CN116209467A - 针对冠状病毒的抗体 - Google Patents

Abstract

本发明提供：针对冠状病毒的刺突蛋白，特别是胞外区或受体结合域的蛋白质的人抗体。

Description

针对冠状病毒的抗体

技术领域

本发明涉及针对冠状病毒的抗体，其是使用人抗体产生小鼠制备的抗体。

背景技术

抗体作为治疗癌症、类风湿性关节炎等的药物在医疗领域被使用。例如，曲妥珠单抗作为针对癌细胞表面的HER2(或ErbB2)的分子靶向抗体药物而被用于乳腺癌的治疗。此外，托珠单抗(Tocilizumab)是人源化抗IL-6受体抗体，用于治疗类风湿关节炎的药物。

抗体优选是人抗体，以施用于人时提高治疗效果和安全性。本发明人之前通过制备小鼠人工染色体载体(Mouse Articifical Chromosome：MAC)(日本专利第5557217号(专利文献1)，WO2019/177163号(专利文献2))，并将人抗体重链基因和人抗体轻链基因(κ基因和/或λ基因)组入该载体中，使其保持在小鼠中，而成功地实现完全人抗体产生小鼠的制备(WO2018/079857号(专利文献3))。

另一方面，重症急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV2)是引起目前正在进行中的新型冠状病毒传染病(COVID-19)引起的全球大流行(pandemic)的新兴冠状病毒，在全世界造成了大量感染者和死亡。为了阻止这种人兽共患传染病病毒引起的全球大流行的扩散，找出疫苗、治疗药物的措施成为最优先的技术问题。

SARS-CoV-2刺突(spike)(S)糖蛋白促进病毒向宿主细胞的侵入，因此是中和抗体的主要靶标，报道了以SARS-CoV2的S糖蛋白为靶标的单克隆抗体(Wang1 C.et al.，NATURECOMMUNICATIONS(2020)11：2251(非专利文献1)；Pinto D.et al.，Nature，Vol.583,290-295,2020(非专利文献2))。

此外，还报道了从新型冠状病毒感染中恢复的患者中取得了具有中和活性的抗体(Wu Y.et al.，Science 10.1126,2020(非专利文献3))。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本专利第5557217号

专利文献2：WO2019/177163号

专利文献3：WO2018/079857号

非专利文献

非专利文献1：Wang1 C.et al.，NATURE COMMUNICATIONS(2020)11：2251

非专利文献2：Pinto D.et al.，Nature，Vol.583,290-295,2020

非专利文献3：Wu Y.et al.，Science 10.1126,2020

发明内容

发明所解决的技术问题

然而，与针对冠状病毒的上述公知抗体相比，需要开发能够安全地应用于人，并且亲和性、中和活性、血中动态、制造成本等优异的抗体。

为了解决所述技术问题，本发明人进行了深入的研究，结果通过使用将人抗体基因搭载在人工染色体载体上而得的人抗体产生小鼠，成功地获得了具有所需性质的抗体，从而完成了本发明。

解决问题的技术手段

即，本发明如下。

项(1)、一种抗体，其针对冠状病毒的刺突蛋白。

项(2)、根据项(1)所述的抗体，其中，刺突蛋白为胞外区或受体结合域的蛋白质。

项(3)、根据项(1)或项(2)所述的抗体，其中，刺突蛋白的表位为受体结合域的全长氨基酸序列中选自R403、D405、E406、R408、T415、G416、K417、D420、Y449、Y453、L455、F456、G485、Y486、N487、Y489、Q493、S494、Y495、G496、Q498、N501、G502、V503、G504和Y505中的至少2个氨基酸残基。

项(4)、根据项(3)所述的抗体，其中，2个氨基酸残基为R403和K417。

项(5)、根据项(1)所述的抗体，其中，冠状病毒为SARS-CoV1、SARS-CoV2或MERS-CoV。

项(6)、根据项(1)～项(5)中任一项所述的抗体，其中，作为病毒的增殖抑制指标的IC50，中和活性低于1ng/ml。

项(7)、根据项(1)～项(6)中任一项所述的抗体，其中，重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.14或18表示的氨基酸序列。

项(8)、根据项(1)～项(6)中任一项所述的抗体，其中，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.16或20表示的氨基酸序列。

项(9)、一种抗体，其与项(1)～项(8)中任一项所述的抗体结合的表位结合。

项(10)、根据项(1)～项(9)中任一项所述的抗体，其中，抗体为嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。

项(11)、一种药物组合物，其包含项(1)～项(10)中任一项所述的抗体。

项(12)、根据项(11)所述的药物组合物，其用于治疗冠状病毒传染病。

项(13)、一种冠状病毒检测用试剂，其包含项(1)～项(10)中任一项所述的抗体。

项(14)、一种冠状病毒的检测方法，其包含：使项(1)～项(10)中任一项所述的抗体与采集得到的生物样品接触的工序。

发明的效果

根据本发明，提供了针对冠状病毒的人抗体。本发明的抗体是通过使用冠状病毒的S蛋白对完全人抗体产生小鼠进行免疫而得到的完全人抗体，亲和性、中和活性优异，可用于治疗或预防冠状病毒传染病等。

附图说明

[图1]是表示人抗体产生小鼠的RBD的免疫程序(immunization schedule)的图。

[图2]是表示记忆B细胞的分离结果的图。

[图3]是表示针对各冠状病毒的抗体的分离结果的图。

[图4]是表示使用了假病毒的中和活性的测定结果的图。

[图5-1]是表示两个RBS抗体克隆不同的SARS交叉中和活性的图。

(A)CoV2 S结合单克隆抗体由来自仅表达人抗体的免疫小鼠的单细胞培养方法确立。通过ELISA法对培养液中的单克隆抗体的结合指示的S和RB D蛋白进行评价。使用培养液中的CoV2中和活性假病毒系统进行评价。两个克隆(#108；NT-108，#193；NT-193)显示中和活性。

(B)在通过连续稀释NT-108/NT-193预孵育后，评价与hACE涂布板结合的CoV2 RBD量。将针对hACE2-RBD结合的抗体介导抑制绘制为百分比。

(C，D)使用假病毒(C)和真病毒(D)评价针对CoV2的中和活性。IC50如上所示。

(E)用竞争抗体掩蔽(masked)RBD结合板后，加载NT-108和NT-193，对向未掩蔽的RBD的结合进行评价。

(F)NT-108和NT-193针对CoV2 RBD的结合亲和性通过SPR分析进行评价。

(G)针对CoV1的中和活性使用假病毒进行评价。

[图5-2]是表示NT-193Fab-S-RBD复合体的结构的图。

(A)左。表示NT-193复合体在两个角度的示意图模型(紫红色：NT-193重链，粉色：NT-193轻链，橙色：S-RBD，编号1～3分别表示CDR-1、2、3)。右。ACE2-S-RBC复合体的结构(PDB：6m0j)角度与NT-193复合体的右侧相同。ACE2用淡蓝色表示。

(B)NT-193复合体(((着色与A相同))与代表性的1类(class1)抗体复合体，CC12.1(深蓝色和灰色，RBS-A亚类)和COVA2-39(暗色和浅褐色，RBS-B亚类)亚类的比较。左侧的模型显示为与(A)的NT-193复合体的右侧的一个相同的角度。左右的角度大致旋转了90度。

(C)在S-RBD(灰色)的受体结合位点(RBS)的表面模型中显示CDR结合位点(图像模型，紫红色和粉红色)。(C)～(E)的RBS的角度相同。

(D)RBS上的ACEand NT-193结合位点间的比较。分别用淡蓝色、紫红色和黄色表示仅ACE、仅NT-193和两者(重叠)的结合区域。

(E)SARS-CoV-1与SARS-CoV-2间的RBS的序列编号保守性，保守的(Conserved)：紫红色，类似(Similar)：粉红色，非保守的(Different)：灰色。

(F～I)NT-193的CDR-H3(F)、CDR-L1(G)、L链的DE环(H)和CDR-H3(I)的详细的识别模式。着色与(A)相同。虚线表示极性相互作用。

[图5-3]是NT-193对变异株也显示出中和活性的图。

(A)将针对501Y.V1和501Y.V3病毒的抗体中和活动与针对原病毒(WK-521)的进行比较。

[图5-4]是表示NT-193和NT-193+NT-108混合物的预防和治疗效果的图。

(A)表示用于评价NT-193和NT-193+NT108混合物的预防效果和治疗效果的实验设计的示意图。

(B，D)每天检测以指示的剂量给药了预防性(B)或治疗性(D)mAb中的任一种的CoV2感染仓鼠的体重。

(C，E)以指示的剂量给药了预防性(C)或治疗性(E)mAb中的任一种的仓鼠的肺组织中的、CoV2病毒载量。

[图6-1]是表示记忆B细胞的基于单细胞培养的CoV2 RBD结合单克隆抗体(mAb)的分离方法·过程的图。

(A)用于从TC-mAb小鼠分离RBD mAb的实验工作流程的示意图。

(B)如图所示，基于几种冠状病毒抗原的初免(prime)和连续加强(boost)后对针对来源于CoV2(红色)、SARS(蓝色)、MERS(灰色)的RBD的血清人IgG抗体滴度进行评价。

(C)CoV2 RBD结合记忆B细胞的单细胞分选

类别转换记忆B细胞通过MACS系统从脾细胞中浓缩，接着进行基于荧光Ab和探针的染色。类别转换记忆B细胞中的CoV2 S/RBD结合记忆B细胞的频率如图所示。

[图6-2]是表示NT-108和NT-193的重链可变区(VH)/轻链可变区(VL)使用量、变异、克隆类型的图。

重链示于上图，轻链示于下图。

[图6-3]是表示基于S309 mAb的hACE2结合抑制的图。

用连续稀释S309(3类(class3))mAb预孵育后，对与hACE包覆板结合的CoV2 RBD量进行评价。将针对hACE2-RBD-结合的抗体介导抑制绘制为百分比。

[图6-4]是表示NT-108和NT-193mAb针对几种冠状病毒S-三聚体抗原的交叉反应性的图。

将来源于几种冠状病毒的S-三聚体抗原涂布至ELISA板，对进行了阶段稀释的NT-108和NT-193的结合进行评价。将人IgG1型示于左图，将人IgG3型示于右图。

[图6-5]是表示NT-108和NT-193Fab向SARS-CoV RBD的结合的SPR解析的结果的图。

通过SPR分析对NT-108或NT-193的连续稀释Fab片段向固定化SARS CoV-1RBD或SARS-CoV-2RBD的结合进行评价。

[图6-6]是表示NT-108和NT-193使与IgG3亚类相关的中和活性增加的图。

(A)用低浓度(0.2μg/ml)和高浓度(5μg/ml)的CoV2 S-三聚体涂布了ELISA板。通过O.D.绘制各IgG亚类与S-三聚体结合的NT-108和NT-193的量。

(B，C)针对CoV2病毒的中和活性通过假病毒(B)和真病毒(C)进行测定。IC50如上所示。

[图6-7]是表示S-RBD复合体的结构比较的图。

(A)表示NT-193复合体与1类抗体复合体，RBS-A(深蓝色和灰色)和RB S-B(暗色和浅褐色)亚类的比较图的模型(紫红：NT-193重链，粉红色：NT-193轻链，橙：S-RBD)。左模型显示为与图2(A)的NT-193复合体的右侧的一个相同的角度。左右的角度大致旋转了90度。

(B)S-RBD上的NT193的CDR和DE环的位置

(C)NT-193(左，与(A)相同颜色)、REGN10933(中央)和REGN10987(右)与S-RBD复合体的概要。显示手绘的模型的图(绿色：REGN10933，蓝色：REGN10987)。

[图6-8]是表示NT-193Fab-S-RBD复合体的结合位点的图。

(A)RBS上的ACE结合位点与NT-193结合位点的比较，分别用淡蓝色、紫红色和黄色表示仅ACE、仅NT-193和两者(重叠)的结合区域。

(B～D)详细说明CDR-H1/L3(B)、CDR-H3(C)、CDR-H1/H2(D)的CDR结合位点。表示棒状模型(紫红：NT-193重链，粉红色：NT-193轻链，橙：S-RBD)。虚线表示极性相互作用。

[图6-9]是表示S-RBD的抗体结合残基的定位(mapping)的图。

将各抗体的S-RBD的结合残基按颜色进行区分。在CoV-1中非保守的SARS-CoV-2残基表示为黄色。报告的突变(粉红色)表示在SARS-CoV-1与Co V-2序列之间的栏。

[图6-10]是表示NT-193的重链(HC)和轻链(LC)的氨基酸序列的图。

结合残基用星号表示。表示二级结构。

[图6-11]表示针对NT-193的逃逸变体(escape variant)的筛选的图。

(A)SARS-CoV-2病毒在指定的抗体存在下传代3次，接着对逃逸进行了验证。使用CPE从孔中回收病毒RNA进行测序。显示RBD中的变异氨基酸残基。(B)评价针对变异病毒的中和活性。

具体实施方式

1.概要

本发明涉及针对冠状病毒的抗体。

本发明人着眼于冠状病毒的刺突蛋白，通过使用导入了人抗体基因的完全人抗体产生小鼠，成功地产生了针对该刺突蛋白的人抗体。

在本发明中，作为对象的冠状病毒是重症呼吸综合征病毒(称为SARS-Co V1或SARS-CoV)、中东呼吸综合征病毒(称为MERS-CoV)、新型重症呼吸综合征病毒(称为SARS-CoV2或SARS-CoV-2)。

对所述抗体的中和活性、亲和性、交叉反应性进行了深入研究，结果发现与现有抗体相比，针对SARS-CoV2的中和活性显著。此外，除了与SARS-CoV2特异性的克隆和与SARS-CoV1和SARS-CoV2呈交叉反应性的克隆之外，还发现了与SARS-CoV1、MERS-CoV、SARS-CoV2结合的抗体。

本发明的抗体与刺突蛋白的胞外区或受体结合域(RBD)结合。并且，即使在冠状病毒感染的初期阶段，也能够高灵敏度地检测出例如血液、唾液、鼻涕等体液中存在的活病毒。由此，可以检查有无冠状病毒感染(是否阳性)。

2.针对冠状病毒的抗体

(1)抗原蛋白

用于制备本发明抗体的用作抗原的蛋白质在本发明中是冠状病毒的刺突蛋白(S蛋白)的胞外区和受体结合域(RBD)区域的蛋白质。这些蛋白质可以通过基因工程方法制备。

病毒蛋白可以是从小鼠、大鼠、人等的组织或细胞中纯化的天然型蛋白质，也可以是基因工程生产的蛋白质。

此外，作为抗原的蛋白质(多肽)的制备方法可以是化学合成，也可以是基于使用大肠杆菌等的基因工程方法的合成，可以使用本领域技术人员公知的方法。

进行多肽的化学合成时，可以通过公知的肽合成法合成。此外，该合成可以应用固相合成法和液相合成法中的任一种。可以使用市售的肽合成装置(例如岛津制作所制：PSSM-8等)。

在基因工程合成多肽的情况下，首先设计和合成编码该多肽的DNA，并使用设计的引物来扩增所需DNA区域，可通过PCR方法进行。然后，通过将上述DNA与适宜的载体连接，而得到蛋白质表达用重组载体，通过将该重组载体以使得目的基因能够表达的方式导入宿主中，而得到转化体(Sambrook J.et al.，Molecular Cloning，A Laboratory Manual(4thedition)(Cold Spring Harbor Laboratory Press(2012))。

例如，人工合成编码SARS-CoV2、SARS-CoV1和MERS-CoV的S蛋白的胞外区和RBD区域蛋白质的碱基序列。根据需要，将其插入至插入有蛋白纯化用标签(例如Histag)的载体中，以制备表达载体。

作为用于转化的宿主，只要能够表达目的基因，就没有特别的限定。例如，可举出细菌(大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等)、酵母、动物细胞(COS细胞、CHO细胞等)、昆虫细胞或昆虫。也可以将山羊等哺乳动物作为宿主使用。将重组载体导入宿主的方法是公知的(Sambrook J.et al.，Molecular Cloning，ALaboratory Manual(4th edition)(ColdSpring Harbor Laboratory Press(2012))。

将上述表达载体基因导入用于蛋白质表达的给定细胞，从培养上清中纯化重组蛋白。就纯化而言，通过单独或适宜组合使用用于分离纯化蛋白质的常用生化方法，例如硫酸铵沉淀、凝胶过滤、离子交换色谱、亲和色谱等，能够分离纯化目的抗原蛋白。

需要说明的是，本发明中，也可以通过使用了市售的无细胞合成系统、例如Expressway^TM系统等的体外翻译而得到抗原蛋白。

本发明中，作为用作抗原的蛋白质，可以是下述序列编号(SEQ ID NO.)表示的氨基酸序列的全部或至少一部分，没有特别限定，优选为胞外区的至少一部分或受体结合域。

本发明中，各冠状病毒的刺突蛋白的氨基酸序列和编码该蛋白质的DNA的碱基序列如表1表示。

[表1]

此外，本发明中，作为抗原，可举出：(a)包含上述序列编号表示的氨基酸序列的蛋白质(多肽)、(b)包含该序列编号表示的氨基酸序列中1个或者数个(例如1～10个、1～5个、1～3个、1～2个等)氨基酸缺失、置换或者添加而得到的氨基酸序列的蛋白质，(c)相对于该序列编号表示的氨基酸序列具有70％以上的同源性的氨基酸序列的蛋白质。

(2)免疫动物

在本发明中制备抗体时，作为免疫对象的动物没有特别限定，可以使用通常用于抗体制备的小鼠、大鼠、兔子、山羊、马、绵羊等，优选完全人抗体产生小鼠(TC小鼠)。

本发明人在通过转染色体(TC)小鼠制备技术而保持全长人Ig基因座并产生完全人抗体的小鼠制备中在世界上首次成功(Tomizuka，K.et al.，Nature Genetics，(1997)16,133-143；Tomizuka，K.et.al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，(2000)97,722-727)。这里使用的人工染色体载体来源于人，通过随后的研究成功地实现了使用小鼠人工染色体载体(MAC)的TC小鼠的制备(WO2018/079857号)。

在这里，小鼠人工染色体载体是指从天然小鼠染色体中去除不需要的基因并缩短，而仅包含端粒、着丝粒和复制起点的微型染色体。在该小鼠人工染色体载体中，可以导入克隆位点loxP序列。小鼠人工染色体载体具有以下优点：(i)能够搭载任何新的基因，(ii)不插入宿主染色体而独立保持并能够进行后代传递，(iii)在包括小鼠和大鼠的哺乳类动物细胞中以恒定的拷贝数长期稳定保持，(iv)对可导入的DNA的长度没有制限。

目的基因(例如人抗体基因)向小鼠人工染色体载体的搭载可利用环状插入型和染色体易位型这两个克隆方法(文献：Uno N，Abe S，Oshimura M，Kazuki Y.J HumGenet.2018Feb；63(2)：145-156.doi：10.1038/s10038-017-0378-7.)。

由于已知ES细胞和iPS细胞有助于种系，因此将导入了包含目的人抗体基因的小鼠人工染色体载体的这些细胞注入小鼠胚胎的胚泡中，将该胚胎移植到寄养母亲的子宫中，并使其分娩而制备转染色体(Trans Chromosomic：TC)小鼠。并且，通过将得到的雌性和雄性TC小鼠交配，而制备其后代小鼠(这些称为TC小鼠)(WO2018/079857号)。

本发明的一方式中，使用所述TC小鼠作为免疫对象。

完全人抗体产生小鼠可通过如下方式获得：对于人Ig重链和轻链(κ和/或λ)，将所述MAC载体导入小鼠(称为TC小鼠)，并且破坏TC小鼠的内源性小鼠Ig基因簇。

人抗体产生小鼠可通过所述公知方法获得，也可以作为市售品获得(TC-mAb^TM小鼠：株式会社Trans Chromosomics)。

(3)病毒抗原对小鼠的免疫

在本发明中，将所制备的抗原施用于动物以进行免疫。作为进行免疫的动物，在本发明中例如可以使用完全人抗体产生小鼠(TC小鼠)。

通过将如上所述制备的抗原蛋白自身或与载体、稀释剂一起施用于动物(例如TC小鼠)来进行免疫。使用佐剂时，每只动物的抗原给药量为1μg～10mg。作为佐剂，可举出弗氏完全佐剂(FCA)、弗氏不完全佐剂(FIA)、氢氧化铝佐剂等。免疫主要通过注入静脉内、皮下或腹腔内等进行。此外，免疫的间隔没有特别限定，每隔几天到几周，优选每隔1～2周，进行2～20次免疫。

(4)抗体分离

从免疫的动物(例如TC小鼠)进行采血，通过夹心ELISA测定针对各个病毒的S蛋白(胞外区，RBD区域)的血中IgG抗体滴度，并采集已经诱导IgG抗体的小鼠脾细胞。将采集到的脾细胞用抗FcγRII/III抗体处理后，用下述抗体和S蛋白荧光探针染色，通过流式细胞术分离与S蛋白荧光探针结合的记忆B细胞。培养分离得到的记忆B细胞，回收培养后第10天的培养上清。培养时，以1cell/well撒在表达合适的小鼠CD40L、BAFF的饲养细胞上。此外，作为培养基，可以使用添加了各种细胞因子(例如小鼠IL-2、IL-4、IL-5)的RPMI培养基。

此外，本发明中，也可通过通常的杂交瘤法制备单克隆抗体。

为了得到杂交瘤，而进行抗体产生细胞与骨髓瘤细胞的细胞融合。融合操作可根据已知的方法、例如Kohler等的方法。作为与抗体产生细胞融合的骨髓瘤细胞，可使用小鼠等动物的通常可入手的成株细胞。作为骨髓瘤细胞，例如可举出P3X63-Ag8、P3X63-Ag8U.1、SP2/O-Ag14、PAI、P3U1、NSI/1-Ag4-1、NSO/1等小鼠骨髓瘤细胞株等。

然后，从细胞融合处理后的细胞中分选目标杂交瘤。作为该方法，将细胞悬浮液适宜稀释后，用极限稀释法在微滴定板上按计算撒0.3个/well左右，在各孔中加入HAT培养基等选择培养基，之后适宜交换选择培养基进行培养。结果，可以在选择培养基中获得培养开始后生长的细胞作为杂交瘤。

(5)基于基因工程方法的抗体蛋白的制备

在通过基因工程方法制备抗体蛋白的情况下，通过ELISA法从发现了与各个S蛋白的结合性的记忆B细胞而合成cDNA，通过PCR方法克隆抗体基因(重链、轻链V区)。将克隆的重链V区导入包含人IgG1或IgG3的C区的哺乳动物表达用载体中，将轻链V区导入包含人Igκ或Igλ的C区的哺乳动物表达用载体中，分别制备抗体表达载体。将制备的抗体表达载体基因导入宿主细胞，从培养上清中纯化重组抗体。

本发明的抗体可以是通过重组手段制备并表达的基因重组抗体或抗原结合片段。例如，本发明的抗体可以是嵌合抗体、人源化抗体或完全人抗体。本发明的重组抗体可以通过重链和轻链的重组表达来制备。例如，如果是小鼠-人嵌合抗体，则可以通过将抗体基因从产生针对病毒的S蛋白的抗体的小鼠细胞分离，将其重链(H链)恒定区与人IgG的H链恒定区基因重组，并将其导入小鼠骨髓瘤细胞来制备。人源化抗体可以例如通过将自产生针对S蛋白的抗体的小鼠细胞分离的抗体的抗原结合位点的基因移植到人源抗体分子中来制备。此外，人抗体可以通过对免疫系统与人交换的小鼠进行S蛋白免疫来制备。

通过本发明而得到的抗体蛋白例如为完全人抗体，为单克隆抗体。

(6)抗体片段的制备

本发明中，也可从如上所述制备的抗体片段化。

抗体的片段是指本发明的抗体的一部分的区域，例如可举出：Fab、Fab’、F(ab’)₂、Fv、双链抗体(diabody，dibodies)、dsFv、scFv(单链Fv)等。所述抗体片段可以根据目的用各种蛋白质分解酶切断本发明的抗体而得到。

例如，Fab可以通过用木瓜蛋白酶处理抗体分子来获得，F(ab’)₂可以通过用胃蛋白酶处理抗体分子来获得。此外，Fab’可以通过切断所述F(ab’)₂的铰链区的二硫键来获得。

在scFv的情况下，获得编码抗体的重链可变区(H链V区)和轻链可变区(L链V区)的cDNA，构建编码scFv的DNA。可通过将该DNA插入表达载体并将该表达载体导入宿主生物中进行表达，来制备scFv。

在双链抗体的情况下，获得编码抗体的H链V区和L链V区的cDNA，以使得肽接头的氨基酸序列的长度为8个残基以下的方式构建编码scFv的DNA。可通过将该DNA插入表达载体并将该表达载体导入宿主生物中进行表达，来制备双链抗体。

在dsFv的情况下，获得编码抗体的H链V区和L链V区的cDNA，构建编码dsFv的DNA。可通过将该DNA插入表达载体并将该表达载体导入宿主生物中进行表达，来制备dsFv。

本发明的人抗体的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列和编码该区域的DNA的碱基序列如下。

TC小鼠抗CoV2 mAb VH序列

NT-108(NTCOV-1)VH(SEQ ID NO.13)

NT-108(NTCOV-1)VH AA seq(SEQ ID NO.14)

NT-108(NTCOV-1)Vκ(SEQ ID NO.15)

NT-108(NTCOV-1)Vκ氨基酸序列(SEQ ID NO.16)

NT-193(NTCOV-2)VH(SEQ ID NO.17)

NT-193(NTCOV-2)VH氨基酸序列(SEQ ID NO.18)

NT-193(NTCOV-2)Vk(SEQ ID NO.19)

NT-193(NTCOV-2)Vk氨基酸序列(SEQ ID NO.20)

(7)基于ELISA的抗体结合性的确认

单克隆抗体针对SARS-CoV2 RBD、SARS-CoV1 RBD和MARS RBD的结合活性例如通过ELISA法进行测定。

(8)中和试验

在本发明中，为了评价抗体对SARS-CoV2病毒感染的防御效果，可以使用VSV假病毒进行中和试验。

中和试验中，例如将在培养基中进行了阶段稀释的抗体(单克隆抗体)和在培养基中稀释的表达病毒S蛋白的VSV假病毒进行混合并培养。

然而，已知在呼吸道内激活呼吸道病毒的主要蛋白酶之一是TMPRSS2(II型跨膜丝氨酸蛋白酶的一种)(Sakai K，et al.，J Virol 88：5608-5616,2014；竹田诚，病毒69：61-72,2019)。并且，已知基因工程上恒定表达TMPRSS2的Vero细胞、VeroE6细胞(Vero/TMPRSS2细胞和VeroE6/TMPRSS2细胞)(Sh irogane Y，et al.，J Virol 82：8942-8946,2008；NaoN，et al.，PLoS One14：e0215822,2019)。最近发现这些细胞株(特别是VeroE6/TMPRSS2细胞)对SARS-CoV2的分离、增殖非常有用(Matsuyama S，et al.，Proc Natl Acad Sci USA117：7001-7003,2020)。

因此，在本发明中，在上述培养后，向冠状病毒高敏细胞(例如Vero E6/TMPRSS2细胞)中添加抗体和病毒的混合液，进一步培养。然后，使用市售的测定系统或试剂盒测定荧光素酶活性。

(9)本发明的抗体所识别的表位和与其结合的抗体

本发明的抗体的表位(抗原决定簇)只要是作为抗原的冠状病毒S蛋白的至少一部分即可，没有特别限定，优选为胞外区或受体结合域(RBD)的至少一部分，例如RBD。识别该区域(与该区域结合)的抗体例如对生物样品中的冠状病毒的中和活性高，并且对冠状病毒传染病的预防或治疗用途非常有用。

本发明的抗体的表位为受体结合域的全长氨基酸序列(例如SEQ ID NO.2)中选自R403、D405、E406、R408、T415、G416、K417、D420、Y449、Y453、L455、F456、G485、Y486、N487、Y489、Q493、S494、Y495、G496、Q498、N501、G502、V503、G504和Y505中的至少2个氨基酸残基。

所述氨基酸残基中，字母为氨基酸的1个文字表述，数字为受体结合域的全长氨基酸序列中氨基酸的位置。例如“R403”是指受体结合域的全长氨基酸序列(例如SEQ IDNO.2)的第403位的精氨酸。其他位置和氨基酸残基也同样，可在整个本说明书中这样表述。

本发明的一方式中，本发明的抗体与包含R403和K417这两个氨基酸残基的表位结合。

(10)结合亲和性和中和活性

结合亲和性可通过结合常数(KA)和解离常数(KD)决定。亲和性平衡常数(K)表示为KA/KD的比。该结合亲和性可通过以下述方式检测。

结合亲和性具有至少1×10^-10M的解离常数(KD)，相对于该解离常数，例如具有2～5倍、5～10倍、10～100倍、100～1000倍或1000～10000倍高的亲和性。具体而言，本发明的抗体中，与冠状病毒的S蛋白的结合亲和性有关的解离常数(KD)为1×10^-10M、5×10^-11M、1×10^-11M、5×10^-12M、1×10^-12M、5×10^-13M、1×10^-13M、5×10^-14M、1×10^-14M、5×10^-15M或1×10^{- 15}M，更优选为1×10^-12M～1×10^-15M。或者，可以是比这些KD低的值可以是更高亲和性。

此处，当作为亲和性的测定对象的抗体的解离常数(KD)为本发明抗体的KD的约1～100倍以内时，该抗体与本发明的抗体实质上相同而包含在本发明中。

结合常数(KA)和解离常数(KD)可以使用表面等离子体共振(SPR)来测定，可以采用实时检测然后监测结合率的公知的机器和方法(例如Biacore(注册商标)T200(GEHealthcare公司)，ProteON XPR36(Bio-Rad公司)等)。

就本发明的抗体针对冠状病毒的中和活性而言，作为病毒的增殖抑制指标的IC50，低于2ng/ml(例如低于1ng/ml)。

3.药物组合物

本发明的药物组合物含有本发明的抗体作为有效成分，对SARS病毒传染病的预防、治疗有效。此外，为了通过血脑屏障(BBB)，可以制备肽化抗体或这些肽与BBB渗透性转运体的结合体。

本发明的抗体可以单独或与药学上可接受的载体或稀释剂等一起给药，其给药可以分为1次或数次进行。

本发明的药物组合物可以通过本领域技术人员公知的方法进行制剂化。例如，可以以无菌溶液或悬浮液注射剂的形式与水或其他药学上可接受的液体肠胃外使用。例如可适宜组合药理学上可接受的载体或介质，具体为灭菌水、生理盐水、植物油、乳化剂、悬浮剂、表面活性剂、稳定剂、调味剂、赋形剂、媒介(ベヒクル)、防腐剂、结合剂等，一般认为，通过以所发现的制药实施中所需的单位剂量形式进行混合来制备制剂。这些制剂中的有效成分量设定为能够得到所指示的范围的适宜容量。

注射用无菌组合物可根据常规制剂实施，使用注射用蒸馏水这样的媒介进行配制。作为注射用水溶液，例如可举出含有生理盐水、葡萄糖和其他辅助药(例如D-山梨糖醇、D-甘露糖、D-甘露醇、氯化钠)的等渗液。也可以组合使用适宜的增溶剂，例如醇(乙醇等)、多元醇(丙二醇、聚乙二醇等)、非离子性表面活性剂(聚山梨酯80(TM)、HCO-50等)。

作为油性液，可举出芝麻油、大豆油，也可以组合使用苯甲酸苄酯和/或苯甲醇作为增溶剂。此外，也可以与缓冲剂(例如磷酸盐缓冲剂和乙酸钠缓冲剂)、舒缓剂(例如盐酸普鲁卡因)、稳定剂(例如苯甲醇和苯酚)、抗氧化剂配合。制备的注射液通常填充到适宜的安瓿中。

本发明的药物组合物优选通过肠胃外给药来给药。例如，可以制成注射剂型、经鼻给药剂型、经肺给药剂型、经皮给药型的组合物。例如，可以通过静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮下注射等进行全身或局部给药。

给药方法可以根据患者的年龄、症状而适宜选择。含有抗体或编码抗体的多核苷酸的药物组合物的给药量例如可以设定为每次每千克体重0.0001mg至1000mg的范围。或者，例如，也可以设定为每患者0.001～100000mg的给药量，本发明并不限于这些数值。给药量和给药方法根据患者的体重、年龄、症状等而变化，本领域技术人员可以考虑这些条件而设定适宜的给药量和给药方法。

口服给药时，微晶纤维素、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸二钾、甘氨酸等各种赋形剂可以与崩解剂、粘合剂等一起使用。作为崩解剂，可举出淀粉、海藻酸、某种硅酸复盐等，作为结合剂，例如可举出聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、明胶、阿拉伯树胶等。此外，硬脂酸镁、月桂基硫酸钠、滑石等润滑剂对片剂形成非常有效。当使用水性悬浮液或酏剂(elixirs)作为口服给药用时，可以根据需要组合使用乳化剂、悬浮剂，并与水、乙醇、丙二醇、甘油等及它们的组合的稀释剂一起使用。

在透皮剂的情况下，通过在皮肤表面的角质层上开多个微细的孔(穴)，在粘合胶带中加入药物并粘贴到皮肤上，可以吸收以往不能从皮肤吸收的抗体。通过调整孔的数量、大小和胶带制剂的组成，可以像注射一样在短时间内给药，也可以长时间释放药剂。

4.冠状病毒检测用或诊断用试剂和试剂盒

本发明的检测用或诊断用试剂包含本发明的抗体或其片段。由于本发明的抗体能够对冠状病毒特异性地结合，因此包含该抗体的本发明的试剂可以用于检测或诊断冠状病毒传染病。

作为本发明的检测或诊断对象的冠状病毒，例如有SARS-CoV2、SARS-CoV1和MERS-CoV。

本发明的试剂除了本发明的抗体外，还可以包含药学上可接受的载体。“药学上可接受的载体”是指适合本发明试剂的任意载体(脂质体、脂质囊泡、胶束等)、稀释剂、赋形剂、湿润剂、缓冲剂、悬浮剂、润滑剂、佐剂、乳化剂、崩解剂、吸收剂、防腐剂、表面活性剂、着色料或增香剂等

此外，另一方式中，本发明提供：用于制造冠状病毒传染病的检测用或诊断用试剂的针对冠状病毒的人抗体或其片段的用途。

5.冠状病毒传染病的检测或诊断方法

本发明的冠状病毒传染病的检测或诊断方法是包含以下工序的方法，该工序为：使本发明的人抗体或其片断与从受试者采集的生物样品(以下简称为“生物样品”)接触，检测所述样品中的冠状病毒蛋白质。在这种情况下，优选将冠状病毒蛋白质的检测结果和冠状病毒传染病(冠状病毒感染的阳性)的可能性联系在一起。

本发明中，作为“受试者，”例如可举出：人、猫、狗、山羊、猪、绵羊、牛、马、猴、仓鼠等哺乳动物，优选为人。在受试者为人的情况下，受试者包含健康人和冠状病毒感染的阳性患者。

此外，作为生物样品，例如是指，来源于哺乳动物的组织、细胞、这些的破碎物或提取物、体液、排泄物本身或包含这些的样品，没有特别限定。此外，生物样品还包含通过对来源于哺乳动物的组织、细胞、这些的破碎物或提取物、体液、排泄物，进行任意的处理，例如稀释、分离、蛋白质的变性等而得到的样品。生物样品优选为体液，特别优选为唾液、粘膜、血液。任一生物样品都可通过进行适宜的预处理来应用。

在本发明中，“接触”是指使本发明的抗体和从受试者采集的生物样品在同一反应体系中存在，例如包含：在反应用凹槽中混合本发明的抗体和生物样品、在该生物样品中添加本发明的抗体、将另一个添加到固定有本发明的抗体或生物样品中的一个的载体中。

在本发明中，对于冠状病毒的检测、表达量的测定或评价，例如可利用酶免疫测定法(EIA、ELISA)、荧光免疫测定法(FIA)、放射免疫测定法(RIA)、化学发光免疫测定法(CIA)、乳胶凝集法、蛋白质印迹法、免疫染色、免疫沉淀法、免疫层析法、荧光偏振免疫测定法(FPIA)等。

作为用于这种检测的设备，没有特别限定，例如可利用微孔板、阵列、芯片、流式细胞仪、表面等离子体共振装置、免疫层析试纸条等。当使用这样的设备时，可以检测、测定和/或评价显色量、荧光量、发光量等信号，并将检测、测定或评价结果和冠状病毒传染病的可能性等联系在一起。

本发明中，可基于冠状病毒的检测结果(表达量的测定结果)，来诊断受试者有无感染冠状病毒的可能性(有无阳性)。

在这种情况下，可以通过用酶、荧光物质标记本发明的抗体来直接检测反应作为荧光信号，或者可以通过使用与本发明的抗体结合的标记二次抗体来间接检测信号。此外，检测方法可以使用竞争法、夹心法或直接吸附法等任一方法。然后，测定反应的强度、进行了反应的样品中的全体病毒中与抗体结合的病毒的比例，将预先设定的基准值、指标确定为临界值(cut-off值)，与临界值进行比较，可以判定或诊断感染冠状病毒的可能性。

临界值例如可以如下求出。首先，对来自冠状病毒阳性患者的生物样品中的冠状病毒的表达量以及来自健康人的生物样品中的冠状病毒的表达量进行测定(在这种情况下预计在检测限以下)。此时，成为对象的患者的例数分别为2例以上，例如10例以上、100例以上。并且，从来自阳性患者的生物样品组和来自健康人的生物样品组这两者中，通过统计处理求出冠状病毒的表达量的临界值。作为统计处理，例如可以使用逻辑回归分析法、使用ROC曲线的方法等。

本发明中，血液样品中的冠状病毒的S蛋白(胞外区)的表达量的临界值(临界值)可适宜设定为血清中浓度。

当在上述条件下测定冠状病毒S蛋白的表达量时，当表达量为所述临界值以上时，可以判定检测到冠状病毒，或者可以诊断受试者可能是冠状病毒阳性。

本发明中，检测冠状病毒的S蛋白时的该检测结果的确定性(准确率)为60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以上，优选为99％以上。

所述检测结果例如可作为进行冠状病毒传染病的检查或治疗效果的确定诊断时的主要资料或辅助资料。

即，本发明还提供了一种辅助冠状病毒传染病的检测或诊断的方法，其包含：使针对冠状病毒的S蛋白的人抗体或其片段与从受试者采集的生物样品接触，检测所述样品中的冠状病毒的S蛋白的工序。

以下，通过实施例详细说明本发明，但本发明并不限定于这些实施例。

实施例

以下，通过实施例更具体地说明本发明。但是，本发明的范围不限于这些实施例。

[实施例1]

1)重组抗原的制备

人工合成SARS-CoV2、SRAR-CoV1和MERS-CoV的重组S蛋白的胞外区和RBD区域蛋白质的碱基序列后，将其插入哺乳类表达用载体(pCMV ve ctor)中，分别制备重组蛋白质表达载体，所述哺乳类表达用载体(pCMV vect or)中插入有蛋白纯化用标签(9xHistag)。在Expi293细胞(THERMO FISHER SCIENTIFIC公司)中基因导入制备的表达载体，在37℃、8％CO₂、125rpm振荡培养的条件下培养5天。

通过TALON柱(CLONTECH公司)从培养上清中纯化各个重组蛋白质。

2)重组病毒抗原对完全人抗体产生小鼠(TC小鼠)的免疫

将SARS-CoV2重组S蛋白(胞外区，RBD区域)10μg与不完全弗氏佐剂100μl和硫代磷酸化的CpG(ATAATCGACGTTCAAGCAAG(SEQ ID NO.21))10μg混合后，将混合而得的溶液注射至完全人抗体产生小鼠(TC小鼠)的腹腔内。以同样的方法制备SARS-CoV1重组S蛋白(胞外区，RBD区域)和MER S重组S蛋白(胞外区，RBD区域)，每隔2周进行追加免疫。

免疫程序示于图1。

3)RBD抗原探针的制备

使荧光色素(PE(DOJINDO)、APC(DOJINDO)、AlexaFluor594(THERMO FISHERSCIENTIFIC公司)、PerCP-Cy5.5(abcam公司)结合至SARS-CoV2、SARS-CoV1和MERS-CoV的重组S蛋白(胞外区，RBD区域)，使其荧光探针化。

4)来自TC小鼠的S蛋白结合性记忆B细胞的分离和单克隆抗体分离

从TC小鼠中采血，通过夹心ELISA测定针对SARS-CoV2、SARS-CoV1和MERS-CoV的S蛋白(胞外区，RBD区域)的血中IgG抗体滴度，采集对全部S蛋白诱导了IgG抗体的小鼠的脾细胞。

脾细胞用抗FcγRII/III抗体处理后，通过下述抗体和S蛋白荧光探针进行染色，通过流式细胞术分离与S蛋白荧光探针结合的记忆B细胞。

将分离得到的记忆B细胞以1cell/well撒在表达小鼠CD40L、BAFF的饲养细胞上，使用添加了小鼠IL-2(4ng/mL)、IL-4(2ng/mL)、IL-5(5ng/mL)的RP MI培养基，在37℃、5％CO₂的条件下进行培养，回收培养后第10天的培养上清。

5)抗体蛋白的制备

从通过ELISA法观察到与各个S蛋白的结合性的记忆B细胞而合成cD NA，通过PCR法克隆抗体基因(重链、轻链V区)。

cDNA的合成如下进行。

将使用RNeasy Plus Mini Kit(QIAGEN)从细胞制备的RNA使用SuperSc ript^TMVILO^TM Master Mix(invitrogen)进行cDNA合成(42℃，120分钟)。

PCR通过以下的试剂和循环条件进行。

使用PrimeSTAR(注册商标)Max DNA Polymerase(TAKARA)，在98℃(5秒)、55℃(5秒)、72℃(30秒)，30个循环的条件下进行扩增。

将克隆的重链V区导入至包含人IgG1的C区的哺乳类表达用载体(pIg vector)中，将轻链V区导入至包含人Igkappa或者Iglambda的C区的哺乳类表达用载体(pIg vector)中，分别制备抗体表达载体。

将制备的抗体表达载体基因导入至Expi293细胞(THERMO FISHER SCI ENTIFIC公司)，使用Protein G从培养上清纯化重组抗体。

6)基于ELISA的抗体结合性的确认

通过ELISA法，测定单克隆抗体针对SARS-CoV2 RBD、SARS-CoV1RBD和MARS-CoVRBD的结合。以下，显示ELISA法的详细实施例。

将SARS-CoV2 RBD、SARS-CoV1 RBD或MARS-CoV RBD溶解于磷酸缓冲生理盐水(pH7.3)中，将50μL添加至96孔板中。在4℃静置过夜后，用磷酸缓冲生理盐水清洗各孔3次，添加110μl包含1％牛血清白蛋白的磷酸缓冲生理盐水。在室温下静置1个半小时后，用磷酸缓冲生理盐水(包含0.1％Tween20)清洗各孔3次，添加用包含0.1％Tween20和1％牛血清白蛋白的磷酸缓冲液阶段稀释的单克隆抗体50μL。在4℃静置过夜后，用磷酸缓冲生理盐水(包含0.1％Tween20)清洗各孔3次，用包含0.1％Tween20和1％牛血清白蛋白的磷酸缓冲生理盐水稀释的过氧化物酶标记抗人IgG抗体(Southern Biot ech)在每孔中添加50μL。在室温下静置1小时后，用磷酸缓冲生理盐水(包含0.1％Tween20)清洗各孔3次，将柠檬酸缓冲液(pH5.0)20mL作为底物，添加邻苯二胺片(o-phenylendiamine tablet)(SIGMA-ALDRICH)10mg和8μL的30％过氧化氢水(和光纯药工业)，将其以100μL添加至各孔。显色后通过50μl的2N硫酸(和光纯药工业)停止反应，使用Microplate Reader 450型(Bio-rad)测定490nm的吸收值。

7)中和试验

为了评价单克隆抗体对SARS-CoV2病毒感染的防御效果，进行了使用VSV假病毒的中和试验。以下示出中和试验的详细实施例。

将在DMEM培养基(含10％小牛血清和0.1％青霉素/链霉素)中阶段稀释的单克隆抗体与在DMEM培养基中稀释的表达CoV2 S蛋白的VSV假病毒混合，在培养箱(5％CO₂，37℃)中反应1小时。培养后，在96孔板中培养的Vero E6/TMPRSS2细胞中添加抗体和病毒的混合液。在培养箱(5％CO₂，37℃)内培养24小时后，将10μL的Bright-Glo Luciferase AssaySystem(Prome ga)添加到各孔中，使用GloMax NAVIGATOR(Promega)测定荧光素酶活性。

结果示于图2～4。

图2是表示记忆B细胞的分离结果的图。图3是表示针对各冠状病毒的抗体的分离结果的图。图4是表示使用了假病毒的中和活性的测定结果的图。

图3中，#108(NTCOV2-1)对SARS-CoV2具有特异性，#193(NTCOV2-2)表示出对SARS-CoV2/CoV1的交叉反应。

图4中，各抗体针对SARS-CoV2的中和活性的IC50为，NTCOV2-1为1.3ng/mL，NTCOV2-2为0.56ng/mL，VHH72为52ng/mL，B38为3460ng/mL，H4为426ng/mL。

此外，各抗体针对SARS-CoV的中和活性的IC50为，NTCOV2-2为13ng/mL。

[实施例2]

用于增加中和宽度和逃逸抗性的SARS-CoV-2抗体的双峰策略(bimodalstrategy)

(1)概要

SARS-CoV-2的受体结合位点(RBS)是强中和抗体的重要靶标，但表位的变异性妨碍了多个冠状病毒的交叉中和和针对逃逸变体的抗性。这次，我们鉴定了超强力交叉中和SARS-CoV-2病毒与SARS-CoV病毒这两者的人RBS抗体。交叉中和是通过重链与保守位点和轻链与RBS的双峰结合来实现的。独特的结合模式允许通过与超变区的最小相互作用而进行广泛的RBS掩蔽，增强了对包含感兴趣的新兴变异体的抗体逃逸变体的抗性。此外，抗体处理在预防性和治疗性设定下在仓鼠模型中提供了保护。在该实施例中，阐明了一种新的抗体策略，以获得广泛且强大的中和活性，这意味着广泛中和的治疗药和疫苗。

截至2021年1月27日(www.who.int)，SARS-CoV-2(CoV2)大流行在全世界引起1亿以上的传染病，造成200万人以上死亡。从恢复期的个体和人源化小鼠中分离出超过400个CoV2中和抗体(参考文献1)，一些表位结构已被解决以引导有效的疫苗和治疗药(参考文献2)。超强中和抗体的代表性靶标是与人细胞血管紧张素转换酶2(ACE2)直接接触的刺突(S)蛋白的受体结合位点(RBS)(参考文献3)。当包含CoV2和SARS-CoV(CoV1)的其他冠状病毒(CoV)间的RBS序列的保守性较低时，通过RBS抗体对多个CoV进行交叉中和的可能性降低。此外，现有的RBS抗体在使用单剂疗法时对逃逸突变敏感(参考文献4～6)。因此，这种结构数据推进了新的抗体疗法和疫苗设计，因此需要具有中和宽度和逃逸抗性的CoV2 RBS抗体。

(2)材料和方法

重组S蛋白抗原

商业合成了编码SARS-CoV-2分离株的刺突(S)蛋白质的人密码子优化核苷酸序列(GenBank：MN994467，核苷酸：21563～25384(SEQ ID NO.22))(Eurofinsgenomics)。将RBD(氨基酸：322～536(SEQ ID NO.23))与信号肽(氨基酸：1～20；MIHSVFLLMFLLTPTESYVD(SEQID NO.24))和组氨酸标签一起克隆到哺乳动物表达载体pCAGGS中。在哺乳动物表达载体pCMV中克隆了T4折叠子三聚体化结构域、组氨酸标签和包含strep-tag的刺突蛋白的可溶性版本(氨基酸：1-1201(SEQ ID NO.34))。改变蛋白质的氨基酸序列以去除多碱基切割位点(RRAR～A)，并引入两个稳定的突变(K986P和V987P；附加野生型编号)(参考文献32)。

将SARS-CoV-1(GenBank：EU371563，氨基酸：15-1195(SEQ ID NO.25))、MERS-CoV(GenBank：KF192507，氨基酸：13-1296(SEQ ID NO.26))、HCoV-NL63(GenBank：NC＿005831，氨基酸：22-1293(SEQ ID NO.27))、HCoV-OC43(GenBank：NC＿006213，氨基酸：12-1299(SEQID NO.28))、HCoV-229E(GenBank：NC＿002645，氨基酸：12-1109(SEQ ID NO.29))和HCoV-HKU1(GenBank：NC＿006577，氨基酸：13-1293(SEQ ID NO.30))的刺突蛋白也克隆至包含T4折叠子三聚体化结构域、组氨酸标签和strep-tag的pMT载体中。

与组氨酸标签一起，将SARS-CoV-1(氨基酸：310-509)和MERS-CoV(氨基酸：367-606)的S蛋白的RBD也克隆到哺乳动物表达载体pHLsec中。位置A475V，E484K，Q493R，R346S，N440K和Y453F中的SARS-CoV-2的RBD突变体是通过使用了引物的位点直接诱变来制备的，所述引物导入了基于相关核苷酸置换和RBD表达载体的Gibson Assembly(NEB)。使用果蝇表达系统或Expi293F细胞(Thermo Fisher Scientific)产生重组蛋白。在转染后的第5天，从转染细胞采集上清，并使用Ni-NTA琼脂糖(Qiagen)和/或链球菌素琼脂糖凝胶(Sigmaaldrich)纯化重组蛋白。为了制备S蛋白-荧光色素探针，使SARS-CoV-2的重组RBD和S蛋白与APC和PE(Dojindo)结合。

小鼠和免疫

如上所述建立TC-mAb小鼠(参考文献7)。与佐剂AddaVax(InvivoGen)一起用SARS-CoV-2刺突蛋白的重组RBD(10μg/body)对小鼠进行i.p.免疫化，每隔21天用SARS-CoV-1、SARS-CoV-2和MERS-CoV的重组RBD或S蛋白连续加强。在追加免疫后第7天采集血清，检查抗原特异性人IgG抗体滴度。在SPF条件下保持所有小鼠，在7～14周龄时使用。所有老鼠的操作都是按照日本国立传染病研究所的动物实验委员会的指导方针进行的。

ELISA法

对ELISA板用SARS-CoV-1、SARS-CoV-2和MERS-CoV的S蛋白的RBD、SARS-CoV-2的RBD和SARS-CoV-2的RBD突变体、E484K、Q493R、R346S、N440K和Y453F或SARS-CoV-1、SARS-CoV-2、MERS-CoV、HCo V-NL63、HCoV-OC43、HCoV-229E和HCoV-HKU1的三聚体S蛋白中的任一种涂布2μg/ml。在一些实验中，涂布抗原的浓度变为0.2μg/ml或5μg/ml。用包含1％BSA的PBS封闭后，将连续稀释的血清、单细胞的培养上清或mAb应用于板上，然后与山羊抗人IgG-HRP(Southern Biotech，Cat#：2040-05,1：5000)一起孵育。HRP活性用OPD底物(Sigma)可视化，使用iMark Mic roplate Reader(Bio-Rad)测定OD490。

流式细胞术解析

用抗FcγRII/III mAb预处理TC-mAb小鼠的脾细胞，接着与针对小鼠CD43、CD90、CD3、c-kit、F4/80、Gr-1、CD4、CD8、CD11b、Ter119、CD93、CD11c、CD138和人IgD的生物素化mAb一起孵化。通过使用了链霉亲和素微珠(Miltenyi Biotec)的MACS系统对类别转换记忆B细胞进行了浓缩。接着用B220-BV786、CD38-AF700、PE标记CoV2-S、APC标记CoV2-RBD、streptavidin-efluor450、DAPI进行了染色。对染色的细胞进行分析，使用FAC SAria装置(BD Bioscience)以单细胞分选至96孔板中。

单细胞培养

在单个B细胞分选前1天，在B细胞培养基(BCM；含有10％Hyclone FBS，1mM丙酮酸钠，10mM HEPES，MEM非必须氨基酸，100IU/mL青霉素，100μg/mL链霉素和55μM 2-巯基乙醇的RPMI-1640)中，以每孔1000NB 21.2D9细胞将饲养细胞(NB21.2D9细胞)接种至96孔板中。第二天，将BCM中的小鼠IL-4(Peprotech：2ng/mL)添加至培养物中，将小鼠/人B细胞以每孔1细胞直接分选至96孔板中，接着与饲养细胞共培养。培养后，回收培养上清，进行用于定位分泌的mAb的表位的ELISA。此外，将培养克隆B细胞冷冻，进行用于制作重组mAb的V(D)J序列解析和V(D)J基因回收。

mAbs的生成

基于先前报道的发现而制备重组单克隆抗体(参考文献8、33)。简而言之，将从单细胞培养物或公开的mAb(REGN10933，REGN10987，S309)中选择的B细胞样品的V_H/V_L基因克隆到人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4重链和κ或λ轻链表达载体中。根据制造商的指示，将一对重链和轻链载体转染到Expi293F细胞(Thermo Fisher Scientific，Cat#：A14527)。然后，使用蛋白质G柱(Thermo Fisher Scientific)从培养上清中纯化抗体，对PBS透析后用于进一步的分析。

ACE2结合抑制

为了确定通过抗体抑制SARS-CoV2 RBD向ACE2的结合，将重组人ACE2(Biolegend)在4℃下在96孔板(Corning)上涂覆过夜。用包含1％BSA的PBS封闭后，将具有Avitag的重组SARS-CoV2 RBD与连续稀释抗体一起在RT下预孵育2小时。将混合物转移到ACE2包覆板的孔中，然后在4℃下孵育过夜。使用链霉亲和素-HRP(Southern Biotech公司)和OPD-底物(Sigma-Aldri ch公司)开发了SARS-CoV2 RBD向ACE2的结合。使用酶标仪(BioRad)读取490nm处的吸光度。抑制百分率计算为(阳性对照的O.D.值样品的O.D.值)/(阳性对照的O.D.值阴性对照的O.D.值)×100。使用非线性回归曲线拟合(GraphP ad Prism)确定半数最大有效浓度(EC50)。

病毒中和测定

为了进行假病毒病毒中和测定，将具有SARS-CoV2或SARS-CoV1刺突蛋白的VSVpsuedovirus与连续稀释抗体一起在37℃下孵育1小时。将接种在96孔固体白色平底板(Corning)中的VeroE6或VeroE6/TMPRSS2细胞接种到混合物中，然后在37℃下与5％CO2一起孵育24小时。使用GroMax Nav igator Microplate Liminomater(Promega)，使用亮萤光素酶测定系统(Promega)测定培养的细胞中的荧光素酶活动。中和百分比计算为(病毒控制信号-样品信号)/(病毒控制信号-仅细胞的控制信号)×100。使用非线性回归曲线拟合(Graph Pad Prism)确定半数最大抑制浓度(IC₅₀)。

为了进行真病毒中和试验，将1100TCID₅₀的SARS-CoV-2JPN/TY/WK-521株和连续稀释抗体在37℃孵育1小时后，置于96孔平底板(TPP)上接种的VeroE6/TMPRSS2细胞(JCRB1819，JCRB细胞库)上。在37℃、5％CO₂下培养5天后，用20％福尔马林(FUJIFILM)固定，用结晶紫液(Sigma-Aldrich)染色，用Epoch2(Biotek)测定595nm的吸光度。中和百分比计算为(样品信号-病毒控制信号)/(仅细胞的控制信号-病毒控制信号)×100。

SPR

将NT-108和NT-193的全长片段和Fab片段溶解在HBS-EP缓冲液(10mM HEPESpH7.4,150mM NaCl，3mM EDTA，0.005％表面活性剂P20)中。SPR实验使用Biacore3000或T200(Cytiva)进行。生物素化的S-RBD蛋白通过流过使用标准胺偶联试剂盒通过胺偶联固定了链霉亲和素的CM5传感器芯片或CAP芯片(Cytiva)中来固定。作为阴性对照蛋白使用了β2-微球蛋白。将NTCOV抗体以30μl/分钟的流速注入固定的S-RBD蛋白上。使用BIAevaluation版本4.1.1、T200 evaluation版本1.0和ORIGIN版本2017软件分析数据。

结晶化、数据收集和结构决定

S-RBD-NT-108络合物的结晶在293K下通过坐滴蒸气扩散法(Sitting Drop VaporDiffusion Crystallization)生长。最终结晶条件为0.1M HEPES pH 7.5、10％(w/v)PEG8000、8％(w/v)乙二醇。将结晶在液氮中冷冻，并在光子工厂(Photon Factory)(筑波，日本)的光束线BL-17A下进行X射线衍射实验。用XDS处理X射线衍射数据集，并在CCP4程序包中用Aimless缩放。通过使用了以S-RBD结构(PDB ID：7jmp)为搜索探针的PHENIX封装的Phaser程序的分子置换法来阐明结构，并使用phenix.refine和COOT进行结构细化。使用Molprobity评价结构的立体化学性质。使用PyMOL(http：//PyMOL.sourceforge.net)制备图5-2、图6-7和图6-8。在CCP4程序包中使用PISA和CONTACT分析分子间接触原子。

体内负载试验

为了确定仓鼠模型中抗体处理对SARS-CoV2病毒感染的防御，在叙利亚仓鼠(i)中腹腔注射盐酸氯胺酮/甲苯噻嗪，然后在SARS-CoV2病毒JPN/TY/WK-521/2020以80μL的容量以10⁴TCID₅₀的给药量感染的i.n.(鼻腔内)进行麻醉。在200μL的恒定体积中，以5或1.25mg/kg体重的PBS稀释抗体，然后通过腹腔注射在用于预防性处置的病毒攻击(viruschallenge)2小时前或用于治疗性处置的病毒攻击的1天后中的任一时间进行给药。对于全部的仓鼠，每天检测生存率和体重减少直至感染后6天为止。将仁慈终点(humaneendpoint)设定为与病毒攻击时(第0天)的初始体重相比减少25％体重。

病毒RNA的qRT-PCR分析

病毒量通过检测SARS-CoV-2的核衣壳基因组RNA的qRT-PCR进行测定。使用Direct-zol miniprep试剂盒(Zymo580 research，Cat.No.R2050)从肺匀浆中提取肺的全部RNA。使用TissueLyser LT(Qiagen)制备全肺匀浆。qRT-PCR反应使用QuantiTect ProbeRT-PCR试剂盒(Qiagen#204443)在45个周期中复制，周期协议为：30分钟50℃，15分钟95℃，然后15秒95℃，1分钟60℃。qRT-PCR中使用的引物和探针序列为正向：5’-AAATTTTGGGGACCAGGAAC-3’(SEQ ID NO.31)，反向：5’-TGGCAGCTGTGTAGGTCAAC-3’(SEQ IDNO.32)，探针：5’FAM-ATGTCGCGCATTGGCATGGA-BHQ-3’(SEQ ID NO.33)。校准曲线使用具有已知的拷贝数(10～10⁶拷贝/μL)的纯化PCR产物的连续10倍稀释进行构建

(3)结果和考察等

在该实施例中，在小鼠Ig敲除背景下，利用了稳定保持进行了包含全人Ig重链和κ链基因座的基因操作的染色体的TC-mAb小鼠(参考文献7)。如图6-1所示，在用多个抗原连续免疫后，如前所述，分选出与CoV2受体结合域(RBD)结合的B细胞用于单细胞培养(参考文献8)。在高亲和性CoV2 RBD结合物中，从基于VSV的假病毒测定的两个克隆中检测到CoV2中和活性(图5-1A)。一个克隆(#108)对CoV2 RBD具有株特异性，另一个克隆(#193)对CoV2/CoV1 RBD具有交叉反应性。以下，#108和#193克隆分别标记为NT-108和NT-193。

RBS抗体通常由公共V_H基因(参考文献9；参考文献10)编码，而NT-108和NT-193分别利用非典型IGHV6-1和IGHV4-34基因(图6-2)。来自COVID-19患者(截止2021年1月17日)的658种CoV2 RBD抗体中，只有2种IGHV6-1编码抗体被委托给CoV-AbDab数据库(参考文献1)。相反，自反应抗体(参考文献11)的代表性V_H基因IGHV4-34更频繁地从COVID-19患者(参考文献12)的B细胞中回收，并被CoV-AbDab数据库(参考文献1)的11种CoV2RBD抗体利用。值得注意的是，在11种V4-34编码的RBD抗体(参考文献13)中有两种检测到CoV1交叉反应性，并且该V_H基因可能促进CoV1交叉反应性。

RBS表位具有两个类型的分类，可通过一个分类(参考文献14)中的1类(class1)和2类(class2)以及另一分类(参考文献2)中的A、B和C来细分。此外，在刺突RBD内存在非RBS表位，其显示为3类(class3)/4类(class4)或S309-潜在性/CR3022-蛋白聚糖位点中的任一种。4类(CR3022-蛋白聚糖)表位通常被不充分或非中和克隆靶向(参考文献15)，由此，本发明人从进一步的分析中排除了针对该类的抗体。基于NT-108和NT-193V_H/V_L序列表达重组人IgG1/κ抗体。为了比较，还制备了来自人源化小鼠的REGN10933和来自人的REGN10987抗体(参考文献4)，这是因为抗体混合物对于用于治疗用途的动物模型和人中是有效的(参考文献16、17)。此外，作为CoV1/CoV2交叉中和抗体的代表而表达针对3类表位的S309抗体(参考文献15、18)。NT-108和NT-193这两者的IgG1均抑制了RBD与人ACE2的结合(图5-1B)，而非RBS抗体S309未抑制(图6-3)。为了获得对这些表位类的进一步了解，实施了RBD 1类-3类表位被各类的代表性抗体掩蔽的竞争ELISA(图5-1C)。2类抗体(C002)的强力竞争加强了NT-108和NT-193这两者实质上都是RBS抗体。1类抗体的进一步竞争表明NT-193识别包含1类和2类的表位。NT-108和NT-193可能在相互竞争时识别部分重叠的表位。重要的是，这两种抗体对CoV2假病毒和真病毒都显示出非常强的中和活性，并且该IC₅₀与REGN抗体(一位数或两位数ng/mL)相同程度强(图5-1D和5-1E)。如表面等离子共振(SPR)解析所证明的，强中和活性得到针对RBD的显着的高亲和性(表观的亲和性为～10^-11～-12M)支持(图5-1F)。因此，尽管不是使用以往的V_H，NT-108和NT-193这两者都是高度中和的RBS抗体。

NT-108和NT-193之间的明确特征是针对CoV1的交叉反应性(图5-1A)。本发明人还研究了它们对包含MERS和四个季节性CoV的各种CoVS三聚体的交叉反应性(图6-4)。从NT-108没有检测到对任何CoV的交叉反应性，NT-193的交叉反应性仅限于CoV1。值得注意的是，NT-193以高亲和性与CoV1RBD结合(图6-5)，以与CoV2病毒相同的强度中和CoV1(图5-1G)。CoV1/CoV2交叉中和抗体从若干组(参考文献13、18～20)分离出，但对CoV1或CoV2中的任一种或这两者的中和活性通常比NT-193(6.1ng/mL IC₅₀)弱(＞100ng/mL IC₅₀)。因此，NT-193是强力并且同等地中和CoV2和CoV1病毒这两者的独特的RBS抗体

在各个CoV2病毒粒子(参考文献21)的表面上只显示了24±9S的三聚体。如先前在HIV-1(参考文献22)中所观察到的，这种低密度的S蛋白可能干扰跨S蛋白交联所需的基于抗体的二价键。在HIV-1中，通过与具有长柔性铰链区的IgG3亚类相关的Env结合抗体，实现了交联的增加(参考文献23)。为了模仿CoV2病毒粒子上的低密度的RBS表位，将RBD蛋白以非饱和浓度涂覆在ELISA板上(图6-6)。然后，将IgG1、IgG2、IgG3和IgG4亚类的NT-108和NT-193添加到用于评价结合活性的板中。在RBD的饱和浓度的结合曲线中没有观察到亚类依赖性的差异，但是与其他IgG亚类相比，结合到RBD的非饱和浓度的IgG3亚类的量增加。通过使用假CoV2病毒和真CoV2病毒的病毒中和测定，确认了IgG3亚类中的优良活性(图6-6)。

为了阐明S蛋白与抗体相互作用的结构方面，进行了X射线结晶解析。成功地获得了S-RBD蛋白与NT-193的Fab片段的复合体的结晶。以

分辨率测定络合物的结构(表2-1)。

[表2-1]

NT-193识别与ACE2的结合位点广泛重叠的S-RBD的上部区域(图5-2A)。1类/RBS-A/B抗体(参考文献2、14)也识别上部区域，但NT-193的识别方式明显不同，并且是独特的(图5-2B和图6-7A)。特别是，NT-193抗体不仅使用轻链CDR-L1和CDR-L3，还使用框架区、DE环来识别ACE2结合位点(图5-2C和5-2D、表2-2)。

[表2-2]

NT-193轻链(B链)与S-RBD(C链)

NT-193重链(A链)与S-RBD(C链)(续)

另一方面，重链突出的CDR-H3CDR-H3与CDR-H1和CDR-H2的一小部分一起结合到邻近ACE2结合位点的CoV1/CoV2保守区域结合(图5-2E和5-2F、以及图6-8和图6-9)。这些结构特征是抗体复合体的非典型性的结合模式(图6-7B)，可能有助于强中和活性和针对CoV2和CoV1的交叉反应性。

详细查看CDR区域的结合界面时(表2-3)，关于CDR-L3，Phe-94与S-RBD的Tyr-449发生π-π相互作用(图5-2G)

[表2-3]

NT-193重链(A链)与S-RBD(C链)

NT-193重链(A链)与S-RBD(C链)(续)

此外，S-RBD的Tyr505由包含CDR-L3的Trp97和Leu95和CDR-H1的Tyr33的疏水片包围(图6-8B)。另一方面，CDR-L1的Tyr33与Leu455进行疏水相互作用，与Lys417和Tyr453进行极性相互作用(图5-2H)。有趣的是，DE环的主链与S-RBD进行氢键合，还夹在Tyr-489和Phe-486之间(图5-2C和5-2I)。接下来，在重链CDR-H3中观察到大的疏水相互作用，包含识别CoV-1/2保守区域的3个连续酪氨酸，Tyr-103、Tyr-104、Tyr-105(图5-2F)。特别是，Tyr-104突出得很深，与S-RBD的Lys-417和Arg-403发生π-阳离子相互作用(图6-8C)。综上所述，NT-193的轻链的CoV2 S-RBD上的表位覆盖了大部分ACE2结合位点，而其重链的CDR-H3识别可能与膜融合前三聚体的形成相关的CoV-1/2保守区域(图6-8A)。与其他报道的抗体的重链相反，NT-193选择性地以所需的最小限度的足迹靶向脆弱的位点，并表现出强中和活性和交叉反应性(图6-9)。

近年来，出现了一些变异株，被称为关切变异株(VOC)的病原性、传播性、抗原性可能发生改变。接着，评价NT-193对几个VOC株(来自501Y.V1的3株，来自501Y.V3的1株)的交叉中和活性(图5-3A)。需要注意的是，501Y.V3株具有E484K突变，所述E484K突变通过单治疗用途(参考文献25)使含有REGN10933、LY-CoV555的RBS抗体的中和活动减少10-1000倍。此外，501Y.V3株具有熊K417的突变，其能够从REGN10933和LY-COV016(参考文献4、26、27)逃逸。尽管存在这些突变，NT-193在中和原始武汉株所需的较低的浓度下，也中和了所有这些VOC(数据在提交之前被替换为IC50)。这些数据强调NT-193对传统RBS抗体的逃逸突变的出现的抗性的增加。

使用叙利亚仓鼠模型，研究了NT-193单独疗法或NT-108/NT-193的混合物的预防性和治疗性效果。该混合物在体外逃逸筛选下防止了逃逸变体的出现(图6-8)。在对仓鼠鼻腔内(治疗性)攻击接种SARS-CoV-2的2小时前(预防性)或1天后(治疗性)给药2剂量(5mg/kg和1.25mg/kg)(图5-4A)。基于单剂给药或其混合物的预防在感染后第6天之前预防了严重的仓鼠的体重减少(图5-4B)。关于其预防效果，5mg/kg的抗体比1.25mg/kg的抗体更为显著，其效果早在感染后第2天就很明显了。处置组和未处置组之间的体重的差异在以后的时间点进一步扩大。与预防一样，所有治疗处置在感染后第6天之前预防了仓鼠的体重减少(图5-4C)，但其效果与预防效果相比略有减弱。此外，还评价了对SARS-CoV-2引起的肺部病变的预防效果及治疗效果。在第6天，无论单剂给药或混合物给药，抗体给药仓鼠的肺与对照仓鼠的肺相比，炎症性损伤较少(图5-4D和图6-9)。

NT-193结合模式的明确特征是双峰抗原识别，这在病毒中和抗体中是独特的。交叉反应性主要通过保守位点的重链识别而获得，中和通过RBS的轻链识别实现(图5-2C和图6-7B)。能够实现基于NT-193的高亲和性结合的重要接触位点是CoV/CoV2保守位点中的R403和K417。这些氨基酸中的非保守性可能是NT-193对MERS缺乏交叉反应性的原因(P403和P417)(图5-2D和5-2E、以及图6-9)。相反，这些氨基酸在进化枝1b(SARS-CoV-2等)、进化枝1a(SARS-CoV等)、进化枝2HKU3和进化枝3(BM48-31等)病毒中的相对保守性意味着NT-193对多个进化枝(参考文献28)中的这些SARS样病毒的广泛覆盖。

中和RBS抗体常常由具有类似的结合模式和足迹的公共V_H基因编码(参考文献9、10)。由于有限的多样性，这种集中的抗体响应可增加产生抗体逃逸突变的风险。实质上，免疫缺陷的COVID-19患者中的持续性感染会产生包括E484K突变的变体(参考文献29)在内的几种变体，并能够从收敛中和抗体(参考文献30)中逃逸。新兴的VOC拥有E484K突变(参考文献31)，引起了从疫苗诱发型免疫和治疗用抗体中的病毒逃逸的担忧。因此，有必要采取对逃逸变异具有抵抗性的对策。此外，希望增加针对具有在动物宿主中循环的大流行的可能性的SARS样CoV的广泛中和活性。本发明人等认为NT-193是通过独特的结合模式而具有这种活性的候选者之一。关于结合模式的更多的结构信息可以为多个SARS样CoV和正在出现的逃逸变体提供广泛的疫苗和治疗药。

(4)参考文献

本实施例中所述的参考文献1～33的详细内容如下。

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[序列表的非关键文字(Sequence Listing Free Text)]

SEQ ID NO.21：合成DNA

SEQ ID NO.24：合成肽

SEQ ID NO.31：合成DNA

SEQ ID NO.32：合成DNA

SEQ ID NO.33：合成DNA

序列表

<110> National University Corporation Tottori University

国立大学法人鸟取大学

<120> 针对冠状病毒的抗体

<130> G2715WO

<150> JP 2020-155314

<151> 2020-09-16

<150> JP 2021-025438

<151> 2021-02-19

<160> 34

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 3822

<212> DNA

<213> SARS-CoV-2

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(3822)

<400> 1

atg ttt gtt ttt ctt gtt tta ttg cca cta gtc tct agt cag tgt gtt 48

Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val

1 5 10 15

aat ctt aca acc aga act caa tta ccc cct gca tac act aat tct ttc 96

Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe

20 25 30

aca cgt ggt gtt tat tac cct gac aaa gtt ttc aga tcc tca gtt tta 144

Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu

35 40 45

cat tca act cag gac ttg ttc tta cct ttc ttt tcc aat gtt act tgg 192

His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp

50 55 60

ttc cat gct ata cat gtc tct ggg acc aat ggt act aag agg ttt gat 240

Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp

65 70 75 80

aac cct gtc cta cca ttt aat gat ggt gtt tat ttt gct tcc act gag 288

Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu

85 90 95

aag tct aac ata ata aga ggc tgg att ttt ggt act act tta gat tcg 336

Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser

100 105 110

aag acc cag tcc cta ctt att gtt aat aac gct act aat gtt gtt att 384

Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile

115 120 125

aaa gtc tgt gaa ttt caa ttt tgt aat gat cca ttt ttg ggt gtt tat 432

Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr

130 135 140

tac cac aaa aac aac aaa agt tgg atg gaa agt gag ttc aga gtt tat 480

Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr

145 150 155 160

tct agt gcg aat aat tgc act ttt gaa tat gtc tct cag cct ttt ctt 528

Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu

165 170 175

atg gac ctt gaa gga aaa cag ggt aat ttc aaa aat ctt agg gaa ttt 576

Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe

180 185 190

gtg ttt aag aat att gat ggt tat ttt aaa ata tat tct aag cac acg 624

Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr

195 200 205

cct att aat tta gtg cgt gat ctc cct cag ggt ttt tcg gct tta gaa 672

Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu

210 215 220

cca ttg gta gat ttg cca ata ggt att aac atc act agg ttt caa act 720

Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr

225 230 235 240

tta ctt gct tta cat aga agt tat ttg act cct ggt gat tct tct tca 768

Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser

245 250 255

ggt tgg aca gct ggt gct gca gct tat tat gtg ggt tat ctt caa cct 816

Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro

260 265 270

agg act ttt cta tta aaa tat aat gaa aat gga acc att aca gat gct 864

Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala

275 280 285

gta gac tgt gca ctt gac cct ctc tca gaa aca aag tgt acg ttg aaa 912

Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys

290 295 300

tcc ttc act gta gaa aaa gga atc tat caa act tct aac ttt aga gtc 960

Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val

305 310 315 320

caa cca aca gaa tct att gtt aga ttt cct aat att aca aac ttg tgc 1008

Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys

325 330 335

cct ttt ggt gaa gtt ttt aac gcc acc aga ttt gca tct gtt tat gct 1056

Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala

340 345 350

tgg aac agg aag aga atc agc aac tgt gtt gct gat tat tct gtc cta 1104

Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu

355 360 365

tat aat tcc gca tca ttt tcc act ttt aag tgt tat gga gtg tct cct 1152

Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro

370 375 380

act aaa tta aat gat ctc tgc ttt act aat gtc tat gca gat tca ttt 1200

Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe

385 390 395 400

gta att aga ggt gat gaa gtc aga caa atc gct cca ggg caa act gga 1248

Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly

405 410 415

aag att gct gat tat aat tat aaa tta cca gat gat ttt aca ggc tgc 1296

Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys

420 425 430

gtt ata gct tgg aat tct aac aat ctt gat tct aag gtt ggt ggt aat 1344

Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn

435 440 445

tat aat tac ctg tat aga ttg ttt agg aag tct aat ctc aaa cct ttt 1392

Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe

450 455 460

gag aga gat att tca act gaa atc tat cag gcc ggt agc aca cct tgt 1440

Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys

465 470 475 480

aat ggt gtt gaa ggt ttt aat tgt tac ttt cct tta caa tca tat ggt 1488

Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly

485 490 495

ttc caa ccc act aat ggt gtt ggt tac caa cca tac aga gta gta gta 1536

Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val

500 505 510

ctt tct ttt gaa ctt cta cat gca cca gca act gtt tgt gga cct aaa 1584

Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys

515 520 525

aag tct act aat ttg gtt aaa aac aaa tgt gtc aat ttc aac ttc aat 1632

Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn

530 535 540

ggt tta aca ggc aca ggt gtt ctt act gag tct aac aaa aag ttt ctg 1680

Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu

545 550 555 560

cct ttc caa caa ttt ggc aga gac att gct gac act act gat gct gtc 1728

Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val

565 570 575

cgt gat cca cag aca ctt gag att ctt gac att aca cca tgt tct ttt 1776

Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe

580 585 590

ggt ggt gtc agt gtt ata aca cca gga aca aat act tct aac cag gtt 1824

Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val

595 600 605

gct gtt ctt tat cag gat gtt aac tgc aca gaa gtc cct gtt gct att 1872

Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile

610 615 620

cat gca gat caa ctt act cct act tgg cgt gtt tat tct aca ggt tct 1920

His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser

625 630 635 640

aat gtt ttt caa aca cgt gca ggc tgt tta ata ggg gct gaa cat gtc 1968

Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val

645 650 655

aac aac tca tat gag tgt gac ata ccc att ggt gca ggt ata tgc gct 2016

Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala

660 665 670

agt tat cag act cag act aat tct cct cgg cgg gca cgt agt gta gct 2064

Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala

675 680 685

agt caa tcc atc att gcc tac act atg tca ctt ggt gca gaa aat tca 2112

Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser

690 695 700

gtt gct tac tct aat aac tct att gcc ata ccc aca aat ttt act att 2160

Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile

705 710 715 720

agt gtt acc aca gaa att cta cca gtg tct atg acc aag aca tca gta 2208

Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val

725 730 735

gat tgt aca atg tac att tgt ggt gat tca act gaa tgc agc aat ctt 2256

Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu

740 745 750

ttg ttg caa tat ggc agt ttt tgt aca caa tta aac cgt gct tta act 2304

Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr

755 760 765

gga ata gct gtt gaa caa gac aaa aac acc caa gaa gtt ttt gca caa 2352

Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln

770 775 780

gtc aaa caa att tac aaa aca cca cca att aaa gat ttt ggt ggt ttt 2400

Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe

785 790 795 800

aat ttt tca caa ata tta cca gat cca tca aaa cca agc aag agg tca 2448

Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser

805 810 815

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Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly

820 825 830

ttc atc aaa caa tat ggt gat tgc ctt ggt gat att gct gct aga gac 2544

Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp

835 840 845

ctc att tgt gca caa aag ttt aac ggc ctt act gtt ttg cca cct ttg 2592

Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu

850 855 860

ctc aca gat gaa atg att gct caa tac act tct gca ctg tta gcg ggt 2640

Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly

865 870 875 880

aca atc act tct ggt tgg acc ttt ggt gca ggt gct gca tta caa ata 2688

Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile

885 890 895

cca ttt gct atg caa atg gct tat agg ttt aat ggt att gga gtt aca 2736

Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr

900 905 910

cag aat gtt ctc tat gag aac caa aaa ttg att gcc aac caa ttt aat 2784

Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn

915 920 925

agt gct att ggc aaa att caa gac tca ctt tct tcc aca gca agt gca 2832

Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala

930 935 940

ctt gga aaa ctt caa gat gtg gtc aac caa aat gca caa gct tta aac 2880

Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn

945 950 955 960

acg ctt gtt aaa caa ctt agc tcc aat ttt ggt gca att tca agt gtt 2928

Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val

965 970 975

tta aat gat atc ctt tca cgt ctt gac aaa gtt gag gct gaa gtg caa 2976

Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln

980 985 990

att gat agg ttg atc aca ggc aga ctt caa agt ttg cag aca tat gtg 3024

Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val

995 1000 1005

act caa caa tta att aga gct gca gaa atc aga gct tct gct aat 3069

Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn

1010 1015 1020

ctt gct gct act aaa atg tca gag tgt gta ctt gga caa tca aaa 3114

Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys

1025 1030 1035

aga gtt gat ttt tgt gga aag ggc tat cat ctt atg tcc ttc cct 3159

Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro

1040 1045 1050

cag tca gca cct cat ggt gta gtc ttc ttg cat gtg act tat gtc 3204

Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val

1055 1060 1065

cct gca caa gaa aag aac ttc aca act gct cct gcc att tgt cat 3249

Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His

1070 1075 1080

gat gga aaa gca cac ttt cct cgt gaa ggt gtc ttt gtt tca aat 3294

Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn

1085 1090 1095

ggc aca cac tgg ttt gta aca caa agg aat ttt tat gaa cca caa 3339

Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln

1100 1105 1110

atc att act aca gac aac aca ttt gtg tct ggt aac tgt gat gtt 3384

Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val

1115 1120 1125

gta ata gga att gtc aac aac aca gtt tat gat cct ttg caa cct 3429

Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro

1130 1135 1140

gaa tta gac tca ttc aag gag gag tta gat aaa tat ttt aag aat 3474

Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn

1145 1150 1155

cat aca tca cca gat gtt gat tta ggt gac atc tct ggc att aat 3519

His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn

1160 1165 1170

gct tca gtt gta aac att caa aaa gaa att gac cgc ctc aat gag 3564

Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu

1175 1180 1185

gtt gcc aag aat tta aat gaa tct ctc atc gat ctc caa gaa ctt 3609

Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu

1190 1195 1200

gga aag tat gag cag tat ata aaa tgg cca tgg tac att tgg cta 3654

Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu

1205 1210 1215

ggt ttt ata gct ggc ttg att gcc ata gta atg gtg aca att atg 3699

Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met

1220 1225 1230

ctt tgc tgt atg acc agt tgc tgt agt tgt ctc aag ggc tgt tgt 3744

Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys

1235 1240 1245

tct tgt gga tcc tgc tgc aaa ttt gat gaa gac gac tct gag cca 3789

Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro

1250 1255 1260

gtg ctc aaa gga gtc aaa tta cat tac aca taa 3822

Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr

1265 1270

<210> 2

<211> 1273

<212> PRT

<213> SARS-CoV-2

<400> 2

Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val

1 5 10 15

Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe

20 25 30

Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu

35 40 45

His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp

50 55 60

Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp

65 70 75 80

Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu

85 90 95

Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser

100 105 110

Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile

115 120 125

Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr

130 135 140

Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr

145 150 155 160

Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu

165 170 175

Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe

180 185 190

Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr

195 200 205

Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu

210 215 220

Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr

225 230 235 240

Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser

245 250 255

Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro

260 265 270

Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala

275 280 285

Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys

290 295 300

Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val

305 310 315 320

Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys

325 330 335

Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala

340 345 350

Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu

355 360 365

Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro

370 375 380

Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe

385 390 395 400

Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly

405 410 415

Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys

420 425 430

Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn

435 440 445

Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe

450 455 460

Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys

465 470 475 480

Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly

485 490 495

Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val

500 505 510

Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys

515 520 525

Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn

530 535 540

Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu

545 550 555 560

Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val

565 570 575

Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe

580 585 590

Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val

595 600 605

Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile

610 615 620

His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser

625 630 635 640

Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val

645 650 655

Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala

660 665 670

Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala

675 680 685

Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser

690 695 700

Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile

705 710 715 720

Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val

725 730 735

Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu

740 745 750

Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr

755 760 765

Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln

770 775 780

Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe

785 790 795 800

Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser

805 810 815

Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly

820 825 830

Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp

835 840 845

Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu

850 855 860

Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly

865 870 875 880

Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile

885 890 895

Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr

900 905 910

Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn

915 920 925

Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala

930 935 940

Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn

945 950 955 960

Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val

965 970 975

Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln

980 985 990

Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val

995 1000 1005

Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn

1010 1015 1020

Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys

1025 1030 1035

Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro

1040 1045 1050

Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val

1055 1060 1065

Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His

1070 1075 1080

Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn

1085 1090 1095

Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln

1100 1105 1110

Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val

1115 1120 1125

Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro

1130 1135 1140

Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn

1145 1150 1155

His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn

1160 1165 1170

Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu

1175 1180 1185

Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu

1190 1195 1200

Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu

1205 1210 1215

Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met

1220 1225 1230

Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys

1235 1240 1245

Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro

1250 1255 1260

Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr

1265 1270

<210> 3

<211> 669

<212> DNA

<213> SARS-CoV-2

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(669)

<400> 3

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Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

1 5 10 15

ttg tgc cct ttt ggt gaa gtt ttt aac gcc acc aga ttt gca tct gtt 96

Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val

20 25 30

tat gct tgg aac agg aag aga atc agc aac tgt gtt gct gat tat tct 144

Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

35 40 45

gtc cta tat aat tcc gca tca ttt tcc act ttt aag tgt tat gga gtg 192

Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val

50 55 60

tct cct act aaa tta aat gat ctc tgc ttt act aat gtc tat gca gat 240

Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

tca ttt gta att aga ggt gat gaa gtc aga caa atc gct cca ggg caa 288

Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln

85 90 95

act gga aag att gct gat tat aat tat aaa tta cca gat gat ttt aca 336

Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr

100 105 110

ggc tgc gtt ata gct tgg aat tct aac aat ctt gat tct aag gtt ggt 384

Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly

115 120 125

ggt aat tat aat tac ctg tat aga ttg ttt agg aag tct aat ctc aaa 432

Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys

130 135 140

cct ttt gag aga gat att tca act gaa atc tat cag gcc ggt agc aca 480

Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr

145 150 155 160

cct tgt aat ggt gtt gaa ggt ttt aat tgt tac ttt cct tta caa tca 528

Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser

165 170 175

tat ggt ttc caa ccc act aat ggt gtt ggt tac caa cca tac aga gta 576

Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val

180 185 190

gta gta ctt tct ttt gaa ctt cta cat gca cca gca act gtt tgt gga 624

Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

195 200 205

cct aaa aag tct act aat ttg gtt aaa aac aaa tgt gtc aat ttc 669

Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe

210 215 220

<210> 4

<211> 223

<212> PRT

<213> SARS-CoV-2

<400> 4

Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

1 5 10 15

Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val

20 25 30

Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

35 40 45

Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val

50 55 60

Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln

85 90 95

Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr

100 105 110

Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly

115 120 125

Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys

130 135 140

Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr

145 150 155 160

Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser

165 170 175

Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val

180 185 190

Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

195 200 205

Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe

210 215 220

<210> 5

<211> 3768

<212> DNA

<213> SARS-CoV

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(3768)

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atg ttt att ttc tta tta ttt ctt act ctc act agt ggt agt gac ctt 48

Met Phe Ile Phe Leu Leu Phe Leu Thr Leu Thr Ser Gly Ser Asp Leu

1 5 10 15

gac cgg tgc acc act ttt gat gat gtt caa gct cct aat tac act caa 96

Asp Arg Cys Thr Thr Phe Asp Asp Val Gln Ala Pro Asn Tyr Thr Gln

20 25 30

cat act tca tct atg agg ggg gtt tac tat cct gat gaa att ttt aga 144

His Thr Ser Ser Met Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Glu Ile Phe Arg

35 40 45

tca gac act ctt tat tta act cag gat tta ttt ctt cca ttt tat tct 192

Ser Asp Thr Leu Tyr Leu Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Tyr Ser

50 55 60

aat gtt aca ggg ttt cat act att aat cat acg ttt ggc aac cct gtc 240

Asn Val Thr Gly Phe His Thr Ile Asn His Thr Phe Gly Asn Pro Val

65 70 75 80

ata cct ttt aag gat ggt att tat ttt gct gcc aca gag aaa tca aat 288

Ile Pro Phe Lys Asp Gly Ile Tyr Phe Ala Ala Thr Glu Lys Ser Asn

85 90 95

gtt gtc cgt ggt tgg gtt ttt ggt tct acc atg aac aac aag tca cag 336

Val Val Arg Gly Trp Val Phe Gly Ser Thr Met Asn Asn Lys Ser Gln

100 105 110

tcg gtg att att att aac aat tct act aat gtt gtt ata cga gca tgt 384

Ser Val Ile Ile Ile Asn Asn Ser Thr Asn Val Val Ile Arg Ala Cys

115 120 125

aac ttt gaa ttg tgt gac aac cct ttc ttt gct gtt tct aaa ccc atg 432

Asn Phe Glu Leu Cys Asp Asn Pro Phe Phe Ala Val Ser Lys Pro Met

130 135 140

ggt aca cag aca cat act atg ata ttc gat aat gca ttt aat tgc act 480

Gly Thr Gln Thr His Thr Met Ile Phe Asp Asn Ala Phe Asn Cys Thr

145 150 155 160

ttc gag tac ata tct gat gcc ttt tcg ctt gat gtt tca gaa aag tca 528

Phe Glu Tyr Ile Ser Asp Ala Phe Ser Leu Asp Val Ser Glu Lys Ser

165 170 175

ggt aat ttt aaa cac tta cga gag ttt gtg ttt aaa aat aaa gat ggg 576

Gly Asn Phe Lys His Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Lys Asp Gly

180 185 190

ttt ctc tat gtt tat aag ggc tat caa cct ata gat gta gtt cgt gat 624

Phe Leu Tyr Val Tyr Lys Gly Tyr Gln Pro Ile Asp Val Val Arg Asp

195 200 205

cta cct tct ggt ttt aac act ttg aaa cct att ttt aag ttg cct ctt 672

Leu Pro Ser Gly Phe Asn Thr Leu Lys Pro Ile Phe Lys Leu Pro Leu

210 215 220

ggt att aac att aca aat ttt aga gcc att ctt aca gcc ttt tca cct 720

Gly Ile Asn Ile Thr Asn Phe Arg Ala Ile Leu Thr Ala Phe Ser Pro

225 230 235 240

gct caa gac att tgg ggc acg tca gct gca gcc tat ttt gtt ggc tat 768

Ala Gln Asp Ile Trp Gly Thr Ser Ala Ala Ala Tyr Phe Val Gly Tyr

245 250 255

tta aag cca act aca ttt atg ctc aag tat gat gaa aat ggt aca atc 816

Leu Lys Pro Thr Thr Phe Met Leu Lys Tyr Asp Glu Asn Gly Thr Ile

260 265 270

aca gat gct gtt gat tgt tct caa aat cca ctt gct gaa ctc aaa tgc 864

Thr Asp Ala Val Asp Cys Ser Gln Asn Pro Leu Ala Glu Leu Lys Cys

275 280 285

tct gtt aag agc ttt gag att gac aaa gga att tac cag acc tct aat 912

Ser Val Lys Ser Phe Glu Ile Asp Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn

290 295 300

ttc agg gtt gtt ccc tca gga gat gtt gtg aga ttc cct aat att aca 960

Phe Arg Val Val Pro Ser Gly Asp Val Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr

305 310 315 320

aac ttg tgt cct ttt gga gag gtt ttt aat gct act aaa ttc cct tct 1008

Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Lys Phe Pro Ser

325 330 335

gtc tat gca tgg gag aga aaa aaa att tct aat tgt gtt gct gat tac 1056

Val Tyr Ala Trp Glu Arg Lys Lys Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr

340 345 350

tct gtg ctc tac aac tca aca ttt ttt tca acc ttt aag tgc tat ggc 1104

Ser Val Leu Tyr Asn Ser Thr Phe Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly

355 360 365

gtt tct gcc act aag ttg aat gat ctt tgc ttc tcc aat gtc tat gca 1152

Val Ser Ala Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Ser Asn Val Tyr Ala

370 375 380

gat tct ttt gta gtc aag gga gat gat gta aga caa ata gcg cca gga 1200

Asp Ser Phe Val Val Lys Gly Asp Asp Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly

385 390 395 400

caa act ggt gtt att gct gat tat aat tat aaa ttg cca gat gat ttc 1248

Gln Thr Gly Val Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe

405 410 415

atg ggt tgt gtc ctt gct tgg aat act agg aac att gat gct act tca 1296

Met Gly Cys Val Leu Ala Trp Asn Thr Arg Asn Ile Asp Ala Thr Ser

420 425 430

act ggt aat tat aat tat aaa tat agg tat ctt aga cat ggc aag ctt 1344

Thr Gly Asn Tyr Asn Tyr Lys Tyr Arg Tyr Leu Arg His Gly Lys Leu

435 440 445

agg ccc ttt gag aga gac ata tct aat gtg cct ttc tcc cct gat ggc 1392

Arg Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Asn Val Pro Phe Ser Pro Asp Gly

450 455 460

aaa cct tgc acc cca cct gct ctt aat tgt tat tgg cca tta aat gat 1440

Lys Pro Cys Thr Pro Pro Ala Leu Asn Cys Tyr Trp Pro Leu Asn Asp

465 470 475 480

tat ggt ttt tac acc act act ggc att ggc tac caa cct tac aga gtt 1488

Tyr Gly Phe Tyr Thr Thr Thr Gly Ile Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val

485 490 495

gta gta ctt tct ttt gaa ctt tta aat gca ccg gcc acg gtt tgt gga 1536

Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu Asn Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

500 505 510

cca aaa tta tcc act gac ctt att aag aac cag tgt gtc aat ttt aat 1584

Pro Lys Leu Ser Thr Asp Leu Ile Lys Asn Gln Cys Val Asn Phe Asn

515 520 525

ttt aat gga ctc act ggt act ggt gtg tta act cct tct tca aag aga 1632

Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Pro Ser Ser Lys Arg

530 535 540

ttt caa cca ttt caa caa ttt ggc cgt gat gtt tct gat ttc act gat 1680

Phe Gln Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Val Ser Asp Phe Thr Asp

545 550 555 560

tcc gtt cga gat cct aaa aca tct gaa ata tta gac att tca cct tgc 1728

Ser Val Arg Asp Pro Lys Thr Ser Glu Ile Leu Asp Ile Ser Pro Cys

565 570 575

gct ttt ggg ggt gta agt gta att aca cct gga aca aat gct tca tct 1776

Ala Phe Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Ala Ser Ser

580 585 590

gaa gtt gct gtt cta tat caa gat gtt aac tgc act gat gtt tct aca 1824

Glu Val Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Asp Val Ser Thr

595 600 605

gca att cat gca gat caa ctc aca cca gct tgg cgc ata tat tct act 1872

Ala Ile His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Ala Trp Arg Ile Tyr Ser Thr

610 615 620

gga aac aat gta ttc cag act caa gca ggc tgt ctt ata gga gct gag 1920

Gly Asn Asn Val Phe Gln Thr Gln Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu

625 630 635 640

cat gtc gac act tct tat gag tgc gac att cct att gga gct ggc att 1968

His Val Asp Thr Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile

645 650 655

tgt gct agt tac cat aca gtt tct tta tta cgt agt act agc caa aaa 2016

Cys Ala Ser Tyr His Thr Val Ser Leu Leu Arg Ser Thr Ser Gln Lys

660 665 670

tct att gtg gct tat act atg tct tta ggt gct gat agt tca att gct 2064

Ser Ile Val Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Asp Ser Ser Ile Ala

675 680 685

tac tct aat aac acc att gct ata cct act aac ttt tca att agc att 2112

Tyr Ser Asn Asn Thr Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Ser Ile Ser Ile

690 695 700

act aca gaa gta atg cct gtt tct atg gct aaa acc tcc gta gat tgt 2160

Thr Thr Glu Val Met Pro Val Ser Met Ala Lys Thr Ser Val Asp Cys

705 710 715 720

aat atg tac atc tgc gga gat tct act gaa tgt gct aat ttg ctt ctc 2208

Asn Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ala Asn Leu Leu Leu

725 730 735

caa tat ggt agc ttt tgc aca caa cta aat cgt gca ctc tca ggt att 2256

Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Ser Gly Ile

740 745 750

gct gct gaa cag gat cgc aac aca cgt gaa gtg ttc gct caa gtc aaa 2304

Ala Ala Glu Gln Asp Arg Asn Thr Arg Glu Val Phe Ala Gln Val Lys

755 760 765

caa atg tac aaa acc cca act ttg aaa tat ttt ggt ggt ttt aat ttt 2352

Gln Met Tyr Lys Thr Pro Thr Leu Lys Tyr Phe Gly Gly Phe Asn Phe

770 775 780

tca caa ata tta cct gac cct cta aag cca act aag agg tct ttt att 2400

Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Leu Lys Pro Thr Lys Arg Ser Phe Ile

785 790 795 800

gag gac ttg ctc ttt aat aag gtg aca ctc gct gat gct ggc ttc atg 2448

Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly Phe Met

805 810 815

aag caa tat ggc gaa tgc cta ggt gat att aat gct aga gat ctc att 2496

Lys Gln Tyr Gly Glu Cys Leu Gly Asp Ile Asn Ala Arg Asp Leu Ile

820 825 830

tgt gcg cag aag ttc aat gga ctt aca gtg ttg cca cct ctg ctc act 2544

Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu Leu Thr

835 840 845

gat gat atg att gct gcc tac act gct gct cta gtt agt ggt act gcc 2592

Asp Asp Met Ile Ala Ala Tyr Thr Ala Ala Leu Val Ser Gly Thr Ala

850 855 860

act gct gga tgg aca ttt ggt gct ggc gct gct ctt caa ata cct ttt 2640

Thr Ala Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile Pro Phe

865 870 875 880

gct atg caa atg gca tat agg ttc aat ggc att gga gtt acc caa aat 2688

Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr Gln Asn

885 890 895

gtt ctc tat gag aac caa aaa caa atc gcc aac caa ttt aac aag gcg 2736

Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Gln Ile Ala Asn Gln Phe Asn Lys Ala

900 905 910

att agt caa att caa gaa tca ctt aca aca aca tca act gca ttg ggc 2784

Ile Ser Gln Ile Gln Glu Ser Leu Thr Thr Thr Ser Thr Ala Leu Gly

915 920 925

aag ctg caa gac gtt gtt aac cag aat gct caa gca tta aac aca ctt 2832

Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu

930 935 940

gtt aaa caa ctt agc tct aat ttt ggt gca att tca agt gtg cta aat 2880

Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn

945 950 955 960

gat atc ctt tcg cga ctt gat aaa gtc gag gcg gag gta caa att gac 2928

Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp

965 970 975

agg tta att aca ggc aga ctt caa agc ctt caa acc tat gta aca caa 2976

Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val Thr Gln

980 985 990

caa cta atc agg gct gct gaa atc agg gct tct gct aat ctt gct gct 3024

Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu Ala Ala

995 1000 1005

act aaa atg tct gag tgt gtt ctt gga caa tca aaa aga gtt gac 3069

Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg Val Asp

1010 1015 1020

ttt tgt gga aag ggc tac cac ctt atg tcc ttc cca caa gca gcc 3114

Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ala Ala

1025 1030 1035

ccg cat ggt gtt gtc ttc cta cat gtc acg tat gtg cca tcc cag 3159

Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ser Gln

1040 1045 1050

gag agg aac ttc acc aca gcg cca gca att tgt cat gaa ggc aaa 3204

Glu Arg Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Glu Gly Lys

1055 1060 1065

gca tac ttc cct cgt gaa ggt gtt ttt gtg ttt aat ggc act tct 3249

Ala Tyr Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Phe Asn Gly Thr Ser

1070 1075 1080

tgg ttt att aca cag agg aac ttc ttt tct cca caa ata att act 3294

Trp Phe Ile Thr Gln Arg Asn Phe Phe Ser Pro Gln Ile Ile Thr

1085 1090 1095

aca gac aat aca ttt gtc tca gga aat tgt gat gtc gtt att ggc 3339

Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly

1100 1105 1110

atc att aac aac aca gtt tat gat cct ctg caa cct gag ctt gac 3384

Ile Ile Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp

1115 1120 1125

tca ttc aaa gaa gag ctg gac aag tac ttc aaa aat cat aca tca 3429

Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser

1130 1135 1140

cca gat gtt gat ctt ggc gac att tca ggc att aac gct tct gtc 3474

Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val

1145 1150 1155

gtc aac att caa aaa gaa att gac cgc ctc aat gag gtc gct aaa 3519

Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys

1160 1165 1170

aat tta aat gaa tca ctc att gac ctt caa gaa ttg gga aaa tat 3564

Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr

1175 1180 1185

gag caa tat att aaa tgg cct tgg tat gtt tgg ctc ggc ttc att 3609

Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Val Trp Leu Gly Phe Ile

1190 1195 1200

gct gga cta att gcc atc gtc atg gtt aca atc ttg ctt tgt tgc 3654

Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Leu Leu Cys Cys

1205 1210 1215

atg act agt tgt tgc agt tgc ctc aag ggt gca tgc tct tgt ggt 3699

Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Ala Cys Ser Cys Gly

1220 1225 1230

tct tgc tgc aag ttt gat gag gat gac tct gag cca gtt ctc aag 3744

Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro Val Leu Lys

1235 1240 1245

ggt gtc aaa tta cat tac aca taa 3768

Gly Val Lys Leu His Tyr Thr

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<211> 1255

<212> PRT

<213> SARS-CoV

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Met Phe Ile Phe Leu Leu Phe Leu Thr Leu Thr Ser Gly Ser Asp Leu

1 5 10 15

Asp Arg Cys Thr Thr Phe Asp Asp Val Gln Ala Pro Asn Tyr Thr Gln

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His Thr Ser Ser Met Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Glu Ile Phe Arg

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Ser Asp Thr Leu Tyr Leu Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Tyr Ser

50 55 60

Asn Val Thr Gly Phe His Thr Ile Asn His Thr Phe Gly Asn Pro Val

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Ile Pro Phe Lys Asp Gly Ile Tyr Phe Ala Ala Thr Glu Lys Ser Asn

85 90 95

Val Val Arg Gly Trp Val Phe Gly Ser Thr Met Asn Asn Lys Ser Gln

100 105 110

Ser Val Ile Ile Ile Asn Asn Ser Thr Asn Val Val Ile Arg Ala Cys

115 120 125

Asn Phe Glu Leu Cys Asp Asn Pro Phe Phe Ala Val Ser Lys Pro Met

130 135 140

Gly Thr Gln Thr His Thr Met Ile Phe Asp Asn Ala Phe Asn Cys Thr

145 150 155 160

Phe Glu Tyr Ile Ser Asp Ala Phe Ser Leu Asp Val Ser Glu Lys Ser

165 170 175

Gly Asn Phe Lys His Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Lys Asp Gly

180 185 190

Phe Leu Tyr Val Tyr Lys Gly Tyr Gln Pro Ile Asp Val Val Arg Asp

195 200 205

Leu Pro Ser Gly Phe Asn Thr Leu Lys Pro Ile Phe Lys Leu Pro Leu

210 215 220

Gly Ile Asn Ile Thr Asn Phe Arg Ala Ile Leu Thr Ala Phe Ser Pro

225 230 235 240

Ala Gln Asp Ile Trp Gly Thr Ser Ala Ala Ala Tyr Phe Val Gly Tyr

245 250 255

Leu Lys Pro Thr Thr Phe Met Leu Lys Tyr Asp Glu Asn Gly Thr Ile

260 265 270

Thr Asp Ala Val Asp Cys Ser Gln Asn Pro Leu Ala Glu Leu Lys Cys

275 280 285

Ser Val Lys Ser Phe Glu Ile Asp Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn

290 295 300

Phe Arg Val Val Pro Ser Gly Asp Val Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr

305 310 315 320

Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Lys Phe Pro Ser

325 330 335

Val Tyr Ala Trp Glu Arg Lys Lys Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr

340 345 350

Ser Val Leu Tyr Asn Ser Thr Phe Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly

355 360 365

Val Ser Ala Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Ser Asn Val Tyr Ala

370 375 380

Asp Ser Phe Val Val Lys Gly Asp Asp Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly

385 390 395 400

Gln Thr Gly Val Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe

405 410 415

Met Gly Cys Val Leu Ala Trp Asn Thr Arg Asn Ile Asp Ala Thr Ser

420 425 430

Thr Gly Asn Tyr Asn Tyr Lys Tyr Arg Tyr Leu Arg His Gly Lys Leu

435 440 445

Arg Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Asn Val Pro Phe Ser Pro Asp Gly

450 455 460

Lys Pro Cys Thr Pro Pro Ala Leu Asn Cys Tyr Trp Pro Leu Asn Asp

465 470 475 480

Tyr Gly Phe Tyr Thr Thr Thr Gly Ile Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val

485 490 495

Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu Asn Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly

500 505 510

Pro Lys Leu Ser Thr Asp Leu Ile Lys Asn Gln Cys Val Asn Phe Asn

515 520 525

Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Pro Ser Ser Lys Arg

530 535 540

Phe Gln Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Val Ser Asp Phe Thr Asp

545 550 555 560

Ser Val Arg Asp Pro Lys Thr Ser Glu Ile Leu Asp Ile Ser Pro Cys

565 570 575

Ala Phe Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Ala Ser Ser

580 585 590

Glu Val Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Asp Val Ser Thr

595 600 605

Ala Ile His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Ala Trp Arg Ile Tyr Ser Thr

610 615 620

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625 630 635 640

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645 650 655

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660 665 670

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675 680 685

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705 710 715 720

Asn Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ala Asn Leu Leu Leu

725 730 735

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Ala Ala Glu Gln Asp Arg Asn Thr Arg Glu Val Phe Ala Gln Val Lys

755 760 765

Gln Met Tyr Lys Thr Pro Thr Leu Lys Tyr Phe Gly Gly Phe Asn Phe

770 775 780

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785 790 795 800

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805 810 815

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820 825 830

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835 840 845

Asp Asp Met Ile Ala Ala Tyr Thr Ala Ala Leu Val Ser Gly Thr Ala

850 855 860

Thr Ala Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile Pro Phe

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885 890 895

Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Gln Ile Ala Asn Gln Phe Asn Lys Ala

900 905 910

Ile Ser Gln Ile Gln Glu Ser Leu Thr Thr Thr Ser Thr Ala Leu Gly

915 920 925

Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu

930 935 940

Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn

945 950 955 960

Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp

965 970 975

Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val Thr Gln

980 985 990

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Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg Val Asp

1010 1015 1020

Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ala Ala

1025 1030 1035

Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ser Gln

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Glu Arg Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Glu Gly Lys

1055 1060 1065

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1070 1075 1080

Trp Phe Ile Thr Gln Arg Asn Phe Phe Ser Pro Gln Ile Ile Thr

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Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly

1100 1105 1110

Ile Ile Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp

1115 1120 1125

Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser

1130 1135 1140

Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val

1145 1150 1155

Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys

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Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr

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Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Val Trp Leu Gly Phe Ile

1190 1195 1200

Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Leu Leu Cys Cys

1205 1210 1215

Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Ala Cys Ser Cys Gly

1220 1225 1230

Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro Val Leu Lys

1235 1240 1245

Gly Val Lys Leu His Tyr Thr

1250 1255

<210> 7

<211> 666

<212> DNA

<213> SARS-CoV

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(666)

<400> 7

agg gtt gtt ccc tca gga gat gtt gtg aga ttc cct aat att aca aac 48

Arg Val Val Pro Ser Gly Asp Val Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

1 5 10 15

ttg tgt cct ttt gga gag gtt ttt aat gct act aaa ttc cct tct gtc 96

Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Lys Phe Pro Ser Val

20 25 30

tat gca tgg gag aga aaa aaa att tct aat tgt gtt gct gat tac tct 144

Tyr Ala Trp Glu Arg Lys Lys Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

35 40 45

gtg ctc tac aac tca aca ttt ttt tca acc ttt aag tgc tat ggc gtt 192

Val Leu Tyr Asn Ser Thr Phe Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val

50 55 60

tct gcc act aag ttg aat gat ctt tgc ttc tcc aat gtc tat gca gat 240

Ser Ala Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Ser Asn Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

tct ttt gta gtc aag gga gat gat gta aga caa ata gcg cca gga caa 288

Ser Phe Val Val Lys Gly Asp Asp Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln

85 90 95

act ggt gtt att gct gat tat aat tat aaa ttg cca gat gat ttc atg 336

Thr Gly Val Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Met

100 105 110

ggt tgt gtc ctt gct tgg aat act agg aac att gat gct act tca act 384

Gly Cys Val Leu Ala Trp Asn Thr Arg Asn Ile Asp Ala Thr Ser Thr

115 120 125

ggt aat tat aat tat aaa tat agg tat ctt aga cat ggc aag ctt agg 432

Gly Asn Tyr Asn Tyr Lys Tyr Arg Tyr Leu Arg His Gly Lys Leu Arg

130 135 140

ccc ttt gag aga gac ata tct aat gtg cct ttc tcc cct gat ggc aaa 480

Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Asn Val Pro Phe Ser Pro Asp Gly Lys

145 150 155 160

cct tgc acc cca cct gct ctt aat tgt tat tgg cca tta aat gat tat 528

Pro Cys Thr Pro Pro Ala Leu Asn Cys Tyr Trp Pro Leu Asn Asp Tyr

165 170 175

ggt ttt tac acc act act ggc att ggc tac caa cct tac aga gtt gta 576

Gly Phe Tyr Thr Thr Thr Gly Ile Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val

180 185 190

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195 200 205

aaa tta tcc act gac ctt att aag aac cag tgt gtc aat ttt 666

Lys Leu Ser Thr Asp Leu Ile Lys Asn Gln Cys Val Asn Phe

210 215 220

<210> 8

<211> 222

<212> PRT

<213> SARS-CoV

<400> 8

Arg Val Val Pro Ser Gly Asp Val Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn

1 5 10 15

Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Lys Phe Pro Ser Val

20 25 30

Tyr Ala Trp Glu Arg Lys Lys Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser

35 40 45

Val Leu Tyr Asn Ser Thr Phe Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val

50 55 60

Ser Ala Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Ser Asn Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

Ser Phe Val Val Lys Gly Asp Asp Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln

85 90 95

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100 105 110

Gly Cys Val Leu Ala Trp Asn Thr Arg Asn Ile Asp Ala Thr Ser Thr

115 120 125

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130 135 140

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145 150 155 160

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165 170 175

Gly Phe Tyr Thr Thr Thr Gly Ile Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val

180 185 190

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195 200 205

Lys Leu Ser Thr Asp Leu Ile Lys Asn Gln Cys Val Asn Phe

210 215 220

<210> 9

<211> 4062

<212> DNA

<213> MERS-CoV

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(4062)

<400> 9

atg ata cac tca gtg ttt cta ctg atg ttc ttg tta aca cct aca gaa 48

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1 5 10 15

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20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

cca caa aag ttg ttt gta gct aac tat tct cag gac gtc aaa cag ttt 336

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100 105 110

gct aat ggg ttt gtc gtc cgt ata gga gca gct gcc aat tcc act ggc 384

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115 120 125

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Thr Val Ile Ile Ser Pro Ser Thr Ser Ala Thr Ile Arg Lys Ile Tyr

130 135 140

cct gct ttt atg ctg ggt tct tca gtt ggt aat ttc tca gat ggt aaa 480

Pro Ala Phe Met Leu Gly Ser Ser Val Gly Asn Phe Ser Asp Gly Lys

145 150 155 160

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165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

act cct gca aca gat tgt tct gat ggc aat tac aat cgt aat gcc agt 672

Thr Pro Ala Thr Asp Cys Ser Asp Gly Asn Tyr Asn Arg Asn Ala Ser

210 215 220

ctg aac tct ttt aag gag tat ttt aat tta cgt aac tgc acc ttt atg 720

Leu Asn Ser Phe Lys Glu Tyr Phe Asn Leu Arg Asn Cys Thr Phe Met

225 230 235 240

tac act tat aac att acc gaa gat gag att tta gag tgg ttt ggc att 768

Tyr Thr Tyr Asn Ile Thr Glu Asp Glu Ile Leu Glu Trp Phe Gly Ile

245 250 255

aca caa act gct caa ggt gtt cac ctc ttc tca tct cgg tat gtt gat 816

Thr Gln Thr Ala Gln Gly Val His Leu Phe Ser Ser Arg Tyr Val Asp

260 265 270

ttg tac ggc ggc aat atg ttt caa ttt gcc acc ttg cct gtt tat gat 864

Leu Tyr Gly Gly Asn Met Phe Gln Phe Ala Thr Leu Pro Val Tyr Asp

275 280 285

act att aag tat tat tct atc att cct cac agt att cgt tct atc caa 912

Thr Ile Lys Tyr Tyr Ser Ile Ile Pro His Ser Ile Arg Ser Ile Gln

290 295 300

agt gat aga aaa gct tgg gct gcc ttc tac gta tat aaa ctt caa ccg 960

Ser Asp Arg Lys Ala Trp Ala Ala Phe Tyr Val Tyr Lys Leu Gln Pro

305 310 315 320

tta act ttc ctg ttg gat ttt tct gtt gat ggt tat ata cgc aga gct 1008

Leu Thr Phe Leu Leu Asp Phe Ser Val Asp Gly Tyr Ile Arg Arg Ala

325 330 335

ata gac tgt ggt ttt aat gat ttg tca caa ctc cac tgc tca tat gaa 1056

Ile Asp Cys Gly Phe Asn Asp Leu Ser Gln Leu His Cys Ser Tyr Glu

340 345 350

tcc ttc gat gtt gaa tct gga gtt tat tca gtt tcg tct ttc gaa gca 1104

Ser Phe Asp Val Glu Ser Gly Val Tyr Ser Val Ser Ser Phe Glu Ala

355 360 365

aaa cct tct ggc tca gtt gtg gaa cag gct gaa ggt gtt gaa tgt gat 1152

Lys Pro Ser Gly Ser Val Val Glu Gln Ala Glu Gly Val Glu Cys Asp

370 375 380

ttt tca cct ctt ctg tct ggc aca cct cct cag gtt tat aat ttc aag 1200

Phe Ser Pro Leu Leu Ser Gly Thr Pro Pro Gln Val Tyr Asn Phe Lys

385 390 395 400

cgt ttg gtt ttt acc aat tgc aat tat aat ctt acc aaa ttg ctt tca 1248

Arg Leu Val Phe Thr Asn Cys Asn Tyr Asn Leu Thr Lys Leu Leu Ser

405 410 415

ctt ttt tct gtg aat gat ttt act tgt agt caa ata tct cca gca gca 1296

Leu Phe Ser Val Asn Asp Phe Thr Cys Ser Gln Ile Ser Pro Ala Ala

420 425 430

att gct agc aac tgt tat tct tca ctg att ttg gat tac ttt tca tac 1344

Ile Ala Ser Asn Cys Tyr Ser Ser Leu Ile Leu Asp Tyr Phe Ser Tyr

435 440 445

cca ctt agt atg aaa tcc gat ctc agt gtt agt tct gct ggt cca ata 1392

Pro Leu Ser Met Lys Ser Asp Leu Ser Val Ser Ser Ala Gly Pro Ile

450 455 460

tcc cag ttt aat tat aaa cag tcc ttt tct aat ccc aca tgt ttg att 1440

Ser Gln Phe Asn Tyr Lys Gln Ser Phe Ser Asn Pro Thr Cys Leu Ile

465 470 475 480

tta gcg act gtt cct cat aac ctt act act att act aag cct ctt aag 1488

Leu Ala Thr Val Pro His Asn Leu Thr Thr Ile Thr Lys Pro Leu Lys

485 490 495

tac agc tat att aac aag tgc tct cgt ctt ctt tct gat gat cgt act 1536

Tyr Ser Tyr Ile Asn Lys Cys Ser Arg Leu Leu Ser Asp Asp Arg Thr

500 505 510

gaa gta cct cag tta gtg aac gct aat caa tac tca ccc tgt gta tcc 1584

Glu Val Pro Gln Leu Val Asn Ala Asn Gln Tyr Ser Pro Cys Val Ser

515 520 525

att gtc cca tcc act gtg tgg gaa gac ggt gat tat tat agg aaa caa 1632

Ile Val Pro Ser Thr Val Trp Glu Asp Gly Asp Tyr Tyr Arg Lys Gln

530 535 540

cta tct cca ctt gaa ggt ggt ggc tgg ctt gtt gct agt ggc tca act 1680

Leu Ser Pro Leu Glu Gly Gly Gly Trp Leu Val Ala Ser Gly Ser Thr

545 550 555 560

gtt gcc atg act gag caa tta cag atg ggc ttt ggt att aca gtt caa 1728

Val Ala Met Thr Glu Gln Leu Gln Met Gly Phe Gly Ile Thr Val Gln

565 570 575

tat ggt aca gac acc aat agt gtt tgc ccc aag ctt gaa ttt gct aat 1776

Tyr Gly Thr Asp Thr Asn Ser Val Cys Pro Lys Leu Glu Phe Ala Asn

580 585 590

gac aca aaa att gcc tct caa tta ggc aat tgc gtg gaa tat tcc ctc 1824

Asp Thr Lys Ile Ala Ser Gln Leu Gly Asn Cys Val Glu Tyr Ser Leu

595 600 605

tat ggt gtt tcg ggc cgt ggt gtt ttt cag aat tgc aca gct gta ggt 1872

Tyr Gly Val Ser Gly Arg Gly Val Phe Gln Asn Cys Thr Ala Val Gly

610 615 620

gtt cga cag cag cgc ttt gtt tat gat gcg tac cag aat tta gtt ggc 1920

Val Arg Gln Gln Arg Phe Val Tyr Asp Ala Tyr Gln Asn Leu Val Gly

625 630 635 640

tat tat tct gat gat ggc aac tac tac tgt ttg cgt gct tgt gtt agt 1968

Tyr Tyr Ser Asp Asp Gly Asn Tyr Tyr Cys Leu Arg Ala Cys Val Ser

645 650 655

gtt cct gtt tct gtc atc tat gat aaa gaa act aaa acc cac gct act 2016

Val Pro Val Ser Val Ile Tyr Asp Lys Glu Thr Lys Thr His Ala Thr

660 665 670

cta ttt ggt agt gtt gca tgt gaa cac att tct tct acc atg tct caa 2064

Leu Phe Gly Ser Val Ala Cys Glu His Ile Ser Ser Thr Met Ser Gln

675 680 685

tac tcc cgt tct acg cga tca atg ctt aaa cgg cga gat tct aca tat 2112

Tyr Ser Arg Ser Thr Arg Ser Met Leu Lys Arg Arg Asp Ser Thr Tyr

690 695 700

ggc ccc ctt cag aca cct gtt ggt tgt gtc cta gga ctt gtt aat tcc 2160

Gly Pro Leu Gln Thr Pro Val Gly Cys Val Leu Gly Leu Val Asn Ser

705 710 715 720

tct ttg ttc gta gag gac tgc aag ttg cct ctt ggt caa tct ctc tgt 2208

Ser Leu Phe Val Glu Asp Cys Lys Leu Pro Leu Gly Gln Ser Leu Cys

725 730 735

gct ctt cct gac aca cct agt act ctc aca cct cgc agt gtg cgc tct 2256

Ala Leu Pro Asp Thr Pro Ser Thr Leu Thr Pro Arg Ser Val Arg Ser

740 745 750

gtt cca ggt gaa atg cgc ttg gca tcc att gct ttt aat cat cct att 2304

Val Pro Gly Glu Met Arg Leu Ala Ser Ile Ala Phe Asn His Pro Ile

755 760 765

cag gtt gat caa ctt aat agt agt tat ttt aaa tta agt ata ccc act 2352

Gln Val Asp Gln Leu Asn Ser Ser Tyr Phe Lys Leu Ser Ile Pro Thr

770 775 780

aat ttt tcc ttt ggt gtg act cag gag tac att cag aca acc att cag 2400

Asn Phe Ser Phe Gly Val Thr Gln Glu Tyr Ile Gln Thr Thr Ile Gln

785 790 795 800

aaa gtt act gtt gat tgt aaa cag tac gtt tgc aat ggt ttc cag aag 2448

Lys Val Thr Val Asp Cys Lys Gln Tyr Val Cys Asn Gly Phe Gln Lys

805 810 815

tgt gag caa tta ctg cgc gag tat ggc cag ttt tgt tcc aaa ata aac 2496

Cys Glu Gln Leu Leu Arg Glu Tyr Gly Gln Phe Cys Ser Lys Ile Asn

820 825 830

cag gct ctc cat ggt gcc aat tta cgc cag gat gat tct gta cgt aat 2544

Gln Ala Leu His Gly Ala Asn Leu Arg Gln Asp Asp Ser Val Arg Asn

835 840 845

ttg ttt gcg agc gtg aaa agc tct caa tca tct cct atc ata cca ggt 2592

Leu Phe Ala Ser Val Lys Ser Ser Gln Ser Ser Pro Ile Ile Pro Gly

850 855 860

ttt gga ggt gac ttt aat ttg aca ctt cta gaa cct gtt tct ata tct 2640

Phe Gly Gly Asp Phe Asn Leu Thr Leu Leu Glu Pro Val Ser Ile Ser

865 870 875 880

act ggc agt cgt agt gca cgt agt gct att gag gat ttg cta ttt gac 2688

Thr Gly Ser Arg Ser Ala Arg Ser Ala Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asp

885 890 895

aaa gtc act ata gct gat cct ggt tat atg caa ggt tac gat gat tgc 2736

Lys Val Thr Ile Ala Asp Pro Gly Tyr Met Gln Gly Tyr Asp Asp Cys

900 905 910

atg cag caa ggt cca gca tca gct cgt gat ctt att tgt gct caa tat 2784

Met Gln Gln Gly Pro Ala Ser Ala Arg Asp Leu Ile Cys Ala Gln Tyr

915 920 925

gtg gct ggt tac aaa gta tta cct cct ctt atg gat gtt aat atg gaa 2832

Val Ala Gly Tyr Lys Val Leu Pro Pro Leu Met Asp Val Asn Met Glu

930 935 940

gcc gcg tat act tca tct ttg ctt ggc agc ata gca ggt gtt ggc tgg 2880

Ala Ala Tyr Thr Ser Ser Leu Leu Gly Ser Ile Ala Gly Val Gly Trp

945 950 955 960

act gct ggc tta tcc tcc ttt gct gct att cca ttt gca cag agt atc 2928

Thr Ala Gly Leu Ser Ser Phe Ala Ala Ile Pro Phe Ala Gln Ser Ile

965 970 975

ttt tat agg tta aac ggt gtt ggc att act caa cag gtt ctt tca gag 2976

Phe Tyr Arg Leu Asn Gly Val Gly Ile Thr Gln Gln Val Leu Ser Glu

980 985 990

aac caa aag ctt att gcc aat aag ttt aat cag gct ctg gga gct atg 3024

Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Lys Phe Asn Gln Ala Leu Gly Ala Met

995 1000 1005

caa aca ggc ttc act aca act aat gaa gct ttt cag aag gtt cag 3069

Gln Thr Gly Phe Thr Thr Thr Asn Glu Ala Phe Gln Lys Val Gln

1010 1015 1020

gat gct gtg aac aac aat gca cag gct cta tcc aaa tta gct agc 3114

Asp Ala Val Asn Asn Asn Ala Gln Ala Leu Ser Lys Leu Ala Ser

1025 1030 1035

gag cta tct aat act ttt ggt gct att tcc gcc tct att gga gac 3159

Glu Leu Ser Asn Thr Phe Gly Ala Ile Ser Ala Ser Ile Gly Asp

1040 1045 1050

atc ata caa cgt ctt gat gtt ctc gaa cag gac gcc caa ata gac 3204

Ile Ile Gln Arg Leu Asp Val Leu Glu Gln Asp Ala Gln Ile Asp

1055 1060 1065

aga ctt att aat ggc cgt ttg aca aca cta aat gct ttt gtt gca 3249

Arg Leu Ile Asn Gly Arg Leu Thr Thr Leu Asn Ala Phe Val Ala

1070 1075 1080

cag cag ctt gtt cgt tcc gaa tca gct gct ctt tcc gct caa ttg 3294

Gln Gln Leu Val Arg Ser Glu Ser Ala Ala Leu Ser Ala Gln Leu

1085 1090 1095

gct aaa gat aaa gtc aat gag tgt gtc aag gca caa tcc aag cgt 3339

Ala Lys Asp Lys Val Asn Glu Cys Val Lys Ala Gln Ser Lys Arg

1100 1105 1110

tct gga ttt tgc ggt caa ggc aca cat ata gtg tcc ttt gtt gta 3384

Ser Gly Phe Cys Gly Gln Gly Thr His Ile Val Ser Phe Val Val

1115 1120 1125

aat gcc cct aat ggc ctt tac ttc atg cat gtt ggt tat tac cct 3429

Asn Ala Pro Asn Gly Leu Tyr Phe Met His Val Gly Tyr Tyr Pro

1130 1135 1140

agc aac cac att gag gtt gtt tct gct tat ggt ctt tgc gat gca 3474

Ser Asn His Ile Glu Val Val Ser Ala Tyr Gly Leu Cys Asp Ala

1145 1150 1155

gct aac cct act aat tgt ata gcc cct gtt aat ggc tac ttt att 3519

Ala Asn Pro Thr Asn Cys Ile Ala Pro Val Asn Gly Tyr Phe Ile

1160 1165 1170

aaa act aat aac act agg att gtt gat gag tgg tca tat act ggc 3564

Lys Thr Asn Asn Thr Arg Ile Val Asp Glu Trp Ser Tyr Thr Gly

1175 1180 1185

tcg tcc ttc tat gca cct gag ccc att acc tcc ctt aat act aag 3609

Ser Ser Phe Tyr Ala Pro Glu Pro Ile Thr Ser Leu Asn Thr Lys

1190 1195 1200

tat gtt gca cca cag gtg aca tac caa aac att tct act aac ctc 3654

Tyr Val Ala Pro Gln Val Thr Tyr Gln Asn Ile Ser Thr Asn Leu

1205 1210 1215

cct cct cct ctt ctc ggc aat tcc acc ggg att gac ttc caa gat 3699

Pro Pro Pro Leu Leu Gly Asn Ser Thr Gly Ile Asp Phe Gln Asp

1220 1225 1230

gag ttg gat gag ttt ttc aaa aat gtt agc acc agt ata cct aat 3744

Glu Leu Asp Glu Phe Phe Lys Asn Val Ser Thr Ser Ile Pro Asn

1235 1240 1245

ttt ggt tcc cta aca cag att aat act aca tta ctc gat ctt acc 3789

Phe Gly Ser Leu Thr Gln Ile Asn Thr Thr Leu Leu Asp Leu Thr

1250 1255 1260

tac gag atg ttg tct ctt caa caa gtt gtt aaa gcc ctt aat gag 3834

Tyr Glu Met Leu Ser Leu Gln Gln Val Val Lys Ala Leu Asn Glu

1265 1270 1275

tct tac ata gac ctt aaa gag ctt ggc aat tat act tat tac aac 3879

Ser Tyr Ile Asp Leu Lys Glu Leu Gly Asn Tyr Thr Tyr Tyr Asn

1280 1285 1290

aaa tgg ccg tgg tac att tgg ctt ggt ttc att gct ggg ctt gtt 3924

Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Val

1295 1300 1305

gcc tta gct cta tgc gtc ttc ttc ata ctg tgc tgc act ggt tgt 3969

Ala Leu Ala Leu Cys Val Phe Phe Ile Leu Cys Cys Thr Gly Cys

1310 1315 1320

ggc aca aac tgt atg gga aaa ctt aag tgt aat cgt tgt tgt gat 4014

Gly Thr Asn Cys Met Gly Lys Leu Lys Cys Asn Arg Cys Cys Asp

1325 1330 1335

aga tac gag gaa tac gac ctc gag ccg cat aag gtt cat gtt cac 4059

Arg Tyr Glu Glu Tyr Asp Leu Glu Pro His Lys Val His Val His

1340 1345 1350

taa 4062

<210> 10

<211> 1353

<212> PRT

<213> MERS-CoV

<400> 10

Met Ile His Ser Val Phe Leu Leu Met Phe Leu Leu Thr Pro Thr Glu

1 5 10 15

Ser Tyr Val Asp Val Gly Pro Asp Ser Val Lys Ser Ala Cys Ile Glu

20 25 30

Val Asp Ile Gln Gln Thr Phe Phe Asp Lys Thr Trp Pro Arg Pro Ile

35 40 45

Asp Val Ser Lys Ala Asp Gly Ile Ile Tyr Pro Gln Gly Arg Thr Tyr

50 55 60

Ser Asn Ile Thr Ile Thr Tyr Gln Gly Leu Phe Pro Tyr Gln Gly Asp

65 70 75 80

His Gly Asp Met Tyr Val Tyr Ser Ala Gly His Ala Thr Gly Thr Thr

85 90 95

Pro Gln Lys Leu Phe Val Ala Asn Tyr Ser Gln Asp Val Lys Gln Phe

100 105 110

Ala Asn Gly Phe Val Val Arg Ile Gly Ala Ala Ala Asn Ser Thr Gly

115 120 125

Thr Val Ile Ile Ser Pro Ser Thr Ser Ala Thr Ile Arg Lys Ile Tyr

130 135 140

Pro Ala Phe Met Leu Gly Ser Ser Val Gly Asn Phe Ser Asp Gly Lys

145 150 155 160

Met Gly Arg Phe Phe Asn His Thr Leu Val Leu Leu Pro Asp Gly Cys

165 170 175

Gly Thr Leu Leu Arg Ala Phe Tyr Cys Ile Leu Glu Pro Arg Ser Gly

180 185 190

Asn His Cys Pro Ala Gly Asn Ser Tyr Thr Ser Phe Ala Thr Tyr His

195 200 205

Thr Pro Ala Thr Asp Cys Ser Asp Gly Asn Tyr Asn Arg Asn Ala Ser

210 215 220

Leu Asn Ser Phe Lys Glu Tyr Phe Asn Leu Arg Asn Cys Thr Phe Met

225 230 235 240

Tyr Thr Tyr Asn Ile Thr Glu Asp Glu Ile Leu Glu Trp Phe Gly Ile

245 250 255

Thr Gln Thr Ala Gln Gly Val His Leu Phe Ser Ser Arg Tyr Val Asp

260 265 270

Leu Tyr Gly Gly Asn Met Phe Gln Phe Ala Thr Leu Pro Val Tyr Asp

275 280 285

Thr Ile Lys Tyr Tyr Ser Ile Ile Pro His Ser Ile Arg Ser Ile Gln

290 295 300

Ser Asp Arg Lys Ala Trp Ala Ala Phe Tyr Val Tyr Lys Leu Gln Pro

305 310 315 320

Leu Thr Phe Leu Leu Asp Phe Ser Val Asp Gly Tyr Ile Arg Arg Ala

325 330 335

Ile Asp Cys Gly Phe Asn Asp Leu Ser Gln Leu His Cys Ser Tyr Glu

340 345 350

Ser Phe Asp Val Glu Ser Gly Val Tyr Ser Val Ser Ser Phe Glu Ala

355 360 365

Lys Pro Ser Gly Ser Val Val Glu Gln Ala Glu Gly Val Glu Cys Asp

370 375 380

Phe Ser Pro Leu Leu Ser Gly Thr Pro Pro Gln Val Tyr Asn Phe Lys

385 390 395 400

Arg Leu Val Phe Thr Asn Cys Asn Tyr Asn Leu Thr Lys Leu Leu Ser

405 410 415

Leu Phe Ser Val Asn Asp Phe Thr Cys Ser Gln Ile Ser Pro Ala Ala

420 425 430

Ile Ala Ser Asn Cys Tyr Ser Ser Leu Ile Leu Asp Tyr Phe Ser Tyr

435 440 445

Pro Leu Ser Met Lys Ser Asp Leu Ser Val Ser Ser Ala Gly Pro Ile

450 455 460

Ser Gln Phe Asn Tyr Lys Gln Ser Phe Ser Asn Pro Thr Cys Leu Ile

465 470 475 480

Leu Ala Thr Val Pro His Asn Leu Thr Thr Ile Thr Lys Pro Leu Lys

485 490 495

Tyr Ser Tyr Ile Asn Lys Cys Ser Arg Leu Leu Ser Asp Asp Arg Thr

500 505 510

Glu Val Pro Gln Leu Val Asn Ala Asn Gln Tyr Ser Pro Cys Val Ser

515 520 525

Ile Val Pro Ser Thr Val Trp Glu Asp Gly Asp Tyr Tyr Arg Lys Gln

530 535 540

Leu Ser Pro Leu Glu Gly Gly Gly Trp Leu Val Ala Ser Gly Ser Thr

545 550 555 560

Val Ala Met Thr Glu Gln Leu Gln Met Gly Phe Gly Ile Thr Val Gln

565 570 575

Tyr Gly Thr Asp Thr Asn Ser Val Cys Pro Lys Leu Glu Phe Ala Asn

580 585 590

Asp Thr Lys Ile Ala Ser Gln Leu Gly Asn Cys Val Glu Tyr Ser Leu

595 600 605

Tyr Gly Val Ser Gly Arg Gly Val Phe Gln Asn Cys Thr Ala Val Gly

610 615 620

Val Arg Gln Gln Arg Phe Val Tyr Asp Ala Tyr Gln Asn Leu Val Gly

625 630 635 640

Tyr Tyr Ser Asp Asp Gly Asn Tyr Tyr Cys Leu Arg Ala Cys Val Ser

645 650 655

Val Pro Val Ser Val Ile Tyr Asp Lys Glu Thr Lys Thr His Ala Thr

660 665 670

Leu Phe Gly Ser Val Ala Cys Glu His Ile Ser Ser Thr Met Ser Gln

675 680 685

Tyr Ser Arg Ser Thr Arg Ser Met Leu Lys Arg Arg Asp Ser Thr Tyr

690 695 700

Gly Pro Leu Gln Thr Pro Val Gly Cys Val Leu Gly Leu Val Asn Ser

705 710 715 720

Ser Leu Phe Val Glu Asp Cys Lys Leu Pro Leu Gly Gln Ser Leu Cys

725 730 735

Ala Leu Pro Asp Thr Pro Ser Thr Leu Thr Pro Arg Ser Val Arg Ser

740 745 750

Val Pro Gly Glu Met Arg Leu Ala Ser Ile Ala Phe Asn His Pro Ile

755 760 765

Gln Val Asp Gln Leu Asn Ser Ser Tyr Phe Lys Leu Ser Ile Pro Thr

770 775 780

Asn Phe Ser Phe Gly Val Thr Gln Glu Tyr Ile Gln Thr Thr Ile Gln

785 790 795 800

Lys Val Thr Val Asp Cys Lys Gln Tyr Val Cys Asn Gly Phe Gln Lys

805 810 815

Cys Glu Gln Leu Leu Arg Glu Tyr Gly Gln Phe Cys Ser Lys Ile Asn

820 825 830

Gln Ala Leu His Gly Ala Asn Leu Arg Gln Asp Asp Ser Val Arg Asn

835 840 845

Leu Phe Ala Ser Val Lys Ser Ser Gln Ser Ser Pro Ile Ile Pro Gly

850 855 860

Phe Gly Gly Asp Phe Asn Leu Thr Leu Leu Glu Pro Val Ser Ile Ser

865 870 875 880

Thr Gly Ser Arg Ser Ala Arg Ser Ala Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asp

885 890 895

Lys Val Thr Ile Ala Asp Pro Gly Tyr Met Gln Gly Tyr Asp Asp Cys

900 905 910

Met Gln Gln Gly Pro Ala Ser Ala Arg Asp Leu Ile Cys Ala Gln Tyr

915 920 925

Val Ala Gly Tyr Lys Val Leu Pro Pro Leu Met Asp Val Asn Met Glu

930 935 940

Ala Ala Tyr Thr Ser Ser Leu Leu Gly Ser Ile Ala Gly Val Gly Trp

945 950 955 960

Thr Ala Gly Leu Ser Ser Phe Ala Ala Ile Pro Phe Ala Gln Ser Ile

965 970 975

Phe Tyr Arg Leu Asn Gly Val Gly Ile Thr Gln Gln Val Leu Ser Glu

980 985 990

Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Lys Phe Asn Gln Ala Leu Gly Ala Met

995 1000 1005

Gln Thr Gly Phe Thr Thr Thr Asn Glu Ala Phe Gln Lys Val Gln

1010 1015 1020

Asp Ala Val Asn Asn Asn Ala Gln Ala Leu Ser Lys Leu Ala Ser

1025 1030 1035

Glu Leu Ser Asn Thr Phe Gly Ala Ile Ser Ala Ser Ile Gly Asp

1040 1045 1050

Ile Ile Gln Arg Leu Asp Val Leu Glu Gln Asp Ala Gln Ile Asp

1055 1060 1065

Arg Leu Ile Asn Gly Arg Leu Thr Thr Leu Asn Ala Phe Val Ala

1070 1075 1080

Gln Gln Leu Val Arg Ser Glu Ser Ala Ala Leu Ser Ala Gln Leu

1085 1090 1095

Ala Lys Asp Lys Val Asn Glu Cys Val Lys Ala Gln Ser Lys Arg

1100 1105 1110

Ser Gly Phe Cys Gly Gln Gly Thr His Ile Val Ser Phe Val Val

1115 1120 1125

Asn Ala Pro Asn Gly Leu Tyr Phe Met His Val Gly Tyr Tyr Pro

1130 1135 1140

Ser Asn His Ile Glu Val Val Ser Ala Tyr Gly Leu Cys Asp Ala

1145 1150 1155

Ala Asn Pro Thr Asn Cys Ile Ala Pro Val Asn Gly Tyr Phe Ile

1160 1165 1170

Lys Thr Asn Asn Thr Arg Ile Val Asp Glu Trp Ser Tyr Thr Gly

1175 1180 1185

Ser Ser Phe Tyr Ala Pro Glu Pro Ile Thr Ser Leu Asn Thr Lys

1190 1195 1200

Tyr Val Ala Pro Gln Val Thr Tyr Gln Asn Ile Ser Thr Asn Leu

1205 1210 1215

Pro Pro Pro Leu Leu Gly Asn Ser Thr Gly Ile Asp Phe Gln Asp

1220 1225 1230

Glu Leu Asp Glu Phe Phe Lys Asn Val Ser Thr Ser Ile Pro Asn

1235 1240 1245

Phe Gly Ser Leu Thr Gln Ile Asn Thr Thr Leu Leu Asp Leu Thr

1250 1255 1260

Tyr Glu Met Leu Ser Leu Gln Gln Val Val Lys Ala Leu Asn Glu

1265 1270 1275

Ser Tyr Ile Asp Leu Lys Glu Leu Gly Asn Tyr Thr Tyr Tyr Asn

1280 1285 1290

Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Val

1295 1300 1305

Ala Leu Ala Leu Cys Val Phe Phe Ile Leu Cys Cys Thr Gly Cys

1310 1315 1320

Gly Thr Asn Cys Met Gly Lys Leu Lys Cys Asn Arg Cys Cys Asp

1325 1330 1335

Arg Tyr Glu Glu Tyr Asp Leu Glu Pro His Lys Val His Val His

1340 1345 1350

<210> 11

<211> 720

<212> DNA

<213> MERS-CoV

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(720)

<400> 11

gaa gca aaa cct tct ggc tca gtt gtg gaa cag gct gaa ggt gtt gaa 48

Glu Ala Lys Pro Ser Gly Ser Val Val Glu Gln Ala Glu Gly Val Glu

1 5 10 15

tgt gat ttt tca cct ctt ctg tct ggc aca cct cct cag gtt tat aat 96

Cys Asp Phe Ser Pro Leu Leu Ser Gly Thr Pro Pro Gln Val Tyr Asn

20 25 30

ttc aag cgt ttg gtt ttt acc aat tgc aat tat aat ctt acc aaa ttg 144

Phe Lys Arg Leu Val Phe Thr Asn Cys Asn Tyr Asn Leu Thr Lys Leu

35 40 45

ctt tca ctt ttt tct gtg aat gat ttt act tgt agt caa ata tct cca 192

Leu Ser Leu Phe Ser Val Asn Asp Phe Thr Cys Ser Gln Ile Ser Pro

50 55 60

gca gca att gct agc aac tgt tat tct tca ctg att ttg gat tac ttt 240

Ala Ala Ile Ala Ser Asn Cys Tyr Ser Ser Leu Ile Leu Asp Tyr Phe

65 70 75 80

tca tac cca ctt agt atg aaa tcc gat ctc agt gtt agt tct gct ggt 288

Ser Tyr Pro Leu Ser Met Lys Ser Asp Leu Ser Val Ser Ser Ala Gly

85 90 95

cca ata tcc cag ttt aat tat aaa cag tcc ttt tct aat ccc aca tgt 336

Pro Ile Ser Gln Phe Asn Tyr Lys Gln Ser Phe Ser Asn Pro Thr Cys

100 105 110

ttg att tta gcg act gtt cct cat aac ctt act act att act aag cct 384

Leu Ile Leu Ala Thr Val Pro His Asn Leu Thr Thr Ile Thr Lys Pro

115 120 125

ctt aag tac agc tat att aac aag tgc tct cgt ctt ctt tct gat gat 432

Leu Lys Tyr Ser Tyr Ile Asn Lys Cys Ser Arg Leu Leu Ser Asp Asp

130 135 140

cgt act gaa gta cct cag tta gtg aac gct aat caa tac tca ccc tgt 480

Arg Thr Glu Val Pro Gln Leu Val Asn Ala Asn Gln Tyr Ser Pro Cys

145 150 155 160

gta tcc att gtc cca tcc act gtg tgg gaa gac ggt gat tat tat agg 528

Val Ser Ile Val Pro Ser Thr Val Trp Glu Asp Gly Asp Tyr Tyr Arg

165 170 175

aaa caa cta tct cca ctt gaa ggt ggt ggc tgg ctt gtt gct agt ggc 576

Lys Gln Leu Ser Pro Leu Glu Gly Gly Gly Trp Leu Val Ala Ser Gly

180 185 190

tca act gtt gcc atg act gag caa tta cag atg ggc ttt ggt att aca 624

Ser Thr Val Ala Met Thr Glu Gln Leu Gln Met Gly Phe Gly Ile Thr

195 200 205

gtt caa tat ggt aca gac acc aat agt gtt tgc ccc aag ctt gaa ttt 672

Val Gln Tyr Gly Thr Asp Thr Asn Ser Val Cys Pro Lys Leu Glu Phe

210 215 220

gct aat gac aca aaa att gcc tct caa tta ggc aat tgc gtg gaa tat 720

Ala Asn Asp Thr Lys Ile Ala Ser Gln Leu Gly Asn Cys Val Glu Tyr

225 230 235 240

<210> 12

<211> 240

<212> PRT

<213> MERS-CoV

<400> 12

Glu Ala Lys Pro Ser Gly Ser Val Val Glu Gln Ala Glu Gly Val Glu

1 5 10 15

Cys Asp Phe Ser Pro Leu Leu Ser Gly Thr Pro Pro Gln Val Tyr Asn

20 25 30

Phe Lys Arg Leu Val Phe Thr Asn Cys Asn Tyr Asn Leu Thr Lys Leu

35 40 45

Leu Ser Leu Phe Ser Val Asn Asp Phe Thr Cys Ser Gln Ile Ser Pro

50 55 60

Ala Ala Ile Ala Ser Asn Cys Tyr Ser Ser Leu Ile Leu Asp Tyr Phe

65 70 75 80

Ser Tyr Pro Leu Ser Met Lys Ser Asp Leu Ser Val Ser Ser Ala Gly

85 90 95

Pro Ile Ser Gln Phe Asn Tyr Lys Gln Ser Phe Ser Asn Pro Thr Cys

100 105 110

Leu Ile Leu Ala Thr Val Pro His Asn Leu Thr Thr Ile Thr Lys Pro

115 120 125

Leu Lys Tyr Ser Tyr Ile Asn Lys Cys Ser Arg Leu Leu Ser Asp Asp

130 135 140

Arg Thr Glu Val Pro Gln Leu Val Asn Ala Asn Gln Tyr Ser Pro Cys

145 150 155 160

Val Ser Ile Val Pro Ser Thr Val Trp Glu Asp Gly Asp Tyr Tyr Arg

165 170 175

Lys Gln Leu Ser Pro Leu Glu Gly Gly Gly Trp Leu Val Ala Ser Gly

180 185 190

Ser Thr Val Ala Met Thr Glu Gln Leu Gln Met Gly Phe Gly Ile Thr

195 200 205

Val Gln Tyr Gly Thr Asp Thr Asn Ser Val Cys Pro Lys Leu Glu Phe

210 215 220

Ala Asn Asp Thr Lys Ile Ala Ser Gln Leu Gly Asn Cys Val Glu Tyr

225 230 235 240

<210> 13

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<212> DNA

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<220>

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Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

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acc ctc tca ctc acc tgt tcc atc tcc ggg gac agt gtc tct agc aac 96

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30

agt gct gct tgg aac tgg atc agg cag tcc cca tcg aga ggc ctt gag 144

Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu

35 40 45

tgg ctg gga agg aca tac tac agg tcc aag tgg tat aat gat tat gca 192

Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala

50 55 60

gga act gtg aaa agt cga ata gcc atc aac cca gac aca tcc aag aac 240

Gly Thr Val Lys Ser Arg Ile Ala Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn

65 70 75 80

cag ttc tcc ctg cac ctg aac tct gtg act ccc gag gac acg gct gtg 288

Gln Phe Ser Leu His Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

tat ttc tgt gca aga gtg ata tca gtg gct ggt tat gct ttt gat atc 336

Tyr Phe Cys Ala Arg Val Ile Ser Val Ala Gly Tyr Ala Phe Asp Ile

100 105 110

tgg ggc caa ggg aca atg gtc acc gtc tcc tca 369

Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 14

<211> 123

<212> PRT

<213> 智人

<400> 14

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

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Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu

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Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala

50 55 60

Gly Thr Val Lys Ser Arg Ile Ala Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn

65 70 75 80

Gln Phe Ser Leu His Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val

85 90 95

Tyr Phe Cys Ala Arg Val Ile Ser Val Ala Gly Tyr Ala Phe Asp Ile

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 15

<211> 321

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(321)

<400> 15

gaa att gtg ttg aca cag tct cca ggc acc ctg tct ttg tct cca ggg 48

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

gaa aga gcc acc ctc tcc tgc agg gcc agt cag agt gtt agc agc acc 96

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Thr

20 25 30

ttc tta gcc tgg tac cag cag aaa cct ggc cag gct ccc agg ctc ctc 144

Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

atc tat ggt gca tcc tac atg gcc act ggc atc cca gac agg ttc agt 192

Ile Tyr Gly Ala Ser Tyr Met Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

ggc agt ggg tct ggg aca gac ttc act ctc acc atc agc aga ctg gag 240

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

cct gaa gat ttt gca gtg tat tac tgt cag cag tat ggt agc tca ctc 288

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Leu

85 90 95

act ttc ggc ggg ggg acc aag ctg gag atc aaa 321

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

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<210> 16

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<212> PRT

<213> 智人

<400> 16

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Thr

20 25 30

Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

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Ile Tyr Gly Ala Ser Tyr Met Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 17

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<212> DNA

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<220>

<221> CDS

<222> (1)..(360)

<400> 3

gag gtg cag cta cag cag tgg ggc gca gga ctg ttg aag cct tcg gag 48

Glu Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

acc ctg tcc ctc acc tgc gct gtc tat ggt ggg tcc ttc agt ggt tac 96

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

tac tgg agc tgg atc cgt cag ccc cca ggg aag ggg ctg gag tgg att 144

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

ggg gaa atc aat cat agt gga agc acc aac tac aac ccg tcc ctc aag 192

Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

agt cga gtc acc att tca gta gac acg tcc aag aac cag ttc tcc ctg 240

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

aag ctg agc tct gtg acc gcc gcg gac acg gct gtg tat tac tgt gcg 288

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

aga ggt tgg gac cta gac tac tac tac ggt atg gac gtc tgg ggc caa 336

Arg Gly Trp Asp Leu Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln

100 105 110

ggg acc acg gta acc gtc tcc tca 360

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 18

<211> 120

<212> PRT

<213> 智人

<400> 5

Glu Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Trp Asp Leu Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 19

<211> 321

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<221> CDS

<222> (1)..(321)

<400> 19

gac atc cgg atg acc cag tct cca tct gcc atg tct gca tct gta gga 48

Asp Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ala Met Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

gac aga gtc acc gtc act tgt cgg gcg agt cag ggc att ggc aat tat 96

Asp Arg Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Asn Tyr

20 25 30

tta gcc tgg ttt cag ctg aaa cca ggg aaa gtc cct aag cgc ctg atc 144

Leu Ala Trp Phe Gln Leu Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Arg Leu Ile

35 40 45

tat gct gca tcc agt ttg caa agt ggg gtc cca gca agg ttc agc ggc 192

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

ggt gga tct ggg aca gaa ttc act ctc aca atc agc agc ctg cag cct 240

Gly Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

gaa gat ttt gca act tat tac tgt cta cag cat ggt ttt ctc ccg tgg 288

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Gly Phe Leu Pro Trp

85 90 95

acg ttc ggc caa ggg acc aag ctg gag atc aaa 321

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 20

<211> 107

<212> PRT

<213> 智人

<400> 20

Asp Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ala Met Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Asn Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Phe Gln Leu Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Arg Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Gly Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Gly Phe Leu Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 21

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工的

<220>

<223> 合成DNA

<400> 21

ataatcgacg ttcaagcaag 20

<210> 22

<211> 3822

<212> DNA

<213> 严重急性呼吸系统综合症冠状病毒 2 (SARS-CoV-2)

<400> 22

atgtttgttt ttcttgtttt attgccacta gtctctagtc agtgtgttaa tcttacaacc 60

agaactcaat taccccctgc atacactaat tctttcacac gtggtgttta ttaccctgac 120

aaagttttca gatcctcagt tttacattca actcaggact tgttcttacc tttcttttcc 180

aatgttactt ggttccatgc tatacatgtc tctgggacca atggtactaa gaggtttgat 240

aaccctgtcc taccatttaa tgatggtgtt tattttgctt ccactgagaa gtctaacata 300

ataagaggct ggatttttgg tactacttta gattcgaaga cccagtccct acttattgtt 360

aataacgcta ctaatgttgt tattaaagtc tgtgaatttc aattttgtaa tgatccattt 420

ttgggtgttt attaccacaa aaacaacaaa agttggatgg aaagtgagtt cagagtttat 480

tctagtgcga ataattgcac ttttgaatat gtctctcagc cttttcttat ggaccttgaa 540

ggaaaacagg gtaatttcaa aaatcttagg gaatttgtgt ttaagaatat tgatggttat 600

tttaaaatat attctaagca cacgcctatt aatttagtgc gtgatctccc tcagggtttt 660

tcggctttag aaccattggt agatttgcca ataggtatta acatcactag gtttcaaact 720

ttacttgctt tacatagaag ttatttgact cctggtgatt cttcttcagg ttggacagct 780

ggtgctgcag cttattatgt gggttatctt caacctagga cttttctatt aaaatataat 840

gaaaatggaa ccattacaga tgctgtagac tgtgcacttg accctctctc agaaacaaag 900

tgtacgttga aatccttcac tgtagaaaaa ggaatctatc aaacttctaa ctttagagtc 960

caaccaacag aatctattgt tagatttcct aatattacaa acttgtgccc ttttggtgaa 1020

gtttttaacg ccaccagatt tgcatctgtt tatgcttgga acaggaagag aatcagcaac 1080

tgtgttgctg attattctgt cctatataat tccgcatcat tttccacttt taagtgttat 1140

ggagtgtctc ctactaaatt aaatgatctc tgctttacta atgtctatgc agattcattt 1200

gtaattagag gtgatgaagt cagacaaatc gctccagggc aaactggaaa gattgctgat 1260

tataattata aattaccaga tgattttaca ggctgcgtta tagcttggaa ttctaacaat 1320

cttgattcta aggttggtgg taattataat tacctgtata gattgtttag gaagtctaat 1380

ctcaaacctt ttgagagaga tatttcaact gaaatctatc aggccggtag cacaccttgt 1440

aatggtgttg aaggttttaa ttgttacttt cctttacaat catatggttt ccaacccact 1500

aatggtgttg gttaccaacc atacagagta gtagtacttt cttttgaact tctacatgca 1560

ccagcaactg tttgtggacc taaaaagtct actaatttgg ttaaaaacaa atgtgtcaat 1620

ttcaacttca atggtttaac aggcacaggt gttcttactg agtctaacaa aaagtttctg 1680

cctttccaac aatttggcag agacattgct gacactactg atgctgtccg tgatccacag 1740

acacttgaga ttcttgacat tacaccatgt tcttttggtg gtgtcagtgt tataacacca 1800

ggaacaaata cttctaacca ggttgctgtt ctttatcagg atgttaactg cacagaagtc 1860

cctgttgcta ttcatgcaga tcaacttact cctacttggc gtgtttattc tacaggttct 1920

aatgtttttc aaacacgtgc aggctgttta ataggggctg aacatgtcaa caactcatat 1980

gagtgtgaca tacccattgg tgcaggtata tgcgctagtt atcagactca gactaattct 2040

cctcggcggg cacgtagtgt agctagtcaa tccatcattg cctacactat gtcacttggt 2100

gcagaaaatt cagttgctta ctctaataac tctattgcca tacccacaaa ttttactatt 2160

agtgttacca cagaaattct accagtgtct atgaccaaga catcagtaga ttgtacaatg 2220

tacatttgtg gtgattcaac tgaatgcagc aatcttttgt tgcaatatgg cagtttttgt 2280

acacaattaa accgtgcttt aactggaata gctgttgaac aagacaaaaa cacccaagaa 2340

gtttttgcac aagtcaaaca aatttacaaa acaccaccaa ttaaagattt tggtggtttt 2400

aatttttcac aaatattacc agatccatca aaaccaagca agaggtcatt tattgaagat 2460

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ttgccacctt tgctcacaga tgaaatgatt gctcaataca cttctgcact gttagcgggt 2640

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acagcaagtg cacttggaaa acttcaagat gtggtcaacc aaaatgcaca agctttaaac 2880

acgcttgtta aacaacttag ctccaatttt ggtgcaattt caagtgtttt aaatgatatc 2940

ctttcacgtc ttgacaaagt tgaggctgaa gtgcaaattg ataggttgat cacaggcaga 3000

cttcaaagtt tgcagacata tgtgactcaa caattaatta gagctgcaga aatcagagct 3060

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<210> 23

<211> 215

<212> PRT

<213> 严重急性呼吸系统综合症冠状病毒 2 (SARS-CoV-2)

<400> 23

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Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp

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Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr

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Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val

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Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr

115 120 125

Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu

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Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe

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Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn

210 215

<210> 24

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> 合成蛋白

<400> 24

Met Ile His Ser Val Phe Leu Leu Met Phe Leu Leu Thr Pro Thr Glu

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Ser Tyr Val Asp

20

<210> 25

<211> 1179

<212> PRT

<213> SARS 冠状病毒 BJ182-8

<400> 25

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20 25 30

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Phe Tyr Ser Asn Val Thr Gly Phe His Thr Ile Asn His Thr Phe Gly

50 55 60

Asn Pro Val Ile Pro Phe Lys Asp Gly Ile Tyr Phe Ala Ala Thr Glu

65 70 75 80

Lys Ser Asn Val Val Arg Gly Trp Val Phe Gly Ser Thr Met Asn Asn

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Lys Ser Gln Ser Val Ile Ile Ile Asn Asn Ser Thr Asn Val Val Ile

100 105 110

Arg Ala Cys Asn Phe Glu Leu Cys Asp Asn Pro Phe Phe Ala Val Ser

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Glu Lys Ser Gly Asn Phe Lys His Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn

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195 200 205

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<210> 26

<211> 1278

<212> PRT

<213> 中东呼吸综合征冠状病毒 (MERS-CoV)

<400> 26

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835 840 845

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Asp Lys Val Thr Ile Ala Asp Pro Gly Tyr Met Gln Gly Tyr Asp Asp

885 890 895

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<210> 27

<211> 1271

<212> PRT

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<400> 27

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580 585 590

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915 920 925

Val Gln Ser Phe Asn Gly Ile Lys Val Leu Pro Pro Ile Leu Ser Glu

930 935 940

Ser Gln Ile Ser Gly Tyr Thr Thr Ala Ala Thr Val Ala Ala Met Phe

945 950 955 960

Pro Pro Trp Ser Ala Ala Ala Gly Ile Pro Phe Ser Leu Asn Val Gln

965 970 975

Tyr Arg Ile Asn Gly Leu Gly Val Thr Met Asp Val Leu Asn Lys Asn

980 985 990

Gln Lys Leu Ile Ala Thr Ala Phe Asn Asn Ala Leu Leu Ser Ile Gln

995 1000 1005

Asn Gly Phe Ser Ala Thr Asn Ser Ala Leu Ala Lys Ile Gln Ser

1010 1015 1020

Val Val Asn Ser Asn Ala Gln Ala Leu Asn Ser Leu Leu Gln Gln

1025 1030 1035

Leu Phe Asn Lys Phe Gly Ala Ile Ser Ser Ser Leu Gln Glu Ile

1040 1045 1050

Leu Ser Arg Leu Asp Ala Leu Glu Ala Gln Val Gln Ile Asp Arg

1055 1060 1065

Leu Ile Asn Gly Arg Leu Thr Ala Leu Asn Ala Tyr Val Ser Gln

1070 1075 1080

Gln Leu Ser Asp Ile Ser Leu Val Lys Phe Gly Ala Ala Leu Ala

1085 1090 1095

Met Glu Lys Val Asn Glu Cys Val Lys Ser Gln Ser Pro Arg Ile

1100 1105 1110

Asn Phe Cys Gly Asn Gly Asn His Ile Leu Ser Leu Val Gln Asn

1115 1120 1125

Ala Pro Tyr Gly Leu Leu Phe Met His Phe Ser Tyr Lys Pro Ile

1130 1135 1140

Ser Phe Lys Thr Val Leu Val Ser Pro Gly Leu Cys Ile Ser Gly

1145 1150 1155

Asp Val Gly Ile Ala Pro Lys Gln Gly Tyr Phe Ile Lys His Asn

1160 1165 1170

Asp His Trp Met Phe Thr Gly Ser Ser Tyr Tyr Tyr Pro Glu Pro

1175 1180 1185

Ile Ser Asp Lys Asn Val Val Phe Met Asn Thr Cys Ser Val Asn

1190 1195 1200

Phe Thr Lys Ala Pro Leu Val Tyr Leu Asn His Ser Val Pro Lys

1205 1210 1215

Leu Ser Asp Phe Glu Ser Glu Leu Ser His Trp Phe Lys Asn Gln

1220 1225 1230

Thr Ser Ile Ala Pro Asn Leu Thr Leu Asn Leu His Thr Ile Asn

1235 1240 1245

Ala Thr Phe Leu Asp Leu Tyr Tyr Glu Met Asn Leu Ile Gln Glu

1250 1255 1260

Ser Ile Lys Ser Leu Asn Asn Ser Tyr Ile Asn Leu Lys Asp Ile

1265 1270 1275

Gly Thr Tyr Glu Met Tyr Val

1280 1285

<210> 31

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工的

<220>

<223> 合成DNA

<400> 31

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<210> 32

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工的

<220>

<223> 合成DNA

<400> 32

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<210> 33

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工的

<220>

<223> 合成DNA

<400> 33

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<210> 34

<211> 1201

<212> PRT

<213> 严重急性呼吸系统综合症冠状病毒 2 (SARS-CoV-2)

<400> 34

Ser Ser Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala

1 5 10 15

Tyr Thr Asn Ser Phe Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe

20 25 30

Arg Ser Ser Val Leu His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe

35 40 45

Ser Asn Val Thr Trp Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly

50 55 60

Thr Lys Arg Phe Asp Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr

65 70 75 80

Phe Ala Ser Thr Glu Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly

85 90 95

Thr Thr Leu Asp Ser Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala

100 105 110

Thr Asn Val Val Ile Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro

115 120 125

Phe Leu Gly Val Tyr Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser

130 135 140

Glu Phe Arg Val Tyr Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val

145 150 155 160

Ser Gln Pro Phe Leu Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys

165 170 175

Asn Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile

180 185 190

Tyr Ser Lys His Thr Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly

195 200 205

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210 215 220

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225 230 235 240

Gly Asp Ser Ser Ser Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val

245 250 255

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275 280 285

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305 310 315 320

Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe

325 330 335

Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala

340 345 350

Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys

355 360 365

Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val

370 375 380

Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala

385 390 395 400

Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp

405 410 415

Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser

420 425 430

Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser

435 440 445

Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala

450 455 460

Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro

465 470 475 480

Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro

485 490 495

Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr

500 505 510

Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val

515 520 525

Asn Phe Asn Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser

530 535 540

Asn Lys Lys Phe Leu Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp

545 550 555 560

Thr Thr Asp Ala Val Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile

565 570 575

Thr Pro Cys Ser Phe Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn

580 585 590

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595 600 605

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610 615 620

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625 630 635 640

Gly Ala Glu His Val Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly

645 650 655

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660 665 670

Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met

675 680 685

Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala

690 695 700

Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val

705 710 715 720

Ser Met Thr Lys Thr Ser Val Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp

725 730 735

Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr

740 745 750

Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn

755 760 765

Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro

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Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro

785 790 795 800

Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys

805 810 815

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820 825 830

Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly

835 840 845

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Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly

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900 905 910

Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser

915 920 925

Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn

930 935 940

Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn

945 950 955 960

Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp

965 970 975

Lys Val Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu

980 985 990

Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu

995 1000 1005

Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys

1010 1015 1020

Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr

1025 1030 1035

His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe

1040 1045 1050

Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr

1055 1060 1065

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1070 1075 1080

Gly Val Phe Val Ser Asn Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg

1085 1090 1095

Asn Phe Tyr Glu Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val

1100 1105 1110

Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val

1115 1120 1125

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1130 1135 1140

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1145 1150 1155

Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu

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Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu

1175 1180 1185

Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile

1190 1195 1200

Claims (14)

1.一种抗体，其针对冠状病毒的刺突蛋白。

2.根据权利要求1所述的抗体，其中，

刺突蛋白为胞外区或受体结合域的蛋白质。

3.根据权利要求1或2所述的抗体，其中，

刺突蛋白的表位为受体结合域的全长氨基酸序列中选自R403、D405、E406、R408、T415、G416、K417、D420、Y449、Y453、L455、F456、G485、Y486、N487、Y489、Q493、S494、Y495、G496、Q498、N501、G502、V503、G504和Y505中的至少2个氨基酸残基。

4.根据权利要求3所述的抗体，其中，

2个氨基酸残基为R403和K417。

5.根据权利要求1所述的抗体，其中，

冠状病毒为SARS-CoV1、SARS-CoV2或MERS-CoV。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的抗体，其中，

作为病毒的增殖抑制指标的IC50，中和活性低于1ng/ml。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的抗体，其中，

重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.14或18表示的氨基酸序列。

8.根据权利要求1～6中任一项所述的抗体，其中，

轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.16或20表示的氨基酸序列。

9.一种抗体，其与权利要求1～8中任一项所述的抗体结合的表位结合。

10.根据权利要求1～9中任一项所述的抗体，其中，

抗体为嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。

11.一种药物组合物，其包含权利要求1～10中任一项所述的抗体。

12.根据权利要求11所述的药物组合物，其用于治疗冠状病毒传染病。

13.一种冠状病毒检测用试剂，其包含权利要求1～10中任一项所述的抗体。

14.一种冠状病毒的检测方法，其包含：

使权利要求1～10中任一项所述的抗体与采集得到的生物样品接触的工序。

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