CN116199786A

CN116199786A - 融合蛋白及其在幽门螺杆菌CagA抗体检测中的应用

Info

Publication number: CN116199786A
Application number: CN202111447997.1A
Authority: CN
Inventors: 王蕾; 欧卫军; 朱益丹; 陈兰兰
Original assignee: NANTONG EGENS BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Current assignee: NANTONG EGENS BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Priority date: 2021-11-30
Filing date: 2021-11-30
Publication date: 2023-06-02

Abstract

本发明涉及融合蛋白及其在幽门螺杆菌CagA抗体检测中的应用，属于生物技术领域。本发明提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白包括氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽，或者，与SEQ ID NO.1所示氨基酸序列具有80％以上同源性，且能够与幽门螺杆菌CagA抗体特异性结合的衍生多肽；所述融合蛋白能够与幽门螺杆菌CagA抗体特异性结合，在幽门螺杆菌CagA抗体检测中具有极高的应用前景。

Description

融合蛋白及其在幽门螺杆菌CagA抗体检测中的应用

技术领域

本发明涉及融合蛋白及其在幽门螺杆菌CagA抗体检测中的应用，属于生物技术领域。

背景技术

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)是一种呈S型或者弧形弯曲的革兰氏阴性细菌。1982年，Barry J.Marshall和J.Robin Warren从人的胃粘膜标本中分离并培养出幽门螺杆菌，从而成功并揭示了其潜在致病机制，二者由此获得了2005年的生理医学奖。1994年，幽门螺杆菌被世界卫生组织定为I类致癌原。现阶段，幽门螺杆菌在全球的感染率已高达50％左右，发展中国家的幽门螺杆菌感染率高于发达国家。

幽门螺杆菌感染是一个长期且慢性的过程，感染后人体一般难以自发清除而导致终身感染，除非进行根除治疗，或人体胃黏膜发生严重肠化生使得细菌难以定植，幽门螺杆菌才会在人体自动消失。研究表明，幽门螺杆菌长期感染会引起慢性胃炎的发生，并且，随着感染程度的加深和病情的恶化，部分患者会发展成十二指肠溃疡，甚至胃癌。因此，通过体外检测病人血液中是否含有幽门螺旋杆菌抗体，以推测病人是否曾经感染或正在感染幽门螺旋杆菌，进而对幽门螺杆菌感染人群进行及时干预对保障病人身体健康十分关键。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白包括：

(a)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽；

和/或，(b)与SEQ ID NO.1所示氨基酸序列具有80％以上同源性，且能够与幽门螺杆菌CagA抗体特异性结合的衍生多肽。

本发明还提供了一种核酸分子，所述核酸分子编码上述融合蛋白。

在本发明的一种实施方式中，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明还提供了一种重组质粒，所述重组质粒携带上述核酸分子。

在本发明的一种实施方式中，所述重组质粒的载体为pET-28a载体、pMAL-C₂载体、pGEX-4T-1载体、pET-32a载体或pET-Duet-1载体。

本发明还提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞携带上述核酸分子；

或者，所述宿主细胞携带上述重组质粒。

在本发明的一种实施方式中，所述宿主细胞为原核细胞或真核细胞。

在本发明的一种实施方式中，所述宿主细胞为大肠杆菌、酵母菌、乳酸菌或芽孢杆菌。

本发明还提供了一种制备上述融合蛋白的方法，所述方法为先将上述宿主细胞接种至培养基中进行发酵，得到发酵液，然后从发酵液中分离得到上述融合蛋白。

本发明还提供了一种幽门螺杆菌CagA抗体检测试剂盒，所述试剂盒以上述融合蛋白作为幽门螺杆菌CagA抗体的检测抗原。

本发明还提供了一种检测幽门螺杆菌CagA抗体的方法，所述方法使用上述幽门螺杆菌CagA抗体检测试剂盒对待测样本进行检测。

在本发明的一种实施方式中，所述待测样品为全血或血清。

本发明还提供了上述融合蛋白或上述试剂盒或上述方法在检测幽门螺杆菌CagA抗体方面的应用。

本发明还提供了一种幽门螺杆菌CagA抗体检测试纸，所述试纸以上述融合蛋白作为幽门螺杆菌CagA抗体的检测抗原。

在本发明的一种实施方式中，所述试纸包括层析膜；所述层析膜的一端连接吸附垫；所述吸附垫上担载免疫标记的上述融合蛋白和免疫标记的第一抗体；所述层析膜上沿液体层析方向依次设有检测线和质控线；所述检测线上包被上述融合蛋白；所述质控线上包被第二抗体；所述第二抗体能够与第一抗体特异性结合。

在本发明的一种实施方式中，所述融合蛋白在胶体金吸附垫上的担载量为0.1～1μg/cm²。

在本发明的一种实施方式中，所述融合蛋白在胶体金吸附垫上的担载量为0.5μg/cm²。

在本发明的一种实施方式中，所述第一抗体在胶体金吸附垫上的担载量为0.1～5μg/cm²。

在本发明的一种实施方式中，所述第一抗体在胶体金吸附垫上的担载量为0.3μg/cm²。

在本发明的一种实施方式中，所述检测线由浓度为0.5～1.5mg/mL的融合蛋白溶液以0.5～1.5μL/cm的液体量包被在检测线位置处形成。

在本发明的一种实施方式中，所述检测线由浓度为1mg/mL的融合蛋白溶液以1μL/cm的液体量包被在检测线位置处形成。

在本发明的一种实施方式中，所述质控线由浓度为1～2mg/mL的第二抗体溶液以1～2μL/cm的液体量包被在质控线位置处形成。

在本发明的一种实施方式中，所述质控线由浓度为1.5mg/mL的第二抗体溶液以1.5μL/cm的液体量包被在质控线位置处形成。

在本发明的一种实施方式中，所述免疫标记为胶体金标记、胶体砷标记、胶体碳标记、有色乳胶标记或荧光乳胶标记。

在本发明的一种实施方式中，所述第一抗体为兔IgG抗体；所述第二抗体为羊抗兔IgG抗体。

在本发明的一种实施方式中，所述试纸还包括底板、样品垫和吸水垫；所述底板上沿液体层析方向依次设有样品垫、吸附垫、层析膜和吸水垫。

本发明技术方案，具有如下优点：

本发明提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白包括氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽，或者，与SEQ ID NO.1所示氨基酸序列具有80％以上同源性，且能够与幽门螺杆菌CagA抗体特异性结合的衍生多肽；所述融合蛋白能够与幽门螺杆菌CagA抗体特异性结合，在幽门螺杆菌CagA抗体检测中具有极高的应用前景；所述融合蛋白表达量较高，均一纯度较高，稳定不容易变性。

附图说明

图1：扩增产物的琼脂糖凝胶电泳结果。

图2：纯化蛋白的SDS-PAGE凝胶电泳分析结果。

图3：幽门螺杆菌CagA抗体检测试纸的整体结构示意图。

图4：阳性标本检测结果。

图5：阴性标本检测结果。

图3中，底板1、样品垫2、吸附垫3、层析膜4、吸水垫5、检测线T和质控线C。

具体实施方式

提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。

下述实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。

实施例1：融合蛋白及其制备

本实施例提供了一种能够与幽门螺杆菌CagA抗体特异性结合的融合蛋白；所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述融合蛋白的制备过程如下：

1、重组菌的制备

合成核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的编码融合蛋白HP2的基因；使用上游引物和下游引物对合成的基因进行PCR扩增，加入酶切位点Bam HⅠ/XhoⅠ，得到扩增产物(琼脂糖凝胶电泳回收扩增产物，扩增产物的琼脂糖凝胶电泳结果见图1)；将扩增产物与pMAl-C₂质粒(购自优宝公司)用限制性内切酶Bam HⅠ/XhoⅠ(购自NEB公司)酶切后连接，得到连接产物；将连接产物转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α(购自北京擎科生物有限公司)，得到转化产物；将转化产物涂布在含有100μg/mL氨苄霉素的LB固体培养基(购自索莱宝公司)上，于37℃恒温培养箱中倒置培养12h，得到转化子；挑取转化子接种至含有5mL含有100μg/mL氨苄霉素的LB液体培养基(购自索莱宝公司)中，于37℃、180rpm的条件下摇瓶培养12h后提取质粒进行酶切验证以及测序验证，验证正确即获得得到重组菌DH5α/pMAl-C₂-hp2。

2、重组菌的发酵

挑取步骤1获得的重组菌DH5α/pMAl-C₂-hp2的单菌落接种至500mL含有100μg/mL氨苄霉素的LB液体培养基中，于37℃、180rpm的条件下振荡培养12h，得到培养液；将培养液全部转接于1000mL含有100μg/mL氨苄霉素的LB液体培养基中，于37℃、220rpm的条件下振荡培养4h至OD₆₀₀＝0.8时，将温度降至16℃，于180rpm继续振荡培养1h，1h后，加入IPTG(终浓度1mM)，于16℃、180rpm的条件下发酵12h，获得发酵液。

3、融合蛋白纯化及鉴定

将发酵液8000rpm下离心10min，收集菌体；在菌体中加入50mL PBS缓冲液(pH7.4、浓度0.01M，购自赛默飞公司)重悬，得到重悬液；将高压破碎仪压力调至800bar对重悬液进行破碎，破碎3次，得到破碎液；将破碎液12000rpm下离心40min，取上清；将上清使用MBP柱(购自GE公司)进行纯化，得到纯化蛋白(对纯化蛋白进行SDS-PAGE凝胶电泳分析，分析结果见图2)；

其中，MBP柱纯化过程如下：

(1)滴出MBP柱中的保存液，加10mL水清洗MBP柱，重复2次；

(2)加10mL MBP平衡液平衡柱子，重复两次；

(3)将上清加入MBP柱中；

(4)用10mL平衡液满柱清洗杂蛋白两次；

(5)用4mL的洗脱液洗脱蛋白，收集。

使用Dextrin Sepharose High Performance(Lot:10288766)试剂盒(购自GE公司)对纯化蛋白进行二次纯化，得到融合蛋白，紫外分光光度计检测蛋白浓度为2.6mg/mL。

实施例2：幽门螺杆菌CagA抗体检测胶体金试纸及其制备

如图3所示，本实施例提供了一种幽门螺杆菌CagA抗体检测试纸，所述试纸包括底板1；所述底板1上沿液体层析方向依次设有样品垫2、吸附垫3、层析膜4和吸水垫5；所述吸附垫3上担载胶体金标记的实施例1所述融合蛋白和胶体金标记的兔IgG抗体；所述层析膜4上沿液体层析方向依次设有检测线T和质控线C；所述检测线T上包被实施例1所述融合蛋白；所述质控线C上包被羊抗兔IgG抗体；

其中，所述胶体金标记的融合蛋白在胶体金吸附垫上的担载量为0.5μg/cm²；所述胶体金标记的兔IgG抗体在胶体金吸附垫上的担载量为0.3μg/cm²；所述检测线由浓度为1mg/mL的胶体金标记的融合蛋白溶液以1μL/cm的液体量包被在检测线位置处形成；所述质控线由浓度为1.5mg/mL的胶体金标记的羊抗兔IgG抗体溶液以1.5μL/cm的液体量包被在质控线位置处形成。

所述幽门螺杆菌CagA抗体检测试纸的制备方法如下：

1、标记

1.1烧金

1)将量筒量取工艺用水792mL倒入三角烧瓶，用移液器移取浓度为2％(w/v，g/100mL)的氯金酸(购自阿拉丁公司)水溶液8mL加入到三角烧瓶中，使氯金酸的终浓度达到0.02％(w/v)，摇匀，置于功率2000瓦的电炉上加热至完全沸腾；

2)完全沸腾后迅速向三角烧瓶中加入1％(w/v)柠檬酸三钠(购自阿拉丁公司)溶液15mL；继续加热，此时可观察到淡黄色的氯金酸水溶液在柠檬酸三钠加入后很快变灰色，续而转成黑色，随后逐渐稳定成红色，全过程2～3分钟，10分钟深红色不再变化，停止加热；

3)胶体金冷却至室温(25℃)，并用工艺用水定溶至初始体积，备用，此瓶胶体金为清亮透明的，得到二倍金溶液。

1.2调节pH

1)取10mL的小试管，用移液枪取1mL的步骤1.1制得的二倍金溶液于试管中；

2)取1μL 0.2mol/L K₂CO₃，1μL抗原(抗原分别为实施例1纯化后的融合蛋白和购自Sigma公司的原液浓度为16.8mg/mL的兔IgG)加入试管中，轻轻震荡，观察颜色变化，若颜色变化，则梯度增加K₂CO₃的量，直至颜色不发生变化(在此实验中，将融合蛋白的pH定为0.6％，将兔IgG的pH定为0.8％)。

1.3兔IgG的标记(pH：0.8％、终浓度20μg/mL)

1)取步骤1.1制得的二倍金溶液60mL置于洁净的小烧杯中，用磁力搅拌器匀速搅拌，加入480μL 0.2mol/L K₂CO₃，71.5μL步骤1.2制得的兔IgG溶液搅拌15min，加入300μL10％(w/v)奶粉搅拌15min；

2)用洗净的离心管灌装步骤1)制得的溶液并用电子天平称重配平后在低温高速离心机上12000rpm离心15min，取出吸净上清液，弃去，收集沉淀，将沉淀用3mL 5％(v/v)TuIgG稀释液(购自Sigma公司)复溶，得到标记好的兔IgG溶液。

1.4融合蛋白标记(pH：0.6％、融合蛋白终浓度为8μg/mL)

1)取步骤1.1制得的二倍金溶液50mL置于洁净的小烧杯中，用磁力搅拌器匀速搅拌，加入300μL 0.2mol/L K₂CO₃，(50mL*8μg/mL)/2.6mg/mL步骤1.2制得的融合蛋白溶液(153.8μL)搅拌15min，加入250μL 10％(w/v)奶粉搅拌15min；

2)用洗净的离心管灌装并平衡后在低温高速离心机上离心12000rpm离心15min，取出吸净上清液，弃去，收集沉淀，将沉淀用5％(v/v)TuIgG稀释液(购自Sigma公司)复溶至2mL后，加入400μL的标记好的兔IgG溶液，用复溶液(为0.01M的添加有2％(w/v)BSA、0.02％(w/v)硫柳汞的PBS缓冲液)定容至3mL，得到标记好的融合蛋白溶液；

3)取一张的胶体金吸附垫，喷金线浓度为3.0μL/cm，干燥间干燥4h，保存。

2、包被

2.1T线

例：配100μL的T线，包膜浓度为0.8mg/mL，融合蛋白浓度为2.6mg/mL。

融合蛋白的量：(100μL*0.8mg/mL)/2.6mg/mL步骤1.2制得的融合蛋白溶液，为30.8μL；

酒精：100μL/10，为10μL；

基液(0.01M的PBS缓冲液+2％(w/v)海藻糖)：100μL-融合蛋白的量-酒精的量，为59.2μL。

将上述溶液依次取样到500μL的EP管中，旋涡振荡器混匀。

2.2C线

例：配100μL的C线，包膜浓度为0.8mg/mL，羊抗兔IgG(购自Sigma公司)浓度12.8mg/mL。

抗原的量：(100μL*1.5mg/mL)/12.8mg/mL，为11.7μL；

酒精：100μL/10，为10μL；

将上述溶液依次取样到500μL的EP管中，旋涡振荡器混匀。

2.3处理

将配制好的C、T线溶液在包被机上包被，包被后置于4℃冰箱不低于4h，用五项处理液浸泡30min，贴膜，置于干燥条件干燥即可。

3、复合

在膜C线一侧贴上手柄纸，搭在膜面的距离1mm，金裁成条，贴在膜T线一侧，贴上HP载体，在金上贴上即时贴，裁成3.0mm宽试纸条，得到幽门螺杆菌CagA抗体检测试纸。

实施例3：幽门螺杆菌CagA抗体检测胶体金试纸的应用

取阴性标本1000份和阳性标本100份(血液样本，来自河南省疾病预防控制中心)，采用实施例2的幽门螺杆菌CagA抗体检测试纸对样本进行幽门螺杆菌CagA抗体的检测，若在检测线和质控线各出现一条色带，则为阳性，若仅在质控线出现一条色带，则为阴性，检测结果如下：

阴性符合率大于95％(图4为部分阴性标本检测结果)；阳性检出率大于96％(图5为部分阳性标本检测结果)。可见，使用实施例2的幽门螺杆菌CagA抗体检测试纸对样本进行幽门螺杆菌CagA抗体检测的准确度较高，使用实施例2的幽门螺杆菌CagA抗体检测试纸通过体外检测病人血液样本中是否含有幽门螺旋杆菌抗体，以推测病人是否曾经感染或正在感染幽门螺旋杆菌极具应用前景。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

序列表

<110> 南通伊仕生物技术股份有限公司

<120> 融合蛋白及其在幽门螺杆菌CagA抗体检测中的应用

<160> 4

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 676

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 1

Pro Gln Gln Phe Ile Asn Asn Leu Gln Val Ala Phe Leu Lys Val Asp

1 5 10 15

Asn Ala Val Ala Ser Tyr Asp Pro Asp Gln Lys Pro Ile Val Asp Lys

20 25 30

Asn Asp Arg Asp Asn Arg Gln Ala Phe Glu Gly Ile Ser Gln Leu Arg

35 40 45

Glu Glu Tyr Ser Asn Lys Ala Ile Lys Asn Pro Thr Lys Lys Asn Gln

50 55 60

Tyr Phe Ser Asp Phe Ile Glu Lys Ser Asn Asp Leu Ile Asn Lys Asp

65 70 75 80

Asn Leu Ile Asp Val Glu Ser Ser Thr Glu Ser Phe Arg Lys Phe Gly

85 90 95

Asp Gln Arg Tyr Arg Ile Phe Thr Ser Trp Val Ser His Gln Asn Asp

100 105 110

Pro Ser Lys Ile Asn Thr Arg Ser Ile Arg Asn Phe Met Glu His Thr

115 120 125

Ile Gln Pro Pro Ile Pro Asp Asp Lys Glu Lys Ala Glu Phe Leu Lys

130 135 140

Ser Ala Lys Gln Ser Phe Ala Gly Ile Ile Ile Gly Asn Gln Ile Arg

145 150 155 160

Thr Asp Gln Lys Phe Met Gly Val Phe Asp Glu Ser Leu Lys Glu Arg

165 170 175

Gln Glu Ala Glu Lys Asn Gly Gly Pro Thr Gly Gly Asp Trp Leu Asp

180 185 190

Ile Phe Leu Ser Phe Ile Phe Asp Lys Lys Gln Ser Ser Asp Val Lys

195 200 205

Glu Ala Ile Asn Gln Glu Pro Val Pro His Val Gln Pro Asp Ile Ala

210 215 220

Thr Ser Thr Thr His Ile Gln Gly Leu Pro Pro Glu Ser Arg Asp Leu

225 230 235 240

Leu Asp Glu Arg Gly Asn Phe Ser Lys Phe Thr Leu Gly Asp Met Glu

245 250 255

Met Leu Asp Val Glu Gly Val Ala Asp Met Asp Pro Asn Tyr Lys Phe

260 265 270

Asn Gln Leu Leu Ile His Asn Asn Ala Leu Ser Ser Val Leu Met Gly

275 280 285

Ser His Asp Gly Ile Glu Pro Glu Lys Val Ser Leu Leu Tyr Ala Gly

290 295 300

Asn Gly Gly Phe Gly Asp Lys His Asp Trp Asn Ala Thr Val Gly Tyr

305 310 315 320

Lys Asp Gln Gln Gly Asn Asn Val Ala Thr Ile Ile Asn Val His Met

325 330 335

Lys Asn Gly Ser Gly Leu Val Ile Ala Gly Gly Glu Lys Gly Ile Asn

340 345 350

Asn Pro Ser Phe Tyr Leu Tyr Lys Glu Asp Gln Leu Thr Gly Ser Gln

355 360 365

Arg Ala Leu Ser Gln Glu Glu Ile Leu Asn Lys Ile Asp Phe Met Glu

370 375 380

Phe Leu Ala Gln Asn Asn Ala Lys Leu Asp Asn Leu Ser Glu Lys Glu

385 390 395 400

Lys Glu Lys Phe Arg Asn Glu Ile Lys Asp Phe Gln Lys Asp Ser Lys

405 410 415

Pro Tyr Leu Asp Ala Leu Gly Asn Asp Arg Ile Thr Phe Val Ser Lys

420 425 430

Lys Asp Pro Lys His Ser Ala Leu Ile Thr Glu Phe Asn Lys Gly Asp

435 440 445

Leu Ser Tyr Thr Leu Lys Asp Tyr Gly Lys Lys Ala Asp Lys Ala Leu

450 455 460

Asp Arg Glu Lys Asn Val Thr Leu Gln Gly Ser Leu Lys His Asp Gly

465 470 475 480

Val Met Phe Val Asn Tyr Ser Asn Phe Lys Tyr Thr Asn Ala Ser Lys

485 490 495

Ser Pro Asn Lys Gly Val Gly Val Thr Asn Gly Val Ser His Leu Glu

500 505 510

Ala Gly Phe Ser Lys Val Ala Val Phe Asn Leu Pro Asn Leu Asn Asn

515 520 525

Leu Ala Ile Thr Ser Val Val Arg Arg Asp Leu Glu Asp Lys Leu Ile

530 535 540

Ala Lys Gly Leu Pro Pro Gln Glu Ala Asn Lys Leu Val Lys Gly Phe

545 550 555 560

Leu Ser Ser Asn Lys Glu Leu Val Gly Lys Ala Leu Asn Phe Asn Lys

565 570 575

Ala Val Ala Glu Ala Lys Asn Thr Gly Asn Tyr Asp Glu Val Lys Arg

580 585 590

Ala Gln Lys Asp Leu Glu Lys Ser Leu Lys Lys Arg Glu Arg Leu Glu

595 600 605

Lys Asp Val Ala Lys Asn Leu Glu Ser Lys Ser Gly Asn Lys Asn Lys

610 615 620

Met Glu Ala Lys Ser Gln Ala Asn Ser Gln Lys Asp Glu Ile Phe Ala

625 630 635 640

Leu Ile Asn Lys Glu Ala Asn Arg Asp Ala Arg Ala Ile Ala Tyr Thr

645 650 655

Gln Asn Leu Lys Gly Ile Lys Arg Glu Leu Ser Asp Lys Leu Glu Asn

660 665 670

Ile Asn Lys Asp

675

<210> 2

<211> 2043

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

ccgcagcagt tcatcaacaa cctccaagtt gcgttcctga aagttgacaa cgctgttgct 60

tcttacgacc cggaccagaa accgatagtt gacaaaaacg accgtgacaa tcgtcaggcg 120

ttcgaaggta tctcgcagct gcgtgaagaa tactctaaca aagctatcaa aaacccgacc 180

aaaaaaaacc agtacttctc tgacttcatc gaaaaatcta acgacctgat aaacaaagac 240

aacctgatag acgttgaatc ttctaccgaa tctttccgta aattcggtga ccagcgttac 300

cgtatcttca cctcttgggt ttctcaccag aacgacccgt ctaaaatcaa cacccgttct 360

atccgtaact tcatggaaca caccatccag ccgccgatac cggacgacaa agaaaaagct 420

gaatttctga aatctgctaa acagtctttc gctggtatca tcatcggtaa ccagatacgt 480

accgaccaga aattcatggg tgttttcgac gaatctctga aagaacgtca ggaagctgaa 540

aaaaacggtg gtccgaccgg tggtgactgg ctcgacatct tcctgagctt catcttcgac 600

aagaaacagt cttctgacgt taaagaagct atcaaccagg aaccggttcc gcacgttcag 660

ccggacatcg ctacctctac cacccacatc cagggtctgc cgccggaatc tcgtgacctg 720

ctggacgaac gtggtaactt ctctaaattc accctgggtg acatggaaat gctggacgtt 780

gaaggtgttg ctgacatgga cccgaactac aaattcaacc agctgctgat acacaacaac 840

gctctgtctt ctgttctgat gggttctcac gacggtatcg aaccggaaaa agtttctctg 900

ctgtacgctg gtaacggtgg tttcggtgac aaacacgact ggaacgctac cgttggttac 960

aaagaccagc agggtaacaa cgttgctacc atcatcaacg ttcacatgaa aaacggttct 1020

ggtctggtta tcgctggtgg tgaaaaaggt atcaacaacc cgtctttcta cctgtacaaa 1080

gaagaccagc tgaccggttc tcagcgtgct ctgtctcagg aagaaatcct gaacaaaatc 1140

gacttcatgg aatttctggc tcagaacaac gctaaactgg acaacctgtc tgaaaaagaa 1200

aaagaaaaat tccgtaacga aatcaaagac ttccagaaag actctaaacc gtacctggac 1260

gctctgggta acgaccgtat caccttcgtt tctaaaaaag acccgaaaca ctctgctctg 1320

ataaccgaat ttaacaaagg tgacctgtct tacaccctga aagactacgg taaaaaagct 1380

gacaaagctc tggaccgtga aaaaaacgtt accctgcagg gttctctgaa acacgacggt 1440

gttatgttcg ttaactactc taacttcaaa tacaccaacg cttctaaatc tccgaacaaa 1500

ggtgttggcg ttactaacgg tgtaagccac ctggaggcgg gcttctctaa agttgcggtt 1560

ttcaacctgc cgaacctgaa caacctggct atcacctctg ttgttcgtcg tgacctggaa 1620

gacaaactga tagctaaagg tctgccgccg caggaagcta acaaactggt taaaggtttc 1680

ctgtcttcta acaaagaact ggttggtaaa gctctgaact tcaacaaagc tgttgctgaa 1740

gctaaaaaca ccggtaacta cgacgaagtt aaacgtgctc agaaagacct ggaaaaatct 1800

ctgaaaaaac gtgaacgtct ggaaaaagac gttgctaaaa acctggaatc taaatctggt 1860

aacaaaaaca aaatggaagc taaatctcag gctaactctc agaaagacga aatcttcgct 1920

ctgataaaca aagaagctaa ccgtgacgct cgtgctatcg cttacaccca gaacctgaaa 1980

ggtatcaaac gtgaactgtc tgacaaactg gaaaacatca acaaagacct gaaagacttc 2040

tct 2043

<210> 3

<211> 36

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

cgcggatcca tgccgcagca gttcatcaac aacctc 36

<210> 4

<211> 36

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

ccgctcgagt taagagaagt ctttcaggtc tttgtt 36

Claims

1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括：

(a)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽；

或者，(b)与SEQ ID NO.1所示氨基酸序列具有80％以上同源性，且能够与幽门螺杆菌CagA抗体特异性结合的衍生多肽。

2.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1所述的融合蛋白。

3.如权利要求2所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。

4.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒携带权利要求2或3所述的核酸分子。

5.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞携带权利要求2或3所述的核酸分子；

或者，所述宿主细胞携带权利要求4所述的重组质粒。

6.一种制备权利要求1所述的融合蛋白的方法，其特征在于，所述方法为先将权利要求5所述的宿主细胞接种至培养基中进行发酵，得到发酵液，然后从发酵液中分离得到权利要求1所述的融合蛋白。

7.一种幽门螺杆菌CagA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒以权利要求1所述的融合蛋白作为幽门螺杆菌CagA抗体的检测抗原。

8.一种检测幽门螺杆菌CagA抗体的方法，其特征在于，所述方法使用权利要求7所述的幽门螺杆菌CagA抗体检测试剂盒对待测样本进行检测。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述待测样品为全血或血清。

10.权利要求1所述的融合蛋白或权利要求7所述的试剂盒或权利要求8或9所述的方法在检测幽门螺杆菌CagA抗体方面的应用。