Hz，2H)，4.55(m，1H)，4.26(d，J＝16.1Hz，1H)，4.13(d，J＝16.5Hz，1H)，3.60(m，1H)，3.15(d，J＝13.2Hz，1H)，3.07(m，1H)，2.87(m，3H)，2.61(dd，J＝30.7，15.0Hz，2H)，2.33(d，J＝8.1Hz，1H)，2.14-1.82(m，2H)，1.73(m，1H)，1.60(m，3H)，1.51-1.31(m，2H)，1.26(dd，J＝13.7，6.2Hz，4H)，1.15-0.99(m，2H).LCMS[M+H]+＝732.62.
实施例4：2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-5-(((反式-4-(3-(3-(6-(4-氟苯基)-4-((S)-3-甲基吗啉代)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)氮杂环丁烷-1-羰基-环己基)甲基)氨基)异二氢吲哚-1，3-二酮(化合物4)的制备
Figure BDA0004023952350000191
将中间体6(1 equiv.)，中间体2(1.05 equiv.)，DIPEA(5 equiv.)，HATU(20mg，0.0508mmol，1.3 equiv.)溶于DMF中，反应混合物在室温条件下搅拌4小时。向反应后体系中加水并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经硅胶柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20∶1)进一步纯化得到化合物4。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.46(dd，J＝8.6，5.7Hz，2H)，7.99(s，1H)，7.61(d，J＝8.2Hz，1H)，7.15(t，J＝8.5Hz，2H)，6.97(s，1H)，6.74(dd，J＝8.6，2.1Hz，1H)，4.92(dd，J＝12.1，5.3Hz，1H)，4.60(s，1H)，4.14(d，J＝9.6Hz，2H)，3.94-3.80(m，2H)，3.75-3.63(m，2H)，3.09(t，J＝5.9Hz，2H)，2.93-2.65(m，3H)，2.21-2.07(m，2H)，2.00-1.76(m，4H)，1.73-1.51(m，8H)，1.48(d，J＝6.8Hz，3H)，1.29(d，J＝3.6Hz，1H)，1.14-0.96(m，3H)，0.93-0.75(m，3H).LCMS[M+H]+＝819.4.
实施例5：2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-5-(((反式-4-(4-(3-(6-(4-氟苯基)-4-((S)-3-甲基吗啉代)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)哌啶-1-羰基)环己基)甲基)氨基)异二氢吲哚-1，3-二酮(化合物5)的制备
Figure BDA0004023952350000192
将中间体7(1 equiv.)，中间体2(1.05 equiv.)，DIPEA(5 equiv.)，HATU(20mg，0.0508mmol，1.3 equiv.)溶于DMF中，反应混合物在室温条件下搅拌4小时。向反应后体系中加水并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经硅胶柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝20∶1)进一步纯化得到化合物5。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.46(dd，J＝8.6，5.6Hz，2H)，8.03-7.96(m，2H)，7.61(d，J＝8.3Hz，1H)，7.14(t，J＝8.6Hz，2H)，6.99-6.94(m，1H)，6.75(d，J＝9.0Hz，1H)，4.93(dd，J＝12.1，5.3Hz，1H)，4.62(s，1H)，4.12(q，J＝7.2Hz，3H)，3.93-3.87(m，1H)，3.83(d，J＝12.7Hz，1H)，3.73-3.63(m，2H)，3.11(t，J＝6.1Hz，3H)，2.94-2.67(m，4H)，2.50(d，J＝10.9Hz，1H)，2.11(d，J＝11.4Hz，2H)，1.95(d，J＝12.4Hz，3H)，1.82(s，3H)，1.55-1.50(m，3H)，1.50-1.45(m，4H)，1.43(d，J＝9.0Hz，2H)，1.29(d，J＝3.5Hz，3H)，1.08(q，J＝11.8Hz，4H).LCMS[M+H]+＝847.3.
实施例6：2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-5-(((反式-4-(3-(4-(6-(4-氟苯基)-4-((s)-3-甲基吗啉代)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-羰基)环己基)甲基)氨基)异二氢吲哚-1，3-二酮(化合物6)的制备
Figure BDA0004023952350000193
将中间体8(1 equiv.)，中间体2(1.05 equiv.)，DIPEA(5 equiv.)，HATU(20mg，0.0508mmol，1.3 equiv.)溶于DMF中，反应混合物在室温条件下搅拌4小时。向反应后体系中加水并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经硅胶柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝20∶1)进一步纯化得到化合物6。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.46(dd，J＝8.6，5.6Hz，2H)，8.06(d，J＝12.5Hz，1H)，7.53(d，J＝8.4Hz，1H)，7.12(t，J＝8.6Hz，2H)，6.95(d，J＝2.2Hz，1H)，6.79(dd，J＝8.5，2.2Hz，1H)，4.97(dd，J＝12.2，5.4Hz，1H)，4.93-4.84(m，1H)，4.34-4.25(m，1H)，4.16-4.02(m，3H)，3.92-3.79(m，3H)，3.68(t，J＝11.8Hz，2H)，3.61-3.50(m，1H)，3.12-3.01(m，4H)，2.83-2.67(m，3H)，2.39(d，J＝11.9Hz，2H)，2.32-2.19(m，3H)，2.11-2.03(m，3H)，1.99-1.92(m，2H)，1.87-1.75(m，3H)，1.72-1.60(m，2H)，1.44(d，J＝6.8Hz，3H)，1.14-1.02(m，4H).LCMS[M+H]+＝847.3.
实施例7：5-(((4-(3-(2-氨基苯并[d]噁唑-5-基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羰基)环己基)甲基)氨基)-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(化合物7)的制备
Figure BDA0004023952350000194
将中间体9(1 equiv.)，中间体2(1.05 equiv.)，DIPEA(5 equiv.)，HATU(20mg，0.0508mmol，1.3 equiv.)溶于DMF中，反应混合物在室温条件下搅拌4小时。向反应后体系中加水并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经硅胶柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝20∶1)进一步纯化得到化合物7。1H NMR(400MHz，DMSO)δ11.04(s，1H)，9.65(s，1H)，9.05(s，1H)，8.68(s，1H)，7.85(s，1H)，7.71(d，J＝8.1Hz，1H)，7.55(d，J＝6.0Hz，2H)，7.47(d，J＝8.2Hz，1H)，7.17(s，1H)，6.96(s，1H)，6.87(d，J＝8.2Hz，1H)，5.14(s，1H)，5.02(dd，J＝12.8，5.4Hz，1H)，4.58(s，1H)，4.13(s，1H)，3.60(s，2H)，3.13(s，2H)，3.04(s，2H)，2.86(d，J＝12.5Hz，2H)，2.67(s，1H)，2.13(d，J＝18.8Hz，2H)，2.03(s，2H)，1.88(d，J＝10.5Hz，2H)，1.77(s，2H)，1.58(s，1H)，1.38(s，2H)，1.17-1.01(m，3H).LCMS[M+H]+＝731.5.
实施例8：2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)-5-(((反式-4-(4-(6-(4-硝基苯基)-4-((S)-3-甲基吗啉代)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羰基)环己基)甲基)氨基)异二氢吲哚-1，3-二酮(化合物8)的制备
Figure BDA0004023952350000201
将中间体10(20.0mg，0.97 equiv.)，中间体2(15.4mg，1.00 equiv.)，DIPEA(25.8mg，5 equiv.)，HATU(20mg，0.0508mmol，1.32 equiv.)溶于DMF中，反应混合物在室温条件下搅拌过夜。向反应体系中加水并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经PTLC纯化(DCM∶MeOH＝15∶1)进一步纯化得到化合物8。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.04(s，1H)，8.67(d，J＝8.6Hz，2H)，8.39-8.29(m，3H)，7.55(d，J＝8.4Hz，1H)，7.16(t，J＝5.7Hz，1H)，6.97(s，1H)，6.87(d，J＝8.5Hz，1H)，5.19-5.08(m，1H)，5.02(dd，J＝12.9，5.4Hz，1H)，4.56(d，J＝12.8Hz，1H)，4.13(d，J＝12.7Hz，1H)，4.05(d，J＝9.6Hz，1H)，3.82(d，J＝11.5Hz，1H)，3.73(d，J＝11.7Hz，1H)，3.59(t，J＝8.9Hz，1H)，3.04(t，J＝5.8Hz，2H)，2.86(d，J＝13.7Hz，2H)，2.73-2.56(m，2H)，2.13-1.94(m，5H)，1.88(d，J＝12.9Hz，3H)，1.82-1.71(m，2H)，1.68-1.52(m，2H)，1.50-1.31(m，7H)，1.19-1.07(m，3H)..LCMS[M+H]+＝819.2.
实施例9：化合物9的制备
Figure BDA0004023952350000202
第一步：化合物9-1
将4-氯-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(2000mg，13.0mmol)，叔丁基4-羟基哌啶-1-羧酸酯(2600mg，13.0mmol)，三苯基膦(4020mg，15.6mmol)溶于四氢呋喃溶液(30mL)中，在冰浴，氩气保护下，加入偶氮二甲酸二异丙酯(2680mg，15.6mmol)。将该混合物在室温下反应16小时。待反应完成后，过滤反应液，将滤液旋干，利用柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)分离纯化，最终得到白色固体状化合物9-1(2500mg)，收率为58％。LC-MS(HCOOH)：m/z＝338.0(M+H).
第二步：化合物9-2
将叔丁基4-(4-氯-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(370mg，1.00mmol)，(S)-3-甲基吗啉(111.8mg，1.10mmol)，三乙胺(201.9mg，2.00mmol)溶于四氢呋喃溶液(15mL)中。将混合溶液在0℃下搅拌半个小时后，在60℃下反应16小时。待反应完成后，利用柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)分离纯化，最终得到黄色透明油状化合物9-2(402mg)，收率为99％。LC-MS(HCOOH)：m/z＝403.0(M+H).
第三步：化合物9-3
向叔丁基(S)-4-(4-(3-甲基吗啉代)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶-1-羧酸酯(402mg，1.00mmol)的二氯甲烷溶液(5mL)中加入氯化氢/1，4-二氧六环溶液(1.30mL，4M，5.20mmol)，室温反应16小时。待反应完成后，将反应液旋干，最终得到白色固体状化合物9-3(130.3mg)，收率为43％。1H NMR(400MHz，Methanol-d4)δ8.58(s，1H)，8.47(s，1H)，5.24(ddd，J＝14.8，10.8，4.2Hz，1H)，4.67(d，J＝6.2Hz，1H)，4.32(d，J＝11.4Hz，1H)，4.17(d，J＝7.8Hz，1H)，3.96-3.71(m，4H)，3.68-3.60(m，2H)，3.39-3.34(m，2H)，2.50(td，J＝14.6，4.0Hz，2H)，2.32(dd，J＝14.0，3.0Hz，2H)，1.57(d，J＝6.8Hz，3H).LC-MS[M+H]+＝303.2。
第四步：化合物9-4
向4-甲酰基苯甲酸(164mg，1.10mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(4mL)中的混合物中加入冰乙酸(1mL)。混合物在室温搅拌10分钟后加入5-氨基-2-(2，6-二羰基哌啶-3-基)异二氢吲哚-1，3-二酮(150mg，0.549mmol)。混合物在室温搅拌1小时。在0℃下加入三乙酰氧基硼氢化钠(698mg，3.29mmol)，混合物在室温搅拌过夜。反应液旋干后反相制备液相色谱分离纯化(Gemini-C18 150x21.2mm，5um，ACN--H2O(0.1％FA30-50)得到125.2mg黄色固体状标题中间体，收率55.1％。LCMS tR＝1.09min，[M+H]+＝407.9.1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.90(s，1H)，11.06(s，1H)，7.93-7.90(m，2H)，7.78(t，J＝6.0Hz，1H)，7.57(d，J＝8.4Hz，1H)，7.47-7.45(m，2H)，6.96(s，1H)，6.89(d，J＝8.4Hz，1H)，5.02(dd，J＝12.8，5.4Hz，1H)，4.55(d，J＝5.8Hz，2H)，2.93-2.80(m，1H)，2.69-2.32(m，2H)，2.02-1.93(m，1H)。
第五步：化合物9
将中间体7(1 equiv.)，中间体4(1.05 equiv.)，DIPEA(5 equiv.)，HATU(20mg，0.0508mmol，1.3 equiv.)溶于DMF中，反应混合物在室温条件下搅拌4小时。向反应后体系中加水并用乙酸乙酯萃取，有机相浓缩后经硅胶柱层析(DCM∶MeOH＝20∶1)进一步纯化得到化合物9。1H NMR(400MHz，Methanol-d4)δ8.30(s，1H)，8.00(s，1H)，7.62-7.34(m，5H)，6.70(d，J＝8.2Hz，1H)，6.56(s，1H)，5.12-4.94(m，2H)，4.88-4.61(m，3H)，4.32-4.21(m，2H)，4.14-3.98(m，3H)，3.92-3.75(m，2H)，3.72-3.41(m，3H)，3.17-3.02(m，1H)，2.90-2.75(m，2H)，2.39-1.90(m，7H)，1.51-1.35(m，3H).LCMS[M+H]+＝692.6.
效果例1：对mToR抑制、GsPT1靶点的降解(Western blot法)
将细胞(MDA-MB-468、U87和A549细胞)悬浮于1.5mL培养基中，置于12孔细胞培养板(5×105～1×106个/孔)中，用不同浓度的本申请化合物、mTOR抑制剂MLN0128(毕得医药，BD305515)处理。孵育指定时间后，收集细胞，离心去除上层培养基，然后用PBS洗两遍。细胞样品于冰上经RIPA裂解20分钟，加入2×蛋白上样缓冲液(50mM Tris-HCl(pH 6.8)，2％(W/V)十二烷基硫酸钠，0.1％(W/V)溴酚蓝，10％(V/V)丙三醇，10％(V/V)β-巯基乙醇的超纯水溶液)，于100℃金属浴加热20分钟后冷却即得蛋白样品。然后取10μL蛋白样品，用10％SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白样品。电泳结束后，在4℃下，湿转至PVDF膜上(100V电压，1.5h)。转膜结束后，5％牛奶封闭一小时。封闭结束后，用PBST洗三次，每次5分钟，然后与一抗4℃孵育过夜。孵育完毕后，回收抗体，再用PBST洗三次，每次5分钟。之后室温孵育相应的兔/小鼠二抗1小时。回收二抗，PBST洗膜三次，每次10分钟。利用化学发光液在天能显影仪器显影，如图1-4所示，显影结果用ImageJ进行灰度分析，通过归一化得到降解比率，如表1所示。
U87细胞经300nM化合物2处理4h后进行定量蛋白质组学检测，分析降解选择性(图5)，化合物2选择性降解GSPT1。
表1：本公开化合物对mTOR蛋白激酶的抑制作用和对GSPT1蛋白的降解作用
化合物 mTOR抑制 GSPT1降解
1 ++++ ++++
2 ++++ ++++
3 ++++ +++
4 ++ ++
5 ++ +++
6 ++ ++
7 +++ +++
8 +++ +++
9 无抑制作用 +++
MLN0128 ++++ 无降解作用
MLN0128的结构式为：
Figure BDA0004023952350000211
在上表中，对于mTor抑制作用，“++++”表示小于等于100nM时，免疫印迹法药物组pS6K条带几乎不可见；“+++”表示大于100nM且小于等于300nM时，免疫印迹法药物组pS6K条带灰度弱于DMSO组；“++”表示大于300nM且小于等于500nM时，免疫印迹法药物组pS6K条带灰度弱于DMSO组；“+”表示大于500nM且小于等于1000nM时，免疫印迹法药物组pS6K条带灰度弱于DMSO组，“无抑制作用”表示大于1000nM时，免疫印迹法药物组pS6K条带灰度与DMSO组一致；对于GSPT1降解作用，“++++”表示小于等于100nM时，免疫印迹法药物组GSPT1条带几乎不可见；“+++”表示大于100nM且小于等于300nM时，免疫印迹法药物组GSPT1条带灰度弱于DMSO组；“++”表示大于300nM且小于等于500nM时，免疫印迹法药物组GSPT1条带灰度弱于DMSO组；“+”表示大于500nM且小于等于1000nM时，免疫印迹法药物组GSPT1条带灰度弱于DMSO组，“无抑制作用”表示大于1000nM时，免疫印迹法药物组pS6K条带灰度与DMSO组基本一致。
效果例2:本公开化合物对肿瘤细胞的增殖抑制活性
本公开中的化合物对多种实体瘤细胞均有明显的增殖抑制效果。
在细胞增殖抑制实验中，将MDA-MB-468、U87细胞悬浮于50μL培养液中，置于96孔细胞培养板中(5000个细胞/孔)。将本公开具体化合物的DMSO储液用50μL培养基稀释后加入96孔细胞培养板中培养。细胞在37℃、5％CO2培养箱中培养。72h后，向96孔细胞培养板每孔加入10μL CCK-8试剂。孵育1-4小时后，使用多功能酶标仪在450nm波长下读取吸光值。用DMSO处理后的细胞为100％的存活率，用GraphPad Prism 8软件，通过非线性回归分析计算IC50。细胞存活率计算公式为：
存活率＝[(剂量-空白)/(对照-空白)]×100％。
表2：测得各实施例化合物的IC50值
Figure BDA0004023952350000221
前述对本公开的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本公开限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本公开的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本公开的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本公开的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。

Claims (10)

1.式(I)所代表的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、对映异构体和非对映异构体的混合物、外消旋体、内消旋体、外消旋体和内消旋体的混合物、药学上可接受的水合物、药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物：
Figure FDA0004023952340000011
其中，
G通过Z1与L相连，G具有以下结构：
Figure FDA0004023952340000012
X1、X2、X10、X11、X12各自独立地选自CH、C或N；
R1选自氢、氨基或
Figure FDA0004023952340000013
R6、R7、R8、R9各自独立地选自氢、C1-6烷基，所述C1-6烷基任选地被一个或多个卤素所取代；
R2不存在或者为
Figure FDA0004023952340000014
R3不存在或者选自氢、卤素、
Figure FDA0004023952340000015
其中，n7选自1至5的整数；
R10选自羟基、氨基、卤素、C1-5烷氧基、C1-5烷胺基，所述C1-5烷氧基、C1-5烷胺基任选地被一个或多个氘或卤素所取代；
A1选自氢、任意取代的C5-18芳基、5至18元杂芳基、5至18元杂环基、或-NH-R5，其中R5选自任意取代的C5-18芳基、5至18元杂芳基；
Z1选自直接键、-CH2-、
Figure FDA0004023952340000016
/>
Figure FDA0004023952340000017
Figure FDA0004023952340000021
L具有以下的结构：
Figure FDA0004023952340000022
其中，n1和n3各自独立地选自0或1；n2和n4各自独立地选自0至4的整数；
M选自O或H；J选自-O-或-NH-；
n2个R11彼此相同或不同，n4个R12彼此相同或不同，R11和R12各自独立地选自-O-、氨基、-C(O)-、C1-6烷基、C2-6炔基、C3-9环烷基、C5-12芳基、4-12元杂环烷基、5-9元杂芳基，所述C3-9环烷基、C5-12芳基、4-12元杂环烷基、5-9元杂芳基任选地被卤素、羟基、氨基、C1-6烷基、-(CH2)n5OH或-(CH2)n5COOH所取代，其中，n5为选自0至3的整数；
Y选自
Figure FDA0004023952340000023
其中，K1选自氢、卤素、C1-5烷氧基，K2选自O或H。
2.根据权利要求1所述的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、对映异构体和非对映异构体的混合物、外消旋体、内消旋体、外消旋体和内消旋体的混合物、药学上可接受的水合物、药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物，其特征在于，R6、R7、R8、R9各自独立地选自氢、甲基、乙基，所述甲基、乙基任选地被一个或多个氟所取代；
优选地，R6、R7、R8、R9各自独立地选自氢、甲基、乙基、三氟甲基、-CF2CH3、-CF2CF3、-CH2CF3；
优选地，R1选自氢、氨基、
Figure FDA0004023952340000031
优选地，R10选自羟基、氘代甲胺基、氘代甲氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基；
优选地，A1选自氢、C5-18芳基、5至18元杂芳基、5至18元杂环基、或-NH-R5，其中R5选自C5-18芳基、5至18元杂芳基，所述C5-18芳基、5至18元杂芳基、5至18元杂环基任选地被氨基、羟基、硝基、氰基、甲基、三氟甲基所取代；
优选地，A1选自氢、苯基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、吡啶基、嘧啶基、苯并吡唑基、吗啉基、哌嗪基、-NH-苯基、-NH-吡啶基、-NH-嘧啶基，所述苯基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、吡啶基、嘧啶基、苯并吡唑基、吗啉基、哌嗪基任选地被氨基、羟基、硝基、氰基、甲基、三氟甲基所取代；
优选地，A1选自氢、苯基、
Figure FDA0004023952340000032
Figure FDA0004023952340000033
优选地，G选自：
Figure FDA0004023952340000034
优选地，G选自
Figure FDA0004023952340000041
优选地，G选自
Figure FDA0004023952340000042
优选地，Z1选自直接键、-CH2-、
Figure FDA0004023952340000043
Figure FDA0004023952340000044
优选地，R11和R12各自独立地选自-O-、氨基、-C(O)-、-CH2-、-CH2CH2-、二价的叔丁基、乙炔基、环戊基、环己基、双环[1.1.1]戊烷基、苯基、萘基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噻吩基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、二氮杂螺庚烷基、二氮杂螺壬烷基、二氧六环基，所述环戊基、环己基、双环[1.1.1]戊烷基、苯基、萘基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噻吩基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、二氮杂螺庚烷基、二氮杂螺壬烷基、二氧六环基任选地被卤素、羟基、氨基、甲基、乙基、-(CH2)n5OH或-(CH2)n5COOH所取代，其中，n5为选自0至3的整数；
优选地，L选自单键、
Figure FDA0004023952340000045
Figure FDA0004023952340000046
优选地，L选自
Figure FDA0004023952340000051
优选地，Y选自
Figure FDA0004023952340000052
3.根据权利要求1或2任一项所述的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、对映异构体和非对映异构体的混合物、外消旋体、内消旋体、外消旋体和内消旋体的混合物、药学上可接受的水合物、药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物，其特征在于，包含式(IIa)或式(IIb)示的化合物：
Figure FDA0004023952340000053
其中，X1、X2、R1、R7、A1、Z1、L的定义如权利要求1或2任一项中所述。
4.根据权利要求1-3任一项所述的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、对映异构体和非对映异构体的混合物、外消旋体、内消旋体、外消旋体和内消旋体的混合物、药学上可接受的水合物、盐、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物，其中，包含式(IIIa1)、式(IIIa2)或式(IIIb1)所示的化合物：
Figure FDA0004023952340000054
Figure FDA0004023952340000061
其中，A1、n5、L的定义如权利要求1或2中所述。
5.下列化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、对映异构体和非对映异构体的混合物、外消旋体、内消旋体、外消旋体和内消旋体的混合物、药学上可接受的水合物、盐、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物：
Figure FDA0004023952340000062
/>
Figure FDA0004023952340000071
6.一种中间体化合物，其具有式(IVa)所示的结构，
Figure FDA0004023952340000081
其中，L、Y的定义如权利要求1或2任一项所述，U不存在或者选自卤素、羟基或者氢。
7.一种药物组合物，所述药物组合物在生理上可接受的介质中包含根据权利要求1-5任一项所述的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、对映异构体和非对映异构体的混合物、外消旋体、内消旋体、外消旋体和内消旋体的混合物、药学上可接受的水合物、药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物。
8.权利要求1-5任一项所述的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、对映异构体和非对映异构体的混合物、外消旋体、内消旋体、外消旋体和内消旋体的混合物、药学上可接受的水合物、药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物、权利要求6的药物组合物在制备mTOR抑制和GSPT1降解的药物中的应用。
9.权利要求1-5任一项所述的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、对映异构体和非对映异构体的混合物、外消旋体、内消旋体、外消旋体和内消旋体的混合物、药学上可接受的水合物、药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物、权利要求6的药物组合物在制备用于治疗mTOR信号通路和GSPT1蛋白各自或同时异常介导的疾病的药物中的应用；
优选地，所述mTOR信号通路和GSPT1蛋白各自或同时异常介导的疾病为恶性疾病，所述的恶性疾病包括但不限于肿瘤疾病、白血病；
优选地，所述肿瘤疾病包括结直肠癌、胰腺癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、肺癌、前列腺癌、淋巴癌等恶性肿瘤；
优选地，所述白血病包括慢性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞性白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病中的一种或多种。
10.一种同时抑制生物样品中的mTOR并降解GSPT1蛋白的方法，其包含使所述生物样品与权利要求1-5任一项所述的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、对映异构体和非对映异构体的混合物、外消旋体、内消旋体、外消旋体和内消旋体的混合物、药学上可接受的水合物、药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物或氮氧化物、权利要求6的药物组合物接触。
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