CN116200325A

CN116200325A - 一种可水溶性脂类复合物的制备方法及其产品

Info

Publication number: CN116200325A
Application number: CN202310171512.3A
Authority: CN
Inventors: 王瑞瑶; 赵峻岭; 黄新朋
Original assignee: Inner Mongolia Jinyuankang Bioengineering Co ltd
Current assignee: Inner Mongolia Jinyuankang Bioengineering Co ltd
Priority date: 2023-02-28
Filing date: 2023-02-28
Publication date: 2023-06-02

Abstract

本发明公开了一种可水溶性脂类复合物的制备方法及其产品，属于脂类复合物制备领域。本发明的制备方法有两种：第一种是将环糊精溶于水中，分别加入到亚油酸、亚麻酸、维生素E、维生素A和胆固醇中，然后将其混合，加热一定时间即可得到可水溶性脂类复合物；第二种是将环糊精溶于水中，先加入胆固醇，加热一定时间后冷却，再依次加入亚油酸、亚麻酸、维生素E、维生素A，混合均匀后得到可水溶性脂类复合物。本发明利用环糊精的助溶性，增加了脂类复合物的溶解性，从而使得脂类复合物在不借助有机溶剂的情况下可以在水中完全溶解，解决了脂类复合物不能水溶的问题。该产品应用于微生物培养基中，可增加细胞培养的效果，提高微生物培养性能。

Description

一种可水溶性脂类复合物的制备方法及其产品

技术领域

本发明属于脂类复合物制备领域，特别是涉及一种可水溶性脂类复合物的制备方法及其产品。

背景技术

脂肪酸具有多种生物学功能，参与能量代谢和细胞信号转导过程，是体内能量来源及某些激素生物合成的前体物。研究结果表明，脂肪酸参与多种与脂肪代谢相关的酶和蛋白基因的表达，进而可调控动物的脂代谢和脂肪细胞的分化。

亚油酸、亚麻酸属于不饱和脂肪酸，具有多种有益的生物活性，其可降低血液中低密度脂蛋白和甘油三酯的浓度，防止动脉粥样硬化；其还具有抗氧化、促进生长发育等众多生理功能，在药品、保健、食品、生物等领域具有广阔的应用前景。胆固醇，是动物组织细胞所不可缺少的重要物质，它不仅参与形成细胞膜，而且是合成胆汁酸，维生素D以及甾体激素的原料。维生素A名为视黄醇，能维持正常视觉功能，维护上皮细胞组织的健康和促进免疫球蛋白的合成；维持骨骼正常生长发育，促进生产和增殖等，是维持人体生长、发育、生殖和细胞膜的稳定性所必需的一种物质。维生素E是生育酚类物质的总称，它是一种人体必需的脂溶性维生素，作为一种优良的抗氧化剂和营养剂，被广泛应用于临床、医药、食品、饲料、保健品和化妆品等行业。

但是，上述物质均存在不溶于水的问题：①亚油酸不溶于水，溶于多数有机溶剂。②亚麻酸不稳定，在空气中易被氧化，尤其在碱性条件下易氧化，形成共轭多烯酸。加热时易聚合。α-亚麻酸，是无色至浅黄色无味的油状液体，溶于乙醇、乙醚、石油醚、正丁烷，不溶于水。③胆固醇其溶解性与脂肪类似，不溶于水，易溶于乙醚、氯仿等溶剂。④维生素E可与丙酮、氯仿、乙醚或者植物油混溶，几乎不溶于水。⑤维生素A不溶于水和甘油，能溶于醇、醚、烃和卤代烃等大多数有机溶剂。它的化学性质相对稳定，但暴露于热、光或空气中则会被轻易破坏。可见，上述物质均不具有水溶性，只能溶于有机溶剂，且即使溶于有机溶剂后再置于水溶液中也是不溶的，溶于有机溶剂也对后续应用如细胞培养、食品加工等方面增加了不安全因素。因此，研究一种可水溶性脂类复合物的制备方法具有重要意义。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种可水溶性脂类复合物的制备方法及其产品，本发明利用环糊精的助溶性，增加了脂类复合物的溶解性，从而使得脂类复合物在不借助有机溶剂的情况下可以在水中完全溶解，解决了脂类复合物不能水溶的问题。该产品应用于微生物培养基中，可增加细胞培养的效果，提高微生物培养性能。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明目的之一是提供一种可水溶性脂类复合物的制备方法，按照下面任意一种方法制备：

方法一：将环糊精溶于水中，分别加入到亚油酸、亚麻酸、维生素E、维生素A和胆固醇中，得到亚油酸水溶液、亚麻酸水溶液、维生素E水溶液、维生素A水溶液和胆固醇水溶液，再将亚油酸水溶液、亚麻酸水溶液、维生素E水溶液、维生素A水溶液和胆固醇水溶液混合，加热一定时间冷却至室温后，得到可水溶性脂类复合物；

方法二：将环糊精溶于水中，先加入胆固醇，加热一定时间后冷却，再依次加入亚油酸、亚麻酸、维生素E、维生素A，混合均匀得到可水溶性脂类复合物。

进一步地，方法一所述环糊精与亚油酸的质量比为2:(1-1.5)，所述环糊精与亚麻酸的质量比为3:(1-2)，所述环糊精与维生素E的质量比为3:(1-1.8)，所述环糊精与维生素A的质量比为2:(1-1.5)，所述环糊精与胆固醇的质量比为2:(1-1.3)。

进一步地，方法一所述加热的温度为80-90℃，时间为2-3h。

进一步地，方法二在加入亚油酸、亚麻酸、维生素E和维生素A时，边加边进行搅拌。

进一步地，方法二所述环糊精、胆固醇、亚油酸、亚麻酸、维生素E、维生素A的质量比为3:(1-1.5):(1-2):(1-2):(1-1.8):(1-2)。

进一步地，方法二所述加热的温度为80-90℃，时间为2-3h。

本发明目的之二是提供一种所述的制备方法制备得到的可水溶性脂类复合物。

本发明目的之三是提供一种所述的可水溶性脂类复合物在微生物培养基制备中的应用。本发明的可水溶性脂类复合物可作为添加物添加到细胞培养基、微生物培养基中，可增加细胞培养的效果，提高微生物培养性能。

本发明的有益效果：

本发明将环糊精溶于水中，分别加入到亚油酸、亚麻酸、维生素E、维生素A和胆固醇中，然后将其混合，加热一定时间制得可水溶性脂类复合物；或者，将环糊精溶于水中，先加入胆固醇，加热一定时间后冷却，再依次加入亚油酸、亚麻酸、维生素E、维生素A，混合均匀后得到可水溶性脂类复合物。本发明利用环糊精的助溶性，增加了脂类复合物的溶解性，从而使得脂类复合物在不借助有机溶剂的情况下可以在水中完全溶解，解决了脂类复合物不能水溶的问题。本发明的可水溶性脂类复合物可作为添加物添加到细胞培养基、微生物培养基中，可增加细胞培养的效果，提高微生物培养性能。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为用vero细胞培养基1(含实施例3的可水溶性脂类复合物)培养vero细胞的结果；

图2为用vero细胞培养基2(不含可水溶性脂类复合物)培养vero细胞的结果。

具体实施方式

为使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合实施例对本发明作进一步详细描述。

实施例1

将2g环糊精溶于100mL水中向其加入1g亚油酸，制成亚油酸水溶液；将3g环糊精溶于100mL水中向其加入1g亚麻酸，制成亚麻酸水溶液；将3g环糊精溶于100mL水中向其加入1g维生素E，制成维生素E水溶液；将2g环糊精溶于100mL水中向其加入1g维生素A，制成维生素A水溶液；将2g环糊精溶于100mL水中向其加入1g胆固醇，制成胆固醇水溶液；将所有水溶液混合，在90℃下加热2h至溶解，放至室温制成可水溶性脂类复合物。该复合物具有良好的水溶性。

实施例2

将2g环糊精溶于100mL水中向其加入1.5g亚油酸，制成亚油酸水溶液；将3g环糊精溶于100mL水中向其加入2g亚麻酸，制成亚麻酸水溶液；将3g环糊精溶于100mL水中向其加入1.8g维生素E，制成维生素E水溶液；将2g环糊精溶于100mL水中向其加入1.5g维生素A，制成维生素A水溶液；将2g环糊精溶于100mL水中向其加入1.3g胆固醇，制成胆固醇水溶液；将所有水溶液混合，在80℃下加热3h至溶解，放至室温制成可水溶性脂类复合物。该复合物具有良好的水溶性。

实施例3

将3g环糊精溶于100mL水中，向其先加入1g胆固醇，在90℃下加热2h至溶解，放置室温，再向其加入1g亚油酸，边加边混合至溶解，再加入1g亚麻酸，边加边混合至溶解；再加入1g维生素E，边加边混合至溶解；最后加入1g维生素A，边加边混合至溶解，制成可水溶性脂类复合物。

实施例4

将3g环糊精溶于100mL水中，向其先加入1.5g胆固醇，在80℃下加热3h至溶解，放置室温，再向其加入2g亚油酸，边加边混合至溶解，再加入2g亚麻酸，边加边混合至溶解；再加入1.8g维生素E，边加边混合至溶解；最后加入2g维生素A，边加边混合至溶解，制成可水溶性脂类复合物。

验证例1

一、配制细胞培养基：

1、vero细胞培养基1(含实施例3的可水溶性脂类复合物)：

(1)准确称取MEM基础培养基(宜兴市赛尔生物科技有限公司干粉培养基)干粉9.53g，加入500mL注射水搅拌溶解。

(2)将100mL实施例3的可水溶性脂类复合物和100mL新生牛血清加到(1)中，并向其补充注射水300mL，最终培养基体积为1L。

(3)调节培养基pH值在7.1-7.2之间。

(4)将配制好的培养基在超净工作台中用0.22μm无菌除菌过滤器过滤(BLOFIL公司生产)即可。

2、vero细胞培养基2(不含可水溶性脂类复合物做对照)：

(2)100mL新生牛血清加到(1)中，并向其补充注射水400mL，最终培养基体积为1L。

(3)调节培养基pH值在7.1-7.2之间。

二、vero细胞传代：

(1)将上述配制的两种培养基在无菌操作台中根据需要分别分装到适宜规格的无菌一次性细胞培养瓶(NEST公司生产)中待用。

(2)将冻存的P3代vero细胞复苏后用步骤(1)中的培养基混悬细胞并计数，按3×10⁴个/mL的密度将vero细胞接种于步骤(1)中分装了培养基的细胞培养瓶中。

(3)将培养瓶置于CO₂孵箱中培养，条件设定为37℃、CO₂浓度为5％、湿度100％。

(4)3d后vero细胞传代，用0.25％胰蛋白酶、0.02％的EDTA消化2～3min。计数，然后按上述方法用两种培养基继续连续传代培养。

三、结果比较：

图1为用vero细胞培养基1(含可水溶性脂类复合物)培养vero细胞的结果；细胞状态正常，细胞透亮，细胞密度高，汇合度在98％左右。图2为用vero细胞培养基2(不含可水溶性脂类复合物)培养vero细胞的结果，汇合度在90％左右。由此可见，可水溶性脂类复合物有助于增强细胞的培养。

以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims

1.一种可水溶性脂类复合物的制备方法，其特征在于，按照下面任意一种方法制备：

方法一：将环糊精溶于水中，分别加入到亚油酸、亚麻酸、维生素E、维生素A和胆固醇中，得到亚油酸水溶液、亚麻酸水溶液、维生素E水溶液、维生素A水溶液和胆固醇水溶液，再将亚油酸水溶液、亚麻酸水溶液、维生素E水溶液、维生素A水溶液和胆固醇水溶液混合，加热一定时间并冷却，得到可水溶性脂类复合物；

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，方法一所述环糊精与亚油酸的质量比为2:(1-1.5)，所述环糊精与亚麻酸的质量比为3:(1-2)，所述环糊精与维生素E的质量比为3:(1-1.8)，所述环糊精与维生素A的质量比为2:(1-1.5)，所述环糊精与胆固醇的质量比为2:(1-1.3)。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，方法一所述加热的温度为80-90℃，时间为2-3h。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，方法二所述环糊精、胆固醇、亚油酸、亚麻酸、维生素E、维生素A的质量比为3:(1-1.5):(1-2):(1-2):(1-1.8):(1-2)。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，方法二所述加热的温度为80-90℃，时间为2-3h。

6.一种如权利要求1-5任一项所述的制备方法制备得到的可水溶性脂类复合物。

7.一种如权利要求6所述的可水溶性脂类复合物在微生物培养基制备中的应用。