CN116209462A - 使用m2/bm2缺陷型流感病毒载体的疫苗 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了包含流感病毒骨架的重组病毒，其中所述流感病毒骨架包含PB1、PB2、PA、NP、M、NS、HA和NA基因区段，其中所述PB1、PB2、PA、NP、M、NS、HA和NA基因区段中的至少一个包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列。本发明提供了重组病毒，其中抗原是SARS‑CoV‑2刺突糖蛋白的免疫原性片段。本发明还提供了引发免疫应答的药物制剂和方法。

Description

使用M2/BM2缺陷型流感病毒载体的疫苗
以电子方式提交的材料通过引用并入
通过引用以其整体并入本文的是随本文同时提交并且如下鉴定的计算机可读的核苷酸/氨基酸序列表：名称为“755022SequenceListing.txt”，创建于2021年7月20日的一份271,121字节ASCII(文本)文件。
发明背景
疫苗是用于预防来自感染性疾病的疾病的重要工具。感染性疾病可在全世界感染数百万人。因此，开发针对多种不同类型疾病的疫苗并且快速和有效地实现这一点是重要的。例如，新型冠状病毒疾病2019(COVID-19)是由新出现的病毒严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)引起的全球大流行病。全世界已有1000多万人被诊断患有该疾病，并且成千上万人死于该疾病。在其严重形式中，该疾病的特征在于急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，并且目前没有治疗或预防它的靶向干预策略。对病毒的免疫应答被认为既有助于疾病的发病机理又在其解决过程中提供保护。因此，前所未有地需要开发一种安全有效的疫苗来免疫极其大量的个体。
发明概述
本发明提供了包含流感病毒骨架的重组病毒，其中所述流感病毒骨架包含PB1、PB2、PA、NP、M、NS、HA和NA基因区段，其中PB1、PB2、PA、NP、M、NS、HA和NA基因区段中的至少一个包含编码至少一种抗原的至少一个核苷酸序列。在优选的实施方案中，抗原是严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)刺突糖蛋白的免疫原性片段。
附图中几个视图的简要说明
图1是经工程改造以表达NS1与SARS-CoV-2刺突受体结合结构域融合蛋白的甲型流感病毒NS区段的示意图。该构建体包括全长甲型流感病毒PR/8/1934NS1蛋白、第一接头(GSG1)、编码SARS-COV-2Wuhan-Hu-1刺突S1蛋白的RBD(受体结合结构域)的氨基酸331-530、第二接头(GSG2)、切割位点(P2A)以及具有外显子1和2的必需PR8核输出蛋白(NEP或NS2)的cDNA。
图2是经工程改造以表达SARS-CoV-2刺突受体结合结构域作为单独多肽的甲型流感病毒NS区段的示意图。该构建体包括全长甲型流感病毒PR/8/1934NS1蛋白、第一接头(GSG1)、第一切割位点(T2A)、编码SARS-COV-2Wuhan-Hu-1刺突S1蛋白的RBD的氨基酸331-530、第二接头(GSG2)、第二切割位点(P2A)以及具有外显子1和2的必需PR8核输出蛋白(NEP或NS2)的cDNA。
图3描绘了来自感染有COV2 NS M2SR、M2SR对照和仅MOCK培养基的Vero细胞的细胞裂解物的免疫印迹的图像。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离蛋白质并对其进行免疫印迹分析。第一抗体是抗SARS-CoV-2RBD(Sino Biological Inc.,Beijing,China)以及第二抗体是利用3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)检测的抗兔IgG辣根过氧化物酶(HRP)。
图4是显示COV2 NS1 M2SR和标准M2SR感染细胞均表达可检测水平的甲型流感病毒NP蛋白的一组图像。同时，RBD的FITC标记只能在COV2 NS1 M2SR感染的细胞中检测到，从而提供了显著的可检测荧光。
图5是经工程改造以表达BM2 SARS-CoV-2刺突RBD与BM2蛋白(SEQ ID NO:84，96)的氨基和羧基末端融合的乙型流感病毒M区段7的示意图。该构建体包括全长乙型流感病毒/佛罗里达/4/2006M1蛋白、5-mer翻译终止/起始位点、氨基酸1-8BM2开放阅读框(ORF)、编码SARS-COV-2Wuhan-Hu-1刺突S1蛋白的RBD的氨基酸330-524和BM2 RBD融合蛋白。
图6是经工程改造以表达BM2 SARS-CoV-2刺突RBD与BM2蛋白(SEQ ID NO:83，95)的氨基末端融合的乙型流感病毒M区段7的示意图。该构建体包括全长乙型流感病毒/佛罗里达/4/2006M1蛋白、5-mer翻译终止/起始位点、包含氨基酸1-3BM2 ORF的BM2 RBD融合蛋白和编码SARS-COV-2Wuhan-Hu-1刺突S1蛋白的RBD的330-524。
图7描绘了来自Vero细胞的细胞裂解物的免疫印迹的图像。总细胞裂解物来自用2种SARS-CoV-2BM2SR毒株(SEQ ID No:83、84、95、96)BM2SR感染的细胞，以及仅MOCK培养基作为阴性对照。通过SDS-PAGE分离蛋白质，然后进行免疫印迹分析。第一抗体是抗SARS-CoV-2RBD(Sino Biological Inc.)以及用TMB检测第二抗体抗兔IgG-HRP。RBD融合蛋白的位置在图像中用井号表示。
图8A是描绘用M2SR重组病毒免疫后小鼠体重变化百分比的图。
图8B是描绘用BM2SR重组病毒免疫后小鼠体重变化百分比的图。
图9是显示酶联免疫吸附测定(ELISA)滴度相对于免疫前基线的倍数增加的条形图。
图10A-10D是描绘研究结果的一组图，其中用单价H1N1FGHY1-M2SR、单价H3N2FGHY1-M2SR、二价H1N1和H3N2 FGHY1-M2MR、单价BM2SR-Vic、单价BM2SR-Yam、二价BM2SR、三价H1N1和H3N2 FGHY1-M2SR和BM2SR Victoria或Yamagata或四价H1N1和H3N2 FGHY1-M2SR和BM2SR Victoria和Yamagata疫苗或对照(SPG)鼻内免疫小鼠(N＝8)。图10A描绘了抗H1HA血清IgG ELISA滴度数据，图10B描绘了抗H3 HA数据，图10C描绘了抗乙型流感病毒-VicHA数据，以及图10D描绘了抗乙型流感病毒-Yam HA数据。
图11描绘了总簇计数相对于簇中命中数的直方图。非常少的簇具有超过10次的命中，如在10.0至20.0次命中之间的灰色阴影所示。
图12描绘了显示两种毒株的病毒滴度TCID50曲线的图，表明病毒生长不被表达NS1和NEP作为单一自切割肽的合成区段损害。
图13描绘了显示生长曲线的图，表明与野生型相比，NS1与未修饰的SARS-CoV-2螺旋抗原融合的区段8损害了病毒的生长。
图14是经工程改造以表达与M2蛋白的氨基末端融合的SARS-CoV-2刺突受体结合结构域的甲型流感病毒M区段7的示意图。该构建体包括全长甲型流感病毒/PR/8/34M1蛋白、剪接位点、包含氨基酸1-25M2 ORF的M2 RBD FLAG融合蛋白、SARS-CoV-2MHC I相容性RBD抗原和FLAG标签以及终止密码子。
图15是用于产生M2SR流感病毒的流感HA基因区段设计的示意图，所述M2SR流感病毒能够驱动锚定到感染细胞的胞外膜的抗原的表达。对于图15-20，“UTR”是指“非翻译区”,“2A”是指“2A自切割肽”，“MD”是指“多聚化结构域”,“TM”是指“跨膜结构域”，以及“ncr”是指“非编码区”。
图16是用于产生M2SR流感病毒的流感HA基因区段设计的示意图，所述M2SR流感病毒能够驱动锚定到感染细胞的胞外膜的抗原的表达。
图17是用于产生M2SR流感病毒的流感NS基因区段设计的示意图，所述M2SR流感病毒能够驱动锚定到感染细胞的胞外膜的抗原的表达。
图18是用于产生M2SR流感病毒的流感基因NS区段设计的示意图，所述M2SR流感病毒能够驱动锚定到感染细胞的胞外膜的抗原的表达。
图19是用于产生M2SR流感病毒的流感基因NA区段设计的示意图，所述M2SR流感病毒能够驱动锚定到感染细胞的胞外膜的抗原的表达。
图20是用于产生M2SR流感病毒的流感基因NA区段设计的示意图，所述M2SR流感病毒能够驱动锚定到感染细胞的胞外膜的抗原的表达。
图21描绘了编码NS1 ORF和NEP外显子1的重复区域的序列。小写字母表示来自A/PR/8/34的突变。在NEPδ2N突变体(SEQ ID NO:110)的NEP外显子1的第二个拷贝中缺失碱基1-6。编码NEP外显子1的NS区段的重复区域的第二个拷贝与野生型A/PR/8/34NS区段cDNA序列的第一个拷贝63％相同，所述野生型A/PR/8/34NS区段cDNA序列具有消除剪接供体位点的单核苷酸突变(SEQ ID NO:109)。
图22描绘了NS1 ORF和NEP外显子2的序列。小写字母表示来自A/PR/8/34的突变。来自NEP外显子2的NS区段的重复区域的第一个拷贝(SEQ ID NO:111)与野生型A/PR/8/34NS区段cDNA序列(SEQ ID NO:112)的第二个拷贝88％相同。
图23描绘了M2SR病毒以MOI＝10接种M2VeroA细胞后连续3天的荧光显微照片图像，所述M2SR病毒具有表达分别由T2A和P2A位点分开的NS1、EGFP和NEP肽(SEQ ID NO:111、112和114)的三联多蛋白的工程化NS区段(SEQ ID NO:113)。
图24描绘了仅被M2SR载体病毒感染，或者被具有NS1区段的M2SR病毒感染的免疫染色的活M2VeroA细胞的流式细胞术分析，所述NS1区段被设计成使用来自RSV的T4 Foldon和TM中仅12个氨基酸的SARS-CoV-2刺突信号序列(SEQ ID NO:115)来指导SARS-CoV-2S1RBD小刺突蛋白三聚体在细胞表面的表达。
图25描绘了仅被M2SR载体病毒感染，或者被具有HA区段的M2SR病毒感染的免疫染色的活M2VeroA细胞的流式细胞术分析，所述HA区段具有SARS-CoV-2S1 RBD与来自A/新加坡/2016H3N2流感病毒的血凝素的氨基末端的直接融合(SEQ ID NO:116)。
图26描绘了用复制子DNA质粒系统转染的人293T细胞的流式细胞术分析，所述复制子DNA质粒系统具有编码呼吸道合胞病毒表面糖蛋白G(RSV G)抗原与来自A/新加坡/2016H3N2流感病毒的血凝素的氨基末端的直接融合的HA区段(SEQ ID NO:117)。
图27描绘了仅被M2SR载体病毒感染，或者被具有NS1区段的M2SR病毒感染的活M2VeroA细胞的流式细胞术分析，所述NS1区段被设计成使用SARS-CoV-2S蛋白信号序列和具有SARS-CoV-2S蛋白TM(SEQ ID NO:119)的S2螺旋连接头结构域指导SARS-CoV-2小刺突蛋白在细胞表面的表达。
图28是如实施例6所述的四种给药方案接种前以及初免和加强施用后的平均血清抗SARS-COV2 RBD IgG滴度的图。
发明详述
本发明的重组病毒可以是任何类型的病毒。如本文所用，重组病毒(例如，重配株(reassortant)或不同的病毒)是包含衍生自遗传上不同的病毒(例如，异源基因区段)的遗传物质(例如，基因区段)的病毒。
如本文所用，术语“基因区段”是指编码病毒蛋白的核苷酸序列。基因区段可以由编码病毒RNA(vRNA)的cDNA(互补DNA)序列表示，即编码病毒蛋白的SEQ ID NO:43-47、53、56、58、60、63-67和73。
如本文所用，术语“骨架”是指编码PB1、PB2、PA、NP、NS1和/或NS2以及M蛋白的流感基因区段。本发明的基因区段编码具有选定氨基酸的蛋白质。病毒骨架是流感病毒骨架。基于流感病毒的核心蛋白分类，有四种类型的流感病毒(即，甲、乙、丙和丁)，尽管季节性流行病最常由流行的甲型流感病毒和乙型流感病毒引起。在一个实施方案中，流感病毒骨架是甲型流感病毒骨架。在另一个实施方案中，流感病毒骨架是乙型流感病毒骨架。
如本文所用，术语“选定氨基酸”是指在氨基酸序列的特定位置上的特定氨基酸。在一些实施方案中，所述选定氨基酸是亲本氨基酸序列的遗传突变的结果。除了选定氨基酸对应的位置之外，亲本氨基酸序列可以与包含选定氨基酸的氨基酸序列相同。
重组病毒
(A)甲型流感病毒骨架蛋白
本发明的PB1(聚合酶碱性蛋白1)基因区段可以编码包含至少一个选定氨基酸的蛋白，即PB1蛋白。在优选的实施方案中，所述选定氨基酸包含在第40位的亮氨酸以及在第180位的色氨酸。PB1蛋白的选定氨基酸还包含在第464位的天冬酰胺或在第607位的丝氨酸中的至少一种。PB1基因区段可以任选地包含核苷酸第4位的胞嘧啶至尿嘧啶的启动子突变。
可以通过对亲本PB1序列，例如除了选定氨基酸对应的位置之外，与本发明的PB1氨基酸序列相同的序列，进行基因突变来获得选定氨基酸。PB1蛋白的第464位氨基酸位于流感PB1蛋白的手掌区并连接RNA依赖性RNA聚合酶活性结构域。通常，在蛋和MDCK细胞中分离的流感病毒中，第464位的天冬氨酸是高度保守的。尽管该氨基酸的作用尚未鉴定，但在该位置观察到的氨基酸改变为天冬酰胺(N)可能影响PB1蛋白构象，并可能影响与宿主细胞因子的相互作用，因此影响Vero细胞中的流感病毒聚合酶活性。此外，流感病毒RNA聚合酶是由PA、PB1和PB2亚基组成的异源三聚体。PB1蛋白的第465位的组氨酸与PA蛋白的第243位的谷氨酸相互作用，PB1的第464位的氨基酸变化可以改变PB1与PA之间的相互作用。PB1蛋白的第607位氨基酸的功能也是未知的；然而，该氨基酸位于RNA依赖性RNA聚合酶区与PB2结合区之间，表明它可以改变PB1与PB2之间的相互作用，从而影响Vero细胞中的聚合酶活性。
本发明的PB2(聚合酶碱性蛋白2)基因区段也可以编码包含至少一个选定氨基酸的蛋白，即PB2蛋白。在优选的实施方案中，选定氨基酸包含在第504位的缬氨酸以及任选地在第467位的异亮氨酸和在第529位的缬氨酸。PB2基因区段可以任选地包含在核苷酸第4位的胞嘧啶至尿嘧啶的启动子突变。PB2蛋白的第467位和第529位的氨基酸在PB2-C部分。具体地，第467位的氨基酸位于PB2蛋白的帽结合区，以及第529位的氨基酸位于帽-627接头结构域。在一些流感病毒中，PB2蛋白结合宿主加帽RNA的帽结构并利用来自宿主RNA的帽以制备流感病毒mRNA。这种方法被称为“抢帽(cap-snatching)”。此外，已知PB2的第627位的氨基酸是宿主范围和病毒致病性的关键决定子。因此，接近帽结合区的氨基酸改变可能影响病毒mRNA合成的效率。
本发明的PA(聚合酶酸性蛋白)基因区段也可以编码包含至少一个选定氨基酸的蛋白，即PA蛋白。在优选的实施方案中，选定氨基酸包含在第401位的赖氨酸。PA基因区段可以任选地包含在核苷酸第4位的胞嘧啶至尿嘧啶的启动子突变。
本发明的NP(核蛋白)基因区段也可以编码包含至少一个选定氨基酸的蛋白，即NP蛋白。在优选的实施方案中，选定氨基酸包含第116位的亮氨酸，以及第294位的赖氨酸或第311位的精氨酸中的至少一种。NP蛋白的氨基酸第294位和第311位位于NP蛋白的体内，因此它们既不作为核定位信号也不作为核输出信号。
本发明的NS(非结构)基因区段也可以编码包含至少一个选定氨基酸的蛋白，即NS1和/或NS2蛋白。在优选的实施方案中，选定氨基酸包含第30位的脯氨酸(NS1蛋白)和第118位的赖氨酸(NS1蛋白)。
在本发明的一个实施方案中，流感病毒骨架包含编码在第40位、第180位和第464位具有选定氨基酸，即在第40位的亮氨酸、在第180位的色氨酸和在第464位的天冬酰胺的蛋白，即PB1蛋白的PB1基因区段。PB1基因区段可以具有由SEQ ID NO:44表示的核苷酸序列。PB1基因区段可以编码具有SEQ ID NO:49的氨基酸序列的蛋白，即PB1蛋白。在该实施方案的另一个方面，流感病毒骨架可以包含编码在第504位具有选定氨基酸，即在第504位的缬氨酸的蛋白，即PB2蛋白的PB2基因区段。PB2基因区段可以具有由SEQ ID NO:56表示的核苷酸序列。PB2基因区段可以编码具有SEQ ID NO:57的氨基酸序列的蛋白，即PB2蛋白。实施方案的NP基因区段可以编码在第116位和第294位具有选定氨基酸，即在第116位的亮氨酸和在第294位的赖氨酸的蛋白，即NP蛋白。NP基因区段可以具有由SEQ ID NO:43表示的核苷酸序列。NP基因区段可以编码具有SEQ ID NO:48的氨基酸序列的蛋白，即NP蛋白。实施方案的PA和NS基因区段也可以编码蛋白，即PA蛋白和NS1和/或NS2蛋白，其包含在第401位(PA蛋白)、第30位(NS1蛋白)和第118位(NS1蛋白)，即在第401位(PA蛋白)的赖氨酸、第30位(NS1蛋白)的脯氨酸和第118位(NS1蛋白)的赖氨酸的选定氨基酸。PA基因区段可以具有由SEQID NO:58表示的核苷酸序列。PA基因区段可以编码具有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的蛋白，即PA蛋白。NS基因区段可以具有由SEQ ID NO:60表示的核苷酸序列。NS基因区段可以编码具有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的蛋白，即NS1蛋白。NS基因区段可以编码具有SEQ IDNO:62的氨基酸序列的蛋白，即NS2蛋白。实施方案的PB1、PB2和PA基因区段还可以包含在核苷酸第4位的胞嘧啶至尿嘧啶的启动子突变。
在本发明的另一个实施方案中，流感病毒骨架包含编码在第40位、第180位和第607位具有选定氨基酸，即在第40位的亮氨酸、在第180位的色氨酸和在第607位的丝氨酸的蛋白，即PB1蛋白的PB1基因区段。PB1基因区段可以具有由SEQ ID NO:46表示的核苷酸序列。PB1基因区段可以编码具有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的蛋白，即PB1蛋白。在该实施方案的另一个方面，流感病毒骨架可以包含编码在第504位、第467位和第529位具有选定氨基酸，即在第504位的缬氨酸、第467位的异亮氨酸和第529位的缬氨酸的蛋白，即PB2蛋白的PB2基因区段。PB2基因区段可以具有由SEQ ID NO:47表示的核苷酸序列。PB2基因区段可以编码具有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的蛋白，即PB2蛋白。实施方案的NP基因区段可以编码在第116位和第311位具有选定氨基酸，即在第116位的亮氨酸和在第311位的精氨酸的蛋白，即NP蛋白。NP基因区段可以具有由SEQ ID NO:45表示的核苷酸序列。NP基因区段可以编码具有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的蛋白，即NP蛋白。PA和NS基因区段也可以编码蛋白，即PA蛋白和NS1和/或NS2蛋白，其包含在第401位(PA蛋白)、第30位(NS1蛋白)和第118位(NS1蛋白)，即在第401位(PA蛋白)的赖氨酸、第30位(NS1蛋白)的脯氨酸和第118位(NS1蛋白)的赖氨酸的选定氨基酸。PA基因区段可以具有由SEQ ID NO:58表示的核苷酸序列。PA基因区段可以编码具有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的蛋白，即PA蛋白。NS基因区段可以具有由SEQID NO:60表示的核苷酸序列。NS基因区段可以编码具有SEQ ID NO:61的氨基酸序列的蛋白，即NS1蛋白。NS基因区段可以编码具有SEQ ID NO:62的氨基酸序列的蛋白，即NS2蛋白。实施方案的PB1、PB2和PA基因区段还可以包含在核苷酸第4位的胞嘧啶至尿嘧啶的启动子突变。
与在相同条件下除了没有选定氨基酸之外其余均相同的流感病毒骨架相比，实施方案的选定氨基酸，特别是在骨架的大多数蛋白中，赋予流感病毒骨架增强的生长特性。例如，本发明的流感病毒骨架在Vero细胞中表现出增强的生长。
本发明的流感病毒骨架还可以包含M(基质蛋白)基因区段。在本发明的一个实施方案中，M基因区段可以是来自甲型流感病毒的突变基因区段，使得病毒缺乏功能性M2蛋白的表达。这种病毒在本文中被称为“M2SR”病毒。如本文所用，“M2SR”和“AM2SR”是可互换的。M2SR病毒是单一复制流感病毒。M2SR病毒的M基因区段可以由SEQ ID NO:53表示。M基因区段可以编码具有SEQ ID NO:54的氨基酸序列的蛋白，例如截短的M2蛋白。M2SR病毒可以在稳定表达野生型M2蛋白的Vero细胞(即M2VeroA细胞)中增殖以允许多周期复制。Vero细胞的高产量不依赖于M基因区段的突变。因此，本发明的流感病毒骨架可以包含编码功能性M2蛋白(SEQ ID NO:1)的M基因区段。
(B)乙型流感病毒骨架蛋白
在本发明的一个实施方案中，重组病毒包含含有PA、NP和NS基因区段的流感病毒骨架，其中(a)所述PA基因区段包含在核苷酸第2272位的胸腺嘧啶；(b)所述NP基因区段编码具有包含选定氨基酸的氨基酸序列的NP蛋白，其中所述选定氨基酸包含在第40位的丝氨酸、第161位的天冬酰胺或甘氨酸、第204位的苏氨酸和任选地在93位的缬氨酸；以及(c)所述NS基因区段包含在核苷酸第39位的鸟嘌呤，以及所述NS基因区段编码具有包含选定氨基酸的氨基酸序列的NS蛋白，其中所述选定氨基酸包含在第176位的谷氨酰胺。
本发明的PB1(聚合酶碱性蛋白1)基因区段可以编码包含至少一个选定氨基酸的蛋白，即PB1蛋白。通过基因突变亲本PB1序列，例如与本发明的PB1氨基酸序列相同的序列(除了选定氨基酸所对应的位置之外)，可以获得选定氨基酸。本发明的PB2(聚合酶碱性蛋白2)基因区段也可以编码包含至少一个选定氨基酸的蛋白，即PB2蛋白。
本发明的PA(聚合酶酸性蛋白)基因区段也可以编码包含至少一个选定氨基酸的蛋白，即PA蛋白。在优选的实施方案中，基因区段包含在核苷酸第2272位的胸腺嘧啶。
本发明的NP(核蛋白)基因区段也可以编码包含至少一个选定氨基酸的蛋白，即NP蛋白。在优选的实施方案中，NP区段包含在第177位的胸腺嘧啶、在第540位的腺嘌呤和在第670位的胸腺嘧啶，并且所述NP基因区段编码具有选定氨基酸的蛋白，所述氨基酸包含在第40位的丝氨酸、在161位的天冬酰胺或甘氨酸、在第204位的苏氨酸以及任选地在第93位的缬氨酸。
本发明的NS(非结构)基因区段也可以编码包含至少一个选定氨基酸的蛋白，即NS1和/或NS2蛋白。在优选的实施方案中，NS区段包含在核苷酸第39位的鸟嘌呤和在第570位的胞嘧啶，并且所述NS基因区段编码具有包含在第176位的谷氨酰胺的选定氨基酸的NS蛋白(NS1蛋白)。
在本发明的一个实施方案中，流感病毒包含编码具有选定氨基酸的蛋白，即PB1蛋白的PB1基因区段。PB1基因区段可以具有由SEQ ID NO:63表示的核苷酸序列。PB1基因区段可以编码具有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的蛋白，即PB1蛋白。在该实施方案的另一个方面，流感病毒可以包含编码具有选定氨基酸的蛋白，即PB2蛋白的PB2基因区段。PB2基因区段可以具有由SEQ ID NO:64表示的核苷酸序列。PB2基因区段可以编码具有SEQ ID NO:69的氨基酸序列的蛋白，即PB2蛋白。在该实施方案的另一个方面，流感病毒可以包含编码在第40位、第161位和第204位，即在第40位的丝氨酸、在第161位的天冬酰胺或甘氨酸、在第204位的苏氨酸以及任选地在第93位的缬氨酸具有选定氨基酸的蛋白，即NP蛋白的NP基因区段。NP基因区段可以具有由SEQ ID NO:66表示的核苷酸序列。NP基因区段可以编码具有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的蛋白，即NP蛋白。在该实施方案的另一个方面，流感病毒可以包含编码在第176位具有选定氨基酸，即在第176位的谷氨酰胺的蛋白，即NS1和/或NS2蛋白的NS基因区段。NS基因区段可以包含在核苷酸第39位的鸟嘌呤和在第570位的胞嘧啶。NS基因区段可以具有由SEQ ID NO:67表示的核苷酸序列。NS基因区段可以编码具有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的蛋白，即NS1和/或NS2蛋白。在该实施方案的另一个方面，流感病毒可以包含编码蛋白，即PA蛋白的PA基因区段。PA基因区段可以具有由SEQ ID NO:65表示的核苷酸序列。PA基因区段可以编码具有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的蛋白，即PA蛋白。
与在相同条件下除了没有选定氨基酸之外其余均相同的流感病毒相比，实施方案的选定氨基酸，特别是在骨架的大多数蛋白中，赋予流感病毒增强的生长特性。例如，本发明的流感病毒在Vero细胞中表现出增强的生长。
本发明的流感病毒还可以包含M(基质蛋白)基因区段。在本发明的一个实施方案中，M基因区段可以是来自乙型流感病毒的突变基因区段，使得病毒缺乏功能性BM2蛋白的表达。这种病毒在本文中被称为“BM2SR”病毒。BM2SR病毒是单一复制流感病毒。BM2SR病毒的M基因区段可以由SEQ ID NO:73表示。M基因区段可以编码具有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的蛋白，例如截短的BM2蛋白。BM2SR病毒可以在稳定表达BM2蛋白的Vero细胞(即BM2VeroA细胞)中增殖以允许多周期复制。Vero细胞的高产量不依赖于M基因区段的突变。因此，本发明的流感病毒可以包含编码功能性BM2蛋白(SEQ ID NO:2)的M基因区段。
(C)甲型流感病毒表面蛋白
在本发明的另一个实施方案中，流感病毒骨架包含NA(神经氨酸酶)和HA(血凝素)基因区段。在本发明的一个实施方案中，HA基因区段可以编码具有包含在蛋白的HA1亚基中至少一个选定氨基酸(例如，氨基酸突变)和/或在蛋白的HA2亚基中至少一个选定氨基酸(例如，氨基酸突变)的氨基酸序列的HA蛋白。例如，HA2亚基中的至少一个氨基酸突变可以是在第107位的天冬酰胺。此类突变也可以有助于在生产过程中增强病毒的生长。
在本发明的一个实施方案中，PB1、PB2、PA、NP和NS基因区段来源于单一流感毒株。HA基因区段可以来源于不同于PB1、PB2、PA、NP和NS基因区段所源自的单一流感毒株的流感毒株。同样，NA基因区段可以来源于不同于PB1、PB2、PA、NP和NS基因区段所源自的单一流感毒株的流感毒株。因此，本发明的重组病毒可以是大规模流行的病毒(例如，H5N1和H7N9)或季节性病毒(例如，H1N1、H3N2和乙型流感病毒)。
(D)乙型流感病毒表面蛋白
在本发明的另一个实施方案中，重组病毒包含流感病毒骨架，所述骨架还包含NA(神经氨酸酶)和HA(血凝素)基因区段。在本发明的一个实施方案中，HA基因区段可以编码具有包含在蛋白的HA1亚基中至少一个选定氨基酸(例如，氨基酸突变)和/或在蛋白的HA2亚基中至少一个选定氨基酸(例如，氨基酸突变)的氨基酸序列的HA蛋白。例如，HA2亚基中的至少一个氨基酸突变可以是在第61位的谷氨酸。在另一个实施方案中，HA2亚基中的至少一个氨基酸突变可以是在第112位的谷氨酸。氨基酸突变可以存在于乙型流感病毒的任何亚型或谱系中(即，Victoria或Yamagata)。在一个优选的实施方案中，HA2亚基中的氨基酸突变可以是在乙型流感病毒的Victoria谱系中第61位的谷氨酸。在另一个优选的实施方案中，HA2亚基中的氨基酸突变可以是乙型流感病毒的Yamagata谱系中第112位的谷氨酸。此类突变也可以有助于在生产过程中增强病毒的生长。
在本发明的一个实施方案中，PB1、PB2、PA、NP和NS基因区段来源于单一流感毒株。HA基因区段可以来源于不同于PB1、PB2、PA、NP和NS基因区段所源自的单一流感毒株的流感毒株。同样，NA基因区段可以来源于不同于PB1、PB2、PA、NP和NS基因区段所源自的单一流感毒株的流感毒株。因此，本发明的流感病毒可以是季节性流感病毒(例如，乙型流感病毒)。
(E)抗原
在一个实施方案中，重组病毒包含流感病毒骨架，其包含PB1、PB2、PA、NP、M、NS、HA和NA基因区段，PB2、PB2、PA、NP、M、NS、HA和NA基因区段中的至少一个包含编码一种或多种抗原的核苷酸序列。如本文所用，术语“抗原”是指相对于HA基因区段异源的抗原。抗原可以是病毒(包括流感病毒)的、细菌的、真菌的或原生动物的。例如，插入基因区段(例如PB1、PB2、PA、NP、M、NS、HA或NA基因区段)的病毒抗原或表位序列将是关于病毒的抗原。在一个实施方案中，抗原是SARS-CoV-2刺突糖蛋白(例如S1蛋白)的免疫原性片段。在另一个实施方案中，抗原是流感病毒基因区段或其片段(即PB1、PB2、PA、NP、M、NS、HA或NA基因区段或其片段)，其与流感病毒骨架中的HA基因区段异源。在另一个实施方案中，抗原是呼吸道合胞病毒(RSV)或其片段。在另一个实施方案中，抗原是副流感病毒(PIV)或其片段。在一些实施方案中，所述一种或多种抗原在病毒基因区段内表达。
在本发明的一个实施方案中，包含编码一种或多种抗原的核苷酸序列的至少一个基因区段还包含编码至少一种柔性接头蛋白，至少一个可切割的切割序列和/或至少一种FLAG蛋白的核苷酸序列。此类基因区段可以编码至少两种柔性接头蛋白、至少两个可切割的切割序列和/或至少两种FLAG蛋白。
在本发明的一个实施方案中，可切割的切割序列包括“自切割”序列。在一个实施方案中，“自切割”序列是“自切割”2A肽。在一个实施方案中，“自切割”序列是“自切割”2A肽。“自切割”2A肽描述在例如Liu等人,Sci.Rep.,7(1):2193(2017)以及Szymczak等人,Nature Biotechnol.,22(5):589-594(2004)中。2A肽是在真核细胞中翻译期间介导多肽切割的病毒寡肽。名称“2A”是指病毒基因组的特定区域。不受特定理论或机制的束缚，认为2A介导的“自切割”机制是在2A肽的C-末端形成甘氨酰-脯氨酰肽键的核糖体跳跃。不同的2A肽可以在C末端包含GDVEXNPGP(SEQ ID NO:19)的共有氨基酸序列，其中SEQ ID NO:19中的X是任何天然存在的氨基酸残基。在本发明的一个实施方案中，可切割的核糖体跳跃序列是猪捷申病毒-1 2A(P2A)氨基酸序列、马鼻炎A病毒(E2A)氨基酸序列、明脉扁刺蛾病毒(thosea asigna)2A(T2A)氨基酸序列或口蹄疫病毒(F2A)氨基酸序列。在本发明的一个实施方案中，核糖体跳跃序列是包含P2A的氨基酸序列，由P2A的氨基酸序列组成或基本上由P2A的氨基酸序列组成的2A肽氨基酸序列。
在本发明的一个实施方案中，柔性接头蛋白是独立地选自甘氨酸和丝氨酸的1-20个氨基酸残基。在一些实施方案中，柔性接头蛋白被定义为(Xaa1)r，其中每个Xaa1独立地选自甘氨酸和丝氨酸，并且r是1至20的整数。这种接头的实例包括但不限于GSG(SEQ IDNO:75)、GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:76)和(G4S)3。在本发明的一个实施方案中，包含编码抗原的氨基酸序列的至少一个基因区段还包含至少一种柔性接头蛋白。在另一个实施方案中，这种基因区段还包含至少两种柔性接头蛋白。
在优选的实施方案中，抗原是SARS-CoV-2刺突糖蛋白(例如S1蛋白)的免疫原性片段。在一个实施方案中，M基因区段编码核苷酸序列，其编码SARS-CoV-2刺突糖蛋白的至少一个免疫原性片段。M基因区段可以编码突变的M2或BM2蛋白。M基因区段还可以编码至少一种柔性接头蛋白和至少一种FLAG蛋白。在一个实施方案中，M基因区段编码包含突变的M2蛋白、柔性接头蛋白和FLAG表位标签蛋白的融合蛋白。例如，M基因区段可以具有由SEQ IDNO:79和81-84中的任一个表示的核苷酸序列。M基因区段可以编码包含SEQ ID NO:1-14和92-96中任一个的蛋白质。
在另一个实施方案中，NS基因区段编码核苷酸序列，其编码SARS-CoV-2刺突糖蛋白的至少一个免疫原性片段。NS基因区段可以编码NS1蛋白和NS2(即NEP)蛋白或其片段。NS基因区段也可以编码至少一种柔性接头蛋白或其片段。NS基因区段也可以编码至少一个可切割的切割序列。NS基因区段可以具有由SEQ ID NO:80和85-91中的任一个表示的核苷酸序列。NS基因区段可以编码包含SEQ ID NO:97-104的蛋白质。
在本发明的一个实施方案中，可切割的切割序列是P2A肽序列。在这样的实施方案中，P2A肽序列在一端与NS1蛋白的C-末端结合，并且在另一端与抗原结合。在这样的实施方案中，抗原可以与NEP开放阅读框(ORF)结合。在本发明的另一个实施方案中，P2A肽序列在一端与NS1蛋白的C-末端结合，并且在另一端与第一柔性接头蛋白结合。在这样的实施方案中，第一柔性接头蛋白可以与抗原结合，该抗原与NEP ORF连接。在另一个实施方案中，存在第二可切割的切割序列。在一个实施方案中，第二可切割的切割序列是P2A或T2A肽序列。任选的第二可切割的切割序列可以在一端与抗原结合，并且在另一端与NEP ORF结合。在另一个实施方案中，第二可切割的切割序列可以与柔性接头蛋白结合，该柔性接头蛋白然后与抗原或NEP ORF结合。
在一个实施方案中，至少一个(即PB2、PB2、PA、NP、M、NS、HA或NA)基因区段将编码核苷酸序列，其编码一种或多种抗原。在一些实施方案中，八个流感病毒骨架区段中的至少两个(即PB1和PB2、PB1和PA、PB1和NP、PB1和M、PB1和NS、PB1和HA,和PB1和NA、PB2和PA、PB2和NP、PB2和M、PB2和NS、PB2和HA、PB2和NA、PA和NP、PA和M、PA和NS、PA和HA、PA和NA、NP和M、NP和NS、NP和HA、NP和NA、M和NS、M和HA、M和NA、NS和HA、NS和NA或HA和NA基因区段)将编码核苷酸序列，其编码一种或多种抗原，如SARS-CoV-2刺突糖蛋白(例如，S1蛋白)的免疫原性片段。
在一些实施方案中，包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列的基因区段还包含下游重复，其中所述下游重复包含至少一个沉默核苷酸突变。在一个实施方案中，包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列的基因区段还包含下游直接串联重复，其中所述下游重复包含至少一个沉默核苷酸突变。下游重复是指核苷酸序列，其中核苷酸序列的一部分以相同的方向重复一次或多次。重复核苷酸序列可以一个接一个地直接排列，或者它们可以在每个重复核苷酸序列之间含有任选的核苷酸序列。此外，重复碱基的数量不受限制。
在一些实施方案中，在插入编码抗原的核苷酸序列期间发生基因区段的核苷酸序列的下游重复。在一些实施方案中，下游重复可降低核苷酸序列和编码的氨基酸序列和蛋白质的稳定性。为了提高稳定性，引入至少一个沉默突变(即，不影响由核苷酸序列编码的氨基酸序列的突变)以降低第一核苷酸序列和第二下游重复的核苷酸序列之间的同源性。例如，在优选的实施方案中，NS基因区段包含编码抗原的核苷酸序列。在插入编码抗原的核苷酸序列期间，重复一部分核苷酸序列，产生下游重复。核苷酸序列的第一拷贝是包装序列的一部分，第二拷贝可以干扰包装。为了防止干扰，将沉默突变添加到下游重复以降低与第一拷贝的同源性。在一个实施方案中，下游重复具有至少一个(即，至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或至少十个)沉默突变。
重组病毒可以具有一个或多个(即，至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个或至少八个)基因区段，所述基因区段包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列并且还包含下游重复，其中所述下游重复包含至少一个沉默核苷酸突变。例如，在一个实施方案中，这样的一个或多个基因区段可以是PB1、PB2、PA、NP、NS、M、HA或NA基因区段。在另一个实施方案中，这样的一个或多个基因区段可以是PB1和PB2、PB2和PA、PB1和NP、PB1和NS、PB1和M、PB1和HA、PB1和NA、PB2和PA、PB2和NP、PB2和NS、PB2和M、PB2和HA、PB2和NA、PA和NP、PA和NS、PA和M、PA和HA、PA和NA、NP和NS、NP和M、NP和HA、NP和NA、NS和M、NS和HA、NS和NA、M和HA、M和NA或HA和NA基因区段。
(F)流感病毒骨架的特性
不管流感病毒的类型如何(例如，甲型流感病毒或乙型流感病毒、季节性或大规模流行的流感病毒)，本发明的重组病毒的骨架赋予流感病毒高生长特性，特别是在Vero细胞中。本发明的流感病毒即使在使用低感染复数(MOI)(例如，0.001)的制造过程中也表现出高产率。MOI是指每个感染靶标(例如，细胞)的试剂(例如，病毒)的平均数。当需要多个感染周期(例如，病毒疫苗生产)时，使用较低的MOI。US FDA执行了当前的良好生产规范规定，并且通常需要使用仍然产生高产率病毒的最低MOI。这是因为主要的种子储备液(masterseed stock)是昂贵的，并且由非传染性颗粒和过量细胞蛋白产生的毒性可降低病毒产生。
在本发明的另一个实施方案中，流感病毒是遗传稳定的，使得骨架蛋白，特别是PB1、PB2、PA、NP和NS1蛋白的选定氨基酸是高度保守的，即使在低MOI下繁殖时亦如此。例如，在本发明的一个实施方案中，在Vero细胞系中至少一次、至少两次、至少三次、至少四次、至少五次、至少六次、至少七次、至少八次、至少九次、至少十次或超过十次连续传代后，所述选定氨基酸在PB1、PB2和NP蛋白中的至少一种中是保守的。在一个实施方案中，Vero细胞系可以包含稳定表达甲型流感病毒的M2离子通道蛋白的Vero细胞(即，M2VeroA细胞)。在本发明的另一个实施方案中，Vero细胞系可以包含稳定表达乙型流感病毒的BM2离子通道蛋白(SEQ ID NO:74)的Vero细胞(即，BM2Vero细胞)。已知BM2是甲型流感病毒M2的功能性对应物。在促进病毒复制中，乙型流感病毒M2蛋白可在功能上替代其甲型流感病毒对应物(Wanitchang等人,Virology 498:99-108(2016))。在这样的实施方案中，即使当流感病毒是甲型流感病毒时，选定氨基酸也可以是保守的。
基因修饰的Vero细胞(即表达流感病毒M2或BM2蛋白的那些细胞)的行为与正常Vero细胞类似，并且支持与正常Vero细胞相当的甲型流感病毒或乙型流感病毒的生长。M2VeroA细胞中M2SR病毒的病毒滴度与在未修饰的Vero细胞系中表达功能性M2的复制流感病毒相当。此外，BM2Vero细胞中BM2SR病毒(即，包含来自乙型流感病毒的突变M基因区段，因此不表达功能性BM2蛋白的流感病毒)的病毒滴度与在未修饰的Vero细胞系中表达功能性BM2的复制流感病毒相当。因此，M2SR和BM2SR病毒的行为类似于在M2VeroA和BM2Vero细胞系中的复制流感病毒。
在本发明的一个实施方案中，流感病毒能够在人细胞中复制。
药物制剂
本发明提供了包含本文所述的本发明重组病毒的药物制剂(例如，疫苗或其它免疫原性组合物)。
药物制剂还可以包含至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。如本文所用，术语“药学上可接受的载体或赋形剂”是指除本发明流感病毒以外的药物制剂的任何组分。药学上可接受的载体或赋形剂可以增强本发明重组病毒的功效或维持药物制剂的稳定性，理想的是不显著灭活本发明的重组病毒。
至少一种药学上可接受的载体或赋形剂可以是任何合适的药学上可接受的载体或赋形剂，其中许多是本领域已知的。示例性的药学上可接受的载体或赋形剂包括维持药物制剂的pH(例如缓冲剂)、调节张力(例如张力调节剂，如无机盐)、改善蛋白质(例如病毒)稳定性和/或免疫原性、改善粘膜粘附、防止蛋白质聚集和/或保存药物制剂(例如防腐剂)的组分。例如，药学上可接受的载体或赋形剂可以包括无机盐、表面活性剂、氨基酸、聚合物或聚合化合物(例如蛋白质、多糖或水凝胶)、螯合剂、糖、多元醇和/或佐剂(例如增强特异性免疫应答的任何物质)中的至少一种，其中许多是本领域已知的。特定的载体或赋形剂可以在药物制剂中用于不止一个目的，因此，以下实施方案不限于本文所述的描述。
药物制剂中可以存在任何合适的缓冲剂。在一个实施方案中，所述缓冲剂包含咪唑缓冲剂、磷酸钾缓冲剂、磷酸盐缓冲盐水(PBS)、杜尔贝科磷酸盐缓冲盐水(DPBS)(例如，1×DPBS)、组氨酸缓冲剂、柠檬酸钠缓冲剂和蔗糖磷酸谷氨酸盐缓冲剂(SPG)中的至少一种。PBS和/或DPBS制剂可以包含例如氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钾和磷酸氢二钠，并且可以任选地进一步包含氯化钙和/或氯化镁。在一些实施方案中，PBS和/或DPBS制剂包含约136.9mM氯化钠、约2.67mM氯化钾、约1.47mM磷酸二氢钾和约8.1mM磷酸氢二钠，尽管任何合适的PBS和/或DPBS制剂(其中的许多是本领域已知的)都可以用作药物制剂中的缓冲剂。
缓冲剂可以以任何合适的浓度存在于药物制剂中。缓冲剂可以以约0.1mM或更高、约1mM或更高、约10mM或更高、约20mM或更高、约30mM或更高、约40mM或更高、约50mM或更高、约60mM或更高、约70mM或更高、约80mM或更高、约90mM或更高、约100mM或更高、约120mM或更高、约140mM或更高、约160mM或更高、约180mM或更高、约200mM或更高、约250mM或更高、约300mM或更高、约350mM或更高、约400mM或更高、约450mM或更高、或者约500mM或更高的浓度存在于药物制剂中。可选地或另外，缓冲剂可以以约1,000mM或更低、约500mM或更低、约450mM或更低、约400mM或更低、约350mM或更低、约300mM或更低、约250mM或更低、约200mM或更低、约180mM或更低、约160mM或更低、约140mM或更低、约120mM或更低、约100mM或更低、约90mM或更低、约80mM或更低、约70mM或更低、约60mM或更低、约50mM或更低、约40mM或更低、约30mM或更低、约20mM或更低、约10mM或更低、或者约1mM或更低的浓度存在于药物制剂中。缓冲剂可以以在由任何前述端点限定的范围内的任何浓度存在于药物制剂中。例如，缓冲剂可以以约0.1mM至约1000mM、约0.1mM至约500mM、约0.1mM至约100mM、约1mM至约1000mM、约1mM至约500mM、约1mM至约100mM、约100mM至约1000mM、约100mM至约500mM等的浓度存在于药物制剂中。
在进一步的实施方案中，缓冲剂以浓度百分比(例如，体积/体积百分比(％v/v)；重量/体积百分比(％w/v)；或重量/重量百分比(％w/w))存在于药物制剂中。缓冲剂可以以约0.1％或更高、约1％或更高、约5％或更高、约10％或更高、约15％或更高、约20％或更高、约30％或更高、约40％或更高、或者约50％或更高的浓度百分比存在于药物制剂中。可选地或另外，缓冲剂可以以约60％或更低、约50％或更低、约40％或更低、约30％或更低、约20％或更低、约15％或更低、约10％或更低、约5％或更低、或者约1％或更低的浓度百分比存在于药物制剂中。缓冲剂可以以在由任何前述端点限定的范围内的任何浓度百分比存在于药物制剂中。例如，缓冲剂可以以约0.1％至约60％、约1％至约60％、约10％至约60％、约0.1％至约50％、约1％至约50％、约10％至约50％、约20％至约60％、约20％至约50％、约20％至约40％、约20％至约30％、约30％至约40％、约40％至约50％等的浓度百分比存在于药物制剂中。
缓冲剂可以将药物制剂的pH维持在任何合适的pH。缓冲剂可以将药物制剂的pH维持在例如约4或更高、约4.5或更高、约5或更高、约5.5或更高、约6或更高、约6.5或更高、约7或更高、或者约7.5或更高的pH。可选地或另外，缓冲剂可以将药物制剂的pH维持在例如约8或更低、约7.5或更低、约7或更低、约6.5或更低、约6或更低、约5.5或更低、约5或更低、或者约4.5或更低的pH。缓冲剂可以将药物制剂的pH维持在由任何前述端点限定的范围内的pH。例如，缓冲剂可以将药物制剂的pH维持在约4至约8、约4.5至约8、约5至约8、约5.5至约8、约6至约8、约6.5至约8、约7至约8、约7.5至约8、约4至约7.5、约5至约7.5、约6至约7.5、约7至约7.5、约4至约7、约5至约7、约6至约7等的pH。
药物制剂中可以存在任何合适的张力调节剂。在某些实施方案中，一种或多种无机盐作为张力调节剂存在于药物制剂中。无机盐可以是氯化钠(NaCl)、硫酸镁(MgSO4)和氯化镁(MgCl2)中的至少一种。张力调节剂，例如无机盐，可以以任何合适的量存在于药物制剂中。张力调节剂，例如无机盐，可以以约0.1mM或更高、约0.2mM或更高、约0.4mM或更高、约0.6mM或更高、约0.8mM或更高、约1mM或更高、约1.2mM或更高、约1.4mM或更高、约1.6mM或更高、1.8mM或更高、约2mM或更高、约3mM或更高、约4mM或更高、约5mM或更高、约6mM或更高、约7mM或更高、约8mM或更高、约9mM或更高、约10mM或更高、约20mM或更高、约30mM或更高、约40mM或更高、约50mM或更高、约100mM或更高、约200mM或更高、约300mM或更高、约400mM或更高、约500mM或更高、约600mM或更高、约700mM或更高、约800mM或更高、约900mM或更高、约1000mM或更高或者约1500mM或更高的浓度存在于药物制剂中。可选地或另外，张力调节剂，例如无机盐，可以以约2000mM或更低、约1500mM或更低、约1000mM或更低、约900mM或更低、约800mM或更低、约700mM或更低、约600mM或更低、约500mM或更低、约450mM或更低、约400mM或更低、约350mM或更低、约300mM或更低、约250mM或更低、约200mM或更低、约150mM或更低、约100mM或更低、约50mM或更低、约45mM或更低、约40mM或更低、约35mM或更低、约30mM或更低、约25mM或更低、约20mM或更低、约10mM或更低、约9mM或更低、约8mM或更低、约7mM或更低、约6mM或更低、约5mM或更低、约4mM或更低、约3mM或更低、约2mM或更低、约1.8mM或更低、约1.6mM或更低、约1.4mM或更低、约1.2mM或更低、约1mM或更低、约0.8mM或更低、约0.6mM或更低、约0.4mM或更低、或者约0.2mM或更低的浓度存在于药物制剂中。张力调节剂，例如无机盐，可以以在由任何前述端点限定的范围内的任何浓度存在于药物制剂中。例如，张力调节剂，例如无机盐，可以以约0.1mM至约2000mM、约0.1mM至约1500mM、约0.1mM至约1000mM、约0.1mM至约500mM、约0.1mM至约250mM、约0.1mM至约100mM、约0.1至约50mM、约0.1mM至约10mM、约1mM至约2000mM、约1mM至约1500mM、约1mM至约1000mM、约1mM至约500mM、约1mM至约250mM、约1mM至约100mM、约1mM至约50mM、约1mM至约10mM、约10mM至约2000mM、约10mM至约1500mM、约10mM至约1000mM、约10mM至约500mM、约10mM至约250mM、约10mM至约100mM、约10mM至约50mM、约100mM至约2000mM、约100mM至约1500mM、约100mM至约1000mM、约100mM至约500mM、约100mM至约250mM、约500mM至约2000mM、约500mM至约1500mM、约500mM至约1000mM等的浓度存在于药物制剂中。
在进一步的实施方案中，无机盐以浓度百分比(例如，体积/体积百分比(％v/v)；重量/体积百分比(％w/v)；或重量/重量百分比(％w/w))存在于药物制剂中。张力调节剂，例如无机盐，以约0.1％或更高、约1％或更高、约2％或更高、约3％或更高、约4％或更高、约5％或更高、约6％或更高、约7％或更高、约8％或更高、约9％或更高、或者约10％或更高的浓度百分比存在于药物制剂中。可选地或另外，张力调节剂，例如无机盐，可以以约10％或更低、约9％或更低、约8％或更低、约7％或更低、约6％或更低、约5％或更低、约4％或更低、约3％或更低、约2％或更低、或者约1％或更低的浓度百分比存在于药物制剂中。张力调节剂，例如无机盐，可以以在由任何前述端点限定的范围内的任何浓度百分比存在于药物制剂中。例如，张力调节剂，例如无机盐，可以以约0.1％至约1％、约0.1％至约2％、约0.1％至约5％、约0.1％至约10％、约1％至约2％、约1％至约5％、约1％至约10％、约2％至约10％、约3％至约10％、约4％至约10％、约5％至约10％等的浓度百分比存在于药物制剂中。
药物制剂中可以存在任何合适的表面活性剂。在某些实施方案中，表面活性剂可以包含聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、脱氧胆酸钠和泊洛沙姆188中的至少一种。表面活性剂可以以任何合适的量存在于药物制剂中。在一些实施方案中，表面活性剂以浓度百分比(例如，体积/体积百分比(％v/v)；重量/体积百分比(％w/v)；或重量/重量百分比(％w/w))存在于药物制剂中。表面活性剂可以以约0.01％或更高、约0.02％或更高、约0.03％或更高、约0.04％或更高、约0.05％或更高、约0.06％或更高、约0.07％或更高、约0.08％或更高、约0.09％或更高、约0.1％或更高、约0.2％或更高、约0.3％或更高、约0.4％或更高、约0.5％或更高、约0.6％或更高、约0.7％或更高、约0.8％或更高、约0.9％或更高、或者约1％或更高的浓度百分比存在于药物制剂中。可选地或另外，表面活性剂可以以约1％或更低、约0.9％或更低、约0.8％或更低、约0.7％或更低、约0.6％或更低、约0.5％或更低、约0.4％或更低、约0.3％或更低、约0.2％或更低、或者约0.1％或更低的浓度百分比存在于药物制剂中。表面活性剂可以以在由任何前述端点限定的范围内的任何浓度百分比存在于药物制剂中。例如，表面活性剂可以以约0.01％至约1％、约0.01％至约0.1％、约0.05％至约1％、约0.05％至约0.1％、约0.1％至约1％、约0.1％至约0.5％、约0.2％至约1％、约0.5％至约1％等的浓度百分比存在于药物制剂中。
药物制剂中可以存在任何合适的氨基酸。在某些实施方案中，氨基酸可以是精氨酸、谷氨酸(glutamic acid)或谷氨酸(glutamate)、天冬酰胺、组氨酸和甘氨酸中的一种或多种。氨基酸可以以任何合适的量存在于药物制剂中。氨基酸可以以约1mM或更高、约2mM或更高、约3mM或更高、约5mM或更高、约6mM或更高、约7mM或更高、约8mM或更高、约9mM或更高、或者约10mM或更高的浓度存在于药物制剂中。可选地或另外，氨基酸可以以约100mM或更低、约90mM或更低、约80mM或更低、约70mM或更低、约60mM或更低、约50mM或更低、约40mM或更低、约30mM或更低、约20mM或更低或者约10mM或更低的浓度存在于药物制剂中。氨基酸可以以在由任何前述端点限定的范围内的任何浓度存在于药物制剂中。例如，氨基酸可以以约1mM至约10mM、约1mM至约50mM、约1mM至约100mM、约5mM至约50mM、约10mM至约50mM、约20mM至约50mM等的浓度存在于药物制剂中。
在一些实施方案中，氨基酸以浓度百分比(例如，体积/体积百分比(％v/v)；重量/体积百分比(％w/v)；或重量/重量百分比(％w/w))存在于药物制剂中。氨基酸可以以约0.1％或更高、约0.2％或更高、约0.3％或更高、约0.4％或更高、约0.5％或更高、约0.6％或更高、约0.7％或更高、约0.8％或更高、约0.9％或更高、约1％或更高、约2％或更高、约3％或更高、约4％或更高、或者约5％或更高的浓度百分比存在于药物制剂中。可选地或另外，氨基酸可以以约10％或更低、约9％或更低、约8％或更低、约7％或更低、约6％或更低、约5％或更低、约4％或更低、约3％或更低、约2％或更低、或者约1％或更低的浓度百分比存在于药物制剂中。氨基酸可以以在由任何前述端点限定的范围内的任何浓度百分比存在于药物制剂中。例如，氨基酸可以以约0.1％至10％、约0.2％至约10％、约0.5％至约10％、约0.1％至约5％、约0.1％至约2％、约0.2％至约2％、约0.5％至约1％等的浓度百分比存在于药物制剂中。
药物制剂中可以存在任何合适的聚合物或聚合化合物。聚合物或聚合化合物可以是，例如，蛋白质、多糖、水凝胶或者任何其它合适的聚合物或聚合化合物，其中许多是本领域已知的。聚合物可以优选是聚阴离子的，如羧甲基纤维素或聚(丙烯酸)。例如，聚合物或聚合化合物可以是重组人血清白蛋白(rHSA)、血清白蛋白(SA)、明胶、羟乙基淀粉(HES)、壳聚糖、葡聚糖(DEX70K，DEX40K)和聚乙烯吡咯烷酮(PVP40K)。
聚合物或聚合化合物可以以任何合适的量存在于药物制剂中。聚合物或聚合化合物可以以浓度百分比(例如，体积/体积百分比(％v/v)；重量/体积百分比(％w/v)；或重量/重量百分比(％w/w))存在于药物制剂中。聚合物或聚合化合物可以以约0.1％或更高、约0.2％或更高、约0.3％或更高、约0.4％或更高、约0.5％或更高、约0.6％或更高、约0.7％或更高、约0.8％或更高、约0.9％或更高、约1％或更高、约2％或更高、约3％或更高、约4％或更高、或者约5％或更高的浓度百分比存在于药物制剂中。可选地或另外，聚合物或聚合化合物可以以约10％或更低、约9％或更低、约8％或更低、约7％或更低、约6％或更低、约5％或更低、约4％或更低、约3％或更低、约2％或更低、或者约1％或更低的浓度百分比存在于药物制剂中。聚合物或聚合化合物可以以在由任何前述端点限定的范围内的任何浓度百分比存在于药物制剂中。例如，聚合物或聚合化合物可以以约0.1％至约10％、约0.2％至约10％、约0.5％至约10％、约0.1％至约5％、约0.1％至约2％、约0.2％至约2％、约0.5至约2％、约0.1％至约1％、约0.2％至约1％、约0.5％至约1％等的浓度百分比存在于药物制剂中。
药物制剂中可以存在任何合适的螯合剂。螯合剂可以是例如乙二胺四乙酸(EDTA)、偕胺肟化合物(AOX)和/或二硫苏糖醇(DTT)。螯合剂可以以任何合适的浓度存在于药物制剂中。螯合剂可以以10μM或更高、约20μM或更高、约30μM或更高、约40μM或更高、约50μM或更高、约60μM或更高、约70μM或更高、约80μM或更高、约90μM或更高、约100μM或更高、约120μM或更高、或者约150μM或更高的浓度存在于药物制剂中。可选地或另外，螯合剂可以以约500μM或更低、约400μM或更低、约300μM或更低、约200μM或更低、约150μM或更低、约140μM或更低、约130μM或更低、约120μM或更低、约110μM或更低、约100μM或更低、约80μM或更低、约70μM或更低、约60μM或更低、或者约50μM或更低的浓度存在于药物制剂中。螯合剂可以以在由任何前述端点限定的范围内的任何浓度存在于药物制剂中。例如，螯合剂可以以约10μM至约500μM、约10μM至约200μM、约10μM至约150μM、约10μM至约100μM、约50μM至约500μM、约50μM至约200μM、约50μM至约150μM、约50μM至约100μM等的浓度存在于药物制剂中。
药物制剂中可以存在任何合适的糖。糖可以是例如蔗糖、海藻糖、甘露糖和乳糖中的一种或多种。糖可以以任何合适的浓度存在于药物制剂中。糖可以以约0.1mM或更高、约0.2mM或更高、约0.4mM或更高、约0.6mM或更高、约0.8mM或更高、约1mM或更高、约1.2mM或更高、约1.4mM或更高、约1.6mM或更高、约1.8mM或更高、约2mM或更高、约3mM或更高、约4mM或更高、约5mM或更高、约6mM或更高、约7mM或更高、约8mM或更高、约9mM或更高、约10mM或更高、约20mM或更高、约30mM或更高、约40mM或更高、约50mM或更高、约60mM或更高、约70mM或更高、约80mM或更高、约90mM或更高、或者约100mM或更高、约200mM或更高、约300mM或更高、约400mM或更高、约500mM或更高、约600mM或更高、约700mM或更高、约800mM或更高、约900mM或更高、约1000mM或更高、或者约1500mM或更高的浓度存在于药物制剂中。可选地或另外，糖可以以约2000mM或更低、约1500mM或更低、约1000mM或更低、约900mM或更低、约800mM或更低、约700mM或更低、约600mM或更低、约500mM或更低、约450mM或更低、约400mM或更低、约350mM或更低、约300mM或更低、约250mM或更低、约200mM或更低、约150mM或更低、约100mM或更低、约50mM或更低、约45mM或更低、约40mM或更低、约35mM或更低、约30mM或更低、约25mM或更低、约20mM或更低、约10mM或更低、约9mM或更低、约8mM或更低、约7mM或更低、约6mM或更低、约5mM或更低、约4mM或更低、约3mM或更低、约2mM或更低、约1.8mM或更低、约1.6mM或更低、约1.4mM或更低、约1.2mM或更低、约1mM或更低、约0.8mM或更低、约0.6mM或更低、约0.4mM或更低、或者约0.2mM或更低的浓度存在于药物制剂中。糖可以以在由任何前述端点限定的范围内的任何浓度存在于药物制剂中。例如，糖可以以约0.1mM至约2000mM、约0.1mM至约1500mM、约0.1mM至约1000mM、约0.1mM至约500mM、约0.1mM至约250mM、约0.1mM至约100mM、约0.1至约50mM、约0.1mM至约10mM、约1mM至约2000mM、约1mM至约1500mM、约1mM至约1000mM、约1mM至约500mM、约1mM至约250mM、约1mM至约100mM、约1mM至约50mM、约1mM至约10mM、约10mM至约2000mM、约10mM至约1500mM、约10mM至约1000mM、约10mM至约500mM、约10mM至约250mM、约10mM至约100mM、约10mM至约50mM、约100mM至约2000mM、约100mM至约1500mM、约100mM至约1000mM、约100mM至约500mM、约100mM至约250mM、约500mM至约2000mM、约500mM至约1500mM、约500mM至约1000mM等的浓度存在于药物制剂中。
在其它实施方案中，糖以浓度百分比(例如，体积/体积百分比(％v/v)；重量/体积百分比(％w/v)；或重量/重量百分比(％w/w))存在于药物制剂中。糖可以以约0.1％或更高、约1％或更高、约5％或更高、约10％或更高、约15％或更高、约20％或更高、约30％或更高、约40％或更高的浓度百分比存在于药物制剂中。可选地或另外，糖可以以约50％或更低、约40％或更低、约30％或更低、约20％或更低、约15％或更低、约10％或更低、约5％或更低、或者约1％或更低的浓度百分比存在于药物制剂中。糖可以以在由任何前述端点限定的范围内的任何浓度百分比存在于药物制剂中。例如，糖可以以约0.1％至约50％、约1％至约50％、约10％至约50％、约0.1％至约20％、约1％至约20％、约10％至约20％、约0.1％至约10％、约1％至约10％等的浓度百分比存在于药物制剂中。
药物制剂中可以存在任何合适的多元醇。多元醇可以是，例如，山梨醇和/或甘露醇。多元醇可以以任何合适的浓度存在于药物制剂中。多元醇可以以约0.1mM或更高、约1mM或更高、约10mM或更高、约20mM或更高、约30mM或更高、约40mM或更高、约50mM或更高、约60mM或更高、约70mM或更高、约80mM或更高、约90mM或更高、约100mM或更高、约120mM或更高、约140mM或更高、约160mM或更高、约180mM或更高、约200mM或更高、约250mM或更高、约300mM或更高、约350mM或更高、约400mM或更高约、450mM或更高、或者约500mM或更高的浓度存在于药物制剂中。可选地或另外，多元醇可以以约1000mM或更低、约500mM或更低、约450mM或更低、约400mM或更低、约350mM或更低、约300mM或更低、约250mM或更低、约200mM或更低、约180mM或更低、约160mM或更低、约140mM或更低、约120mM或更低、约100mM或更低、约90mM或更低、约80mM或更低、约70mM或更低、约60mM或更低、约50mM或更低、约40mM或更低、约30mM或更低、约20mM或更低、约10mM或更低、或者约1mM或更低的浓度存在于药物制剂中。多元醇可以以在由任何前述端点限定的范围内的任何浓度存在于药物制剂中。例如，多元醇可以以约0.1mM至约1000mM、约0.1mM至约500mM、约0.1mM至约100mM、约1mM至约1000mM、约1mM至约500mM、约1mM至约100mM、约100mM至约1000mM、约100mM至约500mM等的浓度存在于药物制剂中。
在其它实施方案中，多元醇以浓度百分比(例如，体积/体积百分比(％v/v)；重量/体积百分比(％w/v)；或重量/重量百分比(％w/w))存在于药物制剂中。多元醇可以以约0.1％或更高、约1％或更高、约2％或更高、约3％或更高、约4％或更高、或者约5％或更高、约10％或更高、约15％或更高、约20％或更高、约25％或更高、约30％或更高、约35％或更高、约40％或更高、约45％或更高的浓度百分比存在于药物制剂中。可选地或另外，多元醇可以以约50％或更低、约45％或更低、约40％或更低、约35％或更低、约30％或更低、约25％或更低、约20％或更低、约15％或更低、约10％或更低、约5％或更低、约4％或更低、约3％或更低、约2％或更低、或者约1％或更低的浓度百分比存在于药物制剂中。多元醇可以以在由任何前述端点限定的范围内的任何浓度百分比存在于药物制剂中。例如，多元醇可以以约0.1％至约50％、约1％至约50％、约5％至约50％、约10％至约50％、约15％至约50％、约0.1％至约25％、约1％至约25％、约5％至约25％、约10％至约25％、约15％至约25％、约0.1％至约15％、约1％至约15％、约5％至约15％、约10％至约15％、约0.1％至约10％、约1％至约10％、约5％至约10％、约0.1％至约5％、约1％至约5％等的浓度百分比存在于药物制剂中。
在一个实施方案中，药物制剂包含本发明的流感病毒、约0.5M蔗糖、约0.1M或约0.5M甘露糖、约0.3M或约0.5M海藻糖、约50％SPG和约0.05％聚山梨醇酯20。在另一个实施方案中，药物制剂包含本发明的流感病毒、约0.5M蔗糖、约0.3M海藻糖和约0.05％聚山梨醇酯20。
至少一种药学上可接受的载体或赋形剂可以是用于结合药物制剂成分的组分(例如，粘合剂)。粘合剂可以包括但不限于蛋白质(例如明胶)、聚合物(例如聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮)和/或多糖或其衍生物(例如淀粉和纤维素)。至少一种药学上可接受的载体或赋形剂可以是增加药物制剂体积的组分(例如，疏松剂(bulking agent)、稀释剂和/或填充剂(filler))。这种疏松剂可以包括但不限于多糖或其衍生物、糖和/或无机化合物。药学上可接受的载体或赋形剂可以是增强药物制剂的味道和/或外观(例如，调味剂、甜味剂和/或颜色)的组分。药学上可接受的载体或赋形剂可以是通过吸收或吸附液体或气体(例如吸附剂)来防潮药物制剂的组分。吸附剂包括但不限于淀粉、磷酸钙和/或胶体二氧化硅。药学上可接受的载体或赋形剂可以是促进药物制剂溶解的组分(例如崩解剂)，如淀粉、纤维素和/或本领域已知的任何其它聚合物，或其衍生物(例如交联的聚乙烯吡咯烷酮或羧甲基纤维素钠)。
在一些实施方案中，药学上可接受的载体或赋形剂是在药物制剂的制造中和期间减少颗粒间粘附和/或优化产物流动的组分(例如助流剂)。助流剂的实例包括但不限于滑石、胶体二氧化硅和玉米淀粉。药学上可接受的载体或赋形剂可以是在药物制剂的制造中和期间，特别是当药物制剂被配制成口服制剂时提供不粘附特性，如降低成分与例如冲孔面(punch face)或润滑剂之间的粘附的组分(例如，抗粘附剂)。例如，抗粘附剂可以包含硬脂酸镁。在其它实施方案中，药学上可接受的载体或赋形剂可以是在制造期间减少成分的结块和/或减少例如药物制剂(即配制为口服制剂)的表面与模壁之间的摩擦的组分(例如润滑剂)。根据某些实施方案，可以使用水溶性润滑剂或不溶于水的润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸、植物油、矿物油、聚乙二醇和/或十二烷基硫酸钠。药学上可接受的载体或赋形剂可以是充当包衣剂的组分。包衣剂包括但不限于基于明胶和/或纤维素的包衣剂(例如羟丙基甲基纤维素)。
其它合适的粘合剂、调味剂、甜味剂、着色剂、崩解剂、助流剂、抗粘附剂、润滑剂和包衣剂是本领域熟知的和容易确定的。
药物制剂还可以包含治疗剂(例如，化疗剂或抗炎剂)。药物制剂还可以包含触发与流感病毒分离的免疫应答的试剂。除了本发明的流感病毒以外的此类另外组分可以以任何合适的量存在。
在呈递给免疫系统之前，可以将另外的组分与其它组分混合以形成药物制剂。另外的组分也可以与药物制剂分开呈递给免疫系统。例如，另外的组分和药物制剂可以分别提供给免疫系统(例如，施用至有机体)。当另外的组分和药物制剂分开施用时，可以将另外的组分和药物制剂施用至被免疫的有机体的相同部位。
在药物制剂的一个实施方案中，药物制剂是病毒疫苗。病毒疫苗可以是减毒的活病毒疫苗或灭活的病毒疫苗(例如，全病毒疫苗、裂解病毒疫苗(split virus vaccine)或亚单位疫苗)。可以用多种流感病毒骨架亚型(即，对于甲型流感病毒和乙型流感病毒的Yamagata或Victoria谱系具有不同的血凝素和神经氨酸酶亚型)将病毒疫苗配制为单价疫苗、二价疫苗(例如，H1H3、H1By H1Bv、H3Bv或BvBy)、三价疫苗(例如，H1H3By、H1H3Bv、BvByH1或BvByH3)或四价疫苗(例如，H1H3ByBv)。例如，疫苗可以包含本发明重组病毒的多个实施方案。在一些实施方案中，疫苗还可以包含不同于本发明的重组病毒的至少一种重组病毒。
可以将病毒疫苗配制成用于任何合适的施用手段的组合物。例如，可以将病毒疫苗配制成口服制剂(例如胶囊、片剂或口腔膜剂(oral film))，喷雾剂(例如鼻喷雾剂)或适于鼻内施用或肠胃外施用，例如静脉内施用、肌内施用、皮内施用或皮下施用的任何组合物，如水性或非水性乳剂、溶液或混悬液。
实施方案：
(1)包含流感病毒骨架的重组病毒，其中所述流感病毒骨架包含PB1、PB2、PA、NP、M、NS、HA和NA基因区段，其中所述PB1、PB2、PA、NP、M、NS、HA和NA基因区段中的至少一个包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列，并且其中
(a)所述PB1基因区段编码具有包含选定氨基酸的氨基酸序列的PB1蛋白，其中所述选定氨基酸包含在第40位的亮氨酸和在第180位的色氨酸，以及在第464位的天冬酰胺、在第563位的异亮氨酸或在第607位的丝氨酸中的至少一种，并且其中所述PB1基因区段任选地包含在核苷酸第4位的胞嘧啶至尿嘧啶的启动子突变；
(b)所述PB2基因区段编码具有包含选定氨基酸的氨基酸序列的PB2蛋白，其中所述选定氨基酸包含在第504位的缬氨酸以及任选地在第467位的异亮氨酸和在第529位的缬氨酸，并且其中所述PB2基因区段任选地包含在核苷酸第4位的胞嘧啶至尿嘧啶的启动子突变；
(c)所述PA基因区段编码具有包含选定氨基酸的氨基酸序列的PA蛋白，其中所述选定氨基酸包含在第401位的赖氨酸，并且其中所述PA基因区段任选地包含在核苷酸第4位的胞嘧啶至尿嘧啶的启动子突变；
(d)所述NP基因区段编码具有包含选定氨基酸的氨基酸序列的NP蛋白，其中所述选定氨基酸包含在第116位的亮氨酸和在第294位的赖氨酸或在第311位的精氨酸中的至少一种；以及
(e)所述NS基因区段编码具有包含选定氨基酸的氨基酸序列的NS1蛋白，其中所述选定氨基酸包含在第30位的脯氨酸、在第55位的赖氨酸和在第118位的赖氨酸。
(2)如实施方案1所述的重组病毒，其中所述抗原是SARS-CoV-2刺突糖蛋白的免疫原性片段。
(3)如实施方案1或2所述的重组病毒，其中所述M基因区段包含编码抗原的至少一个核苷酸序列，其中所述抗原是SARS-CoV-2刺突糖蛋白的免疫原性片段。
(4)如实施方案1-3中任一项所述的重组病毒，其中所述M基因区段编码突变的M2蛋白。
(5)如实施方案4所述的重组病毒，其中所述M基因区段编码包含至少一种接头蛋白和FLAG表位标签的蛋白。
(6)如实施方案1-5中任一项所述的重组病毒，其中所述M区段编码包含SEQ IDNO:1-14和92-96中任一个的蛋白。
(7)包含流感病毒骨架的重组病毒，其中所述流感病毒骨架包含PB1、PB2、PA、NP、M、NS、HA和NA基因区段，所述基因区段包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列，其中
(a)所述PA基因区段包含在核苷酸第2272位的胸腺嘧啶；
(b)所述NP基因区段编码具有包含选定氨基酸的氨基酸序列的NP蛋白，其中所述选定氨基酸包含在第40位的丝氨酸、在第161的天冬酰胺或甘氨酸、在第204位的苏氨酸和任选地在第93位的缬氨酸；以及
(c)所述NS基因区段包含在核苷酸第39位的鸟嘌呤，并且其中所述NS基因区段编码具有包含选定氨基酸的氨基酸序列的NS蛋白，其中所述选定氨基酸包含在第176位的谷氨酰胺。
(8)如实施方案7所述的重组病毒，其中所述抗原是SARS-CoV-2刺突糖蛋白的免疫原性片段。
(9)如实施方案7或8所述的重组病毒，其中所述M基因区段包含编码抗原的至少一个核苷酸序列，其中所述抗原是SARS-CoV-2刺突糖蛋白的免疫原性片段，并且所述M基因区段还编码突变的BM2蛋白。
(10)如实施方案1-9中任一项所述的重组病毒，其中所述NS基因区段包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列。
(11)如实施方案1-10中任一项所述的重组病毒，其中所述抗原是SARS-CoV-2刺突糖蛋白的免疫原性片段。
(12)如实施方案1-11中任一项所述的重组病毒，其中所述NS基因区段编码(1)NS1蛋白，(2)至少一种柔性接头蛋白，(3)SARS-CoV-2刺突糖蛋白的免疫原性片段，(4)至少一种可切割的切割序列以及(5)NEP蛋白。
(13)如实施方案12所述的重组病毒，其中所述至少一个可切割的切割序列是T2A肽序列或P2A肽序列。
(14)如实施方案1-13中任一项所述的重组病毒，其中所述NS基因区段编码包含SEQ ID NO:97-104中任一个的蛋白。
(15)如实施方案1或7所述的重组病毒，其中所述M基因区段和所述NS基因区段中的每一个都包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列，并且其中所述抗原是SARS-CoV-2刺突糖蛋白的免疫原性片段。
(16)如实施方案1或7所述的重组病毒，其中所述NA基因区段和所述NS基因区段中的每一个都包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列，并且其中所述抗原是SARS-CoV-2糖蛋白的免疫原性片段。
(17)如实施方案1或7所述的重组病毒，其中所述M基因区段和所述NA基因区段中的每一个都包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列，并且其中所述抗原是SARS-CoV-2糖蛋白的免疫原性片段。
(18)如实施方案1或7所述的重组病毒，其中所述M基因区段和所述HA基因区段中的每一个都包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列，并且其中所述抗原是SARS-CoV-2糖蛋白的免疫原性片段。
(19)如实施方案1或7所述的重组病毒，其中所述NS基因区段和所述NA基因区段中的每一个都包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列，并且其中所述抗原是SARS-CoV-2糖蛋白的免疫原性片段。
(20)如实施方案1或7所述的重组病毒，其中所述NS基因区段和所述HA基因区段中的每一个都包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列，并且其中所述抗原是SARS-CoV-2刺突糖蛋白的免疫原性片段。
(21)如实施方案1-20中任一项所述的重组病毒，其中所述病毒能够在人细胞中复制。
(22)如实施方案1-21中任一项所述的重组病毒，其中与在相同条件下在Vero细胞中除了没有所述选定氨基酸之外其余均相同的重组病毒相比，所述病毒具有增强的生长。
(23)如实施方案1-22中任一项所述的重组病毒，其中包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列的所述基因区段还包含下游重复，并且其中所述下游重复包含至少一个沉默核苷酸突变。
(24)药物制剂，其包含实施方案1-23中任一项所述的重组病毒。
(25)如实施方案24所述的药物制剂，其中所述疫苗被配制成单价疫苗。
(26)如实施方案24所述的药物制剂，其中所述疫苗被配制成二价疫苗。
(27)如实施方案24所述的药物制剂，其中所述疫苗被配制成三价疫苗。
(28)如实施方案24所述的药物制剂，其中所述疫苗被配制成四价疫苗。
(29)引发哺乳动物中免疫应答的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用实施方案1-23中任一项所述的重组病毒或实施方案24-28中任一项所述的药物制剂，从而在所述哺乳动物中引发对所述抗原的免疫应答。
(30)如实施方案29所述的方法，其中所述哺乳动物是人。
实施例
以下实施例进一步说明本发明，但当然不应解释为以任何方式限制其范围。
实施例1
本实施例证明了用于选择在流感病毒载体中使用的MHC I肽的方法。肽适于插入到M2、BM2和NS基因中。
用于疫苗的肽抗原基于它们刺激来自最广泛的可能数量的MHC基因型的免疫应答的能力来选择，从而为可能的最大数量的潜在疫苗提供益处。采用这种方法是因为对细胞表面上的MHC I类分子与结合并展示呈递给免疫效应T细胞的同源抗原肽的相互作用具有高特异性。具有较高特异性MHC I亲和力的抗原肽在接种后引发较强的免疫应答。已经开发了许多能够预测任何肽序列对给定MHC I类分子的亲和力的模型。这种相互作用在世界范围内发现于不同遗传背景的个体的许多已知MHC I类基因型中也是等位基因特异性的。因此，任何单一肽将对依赖于个体MHC I基因型的MHC I类的受体具有不同的亲和力。
来自SARS-CoV-2冠状病毒的S1或刺突表面糖蛋白用作鉴定最佳肽的靶抗原蛋白。通过标准密码子使用表从严重急性呼吸综合征冠状病毒2分离物Wuhan-Hu-1(Genbank NC_045512_2.)的完整基因组序列预测S1蛋白的氨基酸序列(SEQ ID NO:77)。通过预测27个成员的人MHC I类等位基因组的肽亲和力，使用初级S1蛋白序列来鉴定最好的MHC I类相容性9-mer肽。肽预测通过在一个集合中的所有预测者之间的预测共有百分等级来排名；选择百分等级≤1的那些。使用已知方法将聚类分析应用至这些肽(Dhanda等人,Front.Immunol.,9:1369(2018))，挑选预测对来自高遗传多样性的许多MHC I类分子具有高亲和力的表位簇。使用两步法对得分最高的肽进行排名。最初通过簇连接性对肽进行排名以定位肽亲和力“涂片(smears)”，其是其中多个9-mer平铺(即，肽排列和重叠)的高预测亲和力的区域。以这种方式，可以鉴定长于9个残基的肽涂片并将其靶向包含在疫苗内。给定肽被评分为前1％的次数被制成表格以对累积的命中计数和中位数表位排名进行评分以选择预期在具有高遗传多样性的人对象中结合MHC I的最佳肽涂片。下文更详细地描述该方法。
预测具有MHC-I活性的表位
免疫表位数据库和分析资源(IEDB)TepiTool用于从SARS-CoV-2刺突蛋白的氨基酸序列中提取MHC I相关表位预测。使用27个等位基因的组预测人MHC-I等位基因的表位；允许表位大小范围为8-mer至11-mer。除去重复的肽，并使用IEDB推荐的预测方法。选择具有小于或等于1的预测共有百分等级的肽，产生符合等级条件的647个表位和136566个总体元组(表位、等位基因、预测物、等级)。
将表位聚类到涂片上
IEDB的表位聚类分析工具用于将先前选择的表位聚类成相关表位的聚类，在本文中称为“表位涂片”。选择70％的最小序列同一性阈值，没有将大小过滤器置于表位列表上。将预测的表位聚类到涂片中，如具有小于或等于1的共有百分等级的那些。使用簇断裂聚类算法(cluster-breaking clustering algorithm)，并将具有其表位比对的簇输出到逗号分隔值(CSV)文件格式中。在这种使用情况下，通过降低连通性来有效地排序簇。利用这种方法，对簇按词典簇-簇排序顺序进行排名。
分析涂片
使用Python脚本，摄取簇，归一化，然后与从GenBank RefSeq基因组NC 045512.2获得的刺突S1蛋白开放阅读框比对。对命中的分布、序列长度等进行各种定性统计分析，以告知涂片选择。命中计数(每个簇的表位数量)和中位数等级(簇中每个表位的共有百分等级的中位数)添加为列。命中的总数是选择最高候选涂片序列的有用量度。发现仅一小部分的肽涂片含有大于10次命中/簇(图11)。通过设定每簇9次命中的任意截止值，在长度为1273个氨基酸的SARS-CoV-2S1蛋白中仅鉴定出总共8个涂片。
将来自统计分析的结果进行汇编，并重新输出到CSV格式以用于可视化。将最高的候选涂片彼此比较并手工管理。在三种情况下，候选涂片是重叠的或几乎相邻的，其允许组合成跨越两个候选序列的超共有涂片序列。选择的8个候选涂片显示在表1中。
表1：前8位候选MHC I相容性肽涂片SARS-CoV-2S1蛋白
Figure BDA0004113786380000371
最佳间隔区设计
通过从先前在Fred2(Schubert等人,Bioinformatics,32(13):1367-4803,2044(2016))中实施的公开的算法(Schubert等人,Genome Medicine,8(1):9(2016))延伸，将表位组装成多联体。应优化间隔区和表位排序，以最小化新表位的形成，并最大化间隔区中的MHC加工切割概率。理论上，将成本矩阵中的精心选择的条目处理成正负无穷大可以提供优化的间隔区，但使用中的ILP求解器(CBC)不能解决目标中具有无穷大系数的问题。在新方法中，k-mer间隔区被优化为kmax＝{3,6}。为了适当地优化在C或N末端被现有的氨基酸串束缚的表位链插入物的末端处的切割和新表位的形成，设计了四部分修饰以改进先前的方法：
1.在旅行商模型(Traveling Salesman model)中将C/N-末端结合串添加到肽组中(以Miller-Tucker-Zemlin形式表示为ILP)，
2.修饰间隔区优化以在所有表位肽的正确末端产生边界序列(boundingsequences)的间隔区，
3.将约束条件添加到模型中以实施表位和边界序列的正确排序，
4.修改目标以忽略由边界序列引入的TSP成本矩阵中的缺失条目。
表2：M2和BM2蛋白SARS-CoV2蛋白氨基酸序列：甲型流感病毒/PR/8M2、乙型流感病毒/Lee/40BM2及其嵌合融合蛋白
Figure BDA0004113786380000381
/>
Figure BDA0004113786380000391
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Figure BDA0004113786380000401
表3：编码M2和嵌合M2蛋白氨基酸序列的cDNA序列：甲型流感病毒/PR/8M2、乙型流感病毒/Lee/40BM2、密码子优化的甲型流感病毒/PR/8M2、密码子优化的乙型流感病毒/Lee/40BM2及其密码子优化的嵌合融合蛋白。
Figure BDA0004113786380000402
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Figure BDA0004113786380000411
实施例2
本实施例证明了从甲型流感病毒M2SR载体成功表达SARS-CoV-2受体结合结构域(RBD)抗原。
为了从甲型流感病毒M2SR载体表达SARS-CoV-2RBD抗原，合成构建了工程改造的NS区段8(图1)。然后将设计的基因插入到RNA Pol I载体中，以作为负义vRNA进行表达。将区段8设计成表达三个主要开放阅读框(ORF)的单一融合多肽：首先是完整的甲型流感病毒PR/8/1934NS1蛋白、柔性GSG接头、SARS-COV-2Wuhan-Hu-1刺突S1蛋白的氨基酸331-530、另一个GSG接头和PR8核输出蛋白(NEP或NS2)ORF。NS1与RBD的融合蛋白通过衍生自猪捷申病毒-1 2A的P2A肽与NEP分离。在翻译过程中，P2A位点通过未知的机制允许下游NEP蛋白作为单独的多肽表达，所述机制被认为涉及核糖体滑移。例如，NEP蛋白可以由SEQ ID NO:108表示。因此，保持了NEP的所需功能，并且应该保留NS1功能，因为也保持了完整的NS1 ORF。由于至少两个原因，人工区段8可能是不稳定的。为了提高序列的稳定性，实施了两次变化。当消除剪接时，编码NEP外显子1和一部分外显子2的一部分区段必须是重复的(参见图21和22)。因此，在整个NS1和NEP ORF中引入许多沉默突变以降低这些重复之间的同源性。另外，优化GSG和P2A位点序列以反映流感病毒的富含A-T的密码子偏倚。SARS-CoV-2序列没有改变，因为它已经是>60％的A-T。
NS1-RBD融合物可能不执行NS1功能，或者NS1功能可能受损。如果这样，重组病毒可能缺乏改变mRNA聚腺苷酸化和剪接以及阻抑干扰素和RIG-1介导的先天应答的能力。为了解决这种可能性，构建了在NS1与RBD之间具有来自明脉扁刺蛾病毒2A(T2A)的切割位点的另一构建体(图2)。这种设计旨在允许表达三种不同的多肽：NS1、RBD和NEP。
将编码新的COV2 NS区段的载体用于基于标准质粒的流感病毒反向遗传学方法中，以用SARS-CoV-2RBD区段8拯救M2缺陷型单一复制(M2SR)病毒。使用来自A/新加坡/NFIMH-16-0019/2016IVR-186(H3N2)的WHO推荐的疫苗株的HA和NA区段成功地获得两种病毒。使用M2VeroA细胞回收病毒，所述细胞经工程改造以组成型表达在无动物来源(AOF)培养基中生长的M2SR中缺失的M2蛋白(SEQ ID NO:1、15、17)。这种病毒拯救和培养系统适于制备旨在用于在人类临床试验中测试的M2SR疫苗候选物的cGMP生产的病毒种子。
通过用COV2 NS1 M2SR病毒毒株以>1.0的高感染复数(MOI)感染Vero细胞来测试NS1 SARS-CoV-2融合构建体的表达。也进行了没有病毒的MOCK和没有RBD插入物的新加坡2016M2SR的感染。接种后11小时收获细胞用于总细胞裂解物的免疫印迹分析。结果表明SARS RBD的抗血清结合预期大小的蛋白质。仅在RBD病毒感染的细胞提取物中检测到条带，而在对照中没有检测到条带(图3)。
为了证实NS1 SARS-CoV-2融合构建体的表达，以高MOI感染相同的Vero细胞，并用福尔马林固定细胞用于免疫荧光染色。将细胞与SARS RBD的抗血清孵育。洗涤后，将细胞用抗兔荧光素异硫氰酸酯(FITC)标记的第二抗体和直接用ALEXA FLOURTM 647标记的抗甲型流感病毒NP抗体染色。图4所示的图像显示CoV-2NS1 M2SR和标准M2SR感染的细胞都表达可检测水平的甲型流感病毒NP蛋白。同时，RBD的FITC标记只能在CoV-2NS1 M2SR感染的细胞中检测到，所述细胞产生显著的可检测荧光。染色表明NS1-RBD融合蛋白是胞质的。
实施例3
本实施例证明了从乙型流感病毒BM2SR载体成功表达SARS-CoV-2RBD。
为了从乙型流感病毒BM2SR载体表达SARS-CoV-2RBD抗原，合成构建了工程改造的流感病毒BM2缺陷区段7s(图5-6，SEQ ID NO:83、84)。然后将设计的基因区段插入到RNAPol I载体中，以作为负义vRNA进行表达。设计区段7s以表达来自单一病毒mRNA内的2个多肽ORF：首先是完整的乙型流感病毒/佛罗里达/4/2006M1蛋白，一个5-mer核糖体终止-起始滑移位点；其次是BM2与SARS-COV-2Wuhan-Hu-1刺突S1蛋白的氨基酸330-524的融合蛋白。在BM1和BM2之间天然发现的5碱基(5-mer)序列基序TTATG(SEQ ID NO:20)含有BM1 ORF翻译终止密码子(粗体)和BM2 ORF的起始密码子(斜体)。与甲型流感病毒区段7相比，核糖体滑移和翻译的重新起始允许BM2在第二阅读框中的病毒表达，而不需要剪接。在合成的含有SARS-CoV-2RBD的乙型流感病毒区段7中，一小部分BM2 ORF与S1 RBD(SEQ ID NO:95、96)融合。
人工流感病毒区段可能是不稳定的，导致培养中与生产不相容的不良病毒生长。这至少由于两个原因。首先，必需活性的表达，在这种情况下，可能影响M1基质蛋白。为了保持序列的稳定性，保持5-mer附近的局部RNA结构，使得M1翻译不受影响。因此，BM2ORF的氨基末端氨基酸与SARS-CoV-2RBD融合。由于包装效率低，区段可能丢失。所有流感病毒基因组区段的末端都是自身互补的，因此它们可以经由杂交配对，启动复杂的三级结构的形成，该三级结构依赖于位于距区段两端多达100bp处的非翻译序列和翻译序列。保留区段的正确UTR是最重要的。在疫苗区段7中，冠状病毒序列与乙型流感病毒3’UTR(mRNA有义)融合。UTR比甲型流感病毒的UTR长85bp。构建了两种形式。更保守的形式编码RBD插入BM2，从而保留了BM2 ORF两端的更长延伸(图5，SEQ ID NO:84)。较长的形式分别保留了BM2的10个和13个末端氨基酸(图6，SEQ ID NO:96)。
更精简的形式仅含有9bp，BM2的N-末端的3个残基融合到RBD(SEQ ID NO:95)，然后直接融合到区段UTR(图6，SEQ ID NO:83)。检查SARS-CoV-2序列以观察它们是否反映了流感病毒的富含A-T的密码子偏倚。SARS-CoV-2序列没有改变，因为它已经是约60％的A-T。
将编码2个SARS-CoV-2M区段(SEQ ID NO:83、84)的载体用于标准的基于质粒的流感病毒反向遗传学方法中，以拯救含有SARS-CoV-2RBD BM2SR区段7的BM2缺陷型单一复制(M2SR)病毒。使用来自B/CA/12/2015(YL)的WHO推荐的疫苗株的HA和NA区段成功地获得两种病毒。使用BM2Vero细胞回收病毒，所述细胞经工程改造以组成型表达在无动物来源(AOF)培养基中生长的BM2SR病毒中缺失的BM2蛋白(SEQ ID NO:2、16、18)。这种病毒拯救和培养系统适于制备旨在用于在人类临床试验中测试的BM2SR疫苗候选物的cGMP生产的病毒种子。
通过用CoV-2BM2SR病毒毒株以>1.0的高感染复数(MOI)感染Vero细胞来测试SARS-CoV-2BM2融合蛋白构建体(SEQ ID NO:95、96)的表达。也进行了没有病毒的MOCK和没有RBD插入物的仅CA12 BM2SR载体的感染。接种后11小时收获细胞用于总细胞裂解物的免疫印迹分析。结果表明SARS RBD的抗血清结合预期大小的蛋白质。仅在RBD病毒感染的细胞提取物中检测到条带，而在对照中没有检测到条带(图7)。这些结果表明最小的22kDa RBD构建体表达水平高于较长的24kDa形式。
实施例4
本实施例证明了编码来自SARS-CoV-2的序列的M2SR和BM2SR病毒在体内被减毒。
如表4所示，用以下病毒构建体鼻内免疫7周龄的BALB/c雌性小鼠。M2SR和BM2SR骨架序列和用于编码SARS-CoV-2序列的区段的序列示于SEQ ID NO:43-47、56、58、60、63-67、73、80、83、95、97和107中。以每只小鼠1x106 TCID50的剂量施用这些病毒。对照组小鼠给予含有10％蔗糖和5mM谷氨酸钠(SPGNa)的DPBS，pH7.2。在免疫后观察小鼠14天的体重和感染症状的任何变化。
表4：疫苗组
Figure BDA0004113786380000451
在14天期间，在用M2SR或BM2SR突变体或SPG对照免疫的小鼠中没有观察到感染或体重减轻的临床症状。图8A描绘了M2SR重组病毒免疫后的小鼠体重变化百分比，以及图8B描绘了BM2SR重组病毒免疫后的小鼠体重变化百分比。此外，在14天期间，各组之间的体重变化是相当的。这些结果表明含有SARS-CoV-2序列的M2SR和BM2SR病毒在小鼠中是减毒的并且没有致病性。
实施例5
本实施例证明了来自实施例4的M2SR和BM2SR病毒引发针对SARS-CoV-2的抗体应答。
在初次免疫前和初次给药后约3周从小鼠收集血清。通过酶联免疫吸附测定(ELISA)确定每组汇集的血清样品的抗刺突RBD血清IgG抗体滴度。
使用在293T细胞中表达的具有C-末端HIS标签的可溶性SARS-CoV-2重组RBD蛋白进行ELISA，并通过使用COMPLETETMHis标签纯化树脂(F.Hoffmann-La Roche AG,Basel,Switzerland)纯化。在4℃下用100μL在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中浓度为2μg/mL的RBD蛋白包被ELISA板过夜。在用含有0.1％聚山梨醇酯20(PBS-T)和1％来自冷水鱼皮的明胶的PBS封闭板后，将板用在PBS-T和1％来自冷水鱼皮的明胶中稀释的小鼠血清以一式两份孵育。在室温下孵育2小时后，将板用PBS-T洗涤6次，然后用缀合有辣根过氧化物酶的抗小鼠IgG第二抗体(KPL；在PBS-T和1％来自冷水鱼皮的明胶中1:2,000稀释)孵育。在用第二抗体孵育1小时后，将板用PBS-T洗涤6次，然后用1-STEPTM Ultra TMB-ELISA底物溶液(Thermo FisherScientific,Waltham,MA)显色。孵育10分钟后，加入4N硫酸终止反应。在450nm的波长下测量吸光度(OD450)。终点滴度是稀释度的倒数，该稀释度高于通过减去空白的平均值加上6×标准偏差确定的截止值。
距离免疫前基线的ELISA滴度的倍数增加显示在图9中。不编码刺突RBD序列的空载体在第21天没有显示ELISA滴度的增加。编码SARS-CoV-2序列的M2SR和BM2SR病毒引发RBD刺突ELISA滴度的增加。
实施例6
本实施例证明了在第二剂用于初免或刺突蛋白的疫苗后产生系统性抗体。
评估实施例4中病毒的四种给药方案：(1)用M2SR-COVID-19疫苗候选物(即AM2SR-CovidS-1)或M2SR载体病毒(即M2SR-Sing V5)中的一种初免小鼠，然后在初免后约4周用相同物质(即AM2SR-CovidS-1或M2SR-Sing V5)鼻内加强，(2)用M2SR-COVID-19疫苗候选物(即AM2SR-CovidS-1)或M2SR载体病毒(即M2SR-Sing V5)中的一种鼻内初免小鼠，并在引发后约4周用纯化的SARS-CoV-2蛋白肌内加强，(3)用BM2SR-COVID-19疫苗候选物(即，BM2SR-CovidS-1)或BM2SR载体病毒(即，BM2SR-CA12)中的一种初免小鼠，然后在初免后约4周用相同的物质鼻内加强，以及(4)用BM2SR-COVID-19疫苗候选物(即，BM2SR-CovidS-1)或BM2SR载体病毒(即，BM2SR-CA12)中的一种鼻内引发小鼠，并在引发后约4周用纯化的SARS-CoV-2蛋白肌内加强。在二次免疫(加强)后约3周，将所有小鼠进行末梢抽血，然后安乐死，并收集血清样品用于分析。
如上文关于实施例5所述通过ELISA分析血清样品。
抗SARS-CoV-2RBD IgG滴度显示在图28中。施用两次(初免-加强)的不编码刺突RBD序列的空载体(即，M2SR-Sing V5和BM2SR-CA12)不会引起RBD刺突ELISA滴度的增加。施用两次(初免-加强)的编码SARS-CoV-2序列(即AM2SR-CovidS-1和BM2SR-CovidS-1)的M2SR和BM2SR病毒引起RBD刺突ELISA滴度的增加。用编码SARS-CoV-2序列(即AM2SR-CovidS-1和BM2SR-CovidS-1)的M2SR和BM2SR病毒进行的初免当用纯化的SARS-CoV-2蛋白加强时显著增加RBD刺突ELISA滴度，而用空的M2SR载体病毒进行的初免当用纯化的SARS-CoV-2加强时不引起RBD刺突ELISA滴度的显著增加。
实施例7
本实施例证明了M2SR和BM2SR载体可用于多价制剂中并保留各自的免疫原性。
当配制成单价、二价、三价或四价疫苗时，甲型流感病毒H1N1或H3N2 FGHY1-M2SR或BM2SR-Vic或BM2SR-Yam病毒引发抗体应答。
用单价H1N1 FGHY1-M2SR、单价H3N2 FGHY1-M2SR、二价H1N1和H3N2 FGHY1-M2MR，单价BM2SR-Victoria，单价BM2SR-Yamagata，二价BM2SR、三价H1N1和H3N2 FGHY1-M2SR和BM2SR Victoria或Yamagata或四价H1N1和H3N2 FGHY1-M2SR和BM2SR Victoria和Yamagata疫苗鼻内免疫7周龄的BALB/c雌性小鼠(N＝8)。对照组小鼠用SPG模拟免疫。在接种后28天，用加强免疫对小鼠进行鼻内免疫，该加强免疫由初次免疫所施用的相同疫苗组成。在初次免疫后第7天、第14天和第21天以及加强免疫(第28天)后第35天、第42天和第49天采集血清样品。通过ELISA测定来自血清样品的抗H1 HA、抗H3 HA、抗乙型流感病毒-Vic HA和抗乙型流感病毒Yam HA血清IgG抗体滴度。
所得的抗H1 HA数据显示在图10A中。所得的抗H3 HA数据显示在图10B中。所得的抗乙型流感病毒-Vic HA数据显示在图10C中。所得的抗乙型流感病毒-Yam HA数据显示在图10D中。结果表明，所有疫苗都能够将抗流感病毒抗体提高到SPG对照之上，并且这些提高在疫苗制剂中是相当的。此外，这些结果证明了单价组分在配制成多价疫苗时保持了引发对单价组分的免疫应答的能力。
实施例8
预期本实施例证明了M2SR-SARS-CoV-2疫苗在体内引发抗体应答，该应答在重复给药时增加而对宿主无毒性。
为了证明M2SR-SARS-CoV-2疫苗病毒引发针对该组分的免疫应答而不对宿主造成毒性，用1x108 TCID50(低剂量)或1x109TCID50(高剂量)的剂量水平的M2SR-SARS-CoV-2疫苗鼻内免疫15只雄性和15只雌性雪貂。用SPG作为安慰剂对照模拟鼻内免疫第三组雪貂。对每个处理组使用三剂量接种疫苗方案。向雪貂施用初次免疫(研究第1天)以及在第13天和第27天(研究第14天和第28天)后施用2次加强免疫。每次免疫后，观察7天雪貂的死亡率，每天测量体重、体温和临床体征。从所有存活的雪貂中收集血液以评估研究前和研究第14天、第16天、第30天和第49天的临床病理学。在研究前和研究第14天、第30天和第49天收集血清样品，以通过ELISA、血凝抑制(HAI)测定和病毒中和(VN)测定来评价随时间的抗体水平。在研究第3天、第30天和第49天，对每组中的5只雄性和5只雌性进行尸检，包括检查身体的外表面、所有孔口、颅腔、胸腔和腹腔及其内容物。
疫苗病毒免疫。用三个剂量的M2SR-SARS-CoV-2疫苗鼻内免疫雪貂，剂量为1×108TCID50或1×109TCID50。将冷冻疫苗病毒储备液的小瓶在室温下解冻至少10分钟，然后冷藏保存，或在湿冰上保存，直到使用。用氯胺酮/赛拉嗪麻醉雪貂，并以500μL(250μL/鼻孔)的体积鼻内施用病毒剂量。
M2SR-SARS-CoV-2疫苗病毒是编码甲型流感/新加坡/INFIMH-16-0019/2016(H3N2)的HA和NA基因以及SARS-CoV-2刺突蛋白的RBD的重组甲型流感病毒，其不表达功能性M2蛋白。
实验设计：在研究开始时，将九十(90)只16至22周龄的雪貂(Triple F Farms,Sayre PA)，即45只雄性和45只雌性用于研究。所有动物程序根据IIT研究所的动物护理和使用委员会批准的协议在动物生物安全2级设施中进行。在免疫前，对雪貂进行4天监测以建立基线体温。每天通过皮下植入在每只雪貂的应答器(BioMedic data systems,Seaford,DE)记录温度读数。在研究开始之前收集血液，并测试血清中的流感抗体。用受体破坏酶(RDE)(Denka Seiken,Tokyo,Japan)处理免疫前血清样品以去除非特异性抑制剂，然后连续稀释，针对确定量的甲型流感病毒/密歇根/45/2015(H1N1)、A/新加坡/INFIMH-16-0019/2016(H3N2)、B/普吉岛/3073/2013(Yamagata谱系)和B/科罗拉多(Colorado)/06/2017(Victoria谱系)的病毒进行测试，并与0.5％火鸡红细胞混合。抗体滴度将被定义为引起红细胞凝集抑制的最低血清稀释度。只有HAI滴度小于40的雪貂被认为是血清阴性的，并用于本研究。将研究动物随机分成3组(15只雄性和15只雌性雪貂/组)。
为了评估疫苗效力和毒性，在研究第1天、第14天和第28天，用3个剂量的1×108TCID50或3个剂量的1×109TCID50的M2SR-SARS-CoV-2鼻内免疫雪貂。对照组将在研究第1天、第14天和第28天用SPG模拟鼻内免疫。免疫后7天，将每天监测雪貂体温、体重和临床症状。在研究第-5天、第14天、第16天、第30天和第49天将从所有存活的雪貂中收集血液以评估临床病理学。在研究第-5天、第14天、第30天和第49天将收集血清样品，并保持在约-70℃，直到通过ELISA、病毒中和测定和HAI测定测量抗体滴度。所有研究动物将在其预定日期(第3天、第30天或第49天，每组5只雄性和5只雌性)安乐死，并进行尸检。尸检由检查身体的外表面、所有孔口以及颅腔、胸腔和腹腔及其内容物组成。收集组织、固定并通过委员会认证的兽医病理学家进行组织病理学评价。
垂死状态(moribundity)/死亡率和临床观察：预期所有的雪貂都存活到它们预定的处死日期。对于在第1天-第49天期间测量的所有时间点，预期所有雪貂的活动水平得分为“0”(警示和有趣)。
体重和体重变化：预期不会观察到差异。
体温：预期不会观察到差异。
酶联免疫吸附测定(ELISA)：将通过ELISA测定来自血清样品的抗HA IgG抗体滴度。将用来自A/新加坡//INFIMH-16-0019/2016(H3N2)的重组HA蛋白(Immune TechnologyCorp.,New York,NY)或刺突RBD包被ELISA板，用脱脂乳封闭，并应用样品。通过辣根过氧化物酶标记的抗雪貂IgG山羊抗体(SeraCare Life Sciences,Milford,MA)和1-STEPTM UltraTMB-ELISA(Thermo Fisher Scientific Inc.)底物来检测雪貂IgG抗体。
预期每个免疫组中的雪貂显示出血清中抗H3 HA抗体的显著升高，而预期仅接受SPG的动物中的抗体水平与基线相比没有变化。在初免给药后两周，免疫组中抗H3 HA抗体滴度将高于SPG对照组。在第一次和第二次施用疫苗后，每个免疫组的平均抗体滴度将进一步增加。
血凝抑制(HAI)测定：为了证明通过ELISA检测的抗体的功能活性，将通过HAI测定分析血清样品。将用RDE处理血清样品以消除非特异性血凝的抑制剂。根据制造商的说明将重构RDE。将血清在RDE中以1:3稀释并在37℃±2℃水浴中孵育18-20小时。在加入等体积的2.5％(v/v)柠檬酸钠后，将样品在56±2℃水浴中孵育30±5分钟。在RDE处理后，将向每个样品中加入包含0.85％NaCl的溶液，最终血清稀释度为1:10。然后将样品在PBS中进一步稀释两倍(1:10至1:1280)，并与4个血凝单位的甲型流感病毒/新加坡/INFIMH-16-0019/2016(H3N2)病毒一起孵育。孵育后，将向每个样品中加入0.5％的禽类红细胞并孵育30±5分钟。然后对是否存在血凝进行评分。
预期高剂量(1×109TCID50)组显示比低剂量(1×108TCID50)组更高的HAI滴度，且预期SPG(对照)组没有引发任何HAI滴度。预期M2SR-SARS-COV-2免疫的雪貂对测试病毒显示出等于或高于80个HAI滴度。CDC规定：血清HAI抗体滴度为40与群体中流感感染或疾病风险的至少50％降低有关。因此，预期这些结果表明M2SR-SARS-COV-2病毒能够引发保护性免疫应答。
病毒中和测定：将在病毒中和测定中测试针对A/新加坡/INFIMH-16-0019/2016(H3N2)流感病毒的研究前和处理阶段血清样品(来自研究第3天、第14天、第30天和第49天)。将血清样品在56℃下灭活30分钟。然后将血清连续稀释2倍，并与标准化病毒(浓度为80-140PFU)在37±2℃下在5.0±1％CO2中孵育60分钟。然后将100微升(100μL)的每种血清和病毒混合物转移到含有MDCK细胞单层的96孔板的相应孔中。然后将板(具有样品)在37±2℃下在5.0±1％CO2中孵育18-22小时。孵育后，将细胞用多聚甲醛固定并用抗甲型流感病毒核蛋白单克隆抗体库(1份MAB8257:1份MAB8258(Millipore；Billerica,MA))，然后用过氧化物酶缀合的山羊抗小鼠IgG染色。将使用TrueBlue过氧化物酶底物(Kirkegaard andPerry Laboratories；Gaithersburg,MD)对斑点进行显影。将使用酶联免疫斑点(ELISPOTTM)仪器(AID GmbH,Strassberg,Germany)使噬斑可视化并对其进行计数。50％噬斑减少中和滴度(PRNT50)将通过对噬斑进行计数并将滴度报告为基于对照噬斑的返滴定，使输入对照病毒噬斑计数显示50％降低的最终血清稀释度的倒数来计算。
预期SPG组内的雪貂在研究期间保持阴性(滴度≤100)。预期用1×108TCID50剂量的M2SR-SARS-COV-2免疫的雪貂具有高几何平均滴度(GMT)。预期用1×109TCID50剂量的M2SR-SARS-COV-2免疫的雪貂具有更高的GMT VN滴度。预期用3剂1×109TCID50的H3N2M2SR-SARS-COV-2免疫的所有雪貂表现出最高的PRNT50滴度。
临床病理学：对于所有存活的雪貂，将在研究前以及在第3天、第14天、第16天、第30天和第49天从颈静脉或腔静脉收集用于分析临床化学、血液学和凝血参数的血样。在血液收集之前将动物禁食4-6小时。乙二胺四乙酸(EDTA)将被用作血液学样品的抗凝剂，而柠檬酸钠将被用于凝固样品。将在没有抗凝剂的情况下收集用于临床化学的样品。在尸检时将直接从每只雪貂的膀胱收集尿样。
对于在研究期间评价的任何临床化学或血液学参数，预期不会注意到与治疗相关的或毒理学上显著的发现。
大体尸检(Gross Necropsy)和组织病理学：在研究第3天、第30天和第49天将对每组的5只雄性和5只雌性进行大体尸检和组织病理学。用剂量为1x108 TCID50的M2SR-SARS-COV-2鼻内免疫雪貂预期不会导致总体发现。在1×109TCID50的剂量下，预期在第3天和第30天在肺中注意到总体发现(色素沉着、深色的或斑驳的)，并且预期在第3天和第30天在肺中注意到微小的发现(混合细胞浸润)。在3周恢复后，在研究的第49天，预期不会观察到与试验样品相关的总体病变。
预期本实施例显示了M2SR-SARS-COV-2疫苗病毒的鼻内免疫不会在接种疫苗的宿主中扩散，并且与任何疫苗相关的不良事件(例如，升高的体温、体重减轻或临床体征)无关。预期这些结果表明，M2SR-SARS-COV-2病毒在单次给药后引发针对同源测试病毒的保护性免疫应答，其可以随着重复给药而进一步提高；并且可用作鼻内冠状病毒疫苗。
实施例9
本实施例证明了成功设计和产生表达多种衍生自SARS-CoV-2刺突蛋白的抗原的几种M2SR病毒毒株。
可以对编码两种非结构蛋白NS1和NEP(核输出蛋白)的甲型流感病毒NS区段8进行修饰以使用甲型流感病毒作为疫苗载体来表达抗原。NEP是必需的，而NS1 ORF对于病毒复制是必不可少的。可以在Vero细胞培养中反复传代来分离NS1截短物，甚至可以构建完整的NS1缺失毒株。NS1确实在促进流感感染中起非常重要的作用，包括改变剪接和阻断宿主细胞先天反应。NS1突变降低了病毒滴度，使得制造困难，并且更重要的是，它们损害原代细胞中和体内的病毒复制。使NS区段向量化的第二个主要障碍是必需的NEP蛋白由区段8mRNA的剪接形式表达。剪接将一个短的外显子1序列连接到另一替代翻译阅读框中的外显子2，该翻译阅读框与由未剪接的mRNA编码的NS1 ORF重叠。
为了编码抗原，对NS区段进行两个重要的改变。首先，消除剪接供体(SEQ ID NO:109)和受体位点。然后连接编码NEP外显子1和外显子2的序列以构建不含内含子的NEPORF。结果是产生了编码单一多肽的ORF，其中NS1 C末端与NEP ORF融合，所述NEP ORF被衍生自猪捷申病毒-1 2A的NS1 P2A肽和GSG柔性接头(SEQ ID NO:80、85、87-91、97-104)分开。在翻译过程中，P2A位点通过未知的机制允许NEP蛋白作为单独的多肽表达，所述机制被认为涉及核糖体滑移。将编码所需疫苗抗原的遗传信息插入到流感病毒ORF之间，通过融合到NS1或通过添加第二个P2A或T2A肽表达以切割抗原的两侧(SEQ ID NO:86、99)。这种排列导致携带来自NS1 ORF内的核苷酸序列的长重复序列的放大区段8。
遗憾的是，这种重复在遗传上是不稳定的。基因组复制期间区段的两个部分之间的非典型杂交可诱导流感病毒RNA聚合酶错误，通常导致缺失和插入以及缺陷型基因组RNA合成。在这种情况下，不稳定性可能加剧，因为基因重复包括仅距区段8末端26bp的NEP外显子1序列，其对于基因组包装可能是重要的。将流感病毒基因区段装配到病毒体中是经由5’和3’UTR中反向重复序列杂交形成的双链“泛柄(pan handle)”RNA结构介导的。区段末端附近的编码序列也参与包装，并且区段末端附近的沉默突变已经显示出阻断病毒复制。区段内部的重复区域可与末端UTR包装序列竞争基本杂交，损害病毒装配。结果是病毒生长不良、病毒滴度低和转基因表达丧失。
为了通过降低工程化区段中串联重复之间的同源性来提高遗传稳定性，将关键突变引入编码NS1和NEP ORF的序列(SEQ ID NO:110、111)。对编码NS1的密码子的第三个位置进行沉默突变，以通过消除起始密码子并向任何潜在的替代翻译阅读框添加终止密码子来切割非预期表达的潜能。这减少了从载体和插入序列或两者产生非预期新抗原的机会。
编码NEP的10个N-末端氨基酸的外显子1序列重复以两种方式显著改变，以降低拷贝之间的序列同一性(图21，SEQ ID NO:80、97、110)。该构建体经由P2A切割位点表达NEP。尽管机制还不清楚，但切割总是留下单一脯氨酰残基作为附加到切割的下游肽的N末端的蛋白质疤痕。NEP的第三个氨基酸已经是脯氨酸，表明前两个残基在结构上不相关。因此，设计构建的NS区段以表达NEP的6bp缺失N末端突变体，其在脯氨酸处开始，没有疤痕(SEQ IDNO:117)。通过改变密码子第三位置并保持高A-T％，进一步改善了有害的同源性。另外，对GSG和P2A位点序列进行密码子优化，以反映流感病毒的富含A-T的密码子偏倚。
将含有重复的剪接负性NS区段(SEQ ID NO:85、98)插入到RNA Pol I质粒载体中，以作为负义vRNA表达。将基于标准质粒的流感病毒反向遗传学方法用于拯救含有工程改造的和对照A PR/8/1934区段8的M2缺陷型单一复制(M2SR)病毒。在M2VeroA细胞中扩增回收的病毒毒株并测定病毒滴度。将毒株用于以MOI＝0.001接种的一式三份培养物以比较生长动力学。接种后4天，对病毒培养物取样，冷冻保存等分试样用于随后的滴定分析。通过TCID50测定病毒滴度后，计算每日平均滴度。两种毒株的曲线的图(图12)显示病毒生长不被表达NS1和NEP作为单一自切割肽的合成区段损害。
产生了几种M2SR病毒毒株，其被设计以表达多种衍生自SARS-CoV-2刺突蛋白的抗原，在M2VeroA细胞中生长，如表5所示。
表5：M2SR SARS CoV-2疫苗候选毒株及最大病毒滴度
Figure BDA0004113786380000541
Figure BDA0004113786380000551
a＝在Vero细胞中进行的TCID50
b＝检测的测定限度
实施例10
本实施例证明了NS载体区段表达抗原的功能性，所述抗原是SARS-CoV-2S1蛋白的刺突螺旋。
已知SARS-CoV-2S1蛋白的刺突螺旋经历大的构象变化，所述变化驱动病毒和细胞膜之间的融合。对其它病毒刺突蛋白螺旋(包括RSV和PIV的那些螺旋)的研究已经鉴定了一组2个串联脯氨酸突变，其通过稳定作为重组抗原的刺突蛋白来改善性能。这两个脯氨酸残基(2P)依次位于存在于刺突蛋白融合前构象中的两个较短螺旋之间。这种改变将蛋白质锁定在融合前构象中，这导致了好得多的重组蛋白表达和对疫苗接种的中和免疫应答的双重益处。图13中的生长曲线显示，与野生型相比，具有NS1融合到未修饰的SARS-CoV-2螺旋抗原的区段8损害病毒生长(SEQ ID NO:88、101)。用2P替代转角残基以将刺突螺旋锁定成融合前形式改善了生长(SEQ ID NO:88、102)，可能是通过改善NS1功能性。
实施例11
本实施例证明了从甲型流感病毒M2SR区段成功表达SARS-CoV-2受体结合结构域(RBD)。
各种SARS-CoV-2RBD抗原由合成构建的工程化甲型流感病毒M2SR甲型流感病毒M2缺陷型载体区段7(SEQ ID NO:122-124)表达(图14)。然后将设计的基因区段插入到RNAPol I载体中，以作为负义vRNA进行表达。设计区段7以表达来自剪接病毒mRNA的2个多肽开放阅读框(ORF)：首先是完整的甲型流感病毒/PR/8/34M1蛋白，其次是M2与SARS-COV-2Wuhan-Hu-1刺突S1蛋白抗原的融合蛋白。通过剪接发生M2在甲型流感病毒区段7的第二阅读框中的病毒表达。为了保持来自合成的含有SARS-CoV-2的甲型流感病毒区段7的必需M1蛋白功能，将一部分M2 ORF与S1 RBD(SEQ ID NO:6、8、10、79)融合。
将编码SARS-CoV-2M2SR区段的载体用于基于标准质粒的流感病毒反向遗传学方法中，以拯救含有SARS-CoV-2RBD M2SR区段7的M2缺陷型单一复制(M2SR)病毒。使用来自A/新加坡//2016(H3N2)的WHO推荐的疫苗株的HA和NA区段成功地获得两种病毒。使用M2Vero细胞回收病毒，所述细胞经工程改造以组成型表达在AOF培养基中生长的M2SR病毒中缺失的M2蛋白。这种病毒拯救和培养系统适于制备旨在用于在人类临床试验中测试的M2SR疫苗候选物的cGMP生产的病毒种子。
实施例12
本实施例证明了M2SR流感病毒能够驱动锚定到感染细胞的胞外膜的抗原的表达(参见图15-20和24-27)。
预期在支持性M2表达底物细胞中产生的包装病毒基本上缺乏目的基因编码的蛋白、多聚化结构域或跨膜结构域，除非抗原直接与掺入的流感病毒亚基，如血凝素、HA融合。目的基因(GOI)可以是病毒(包括流感病毒)、细菌、真菌或原生动物来源的抗原相关元件。
抗原在细胞表面上的适当表达可通过免疫荧光染色来证实，所述免疫荧光染色通过用对病毒编码的预期疫苗抗原具有特异性的单克隆抗体对感染细胞进行流式细胞术分析来进行。不同的区段可用于表达相同的抗原。示例性抗原是SARS-CoV-2刺突蛋白人ACE2受体结合结构域(RBD)。RBD抗原可使用来自另一种膜蛋白的TM结构域在细胞表面表达。RBD与来自呼吸道合胞病毒(RSV)F蛋白的TM的融合由来自单一开放阅读框(ORF)的NS1区段编码，该开放阅读框含有产生三种肽的P2A和T2A翻译滑动位点：NS1、NEP和RBD-RSV TM与T4三聚体结构域的融合。替代方法是直接与HA蛋白本身融合。HA是一种膜蛋白，因此融合抗原将作为三聚体展示在感染细胞的表面上并掺入到病毒体中。
通过在膜上表达来自NS1区段或HA区段的RBD的M2SR病毒，以1-10的感染复数(MOI)接种M2VeroA细胞。在4℃下，在FACS缓冲液(1×DPBS,1％ FBS)中接种后18小时，对感染的细胞进行SARS-CoV-2S1 RBD的表面表达的免疫染色。使用从恢复期SARS-CoV-1患者中分离的中和单克隆抗体CR3022作为一级抗体对活的完整细胞进行染色(ter Meulen等人,PLoS Med.3(7):e237(2006))，然后用Alexa Fluor 488标记的抗人IgG第二抗体检测，如图24-25所示。从用表达来自NS或HA区段的SARS-CoV-2RBD抗原的病毒感染的细胞中检测到高于背景的表面表达。
可以靶向的另一种呼吸道病毒是呼吸道合胞病毒(RSV)。RSV的两种主要表面蛋白(融合蛋白(F)和表面糖蛋白(G))都是可中和RSV的单克隆抗体的重要结合位点。用4个DNA质粒的甲型流感病毒复制子化学转染人293T细胞以组成型过表达表达流感病毒RNA区段编码的蛋白所需的PA、PB1、PB2和NP病毒亚基；以及用表达来自RNA聚合酶I启动子的流感病毒HA基因组区段的单一质粒进行。RSV G蛋白抗原直接与HA糖蛋白融合，导致RSV G抗原在细胞膜上表达。在转染后48小时，对活的完整细胞进行免疫染色，以便在转染后48小时对RSVG表面糖蛋白抗原进行表面表达。使用第一小鼠单克隆抗体131-2G(Chemicon)在FACS缓冲液中染色，然后用Alexa Fluor 488标记的抗小鼠IgG第二抗体检测。从用表达RSV G蛋白抗原的病毒感染的细胞中检测到高于背景的表面表达。
来自单一病原体的多种抗原可以展示在膜上。用编码SARS-CoV-2S2抗原的M2SR病毒以MOI＝1接种的细胞在表面上表达不同于RBD的第二替代COVID疫苗靶标，如图27所示。用病毒以MOI＝1感染的完整的活M2VeroA细胞在接种后18小时免疫染色SARS-CoV-2刺突S2亚基抗原的表面表达。使用针对SARS-CoV-2S2免疫原激发的第一兔单克隆抗体3C4(Genscript)在FACS缓冲液中染色，然后用Alexa Fluor 488标记的抗兔IgG第二抗体检测。用表达SARS-CoV-2S2连接头和TM抗原的病毒感染的细胞中检测到高于背景的表面表达。
对于HA和NS区段的构建体，包装信号保持在GOI的上游，并且在HA的情况下，可以重复包装信号以保持适当的HA加工。重复的包装信号应具有沉默突变以消除其与5’包装信号的二级相互作用并帮助防止不希望的重组事件。其它实施方案可采用抗原(例如，来自呼吸道合胞病毒(RSV)融合(F)或糖蛋白(G)或SARS-COV2刺突序列的序列)与HA自身的直接融合，在这种情况下，包装序列不是重复的(图24-27，SEQ ID NO:116-118)。在许多情况下，多聚化结构域(MD)的使用将是优选的以增强免疫原性。这种MD可以选自多种基序，如T4fibritin的C-末端结构域(SEQ ID NO:115,Foldon)或GCN4-p1亮氨酸拉链结构域。跨膜结构域(TM)可以是SARS-COV2刺突预测的跨膜螺旋氨基酸1214-1246(Genebank登录：YP_009724390.1,SEQ ID NO:36-41、77、119)的跨膜结构域，至少氨基酸1201-1246的使用将先验地包括表1中排序最高的MHC I相容性表位(SEQ ID NO:21)。其它TM可包括RSV融合蛋白的TM(SEQ ID NO:115)。
表6显示了小刺突蛋白，所述蛋白是SARS-CoV-2S1蛋白的部分或S1部分的融合物，其被设计成使用刺突TM锚定的膜。S1信号序列(SEQ ID NO:39-41、42、115、119)的使用将将肽导向细胞分泌设备，用于在细胞表面膜上展示以及用于翻译后修饰，如N-连接的糖基化。
表6：包括SARS-CoV-2S1蛋白的部分在内的小刺突蛋白
Figure BDA0004113786380000591
/>
Figure BDA0004113786380000601
实施例13
本实施例证明了含有沉默突变的M2SR的NS载体区段表达抗原(SEQ ID NO:113)EGFP荧光蛋白的功能性，所述NS载体区段也是标志物基因(SEQ ID NO:114)(图21-22)。含有设计用于表达EGFP的NS区段的M2SR病毒用于以MOI＝10感染M2VeroA细胞。接种后3天的荧光显微镜显示，可以在24小时内检测到稳健的EGFP表达，扩散直至在48小时观察到几乎100％的细胞表达抗原。在72小时后，细胞从基质上分离并表现出强的细胞病变效应(CPE)，如由于流感病毒感染所预期的(图23)。在第3天观察到的强CPE显示病毒复制基本上不被插入的EGFP基因抑制。
实施例14
本实施例证明了来自实施例4的编码SARS-CoV-2序列的M2SR和BM2SR病毒保留了引发针对流感病毒HA(血凝素)表面蛋白的抗体应答的能力。
在初次免疫前和初次给药后约3周从小鼠收集血清。汇集每组的血清样品，并通过酶联免疫吸附测定(ELISA)确定抗HA IgG抗体滴度。
使用重组HA蛋白作为捕获抗原进行ELISA。重组H3 HA(ΔTM)(A/新加坡/INFIMH-16-0019/2006)(H3N2)[Immune-Tech,New York,NY]用于编码SARS-CoV-2序列的M2SR载体病毒或M2SR病毒所施用的小鼠的血清ELISA分析。重组InfB HA1(B/普吉岛/3073/2013)[Immune-Tech,New York,NY]用于编码SARS-CoV-2序列的BM2SR载体病毒或BM2SR病毒所施用的小鼠的血清ELISA分析。
在4℃下用100μL在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中浓度为2g/mL的捕获抗原包被ELISA板过夜。在用含有0.1％聚山梨醇酯20(PBS-T)和1％来自冷水鱼皮的明胶的PBS封闭板后，将板用在PBS-T和1％来自冷水鱼皮的明胶中稀释的小鼠血清以一式两份孵育。在室温下孵育2小时后，将板用PBS-T洗涤6次，然后用缀合有辣根过氧化物酶的抗小鼠IgG第二抗体(KPL；在PBS-T和1％来自冷水鱼皮的明胶中1:2,000稀释)孵育。在用第二抗体孵育1小时后，将板用PBS-T洗涤6次，然后用1-STEPTM Ultra TMB-ELISA底物溶液(Thermo FisherScientific,Waltham,MA)显色。孵育10分钟后，加入4N硫酸终止反应。在450nm的波长下测量吸光度(OD450)。终点滴度是稀释度的倒数，该稀释度高于通过减去空白的平均值加上0.3OD450确定的截止值。
在编码SARS-CoV-2序列的M2SR和BM2SR病毒及其相应的载体病毒之间没有观察到血清抗HA IgG水平的差异，如表7所示。
表7：抗HA滴度水平
初免抗原 抗HA滴度
AM2SR-CovidS-1 >12,500
M2SR-Sing V5 >12,500
PBS/SPGNa <100
BM2SR-CovidS-1 >12,500
BM2SR-CA12 >12,500
PBS/SPGNa <100
本文引用的所有参考文献，包括出版物、专利申请和专利，均通过引用并入本文，其程度如同每篇参考文献均被单独且具体地指示为通过引入并入本文并在本文整体阐述。
在描述本发明的上下文中(尤其是在所附权利要求的上下文中)术语“一个”和“一种”和“该”和“至少一种”以及类似指代物的使用应被解释为涵盖了单数和复数两种，除非本文另有说明或与上下文明显矛盾。术语“至少一种”之后是一项或多项的列表(例如，“A和B中的至少一种”)的使用应理解为意指选自所列项(A或B)的一项或所列项(A和B)的两种或多种的任何组合，除非本文另有说明或与上下文明显矛盾。除非另有说明，否则术语“包含”、“具有”、“包括”和“含有”应被解释为开放式术语(即，意指“包括但不限于”)。除非在本文中另外指出，否则本文中数值范围的叙述仅旨在用作分别指代落入该范围内的每个单独值的简写方法，并且每个单独值都被并入说明书中，就好像它在本文中被单独叙述一样。除非本文另外指出或另外与上下文明显矛盾，否则本文描述的所有方法可以以任何适合的顺序执行。除非另外要求保护，否则本文提供的任何和所有示例或示例性语言(如，“诸如”)的使用仅旨在更好地阐明本发明，并且不对本发明的范围构成限制。说明书中的任何语言都不应解释为指示任何未要求保护的要素对于实施本发明必不可少。
本文描述了本发明的优选实施方案，包括发明人已知的用于实施本发明的最佳模式。在阅读前述说明书之后，那些优选实施方案的变型对于本领域普通技术人员而言将变得显而易见。本发明人期望熟练的技术人员适当地采用这样的变型，并且本发明人有意以不同于本文具体描述的方式来实践本发明。因此，本发明包括适用法律所允许的所附权利要求书中记载的主题的所有修改和等同物。此外，除非本文另外指出或另外与上下文明显矛盾，否则本发明涵盖上述要素在其所有可能的变型中的任何组合。
测序惯例基于涉及四种核苷酸的DNA：腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)和胸腺嘧啶(T)。当提到RNA或流感病毒时，T意指尿嘧啶(U)。
序列表
<110> 复尔健有限公司(FluGen, Inc.)
<120> 使用M2/BM2缺陷型流感病毒载体的疫苗
<130> 755022
<150> 63/054,700
<151> 2020-07-21
<160> 119
<170> PatentIn version 3.5
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<220>
<223> 合成序列
<400> 1
Met Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Ile Arg Asn Glu Trp Gly
1 5 10 15
Cys Arg Cys Asn Gly Ser Ser Asp Pro Leu Thr Ile Ala Ala Asn Ile
20 25 30
Ile Gly Ile Leu His Leu Thr Leu Trp Ile Leu Asp Arg Leu Phe Phe
35 40 45
Lys Cys Ile Tyr Arg Arg Phe Lys Tyr Gly Leu Lys Gly Gly Pro Ser
50 55 60
Thr Glu Gly Val Pro Lys Ser Met Arg Glu Glu Tyr Arg Lys Glu Gln
65 70 75 80
Gln Ser Ala Val Asp Ala Asp Asp Gly His Phe Val Ser Ile Glu Leu
85 90 95
Glu
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Met Leu Glu Pro Leu Gln Ile Leu Ser Ile Cys Ser Phe Ile Leu Ser
1 5 10 15
Ala Leu His Phe Met Ala Trp Thr Ile Gly His Leu Asn Gln Ile Arg
20 25 30
Arg Gly Val Asn Leu Lys Ile Gln Ile Arg Asn Pro Asn Lys Glu Ala
35 40 45
Ile Asn Arg Glu Val Ser Ile Leu Arg His Asn Tyr Gln Lys Glu Ile
50 55 60
Gln Ala Lys Glu Thr Met Lys Lys Ile Leu Ser Asp Asn Met Glu Val
65 70 75 80
Leu Gly Asp His Ile Val Val Glu Gly Leu Ser Thr Asp Glu Ile Ile
85 90 95
Lys Met Gly Glu Thr Val Leu Glu Val Glu Glu Leu Gln
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Cys Arg Cys Asn Gly Ser Ser Asp Pro
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Met Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Ile Arg Asn Glu Trp Gly
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Cys Arg Cys Asn Gly Ser Ser Asp Pro Ala Gly Ala Gly Asp Tyr Lys
20 25 30
Asp Asp Asp Asp Lys
35
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Cys Arg Cys Asn Gly Ser Ser Asp Pro Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly
20 25 30
Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Gly Phe
35 40 45
Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val
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Cys Arg Cys Asn Gly Ser Ser Asp Pro Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly
20 25 30
Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Gly Phe
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Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Ala Gly Ala Gly Asp Tyr Lys Asp
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Asp Asp Asp Lys
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Met Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Ile Arg Asn Glu Trp Gly
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Cys Arg Cys Asn Gly Ser Ser Asp Pro Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
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Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
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Pro Phe Glu Arg
50
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Cys Arg Cys Asn Gly Ser Ser Asp Pro Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
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Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
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Pro Phe Glu Arg Ala Gly Ala Gly Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
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Cys Arg Cys Asn Gly Ser Ser Asp Pro Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser
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Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val
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Cys Arg Cys Asn Gly Ser Ser Asp Pro Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser
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Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ala Gly Ala Gly Asp
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Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
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Met Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Ile Arg Asn Glu Trp Gly
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Cys Arg Cys Asn Gly Ser Ser Asp Pro Leu Pro Pro Leu Leu Thr Asp
20 25 30
Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Met Asn Asp Asn Leu
35 40 45
Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg
50 55 60
Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Trp Asn Trp Ser Pro Arg Arg
65 70 75 80
Ala Arg Ser Val Ala Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Ser Asn Trp Ala
85 90 95
Ala Leu Gln Ile Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly
100 105 110
Ile Gly Val Ser Trp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser
115 120 125
Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Trp Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr
130 135 140
Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Gly Trp Met
145 150 155 160
Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala
165 170 175
Ile Tyr Phe Trp Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp
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Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile
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<210> 12
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 12
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Cys Arg Cys Asn Gly Ser Ser Asp Pro Leu Pro Pro Leu Leu Thr Asp
20 25 30
Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Met Asn Asp Asn Leu
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Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg
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Ala Arg Ser Val Ala Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Ser Asn Trp Ala
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Ala Leu Gln Ile Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly
100 105 110
Ile Gly Val Ser Trp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser
115 120 125
Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Trp Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr
130 135 140
Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Gly Trp Met
145 150 155 160
Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala
165 170 175
Ile Tyr Phe Trp Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp
180 185 190
Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Gly Ala
195 200 205
Gly Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> 合成序列
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Cys Arg Cys Asn Gly Ser Ser Asp Pro Leu Pro Pro Leu Leu Thr Asp
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Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Gly Ala
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ggttcaagtg atcctctcac tattgccgca aatatcattg ggatcttgca cttgacattg 120
tggattcttg atcgtctttt tttcaaatgc atttaccgtc gctttaaata cggactgaaa 180
ggagggcctt ctacggaagg agtgccaaag tctatgaggg aagaatatcg aaaggaacag 240
cagagtgctg tggatgctga cgatggtcat tttgtcagca tagagctgga gtaa 294
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atggcttgga caatagggca tttgaatcaa ataagaagag gggtaaacct gaaaatacaa 120
ataaggaatc caaataagga ggcaataaac agagaggtgt caattctgag acacaattac 180
caaaaggaaa tccaagccaa agaaacaatg aagaaaatac tctctgacaa catggaagta 240
ttgggtgacc acatagtagt tgaagggctt tcaactgatg agataataaa aatgggtgaa 300
acagttttgg aggtggaaga attgcaataa 330
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ggctcaagcg accctctgac cattgctgcc aacatcattg gcatcctgca cctgaccctg 120
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<223> 合成序列
<400> 18
atgctggaac cactgcagat cctgagtatt tgctctttta tcctgagcgc actgcacttt 60
atggcctgga ctatcgggca cctgaaccag atcagaaggg gcgtgaacct gaagatccag 120
atcagaaacc caaacaagga ggccatcaac cgcgaagtga gcatcctgag acacaattac 180
cagaaggaga tccaggctaa agaaaccatg aagaaaatcc tgtctgacaa tatggaggtg 240
ctgggcgatc acatcgtggt ggaaggactg agcaccgacg aaatcatcaa aatgggcgag 300
actgtcctgg aagtggaaga actgcagtaa 330
<210> 19
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa可以是任意天然存在的氨基酸
<400> 19
Gly Asp Val Glu Xaa Asn Pro Gly Pro
1 5
<210> 20
<211> 5
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 20
ttatg 5
<210> 21
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 21
Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile
1 5 10 15
Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile
20 25
<210> 22
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 22
Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu
1 5 10 15
Phe Arg Lys
<210> 23
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 23
Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg
1 5 10
<210> 24
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 24
Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu
1 5 10 15
Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg
20 25
<210> 25
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 25
Ala Ala Leu Gln Ile Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn
1 5 10 15
Gly Ile Gly Val
20
<210> 26
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 26
Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg
1 5 10 15
Lys Arg Ile
<210> 27
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 27
Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe
1 5
<210> 28
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 28
Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn
1 5 10 15
Arg Lys Arg Ile
20
<210> 29
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 29
Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr
1 5 10 15
Gly Val
<210> 30
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 30
Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr
1 5 10 15
<210> 31
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 31
Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile
1 5 10 15
Ala Ile
<210> 32
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 32
Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr
1 5 10 15
Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser
20 25 30
Ile Ala Ile
35
<210> 33
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 33
Leu Pro Pro Leu Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala
1 5 10 15
Leu
<210> 34
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 34
Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu
1 5 10
<210> 35
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 35
Leu Pro Pro Leu Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala
1 5 10 15
Leu Leu
<210> 36
<211> 177
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 36
Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Asp
1 5 10 15
Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn Gly Thr
20 25 30
His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln Ile Ile Thr
35 40 45
Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly Ile
50 55 60
Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe
65 70 75 80
Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val
85 90 95
Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln
100 105 110
Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser
115 120 125
Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp
130 135 140
Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val
145 150 155 160
Met Val Thr Ile Met Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu
165 170 175
Lys
<210> 37
<211> 304
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 37
Ala Ser Ala Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln
1 5 10 15
Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile
20 25 30
Ser Ser Val Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala
35 40 45
Glu Val Gln Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln
50 55 60
Thr Tyr Val Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser
65 70 75 80
Ala Asn Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser
85 90 95
Lys Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
100 105 110
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro
115 120 125
Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Asp Gly
130 135 140
Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn Gly Thr His
145 150 155 160
Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln Ile Ile Thr Thr
165 170 175
Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly Ile Val
180 185 190
Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys
195 200 205
Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp
210 215 220
Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys
225 230 235 240
Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu
245 250 255
Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro
260 265 270
Trp Tyr Ile Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met
275 280 285
Val Thr Ile Met Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys
290 295 300
<210> 38
<211> 304
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 38
Ala Ser Ala Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln
1 5 10 15
Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile
20 25 30
Ser Ser Val Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Pro Pro Glu Ala
35 40 45
Glu Val Gln Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln
50 55 60
Thr Tyr Val Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser
65 70 75 80
Ala Asn Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser
85 90 95
Lys Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
100 105 110
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro
115 120 125
Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Asp Gly
130 135 140
Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn Gly Thr His
145 150 155 160
Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln Ile Ile Thr Thr
165 170 175
Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly Ile Val
180 185 190
Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys
195 200 205
Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp
210 215 220
Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys
225 230 235 240
Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu
245 250 255
Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro
260 265 270
Trp Tyr Ile Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met
275 280 285
Val Thr Ile Met Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys
290 295 300
<210> 39
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 39
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Ser Ala Leu Gly Lys
20 25 30
Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu Val
35 40 45
Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn Asp
50 55 60
Ile Leu Ser Arg Leu Asp Pro Pro Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp Arg
65 70 75 80
Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val Thr Gln Gln
85 90 95
Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu Ala Ala Thr
100 105 110
Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys Arg Val Asp Phe Cys
115 120 125
Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gln Ser Ala Pro His Gly
130 135 140
Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe
145 150 155 160
Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg
165 170 175
Glu Gly Val Phe Val Ser Asn Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg
180 185 190
Asn Phe Tyr Glu Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser
195 200 205
Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp
210 215 220
Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr
225 230 235 240
Phe Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly
245 250 255
Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn
260 265 270
Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu
275 280 285
Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Gly
290 295 300
Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met Leu Cys
305 310 315 320
Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys
325 330
<210> 40
<211> 471
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 40
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala
290 295 300
Pro Ala Ile Cys His Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val
305 310 315 320
Phe Val Ser Asn Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr
325 330 335
Glu Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys
340 345 350
Asp Val Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln
355 360 365
Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn
370 375 380
His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala
385 390 395 400
Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala
405 410 415
Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr
420 425 430
Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Gly Phe Ile Ala
435 440 445
Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met Leu Cys Cys Met Thr
450 455 460
Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys
465 470
<210> 41
<211> 406
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 41
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
20 25 30
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
35 40 45
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
50 55 60
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
65 70 75 80
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
85 90 95
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
100 105 110
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
115 120 125
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
130 135 140
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
145 150 155 160
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
165 170 175
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
180 185 190
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
195 200 205
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
210 215 220
Lys Ser Thr Tyr Val Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro
225 230 235 240
Ala Ile Cys His Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe
245 250 255
Val Ser Asn Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu
260 265 270
Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp
275 280 285
Val Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro
290 295 300
Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His
305 310 315 320
Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser
325 330 335
Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys
340 345 350
Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu
355 360 365
Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly
370 375 380
Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met Leu Cys Cys Met Thr Ser
385 390 395 400
Cys Cys Ser Cys Leu Lys
405
<210> 42
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 42
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro
20 25
<210> 43
<211> 1565
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 43
agcaaaagca gggtagataa tcactcactg agtgacatca aaatcatggc gtctcaaggc 60
accaaacgat cttacgaaca gatggagact gatggagaac gccagaatgc cactgaaatc 120
agagcatccg tcggaaaaat gattggtgga attggacgat tctacatcca aatgtgcacc 180
gaactcaaac tcagtgatta tgagggacgg ttgatccaaa acagcttaac aatagagaga 240
atggtgctct ctgcttttga cgaaaggaga aataaatacc ttgaagaaca tcccagtgcg 300
gggaaagatc ctaagaaaac tggaggacct atatacagga gagtaaacgg aaagtggatg 360
agagaactca tcctttatga caaagaagaa ttaaggcgaa tctggcgcca agctaataat 420
ggtgacgatg caacggctgg tctgactcac atgatgatct ggcattccaa tttgaatgat 480
gcaacttatc agaggacaag agctcttgtt cgcaccggaa tggatcccag gatgtgctct 540
ctgatgcaag gttcaactct ccctaggagg tctggagccg caggtgctgc agtcaaagga 600
gttggaacaa tggtgatgga attggtcaga atgatcaaac gtgggatcaa tgatcggaac 660
ttctggaggg gtgagaatgg acgaaaaaca agaattgctt atgaaagaat gtgcaacatt 720
ctcaaaggga aatttcaaac tgctgcacaa aaagcaatga tggatcaagt gagagagagc 780
cggaacccag ggaatgctga gttcgaagat ctcacttttc tagcacggtc tgcactcata 840
ttgagagggt cggttgctca caagtcctgc ctgcctgcct gtgtgtatgg acctgccgta 900
gccagtgggt acgactttga aaggaaggga tactctctag tcggaataga ccctttcaga 960
ctgcttcaaa acagccaagt gtacagccta atcagaccaa atgagaatcc agcacacaag 1020
agtcaactgg tgtggatggc atgccattct gccgcatttg aagatctaag agtattaagc 1080
ttcatcaaag ggacgaaggt gctcccaaga gggaagcttt ccactagagg agttcaaatt 1140
gcttccaatg aaaatatgga gactatggaa tcaagtacac ttgaactgag aagcaggtac 1200
tgggccataa ggaccagaag tggaggaaac accaatcaac agagggcatc tgcgggccaa 1260
atcagcatac aacctacgtt ctcagtacag agaaatctcc cttttgacag aacaaccatt 1320
atggcagcat tcaatgggaa tacagagggg agaacatctg acatgaggac cgaaatcata 1380
aggatgatgg aaagtgcaag accagaagat gtgtctttcc aggggcgggg agtcttcgag 1440
ctctcggacg aaaaggcagc gagcccgatc gtgccttcct ttgacatgag taatgaagga 1500
tcttatttct tcggagacaa tgcagaggag tacgacaatt aaagaaaaat acccttgttt 1560
ctact 1565
<210> 44
<211> 2341
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 44
agcaaaagca ggcaaaccat ttgaatggat gtcaatccga ccttactttt cttaaaagtg 60
ccagcacaaa atgctataag cacaactttc ccttatactg gagatcctcc ttacagccat 120
gggacaggaa caggatacac cttggatact gtcaacagga cacatcagta ctcagaaaag 180
ggaagatgga caacaaacac cgaaactgga gcaccgcaac tcaacccgat tgatgggcca 240
ctgccagaag acaatgaacc aagtggttat gcccaaacag attgtgtatt ggaggcgatg 300
gctttccttg aggaatccca tcctggtatt tttgaaaact cgtgtattga aacgatggag 360
gttgttcagc aaacacgagt agacaagctg acacaaggcc gacagaccta tgactggact 420
ctaaatagaa accaacctgc tgcaacagca ttggccaaca caatagaagt gttcagatca 480
aatggcctca cggccaatga gtctggaagg ctcatagact tccttaagga tgtaatggag 540
tcaatgaaca aagaagaaat gtggatcaca actcattttc agagaaagag acgggtgaga 600
gacaatatga ctaagaaaat gataacacag agaacaatgg gtaaaaagaa gcagagattg 660
aacaaaagga gttatctaat tagagcattg accctgaaca caatgaccaa agatgctgag 720
agagggaagc taaaacggag agcaattgca accccaggga tgcaaataag ggggtttgta 780
tactttgttg agacactggc aaggagtata tgtgagaaac ttgaacaatc agggttgcca 840
gttggaggca atgagaagaa agcaaagttg gcaaatgttg taaggaagat gatgaccaat 900
tctcaggaca ccgaactttc tttcaccatc actggagata acaccaaatg gaacgaaaat 960
cagaatcctc ggatgttttt ggccatgatc acatatatga ccagaaatca gcccgaatgg 1020
ttcagaaatg ttctaagtat tgctccaata atgttctcaa acaaaatggc gagactggga 1080
aaagggtata tgtttgagag caagagtatg aaacttagaa ctcaaatacc tgcagaaatg 1140
ctagcaagca tcgatttgaa atatttcaat gattcaacaa gaaagaagat tgaaaaaatc 1200
cgaccgctct taatagaggg gactgcatca ttgagccctg gaatgatgat gggcatgttc 1260
aatatgttaa gcactgtatt aggcgtctcc atcctgaatc ttggacaaaa gagatacacc 1320
aagactactt actggtggga tggtcttcaa tcctctgacg attttgctct gattgtgaat 1380
gcacccaatc atgaagggat tcaagccgga gtcaacaggt tttatcgaac ctgtaagcta 1440
cttggaatca atatgagcaa gaaaaagtct tacataaaca gaacaggtac atttgaattc 1500
acaagttttt tctatcgtta tgggtttgtt gccaatttca gcatggagct tcccagtttt 1560
ggggtgtctg ggatcaacga gtcagcggac atgagtattg gagttactgt catcaaaaac 1620
aatatgataa acaatgatct tggtccagca acagctcaaa tggcccttca gttgttcatc 1680
aaagattaca ggtacacgta ccgatgccat ataggtgaca cacaaataca aacccgaaga 1740
tcatttgaaa taaagaaact gtgggagcaa acccgttcca aagctggact gctagtctcc 1800
gacggaggcc caaatttata caacattaga aatctccaca ttcctgaagt ctgcctaaaa 1860
tgggaattga tggatgagga ttaccagggg cgtttatgca acccactgaa cccatttgtc 1920
agccataaag aaattgaatc aatgaacaat gcagtgatga tgccagcaca tggtccagcc 1980
aaaaacatgg agtatgatgc tgttgcaaca acacactcct ggatccccaa aagaaatcga 2040
tccatcttga atacaagtca aagaggagta cttgaggatg aacaaatgta ccaaaggtgc 2100
tgcaatttat ttgaaaaatt cttccccagc agttcataca gaagaccagt cgggatatcc 2160
agtatggtgg aggctatggt ttccagagcc cgaattgatg cacggattga tttcgaatct 2220
ggaaggataa agaaagaaga gttcactgag atcatgaaga tctgttccac cattgaagag 2280
ctcagacggc aaaaatagtg aatttagctt gtccttcatg aaaaaatgcc ttgtttctac 2340
t 2341
<210> 45
<211> 1565
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 45
agcaaaagca gggtagataa tcactcactg agtgacatca aaatcatggc gtctcaaggc 60
accaaacgat cttacgaaca gatggagact gatggagaac gccagaatgc cactgaaatc 120
agagcatccg tcggaaaaat gattggtgga attggacgat tctacatcca aatgtgcacc 180
gaactcaaac tcagtgatta tgagggacgg ttgatccaaa acagcttaac aatagagaga 240
atggtgctct ctgcttttga cgaaaggaga aataaatacc ttgaagaaca tcccagtgcg 300
gggaaagatc ctaagaaaac tggaggacct atatacagga gagtaaacgg aaagtggatg 360
agagaactca tcctttatga caaagaagaa ttaaggcgaa tctggcgcca agctaataat 420
ggtgacgatg caacggctgg tctgactcac atgatgatct ggcattccaa tttgaatgat 480
gcaacttatc agaggacaag agctcttgtt cgcaccggaa tggatcccag gatgtgctct 540
ctgatgcaag gttcaactct ccctaggagg tctggagccg caggtgctgc agtcaaagga 600
gttggaacaa tggtgatgga attggtcaga atgatcaaac gtgggatcaa tgatcggaac 660
ttctggaggg gtgagaatgg acgaaaaaca agaattgctt atgaaagaat gtgcaacatt 720
ctcaaaggga aatttcaaac tgctgcacaa aaagcaatga tggatcaagt gagagagagc 780
cggaacccag ggaatgctga gttcgaagat ctcacttttc tagcacggtc tgcactcata 840
ttgagagggt cggttgctca caagtcctgc ctgcctgcct gtgtgtatgg acctgccgta 900
gccagtgggt acgactttga aagggaggga tactctctag tcggaataga ccctttcaga 960
ctgcttcaaa acagccgagt gtacagccta atcagaccaa atgagaatcc agcacacaag 1020
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ttcatcaaag ggacgaaggt gctcccaaga gggaagcttt ccactagagg agttcaaatt 1140
gcttccaatg aaaatatgga gactatggaa tcaagtacac ttgaactgag aagcaggtac 1200
tgggccataa ggaccagaag tggaggaaac accaatcaac agagggcatc tgcgggccaa 1260
atcagcatac aacctacgtt ctcagtacag agaaatctcc cttttgacag aacaaccatt 1320
atggcagcat tcaatgggaa tacagagggg agaacatctg acatgaggac cgaaatcata 1380
aggatgatgg aaagtgcaag accagaagat gtgtctttcc aggggcgggg agtcttcgag 1440
ctctcggacg aaaaggcagc gagcccgatc gtgccttcct ttgacatgag taatgaagga 1500
tcttatttct tcggagacaa tgcagaggag tacgacaatt aaagaaaaat acccttgttt 1560
ctact 1565
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<211> 2341
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
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aatatgataa acaatgatct tggtccagca acagctcaaa tggcccttca gttgttcatc 1680
aaagattaca ggtacacgta ccgatgccat ataggtgaca cacaaataca aacccgaaga 1740
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t 2341
<210> 47
<211> 2341
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 47
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<223> 合成序列
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Gly Glu Arg Gln Asn Ala Thr Glu Ile Arg Ala Ser Val Gly Lys Met
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Ile Gly Gly Ile Gly Arg Phe Tyr Ile Gln Met Cys Thr Glu Leu Lys
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Leu Ser Asp Tyr Glu Gly Arg Leu Ile Gln Asn Ser Leu Thr Ile Glu
50 55 60
Arg Met Val Leu Ser Ala Phe Asp Glu Arg Arg Asn Lys Tyr Leu Glu
65 70 75 80
Glu His Pro Ser Ala Gly Lys Asp Pro Lys Lys Thr Gly Gly Pro Ile
85 90 95
Tyr Arg Arg Val Asn Gly Lys Trp Met Arg Glu Leu Ile Leu Tyr Asp
100 105 110
Lys Glu Glu Leu Arg Arg Ile Trp Arg Gln Ala Asn Asn Gly Asp Asp
115 120 125
Ala Thr Ala Gly Leu Thr His Met Met Ile Trp His Ser Asn Leu Asn
130 135 140
Asp Ala Thr Tyr Gln Arg Thr Arg Ala Leu Val Arg Thr Gly Met Asp
145 150 155 160
Pro Arg Met Cys Ser Leu Met Gln Gly Ser Thr Leu Pro Arg Arg Ser
165 170 175
Gly Ala Ala Gly Ala Ala Val Lys Gly Val Gly Thr Met Val Met Glu
180 185 190
Leu Val Arg Met Ile Lys Arg Gly Ile Asn Asp Arg Asn Phe Trp Arg
195 200 205
Gly Glu Asn Gly Arg Lys Thr Arg Ile Ala Tyr Glu Arg Met Cys Asn
210 215 220
Ile Leu Lys Gly Lys Phe Gln Thr Ala Ala Gln Lys Ala Met Met Asp
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Gln Val Arg Glu Ser Arg Asn Pro Gly Asn Ala Glu Phe Glu Asp Leu
245 250 255
Thr Phe Leu Ala Arg Ser Ala Leu Ile Leu Arg Gly Ser Val Ala His
260 265 270
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275 280 285
Tyr Asp Phe Glu Arg Lys Gly Tyr Ser Leu Val Gly Ile Asp Pro Phe
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Asn Pro Ala His Lys Ser Gln Leu Val Trp Met Ala Cys His Ser Ala
325 330 335
Ala Phe Glu Asp Leu Arg Val Leu Ser Phe Ile Lys Gly Thr Lys Val
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Leu Pro Arg Gly Lys Leu Ser Thr Arg Gly Val Gln Ile Ala Ser Asn
355 360 365
Glu Asn Met Glu Thr Met Glu Ser Ser Thr Leu Glu Leu Arg Ser Arg
370 375 380
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Ala Ser Ala Gly Gln Ile Ser Ile Gln Pro Thr Phe Ser Val Gln Arg
405 410 415
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Thr Glu Gly Arg Thr Ser Asp Met Arg Thr Glu Ile Ile Arg Met Met
435 440 445
Glu Ser Ala Arg Pro Glu Asp Val Ser Phe Gln Gly Arg Gly Val Phe
450 455 460
Glu Leu Ser Asp Glu Lys Ala Ala Ser Pro Ile Val Pro Ser Phe Asp
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Met Ser Asn Glu Gly Ser Tyr Phe Phe Gly Asp Asn Ala Glu Glu Tyr
485 490 495
Asp Asn
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<211> 757
<212> PRT
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<220>
<223> 合成序列
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Gln Leu Asn Pro Ile Asp Gly Pro Leu Pro Glu Asp Asn Glu Pro Ser
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Gly Tyr Ala Gln Thr Asp Cys Val Leu Glu Ala Met Ala Phe Leu Glu
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Glu Ser His Pro Gly Ile Phe Glu Asn Ser Cys Ile Glu Thr Met Glu
100 105 110
Val Val Gln Gln Thr Arg Val Asp Lys Leu Thr Gln Gly Arg Gln Thr
115 120 125
Tyr Asp Trp Thr Leu Asn Arg Asn Gln Pro Ala Ala Thr Ala Leu Ala
130 135 140
Asn Thr Ile Glu Val Phe Arg Ser Asn Gly Leu Thr Ala Asn Glu Ser
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Gly Arg Leu Ile Asp Phe Leu Lys Asp Val Met Glu Ser Met Asn Lys
165 170 175
Glu Glu Met Trp Ile Thr Thr His Phe Gln Arg Lys Arg Arg Val Arg
180 185 190
Asp Asn Met Thr Lys Lys Met Ile Thr Gln Arg Thr Met Gly Lys Lys
195 200 205
Lys Gln Arg Leu Asn Lys Arg Ser Tyr Leu Ile Arg Ala Leu Thr Leu
210 215 220
Asn Thr Met Thr Lys Asp Ala Glu Arg Gly Lys Leu Lys Arg Arg Ala
225 230 235 240
Ile Ala Thr Pro Gly Met Gln Ile Arg Gly Phe Val Tyr Phe Val Glu
245 250 255
Thr Leu Ala Arg Ser Ile Cys Glu Lys Leu Glu Gln Ser Gly Leu Pro
260 265 270
Val Gly Gly Asn Glu Lys Lys Ala Lys Leu Ala Asn Val Val Arg Lys
275 280 285
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Asp Asn Thr Lys Trp Asn Glu Asn Gln Asn Pro Arg Met Phe Leu Ala
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Met Ile Thr Tyr Met Thr Arg Asn Gln Pro Glu Trp Phe Arg Asn Val
325 330 335
Leu Ser Ile Ala Pro Ile Met Phe Ser Asn Lys Met Ala Arg Leu Gly
340 345 350
Lys Gly Tyr Met Phe Glu Ser Lys Ser Met Lys Leu Arg Thr Gln Ile
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405 410 415
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420 425 430
Lys Thr Thr Tyr Trp Trp Asp Gly Leu Gln Ser Ser Asp Asp Phe Ala
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Leu Ile Val Asn Ala Pro Asn His Glu Gly Ile Gln Ala Gly Val Asn
450 455 460
Arg Phe Tyr Arg Thr Cys Lys Leu Leu Gly Ile Asn Met Ser Lys Lys
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485 490 495
Tyr Arg Tyr Gly Phe Val Ala Asn Phe Ser Met Glu Leu Pro Ser Phe
500 505 510
Gly Val Ser Gly Ile Asn Glu Ser Ala Asp Met Ser Ile Gly Val Thr
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580 585 590
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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450 455 460
Glu Leu Ser Asp Glu Lys Ala Ala Ser Pro Ile Val Pro Ser Phe Asp
465 470 475 480
Met Ser Asn Glu Gly Ser Tyr Phe Phe Gly Asp Asn Ala Glu Glu Tyr
485 490 495
Asp Asn
<210> 51
<211> 757
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 51
Met Asp Val Asn Pro Thr Leu Leu Phe Leu Lys Val Pro Ala Gln Asn
1 5 10 15
Ala Ile Ser Thr Thr Phe Pro Tyr Thr Gly Asp Pro Pro Tyr Ser His
20 25 30
Gly Thr Gly Thr Gly Tyr Thr Leu Asp Thr Val Asn Arg Thr His Gln
35 40 45
Tyr Ser Glu Lys Gly Arg Trp Thr Thr Asn Thr Glu Thr Gly Ala Pro
50 55 60
Gln Leu Asn Pro Ile Asp Gly Pro Leu Pro Glu Asp Asn Glu Pro Ser
65 70 75 80
Gly Tyr Ala Gln Thr Asp Cys Val Leu Glu Ala Met Ala Phe Leu Glu
85 90 95
Glu Ser His Pro Gly Ile Phe Glu Asn Ser Cys Ile Glu Thr Met Glu
100 105 110
Val Val Gln Gln Thr Arg Val Asp Lys Leu Thr Gln Gly Arg Gln Thr
115 120 125
Tyr Asp Trp Thr Leu Asn Arg Asn Gln Pro Ala Ala Thr Ala Leu Ala
130 135 140
Asn Thr Ile Glu Val Phe Arg Ser Asn Gly Leu Thr Ala Asn Glu Ser
145 150 155 160
Gly Arg Leu Ile Asp Phe Leu Lys Asp Val Met Glu Ser Met Asn Lys
165 170 175
Glu Glu Met Trp Ile Thr Thr His Phe Gln Arg Lys Arg Arg Val Arg
180 185 190
Asp Asn Met Thr Lys Lys Met Ile Thr Gln Arg Thr Met Gly Lys Lys
195 200 205
Lys Gln Arg Leu Asn Lys Arg Ser Tyr Leu Ile Arg Ala Leu Thr Leu
210 215 220
Asn Thr Met Thr Lys Asp Ala Glu Arg Gly Lys Leu Lys Arg Arg Ala
225 230 235 240
Ile Ala Thr Pro Gly Met Gln Ile Arg Gly Phe Val Tyr Phe Val Glu
245 250 255
Thr Leu Ala Arg Ser Ile Cys Glu Lys Leu Glu Gln Ser Gly Leu Pro
260 265 270
Val Gly Gly Asn Glu Lys Lys Ala Lys Leu Ala Asn Val Val Arg Lys
275 280 285
Met Met Thr Asn Ser Gln Asp Thr Glu Leu Ser Phe Thr Ile Thr Gly
290 295 300
Asp Asn Thr Lys Trp Asn Glu Asn Gln Asn Pro Arg Met Phe Leu Ala
305 310 315 320
Met Ile Thr Tyr Met Thr Arg Asn Gln Pro Glu Trp Phe Arg Asn Val
325 330 335
Leu Ser Ile Ala Pro Ile Met Phe Ser Asn Lys Met Ala Arg Leu Gly
340 345 350
Lys Gly Tyr Met Phe Glu Ser Lys Ser Met Lys Leu Arg Thr Gln Ile
355 360 365
Pro Ala Glu Met Leu Ala Ser Ile Asp Leu Lys Tyr Phe Asn Asp Ser
370 375 380
Thr Arg Lys Lys Ile Glu Lys Ile Arg Pro Leu Leu Ile Glu Gly Thr
385 390 395 400
Ala Ser Leu Ser Pro Gly Met Met Met Gly Met Phe Asn Met Leu Ser
405 410 415
Thr Val Leu Gly Val Ser Ile Leu Asn Leu Gly Gln Lys Arg Tyr Thr
420 425 430
Lys Thr Thr Tyr Trp Trp Asp Gly Leu Gln Ser Ser Asp Asp Phe Ala
435 440 445
Leu Ile Val Asn Ala Pro Asn His Glu Gly Ile Gln Ala Gly Val Asp
450 455 460
Arg Phe Tyr Arg Thr Cys Lys Leu Leu Gly Ile Asn Met Ser Lys Lys
465 470 475 480
Lys Ser Tyr Ile Asn Arg Thr Gly Thr Phe Glu Phe Thr Ser Phe Phe
485 490 495
Tyr Arg Tyr Gly Phe Val Ala Asn Phe Ser Met Glu Leu Pro Ser Phe
500 505 510
Gly Val Ser Gly Ile Asn Glu Ser Ala Asp Met Ser Ile Gly Val Thr
515 520 525
Val Ile Lys Asn Asn Met Ile Asn Asn Asp Leu Gly Pro Ala Thr Ala
530 535 540
Gln Met Ala Leu Gln Leu Phe Ile Lys Asp Tyr Arg Tyr Thr Tyr Arg
545 550 555 560
Cys His Ile Gly Asp Thr Gln Ile Gln Thr Arg Arg Ser Phe Glu Ile
565 570 575
Lys Lys Leu Trp Glu Gln Thr Arg Ser Lys Ala Gly Leu Leu Val Ser
580 585 590
Asp Gly Gly Pro Asn Leu Tyr Asn Ile Arg Asn Leu His Ile Ser Glu
595 600 605
Val Cys Leu Lys Trp Glu Leu Met Asp Glu Asp Tyr Gln Gly Arg Leu
610 615 620
Cys Asn Pro Leu Asn Pro Phe Val Ser His Lys Glu Ile Glu Ser Met
625 630 635 640
Asn Asn Ala Val Met Met Pro Ala His Gly Pro Ala Lys Asn Met Glu
645 650 655
Tyr Asp Ala Val Ala Thr Thr His Ser Trp Ile Pro Lys Arg Asn Arg
660 665 670
Ser Ile Leu Asn Thr Ser Gln Arg Gly Val Leu Glu Asp Glu Gln Met
675 680 685
Tyr Gln Arg Cys Cys Asn Leu Phe Glu Lys Phe Phe Pro Ser Ser Ser
690 695 700
Tyr Arg Arg Pro Val Gly Ile Ser Ser Met Val Glu Ala Met Val Ser
705 710 715 720
Arg Ala Arg Ile Asp Ala Arg Ile Asp Phe Glu Ser Gly Arg Ile Lys
725 730 735
Lys Glu Glu Phe Thr Glu Ile Met Lys Ile Cys Ser Thr Ile Glu Glu
740 745 750
Leu Arg Arg Gln Lys
755
<210> 52
<211> 759
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 52
Met Glu Arg Ile Lys Glu Leu Arg Asn Leu Met Ser Gln Ser Arg Thr
1 5 10 15
Arg Glu Ile Leu Thr Lys Thr Thr Val Asp His Met Ala Ile Ile Lys
20 25 30
Lys Tyr Thr Ser Gly Arg Gln Glu Lys Asn Pro Ala Leu Arg Met Lys
35 40 45
Trp Met Met Ala Met Lys Tyr Pro Ile Thr Ala Asp Lys Arg Ile Thr
50 55 60
Glu Met Ile Pro Glu Arg Asn Glu Gln Gly Gln Thr Leu Trp Ser Lys
65 70 75 80
Met Asn Asp Ala Gly Ser Asp Arg Val Met Val Ser Pro Leu Ala Val
85 90 95
Thr Trp Trp Asn Arg Asn Gly Pro Ile Thr Asn Thr Val His Tyr Pro
100 105 110
Lys Ile Tyr Lys Thr Tyr Phe Glu Arg Val Glu Arg Leu Lys His Gly
115 120 125
Thr Phe Gly Pro Val His Phe Arg Asn Gln Val Lys Ile Arg Arg Arg
130 135 140
Val Asp Ile Asn Pro Gly His Ala Asp Leu Ser Ala Lys Glu Ala Gln
145 150 155 160
Asp Val Ile Met Glu Val Val Phe Pro Asn Glu Val Gly Ala Arg Ile
165 170 175
Leu Thr Ser Glu Ser Gln Leu Thr Ile Thr Lys Glu Lys Lys Glu Glu
180 185 190
Leu Gln Asp Cys Lys Ile Ser Pro Leu Met Val Ala Tyr Met Leu Glu
195 200 205
Arg Glu Leu Val Arg Lys Thr Arg Phe Leu Pro Val Ala Gly Gly Thr
210 215 220
Ser Ser Val Tyr Ile Glu Val Leu His Leu Thr Gln Gly Thr Cys Trp
225 230 235 240
Glu Gln Met Tyr Thr Pro Gly Gly Glu Val Arg Asn Asp Asp Val Asp
245 250 255
Gln Ser Leu Ile Ile Ala Ala Arg Asn Ile Val Arg Arg Ala Ala Val
260 265 270
Ser Ala Asp Pro Leu Ala Ser Leu Leu Glu Met Cys His Ser Thr Gln
275 280 285
Ile Gly Gly Ile Arg Met Val Asp Ile Leu Arg Gln Asn Pro Thr Glu
290 295 300
Glu Gln Ala Val Asp Ile Cys Lys Ala Ala Met Gly Leu Arg Ile Ser
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Phe Gly Gly Phe Thr Phe Lys Arg Thr Ser Gly Ser
325 330 335
Ser Val Lys Arg Glu Glu Glu Val Leu Thr Gly Asn Leu Gln Thr Leu
340 345 350
Lys Ile Arg Val His Glu Gly Tyr Glu Glu Phe Thr Met Val Gly Arg
355 360 365
Arg Ala Thr Ala Ile Leu Arg Lys Ala Thr Arg Arg Leu Ile Gln Leu
370 375 380
Ile Val Ser Gly Arg Asp Glu Gln Ser Ile Ala Glu Ala Ile Ile Val
385 390 395 400
Ala Met Val Phe Ser Gln Glu Asp Cys Met Ile Lys Ala Val Arg Gly
405 410 415
Asp Leu Asn Phe Val Asn Arg Ala Asn Gln Arg Leu Asn Pro Met His
420 425 430
Gln Leu Leu Arg His Phe Gln Lys Asp Ala Lys Val Leu Phe Gln Asn
435 440 445
Trp Gly Val Glu Pro Ile Asp Asn Val Met Gly Met Ile Gly Ile Leu
450 455 460
Pro Asp Ile Thr Pro Ser Ile Glu Met Ser Met Arg Gly Val Arg Ile
465 470 475 480
Ser Lys Met Gly Val Asp Glu Tyr Ser Ser Thr Glu Arg Val Val Val
485 490 495
Ser Ile Asp Arg Phe Leu Arg Val Arg Asp Gln Arg Gly Asn Val Leu
500 505 510
Leu Ser Pro Glu Glu Val Ser Glu Thr Gln Gly Thr Glu Lys Leu Thr
515 520 525
Val Thr Tyr Ser Ser Ser Met Met Trp Glu Ile Asn Gly Pro Glu Ser
530 535 540
Val Leu Val Asn Thr Tyr Gln Trp Ile Ile Arg Asn Trp Glu Thr Val
545 550 555 560
Lys Ile Gln Trp Ser Gln Asn Pro Thr Met Leu Tyr Asn Lys Met Glu
565 570 575
Phe Glu Pro Phe Gln Ser Leu Val Pro Lys Ala Ile Arg Gly Gln Tyr
580 585 590
Ser Gly Phe Val Arg Thr Leu Phe Gln Gln Met Arg Asp Val Leu Gly
595 600 605
Thr Phe Asp Thr Ala Gln Ile Ile Lys Leu Leu Pro Phe Ala Ala Ala
610 615 620
Pro Pro Lys Gln Ser Arg Met Gln Phe Ser Ser Phe Thr Val Asn Val
625 630 635 640
Arg Gly Ser Gly Met Arg Ile Leu Val Arg Gly Asn Ser Pro Val Phe
645 650 655
Asn Tyr Asn Lys Ala Thr Lys Arg Leu Thr Val Leu Gly Lys Asp Ala
660 665 670
Gly Thr Leu Thr Glu Asp Pro Asp Glu Gly Thr Ala Gly Val Glu Ser
675 680 685
Ala Val Leu Arg Gly Phe Leu Ile Leu Gly Lys Glu Asp Lys Arg Tyr
690 695 700
Gly Pro Ala Leu Ser Ile Asn Glu Leu Ser Asn Leu Ala Lys Gly Glu
705 710 715 720
Lys Ala Asn Val Leu Ile Gly Gln Gly Asp Val Val Leu Val Met Lys
725 730 735
Arg Lys Arg Asp Ser Ser Ile Leu Thr Asp Ser Gln Thr Ala Thr Lys
740 745 750
Arg Ile Arg Met Ala Ile Asn
755
<210> 53
<211> 976
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 53
agcaaaagca ggtagatatt gaaagatgag tcttctaacc gaggtcgaaa cgtacgtact 60
ctctatcatc ccgtcaggcc ccctcaaagc cgagatcgca cagagacttg aagatgtctt 120
tgcagggaag aacaccgatc ttgaggttct catggaatgg ctaaagacaa gaccaatcct 180
gtcacctctg actaagggga ttttaggatt tgtgttcacg ctcaccgtgc ccagtgagcg 240
aggactgcag cgtagacgct ttgtccaaaa tgcccttaat gggaacgggg atccaaataa 300
catggacaaa gcagttaaac tgtataggaa gctcaagagg gagataacat tccatggggc 360
caaagaaatc tcactcagtt attctgctgg tgcacttgcc agttgtatgg gcctcatata 420
caacaggatg ggggctgtga ccactgaagt ggcatttggc ctggtatgtg caacctgtga 480
acagattgct gactcccagc atcggtctca taggcaaatg gtgacaacaa ccaatccact 540
aatcagacat gagaacagaa tggttttagc cagcactaca gctaaggcta tggagcaaat 600
ggctggatcg agtgagcaag cagcagaggc catggaggtt gctagtcagg ctagacaaat 660
ggtgcaagcg atgagaacca ttgggactca tcctagctcc agtgctggtc tgaaaaatga 720
tcttcttgaa aatttgcagg cctatcagaa acgaatgggg gtgcagatgc aacggttcaa 780
gtgattaata ggatcgtctt tttttcaaat gcatttaccg tcgctttaaa tacggactga 840
aaggagggcc ttctacggaa ggagtgccaa agtctatgag ggaagaatat cgaaaggaac 900
agcagagtgc tgtggatgct gacgatggtc attttgtcag catagagctg gagtaaaaaa 960
ctaccttgtt tctact 976
<210> 54
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 54
Met Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Ile Arg Asn Glu Trp Gly
1 5 10 15
Cys Arg Cys Asn Gly Ser Ser Asp
20
<210> 55
<211> 1069
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 55
agcaaaagca ggtagatatt gaaagatgag tcttctaacc gaggtcgaaa cgtacgtact 60
ctctatcatc ccgtcaggcc ccctcaaagc cgagatcgca cagagacttg aagatgtctt 120
tgcagggaag aacaccgatc ttgaggttct catggaatgg ctaaagacaa gaccaatcct 180
gtcacctctg actaagggga ttttaggatt tgtgttcacg ctcaccgtgc ccagtgagcg 240
aggactgcag cgtagacgct ttgtccaaaa tgcccttaat gggaacgggg atccaaataa 300
catggacaaa gcagctaaac tgtataggaa gctcaagagg gagataacat tccatggggc 360
caaagaaatc tcactcagtt attctgctgg tgcacttgcc agttgtatgg gcctcatata 420
caacaggatg ggggctgtga ccactgaagt ggcatttggc ctggtatgtg caacctgtga 480
acagattgct gactcccagc atcggtctca taggcaaatg gtgacaacaa ccaatccact 540
aatcagacat gagaacagaa tggttttagc cagcactaca gctaaggcta tggagcaaat 600
ggctggatcg agtgagcaag cagcagaggc catggaggtt gctagtcagg ctagacaaat 660
ggtgcaagcg atgagaacca ttgggactca tcctagctcc agtgctggtc tgaaaaatga 720
tcttcttgaa aatttgcagg cctatcagaa acgaatgggg gtgcagatgc aacggttcaa 780
gtgatcctta ttctgtccta tataattccg catcattttc cacttttaag tgttatggag 840
tggcaggtgc aggtgattac aaggatgacg acgataagta ataggatcgt ctttttttca 900
aatgcattta ccgtcgcttt aaatacggac tgaaaggagg gccttctacg gaaggagtgc 960
caaagtctat gagggaagaa tatcgaaagg aacagcagag tgctgtggat gctgacgatg 1020
gtcattttgt cagcatagag ctggagtaaa aaactacctt gtttctact 1069
<210> 56
<211> 2341
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 56
agcaaaagca ggtcaattat attcaatatg gaaagaataa aagaactacg aaatctaatg 60
tcgcagtctc gcacccgcga gatactcaca aaaaccaccg tggaccatat ggccataatc 120
aagaagtaca catcaggaag acaggagaag aacccagcac ttaggatgaa atggatgatg 180
gcaatgaaat atccaattac agcagacaag aggataacgg aaatgattcc tgagagaaat 240
gagcaaggac aaactttatg gagtaaaatg aatgatgccg gatcagaccg agtgatggta 300
tcacctctgg ctgtgacatg gtggaatagg aatggaccaa taacaaatac agttcattat 360
ccaaaaatct acaaaactta ttttgaaaga gtcgaaaggc taaagcatgg aacctttggc 420
cctgtccatt ttagaaacca agtcaaaata cgtcggagag ttgacataaa tcctggtcat 480
gcagatctca gtgccaagga ggcacaggat gtaatcatgg aagttgtttt ccctaacgaa 540
gtgggagcca ggatactaac atcggaatcg caactaacga taaccaaaga gaagaaagaa 600
gaactccagg attgcaaaat ttctcctttg atggttgcat acatgttgga gagagaactg 660
gtccgcaaaa cgagattcct cccagtggct ggtggaacaa gcagtgtgta cattgaagtg 720
ttgcatttga ctcaaggaac atgctgggaa cagatgtata ctccaggagg ggaagtgagg 780
aatgatgatg ttgatcaaag cttgattatt gctgctagga acatagtgag aagagctgca 840
gtatcagcag atccactagc atctttattg gagatgtgcc acagcacaca gattggtgga 900
attaggatgg tagacatcct taggcagaac ccaacagaag agcaagccgt ggatatatgc 960
aaggctgcaa tgggactgag aattagctca tccttcagtt ttggtggatt cacatttaag 1020
agaacaagcg gatcatcagt caagagagag gaagaggtgc ttacgggcaa tcttcaaaca 1080
ttgaagataa gagtgcatga gggatatgaa gagttcacaa tggttgggag aagagcaaca 1140
gccatactca gaaaagcaac caggagattg attcagctga tagtgagtgg gagagacgaa 1200
cagtcgattg ccgaagcaat aattgtggcc atggtatttt cacaagagga ttgtatgata 1260
aaagcagtca gaggtgatct gaatttcgtc aatagggcga atcaacgatt gaatcctatg 1320
catcaacttt taagacattt tcagaaggat gcgaaagtgc tttttcaaaa ttggggagtt 1380
gaacctatcg acaatgtgat gggaatgatt gggatattgc ccgacatgac tccaagcatc 1440
gagatgtcaa tgagaggagt gagaatcagc aaaatgggtg tagatgagta ctccagcacg 1500
gagagggtag tggtgagcat tgaccgtttt ttgagagtcc gggaccaacg aggaaatgta 1560
ctactgtctc ccgaggaggt cagtgaaaca cagggaacag agaaactgac aataacttac 1620
tcatcgtcaa tgatgtggga gattaatggt cctgaatcag tgttggtcaa tacctatcaa 1680
tggatcatca gaaactggga aactgttaaa attcagtggt cccagaaccc tacaatgcta 1740
tacaataaaa tggaatttga accatttcag tctttagtac ctaaggccat tagaggccaa 1800
tacagtgggt ttgtaagaac tctgttccaa caaatgaggg atgtgcttgg gacatttgat 1860
accgcacaga taataaaact tcttcccttc gcagccgctc caccaaagca aagtagaatg 1920
cagttctcct catttactgt gaatgtgagg ggatcaggaa tgagaatact tgtaaggggc 1980
aattctcctg tattcaacta taacaaggcc acgaagagac tcacagttct cggaaaggat 2040
gctggcactt taactgaaga cccagatgaa ggcacagctg gagtggagtc cgctgttctg 2100
aggggattcc tcattctggg caaagaagac aagagatatg ggccagcact aagcatcaat 2160
gaactgagca accttgcgaa aggagagaag gctaatgtgc taattgggca aggagacgtg 2220
gtgttggtaa tgaaacggaa acgggactct agcatactta ctgacagcca gacagcgacc 2280
aaaagaattc ggatggccat caattagtgt cgaatagttt aaaaacgacc ttgtttctac 2340
t 2341
<210> 57
<211> 759
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 57
Met Glu Arg Ile Lys Glu Leu Arg Asn Leu Met Ser Gln Ser Arg Thr
1 5 10 15
Arg Glu Ile Leu Thr Lys Thr Thr Val Asp His Met Ala Ile Ile Lys
20 25 30
Lys Tyr Thr Ser Gly Arg Gln Glu Lys Asn Pro Ala Leu Arg Met Lys
35 40 45
Trp Met Met Ala Met Lys Tyr Pro Ile Thr Ala Asp Lys Arg Ile Thr
50 55 60
Glu Met Ile Pro Glu Arg Asn Glu Gln Gly Gln Thr Leu Trp Ser Lys
65 70 75 80
Met Asn Asp Ala Gly Ser Asp Arg Val Met Val Ser Pro Leu Ala Val
85 90 95
Thr Trp Trp Asn Arg Asn Gly Pro Ile Thr Asn Thr Val His Tyr Pro
100 105 110
Lys Ile Tyr Lys Thr Tyr Phe Glu Arg Val Glu Arg Leu Lys His Gly
115 120 125
Thr Phe Gly Pro Val His Phe Arg Asn Gln Val Lys Ile Arg Arg Arg
130 135 140
Val Asp Ile Asn Pro Gly His Ala Asp Leu Ser Ala Lys Glu Ala Gln
145 150 155 160
Asp Val Ile Met Glu Val Val Phe Pro Asn Glu Val Gly Ala Arg Ile
165 170 175
Leu Thr Ser Glu Ser Gln Leu Thr Ile Thr Lys Glu Lys Lys Glu Glu
180 185 190
Leu Gln Asp Cys Lys Ile Ser Pro Leu Met Val Ala Tyr Met Leu Glu
195 200 205
Arg Glu Leu Val Arg Lys Thr Arg Phe Leu Pro Val Ala Gly Gly Thr
210 215 220
Ser Ser Val Tyr Ile Glu Val Leu His Leu Thr Gln Gly Thr Cys Trp
225 230 235 240
Glu Gln Met Tyr Thr Pro Gly Gly Glu Val Arg Asn Asp Asp Val Asp
245 250 255
Gln Ser Leu Ile Ile Ala Ala Arg Asn Ile Val Arg Arg Ala Ala Val
260 265 270
Ser Ala Asp Pro Leu Ala Ser Leu Leu Glu Met Cys His Ser Thr Gln
275 280 285
Ile Gly Gly Ile Arg Met Val Asp Ile Leu Arg Gln Asn Pro Thr Glu
290 295 300
Glu Gln Ala Val Asp Ile Cys Lys Ala Ala Met Gly Leu Arg Ile Ser
305 310 315 320
Ser Ser Phe Ser Phe Gly Gly Phe Thr Phe Lys Arg Thr Ser Gly Ser
325 330 335
Ser Val Lys Arg Glu Glu Glu Val Leu Thr Gly Asn Leu Gln Thr Leu
340 345 350
Lys Ile Arg Val His Glu Gly Tyr Glu Glu Phe Thr Met Val Gly Arg
355 360 365
Arg Ala Thr Ala Ile Leu Arg Lys Ala Thr Arg Arg Leu Ile Gln Leu
370 375 380
Ile Val Ser Gly Arg Asp Glu Gln Ser Ile Ala Glu Ala Ile Ile Val
385 390 395 400
Ala Met Val Phe Ser Gln Glu Asp Cys Met Ile Lys Ala Val Arg Gly
405 410 415
Asp Leu Asn Phe Val Asn Arg Ala Asn Gln Arg Leu Asn Pro Met His
420 425 430
Gln Leu Leu Arg His Phe Gln Lys Asp Ala Lys Val Leu Phe Gln Asn
435 440 445
Trp Gly Val Glu Pro Ile Asp Asn Val Met Gly Met Ile Gly Ile Leu
450 455 460
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465 470 475 480
Ser Lys Met Gly Val Asp Glu Tyr Ser Ser Thr Glu Arg Val Val Val
485 490 495
Ser Ile Asp Arg Phe Leu Arg Val Arg Asp Gln Arg Gly Asn Val Leu
500 505 510
Leu Ser Pro Glu Glu Val Ser Glu Thr Gln Gly Thr Glu Lys Leu Thr
515 520 525
Ile Thr Tyr Ser Ser Ser Met Met Trp Glu Ile Asn Gly Pro Glu Ser
530 535 540
Val Leu Val Asn Thr Tyr Gln Trp Ile Ile Arg Asn Trp Glu Thr Val
545 550 555 560
Lys Ile Gln Trp Ser Gln Asn Pro Thr Met Leu Tyr Asn Lys Met Glu
565 570 575
Phe Glu Pro Phe Gln Ser Leu Val Pro Lys Ala Ile Arg Gly Gln Tyr
580 585 590
Ser Gly Phe Val Arg Thr Leu Phe Gln Gln Met Arg Asp Val Leu Gly
595 600 605
Thr Phe Asp Thr Ala Gln Ile Ile Lys Leu Leu Pro Phe Ala Ala Ala
610 615 620
Pro Pro Lys Gln Ser Arg Met Gln Phe Ser Ser Phe Thr Val Asn Val
625 630 635 640
Arg Gly Ser Gly Met Arg Ile Leu Val Arg Gly Asn Ser Pro Val Phe
645 650 655
Asn Tyr Asn Lys Ala Thr Lys Arg Leu Thr Val Leu Gly Lys Asp Ala
660 665 670
Gly Thr Leu Thr Glu Asp Pro Asp Glu Gly Thr Ala Gly Val Glu Ser
675 680 685
Ala Val Leu Arg Gly Phe Leu Ile Leu Gly Lys Glu Asp Lys Arg Tyr
690 695 700
Gly Pro Ala Leu Ser Ile Asn Glu Leu Ser Asn Leu Ala Lys Gly Glu
705 710 715 720
Lys Ala Asn Val Leu Ile Gly Gln Gly Asp Val Val Leu Val Met Lys
725 730 735
Arg Lys Arg Asp Ser Ser Ile Leu Thr Asp Ser Gln Thr Ala Thr Lys
740 745 750
Arg Ile Arg Met Ala Ile Asn
755
<210> 58
<211> 2233
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 58
agcaaaagca ggtactgatc caaaatggaa gattttgtgc gacaatgctt caatccgatg 60
attgtcgagc ttgcggaaaa aacaatgaaa gagtatgggg aggacctgaa aatcgaaaca 120
aacaaatttg cagcaatatg cactcacttg gaagtatgct tcatgtattc agattttcac 180
ttcatcaatg agcaaggcga gtcaataatc gtagaacttg gtgatccaaa tgcacttttg 240
aagcacagat ttgaaataat cgagggaaga gatcgcacaa tggcctggac agtagtaaac 300
agtatttgca acactacagg ggctgagaaa ccaaagtttc taccagattt gtatgattac 360
aaggagaata gattcatcga aattggagta acaaggagag aagttcacat atactatctg 420
gaaaaggcca ataaaattaa atctgagaaa acacacatcc acattttctc gttcactggg 480
gaagaaatgg ccacaaaggc agactacact ctcgatgaag aaagcagggc taggatcaaa 540
accagactat tcaccataag acaagaaatg gccagcagag gcctctggga ttcctttcgt 600
cagtccgaga gaggagaaga gacaattgaa gaaaggtttg aaatcacagg aacaatgcgc 660
aagcttgccg accaaagtct cccgccgaac ttctccagcc ttgaaaattt tagagcctat 720
gtggatggat tcgaaccgaa cggctacatt gagggcaagc tgtctcaaat gtccaaagaa 780
gtaaatgcta gaattgaacc ttttttgaaa acaacaccac gaccacttag acttccgaat 840
gggcctccct gttctcagcg gtccaaattc ctgctgatgg atgccttaaa attaagcatt 900
gaggacccaa gtcatgaagg agagggaata ccgctatatg atgcaatcaa atgcatgaga 960
acattctttg gatggaagga acccaatgtt gttaaaccac acgaaaaggg aataaatcca 1020
aattatcttc tgtcatggaa gcaagtactg gcagaactgc aggacattga gaatgaggag 1080
aaaattccaa agactaaaaa tatgaagaaa acaagtcagc taaagtgggc acttggtgag 1140
aacatggcac cagaaaaggt agactttgac gactgtaaag atgtaggtga tttgaagcaa 1200
tatgatagtg atgaaccaga attgaagtcg cttgcaagtt ggattcagaa tgagtttaac 1260
aaggcatgcg aactgacaga ttcaagctgg atagagctcg atgagattgg agaagatgtg 1320
gctccaattg aacacattgc aagcatgaga aggaattatt tcacatcaga ggtgtctcac 1380
tgcagagcca cagaatacat aatgaaggga gtgtacatca atactgcctt gcttaatgca 1440
tcttgtgcag caatggatga tttccaatta attccaatga taagcaagtg tagaactaag 1500
gagggaaggc gaaagaccaa cttgtatggt ttcatcataa aaggaagatc ccacttaagg 1560
aatgacaccg acgtggtaaa ctttgtgagc atggagtttt ctctcactga cccaagactt 1620
gaaccacata aatgggagaa gtactgtgtt cttgagatag gagatatgct tataagaagt 1680
gccataggcc aggtttcaag gcccatgttc ttgtatgtga gaacaaatgg aacctcaaaa 1740
attaaaatga aatggggaat ggagatgagg cgttgcctcc tccagtcact tcaacaaatt 1800
gagagtatga ttgaagctga gtcctctgtc aaagagaaag acatgaccaa agagttcttt 1860
gagaacaaat cagaaacatg gcccattgga gagtccccca aaggagtgga ggaaagttcc 1920
attgggaagg tctgcaggac tttattagca aagtcggtat tcaacagctt gtatgcatct 1980
ccacaactag aaggattttc agctgaatca agaaaactgc ttcttatcgt tcaggctctt 2040
agggacaacc tggaacctgg gacctttgat cttggggggc tatatgaagc aattgaggag 2100
tgcctgatta atgatccctg ggttttgctt aatgcttctt ggttcaactc cttccttaca 2160
catgcattga gttagttgtg gcagtgctac tatttgctat ccatactgtc caaaaaagta 2220
ccttgtttct act 2233
<210> 59
<211> 716
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 59
Met Glu Asp Phe Val Arg Gln Cys Phe Asn Pro Met Ile Val Glu Leu
1 5 10 15
Ala Glu Lys Thr Met Lys Glu Tyr Gly Glu Asp Leu Lys Ile Glu Thr
20 25 30
Asn Lys Phe Ala Ala Ile Cys Thr His Leu Glu Val Cys Phe Met Tyr
35 40 45
Ser Asp Phe His Phe Ile Asn Glu Gln Gly Glu Ser Ile Ile Val Glu
50 55 60
Leu Gly Asp Pro Asn Ala Leu Leu Lys His Arg Phe Glu Ile Ile Glu
65 70 75 80
Gly Arg Asp Arg Thr Met Ala Trp Thr Val Val Asn Ser Ile Cys Asn
85 90 95
Thr Thr Gly Ala Glu Lys Pro Lys Phe Leu Pro Asp Leu Tyr Asp Tyr
100 105 110
Lys Glu Asn Arg Phe Ile Glu Ile Gly Val Thr Arg Arg Glu Val His
115 120 125
Ile Tyr Tyr Leu Glu Lys Ala Asn Lys Ile Lys Ser Glu Lys Thr His
130 135 140
Ile His Ile Phe Ser Phe Thr Gly Glu Glu Met Ala Thr Lys Ala Asp
145 150 155 160
Tyr Thr Leu Asp Glu Glu Ser Arg Ala Arg Ile Lys Thr Arg Leu Phe
165 170 175
Thr Ile Arg Gln Glu Met Ala Ser Arg Gly Leu Trp Asp Ser Phe Arg
180 185 190
Gln Ser Glu Arg Gly Glu Glu Thr Ile Glu Glu Arg Phe Glu Ile Thr
195 200 205
Gly Thr Met Arg Lys Leu Ala Asp Gln Ser Leu Pro Pro Asn Phe Ser
210 215 220
Ser Leu Glu Asn Phe Arg Ala Tyr Val Asp Gly Phe Glu Pro Asn Gly
225 230 235 240
Tyr Ile Glu Gly Lys Leu Ser Gln Met Ser Lys Glu Val Asn Ala Arg
245 250 255
Ile Glu Pro Phe Leu Lys Thr Thr Pro Arg Pro Leu Arg Leu Pro Asn
260 265 270
Gly Pro Pro Cys Ser Gln Arg Ser Lys Phe Leu Leu Met Asp Ala Leu
275 280 285
Lys Leu Ser Ile Glu Asp Pro Ser His Glu Gly Glu Gly Ile Pro Leu
290 295 300
Tyr Asp Ala Ile Lys Cys Met Arg Thr Phe Phe Gly Trp Lys Glu Pro
305 310 315 320
Asn Val Val Lys Pro His Glu Lys Gly Ile Asn Pro Asn Tyr Leu Leu
325 330 335
Ser Trp Lys Gln Val Leu Ala Glu Leu Gln Asp Ile Glu Asn Glu Glu
340 345 350
Lys Ile Pro Lys Thr Lys Asn Met Lys Lys Thr Ser Gln Leu Lys Trp
355 360 365
Ala Leu Gly Glu Asn Met Ala Pro Glu Lys Val Asp Phe Asp Asp Cys
370 375 380
Lys Asp Val Gly Asp Leu Lys Gln Tyr Asp Ser Asp Glu Pro Glu Leu
385 390 395 400
Lys Ser Leu Ala Ser Trp Ile Gln Asn Glu Phe Asn Lys Ala Cys Glu
405 410 415
Leu Thr Asp Ser Ser Trp Ile Glu Leu Asp Glu Ile Gly Glu Asp Val
420 425 430
Ala Pro Ile Glu His Ile Ala Ser Met Arg Arg Asn Tyr Phe Thr Ser
435 440 445
Glu Val Ser His Cys Arg Ala Thr Glu Tyr Ile Met Lys Gly Val Tyr
450 455 460
Ile Asn Thr Ala Leu Leu Asn Ala Ser Cys Ala Ala Met Asp Asp Phe
465 470 475 480
Gln Leu Ile Pro Met Ile Ser Lys Cys Arg Thr Lys Glu Gly Arg Arg
485 490 495
Lys Thr Asn Leu Tyr Gly Phe Ile Ile Lys Gly Arg Ser His Leu Arg
500 505 510
Asn Asp Thr Asp Val Val Asn Phe Val Ser Met Glu Phe Ser Leu Thr
515 520 525
Asp Pro Arg Leu Glu Pro His Lys Trp Glu Lys Tyr Cys Val Leu Glu
530 535 540
Ile Gly Asp Met Leu Ile Arg Ser Ala Ile Gly Gln Val Ser Arg Pro
545 550 555 560
Met Phe Leu Tyr Val Arg Thr Asn Gly Thr Ser Lys Ile Lys Met Lys
565 570 575
Trp Gly Met Glu Met Arg Arg Cys Leu Leu Gln Ser Leu Gln Gln Ile
580 585 590
Glu Ser Met Ile Glu Ala Glu Ser Ser Val Lys Glu Lys Asp Met Thr
595 600 605
Lys Glu Phe Phe Glu Asn Lys Ser Glu Thr Trp Pro Ile Gly Glu Ser
610 615 620
Pro Lys Gly Val Glu Glu Ser Ser Ile Gly Lys Val Cys Arg Thr Leu
625 630 635 640
Leu Ala Lys Ser Val Phe Asn Ser Leu Tyr Ala Ser Pro Gln Leu Glu
645 650 655
Gly Phe Ser Ala Glu Ser Arg Lys Leu Leu Leu Ile Val Gln Ala Leu
660 665 670
Arg Asp Asn Leu Glu Pro Gly Thr Phe Asp Leu Gly Gly Leu Tyr Glu
675 680 685
Ala Ile Glu Glu Cys Leu Ile Asn Asp Pro Trp Val Leu Leu Asn Ala
690 695 700
Ser Trp Phe Asn Ser Phe Leu Thr His Ala Leu Ser
705 710 715
<210> 60
<211> 890
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 60
agcaaaagca gggtgacaaa aacataatgg atccaaacac tgtgtcaagc tttcaggtag 60
attgctttct ttggcatgtc cgcaaacgag ttgcagacca agaactaggc gatcccccat 120
tccttgatcg gcttcgccga gatcagaaat ccctaagagg aaggggcagt actctcggtc 180
tggacatcaa gacagccaca cgtgctggaa agcagatagt ggagcggatt ctgaaagaag 240
aatccgatga ggcacttaaa atgaccatgg cctctgtacc tgcgtcgcgt tacctaactg 300
acatgactct tgaggaaatg tcaagggact ggtccatgct catacccaag cagaaagtgg 360
caggccctct ttgtatcaaa atggaccagg cgatcatgga taagaacatc atactgaaag 420
cgaacttcag tgtgattttt gaccggctgg agactctaat attgctaagg gctttcaccg 480
aagagggagc aattgttggc gaaatttcac cattgccttc tcttccagga catactgctg 540
aggatgtcaa aaatgcagtt ggagtcctca tcggaggact tgaatggaat gataacacag 600
ttcgagtctc tgaaactcta cagagattcg cttggagaag cagtaatgag aatgggagac 660
ctccactcac tccaaaacag aaacgagaaa tggcgggaac aattaggtca gaagtttgaa 720
gaaataagat ggttgattga agaagtgaga cacaaactga agataacaga gaatagtttt 780
gagcaaataa catttatgca agccttacat ctattgcttg aagtggagca agagataaga 840
actttctcgt ttcagcttat ttagtactaa aaaacaccct tgtttctact 890
<210> 61
<211> 230
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 61
Met Asp Pro Asn Thr Val Ser Ser Phe Gln Val Asp Cys Phe Leu Trp
1 5 10 15
His Val Arg Lys Arg Val Ala Asp Gln Glu Leu Gly Asp Pro Pro Phe
20 25 30
Leu Asp Arg Leu Arg Arg Asp Gln Lys Ser Leu Arg Gly Arg Gly Ser
35 40 45
Thr Leu Gly Leu Asp Ile Lys Thr Ala Thr Arg Ala Gly Lys Gln Ile
50 55 60
Val Glu Arg Ile Leu Lys Glu Glu Ser Asp Glu Ala Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Met Ala Ser Val Pro Ala Ser Arg Tyr Leu Thr Asp Met Thr Leu Glu
85 90 95
Glu Met Ser Arg Asp Trp Ser Met Leu Ile Pro Lys Gln Lys Val Ala
100 105 110
Gly Pro Leu Cys Ile Lys Met Asp Gln Ala Ile Met Asp Lys Asn Ile
115 120 125
Ile Leu Lys Ala Asn Phe Ser Val Ile Phe Asp Arg Leu Glu Thr Leu
130 135 140
Ile Leu Leu Arg Ala Phe Thr Glu Glu Gly Ala Ile Val Gly Glu Ile
145 150 155 160
Ser Pro Leu Pro Ser Leu Pro Gly His Thr Ala Glu Asp Val Lys Asn
165 170 175
Ala Val Gly Val Leu Ile Gly Gly Leu Glu Trp Asn Asp Asn Thr Val
180 185 190
Arg Val Ser Glu Thr Leu Gln Arg Phe Ala Trp Arg Ser Ser Asn Glu
195 200 205
Asn Gly Arg Pro Pro Leu Thr Pro Lys Gln Lys Arg Glu Met Ala Gly
210 215 220
Thr Ile Arg Ser Glu Val
225 230
<210> 62
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 62
Met Asp Pro Asn Thr Val Ser Ser Phe Gln Asp Ile Leu Leu Arg Met
1 5 10 15
Ser Lys Met Gln Leu Glu Ser Ser Ser Glu Asp Leu Asn Gly Met Ile
20 25 30
Thr Gln Phe Glu Ser Leu Lys Leu Tyr Arg Asp Ser Leu Gly Glu Ala
35 40 45
Val Met Arg Met Gly Asp Leu His Ser Leu Gln Asn Arg Asn Glu Lys
50 55 60
Trp Arg Glu Gln Leu Gly Gln Lys Phe Glu Glu Ile Arg Trp Leu Ile
65 70 75 80
Glu Glu Val Arg His Lys Leu Lys Ile Thr Glu Asn Ser Phe Glu Gln
85 90 95
Ile Thr Phe Met Gln Ala Leu His Leu Leu Leu Glu Val Glu Gln Glu
100 105 110
Ile Arg Thr Phe Ser Phe Gln Leu Ile
115 120
<210> 63
<211> 2369
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 63
agcagaagcg gagcctttaa gatgaatata aatccttatt ttctcttcat agatgtaccc 60
atacaggcag caatttcaac aacattccca tacaccggtg ttccccctta ttcccatgga 120
acgggaacag gctacacaat agacaccgtg atcagaacac atgagtactc aaacaaggga 180
aaacagtaca tttctgatgt tacaggatgt acaatggtag atccaacaaa tgggccatta 240
cccgaagaca atgagccgag tgcctatgca caattagatt gcgttctgga ggctttggat 300
agaatggatg aagaacatcc aggtctgttt caagcagcct cacagaatgc catggaggca 360
ctaatggtca caactgtaga caaattaacc caggggagac agacttttga ttggacagta 420
tgcagaaacc aacctgctgc aacggcactg aacacaacaa taacctcttt taggttgaat 480
gatttgaatg gagccgacaa gggtggatta gtaccctttt gccaagatat cattgattca 540
ttggacagac ctgaaatgac tttcttctca gtaaagaata taaagaaaaa attgcctgct 600
aaaaacagaa agggtttcct cataaagaga ataccaatga aggtaaaaga cagaataacc 660
agagtggaat acatcaaaag agcattatca ttaaacacaa tgacaaaaga tgctgaaaga 720
ggcaaactaa aaagaagagc gattgccacc gctggaatac aaatcagagg gtttgtatta 780
gtagttgaaa acttggctaa aaatatctgt gaaaatctag aacaaagtgg tttgccagta 840
ggtggaaacg agaagaaggc caaactgtca aatgcagtgg ccaaaatgct cagtaactgc 900
ccaccaggag ggatcagcat gacagtaaca ggagacaata ccaaatggaa tgaatgctta 960
aatccaagaa tctttttggc tatgactgaa agaataacca gagacagccc aatttggttc 1020
cgggattttt gtagtatagc accggtcttg ttctccaata aaatagccag attgggaaaa 1080
gggtttatga taacaagcaa aacaaaaaga ctgaaggctc aaataccttg tcctgatctg 1140
tttagtatac cattagaaag atataatgaa gaaacaaggg caaaattgaa aaagctgaaa 1200
ccattcttca atgaagaagg aacggcatct ttgtcgcctg ggatgatgat gggaatgttt 1260
aatatgctat ctaccgtgtt gggagtagcc gcactaggta tcaaaaacat tggaaacaaa 1320
gaatacttat gggatggact gcaatcttct gatgattttg ctctgtttgt taatgcaaaa 1380
gatgaagaga catgtatgga aggaataaac gacttttacc gaacatgtaa actattggga 1440
ataaacatga gcaaaaagaa aagttactgt aatgaaactg gaatgtttga atttacaagc 1500
atgttctaca gagatggatt tgtatctaat tttgcaatgg aacttccttc atttggagtt 1560
gctggagtaa atgaatcagc agatatggca ataggaatga caataataaa gaacaatatg 1620
atcaacaatg ggatgggtcc agcaacagca caaacagcca tacaattatt catagctgat 1680
tatagataca cctacaaatg ccacagggga gattccaaag tggaaggaaa gagaatgaaa 1740
attataaagg agctatggga aaacactaaa ggaagagatg gtctgttagt agcagatggt 1800
gggcctaaca tttacaattt gagaaacttg catatcccag aaatagtatt aaagtacaac 1860
ctaatggacc ctgaatacaa agggcggtta cttcatcctc aaaatccctt tgtaggacat 1920
ttgtctattg agggcatcaa agaggcagat ataaccccag cacatggtcc agtaaagaaa 1980
atggactatg atgcggtgtc tggaactcat agttggagaa ccaaaaggaa cagatctata 2040
ctaaacactg atcagaggaa catgattctt gaggaacaat gctacgctaa gtgttgcaac 2100
ctttttgagg cctgttttaa cagtgcatca tacaggaaac cagtaggtca gcacagcatg 2160
cttgaggcta tggcccacag attaagaatg gatgcacgac tagattatga atcaggaaga 2220
atgtcaaagg atgattttga gaaagcaatg gctcaccttg gtgagattgg gtacatataa 2280
gcttcgaaga tgtctatggg gttattggtc atcattgaat acatgcggta cacaaatgat 2340
taaaatgaaa aaaggctcgt gtttctact 2369
<210> 64
<211> 2396
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 64
agcagaagcg gagcgttttc aagatgacat tggctaaaat tgaattgtta aaacaactgt 60
taagggacaa cgaagccaaa acagtattga aacaaacaac ggtagaccaa tataacataa 120
taagaaaatt caatacatca agaattgaaa agaacccttc attaaggatg aagtgggcca 180
tgtgttctaa ttttcccttg gctctgacca agggtgatat ggcaaataga atccccttgg 240
aatacaaggg aatacaactt aaaacaaatg ctgaagacat aggaaccaaa ggccaaatgt 300
gctcaatagc agcagttacc tggtggaata catatggacc aataggagac actgaaggtt 360
tcgaaaaggt ctacgaaagc ttctttctca gaaagatgag acttgacaat gccacttggg 420
gccgaataac ttttggccca gttgaaagag taagaaaaag ggtactgcta aaccctctca 480
ccaaggaaat gcctccagat gaagcgagca atgtgataat ggaaatattg ttccctaagg 540
aagcaggaat accaagagaa tctacttgga tacataggga actgataaaa gaaaaaagag 600
aaaaattgaa aggaacgatg ataactccca ttgtactggc atacatgctt gagagagaat 660
tggttgcccg aagaaggttc ctgccagtgg caggagcaac atcagctgag ttcatagaaa 720
tgctacactg cttacaaggt gaaaattgga gacaaatata tcacccagga gggaataaac 780
taactgaatc taggtctcaa tcaatgattg tagcttgtag aaaaataatc agaagatcaa 840
tagtcgcatc aaacccacta gagctagctg tagaaattgc aaacaagact gtgatagata 900
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tgagagctgc attaggacta aagatcagac aaagacaaag atttggacgg cttgaactaa 1020
agagaatatc aggaagagga ttcaaaaatg atgaagaaat attgatcggg aacggaacaa 1080
tacagaagat tggaatatgg gacggagaag aggagttcca tgtaagatgt ggtgaatgca 1140
ggggaatatt aaaaaagagc aaaatgagaa tggaaaaact actaataaat tcagccaaaa 1200
aggaggacat gaaagattta ataatcttgt gcatggtatt ttctcaagac actaggatgt 1260
tccaaggagt gagaggagaa ataaattttc ttaatcgagc aggccaactt ttatctccaa 1320
tgtaccaact ccaaagatat tttttgaata ggagcaacga tctttttgat caatgggggt 1380
atgaggaatc acccaaagca agtgaactac atgggataaa tgaattaatg aatgcatctg 1440
attatacgtt gaaaggggtt gtagtaacaa aaaatgtgat tgatgacttt agttctactg 1500
aaacagaaaa agtatctata acaaaaaatc ttagtttaat aaaaagaact ggggaagtca 1560
taatgggggc taatgacgta agtgaattag aatcacaagc tcagctaatg ataacatatg 1620
atacacctaa gatgtgggag atgggaacaa ccaaagaact ggtgcaaaac acctaccaat 1680
gggtgctaaa aaatttggta acactgaagg ctcagtttct tctaggaaaa gaagacatgt 1740
tccaatggga tgcatttgaa gcatttgaaa gcataatccc ccagaagatg gctggccagt 1800
acagtggatt tgcaagggca gtgctcaaac aaatgagaga ccaagaggtt atgaaaactg 1860
accagttcat aaagttgttg cctttctgtt tctcaccacc aaaattaagg agcaatgggg 1920
agccttatca attcttgagg cttatattga agggaggagg agaaaatttc atcgaagtaa 1980
ggaaagggtc ccctctattc tcctacaatc cacaaacaga agtcctaact atatgcggca 2040
gaatgatgtc attaaaaggg aaaattgaag atgaagaaag gaatagatca atggggaatg 2100
cagtattggc aggctttctc gttagtggca agtatgaccc agatcttgga gatttcaaaa 2160
ctattgaaga acttgaaaag ctaaaaccgg gggagaaagc aaacatctta ctttatcaag 2220
gaaagcccgt taaagtagtt aaaaggaaaa gatatagtgc tttatccaat gacatttcac 2280
aaggaattaa gagacaaaga atgacagttg agtccatggg gtgggccttg agctaatata 2340
aatttatcca ttaattcaat aaacacaatt gagtgaaaaa tgctcgtgtt tctact 2396
<210> 65
<211> 2308
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 65
agcagaagcg gtgcgtttga tttgccataa tggatacttt tattacaaga aacttccaga 60
ctacaataat acaaaaggcc aaaaacacaa tggcagaatt tagtgaagat cctgaattac 120
aaccagcaat gctattcaac atctgcgtcc atctggaggt ctgctatgta ataagtgata 180
tgaattttct tgatgaagaa ggaaaagcat atacagcatt agaaggacaa ggaaaagaac 240
aaaacttgag accacaatat gaagtgattg agggaatgcc aagaaacata gcatggatgg 300
ttcaaagatc cttagcccaa gagcatggga tagagactcc aaggtatctg gctgatttgt 360
tcgattataa aactaagagg tttatagaag ttggaataac aaagggattg gctgatgatt 420
acttctggaa aaagaaagaa aagctgggga atagcatgga actgatgata ttcagctaca 480
atcaagacta ttcgttaagt aatgaatcct cattggatga ggaaggaaaa gggagagtgc 540
taagcagact cacagaactt caggctgagt taagtctgaa aaatctatgg caagttctca 600
taggagaaga agatattgaa aaaggaattg acttcaaact tggacaaaca atatctaaac 660
taagggatat atctgttcca gctggtttct ccaattttga aggaatgagg agctacatag 720
acaatataga tcctaaagga gcaatagaga gaaatctagc aaggatgtct cccttagtat 780
cagttacacc taaaaagttg aaatgggagg acctaagacc aatagggcct cacatttaca 840
accatgagct accagaagtt ccatataatg cctttcttct aatgtctgat gaattggggc 900
tggctaatat gactgaaggg aagtccaaga aaccgaagac cttagccaaa gagtgcctag 960
aaaagtactc aacactacgg gatcaaactg acccaatatt aataatgaaa agcgaaaaag 1020
ctaatgaaca cttcctatgg aaactgtgga gggactgtgt aaatacaata agtaatgagg 1080
aaacaagtaa cgaattacag aaaaccaatt atgccaagtg ggccacagga gatggattaa 1140
catatcagaa aataatgaaa gaagtagcaa tagatgacga aacaatgtac caagaagagc 1200
ccaaaatacc taacaaatgt agagtggctg cttgggttca aacagagatg aatctattga 1260
gcactctgac aagtaaaagg gccctggatc tgccagaaat agggccagac gtagcacccg 1320
tggagcatgt agggagtgaa agaaggaaat actttgttaa tgaaatcaac tactgtaagg 1380
cctctaccgt tatgatgaag tatgtgcttt ttcacacttc attattaaat gaaagcaatg 1440
ccagtatggg aaaatataaa gtaataccaa taaccaacag agtagtaaat gaaaagggag 1500
aaagttttga catgctttat ggtctagcgg ttaaagggca atctcatctg aggggagata 1560
ctgatgttgt aacagttgtg actttcgaat ttagtagtac agatcccaga gtggactcag 1620
gaaagtggcc aaaatatact gtatttagaa ttggctcctt atttgtgagt gggagggaaa 1680
aatctgtata cctatattgc cgagtgaatg gtacaaataa gatccaaatg aaatggggaa 1740
tggaagctag aagatgtctg cttcaatcaa tgcaacaaat ggaagcaatt gttgaacaag 1800
aatcatcgat acaaggatat gacatgacca aagcttgttt caagggagac agagtgaata 1860
gtccaaaaac tttcagtatt gggactcaag aaggaaaact agtgaaagga tcctttggga 1920
aagcactaag agtaatattc accaaatgtt tgatgcacta tgtatttgga aatgcccaat 1980
tggaggggtt tagtgccgaa tctaggagac ttctactgtt aattcaggca ttaaaagaca 2040
gaaagggccc ttgggtattc gacttagagg gaatgtattc tggaatagaa gaatgtatta 2100
gtaacaaccc ttgggtaata cagagtgcat actggtttaa tgaatggttg ggctttgaaa 2160
aagaggggag taaagtatta gaatcagtag atgaaataat ggatgaatga aagaagggca 2220
tagtgctcaa tttggtacta ttttgttcat tatgtatcta aacatccaat ataaagaatt 2280
gagaattaaa aatgcacgtg tttctact 2308
<210> 66
<211> 1843
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 66
agcagaagca cagcattttc ttgtgaactt caagtaccaa caaaaaactg aaaatcaaaa 60
tgtccaacat ggacattgac ggcatcaaca ctggaataat tgacaaaaca ccagaagaaa 120
taacttccgg aaccagtggg gcaaccagac caatcatcag accagcaacc cttgcctcac 180
caagcaacaa acgaaccaga aacccatccc cggaaagggc aaccacaagc agtgaagctg 240
atgtcggaag gaaaacccaa aagaaacaaa ctccgacaga gataaagaag agcgtctaca 300
atatggtagt gaaactgggt gaattctaca accagatgat ggtcaaagct ggactcaacg 360
atgacatgga gagaaaccta atccaaaatg cacatgctgt ggaaagaatt ctattggctg 420
ctactgatga caagaaaact gaattccaaa agaaaaagaa tgccagagac gtcaaagaag 480
ggaaagaaga aatagaccat aacaaaacag gaggcacctt ttacaagatg gtaagagata 540
ataaaaccat ctacttcagc cctataagaa ttaccttttt aaaagaagag gtgaaaacaa 600
tgtacaaaac caccatgggg agtgacggtt tcagtggact aaatcacatc atgattgggc 660
attcacagac gaacgatgtc tgtttccaaa gatcaaaggc actaaaaaga gttggacttg 720
acccttcatt aatcagtact tttgcaggaa gcacactccc cagaagatca ggtacaactg 780
gtgttgcgac caaaggaggt ggaactttag tggcagaagc cattcgattt ataggaagag 840
caatggcaga cagagggcta ttgagagaca tcagagccaa gacggcctat gaaaagattc 900
ttctgaatct gaaaaacaag tgctctgcgc cccaacaaaa ggctctggtt gatcaagtga 960
tcggaagtag aaatccaggg attgcagaca tagaagatct caccctgctt gctcgaagta 1020
tggtcgttgt taggccctct gtagcaagca aagtggtgct tcccataagc atctatgcta 1080
aaatacctca actggggttc aacgttgaag aatactctat ggttgggtat gaagccatgg 1140
ctctttataa tatggcaaca cctgtttcca tattaagaat gggagacgat gcaaaagata 1200
aatcacaatt attcttcatg tcttgctttg gagctgccta tgaagaccta agagttctgt 1260
ctgcactaac aggcacggaa ttcaagccta ggtcagcatt aaagtgcaaa ggtttccacg 1320
ttccagcaaa ggagcaagtg gaaggaatgg gggcagctct gatgtccatc aagctccagt 1380
tttgggctcc aatgaccaga tctgggggga atgaagtagg tggagacgga gggtctggtc 1440
aaataagttg cagccccgtg tttgcagtag aaagacctat tgctctaagc aagcaagctg 1500
taagaagaat gctgtcaatg aatattgagg gacgtgatgc agatgtcaaa ggaaatctac 1560
tcaagatgat gaatgattca atggctaaga aaaccaatgg aaatgctttc attgggaaga 1620
aaatgttcca aatatcagac aaaaacaaaa ccaatcccgt tgagattcca attaagcaga 1680
ccatccccag tttcttcttt gggagggaca cagcagagga ttatgatgac ctcgattatt 1740
aaagcaacaa aatagacact atggctgtga ttgtttcagt acgtttggaa tgtgggtgtt 1800
tactcttatt gaaataaatg taaaaaatgc tgttgtttct act 1843
<210> 67
<211> 1098
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 67
agcagaagca gaggatttgt ttagtcactg gcaaacggga aaaaatggcg gacaacatga 60
ccacaacaca aattgaggtg ggtccgggag caaccaatgc cactataaac tttgaagcag 120
gaattttgga gtgctatgaa aggctttcat ggcaaagagc ccttgactac cctggtcaag 180
accgcctaaa cagactaaag agaaaattag aatcaagaat aaagactcac aacaaaagtg 240
agcctgaaag taaaaggatg tctcttgaag agagaaaagc aattggggta aaaatgatga 300
aagtgctcct atttatgaac ccatctgctg gaattgaagg gtttgagcca tactgtatga 360
aaaattcctc caatagcaac tgcccaaact gcaattgggc cgattaccct ccaacatcag 420
gaaagtgcct tgatgacata gaagaagaac cggagaatgt tgatgaccca actgaaatag 480
tattaaggga catgaacaac aaagatgcaa ggcaaaagat aaaagaggaa gtaaacactc 540
agaaagaagg gaagttccgt ttgacaatac aaagggatat acgtaatgtg ttgtccttga 600
gagtgttggt aaacggaaca ttcctcaagc accctaatgg atacaagtcc ttatcaactc 660
tgcatagatt gaatgcatat gaccagagtg gaaggcttgt tgctaaactt gttgctactg 720
atgatcttac agtggaggat gaagaagatg gccatcggat cctcaactca ctcttcgagc 780
gttttaatga aggacattca aagccaattc gagcagctga aactgcggtg ggagtcttat 840
cccaatttgg tcaagagcac cgattatcac cagaggaggg agacaattag actggttacg 900
gaagaacttt atcttttaag taaaagaatt gatgataaca tattgttcca caaaacagta 960
atagctaaca gctccataat agctgacatg attgtatcat tatcattatt ggaaacattg 1020
tatgagatga aggatgtggt tgaagtgtac agcaggcagt gcttgtgaat ttaaaataaa 1080
aatcctcttg ttactact 1098
<210> 68
<211> 752
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 68
Met Asn Ile Asn Pro Tyr Phe Leu Phe Ile Asp Val Pro Ile Gln Ala
1 5 10 15
Ala Ile Ser Thr Thr Phe Pro Tyr Thr Gly Val Pro Pro Tyr Ser His
20 25 30
Gly Thr Gly Thr Gly Tyr Thr Ile Asp Thr Val Ile Arg Thr His Glu
35 40 45
Tyr Ser Asn Lys Gly Lys Gln Tyr Ile Ser Asp Val Thr Gly Cys Thr
50 55 60
Met Val Asp Pro Thr Asn Gly Pro Leu Pro Glu Asp Asn Glu Pro Ser
65 70 75 80
Ala Tyr Ala Gln Leu Asp Cys Val Leu Glu Ala Leu Asp Arg Met Asp
85 90 95
Glu Glu His Pro Gly Leu Phe Gln Ala Ala Ser Gln Asn Ala Met Glu
100 105 110
Ala Leu Met Val Thr Thr Val Asp Lys Leu Thr Gln Gly Arg Gln Thr
115 120 125
Phe Asp Trp Thr Val Cys Arg Asn Gln Pro Ala Ala Thr Ala Leu Asn
130 135 140
Thr Thr Ile Thr Ser Phe Arg Leu Asn Asp Leu Asn Gly Ala Asp Lys
145 150 155 160
Gly Gly Leu Val Pro Phe Cys Gln Asp Ile Ile Asp Ser Leu Asp Arg
165 170 175
Pro Glu Met Thr Phe Phe Ser Val Lys Asn Ile Lys Lys Lys Leu Pro
180 185 190
Ala Lys Asn Arg Lys Gly Phe Leu Ile Lys Arg Ile Pro Met Lys Val
195 200 205
Lys Asp Arg Ile Thr Arg Val Glu Tyr Ile Lys Arg Ala Leu Ser Leu
210 215 220
Asn Thr Met Thr Lys Asp Ala Glu Arg Gly Lys Leu Lys Arg Arg Ala
225 230 235 240
Ile Ala Thr Ala Gly Ile Gln Ile Arg Gly Phe Val Leu Val Val Glu
245 250 255
Asn Leu Ala Lys Asn Ile Cys Glu Asn Leu Glu Gln Ser Gly Leu Pro
260 265 270
Val Gly Gly Asn Glu Lys Lys Ala Lys Leu Ser Asn Ala Val Ala Lys
275 280 285
Met Leu Ser Asn Cys Pro Pro Gly Gly Ile Ser Met Thr Val Thr Gly
290 295 300
Asp Asn Thr Lys Trp Asn Glu Cys Leu Asn Pro Arg Ile Phe Leu Ala
305 310 315 320
Met Thr Glu Arg Ile Thr Arg Asp Ser Pro Ile Trp Phe Arg Asp Phe
325 330 335
Cys Ser Ile Ala Pro Val Leu Phe Ser Asn Lys Ile Ala Arg Leu Gly
340 345 350
Lys Gly Phe Met Ile Thr Ser Lys Thr Lys Arg Leu Lys Ala Gln Ile
355 360 365
Pro Cys Pro Asp Leu Phe Ser Ile Pro Leu Glu Arg Tyr Asn Glu Glu
370 375 380
Thr Arg Ala Lys Leu Lys Lys Leu Lys Pro Phe Phe Asn Glu Glu Gly
385 390 395 400
Thr Ala Ser Leu Ser Pro Gly Met Met Met Gly Met Phe Asn Met Leu
405 410 415
Ser Thr Val Leu Gly Val Ala Ala Leu Gly Ile Lys Asn Ile Gly Asn
420 425 430
Lys Glu Tyr Leu Trp Asp Gly Leu Gln Ser Ser Asp Asp Phe Ala Leu
435 440 445
Phe Val Asn Ala Lys Asp Glu Glu Thr Cys Met Glu Gly Ile Asn Asp
450 455 460
Phe Tyr Arg Thr Cys Lys Leu Leu Gly Ile Asn Met Ser Lys Lys Lys
465 470 475 480
Ser Tyr Cys Asn Glu Thr Gly Met Phe Glu Phe Thr Ser Met Phe Tyr
485 490 495
Arg Asp Gly Phe Val Ser Asn Phe Ala Met Glu Leu Pro Ser Phe Gly
500 505 510
Val Ala Gly Val Asn Glu Ser Ala Asp Met Ala Ile Gly Met Thr Ile
515 520 525
Ile Lys Asn Asn Met Ile Asn Asn Gly Met Gly Pro Ala Thr Ala Gln
530 535 540
Thr Ala Ile Gln Leu Phe Ile Ala Asp Tyr Arg Tyr Thr Tyr Lys Cys
545 550 555 560
His Arg Gly Asp Ser Lys Val Glu Gly Lys Arg Met Lys Ile Ile Lys
565 570 575
Glu Leu Trp Glu Asn Thr Lys Gly Arg Asp Gly Leu Leu Val Ala Asp
580 585 590
Gly Gly Pro Asn Ile Tyr Asn Leu Arg Asn Leu His Ile Pro Glu Ile
595 600 605
Val Leu Lys Tyr Asn Leu Met Asp Pro Glu Tyr Lys Gly Arg Leu Leu
610 615 620
His Pro Gln Asn Pro Phe Val Gly His Leu Ser Ile Glu Gly Ile Lys
625 630 635 640
Glu Ala Asp Ile Thr Pro Ala His Gly Pro Val Lys Lys Met Asp Tyr
645 650 655
Asp Ala Val Ser Gly Thr His Ser Trp Arg Thr Lys Arg Asn Arg Ser
660 665 670
Ile Leu Asn Thr Asp Gln Arg Asn Met Ile Leu Glu Glu Gln Cys Tyr
675 680 685
Ala Lys Cys Cys Asn Leu Phe Glu Ala Cys Phe Asn Ser Ala Ser Tyr
690 695 700
Arg Lys Pro Val Gly Gln His Ser Met Leu Glu Ala Met Ala His Arg
705 710 715 720
Leu Arg Met Asp Ala Arg Leu Asp Tyr Glu Ser Gly Arg Met Ser Lys
725 730 735
Asp Asp Phe Glu Lys Ala Met Ala His Leu Gly Glu Ile Gly Tyr Ile
740 745 750
<210> 69
<211> 770
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 69
Met Thr Leu Ala Lys Ile Glu Leu Leu Lys Gln Leu Leu Arg Asp Asn
1 5 10 15
Glu Ala Lys Thr Val Leu Lys Gln Thr Thr Val Asp Gln Tyr Asn Ile
20 25 30
Ile Arg Lys Phe Asn Thr Ser Arg Ile Glu Lys Asn Pro Ser Leu Arg
35 40 45
Met Lys Trp Ala Met Cys Ser Asn Phe Pro Leu Ala Leu Thr Lys Gly
50 55 60
Asp Met Ala Asn Arg Ile Pro Leu Glu Tyr Lys Gly Ile Gln Leu Lys
65 70 75 80
Thr Asn Ala Glu Asp Ile Gly Thr Lys Gly Gln Met Cys Ser Ile Ala
85 90 95
Ala Val Thr Trp Trp Asn Thr Tyr Gly Pro Ile Gly Asp Thr Glu Gly
100 105 110
Phe Glu Lys Val Tyr Glu Ser Phe Phe Leu Arg Lys Met Arg Leu Asp
115 120 125
Asn Ala Thr Trp Gly Arg Ile Thr Phe Gly Pro Val Glu Arg Val Arg
130 135 140
Lys Arg Val Leu Leu Asn Pro Leu Thr Lys Glu Met Pro Pro Asp Glu
145 150 155 160
Ala Ser Asn Val Ile Met Glu Ile Leu Phe Pro Lys Glu Ala Gly Ile
165 170 175
Pro Arg Glu Ser Thr Trp Ile His Arg Glu Leu Ile Lys Glu Lys Arg
180 185 190
Glu Lys Leu Lys Gly Thr Met Ile Thr Pro Ile Val Leu Ala Tyr Met
195 200 205
Leu Glu Arg Glu Leu Val Ala Arg Arg Arg Phe Leu Pro Val Ala Gly
210 215 220
Ala Thr Ser Ala Glu Phe Ile Glu Met Leu His Cys Leu Gln Gly Glu
225 230 235 240
Asn Trp Arg Gln Ile Tyr His Pro Gly Gly Asn Lys Leu Thr Glu Ser
245 250 255
Arg Ser Gln Ser Met Ile Val Ala Cys Arg Lys Ile Ile Arg Arg Ser
260 265 270
Ile Val Ala Ser Asn Pro Leu Glu Leu Ala Val Glu Ile Ala Asn Lys
275 280 285
Thr Val Ile Asp Thr Glu Pro Leu Lys Ser Cys Leu Ala Ala Ile Asp
290 295 300
Gly Gly Asp Val Ala Cys Asp Ile Met Arg Ala Ala Leu Gly Leu Lys
305 310 315 320
Ile Arg Gln Arg Gln Arg Phe Gly Arg Leu Glu Leu Lys Arg Ile Ser
325 330 335
Gly Arg Gly Phe Lys Asn Asp Glu Glu Ile Leu Ile Gly Asn Gly Thr
340 345 350
Ile Gln Lys Ile Gly Ile Trp Asp Gly Glu Glu Glu Phe His Val Arg
355 360 365
Cys Gly Glu Cys Arg Gly Ile Leu Lys Lys Ser Lys Met Arg Met Glu
370 375 380
Lys Leu Leu Ile Asn Ser Ala Lys Lys Glu Asp Met Lys Asp Leu Ile
385 390 395 400
Ile Leu Cys Met Val Phe Ser Gln Asp Thr Arg Met Phe Gln Gly Val
405 410 415
Arg Gly Glu Ile Asn Phe Leu Asn Arg Ala Gly Gln Leu Leu Ser Pro
420 425 430
Met Tyr Gln Leu Gln Arg Tyr Phe Leu Asn Arg Ser Asn Asp Leu Phe
435 440 445
Asp Gln Trp Gly Tyr Glu Glu Ser Pro Lys Ala Ser Glu Leu His Gly
450 455 460
Ile Asn Glu Leu Met Asn Ala Ser Asp Tyr Thr Leu Lys Gly Val Val
465 470 475 480
Val Thr Lys Asn Val Ile Asp Asp Phe Ser Ser Thr Glu Thr Glu Lys
485 490 495
Val Ser Ile Thr Lys Asn Leu Ser Leu Ile Lys Arg Thr Gly Glu Val
500 505 510
Ile Met Gly Ala Asn Asp Val Ser Glu Leu Glu Ser Gln Ala Gln Leu
515 520 525
Met Ile Thr Tyr Asp Thr Pro Lys Met Trp Glu Met Gly Thr Thr Lys
530 535 540
Glu Leu Val Gln Asn Thr Tyr Gln Trp Val Leu Lys Asn Leu Val Thr
545 550 555 560
Leu Lys Ala Gln Phe Leu Leu Gly Lys Glu Asp Met Phe Gln Trp Asp
565 570 575
Ala Phe Glu Ala Phe Glu Ser Ile Ile Pro Gln Lys Met Ala Gly Gln
580 585 590
Tyr Ser Gly Phe Ala Arg Ala Val Leu Lys Gln Met Arg Asp Gln Glu
595 600 605
Val Met Lys Thr Asp Gln Phe Ile Lys Leu Leu Pro Phe Cys Phe Ser
610 615 620
Pro Pro Lys Leu Arg Ser Asn Gly Glu Pro Tyr Gln Phe Leu Arg Leu
625 630 635 640
Ile Leu Lys Gly Gly Gly Glu Asn Phe Ile Glu Val Arg Lys Gly Ser
645 650 655
Pro Leu Phe Ser Tyr Asn Pro Gln Thr Glu Val Leu Thr Ile Cys Gly
660 665 670
Arg Met Met Ser Leu Lys Gly Lys Ile Glu Asp Glu Glu Arg Asn Arg
675 680 685
Ser Met Gly Asn Ala Val Leu Ala Gly Phe Leu Val Ser Gly Lys Tyr
690 695 700
Asp Pro Asp Leu Gly Asp Phe Lys Thr Ile Glu Glu Leu Glu Lys Leu
705 710 715 720
Lys Pro Gly Glu Lys Ala Asn Ile Leu Leu Tyr Gln Gly Lys Pro Val
725 730 735
Lys Val Val Lys Arg Lys Arg Tyr Ser Ala Leu Ser Asn Asp Ile Ser
740 745 750
Gln Gly Ile Lys Arg Gln Arg Met Thr Val Glu Ser Met Gly Trp Ala
755 760 765
Leu Ser
770
<210> 70
<211> 726
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 70
Met Asp Thr Phe Ile Thr Arg Asn Phe Gln Thr Thr Ile Ile Gln Lys
1 5 10 15
Ala Lys Asn Thr Met Ala Glu Phe Ser Glu Asp Pro Glu Leu Gln Pro
20 25 30
Ala Met Leu Phe Asn Ile Cys Val His Leu Glu Val Cys Tyr Val Ile
35 40 45
Ser Asp Met Asn Phe Leu Asp Glu Glu Gly Lys Ala Tyr Thr Ala Leu
50 55 60
Glu Gly Gln Gly Lys Glu Gln Asn Leu Arg Pro Gln Tyr Glu Val Ile
65 70 75 80
Glu Gly Met Pro Arg Asn Ile Ala Trp Met Val Gln Arg Ser Leu Ala
85 90 95
Gln Glu His Gly Ile Glu Thr Pro Arg Tyr Leu Ala Asp Leu Phe Asp
100 105 110
Tyr Lys Thr Lys Arg Phe Ile Glu Val Gly Ile Thr Lys Gly Leu Ala
115 120 125
Asp Asp Tyr Phe Trp Lys Lys Lys Glu Lys Leu Gly Asn Ser Met Glu
130 135 140
Leu Met Ile Phe Ser Tyr Asn Gln Asp Tyr Ser Leu Ser Asn Glu Ser
145 150 155 160
Ser Leu Asp Glu Glu Gly Lys Gly Arg Val Leu Ser Arg Leu Thr Glu
165 170 175
Leu Gln Ala Glu Leu Ser Leu Lys Asn Leu Trp Gln Val Leu Ile Gly
180 185 190
Glu Glu Asp Ile Glu Lys Gly Ile Asp Phe Lys Leu Gly Gln Thr Ile
195 200 205
Ser Lys Leu Arg Asp Ile Ser Val Pro Ala Gly Phe Ser Asn Phe Glu
210 215 220
Gly Met Arg Ser Tyr Ile Asp Asn Ile Asp Pro Lys Gly Ala Ile Glu
225 230 235 240
Arg Asn Leu Ala Arg Met Ser Pro Leu Val Ser Val Thr Pro Lys Lys
245 250 255
Leu Lys Trp Glu Asp Leu Arg Pro Ile Gly Pro His Ile Tyr Asn His
260 265 270
Glu Leu Pro Glu Val Pro Tyr Asn Ala Phe Leu Leu Met Ser Asp Glu
275 280 285
Leu Gly Leu Ala Asn Met Thr Glu Gly Lys Ser Lys Lys Pro Lys Thr
290 295 300
Leu Ala Lys Glu Cys Leu Glu Lys Tyr Ser Thr Leu Arg Asp Gln Thr
305 310 315 320
Asp Pro Ile Leu Ile Met Lys Ser Glu Lys Ala Asn Glu His Phe Leu
325 330 335
Trp Lys Leu Trp Arg Asp Cys Val Asn Thr Ile Ser Asn Glu Glu Thr
340 345 350
Ser Asn Glu Leu Gln Lys Thr Asn Tyr Ala Lys Trp Ala Thr Gly Asp
355 360 365
Gly Leu Thr Tyr Gln Lys Ile Met Lys Glu Val Ala Ile Asp Asp Glu
370 375 380
Thr Met Tyr Gln Glu Glu Pro Lys Ile Pro Asn Lys Cys Arg Val Ala
385 390 395 400
Ala Trp Val Gln Thr Glu Met Asn Leu Leu Ser Thr Leu Thr Ser Lys
405 410 415
Arg Ala Leu Asp Leu Pro Glu Ile Gly Pro Asp Val Ala Pro Val Glu
420 425 430
His Val Gly Ser Glu Arg Arg Lys Tyr Phe Val Asn Glu Ile Asn Tyr
435 440 445
Cys Lys Ala Ser Thr Val Met Met Lys Tyr Val Leu Phe His Thr Ser
450 455 460
Leu Leu Asn Glu Ser Asn Ala Ser Met Gly Lys Tyr Lys Val Ile Pro
465 470 475 480
Ile Thr Asn Arg Val Val Asn Glu Lys Gly Glu Ser Phe Asp Met Leu
485 490 495
Tyr Gly Leu Ala Val Lys Gly Gln Ser His Leu Arg Gly Asp Thr Asp
500 505 510
Val Val Thr Val Val Thr Phe Glu Phe Ser Ser Thr Asp Pro Arg Val
515 520 525
Asp Ser Gly Lys Trp Pro Lys Tyr Thr Val Phe Arg Ile Gly Ser Leu
530 535 540
Phe Val Ser Gly Arg Glu Lys Ser Val Tyr Leu Tyr Cys Arg Val Asn
545 550 555 560
Gly Thr Asn Lys Ile Gln Met Lys Trp Gly Met Glu Ala Arg Arg Cys
565 570 575
Leu Leu Gln Ser Met Gln Gln Met Glu Ala Ile Val Glu Gln Glu Ser
580 585 590
Ser Ile Gln Gly Tyr Asp Met Thr Lys Ala Cys Phe Lys Gly Asp Arg
595 600 605
Val Asn Ser Pro Lys Thr Phe Ser Ile Gly Thr Gln Glu Gly Lys Leu
610 615 620
Val Lys Gly Ser Phe Gly Lys Ala Leu Arg Val Ile Phe Thr Lys Cys
625 630 635 640
Leu Met His Tyr Val Phe Gly Asn Ala Gln Leu Glu Gly Phe Ser Ala
645 650 655
Glu Ser Arg Arg Leu Leu Leu Leu Ile Gln Ala Leu Lys Asp Arg Lys
660 665 670
Gly Pro Trp Val Phe Asp Leu Glu Gly Met Tyr Ser Gly Ile Glu Glu
675 680 685
Cys Ile Ser Asn Asn Pro Trp Val Ile Gln Ser Ala Tyr Trp Phe Asn
690 695 700
Glu Trp Leu Gly Phe Glu Lys Glu Gly Ser Lys Val Leu Glu Ser Val
705 710 715 720
Asp Glu Ile Met Asp Glu
725
<210> 71
<211> 560
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 71
Met Ser Asn Met Asp Ile Asp Gly Ile Asn Thr Gly Ile Ile Asp Lys
1 5 10 15
Thr Pro Glu Glu Ile Thr Ser Gly Thr Ser Gly Ala Thr Arg Pro Ile
20 25 30
Ile Arg Pro Ala Thr Leu Ala Ser Pro Ser Asn Lys Arg Thr Arg Asn
35 40 45
Pro Ser Pro Glu Arg Ala Thr Thr Ser Ser Glu Ala Asp Val Gly Arg
50 55 60
Lys Thr Gln Lys Lys Gln Thr Pro Thr Glu Ile Lys Lys Ser Val Tyr
65 70 75 80
Asn Met Val Val Lys Leu Gly Glu Phe Tyr Asn Gln Met Met Val Lys
85 90 95
Ala Gly Leu Asn Asp Asp Met Glu Arg Asn Leu Ile Gln Asn Ala His
100 105 110
Ala Val Glu Arg Ile Leu Leu Ala Ala Thr Asp Asp Lys Lys Thr Glu
115 120 125
Phe Gln Lys Lys Lys Asn Ala Arg Asp Val Lys Glu Gly Lys Glu Glu
130 135 140
Ile Asp His Asn Lys Thr Gly Gly Thr Phe Tyr Lys Met Val Arg Asp
145 150 155 160
Asn Lys Thr Ile Tyr Phe Ser Pro Ile Arg Ile Thr Phe Leu Lys Glu
165 170 175
Glu Val Lys Thr Met Tyr Lys Thr Thr Met Gly Ser Asp Gly Phe Ser
180 185 190
Gly Leu Asn His Ile Met Ile Gly His Ser Gln Thr Asn Asp Val Cys
195 200 205
Phe Gln Arg Ser Lys Ala Leu Lys Arg Val Gly Leu Asp Pro Ser Leu
210 215 220
Ile Ser Thr Phe Ala Gly Ser Thr Leu Pro Arg Arg Ser Gly Thr Thr
225 230 235 240
Gly Val Ala Thr Lys Gly Gly Gly Thr Leu Val Ala Glu Ala Ile Arg
245 250 255
Phe Ile Gly Arg Ala Met Ala Asp Arg Gly Leu Leu Arg Asp Ile Arg
260 265 270
Ala Lys Thr Ala Tyr Glu Lys Ile Leu Leu Asn Leu Lys Asn Lys Cys
275 280 285
Ser Ala Pro Gln Gln Lys Ala Leu Val Asp Gln Val Ile Gly Ser Arg
290 295 300
Asn Pro Gly Ile Ala Asp Ile Glu Asp Leu Thr Leu Leu Ala Arg Ser
305 310 315 320
Met Val Val Val Arg Pro Ser Val Ala Ser Lys Val Val Leu Pro Ile
325 330 335
Ser Ile Tyr Ala Lys Ile Pro Gln Leu Gly Phe Asn Val Glu Glu Tyr
340 345 350
Ser Met Val Gly Tyr Glu Ala Met Ala Leu Tyr Asn Met Ala Thr Pro
355 360 365
Val Ser Ile Leu Arg Met Gly Asp Asp Ala Lys Asp Lys Ser Gln Leu
370 375 380
Phe Phe Met Ser Cys Phe Gly Ala Ala Tyr Glu Asp Leu Arg Val Leu
385 390 395 400
Ser Ala Leu Thr Gly Thr Glu Phe Lys Pro Arg Ser Ala Leu Lys Cys
405 410 415
Lys Gly Phe His Val Pro Ala Lys Glu Gln Val Glu Gly Met Gly Ala
420 425 430
Ala Leu Met Ser Ile Lys Leu Gln Phe Trp Ala Pro Met Thr Arg Ser
435 440 445
Gly Gly Asn Glu Val Gly Gly Asp Gly Gly Ser Gly Gln Ile Ser Cys
450 455 460
Ser Pro Val Phe Ala Val Glu Arg Pro Ile Ala Leu Ser Lys Gln Ala
465 470 475 480
Val Arg Arg Met Leu Ser Met Asn Ile Glu Gly Arg Asp Ala Asp Val
485 490 495
Lys Gly Asn Leu Leu Lys Met Met Asn Asp Ser Met Ala Lys Lys Thr
500 505 510
Asn Gly Asn Ala Phe Ile Gly Lys Lys Met Phe Gln Ile Ser Asp Lys
515 520 525
Asn Lys Thr Asn Pro Val Glu Ile Pro Ile Lys Gln Thr Ile Pro Ser
530 535 540
Phe Phe Phe Gly Arg Asp Thr Ala Glu Asp Tyr Asp Asp Leu Asp Tyr
545 550 555 560
<210> 72
<211> 281
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 72
Met Ala Asp Asn Met Thr Thr Thr Gln Ile Glu Val Gly Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Asn Ala Thr Ile Asn Phe Glu Ala Gly Ile Leu Glu Cys Tyr Glu
20 25 30
Arg Leu Ser Trp Gln Arg Ala Leu Asp Tyr Pro Gly Gln Asp Arg Leu
35 40 45
Asn Arg Leu Lys Arg Lys Leu Glu Ser Arg Ile Lys Thr His Asn Lys
50 55 60
Ser Glu Pro Glu Ser Lys Arg Met Ser Leu Glu Glu Arg Lys Ala Ile
65 70 75 80
Gly Val Lys Met Met Lys Val Leu Leu Phe Met Asn Pro Ser Ala Gly
85 90 95
Ile Glu Gly Phe Glu Pro Tyr Cys Met Lys Asn Ser Ser Asn Ser Asn
100 105 110
Cys Pro Asn Cys Asn Trp Ala Asp Tyr Pro Pro Thr Ser Gly Lys Cys
115 120 125
Leu Asp Asp Ile Glu Glu Glu Pro Glu Asn Val Asp Asp Pro Thr Glu
130 135 140
Ile Val Leu Arg Asp Met Asn Asn Lys Asp Ala Arg Gln Lys Ile Lys
145 150 155 160
Glu Glu Val Asn Thr Gln Lys Glu Gly Lys Phe Arg Leu Thr Ile Gln
165 170 175
Arg Asp Ile Arg Asn Val Leu Ser Leu Arg Val Leu Val Asn Gly Thr
180 185 190
Phe Leu Lys His Pro Asn Gly Tyr Lys Ser Leu Ser Thr Leu His Arg
195 200 205
Leu Asn Ala Tyr Asp Gln Ser Gly Arg Leu Val Ala Lys Leu Val Ala
210 215 220
Thr Asp Asp Leu Thr Val Glu Asp Glu Glu Asp Gly His Arg Ile Leu
225 230 235 240
Asn Ser Leu Phe Glu Arg Phe Asn Glu Gly His Ser Lys Pro Ile Arg
245 250 255
Ala Ala Glu Thr Ala Val Gly Val Leu Ser Gln Phe Gly Gln Glu His
260 265 270
Arg Leu Ser Pro Glu Glu Gly Asp Asn
275 280
<210> 73
<211> 1111
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 73
agcagaagca cgcactttct taaaatgtcg ctgtttggag acacaattgc ctacctgctt 60
tcattgacag aagatggaga aggcaaagca gaactagcag aaaaattaca ctgttggttc 120
ggtgggaaag aatttgacct agactctgcc ttggaatgga taaaaaacaa aagatgctta 180
actgacatac agaaagcact aattggcgcc tctatctgct ttttaaaacc caaagaccag 240
gaaagaaaaa gaagattcat cacagagccc ctatcaggaa tggggacaac agcaacaaaa 300
aagaagggcc tgattctagc tgagagaaaa atgagaagat gtgtgagctt ccatgaagca 360
tttgaaatag cagaaggcca tgaaagctca gcgttactat attgtctcat ggtcatgtac 420
ctgaatcctg gaaattattc aatgcaagta aaactaggaa cgctctgtgc tttgtgcgaa 480
aaacaagcat cacattcaca cagggctcat agcagagcag cgagatcttc agtgcctgga 540
gtgagacggg aaatgcagat ggtctcagct atgaacacag caaaaacaat gaatggaatg 600
ggaaaaggag aagacgttca aaaactggca gaagaactgc aaagcaacat tggagtattg 660
agatctcttg gggcaagtca aaagaatggg gaaggaattg caaaggatgt aatggaagtg 720
ctaaagcaga gctctatggg aaattcagct cttgtgaaga aatacctata atgctcgaac 780
catttcagat tctttcaatt tgttagatag ctaaaagggg ccaaataaag agacaataaa 840
cagagaggta tcaattttga gacacagtta ccaaaaagaa atccaggcca aagaagcaat 900
gaaggaagta ctctctgaca acatggaggt attgagtgac cacatagtaa ttgaggggct 960
ttctgctgaa gagataataa aaatgggtga aacagttttg gaggtagaag aattgcatta 1020
aattcaattt ttactgtact tcttactatg catttaagca aattgtaatc aatgtcagca 1080
aataaactgg aaaaagtgcg ttgtttctac t 1111
<210> 74
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 74
Met Leu Glu Pro Leu Gln Ile Leu Ser Ile Cys Ser Phe Ile Leu Ser
1 5 10 15
Ala Leu His Phe Met Ala Trp Thr Ile Gly His Leu Asn Gln Ile Arg
20 25 30
Arg Gly Val Asn Leu Lys Ile Gln Ile Arg Asn Pro Asn Lys Glu Ala
35 40 45
Ile Asn Arg Glu Val Ser Ile Leu Arg His Asn Tyr Gln Lys Glu Ile
50 55 60
Gln Ala Lys Glu Thr Met Lys Lys Ile Leu Ser Asp Asn Met Glu Val
65 70 75 80
Leu Gly Asp His Ile Val Val Glu Gly Leu Ser Thr Asp Glu Ile Ile
85 90 95
Lys Met Gly Glu Thr Val Leu Glu Val Glu Glu Leu Gln
100 105
<210> 75
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 75
Gly Ser Gly
1
<210> 76
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 76
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 77
<211> 1273
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 77
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
1010 1015 1020
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys
1025 1030 1035
Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
1040 1045 1050
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val
1055 1060 1065
Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His
1070 1075 1080
Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn
1085 1090 1095
Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln
1100 1105 1110
Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val
1115 1120 1125
Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro
1130 1135 1140
Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn
1145 1150 1155
His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn
1160 1165 1170
Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu
1175 1180 1185
Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu
1190 1195 1200
Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu
1205 1210 1215
Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met
1220 1225 1230
Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro
1250 1255 1260
Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270
<210> 78
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 78
Met Leu Glu Pro Phe Gln Ile Leu Ser Ile Cys
1 5 10
<210> 79
<211> 1423
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 79
agcaaaagca ggtagatatt gaaagatgag tcttctaacc gaggtcgaaa cgtacgtact 60
ctctatcatc ccgtcaggcc ccctcaaagc cgagatcgca cagagacttg aagatgtctt 120
tgcagggaag aacaccgatc ttgaggttct catggaatgg ctaaagacaa gaccaatcct 180
gtcacctctg actaagggga ttttaggatt tgtgttcacg ctcaccgtgc ccagtgagcg 240
aggactgcag cgtagacgct ttgtccaaaa tgcccttaat gggaacgggg atccaaataa 300
catggacaaa gcagttaaac tgtataggaa gctcaagagg gagataacat tccatggggc 360
caaagaaatc tcactcagtt attctgctgg tgcacttgcc agttgtatgg gcctcatata 420
caacaggatg ggggctgtga ccactgaagt ggcatttggc ctggtatgtg caacctgtga 480
acagattgct gactcccagc atcggtctca taggcaaatg gtgacaacaa ccaatccact 540
aatcagacat gagaacagaa tggttttagc cagcactaca gctaaggcta tggagcaaat 600
ggctggatcg agtgagcaag cagcagaggc catggaggtt gctagtcagg ctagacaaat 660
ggtgcaagcg atgagaacca ttggaactca tcctagctcc agtgctggtc tgaaaaatga 720
tcttcttgaa aatttgcagg cctatcagaa acgaatgggg gtgcagatgc aacggttcaa 780
gtgatcctaa tattacaaac ttgtgccctt ttggtgaagt ttttaacgcc accagatttg 840
catctgttta tgcttggaac aggaagagaa tcagcaactg tgttgctgat tattctgtcc 900
tatataattc cgcatcattt tccactttta agtgttatgg agtgtctcct actaaattaa 960
atgatctctg ctttactaat gtctatgcag attcatttgt aattagaggt gatgaagtca 1020
gacaaatcgc tccagggcaa actggaaaga ttgctgatta taattataaa ttaccagatg 1080
attttacagg ctgcgttata gcttggaatt ctaacaatct tgattctaag gttggtggta 1140
attataatta cctgtataga ttgtttagga agtctaatct caaacctttt gagagagata 1200
tttcaactga aatctatcag gccggtagca caccttgtaa tggtgttgaa ggttttaatt 1260
gttactttcc tttacaatca tatggtttcc aacccactaa tggtgttggt taccaaccat 1320
acagagtagt agtactttct tttgaacttc tacatgcacc agcaactgtt tgtggaccta 1380
aaaagtctat agagctggag taaaaaacta ccttgtttct act 1423
<210> 80
<211> 1774
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 80
agcaaaagca gggtgacaaa aacataatgg atccaaacac tgtgtcaagc tttcaagtag 60
attgctttct ttggcatgtc cgcaaacgag ttgcagacca agaactaggc gatcccccat 120
tccttgatcg gcttcgccga gatcagaaat ccctaagagg aaggggcagt actctcggtc 180
tggacatcaa gacagccaca cgtgctggaa agcagatagt ggagcggatt ctgaaagaag 240
aatccgatga ggcacttaaa atgaccatgg cctctgtacc tgcgtcgcgt tacctaactg 300
acatgactct tgaggaaatg tcaagggact ggtccatgct catacccaag cagaaagtgg 360
caggccctct ttgtatcaaa atggaccagg cgatcatgga taagaacatc atactgaaag 420
cgaacttcag tgtgattttt gaccggctgg agactctaat attgctaagg gctttcaccg 480
aagagggagc aattgttggc gaaatttcac cattgccttc tctcccggga catactgctg 540
aggttgtcaa aaatgcagtt ggagtcctaa tcggaggact tgaatggaac gataacacag 600
ttcgagtctc tgaaactcta cagagattcg cttggagaag cagtaatgag aacgggagac 660
ctccactgac tccaaaacag aaacgagaaa tggcgggaac aattaggtca gaagttggta 720
gtggaaatat tacaaacttg tgcccttttg gtgaagtttt taacgccacc agatttgcat 780
ctgtttatgc ttggaacagg aagagaatca gcaactgtgt tgctgattat tctgtcctat 840
ataattccgc atcattttcc acttttaagt gttatggagt gtctcctact aaattaaatg 900
atctctgctt tactaatgtc tatgcagatt catttgtaat tagaggtgat gaagtcagac 960
aaatcgctcc agggcaaact ggaaagattg ctgattataa ttataaatta ccagatgatt 1020
ttacaggctg cgttatagct tggaattcta acaatcttga ttctaaggtt ggtggtaatt 1080
ataattacct gtatagattg tttaggaagt ctaatctcaa accttttgag agagatattt 1140
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actttccttt acaatcatat ggtttccaac ccactaatgg tgttggttac caaccataca 1260
gagtagtagt actttctttt gaacttctac atgcaccagc aactgtttgt ggacctaaaa 1320
agtctggatc aggtgcaact aactttagtc ttcttaaaca agctggtgat gttgaagaaa 1380
atcctggacc taatacagtg tctagcttcc aggacatact gctgaggatg tcaaaaatgc 1440
agttggagtc ctcatcggag gacttgaatg gaatgataac acagttcgag tctctgaaac 1500
tctacagaga ttcgcttgga gaagcagtaa tgagaatggg agacctccac tcactccaaa 1560
acagaaacga gaaatggcgg gaacaattag gtcagaagtt tgaagaaata agatggttga 1620
ttgaagaagt gagacacaaa ctgaagataa cagagaatag ttttgagcaa ataacattta 1680
tgcaagcctt acatctattg cttgaagtgg agcaagagat aagaactttc tcgtttcagc 1740
ttatttagta ctaaaaaaca cccttgtttc tact 1774
<210> 81
<211> 1482
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 81
agcaaaagca ggtagatatt gaaagatgag tcttctaacc gaggtcgaaa cttacgtact 60
ctctatcatc ccgtcaggcc ccctcaaagc cgagatcgca cagagacttg aagatgtctt 120
tgcagggaag aacaccgatc ttgaggttct catggaatgg ctaaagacaa gaccaatcct 180
gtcacctctg actaagggga ttttaggatt tgtgttcacg ctcaccgtgc ccagtgagcg 240
aggactgcag cgtagacgct ttgtccaaaa tgcccttaat gggaacgggg atccaaataa 300
catggacaaa gcagttaaac tgtataggaa gctcaagagg gagataacat tccatggggc 360
caaagaaatc tcactcagtt attctgctgg tgcacttgcc agttgtatgg gcctcatata 420
caacaggatg ggggctgtga ccactgaagt ggcatttggc ctggtatgtg caacctgtga 480
acagattgct gactcccagc atcggtctca taggcaaatg gtgacaacaa ccaatccact 540
aatcagacat gagaacagaa tggttttagc cagcactaca gctaaggcta tggagcaaat 600
ggctggatcg agtgagcaag cagcagaggc catggaggtt gctagtcagg ctagacaaat 660
ggtgcaagcg atgagaacca ttggaactca tcctagctcc agtgctggtc tgaaaaatga 720
tcttcttgaa aatttgcaag cctatcagaa acgaatgggg gtgcagatgc aacggttcaa 780
gggatcaggt gcaactaact ttagtcttct taaacaagct ggtgatgttg aagaaaatcc 840
tggacctaat attacaaact tgtgcccttt tggtgaagtt tttaacgcca ccagatttgc 900
atctgtttat gcttggaaca ggaagagaat cagcaactgt gttgctgatt attctgtcct 960
atataattcc gcatcatttt ccacttttaa gtgttatgga gtgtctccta ctaaattaaa 1020
tgatctctgc tttactaatg tctatgcaga ttcatttgta attagaggtg atgaagtcag 1080
acaaatcgct ccagggcaaa ctggaaagat tgctgattat aattataaat taccagatga 1140
ttttacaggc tgcgttatag cttggaattc taacaatctt gattctaagg ttggtggtaa 1200
ttataattac ctgtatagat tgtttaggaa gtctaatctc aaaccttttg agagagatat 1260
ttcaactgaa atctatcagg ccggtagcac accttgtaat ggtgttgaag gttttaattg 1320
ttactttcct ttacaatcat atggtttcca acccactaat ggtgttggtt accaaccata 1380
cagagtagta gtactttctt ttgaacttct acatgcacca gcaactgttt gtggacctaa 1440
aaagtctata gagctggagt aaaaaactac cttgtttcta ct 1482
<210> 82
<211> 1424
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 82
agcaaaagca ggtagatatt gaaagatgag tcttctaacc gaggtcgaaa cttacgtact 60
ctctatcatc ccgtcaggcc ccctcaaagc cgagatcgca cagagacttg aagatgtctt 120
tgcagggaag aacaccgatc ttgaggttct catggaatgg ctaaagacaa gaccaatcct 180
gtcacctctg actaagggga ttttaggatt tgtgttcacg ctcaccgtgc ccagtgagcg 240
aggactgcag cgtagacgct ttgtccaaaa tgcccttaat gggaacgggg atccaaataa 300
catggacaaa gcagttaaac tgtataggaa gctcaagagg gagataacat tccatggggc 360
caaagaaatc tcactcagtt attctgctgg tgcacttgcc agttgtatgg gcctcatata 420
caacaggatg ggggctgtga ccactgaagt ggcatttggc ctggtatgtg caacctgtga 480
acagattgct gactcccagc atcggtctca taggcaaatg gtgacaacaa ccaatccact 540
aatcagacat gagaacagaa tggttttagc cagcactaca gctaaggcta tggagcaaat 600
ggctggatcg agtgagcaag cagcagaggc catggaggtt gctagtcagg ctagacaaat 660
ggtgcaagcg atgagaacca ttggaactca tcctagctcc agtgctggtc tgaaaaatga 720
tcttcttgaa aatttgcaag cctatcagaa acgaatgggg gtgcagatgc aacggttcaa 780
gtaatgccta atattacaaa cttgtgccct tttggtgaag tttttaacgc caccagattt 840
gcatctgttt atgcttggaa caggaagaga atcagcaact gtgttgctga ttattctgtc 900
ctatataatt ccgcatcatt ttccactttt aagtgttatg gagtgtctcc tactaaatta 960
aatgatctct gctttactaa tgtctatgca gattcatttg taattagagg tgatgaagtc 1020
agacaaatcg ctccagggca aactggaaag attgctgatt ataattataa attaccagat 1080
gattttacag gctgcgttat agcttggaat tctaacaatc ttgattctaa ggttggtggt 1140
aattataatt acctgtatag attgtttagg aagtctaatc tcaaaccttt tgagagagat 1200
atttcaactg aaatctatca ggccggtagc acaccttgta atggtgttga aggttttaat 1260
tgttactttc ctttacaatc atatggtttc caacccacta atggtgttgg ttaccaacca 1320
tacagagtag tagtactttc ttttgaactt ctacatgcac cagcaactgt ttgtggacct 1380
aaaaagtcta tagagctgga gtaaaaaact accttgtttc tact 1424
<210> 83
<211> 1472
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 83
agcagaagca cgcactttct taaaatgtcg ctgtttggag acacaattgc ctacctgctt 60
tcattgacag aagatggaga aggcaaagca gaactagcag aaaaattaca ctgttggttc 120
ggtgggaaag aatttgacct agactctgcc ttggaatgga taaaaaacaa aagatgctta 180
actgacatac agaaagcact aattggcgcc tctatctgct ttttaaaacc caaagaccag 240
gaaagaaaaa gaagattcat cacagagccc ctatcaggaa tggggacaac agcaacaaaa 300
aagaagggcc tgattctagc tgagagaaaa atgagaagat gtgtgagctt ccatgaagca 360
tttgaaatag cagaaggcca tgaaagctca gcgttactat attgtctcat ggtcatgtac 420
ctgaatcctg gaaattattc aatgcaagta aaactaggaa cgctctgtgc tttgtgcgaa 480
aaacaagcat cacattcaca cagggctcat agcagagcag cgagatcttc agtgcctgga 540
gtgagacggg aaatgcagat ggtctcagct atgaacacag caaaaacaat gaatggaatg 600
ggaaaaggag aagacgttca aaaactggca gaagaactgc aaagcaacat tggagtattg 660
agatctcttg gggcaagtca aaagaatggg gaaggaattg caaaggatgt aatggaagtg 720
ctaaagcaga gctctatggg aaattcagct cttgtgaaga aatacctata atgctcgaat 780
caattgttag atttcctaat attacaaact tgtgcccttt tggtgaagtt tttaacgcca 840
ccagatttgc atctgtttat gcttggaaca ggaagagaat cagcaactgt gttgctgatt 900
attctgtcct atataattcc gcatcatttt ccacttttaa gtgttatgga gtgtctccta 960
ctaaattaaa tgatctctgc tttactaatg tctatgcaga ttcatttgta attagaggtg 1020
atgaagtcag acaaatcgct ccagggcaaa ctggaaagat tgctgattat aattataaat 1080
taccagatga ttttacaggc tgcgttatag cttggaattc taacaatctt gattctaagg 1140
ttggtggtaa ttataattac ctgtatagat tgtttaggaa gtctaatctc aaaccttttg 1200
agagagatat ttcaactgaa atctatcagg ccggtagcac accttgtaat ggtgttgaag 1260
gttttaattg ttactttcct ttacaatcat atggtttcca acccactaat ggtgttggtt 1320
accaaccata cagagtagta gtactttctt ttgaacttct acatgcacca gcaacagttt 1380
aaattcaatt tttactgtac ttcttactat gcatttaagc aaattgtaat caatgtcagc 1440
aaataaactg gaaaaagtgc gttgtttcta ct 1472
<210> 84
<211> 1508
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 84
agcagaagca cgcactttct taaaatgtcg ctgtttggag acacaattgc ctacctgctt 60
tcattgacag aagatggaga aggcaaagca gaactagcag aaaaattaca ctgttggttc 120
ggtgggaaag aatttgacct agactctgcc ttggaatgga taaaaaacaa aagatgctta 180
actgacatac agaaagcact aattggcgcc tctatctgct ttttaaaacc caaagaccag 240
gaaagaaaaa gaagattcat cacagagccc ctatcaggaa tggggacaac agcaacaaaa 300
aagaagggcc tgattctagc tgagagaaaa atgagaagat gtgtgagctt ccatgaagca 360
tttgaaatag cagaaggcca tgaaagctca gcgttactat attgtctcat ggtcatgtac 420
ctgaatcctg gaaattattc aatgcaagta aaactaggaa cgctctgtgc tttgtgcgaa 480
aaacaagcat cacattcaca cagggctcat agcagagcag cgagatcttc agtgcctgga 540
gtgagacggg aaatgcagat ggtctcagct atgaacacag caaaaacaat gaatggaatg 600
ggaaaaggag aagacgttca aaaactggca gaagaactgc aaagcaacat tggagtattg 660
agatctcttg gggcaagtca aaagaatggg gaaggaattg caaaggatgt aatggaagtg 720
ctaaagcaga gctctatggg aaattcagct cttgtgaaga aatacctata atgctcgaac 780
catttcagat tctttcaatt gttagatttc ctaatattac aaacttgtgc ccttttggtg 840
aagtttttaa cgccaccaga tttgcatctg tttatgcttg gaacaggaag agaatcagca 900
actgtgttgc tgattattct gtcctatata attccgcatc attttccact tttaagtgtt 960
atggagtgtc tcctactaaa ttaaatgatc tctgctttac taatgtctat gcagattcat 1020
ttgtaattag aggtgatgaa gtcagacaaa tcgctccagg gcaaactgga aagattgctg 1080
attataatta taaattacca gatgatttta caggctgcgt tatagcttgg aattctaaca 1140
atcttgattc taaggttggt ggtaattata attacctgta tagattgttt aggaagtcta 1200
atctcaaacc ttttgagaga gatatttcaa ctgaaatcta tcaggccggt agcacacctt 1260
gtaatggtgt tgaaggtttt aattgttact ttcctttaca atcatatggt ttccaaccca 1320
ctaatggtgt tggttaccaa ccatacagag tagtagtact ttcttttgaa cttctacatg 1380
caccagcaac agttttggag gtagaagaat tgcattaaat tcaattttta ctgtacttct 1440
tactatgcat ttaagcaaat tgtaatcaat gtcagcaaat aaactggaaa aagtgcgttg 1500
tttctact 1508
<210> 85
<211> 1165
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 85
agcaaaagca gggtgacaaa aacataatgg atccaaacac tgtgtcaagc tttcaagtag 60
attgctttct ttggcatgtc cgcaaacgag ttgcagacca agaactaggc gatcccccat 120
tccttgatcg gcttcgccga gatcagaaat ccctaagagg aaggggcagt actctcggtc 180
tggacatcaa gacagccaca cgtgctggaa agcagatagt ggagcggatt ctgaaagaag 240
aatccgatga ggcacttaaa atgaccatgg cctctgtacc tgcgtcgcgt tacctaactg 300
acatgactct tgaggaaatg tcaagggact ggtccatgct catacccaag cagaaagtgg 360
caggccctct ttgtatcaaa atggaccagg cgatcatgga taagaacatc atactgaaag 420
cgaacttcag tgtgattttt gaccggctgg agactctaat attgctaagg gctttcaccg 480
aagagggagc aattgttggc gaaatttcac cattgccttc tctcccggga catactgctg 540
aggttgtcaa gaatgctgtt ggagtgctaa tcggaggact tgaatggaac gacaacactg 600
tgcgagtcag cgaaactttg cagagatttg cttggagaag ctctaatgag aacgggagac 660
ctccactgac tccaaagcag aaacgagaca tggctggaac aattagaagc gaagttggat 720
caggtgcaac taactttagt cttcttaaac aagctggtga tgttgaagaa aatcctggac 780
ctaatacagt gtctagcttc caggacatac tgctgaggat gtcaaaaatg cagttggagt 840
cctcatcgga ggacttgaat ggaatgataa cacagttcga gtctctgaaa ctctacagag 900
attcgcttgg agaagcagta atgagaatgg gagacctcca ctcactccaa aacagaaacg 960
agaaatggcg ggaacaatta ggtcagaagt ttgaagaaat aagatggttg attgaagaag 1020
tgagacacaa actgaagata acagagaata gttttgagca aataacattt atgcaagcct 1080
tacatctatt gcttgaagtg gagcaagaga taagaacttt ctcgtttcag cttatttagt 1140
actaaaaaac acccttgttt ctact 1165
<210> 86
<211> 1828
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 86
agcaaaagca gggtgacaaa aacataatgg atccaaacac tgtgtcaagc tttcaagtag 60
attgctttct ttggcatgtc cgcaaacgag ttgcagacca agaactaggc gatcccccat 120
tccttgatcg gcttcgccga gatcagaaat ccctaagagg aaggggcagt actctcggtc 180
tggacatcaa gacagccaca cgtgctggaa agcagatagt ggagcggatt ctgaaagaag 240
aatccgatga ggcacttaaa atgaccatgg cctctgtacc tgcgtcgcgt tacctaactg 300
acatgactct tgaggaaatg tcaagggact ggtccatgct catacccaag cagaaagtgg 360
caggccctct ttgtatcaaa atggaccagg cgatcatgga taagaacatc atactgaaag 420
cgaacttcag tgtgattttt gaccggctgg agactctaat attgctaagg gctttcaccg 480
aagagggagc aattgttggc gaaatttcac cattgccttc tctcccggga catactgctg 540
aggttgtcaa aaatgcagtt ggagtcctaa tcggaggact tgaatggaac gataacacag 600
ttcgagtctc tgaaactcta cagagattcg cttggagaag cagtaatgag aacgggagac 660
ctccactgac tccaaaacag aaacgagaaa tggcgggaac aattaggtca gaagttggta 720
gtggagaagg tagaggaagt cttctaacat gtggtgatgt agaagagaat ccaggtccta 780
atattacaaa cttgtgccct tttggtgaag tttttaacgc caccagattt gcatctgttt 840
atgcttggaa caggaagaga atcagcaact gtgttgctga ttattctgtc ctatataatt 900
ccgcatcatt ttccactttt aagtgttatg gagtgtctcc tactaaatta aatgatctct 960
gctttactaa tgtctatgca gattcatttg taattagagg tgatgaagtc agacaaatcg 1020
ctccagggca aactggaaag attgctgatt ataattataa attaccagat gattttacag 1080
gctgcgttat agcttggaat tctaacaatc ttgattctaa ggttggtggt aattataatt 1140
acctgtatag attgtttagg aagtctaatc tcaaaccttt tgagagagat atttcaactg 1200
aaatctatca ggccggtagc acaccttgta atggtgttga aggttttaat tgttactttc 1260
ctttacaatc atatggtttc caacccacta atggtgttgg ttaccaacca tacagagtag 1320
tagtactttc ttttgaactt ctacatgcac cagcaactgt ttgtggacct aaaaagtctg 1380
gatcaggtgc aactaacttt agtcttctta aacaagctgg tgatgttgaa gaaaatcctg 1440
gacctaatac agtgtctagc ttccaggaca tactgctgag gatgtcaaaa atgcagttgg 1500
agtcctcatc ggaggacttg aatggaatga taacacagtt cgagtctctg aaactctaca 1560
gagattcgct tggagaagca gtaatgagaa tgggagacct ccactcactc caaaacagaa 1620
acgagaaatg gcgggaacaa ttaggtcaga agtttgaaga aataagatgg ttgattgaag 1680
aagtgagaca caaactgaag ataacagaga atagttttga gcaaataaca tttatgcaag 1740
ccttacatct attgcttgaa gtggagcaag agataagaac tttctcgttt cagcttattt 1800
agtactaaaa aacacccttg tttctact 1828
<210> 87
<211> 1984
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 87
agcaaaagca gggtgacaaa aacataatgg atccaaacac tgtgtcaagc tttcaagtag 60
attgctttct ttggcatgtc cgcaaacgag ttgcagacca agaactaggc gatcccccat 120
tccttgatcg gcttcgccga gatcagaaat ccctaagagg aaggggcagt actctcggtc 180
tggacatcaa gacagccaca cgtgctggaa agcagatagt ggagcggatt ctgaaagaag 240
aatccgatga ggcacttaaa atgaccatgg cctctgtacc tgcgtcgcgt tacctaactg 300
acatgactct tgaggaaatg tcaagggact ggtccatgct catacccaag cagaaagtgg 360
caggccctct ttgtatcaaa atggaccagg cgatcatgga taagaacatc atactgaaag 420
cgaacttcag tgtgattttt gaccggctgg agactctaat attgctaagg gctttcaccg 480
aagagggagc aattgttggc gaaatttcac cattgccttc tctcccggga catactgctg 540
aggttgtcaa aaatgcagtt ggagtcctaa tcggaggact tgaatggaac gataacacag 600
ttcgagtctc tgaaactcta cagagattcg cttggagaag cagtaatgag aacgggagac 660
ctccactgac tccaaaacag aaacgagaaa tggcgggaac aattaggtca gaagttggta 720
gtggacctgc atacactaat tctttcacac gtggtgttta ttaccctgac aaagttttca 780
gatcctcagt tttacattca actcaggact tgttcttacc tttcttttcc aatgttactt 840
ggttccatgc tatacatgtc tctgggacca atggtactaa gaggtttgat aaccctgtcc 900
taccatttaa tgatggtgtt tattttgctt ccactgagaa gtctaacata ataagaggct 960
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ctaatgttgt tattaaagtc tgtgaatttc aattttgtaa tgatccattt ttgggtgttt 1080
attaccacaa aaacaacaaa agttggatgg aaagtgagtt cagagtttat tctagtgcga 1140
ataattgcac ttttgaatat gtctctcagc cttttcttat ggaccttgaa ggaaaacagg 1200
gtaatttcaa aaatcttagg gaatttgtgt ttaagaatat tgatggttat tttaaaatat 1260
attctaagca cacgcctatt aatttagtgc gtgatctccc tcagggtttt tcggctttag 1320
aaccattggt agatttgcca ataggtatta acatcactag gtttcaaact ttacttgctt 1380
tacatagaag ttatttgact cctggtgatt cttcttcagg ttggacagct ggtgctgcag 1440
cttattatgt gggttatctt caacctagga cttttctatt aaaatataat gaaaatggaa 1500
ccattacaga tgctgtagac tgtgcacttg acccaggatc aggtgcaact aactttagtc 1560
ttcttaaaca agctggtgat gttgaagaaa atcctggacc taatacagtg tctagcttcc 1620
aggacatact gctgaggatg tcaaaaatgc agttggagtc ctcatcggag gacttgaatg 1680
gaatgataac acagttcgag tctctgaaac tctacagaga ttcgcttgga gaagcagtaa 1740
tgagaatggg agacctccac tcactccaaa acagaaacga gaaatggcgg gaacaattag 1800
gtcagaagtt tgaagaaata agatggttga ttgaagaagt gagacacaaa ctgaagataa 1860
cagagaatag ttttgagcaa ataacattta tgcaagcctt acatctattg cttgaagtgg 1920
agcaagagat aagaactttc tcgtttcagc ttatttagta ctaaaaaaca cccttgtttc 1980
tact 1984
<210> 88
<211> 1444
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 88
agcaaaagca gggtgacaaa aacataatgg atccaaacac tgtgtcaagc tttcaagtag 60
attgctttct ttggcatgtc cgcaaacgag ttgcagacca agaactaggc gatcccccat 120
tccttgatcg gcttcgccga gatcagaaat ccctaagagg aaggggcagt actctcggtc 180
tggacatcaa gacagccaca cgtgctggaa agcagatagt ggagcggatt ctgaaagaag 240
aatccgatga ggcacttaaa atgaccatgg cctctgtacc tgcgtcgcgt tacctaactg 300
acatgactct tgaggaaatg tcaagggact ggtccatgct catacccaag cagaaagtgg 360
caggccctct ttgtatcaaa atggaccagg cgatcatgga taagaacatc atactgaaag 420
cgaacttcag tgtgattttt gaccggctgg agactctaat attgctaagg gctttcaccg 480
aagagggagc aattgttggc gaaatttcac cattgccttc tctcccggga catactgctg 540
aggttgtcaa aaatgcagtt ggagtcctaa tcggaggact tgaatggaac gataacacag 600
ttcgagtctc tgaaactcta cagagattcg cttggagaag cagtaatgag aacgggagac 660
ctccactgac tccaaaacag aaacgagaaa tggcgggaac aattaggtca gaagttggta 720
gtggagcaag tgcacttgga aaacttcaag atgtggtcaa ccaaaatgca caagctttaa 780
acacgcttgt taaacaactt agctccaatt ttggtgcaat ttcaagtgtt ttaaatgata 840
tcctttcacg tcttgacaaa gttgaggctg aagtgcaaat tgataggttg atcacaggca 900
gacttcaaag tttgcagaca tatgtgactc aacaattaat tagagctgca gaaatcagag 960
cttctgctaa tcttgctgct actaaaatgt cagagggatc aggtgcaact aactttagtc 1020
ttcttaaaca agctggtgat gttgaagaaa atcctggacc taatacagtg tctagcttcc 1080
aggacatact gctgaggatg tcaaaaatgc agttggagtc ctcatcggag gacttgaatg 1140
gaatgataac acagttcgag tctctgaaac tctacagaga ttcgcttgga gaagcagtaa 1200
tgagaatggg agacctccac tcactccaaa acagaaacga gaaatggcgg gaacaattag 1260
gtcagaagtt tgaagaaata agatggttga ttgaagaagt gagacacaaa ctgaagataa 1320
cagagaatag ttttgagcaa ataacattta tgcaagcctt acatctattg cttgaagtgg 1380
agcaagagat aagaactttc tcgtttcagc ttatttagta ctaaaaaaca cccttgtttc 1440
tact 1444
<210> 89
<211> 1444
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 89
agcaaaagca gggtgacaaa aacataatgg atccaaacac tgtgtcaagc tttcaagtag 60
attgctttct ttggcatgtc cgcaaacgag ttgcagacca agaactaggc gatcccccat 120
tccttgatcg gcttcgccga gatcagaaat ccctaagagg aaggggcagt actctcggtc 180
tggacatcaa gacagccaca cgtgctggaa agcagatagt ggagcggatt ctgaaagaag 240
aatccgatga ggcacttaaa atgaccatgg cctctgtacc tgcgtcgcgt tacctaactg 300
acatgactct tgaggaaatg tcaagggact ggtccatgct catacccaag cagaaagtgg 360
caggccctct ttgtatcaaa atggaccagg cgatcatgga taagaacatc atactgaaag 420
cgaacttcag tgtgattttt gaccggctgg agactctaat attgctaagg gctttcaccg 480
aagagggagc aattgttggc gaaatttcac cattgccttc tctcccggga catactgctg 540
aggttgtcaa aaatgcagtt ggagtcctaa tcggaggact tgaatggaac gataacacag 600
ttcgagtctc tgaaactcta cagagattcg cttggagaag cagtaatgag aacgggagac 660
ctccactgac tccaaaacag aaacgagaaa tggcgggaac aattaggtca gaagttggta 720
gtggagcaag tgcacttgga aaacttcaag atgtggtcaa ccaaaatgca caagctttaa 780
acacgcttgt taaacaactt agctccaatt ttggtgcaat ttcaagtgtt ttaaatgata 840
tcctttcacg tcttgaccca cctgaggctg aagtgcaaat tgataggttg atcacaggca 900
gacttcaaag tttgcagaca tatgtgactc aacaattaat tagagctgca gaaatcagag 960
cttctgctaa tcttgctgct actaaaatgt cagagggatc aggtgcaact aactttagtc 1020
ttcttaaaca agctggtgat gttgaagaaa atcctggacc taatacagtg tctagcttcc 1080
aggacatact gctgaggatg tcaaaaatgc agttggagtc ctcatcggag gacttgaatg 1140
gaatgataac acagttcgag tctctgaaac tctacagaga ttcgcttgga gaagcagtaa 1200
tgagaatggg agacctccac tcactccaaa acagaaacga gaaatggcgg gaacaattag 1260
gtcagaagtt tgaagaaata agatggttga ttgaagaagt gagacacaaa ctgaagataa 1320
cagagaatag ttttgagcaa ataacattta tgcaagcctt acatctattg cttgaagtgg 1380
agcaagagat aagaactttc tcgtttcagc ttatttagta ctaaaaaaca cccttgtttc 1440
tact 1444
<210> 90
<211> 1375
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 90
agcaaaagca gggtgacaaa aacataatgg atccaaacac tgtgtcaagc tttcaagtag 60
attgctttct ttggcatgtc cgcaaacgag ttgcagacca agaactaggc gatcccccat 120
tccttgatcg gcttcgccga gatcagaaat ccctaagagg aaggggcagt actctcggtc 180
tggacatcaa gacagccaca cgtgctggaa agcagatagt ggagcggatt ctgaaagaag 240
aatccgatga ggcacttaaa atgaccatgg cctctgtacc tgcgtcgcgt tacctaactg 300
acatgactct tgaggaaatg tcaagggact ggtccatgct catacccaag cagaaagtgg 360
caggccctct ttgtatcaaa atggaccagg cgatcatgga taagaacatc atactgaaag 420
cgaacttcag tgtgattttt gaccggctgg agactctaat attgctaagg gctttcaccg 480
aagagggagc aattgttggc gaaatttcac cattgccttc tctcccggga catactgctg 540
aggttgtcaa aaatgcagtt ggagtcctaa tcggaggact tgaatggaac gataacacag 600
ttcgagtctc tgaaactcta cagagattcg cttggagaag cagtaatgag aacgggagac 660
ctccactgac tccaaaacag aaacgagaaa tggcgggaac aattaggtca gaagttggta 720
gtggaaagaa cttcacaact gctcctgcca tttgtcatga tggaaaagca cactttcctc 780
gtgaaggtgt ctttgtttca aatggcacac actggtttgt aacacaaagg aatttttatg 840
aaccacaaat cattactaca gacaacacat ttgtgtctgg taactgtgat gttgtaatag 900
gaattgtcaa caacacagtt tatgatggat caggtgcaac taactttagt cttcttaaac 960
aagctggtga tgttgaagaa aatcctggac ctaatacagt gtctagcttc caggacatac 1020
tgctgaggat gtcaaaaatg cagttggagt cctcatcgga ggacttgaat ggaatgataa 1080
cacagttcga gtctctgaaa ctctacagag attcgcttgg agaagcagta atgagaatgg 1140
gagacctcca ctcactccaa aacagaaacg agaaatggcg ggaacaatta ggtcagaagt 1200
ttgaagaaat aagatggttg attgaagaag tgagacacaa actgaagata acagagaata 1260
gttttgagca aataacattt atgcaagcct tacatctatt gcttgaagtg gagcaagaga 1320
taagaacttt ctcgtttcag cttatttagt actaaaaaac acccttgttt ctact 1375
<210> 91
<211> 1396
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 91
agcaaaagca gggtgacaaa aacataatgg atccaaacac tgtgtcaagc tttcaagtag 60
attgctttct ttggcatgtc cgcaaacgag ttgcagacca agaactaggc gatcccccat 120
tccttgatcg gcttcgccga gatcagaaat ccctaagagg aaggggcagt actctcggtc 180
tggacatcaa gacagccaca cgtgctggaa agcagatagt ggagcggatt ctgaaagaag 240
aatccgatga ggcacttaaa atgaccatgg cctctgtacc tgcgtcgcgt tacctaactg 300
acatgactct tgaggaaatg tcaagggact ggtccatgct catacccaag cagaaagtgg 360
caggccctct ttgtatcaaa atggaccagg cgatcatgga taagaacatc atactgaaag 420
cgaacttcag tgtgattttt gaccggctgg agactctaat attgctaagg gctttcaccg 480
aagagggagc aattgttggc gaaatttcac cattgccttc tctcccggga catactgctg 540
aggttgtcaa aaatgcagtt ggagtcctaa tcggaggact tgaatggaac gataacacag 600
ttcgagtctc tgaaactcta cagagattcg cttggagaag cagtaatgag aacgggagac 660
ctccactgac tccaaaacag aaacgagaaa tggcgggaac aattaggtca gaagttggta 720
gtggaccttt gcaacctgaa ttagactcat tcaaggagga gttagataaa tattttaaga 780
atcatacatc accagatgtt gatttaggtg acatctctgg cattaatgct tcagttgtaa 840
acattcaaaa agaaattgac cgcctcaatg aggttgccaa gaatttaaat gaatctctca 900
tcgatctcca agaacttgga aagtatgagc agtatataaa atggccagga tcaggtgcaa 960
ctaactttag tcttcttaaa caagctggtg atgttgaaga aaatcctgga cctaatacag 1020
tgtctagctt ccaggacata ctgctgagga tgtcaaaaat gcagttggag tcctcatcgg 1080
aggacttgaa tggaatgata acacagttcg agtctctgaa actctacaga gattcgcttg 1140
gagaagcagt aatgagaatg ggagacctcc actcactcca aaacagaaac gagaaatggc 1200
gggaacaatt aggtcagaag tttgaagaaa taagatggtt gattgaagaa gtgagacaca 1260
aactgaagat aacagagaat agttttgagc aaataacatt tatgcaagcc ttacatctat 1320
tgcttgaagt ggagcaagag ataagaactt tctcgtttca gcttatttag tactaaaaaa 1380
cacccttgtt tctact 1396
<210> 92
<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 92
Met Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Ile Arg Asn Glu Trp Gly
1 5 10 15
Cys Arg Cys Asn Gly Ser Ser Asp Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro
20 25 30
Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp
35 40 45
Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr
50 55 60
Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr
65 70 75 80
Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val
85 90 95
Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys
100 105 110
Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val
115 120 125
Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr
130 135 140
Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu
145 150 155 160
Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn
165 170 175
Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe
180 185 190
Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu
195 200 205
Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys
210 215 220
Ser Ile Glu Leu Glu
225
<210> 93
<211> 478
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 93
Met Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Tyr Val Leu Ser Ile Ile Pro
1 5 10 15
Ser Gly Pro Leu Lys Ala Glu Ile Ala Gln Arg Leu Glu Asp Val Phe
20 25 30
Ala Gly Lys Asn Thr Asp Leu Glu Val Leu Met Glu Trp Leu Lys Thr
35 40 45
Arg Pro Ile Leu Ser Pro Leu Thr Lys Gly Ile Leu Gly Phe Val Phe
50 55 60
Thr Leu Thr Val Pro Ser Glu Arg Gly Leu Gln Arg Arg Arg Phe Val
65 70 75 80
Gln Asn Ala Leu Asn Gly Asn Gly Asp Pro Asn Asn Met Asp Lys Ala
85 90 95
Val Lys Leu Tyr Arg Lys Leu Lys Arg Glu Ile Thr Phe His Gly Ala
100 105 110
Lys Glu Ile Ser Leu Ser Tyr Ser Ala Gly Ala Leu Ala Ser Cys Met
115 120 125
Gly Leu Ile Tyr Asn Arg Met Gly Ala Val Thr Thr Glu Val Ala Phe
130 135 140
Gly Leu Val Cys Ala Thr Cys Glu Gln Ile Ala Asp Ser Gln His Arg
145 150 155 160
Ser His Arg Gln Met Val Thr Thr Thr Asn Pro Leu Ile Arg His Glu
165 170 175
Asn Arg Met Val Leu Ala Ser Thr Thr Ala Lys Ala Met Glu Gln Met
180 185 190
Ala Gly Ser Ser Glu Gln Ala Ala Glu Ala Met Glu Val Ala Ser Gln
195 200 205
Ala Arg Gln Met Val Gln Ala Met Arg Thr Ile Gly Thr His Pro Ser
210 215 220
Ser Ser Ala Gly Leu Lys Asn Asp Leu Leu Glu Asn Leu Gln Ala Tyr
225 230 235 240
Gln Lys Arg Met Gly Val Gln Met Gln Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ala
245 250 255
Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro
260 265 270
Gly Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala
275 280 285
Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn
290 295 300
Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr
305 310 315 320
Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe
325 330 335
Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg
340 345 350
Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys
355 360 365
Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn
370 375 380
Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe
385 390 395 400
Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile
405 410 415
Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys
420 425 430
Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly
435 440 445
Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala
450 455 460
Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Ile Glu Leu Glu
465 470 475
<210> 94
<211> 206
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 94
Met Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala
1 5 10 15
Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn
20 25 30
Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr
35 40 45
Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe
50 55 60
Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg
65 70 75 80
Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys
85 90 95
Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn
100 105 110
Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe
115 120 125
Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile
130 135 140
Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys
145 150 155 160
Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly
165 170 175
Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala
180 185 190
Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Ile Glu Leu Glu
195 200 205
<210> 95
<211> 203
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 95
Met Leu Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro
1 5 10 15
Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp
20 25 30
Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr
35 40 45
Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr
50 55 60
Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val
65 70 75 80
Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys
85 90 95
Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val
100 105 110
Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr
115 120 125
Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu
130 135 140
Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn
145 150 155 160
Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe
165 170 175
Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu
180 185 190
Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val
195 200
<210> 96
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 96
Met Leu Glu Pro Phe Gln Ile Leu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile
1 5 10 15
Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala
20 25 30
Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp
35 40 45
Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr
50 55 60
Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro
85 90 95
Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp
100 105 110
Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys
115 120 125
Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn
130 135 140
Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly
145 150 155 160
Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu
165 170 175
Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr
180 185 190
Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val
195 200 205
Leu Glu Val Glu Glu Leu His
210 215
<210> 97
<211> 573
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 97
Met Asp Pro Asn Thr Val Ser Ser Phe Gln Val Asp Cys Phe Leu Trp
1 5 10 15
His Val Arg Lys Arg Val Ala Asp Gln Glu Leu Gly Asp Pro Pro Phe
20 25 30
Leu Asp Arg Leu Arg Arg Asp Gln Lys Ser Leu Arg Gly Arg Gly Ser
35 40 45
Thr Leu Gly Leu Asp Ile Lys Thr Ala Thr Arg Ala Gly Lys Gln Ile
50 55 60
Val Glu Arg Ile Leu Lys Glu Glu Ser Asp Glu Ala Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Met Ala Ser Val Pro Ala Ser Arg Tyr Leu Thr Asp Met Thr Leu Glu
85 90 95
Glu Met Ser Arg Asp Trp Ser Met Leu Ile Pro Lys Gln Lys Val Ala
100 105 110
Gly Pro Leu Cys Ile Lys Met Asp Gln Ala Ile Met Asp Lys Asn Ile
115 120 125
Ile Leu Lys Ala Asn Phe Ser Val Ile Phe Asp Arg Leu Glu Thr Leu
130 135 140
Ile Leu Leu Arg Ala Phe Thr Glu Glu Gly Ala Ile Val Gly Glu Ile
145 150 155 160
Ser Pro Leu Pro Ser Leu Pro Gly His Thr Ala Glu Val Val Lys Asn
165 170 175
Ala Val Gly Val Leu Ile Gly Gly Leu Glu Trp Asn Asp Asn Thr Val
180 185 190
Arg Val Ser Glu Thr Leu Gln Arg Phe Ala Trp Arg Ser Ser Asn Glu
195 200 205
Asn Gly Arg Pro Pro Leu Thr Pro Lys Gln Lys Arg Glu Met Ala Gly
210 215 220
Thr Ile Arg Ser Glu Val Gly Ser Gly Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro
225 230 235 240
Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp
245 250 255
Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr
260 265 270
Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr
275 280 285
Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val
290 295 300
Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys
305 310 315 320
Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val
325 330 335
Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr
340 345 350
Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu
355 360 365
Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn
370 375 380
Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe
385 390 395 400
Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu
405 410 415
Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys
420 425 430
Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp
435 440 445
Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Asn Thr Val Ser Ser Phe Gln Asp Ile
450 455 460
Leu Leu Arg Met Ser Lys Met Gln Leu Glu Ser Ser Ser Glu Asp Leu
465 470 475 480
Asn Gly Met Ile Thr Gln Phe Glu Ser Leu Lys Leu Tyr Arg Asp Ser
485 490 495
Leu Gly Glu Ala Val Met Arg Met Gly Asp Leu His Ser Leu Gln Asn
500 505 510
Arg Asn Glu Lys Trp Arg Glu Gln Leu Gly Gln Lys Phe Glu Glu Ile
515 520 525
Arg Trp Leu Ile Glu Glu Val Arg His Lys Leu Lys Ile Thr Glu Asn
530 535 540
Ser Phe Glu Gln Ile Thr Phe Met Gln Ala Leu His Leu Leu Leu Glu
545 550 555 560
Val Glu Gln Glu Ile Arg Thr Phe Ser Phe Gln Leu Ile
565 570
<210> 98
<211> 370
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 98
Met Asp Pro Asn Thr Val Ser Ser Phe Gln Val Asp Cys Phe Leu Trp
1 5 10 15
His Val Arg Lys Arg Val Ala Asp Gln Glu Leu Gly Asp Pro Pro Phe
20 25 30
Leu Asp Arg Leu Arg Arg Asp Gln Lys Ser Leu Arg Gly Arg Gly Ser
35 40 45
Thr Leu Gly Leu Asp Ile Lys Thr Ala Thr Arg Ala Gly Lys Gln Ile
50 55 60
Val Glu Arg Ile Leu Lys Glu Glu Ser Asp Glu Ala Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Met Ala Ser Val Pro Ala Ser Arg Tyr Leu Thr Asp Met Thr Leu Glu
85 90 95
Glu Met Ser Arg Asp Trp Ser Met Leu Ile Pro Lys Gln Lys Val Ala
100 105 110
Gly Pro Leu Cys Ile Lys Met Asp Gln Ala Ile Met Asp Lys Asn Ile
115 120 125
Ile Leu Lys Ala Asn Phe Ser Val Ile Phe Asp Arg Leu Glu Thr Leu
130 135 140
Ile Leu Leu Arg Ala Phe Thr Glu Glu Gly Ala Ile Val Gly Glu Ile
145 150 155 160
Ser Pro Leu Pro Ser Leu Pro Gly His Thr Ala Glu Val Val Lys Asn
165 170 175
Ala Val Gly Val Leu Ile Gly Gly Leu Glu Trp Asn Asp Asn Thr Val
180 185 190
Arg Val Ser Glu Thr Leu Gln Arg Phe Ala Trp Arg Ser Ser Asn Glu
195 200 205
Asn Gly Arg Pro Pro Leu Thr Pro Lys Gln Lys Arg Asp Met Ala Gly
210 215 220
Thr Ile Arg Ser Glu Val Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu
225 230 235 240
Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Asn Thr Val Ser
245 250 255
Ser Phe Gln Asp Ile Leu Leu Arg Met Ser Lys Met Gln Leu Glu Ser
260 265 270
Ser Ser Glu Asp Leu Asn Gly Met Ile Thr Gln Phe Glu Ser Leu Lys
275 280 285
Leu Tyr Arg Asp Ser Leu Gly Glu Ala Val Met Arg Met Gly Asp Leu
290 295 300
His Ser Leu Gln Asn Arg Asn Glu Lys Trp Arg Glu Gln Leu Gly Gln
305 310 315 320
Lys Phe Glu Glu Ile Arg Trp Leu Ile Glu Glu Val Arg His Lys Leu
325 330 335
Lys Ile Thr Glu Asn Ser Phe Glu Gln Ile Thr Phe Met Gln Ala Leu
340 345 350
His Leu Leu Leu Glu Val Glu Gln Glu Ile Arg Thr Phe Ser Phe Gln
355 360 365
Leu Ile
370
<210> 99
<211> 591
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 99
Met Asp Pro Asn Thr Val Ser Ser Phe Gln Val Asp Cys Phe Leu Trp
1 5 10 15
His Val Arg Lys Arg Val Ala Asp Gln Glu Leu Gly Asp Pro Pro Phe
20 25 30
Leu Asp Arg Leu Arg Arg Asp Gln Lys Ser Leu Arg Gly Arg Gly Ser
35 40 45
Thr Leu Gly Leu Asp Ile Lys Thr Ala Thr Arg Ala Gly Lys Gln Ile
50 55 60
Val Glu Arg Ile Leu Lys Glu Glu Ser Asp Glu Ala Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Met Ala Ser Val Pro Ala Ser Arg Tyr Leu Thr Asp Met Thr Leu Glu
85 90 95
Glu Met Ser Arg Asp Trp Ser Met Leu Ile Pro Lys Gln Lys Val Ala
100 105 110
Gly Pro Leu Cys Ile Lys Met Asp Gln Ala Ile Met Asp Lys Asn Ile
115 120 125
Ile Leu Lys Ala Asn Phe Ser Val Ile Phe Asp Arg Leu Glu Thr Leu
130 135 140
Ile Leu Leu Arg Ala Phe Thr Glu Glu Gly Ala Ile Val Gly Glu Ile
145 150 155 160
Ser Pro Leu Pro Ser Leu Pro Gly His Thr Ala Glu Val Val Lys Asn
165 170 175
Ala Val Gly Val Leu Ile Gly Gly Leu Glu Trp Asn Asp Asn Thr Val
180 185 190
Arg Val Ser Glu Thr Leu Gln Arg Phe Ala Trp Arg Ser Ser Asn Glu
195 200 205
Asn Gly Arg Pro Pro Leu Thr Pro Lys Gln Lys Arg Glu Met Ala Gly
210 215 220
Thr Ile Arg Ser Glu Val Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu
225 230 235 240
Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Asn Ile Thr Asn Leu
245 250 255
Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr
260 265 270
Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val
275 280 285
Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser
290 295 300
Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser
305 310 315 320
Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr
325 330 335
Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly
340 345 350
Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly
355 360 365
Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro
370 375 380
Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro
385 390 395 400
Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr
405 410 415
Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val
420 425 430
Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro
435 440 445
Lys Lys Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala
450 455 460
Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Asn Thr Val Ser Ser Phe Gln
465 470 475 480
Asp Ile Leu Leu Arg Met Ser Lys Met Gln Leu Glu Ser Ser Ser Glu
485 490 495
Asp Leu Asn Gly Met Ile Thr Gln Phe Glu Ser Leu Lys Leu Tyr Arg
500 505 510
Asp Ser Leu Gly Glu Ala Val Met Arg Met Gly Asp Leu His Ser Leu
515 520 525
Gln Asn Arg Asn Glu Lys Trp Arg Glu Gln Leu Gly Gln Lys Phe Glu
530 535 540
Glu Ile Arg Trp Leu Ile Glu Glu Val Arg His Lys Leu Lys Ile Thr
545 550 555 560
Glu Asn Ser Phe Glu Gln Ile Thr Phe Met Gln Ala Leu His Leu Leu
565 570 575
Leu Glu Val Glu Gln Glu Ile Arg Thr Phe Ser Phe Gln Leu Ile
580 585 590
<210> 100
<211> 643
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 100
Met Asp Pro Asn Thr Val Ser Ser Phe Gln Val Asp Cys Phe Leu Trp
1 5 10 15
His Val Arg Lys Arg Val Ala Asp Gln Glu Leu Gly Asp Pro Pro Phe
20 25 30
Leu Asp Arg Leu Arg Arg Asp Gln Lys Ser Leu Arg Gly Arg Gly Ser
35 40 45
Thr Leu Gly Leu Asp Ile Lys Thr Ala Thr Arg Ala Gly Lys Gln Ile
50 55 60
Val Glu Arg Ile Leu Lys Glu Glu Ser Asp Glu Ala Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Met Ala Ser Val Pro Ala Ser Arg Tyr Leu Thr Asp Met Thr Leu Glu
85 90 95
Glu Met Ser Arg Asp Trp Ser Met Leu Ile Pro Lys Gln Lys Val Ala
100 105 110
Gly Pro Leu Cys Ile Lys Met Asp Gln Ala Ile Met Asp Lys Asn Ile
115 120 125
Ile Leu Lys Ala Asn Phe Ser Val Ile Phe Asp Arg Leu Glu Thr Leu
130 135 140
Ile Leu Leu Arg Ala Phe Thr Glu Glu Gly Ala Ile Val Gly Glu Ile
145 150 155 160
Ser Pro Leu Pro Ser Leu Pro Gly His Thr Ala Glu Val Val Lys Asn
165 170 175
Ala Val Gly Val Leu Ile Gly Gly Leu Glu Trp Asn Asp Asn Thr Val
180 185 190
Arg Val Ser Glu Thr Leu Gln Arg Phe Ala Trp Arg Ser Ser Asn Glu
195 200 205
Asn Gly Arg Pro Pro Leu Thr Pro Lys Gln Lys Arg Glu Met Ala Gly
210 215 220
Thr Ile Arg Ser Glu Val Gly Ser Gly Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
225 230 235 240
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
245 250 255
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
260 265 270
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
275 280 285
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
290 295 300
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
305 310 315 320
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
325 330 335
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
340 345 350
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
355 360 365
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
370 375 380
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
385 390 395 400
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
405 410 415
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
420 425 430
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
435 440 445
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
450 455 460
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
465 470 475 480
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
485 490 495
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu
500 505 510
Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Asn Thr Val
515 520 525
Ser Ser Phe Gln Asp Ile Leu Leu Arg Met Ser Lys Met Gln Leu Glu
530 535 540
Ser Ser Ser Glu Asp Leu Asn Gly Met Ile Thr Gln Phe Glu Ser Leu
545 550 555 560
Lys Leu Tyr Arg Asp Ser Leu Gly Glu Ala Val Met Arg Met Gly Asp
565 570 575
Leu His Ser Leu Gln Asn Arg Asn Glu Lys Trp Arg Glu Gln Leu Gly
580 585 590
Gln Lys Phe Glu Glu Ile Arg Trp Leu Ile Glu Glu Val Arg His Lys
595 600 605
Leu Lys Ile Thr Glu Asn Ser Phe Glu Gln Ile Thr Phe Met Gln Ala
610 615 620
Leu His Leu Leu Leu Glu Val Glu Gln Glu Ile Arg Thr Phe Ser Phe
625 630 635 640
Gln Leu Ile
<210> 101
<211> 463
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 101
Met Asp Pro Asn Thr Val Ser Ser Phe Gln Val Asp Cys Phe Leu Trp
1 5 10 15
His Val Arg Lys Arg Val Ala Asp Gln Glu Leu Gly Asp Pro Pro Phe
20 25 30
Leu Asp Arg Leu Arg Arg Asp Gln Lys Ser Leu Arg Gly Arg Gly Ser
35 40 45
Thr Leu Gly Leu Asp Ile Lys Thr Ala Thr Arg Ala Gly Lys Gln Ile
50 55 60
Val Glu Arg Ile Leu Lys Glu Glu Ser Asp Glu Ala Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Met Ala Ser Val Pro Ala Ser Arg Tyr Leu Thr Asp Met Thr Leu Glu
85 90 95
Glu Met Ser Arg Asp Trp Ser Met Leu Ile Pro Lys Gln Lys Val Ala
100 105 110
Gly Pro Leu Cys Ile Lys Met Asp Gln Ala Ile Met Asp Lys Asn Ile
115 120 125
Ile Leu Lys Ala Asn Phe Ser Val Ile Phe Asp Arg Leu Glu Thr Leu
130 135 140
Ile Leu Leu Arg Ala Phe Thr Glu Glu Gly Ala Ile Val Gly Glu Ile
145 150 155 160
Ser Pro Leu Pro Ser Leu Pro Gly His Thr Ala Glu Val Val Lys Asn
165 170 175
Ala Val Gly Val Leu Ile Gly Gly Leu Glu Trp Asn Asp Asn Thr Val
180 185 190
Arg Val Ser Glu Thr Leu Gln Arg Phe Ala Trp Arg Ser Ser Asn Glu
195 200 205
Asn Gly Arg Pro Pro Leu Thr Pro Lys Gln Lys Arg Glu Met Ala Gly
210 215 220
Thr Ile Arg Ser Glu Val Gly Ser Gly Ala Ser Ala Leu Gly Lys Leu
225 230 235 240
Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys
245 250 255
Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn Asp Ile
260 265 270
Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp Arg Leu
275 280 285
Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val Thr Gln Gln Leu
290 295 300
Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu Ala Ala Thr Lys
305 310 315 320
Met Ser Glu Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala
325 330 335
Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Asn Thr Val Ser Ser Phe Gln
340 345 350
Asp Ile Leu Leu Arg Met Ser Lys Met Gln Leu Glu Ser Ser Ser Glu
355 360 365
Asp Leu Asn Gly Met Ile Thr Gln Phe Glu Ser Leu Lys Leu Tyr Arg
370 375 380
Asp Ser Leu Gly Glu Ala Val Met Arg Met Gly Asp Leu His Ser Leu
385 390 395 400
Gln Asn Arg Asn Glu Lys Trp Arg Glu Gln Leu Gly Gln Lys Phe Glu
405 410 415
Glu Ile Arg Trp Leu Ile Glu Glu Val Arg His Lys Leu Lys Ile Thr
420 425 430
Glu Asn Ser Phe Glu Gln Ile Thr Phe Met Gln Ala Leu His Leu Leu
435 440 445
Leu Glu Val Glu Gln Glu Ile Arg Thr Phe Ser Phe Gln Leu Ile
450 455 460
<210> 102
<211> 463
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 102
Met Asp Pro Asn Thr Val Ser Ser Phe Gln Val Asp Cys Phe Leu Trp
1 5 10 15
His Val Arg Lys Arg Val Ala Asp Gln Glu Leu Gly Asp Pro Pro Phe
20 25 30
Leu Asp Arg Leu Arg Arg Asp Gln Lys Ser Leu Arg Gly Arg Gly Ser
35 40 45
Thr Leu Gly Leu Asp Ile Lys Thr Ala Thr Arg Ala Gly Lys Gln Ile
50 55 60
Val Glu Arg Ile Leu Lys Glu Glu Ser Asp Glu Ala Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Met Ala Ser Val Pro Ala Ser Arg Tyr Leu Thr Asp Met Thr Leu Glu
85 90 95
Glu Met Ser Arg Asp Trp Ser Met Leu Ile Pro Lys Gln Lys Val Ala
100 105 110
Gly Pro Leu Cys Ile Lys Met Asp Gln Ala Ile Met Asp Lys Asn Ile
115 120 125
Ile Leu Lys Ala Asn Phe Ser Val Ile Phe Asp Arg Leu Glu Thr Leu
130 135 140
Ile Leu Leu Arg Ala Phe Thr Glu Glu Gly Ala Ile Val Gly Glu Ile
145 150 155 160
Ser Pro Leu Pro Ser Leu Pro Gly His Thr Ala Glu Val Val Lys Asn
165 170 175
Ala Val Gly Val Leu Ile Gly Gly Leu Glu Trp Asn Asp Asn Thr Val
180 185 190
Arg Val Ser Glu Thr Leu Gln Arg Phe Ala Trp Arg Ser Ser Asn Glu
195 200 205
Asn Gly Arg Pro Pro Leu Thr Pro Lys Gln Lys Arg Glu Met Ala Gly
210 215 220
Thr Ile Arg Ser Glu Val Gly Ser Gly Ala Ser Ala Leu Gly Lys Leu
225 230 235 240
Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn Thr Leu Val Lys
245 250 255
Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val Leu Asn Asp Ile
260 265 270
Leu Ser Arg Leu Asp Pro Pro Glu Ala Glu Val Gln Ile Asp Arg Leu
275 280 285
Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val Thr Gln Gln Leu
290 295 300
Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn Leu Ala Ala Thr Lys
305 310 315 320
Met Ser Glu Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala
325 330 335
Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Asn Thr Val Ser Ser Phe Gln
340 345 350
Asp Ile Leu Leu Arg Met Ser Lys Met Gln Leu Glu Ser Ser Ser Glu
355 360 365
Asp Leu Asn Gly Met Ile Thr Gln Phe Glu Ser Leu Lys Leu Tyr Arg
370 375 380
Asp Ser Leu Gly Glu Ala Val Met Arg Met Gly Asp Leu His Ser Leu
385 390 395 400
Gln Asn Arg Asn Glu Lys Trp Arg Glu Gln Leu Gly Gln Lys Phe Glu
405 410 415
Glu Ile Arg Trp Leu Ile Glu Glu Val Arg His Lys Leu Lys Ile Thr
420 425 430
Glu Asn Ser Phe Glu Gln Ile Thr Phe Met Gln Ala Leu His Leu Leu
435 440 445
Leu Glu Val Glu Gln Glu Ile Arg Thr Phe Ser Phe Gln Leu Ile
450 455 460
<210> 103
<211> 440
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 103
Met Asp Pro Asn Thr Val Ser Ser Phe Gln Val Asp Cys Phe Leu Trp
1 5 10 15
His Val Arg Lys Arg Val Ala Asp Gln Glu Leu Gly Asp Pro Pro Phe
20 25 30
Leu Asp Arg Leu Arg Arg Asp Gln Lys Ser Leu Arg Gly Arg Gly Ser
35 40 45
Thr Leu Gly Leu Asp Ile Lys Thr Ala Thr Arg Ala Gly Lys Gln Ile
50 55 60
Val Glu Arg Ile Leu Lys Glu Glu Ser Asp Glu Ala Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Met Ala Ser Val Pro Ala Ser Arg Tyr Leu Thr Asp Met Thr Leu Glu
85 90 95
Glu Met Ser Arg Asp Trp Ser Met Leu Ile Pro Lys Gln Lys Val Ala
100 105 110
Gly Pro Leu Cys Ile Lys Met Asp Gln Ala Ile Met Asp Lys Asn Ile
115 120 125
Ile Leu Lys Ala Asn Phe Ser Val Ile Phe Asp Arg Leu Glu Thr Leu
130 135 140
Ile Leu Leu Arg Ala Phe Thr Glu Glu Gly Ala Ile Val Gly Glu Ile
145 150 155 160
Ser Pro Leu Pro Ser Leu Pro Gly His Thr Ala Glu Val Val Lys Asn
165 170 175
Ala Val Gly Val Leu Ile Gly Gly Leu Glu Trp Asn Asp Asn Thr Val
180 185 190
Arg Val Ser Glu Thr Leu Gln Arg Phe Ala Trp Arg Ser Ser Asn Glu
195 200 205
Asn Gly Arg Pro Pro Leu Thr Pro Lys Gln Lys Arg Glu Met Ala Gly
210 215 220
Thr Ile Arg Ser Glu Val Gly Ser Gly Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro
225 230 235 240
Ala Ile Cys His Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe
245 250 255
Val Ser Asn Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu
260 265 270
Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp
275 280 285
Val Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Gly Ser Gly Ala
290 295 300
Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro
305 310 315 320
Gly Pro Asn Thr Val Ser Ser Phe Gln Asp Ile Leu Leu Arg Met Ser
325 330 335
Lys Met Gln Leu Glu Ser Ser Ser Glu Asp Leu Asn Gly Met Ile Thr
340 345 350
Gln Phe Glu Ser Leu Lys Leu Tyr Arg Asp Ser Leu Gly Glu Ala Val
355 360 365
Met Arg Met Gly Asp Leu His Ser Leu Gln Asn Arg Asn Glu Lys Trp
370 375 380
Arg Glu Gln Leu Gly Gln Lys Phe Glu Glu Ile Arg Trp Leu Ile Glu
385 390 395 400
Glu Val Arg His Lys Leu Lys Ile Thr Glu Asn Ser Phe Glu Gln Ile
405 410 415
Thr Phe Met Gln Ala Leu His Leu Leu Leu Glu Val Glu Gln Glu Ile
420 425 430
Arg Thr Phe Ser Phe Gln Leu Ile
435 440
<210> 104
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 104
Met Asp Pro Asn Thr Val Ser Ser Phe Gln Val Asp Cys Phe Leu Trp
1 5 10 15
His Val Arg Lys Arg Val Ala Asp Gln Glu Leu Gly Asp Pro Pro Phe
20 25 30
Leu Asp Arg Leu Arg Arg Asp Gln Lys Ser Leu Arg Gly Arg Gly Ser
35 40 45
Thr Leu Gly Leu Asp Ile Lys Thr Ala Thr Arg Ala Gly Lys Gln Ile
50 55 60
Val Glu Arg Ile Leu Lys Glu Glu Ser Asp Glu Ala Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Met Ala Ser Val Pro Ala Ser Arg Tyr Leu Thr Asp Met Thr Leu Glu
85 90 95
Glu Met Ser Arg Asp Trp Ser Met Leu Ile Pro Lys Gln Lys Val Ala
100 105 110
Gly Pro Leu Cys Ile Lys Met Asp Gln Ala Ile Met Asp Lys Asn Ile
115 120 125
Ile Leu Lys Ala Asn Phe Ser Val Ile Phe Asp Arg Leu Glu Thr Leu
130 135 140
Ile Leu Leu Arg Ala Phe Thr Glu Glu Gly Ala Ile Val Gly Glu Ile
145 150 155 160
Ser Pro Leu Pro Ser Leu Pro Gly His Thr Ala Glu Val Val Lys Asn
165 170 175
Ala Val Gly Val Leu Ile Gly Gly Leu Glu Trp Asn Asp Asn Thr Val
180 185 190
Arg Val Ser Glu Thr Leu Gln Arg Phe Ala Trp Arg Ser Ser Asn Glu
195 200 205
Asn Gly Arg Pro Pro Leu Thr Pro Lys Gln Lys Arg Glu Met Ala Gly
210 215 220
Thr Ile Arg Ser Glu Val Gly Ser Gly Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp
225 230 235 240
Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser Pro
245 250 255
Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val Val Asn
260 265 270
Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn
275 280 285
Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile
290 295 300
Lys Trp Pro Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala
305 310 315 320
Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Asn Thr Val Ser Ser Phe Gln
325 330 335
Asp Ile Leu Leu Arg Met Ser Lys Met Gln Leu Glu Ser Ser Ser Glu
340 345 350
Asp Leu Asn Gly Met Ile Thr Gln Phe Glu Ser Leu Lys Leu Tyr Arg
355 360 365
Asp Ser Leu Gly Glu Ala Val Met Arg Met Gly Asp Leu His Ser Leu
370 375 380
Gln Asn Arg Asn Glu Lys Trp Arg Glu Gln Leu Gly Gln Lys Phe Glu
385 390 395 400
Glu Ile Arg Trp Leu Ile Glu Glu Val Arg His Lys Leu Lys Ile Thr
405 410 415
Glu Asn Ser Phe Glu Gln Ile Thr Phe Met Gln Ala Leu His Leu Leu
420 425 430
Leu Glu Val Glu Gln Glu Ile Arg Thr Phe Ser Phe Gln Leu Ile
435 440 445
<210> 105
<211> 1096
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 105
agcaaaagca ggtagatatt gaaagatgag tcttctaacc gaggtcgaaa cgtacgtact 60
ctctatcatc ccgtcaggcc ccctcaaagc cgagatcgca cagagacttg aagatgtctt 120
tgcagggaag aacaccgatc ttgaggttct catggaatgg ctaaagacaa gaccaatcct 180
gtcacctctg actaagggga ttttaggatt tgtgttcacg ctcaccgtgc ccagtgagcg 240
aggactgcag cgtagacgct ttgtccaaaa tgcccttaat gggaacgggg atccaaataa 300
catggacaaa gcagctaaac tgtataggaa gctcaagagg gagataacat tccatggggc 360
caaagaaatc tcactcagtt attctgctgg tgcacttgcc agttgtatgg gcctcatata 420
caacaggatg ggggctgtga ccactgaagt ggcatttggc ctggtatgtg caacctgtga 480
acagattgct gactcccagc atcggtctca taggcaaatg gtgacaacaa ccaatccact 540
aatcagacat gagaacagaa tggttttagc cagcactaca gctaaggcta tggagcaaat 600
ggctggatcg agtgagcaag cagcagaggc catggaggtt gctagtcagg ctagacaaat 660
ggtgcaagcg atgagaacca ttgggactca tcctagctcc agtgctggtc tgaaaaatga 720
tcttcttgaa aatttgcagg cctatcagaa acgaatgggg gtgcagatgc aacggttcaa 780
gtgatcctaa tcttgattct aaggttggtg gtaattataa ttacctgtat agattgttta 840
ggaagtctaa tctcaaacct tttgagagag caggtgcagg tgattacaag gatgacgacg 900
ataagtaata ggatcgtctt tttttcaaat gcatttaccg tcgctttaaa tacggactga 960
aaggagggcc ttctacggaa ggagtgccaa agtctatgag ggaagaatat cgaaaggaac 1020
agcagagtgc tgtggatgct gacgatggtc attttgtcag catagagctg gagtaaaaaa 1080
ctaccttgtt tctact 1096
<210> 106
<211> 1108
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 106
agcaaaagca ggtagatatt gaaagatgag tcttctaacc gaggtcgaaa cgtacgtact 60
ctctatcatc ccgtcaggcc ccctcaaagc cgagatcgca cagagacttg aagatgtctt 120
tgcagggaag aacaccgatc ttgaggttct catggaatgg ctaaagacaa gaccaatcct 180
gtcacctctg actaagggga ttttaggatt tgtgttcacg ctcaccgtgc ccagtgagcg 240
aggactgcag cgtagacgct ttgtccaaaa tgcccttaat gggaacgggg atccaaataa 300
catggacaaa gcagctaaac tgtataggaa gctcaagagg gagataacat tccatggggc 360
caaagaaatc tcactcagtt attctgctgg tgcacttgcc agttgtatgg gcctcatata 420
caacaggatg ggggctgtga ccactgaagt ggcatttggc ctggtatgtg caacctgtga 480
acagattgct gactcccagc atcggtctca taggcaaatg gtgacaacaa ccaatccact 540
aatcagacat gagaacagaa tggttttagc cagcactaca gctaaggcta tggagcaaat 600
ggctggatcg agtgagcaag cagcagaggc catggaggtt gctagtcagg ctagacaaat 660
ggtgcaagcg atgagaacca ttgggactca tcctagctcc agtgctggtc tgaaaaatga 720
tcttcttgaa aatttgcagg cctatcagaa acgaatgggg gtgcagatgc aacggttcaa 780
gtgatcctat cgatctccaa gaacttggaa agtatgagca gtatataaaa tggccatggt 840
acatttggct aggttttata gctggcttga ttgccatagt agcaggtgca ggtgattaca 900
aggatgacga cgataagtaa taggatcgtc tttttttcaa atgcatttac cgtcgcttta 960
aatacggact gaaaggaggg ccttctacgg aaggagtgcc aaagtctatg agggaagaat 1020
atcgaaagga acagcagagt gctgtggatg ctgacgatgg tcattttgtc agcatagagc 1080
tggagtaaaa aactaccttg tttctact 1108
<210> 107
<211> 976
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 107
agcaaaagca ggtagatatt gaaagatgag tcttctaacc gaggtcgaaa cgtacgtact 60
ctctatcatc ccgtcaggcc ccctcaaagc cgagatcgca cagagacttg aagatgtctt 120
tgcagggaag aacaccgatc ttgaggttct catggaatgg ctaaagacaa gaccaatcct 180
gtcacctctg actaagggga ttttaggatt tgtgttcacg ctcaccgtgc ccagtgagcg 240
aggactgcag cgtagacgct ttgtccaaaa tgcccttaat gggaacgggg atccaaataa 300
catggacaaa gcagttaaac tgtataggaa gctcaagagg gagataacat tccatggggc 360
caaagaaatc tcactcagtt attctgctgg tgcacttgcc agttgtatgg gcctcatata 420
caacaggatg ggggctgtga ccactgaagt ggcatttggc ctggtatgtg caacctgtga 480
acagattgct gactcccagc atcggtctca taggcaaatg gtgacaacaa ccaatccact 540
aatcagacat gagaacagaa tggttttagc cagcactaca gctaaggcta tggagcaaat 600
ggctggatcg agtgagcaag cagcagaggc catggaggtt gctagtcagg ctagacaaat 660
ggtgcaagcg atgagaacca ttgggactca tcctagctcc agtgctggtc tgaaaaatga 720
tcttcttgaa aatttgcagg cctatcagaa acgaatgggg gtgcagatgc aacggttcaa 780
gtgattaata ggatcgtctt tttttcaaat gcatttaccg tcgctttaaa tacggactga 840
aaggagggcc ttctacggaa ggagtgccaa agtctatgag ggaagaatat cgaaaggaac 900
agcagagtgc tgtggatgct gacgatggtc attttgtcag catagagctg gagtaaaaaa 960
ctaccttgtt tctact 976
<210> 108
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 108
Pro Asn Thr Val Ser Ser Phe Gln Asp Ile Leu Leu Arg Met Ser Lys
1 5 10 15
Met Gln Leu Glu Ser Ser Ser Glu Asp Leu Asn Gly Met Ile Thr Gln
20 25 30
Phe Glu Ser Leu Lys Leu Tyr Arg Asp Ser Leu Gly Glu Ala Val Met
35 40 45
Arg Met Gly Asp Leu His Ser Leu Gln Asn Arg Asn Glu Lys Trp Arg
50 55 60
Glu Gln Leu Gly Gln Lys Phe Glu Glu Ile Arg Trp Leu Ile Glu Glu
65 70 75 80
Val Arg His Lys Leu Lys Ile Thr Glu Asn Ser Phe Glu Gln Ile Thr
85 90 95
Phe Met Gln Ala Leu His Leu Leu Leu Glu Val Glu Gln Glu Ile Arg
100 105 110
Thr Phe Ser Phe Gln Leu Ile
115
<210> 109
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 109
atggatccaa acactgtgtc aagctttcaa 30
<210> 110
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 110
cctaatacag tgtctagctt ccag 24
<210> 111
<211> 188
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 111
gacatactgc tgaggttgtc aagaatgctg ttggagtgct aatcggagga cttgaatgga 60
acgacaacac tgtgcgagtc agcgaaactt tgcagagatt tgcttggaga agctctaatg 120
agaacgggag acctccactg actccaaagc agaaacgaga catggctgga acaattagaa 180
gcgaagtt 188
<210> 112
<211> 188
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 112
gacatactgc tgaggatgtc aaaaatgcag ttggagtcct catcggagga cttgaatgga 60
atgataacac agttcgagtc tctgaaactc tacagagatt cgcttggaga agcagtaatg 120
agaatgggag acctccactc actccaaaac agaaacgaga aatggcggga acaattaggt 180
cagaagtt 188
<210> 113
<211> 282
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 113
Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu
1 5 10 15
Glu Asn Pro Gly Pro Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly Val
20 25 30
Val Pro Ile Leu Val Glu Leu Asp Gly Asp Val Asn Gly His Lys Phe
35 40 45
Ser Val Ser Gly Glu Gly Glu Gly Asp Ala Thr Tyr Gly Lys Leu Thr
50 55 60
Leu Lys Phe Ile Cys Thr Thr Gly Lys Leu Pro Val Pro Trp Pro Thr
65 70 75 80
Leu Val Thr Thr Leu Thr Tyr Gly Val Gln Cys Phe Ser Arg Tyr Pro
85 90 95
Asp His Met Lys Gln His Asp Phe Phe Lys Ser Ala Met Pro Glu Gly
100 105 110
Tyr Val Gln Glu Arg Thr Ile Phe Phe Lys Asp Asp Gly Asn Tyr Lys
115 120 125
Thr Arg Ala Glu Val Lys Phe Glu Gly Asp Thr Leu Val Asn Arg Ile
130 135 140
Glu Leu Lys Gly Ile Asp Phe Lys Glu Asp Gly Asn Ile Leu Gly His
145 150 155 160
Lys Leu Glu Tyr Asn Tyr Asn Ser His Asn Val Tyr Ile Met Ala Asp
165 170 175
Lys Gln Lys Asn Gly Ile Lys Val Asn Phe Lys Ile Arg His Asn Ile
180 185 190
Glu Asp Gly Ser Val Gln Leu Ala Asp His Tyr Gln Gln Asn Thr Pro
195 200 205
Ile Gly Asp Gly Pro Val Leu Leu Pro Asp Asn His Tyr Leu Ser Thr
210 215 220
Gln Ser Ala Leu Ser Lys Asp Pro Asn Glu Lys Arg Asp His Met Val
225 230 235 240
Leu Leu Glu Phe Val Thr Ala Ala Gly Ile Thr Leu Gly Met Asp Glu
245 250 255
Leu Tyr Lys Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln
260 265 270
Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro
275 280
<210> 114
<211> 846
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 114
ggtagtggag aaggtagagg aagtcttcta acatgtggtg atgtagaaga gaatccaggt 60
cctgtatcta aaggtgaaga attattcact ggtgttgtcc caattttggt tgaattagat 120
ggtgatgtta atggtcataa attttctgtc tccggtgaag gtgaaggtga tgctacttac 180
ggtaaattga ccttaaaatt tatttgtact actggtaaat tgccagttcc atggccaacc 240
ttagtcacta ctttaactta tggtgttcaa tgtttttcaa gatacccaga tcatatgaaa 300
caacatgact ttttcaagtc tgccatgcca gaaggttatg ttcaagaaag aactattttt 360
ttcaaagatg acggtaacta caagaccaga gctgaagtca agtttgaagg tgatacctta 420
gttaatagaa tcgaattaaa aggtattgat tttaaagaag atggtaacat tttaggtcac 480
aaacttgaat acaactataa ctctcacaat gtttacatca tggctgacaa acaaaagaat 540
ggtatcaaag ttaacttcaa aattagacac aacattgaag atggtagcgt tcaattagct 600
gaccattatc aacaaaatac tccaattggt gatggtccag tcttgttacc agacaaccat 660
tacttatcca cacaatctgc cttatccaaa gatccaaacg aaaagagaga tcacatggtc 720
ttgttagaat ttgttactgc tgctggtatt acccttggta tggatgaatt gtacaaatca 780
ggatcaggtg caactaactt tagtcttctt aaacaagctg gtgatgttga agaaaatcct 840
ggacct 846
<210> 115
<211> 275
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 115
Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Pro Asn Ile
1 5 10 15
Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala
20 25 30
Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp
35 40 45
Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr
50 55 60
Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro
85 90 95
Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp
100 105 110
Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys
115 120 125
Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn
130 135 140
Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly
145 150 155 160
Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu
165 170 175
Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr
180 185 190
Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val
195 200 205
Cys Gly Pro Lys Lys Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg Asp Gly
210 215 220
Gln Ala Tyr Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu Ser Thr Phe
225 230 235 240
Leu Gly Ser Thr Thr Asn Ile Met Ile Thr Thr Ile Ile Ile Val Ile
245 250 255
Ile Val Ile Leu Leu Ser Leu Ile Ala Val Gly Leu Leu Leu Tyr Cys
260 265 270
Lys Ala Arg
275
<210> 116
<211> 773
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 116
Met Lys Thr Ile Ile Ala Leu Ser Tyr Ile Leu Ser Leu Val Phe Ala
1 5 10 15
Gln Lys Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn
20 25 30
Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser
35 40 45
Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser
50 55 60
Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys
65 70 75 80
Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val
85 90 95
Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr
100 105 110
Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn
115 120 125
Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu
130 135 140
Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu
145 150 155 160
Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn
165 170 175
Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val
180 185 190
Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His
195 200 205
Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gln
210 215 220
Lys Ile Pro Gly Asn Asp Asn Ser Thr Ala Thr Leu Cys Leu Gly His
225 230 235 240
His Ala Val Pro Asn Gly Thr Ile Val Lys Thr Ile Thr Asn Asp Arg
245 250 255
Ile Glu Val Thr Asn Ala Thr Glu Leu Val Gln Asn Ser Ser Ile Gly
260 265 270
Glu Ile Cys Asp Ser Pro His Gln Ile Leu Asp Gly Glu Asn Cys Thr
275 280 285
Leu Ile Asp Ala Leu Leu Gly Asp Pro Gln Cys Asp Gly Phe Gln Asn
290 295 300
Lys Lys Trp Asp Leu Phe Val Glu Arg Ser Lys Ala Tyr Ser Asn Cys
305 310 315 320
Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala Ser Leu Arg Ser Leu Val Ala
325 330 335
Ser Ser Gly Thr Leu Glu Phe Lys Asn Glu Ser Phe Asn Trp Thr Gly
340 345 350
Val Thr Gln Asn Gly Thr Ser Ser Ala Cys Ile Arg Gly Ser Ser Ser
355 360 365
Ser Phe Phe Ser Arg Leu Asn Trp Leu Thr His Leu Asn Tyr Lys Tyr
370 375 380
Pro Ala Leu Asn Val Thr Met Pro Asn Lys Glu Gln Phe Asp Lys Leu
385 390 395 400
Tyr Ile Trp Gly Val His His Pro Gly Thr Asp Lys Asp Gln Ile Phe
405 410 415
Pro Tyr Ala Gln Ser Ser Gly Arg Ile Thr Val Ser Thr Lys Arg Ser
420 425 430
Gln Gln Ala Val Ile Pro Asn Ile Gly Ser Arg Pro Arg Ile Arg Gly
435 440 445
Ile Pro Ser Arg Ile Ser Ile Tyr Trp Thr Ile Val Lys Pro Gly Asp
450 455 460
Ile Leu Leu Ile Asn Ser Thr Gly Asn Leu Ile Ala Pro Arg Gly Tyr
465 470 475 480
Phe Lys Ile Arg Ser Gly Lys Ser Ser Ile Met Arg Ser Asp Ala Pro
485 490 495
Ile Gly Lys Cys Lys Ser Glu Cys Ile Thr Pro Asn Gly Ser Ile Pro
500 505 510
Asn Asp Lys Pro Phe Gln Asn Val Asn Arg Ile Thr Tyr Gly Ala Cys
515 520 525
Pro Arg Tyr Val Lys His Ser Thr Leu Lys Leu Ala Thr Gly Met Arg
530 535 540
Asn Val Pro Glu Lys Gln Thr Arg Gly Ile Phe Gly Ala Ile Ala Gly
545 550 555 560
Phe Ile Glu Asn Gly Trp Glu Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Phe
565 570 575
Arg His Gln Asn Ser Glu Gly Arg Gly Gln Ala Ala Asp Leu Lys Ser
580 585 590
Thr Gln Ala Ala Ile Asp Gln Ile Asn Gly Lys Leu Asn Arg Leu Ile
595 600 605
Gly Lys Thr Asn Glu Lys Phe His Gln Ile Glu Lys Glu Phe Ser Glu
610 615 620
Val Glu Gly Arg Val Gln Asp Leu Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr Lys
625 630 635 640
Ile Asp Leu Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Leu Glu Asn
645 650 655
Gln His Thr Ile Asp Leu Thr Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Phe Glu
660 665 670
Lys Thr Lys Lys Gln Leu Arg Glu Asn Ala Glu Asp Met Gly Asn Gly
675 680 685
Cys Phe Lys Ile Tyr His Lys Cys Asp Asn Ala Cys Ile Glu Ser Ile
690 695 700
Arg Asn Glu Thr Tyr Asp His Asn Val Tyr Arg Asp Glu Ala Leu Asn
705 710 715 720
Asn Arg Phe Gln Ile Lys Gly Val Glu Leu Lys Ser Gly Tyr Lys Asp
725 730 735
Trp Ile Leu Trp Ile Ser Phe Ala Ile Ser Cys Phe Leu Leu Cys Val
740 745 750
Ala Leu Leu Gly Phe Ile Met Trp Ala Cys Gln Lys Gly Asn Ile Arg
755 760 765
Cys Asn Ile Cys Ile
770
<210> 117
<211> 625
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 117
Met Lys Thr Ile Ile Ala Leu Ser Tyr Ile Leu Cys Leu Val Phe Ala
1 5 10 15
Gln Lys Ile Pro Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu Leu Leu
20 25 30
Ser Leu Ile Asn Asp Met Pro Ile Thr Asn Asp Gln Lys Lys Leu Met
35 40 45
Ser Asn Asn Val Gln Ile Val Arg Gln Gln Ser Tyr Ser Ile Met Ser
50 55 60
Ile Ile Lys Glu Ala Ala Ala Pro Gly Ala Ala Gln Lys Ile Pro Gly
65 70 75 80
Asn Asp Asn Ser Thr Ala Thr Leu Cys Leu Gly His His Ala Val Pro
85 90 95
Asn Gly Thr Ile Val Lys Thr Ile Thr Asn Asp Arg Ile Glu Val Thr
100 105 110
Asn Ala Thr Glu Leu Val Gln Asn Ser Ser Ile Gly Glu Ile Cys Asp
115 120 125
Ser Pro His Gln Ile Leu Asp Gly Glu Asn Cys Thr Leu Ile Asp Ala
130 135 140
Leu Leu Gly Asp Pro Gln Cys Asp Gly Phe Gln Asn Lys Lys Trp Asp
145 150 155 160
Leu Phe Val Glu Arg Ser Lys Ala Tyr Ser Asn Cys Tyr Pro Tyr Asp
165 170 175
Val Pro Asp Tyr Ala Ser Leu Arg Ser Leu Val Ala Ser Ser Gly Thr
180 185 190
Leu Glu Phe Lys Asn Glu Ser Phe Asn Trp Thr Gly Val Thr Gln Asn
195 200 205
Gly Thr Ser Ser Ala Cys Ile Arg Gly Ser Ser Ser Ser Phe Phe Ser
210 215 220
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225 230 235 240
Val Thr Met Pro Asn Lys Glu Gln Phe Asp Lys Leu Tyr Ile Trp Gly
245 250 255
Val His His Pro Gly Thr Asp Lys Asp Gln Ile Phe Pro Tyr Ala Gln
260 265 270
Ser Ser Gly Arg Ile Thr Val Ser Thr Lys Arg Ser Gln Gln Ala Val
275 280 285
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290 295 300
Ile Ser Ile Tyr Trp Thr Ile Val Lys Pro Gly Asp Ile Leu Leu Ile
305 310 315 320
Asn Ser Thr Gly Asn Leu Ile Ala Pro Arg Gly Tyr Phe Lys Ile Arg
325 330 335
Ser Gly Lys Ser Ser Ile Met Arg Ser Asp Ala Pro Ile Gly Lys Cys
340 345 350
Lys Ser Glu Cys Ile Thr Pro Asn Gly Ser Ile Pro Asn Asp Lys Pro
355 360 365
Phe Gln Asn Val Asn Arg Ile Thr Tyr Gly Ala Cys Pro Arg Tyr Val
370 375 380
Lys His Ser Thr Leu Lys Leu Ala Thr Gly Met Arg Asn Val Pro Glu
385 390 395 400
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405 410 415
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420 425 430
Ser Glu Gly Arg Gly Gln Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Ala Ala
435 440 445
Ile Asp Gln Ile Asn Gly Lys Leu Asn Arg Leu Ile Gly Lys Thr Asn
450 455 460
Glu Lys Phe His Gln Ile Glu Lys Glu Phe Ser Glu Val Glu Gly Arg
465 470 475 480
Val Gln Asp Leu Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr Lys Ile Asp Leu Trp
485 490 495
Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Leu Glu Asn Gln His Thr Ile
500 505 510
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515 520 525
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530 535 540
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545 550 555 560
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Phe Ile Met Trp Ala Cys Gln Lys Gly Asn Ile Arg Cys Asn Ile Cys
610 615 620
Ile
625
<210> 118
<211> 673
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 118
Met Lys Thr Ile Ile Ala Leu Ser Tyr Ile Leu Cys Leu Val Phe Ala
1 5 10 15
Gln Lys Thr Lys Asn Thr Thr Thr Thr Gln Thr Gln Pro Ser Lys Pro
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115 120 125
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Asn Gly Thr Ile Val Lys Thr Ile Thr Asn Asp Arg Ile Glu Val Thr
145 150 155 160
Asn Ala Thr Glu Leu Val Gln Asn Ser Ser Ile Gly Glu Ile Cys Asp
165 170 175
Ser Pro His Gln Ile Leu Asp Gly Glu Asn Cys Thr Leu Ile Asp Ala
180 185 190
Leu Leu Gly Asp Pro Gln Cys Asp Gly Phe Gln Asn Lys Lys Trp Asp
195 200 205
Leu Phe Val Glu Arg Ser Lys Ala Tyr Ser Asn Cys Tyr Pro Tyr Asp
210 215 220
Val Pro Asp Tyr Ala Ser Leu Arg Ser Leu Val Ala Ser Ser Gly Thr
225 230 235 240
Leu Glu Phe Lys Asn Glu Ser Phe Asn Trp Thr Gly Val Thr Gln Asn
245 250 255
Gly Thr Ser Ser Ala Cys Ile Arg Gly Ser Ser Ser Ser Phe Phe Ser
260 265 270
Arg Leu Asn Trp Leu Thr His Leu Asn Tyr Lys Tyr Pro Ala Leu Asn
275 280 285
Val Thr Met Pro Asn Lys Glu Gln Phe Asp Lys Leu Tyr Ile Trp Gly
290 295 300
Val His His Pro Gly Thr Asp Lys Asp Gln Ile Phe Pro Tyr Ala Gln
305 310 315 320
Ser Ser Gly Arg Ile Thr Val Ser Thr Lys Arg Ser Gln Gln Ala Val
325 330 335
Ile Pro Asn Ile Gly Ser Arg Pro Arg Ile Arg Gly Ile Pro Ser Arg
340 345 350
Ile Ser Ile Tyr Trp Thr Ile Val Lys Pro Gly Asp Ile Leu Leu Ile
355 360 365
Asn Ser Thr Gly Asn Leu Ile Ala Pro Arg Gly Tyr Phe Lys Ile Arg
370 375 380
Ser Gly Lys Ser Ser Ile Met Arg Ser Asp Ala Pro Ile Gly Lys Cys
385 390 395 400
Lys Ser Glu Cys Ile Thr Pro Asn Gly Ser Ile Pro Asn Asp Lys Pro
405 410 415
Phe Gln Asn Val Asn Arg Ile Thr Tyr Gly Ala Cys Pro Arg Tyr Val
420 425 430
Lys His Ser Thr Leu Lys Leu Ala Thr Gly Met Arg Asn Val Pro Glu
435 440 445
Lys Gln Thr Arg Gly Ile Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Asn
450 455 460
Gly Trp Glu Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Phe Arg His Gln Asn
465 470 475 480
Ser Glu Gly Arg Gly Gln Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Ala Ala
485 490 495
Ile Asp Gln Ile Asn Gly Lys Leu Asn Arg Leu Ile Gly Lys Thr Asn
500 505 510
Glu Lys Phe His Gln Ile Glu Lys Glu Phe Ser Glu Val Glu Gly Arg
515 520 525
Val Gln Asp Leu Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr Lys Ile Asp Leu Trp
530 535 540
Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Leu Glu Asn Gln His Thr Ile
545 550 555 560
Asp Leu Thr Asp Ser Glu Met Asn Lys Leu Phe Glu Lys Thr Lys Lys
565 570 575
Gln Leu Arg Glu Asn Ala Glu Asp Met Gly Asn Gly Cys Phe Lys Ile
580 585 590
Tyr His Lys Cys Asp Asn Ala Cys Ile Glu Ser Ile Arg Asn Glu Thr
595 600 605
Tyr Asp His Asn Val Tyr Arg Asp Glu Ala Leu Asn Asn Arg Phe Gln
610 615 620
Ile Lys Gly Val Glu Leu Lys Ser Gly Tyr Lys Asp Trp Ile Leu Trp
625 630 635 640
Ile Ser Phe Ala Ile Ser Cys Phe Leu Leu Cys Val Ala Leu Leu Gly
645 650 655
Phe Ile Met Trp Ala Cys Gln Lys Gly Asn Ile Arg Cys Asn Ile Cys
660 665 670
Ile
<210> 119
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成序列
<400> 119
Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu
1 5 10 15
Glu Asn Pro Gly Pro Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser
20 25 30
Ser Gln Cys Val Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Gln
35 40 45
Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His Asp Gly Lys Ala
50 55 60
His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn Gly Thr His Trp Phe
65 70 75 80
Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln Ile Ile Thr Thr Asp Asn
85 90 95
Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val Ile Gly Ile Val Asn Asn
100 105 110
Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu
115 120 125
Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly
130 135 140
Asp Ile Ser Gly Ile Asn Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile
145 150 155 160
Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp
165 170 175
Leu Gln Glu Leu Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr
180 185 190
Ile Trp Leu Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr
195 200 205
Ile Met Leu Cys Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln
210 215 220
Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro
225 230

Claims (30)

1.包含流感病毒骨架的重组病毒，其中所述流感病毒骨架包含PB1、PB2、PA、NP、M、NS、HA和NA基因区段，其中所述PB1、PB2、PA、NP、M、NS、HA和NA基因区段中的至少一个包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列，并且其中
(a)所述PB1基因区段编码具有包含选定氨基酸的氨基酸序列的PB1蛋白，其中所述选定氨基酸包含在第40位的亮氨酸和在第180位的色氨酸，以及在第464位的天冬酰胺、在第563位的异亮氨酸或在第607位的丝氨酸中的至少一种，并且其中所述PB1基因区段任选地包含在核苷酸第4位的胞嘧啶至尿嘧啶的启动子突变；
(b)所述PB2基因区段编码具有包含选定氨基酸的氨基酸序列的PB2蛋白，其中所述选定氨基酸包含在第504位的缬氨酸以及任选地在第467位的异亮氨酸和在第529位的缬氨酸，并且其中所述PB2基因区段任选地包含在核苷酸第4位的胞嘧啶至尿嘧啶的启动子突变；
(c)所述PA基因区段编码具有包含选定氨基酸的氨基酸序列的PA蛋白，其中所述选定氨基酸包含在第401位的赖氨酸，并且其中所述PA基因区段任选地包含在核苷酸第4位的胞嘧啶至尿嘧啶的启动子突变；
(d)所述NP基因区段编码具有包含选定氨基酸的氨基酸序列的NP蛋白，其中所述选定氨基酸包含在第116位的亮氨酸和在第294位的赖氨酸或在第311位的精氨酸中的至少一种；以及
(e)所述NS基因区段编码具有包含选定氨基酸的氨基酸序列的NS1蛋白，其中所述选定氨基酸包含在第30位的脯氨酸、在第55位的赖氨酸和在第118位的赖氨酸。
2.如权利要求1所述的重组病毒，其中所述抗原是SARS-CoV-2刺突糖蛋白的免疫原性片段。
3.如权利要求1或2所述的重组病毒，其中所述M基因区段包含编码抗原的至少一个核苷酸序列，其中所述抗原是SARS-CoV-2刺突糖蛋白的免疫原性片段。
4.如权利要求1-3中任一项所述的重组病毒，其中所述M基因区段编码突变的M2蛋白。
5.如权利要求4中任一项所述的重组病毒，其中所述M基因区段编码包含至少一种接头蛋白和FLAG表位标签的蛋白。
6.如权利要求1-5中任一项所述的重组病毒，其中所述M区段编码包含SEQ ID NO:1-14和92-96中任一个的蛋白。
7.包含流感病毒骨架的重组病毒，其中所述流感病毒骨架包含PB1、PB2、PA、NP、M、NS、HA和NA基因区段，所述基因区段包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列，其中
(a)所述PA基因区段包含在核苷酸第2272位的胸腺嘧啶；
(b)所述NP基因区段编码具有包含选定氨基酸的氨基酸序列的NP蛋白，其中所述选定氨基酸包含在第40位的丝氨酸、在第161的天冬酰胺或甘氨酸、在第204位的苏氨酸和任选地在第93位的缬氨酸；以及
(c)所述NS基因区段包含在核苷酸第39位的鸟嘌呤，并且其中所述NS基因区段编码具有包含选定氨基酸的氨基酸序列的NS蛋白，其中所述选定氨基酸包含在第176位的谷氨酰胺。
8.如权利要求7所述的重组病毒，其中所述抗原是SARS-CoV-2刺突糖蛋白的免疫原性片段。
9.如权利要求7或8所述的重组病毒，其中所述M基因区段包含编码抗原的至少一个核苷酸序列，其中所述抗原是SARS-CoV-2刺突糖蛋白的免疫原性片段，并且所述M基因区段还编码突变的BM2蛋白。
10.如权利要求1-9中任一项所述的重组病毒，其中所述NS基因区段包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列。
11.如权利要求1-10中任一项所述的重组病毒，其中所述抗原是SARS-CoV-2刺突糖蛋白的免疫原性片段。
12.如权利要求1-11中任一项所述的重组病毒，其中所述NS基因区段编码(1)NS1蛋白，(2)至少一种柔性接头蛋白，(3)SARS-CoV-2刺突糖蛋白的免疫原性片段，(4)至少一种可切割的切割序列以及(5)NEP蛋白。
13.如权利要求12所述的重组病毒，其中所述至少一个可切割的切割序列是T2A肽序列或P2A肽序列。
14.如权利要求1-13中任一项所述的重组病毒，其中所述NS基因区段编码包含SEQ IDNO:97-104中任一个的蛋白。
15.如权利要求1或7所述的重组病毒，其中所述M基因区段和所述NS基因区段中的每一个都包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列，并且其中所述抗原是SARS-CoV-2刺突糖蛋白的免疫原性片段。
16.如权利要求1或7所述的重组病毒，其中所述NA基因区段和所述NS基因区段中的每一个都包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列，并且其中所述抗原是SARS-CoV-2糖蛋白的免疫原性片段。
17.如权利要求1或7所述的重组病毒，其中所述M基因区段和所述NA基因区段中的每一个都包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列，并且其中所述抗原是SARS-CoV-2糖蛋白的免疫原性片段。
18.如权利要求1或7所述的重组病毒，其中所述M基因区段和所述HA基因区段中的每一个都包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列，并且其中所述抗原是SARS-CoV-2糖蛋白的免疫原性片段。
19.如权利要求1或7所述的重组病毒，其中所述NS基因区段和所述NA基因区段中的每一个都包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列，并且其中所述抗原是SARS-CoV-2糖蛋白的免疫原性片段。
20.如权利要求1或7所述的重组病毒，其中所述NS基因区段和所述HA基因区段中的每一个都包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列，并且其中所述抗原是SARS-CoV-2刺突糖蛋白的免疫原性片段。
21.如权利要求1-20中任一项所述的重组病毒，其中所述病毒能够在人细胞中复制。
22.如权利要求1-21中任一项所述的重组病毒，其中与在相同条件下在Vero细胞中除了没有所述选定氨基酸之外其余均相同的重组病毒相比，所述病毒具有增强的生长。
23.如权利要求1-22中任一项所述的重组病毒，其中包含编码一种或多种抗原的至少一个核苷酸序列的所述基因区段还包含下游重复，并且其中所述下游重复包含至少一个沉默核苷酸突变。
24.药物制剂，其包含权利要求1-23中任一项所述的重组病毒。
25.如权利要求24所述的药物制剂，其中所述疫苗被配制成单价疫苗。
26.如权利要求24所述的药物制剂，其中所述疫苗被配制成二价疫苗。
27.如权利要求24所述的药物制剂，其中所述疫苗被配制成三价疫苗。
28.如权利要求24所述的药物制剂，其中所述疫苗被配制成四价疫苗。
29.引发哺乳动物中免疫应答的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用权利要求1-23中任一项所述的重组病毒或权利要求24-28中任一项所述的药物制剂，从而在所述哺乳动物中引发对所述抗原的免疫应答。
30.如权利要求29所述的方法，其中所述哺乳动物是人。
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