CN116196248A - 一种干细胞修护精华液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种干细胞修护精华液,包括以下重量份的成分:干细胞因子0.5‑1份、南瓜愈伤组织7‑12份、叶下珠脂素0.5‑0.8份、甘酪二肽4‑8份、透明质酸10‑15份、烟酰胺5‑10份、甘草酸二钾0.5‑1份、增稠剂0.1‑0.5份、防腐剂0.1‑0.3份、去离子水50‑60份。本发明的精华液中添加南瓜愈伤组织和干细胞因子、叶下珠脂素、甘酪二肽等成分协同作用,快速修复受损皮肤屏障,提升皮肤抵御力,增强皮肤的自我修护能力。
Description
技术领域
本发明涉及一种精华液,尤其涉及一种干细胞修护精华液及其制备方法。
背景技术
皮肤是人体的第一道防线,是人类与外界环境接触的最大器官,覆盖全身,是身体其他器官最外层的保护伞。它表面有一层由皮脂腺里分泌出来的油脂、角质细胞产生的脂质、汗腺里分泌出来的汗液和脱落的角质细胞经过低温乳化,在皮肤表面而形成的一层保护膜,称为皮脂膜,可以减少皮肤表面水分蒸发,阻隔外界粉尘污垢、刺激物等侵入皮肤,为皮肤提供天然的屏障保护层,作为皮肤屏障能锁住皮肤水分和油脂,并抵抗各种皮肤表面病菌入侵,是维持皮肤健康的重要结构。
为满足工作生活的需求,人们常常需要每天长时间面对电脑、手机等辐射性电器,会造成皮肤成纤维细胞的增殖抑制,皮肤上病原微生物增多,从而破坏皮肤屏障,造成皮肤衰老。外界环境变化的影响如寒冷、干燥、以及雾霾等恶劣环境问题,也会造成皮肤屏障受损。一旦皮肤的屏障功能被破坏了,皮肤的耐受性或防御性就会下降,会出现皮肤水分易丢失,导致皮肤干燥、发红、刺痛,容易引发脱屑、皴裂、炎症等,长久下去引起皮肤衰老。
市场上针对皮肤屏障修护功效的护肤品很多,然而,许多护肤品为了追求快速、直接的效果,添加大量的化学药品,增加皮肤的负担,只会让皮肤变得更加敏感,抵抗力下降,长期使用会对皮肤造成不同程度的伤害。因为研究一种舒缓、低刺激型的护肤产品用于皮肤屏障的修护显得尤其重要。
发明内容
为了克服现有技术的不足,本发明的目的之一在于提供一种干细胞修护精华,成分安全,能有效改善皮肤屏障受损的问题。
本发明的目的之二在于提供一种干细胞修护精华的制备方法。
本发明的目的之一采用如下技术方案实现:
一种干细胞修护精华液,包括以下重量份的成分:干细胞因子0.5-1份、南瓜愈伤组织7-12份、叶下珠脂素0.5-0.8份、甘酪二肽4-8份、透明质酸10-15份、烟酰胺5-10份、甘草酸二钾0.5-1份、增稠剂0.1-0.5份、防腐剂0.1-0.3份、去离子水50-60份。
进一步地,所述干细胞修护精华液包括以下重量份的成分:干细胞因子0.3份、南瓜愈伤组织10份、叶下珠脂素0.7份、甘酪二肽5份、透明质酸12份、烟酰胺8份、甘草酸二钾0.6份、增稠剂0.3份、防腐剂0.2份、去离子水55份。
进一步地,所述干细胞因子由表皮生长因子和成纤维细胞生长因子以重量份比1:1组成。
进一步地,所述南瓜愈伤组织的制备过程如下:对南瓜种子预处理后进行暗培养,发芽后转入光照培养,取子叶作为外植体接种在愈伤组织诱导培养基中,诱导培养得到愈伤组织,将所述愈伤组织冻干后备用。
进一步地,取南瓜种子浸泡后消毒,然后在无菌条件下置于pH5.8-6.0,添加25-30g/L蔗糖、5-6g/L琼脂粉的MS培养基上进行暗培养,发芽后进行光照培养,光照周期为15-17h/d,光照强度为2000-3000lx,温度为24-26℃。
进一步地,所述愈伤组织诱导培养基为添加1-2mg/L6-BA,0.1-0.2mg/LNAA、20-25g/L蔗糖、5-10g/L琼脂粉的MS培养基,诱导培养的光照周期为10-12h/d,光照强度1500-2000lx,温度为24-26℃,培养时间为20天。
进一步地,所述增稠剂为黄原胶,所述防腐剂为对羟基苯乙酮。
本发明的目的之二采用如下技术方案实现:
所述干细胞修护精华液的制备方法,包括以下步骤:
(1)向去离子水中加入甘酪二肽、透明质酸、烟酰胺、甘草酸二钾,加热至60-70℃,混合均匀;
(2)将步骤(1)的混合物降温至45-50℃,在搅拌条件下加入干细胞因子、南瓜愈伤组织、叶下珠脂素、增稠剂,混合均匀后降至常温,加入防腐剂,过滤后得产品。
进一步地,步骤(2)中混合物料经120目滤网过滤。
相比现有技术,本发明的有益效果在于:本发明提供一种干细胞修护精华液,在精华液中添加南瓜愈伤组织和干细胞因子协同作用快速修复受损皮肤屏障,提升皮肤抵御力,帮助维持皮肤状态的稳定,降低经皮水分的流失,进而改善面部皮肤干燥、敏感等症状。该精华液中添加的叶下珠脂素提升了南瓜愈伤组织在产品中的稳定性,使其保持较好的活性。添加的甘酪二肽可以促进真皮成纤维细胞分泌胶原蛋白,进一步增强皮肤的自我修护能力。本发明的精华液成分安全,刺激性低,皮肤吸收无负担。
具体实施方式
下面,结合具体实施方式,对本发明做进一步描述,需要说明的是,在不相冲突的前提下,以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。
实施例1
一种干细胞修护精华,由以下重量份的成分组成:干细胞因子0.3份、南瓜愈伤组织10份、叶下珠脂素0.7份、甘酪二肽5份、透明质酸12份、烟酰胺8份、甘草酸二钾0.6份、黄原胶0.3份、对羟基苯乙酮0.2份、去离子水55份;
干细胞因子由表皮生长因子和成纤维细胞生长因子以重量比1:1组成;
南瓜愈伤组织的制备过程如下:取南瓜种子在40℃水浴中浸泡5h,在超净台上用75%的酒精消毒,再用0.1%的HgCl2溶液消毒10min,无菌水冲洗后用无菌滤纸吸干水分,然后在无菌条件下置于pH5.8,添加25g/L蔗糖、5g/L琼脂粉的MS培养基上进行暗培养,发芽后进行光照培养,光照周期为15h/d,光照强度为2000lx,温度为24℃,将刚转绿两天的子叶作为外植体接种在愈伤组织诱导培养基中,愈伤组织诱导培养基为添加1mg/L6-BA,0.1mg/LNAA、20g/L蔗糖、5g/L琼脂粉的MS培养基,诱导培养的光照周期为10h/d,光照强度1500lx,培养时间为20天,诱导培养得到愈伤组织,将所述愈伤组织冻干后备用。
上述干细胞修护精华液的制备方法,包括以下步骤:
(1)向去离子水中加入甘酪二肽、透明质酸、烟酰胺、甘草酸二钾,加热至60℃,混合均匀;
(2)将步骤(1)的混合物降温至45℃,在搅拌条件下加入干细胞因子、南瓜愈伤组织、叶下珠脂素、黄原胶,混合均匀后降至常温,加入对羟基苯乙酮,经120目滤网过滤得产品。
实施例2
一种干细胞修护精华,由以下重量份的成分组成:干细胞因子0.5份、南瓜愈伤组织7份、叶下珠脂素0.5份、甘酪二肽4份、透明质酸10份、烟酰胺5份、甘草酸二钾0.5份、黄原胶0.1份、对羟基苯乙酮0.1份、去离子水50份。
干细胞因子由表皮生长因子和成纤维细胞生长因子以重量比1:1组成;
所述南瓜愈伤组织的制备过程如下:取南瓜种子在40℃水浴中浸泡5h,在超净台上用75%的酒精消毒,再用0.1%的HgCl2溶液消毒10min,无菌水冲洗后用无菌滤纸吸干水分,然后在无菌条件下置于pH5.9,添加28g/L蔗糖、6g/L琼脂粉的MS培养基上进行暗培养,发芽后进行光照培养,光照周期为16h/d,光照强度为2500lx,温度为25℃,将刚转绿两天的子叶作为外植体接种在愈伤组织诱导培养基中,愈伤组织诱导培养基为添加1-2mg/L6-BA,0.1-0.2mg/LNAA、20-25g/L蔗糖、5-10g/L琼脂粉的MS培养基,诱导培养的光照周期为11h/d,光照强度1800lx,温度为25℃,培养时间为20天,诱导培养得到愈伤组织,将所述愈伤组织冻干后备用。
上述干细胞修护精华液的制备方法,包括以下步骤:
(1)向去离子水中加入甘酪二肽、透明质酸、烟酰胺、甘草酸二钾,加热至65℃,混合均匀;
(2)将步骤(1)的混合物降温至48℃,在搅拌条件下加入干细胞因子、南瓜愈伤组织、叶下珠脂素、黄原胶,混合均匀后降至常温,加入对羟基苯乙酮,经120目滤网过滤得产品。
实施例3
一种干细胞修护精华,由以下重量份的成分组成:干细胞因子1份、南瓜愈伤组织12份、叶下珠脂素0.8份、甘酪二肽8份、透明质酸15份、烟酰胺10份、甘草酸二钾1份、黄原胶0.5份、对羟基苯乙酮0.3份、去离子水60份。
干细胞因子由表皮生长因子和成纤维细胞生长因子以重量比1:1组成;
所述南瓜愈伤组织的制备过程如下:取南瓜种子在40℃水浴中浸泡5h,在超净台上用75%的酒精消毒,再用0.1%的HgCl2溶液消毒10min,无菌水冲洗后用无菌滤纸吸干水分,然后在无菌条件下置于pH6.0,添加30g/L蔗糖、6g/L琼脂粉的MS培养基上进行暗培养,发芽后进行光照培养,光照周期为17h/d,光照强度为3000lx,温度为26℃,将刚转绿两天的子叶作为外植体接种在愈伤组织诱导培养基中,愈伤组织诱导培养基为添加2mg/L6-BA,0.2mg/LNAA、25g/L蔗糖、10g/L琼脂粉的MS培养基,诱导培养的光照周期为12h/d,光照强度2000lx,温度为26℃,培养时间为20天,诱导培养得到愈伤组织,将所述愈伤组织冻干后备用。
上述干细胞修护精华液的制备方法,包括以下步骤:
(1)向去离子水中加入甘酪二肽、透明质酸、烟酰胺、甘草酸二钾,加热至70℃,混合均匀;
(2)将步骤(1)的混合物降温至50℃,在搅拌条件下加入干细胞因子、南瓜愈伤组织、叶下珠脂素、黄原胶,混合均匀后降至常温,加入对羟基苯乙酮,经120目滤网过滤得产品。
对比例1
对比例1为一种干细胞修护精华,和实施例1的区别为:不添加南瓜愈伤组织,其他均和实施例1相同。
对比例2
对比例2为一种干细胞修护精华,和实施例1的区别为:将南瓜愈伤组织替换为南瓜种子提取物,南瓜种子提取物的制备过程如下:将南瓜种子脱脂后得到的南瓜饼粕在65℃的热水中浸提,离心取上清液冷冻干燥得到。其他均和实施例1相同。
对比例3
对比例3为一种干细胞修护精华,和实施例1的区别为:不添加叶下珠脂素,其他均和实施例1相同。
对比例4
对比例4为一种干细胞修护精华,和实施例1的区别为:不添加南瓜愈伤组织和叶下珠脂素,其他均和实施例1相同。
对比例5
对比例5为一种干细胞修护精华,和实施例1的区别为:不添加甘酪二肽,其他均和实施例1相同。
对比例6
对比例6为实施例1的产品在45℃下密封放置4周。
对比例7
对比例7为对比例3的产品在45℃下密封放置4周。
安全性试验:对实施例1至3的产品进行安全性试验,过程如下:取健康家兔的心脏血5mL,加入2%草酸钾溶液0.5mL,离心去除上清,加入20mmol/L的PBS溶液将其稀释至10mL得到红细胞悬液。将待测样品用PBS稀释,取100μL上述红细胞悬液加入5mL待测产品的稀释液中,混合均匀,使最终的混合液中待测产品的浓度分别为5mg/mL、10mg/mL、20mg/mL、50mg/mL、100mg/mL,在37℃下孵育30min,离心取上清用分光光度计检测其在560nm处的吸光度A,用PBS溶液作为阴性对照,蒸馏水作为全溶血对照组,计算溶血率,绘制溶血率-样品浓度标准曲线,计算50%红细胞发生溶血时样品的浓度即HD50值,结果如表2所示。
溶血率=(产品组A值-阴性对照A值)/(全溶血对照组A值-阴性对照组A值)×100%
将待测产品用PBS稀释至10g/L,取5mL加入100μL上述红细胞悬液,混合均匀后在37℃下孵育30min,离心取上清分别测试在540nm和575nm处的吸光度A,用1mg/mL十二烷基磺酸钠作为阳性对照,蒸馏水作为空白对照,计算蛋白变性指数DI,结果如表2所示。
DI=(R1-R2)/(R1-R3)×100%,其中R1=空白对照A575/空白对照A540,R2=产品组A575/产品组A540,R3=阳性对照A575/阳性对照A540。
根据IP值对待测产品进行刺激性评价,IP=HD50/DI,评价标准如表1所示,结果如表2所示。
表1
IP值 | 分级 |
>100 | 无刺激 |
10<IP≤100 | 微刺激 |
1<IP≤10 | 轻度刺激 |
0.1<IP≤1 | 中度刺激 |
表2
组别 | HD50(mg/L) | DI(%) | IP值 | 刺激性分级 |
实施例1 | 24079 | 1.21 | >100 | 无刺激 |
实施例2 | 23054 | 1.28 | >100 | 无刺激 |
实施例3 | 24012 | 1.30 | >100 | 无刺激 |
由表2可以看出本发明的产品安全无刺激。
取冻存的人真皮成纤维细胞在37℃水浴中复苏,离心后用DMEM/F12培养基(10%FBS)重悬,调整细胞密度为0.9×105个/mL,接种在24孔板中,每孔1mL培养基,在37℃,5%CO2的培养箱中培养24h,分别设置实验组和对照组,每组设3个复孔,其中实验组1的培养基中含有10nM甘酪二肽,实验组2的培养基中含有20nM甘酪二肽,实验组3的培养基中含有30nM甘酪二肽,空白组不添加甘酪二肽,继续培养培养72h,收集细胞上清液,采用Anti-Human Procollagen Type I C-peptide(PIP)试剂盒检测上清液中I型胶原蛋白的表达量,结果如表3所示。
表3
由表3可以看出添加甘酪二肽的实验组中真皮成纤维细胞I型胶原蛋白表达量有一定程度的提高,将其用在精华液中提高皮肤的自我修护能力。
选取年龄在25-45岁之间的受试者150人,面部皮肤均有中轻度的皮肤屏障受损情况,如出现干燥、红斑、脱屑等症状,经诊断排除上述症状为其他皮肤病引起的。将上述受试者随机分为10组,每组15人。试验开始前受试者清洁皮肤后进入22±1℃,相对湿度50%的气候控制室内静坐30min。每天早晚分别使用实施例1至3,对比例1至7的产品,使用量以均匀涂抹全脸为准,连续使用4周。在此期间不使用其他护肤品。分别在第0d(第一次使用前)、第28d采用德国CK公司的TM300多功能皮肤探测仪测量皮肤的经皮水分散失值(TEWL),结果如表4所示。
表4
组别 | 第0d TEWL(g/m2h) | 第28d TEWL(g/m2h) |
实施例1 | 22.97±2.35 | 17.66±1.98 |
实施例2 | 23.56±2.44 | 18.03±2.01 |
实施例3 | 22.17±2.62 | 17.86±2.04 |
对比例1 | 22.71±2.36 | 20.33±1.99 |
对比例2 | 23.25±2.96 | 19.96±1.63 |
对比例3 | 23.69±3.01 | 17.25±1.84 |
对比例4 | 24.06±3.12 | 21.39±1.78 |
对比例5 | 23.37±2.86 | 21.52±2.12 |
对比例6 | 22.84±2.39 | 17.59±1.92 |
对比例7 | 23.26±2.88 | 22.87±2.09 |
当皮肤屏障受损伤后TEWL值会升高,随着皮肤屏障的修复TEWL值降低。由表4可以看出实施例1至3中的产品皮肤屏障修护能力较好,对比例1至7制备的产品在使用效果上不及实施例1。
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式,不能以此来限定本发明保护的范围,本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。
Claims (9)
1.一种干细胞修护精华液,其特征在于,包括以下重量份的成分:干细胞因子0.5-1份、南瓜愈伤组织7-12份、叶下珠脂素0.5-0.8份、甘酪二肽4-8份、透明质酸10-15份、烟酰胺5-10份、甘草酸二钾0.5-1份、增稠剂0.1-0.5份、防腐剂0.1-0.3份、去离子水50-60份。
2.根据权利要求1所述干细胞修护精华液,其特征在于,包括以下重量份的成分:干细胞因子0.3份、南瓜愈伤组织10份、叶下珠脂素0.7份、甘酪二肽5份、透明质酸12份、烟酰胺8份、甘草酸二钾0.6份、增稠剂0.3份、防腐剂0.2份、去离子水55份。
3.根据权利要求1所述干细胞修护精华液,其特征在于,所述干细胞因子由表皮生长因子和成纤维细胞生长因子以重量份比1:1组成。
4.根据权利要求1所述干细胞修护精华液,其特征在于,所述南瓜愈伤组织的制备过程如下:对南瓜种子预处理后进行暗培养,发芽后转入光照培养,取子叶作为外植体接种在愈伤组织诱导培养基中,诱导培养得到愈伤组织,将所述愈伤组织冻干后备用。
5.根据权利要求4所述干细胞修护精华液,其特征在于,取南瓜种子浸泡后消毒,然后在无菌条件下置于pH5.8-6.0,添加25-30g/L蔗糖、5-6g/L琼脂粉的MS培养基上进行暗培养,发芽后进行光照培养,光照周期为15-17h/d,光照强度为2000-3000lx,温度为24-26℃。
6.根据权利要求4所述干细胞修护精华液,其特征在于,所述愈伤组织诱导培养基为添加1-2mg/L6-BA,0.1-0.2mg/LNAA、20-25g/L蔗糖、5-10g/L琼脂粉的MS培养基,诱导培养的光照周期为10-12h/d,光照强度1500-2000lx,温度为24-26℃,培养时间为20天。
7.根据权利要求1所述干细胞修护精华液,其特征在于,所述增稠剂为黄原胶,所述防腐剂为对羟基苯乙酮。
8.如权利要求1至7任一项所述干细胞修护精华液的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)向去离子水中加入甘酪二肽、透明质酸、烟酰胺、甘草酸二钾,加热至60-70℃,混合均匀;
(2)将步骤(1)的混合物降温至45-50℃,在搅拌条件下加入干细胞因子、南瓜愈伤组织、叶下珠脂素、增稠剂,混合均匀后降至常温,加入防腐剂,过滤后得产品。
9.根据权利要求8所述干细胞修护精华液的制备方法,其特征在于,步骤(2)中混合物料经120目滤网过滤。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20230602 |