CN111616992A - 一种皮肤屏障修护复合物、肌底液及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种皮肤屏障修护复合物、肌底液及其制备方法。所述皮肤屏障修护复合物包括：修复皮肤屏障的组合物、羟基积雪草甙、葡萄叶提取物、皱波角叉菜提取物、糖鞘脂类和糖脂；所述修复皮肤屏障的组合物包括：海茴香愈伤组织培养物滤液、四氢甲基嘧啶羧酸和水解红藻提取物。所述肌底液按质量百分含量计包括：1‑10％所述的皮肤屏障修护复合物、10‑30％保湿剂、1‑10％润肤剂和1‑5％乳化剂，余量为水。所述皮肤屏障修护复合物可有效平衡微生物屏障、稳定角质屏障、强化免疫力屏障，使肌肤健康稳定。由此皮肤屏障修护复合物制备得到的肌底液能够有效调节角质更新，强化肌肤角质屏障，提升肌肤抵御力。

Description

一种皮肤屏障修护复合物、肌底液及其制备方法
技术领域
本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种皮肤屏障修护复合物、肌底液 及其制备方法。
背景技术
皮肤是人类体表的天然屏障，存在着许多微生物，皮肤微生态平衡保持着 皮肤环境的稳定，对机体的健康有重要作用。健康的皮肤可以有效地挽留住水 分，从而保持皮肤良好的弹性和光泽的外表。但皮肤受生活环境和自身生理条 件的影响，肌肤可能出现敏感、干燥脱皮、油脂分泌过剩、产生色斑、皮肤松 弛老化、红血丝等肌肤问题，究其最主要的原因就是肌肤屏障受到损害。肌肤 屏障是由角质层和皮脂膜共同构建的一层保护性结构，其既可以缓冲理化刺激、 有效抑制细菌滋生、阻隔细菌、病毒、真菌对肌肤的伤害，又可以锁住水分， 防止水分蒸发，从而实现保持水分的功能。肌肤屏障受到损害，导致肌肤遭受细菌、病毒、真菌的侵蚀，也会导致肌肤内的水分肆无忌惮的蒸发，进而使肌 肤出现各种问题。
目前常用的修复肌肤屏障的护肤品存在一些弊端：一是只注重功效的加强， 却忽略了皮肤屏障的健康，只有健康的皮肤才能更好的吸收营养，只有健康的 肌肤才能远离各种问题，才能持久地保持青春靓丽。二是只注重单一的屏障保 养，却忽略了皮肤的其它屏障，皮肤表面看起来不错，深层皮肤问题难以得到 解决。
CN102349867A公开了一种补水修复化妆品及其制备方法和应用。该发明 化妆品，包括补水修复冻干粉和补水修复基本液。所述冻干粉主要成分有葡萄 籽提取物、水解红藻提取物、小分子量透明质酸、水解胶原蛋白、重组人角质 细胞生长因子、重组人表皮细胞生长因子、低分子肝素钠。该发明补水修复化 妆品可用于日常皮肤护理，具有补充皮肤水分，修复缺水受损细胞，增强皮肤 弹性的美容功效。
CN109316439A公开了一种含有海茴香干细胞的混悬修护精华液，包括以 下质量百分含量的组分：海茴香干细胞0.01-0.5％，丙三醇1-10％，山梨醇 0.1-10％，琼脂0.1-5％，透明质酸盐0.01-2％，泊洛沙姆0.05-2％。该发明的混 悬修护精华液，具有协同修复、保湿，增强真皮层屏障的功效。。
因此，开发一种能够平衡皮肤微生物屏障、稳定角质屏障、强化免疫力屏 障的护肤品是目前研究的重点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种皮肤屏障修护复合物、肌底液及其制备方法。 所述皮肤屏障修护复合物可有效修护微生物屏障、角质屏障、免疫屏障，使肌 肤健康稳定。由此皮肤屏障修护复合物制备得到的肌底液能够有效调节角质更 新，强化肌肤角质屏障，提升肌肤抵御力，并有效平衡微生物屏障、稳定角质 屏障、强化免疫力屏障，令肌肤能够维持健康的代谢，达到理想的水润、光泽、 健康状态。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种皮肤屏障修护复合物，所述皮肤屏障修护复 合物包括：修复皮肤屏障的组合物、羟基积雪草甙、葡萄叶提取物、皱波角叉 菜提取物、糖鞘脂类和糖脂；
所述修复皮肤屏障的组合物包括：海茴香愈伤组织培养物滤液、四氢甲基 嘧啶羧酸和水解红藻提取物。
本发明中，所述修复皮肤屏障的组合物中海茴香愈伤组织培养物滤液、四 氢甲基嘧啶羧酸和水解红藻提取物相互配合，协同增效，从而全面修复皮肤屏 障。通过强化皮肤的微生物屏障、理化屏障和免疫屏障，将有害侵扰因素隔绝 在皮肤之外，构筑完整健康的肌肤防御线，从根本上解决各种皮肤问题。此外， 所述组合物还具有抗炎舒缓的功效，对于皮肤的炎症反应和不适症状进行快速 有效地安抚，维持皮肤的稳态与基础健康。
其中，所述海茴香愈伤组织培养物滤液为精选珍稀盐土植物海茴香，经特 殊工艺培养出干细胞活性因子，有效调节角质更新，强化肌肤角质屏障，提升 肌肤抵御力。所述四氢甲基嘧啶羧酸提取自沙漠盐湖带嗜盐菌维生因子，能够 有效保护皮肤免疫屏障，使肌肤免受外界伤害，长葆青春活力。所述水解红藻 提取物优选纯净海域的杜尔维利藻，有效改善皮肤微生态环境，使常驻菌群数 量达到有益的均衡状态，令肌肤能够维持健康的代谢，达到理想的水润、光泽、 健康状态。
本发明中，所述羟基积雪草甙可促进成纤维细胞生长，修复肌肤损伤过程 中，成纤维细胞起着十分重要的作用，以伤口愈合过程为例，成纤维细胞通过 有丝分裂大量增殖，合成和分泌大量胶原纤维和基质成分，与新生毛细血管等 共同形成肉芽组织，填补伤口组织缺损，为表皮细胞的覆盖创造条件，使得皮 肤损伤修复；促进胶原合成和上皮细胞生长；通过抑制炎症，达到消炎作用。
本发明中，所述葡萄叶提取物延长细胞的生命，也增强皮肤的活性；具有 消除自由基的作用，对胶原蛋白酶的抑制以及对氮氧化物生成抑制，多方面显 示了抑制衰老的能力；对黑色素细胞有增殖作用，可以用于护发素类产品已减 慢灰发的生成；对毛孔直径有收缩和收敛的作用，有紧肤效果。
本发明中，所述皱波角叉菜提取物对人体白细胞弹性蛋白酶有抑制，显示 具有抗炎活性；对胶原蛋白的生成有很好的促进，有活跃作用。
本发明中，所述糖鞘脂类有效改善角质细胞的粘合力，使细胞紧密结合， 降低水分丧失；糖脂能很快渗透进皮肤，和角质层中的水结合，形成一种网状 结构，锁住水分。
本发明，所述皮肤屏障修护复合物中各组分相互配合，协同增效，三维强 化肌肤屏障，其中包括微生物屏障、角质屏障、免疫屏障，使肌肤健康稳定， 由内而外焕发年轻活力。
优选地，所述皮肤屏障修护复合物按重量份数计包括：修复皮肤屏障的组 合物1-10份、羟基积雪草甙0.1-5份、葡萄叶提取物0.1-5份、皱波角叉菜提取 物0.1-5份、糖鞘脂类0.1-1份和糖脂0.1-1份。
所述皮肤屏障修护复合物中，修复皮肤屏障的组合物的重量份数为1-10份， 例如可以是1份、2份、3份、4份、5份、6份、7份、8份、9份、10份等。
所述皮肤屏障修护复合物中，羟基积雪草甙的重量份数为0.1-5份，例如可 以是0.1份、0.5份、1份、1.5份、2份、3份、4份、5份等。
所述皮肤屏障修护复合物中，葡萄叶提取物的重量份数为0.1-5份，例如可 以是0.1份、0.5份、1份、1.5份、2份、3份、4份、5份等。
所述皮肤屏障修护复合物中，皱波角叉菜提取物的重量份数为0.1-5份，例 如可以是0.1份、0.5份、1份、1.5份、2份、3份、4份、5份等。
所述皮肤屏障修护复合物中，糖鞘脂类的重量份数为0.1-1份，例如可以是 0.1份、0.2份、0.3份、0.4份、0.5份、0.6份、0.7份、0.8份、0.9份、1份等。
所述皮肤屏障修护复合物中，糖脂的重量份数为0.1-1份，例如可以是0.1 份、0.2份、0.3份、0.4份、0.5份、0.6份、0.7份、0.8份、0.9份、1份等。
优选地，所述海茴香愈伤组织培养物滤液、四氢甲基嘧啶羧酸和水解红藻 提取物的质量比为(3-9):(2-5):(1-3)。
其中，“3～9”可以是3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、 9等；其中，“2～5”可以是2、2.2、2.5、2.8、3、3.2、3.5、3.8、4、4.2、4.5、 4.8、5等；其中，“1～3”可以是1、1.2、1.4、1.5、1.6、1.8、2、2.2、2.4、2.6、 2.8、3等。
第二方面，本发明提供一种肌底液，所述肌底液包括如第一方面所述的皮 肤屏障修护复合物。
优选地，所述肌底液按质量百分含量计包括：1-10％第一方面所述的皮肤屏 障修护复合物、10-30％保湿剂、1-10％润肤剂和1-5％乳化剂，余量为水。
以所述肌底液总质量为100％计，皮肤屏障修护复合物的含量为1-10％，例 如可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％等。
以所述肌底液总质量为100％计，保湿剂的含量为10-30％，例如可以是10％、12％、14％、16％、18％、20％、22％、24％、26％、28％、30％等。
以所述肌底液总质量为100％计，润肤剂的含量为1-10％，例如可以是1％、 2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％等。
以所述肌底液总质量为100％计，乳化剂的含量为1-5％，例如可以是1％、 2％、3％、4％、5％等。
优选地，所述保湿剂包括甘油、硅烷三醇、透明质酸、透明质酸钠、木糖 醇、脱水木糖醇、木糖醇基葡糖苷、1,3-丙二醇、1,2-己二醇、丁二醇、甘油聚 醚-26、PCA钠、赤藓醇或聚乙二醇-32中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述润肤剂包括聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷醇、霍霍巴籽 油、双-二甘油多酰基己二酸酯-2、葡萄柚油、香叶天竺葵油、椰子油、塔希提 栀子花提取物、生育酚、向日葵籽油或苦橙花油中的任意一种或至少两种的组 合。
优选地，所述乳化剂包括C20-22醇和/或C20-22醇磷酸酯。
头选的，所述肌底液还包括0.1-1％的抗氧化剂，例如可以是0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％等。
优选地，所述抗氧化剂为对羟基苯乙酮。
优选地，所述肌底液还包括0.5-3％的增稠剂，例如可以是0.5％、0.6％、0.8％、1％、1.2％、1.4％、1.6％、1.8％、2％、2.2％、2.4％、2.6％、2.8％、3％等。
优选地，所述增稠剂包括聚丙烯酸酯交联聚合物-6、阿拉伯胶树胶、黄原 胶或丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物中的任意一种或至少两种的 组合。
优选地，所述肌底液还包括0.1-0.5％的中和剂，例如可以是0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％等。
优选地，所述中和剂为精氨酸。
第三方面，本发明提供一种如第二方面所述的肌底液的制备方法，所述制 备方法包括以下步骤：
(1)将保湿剂和水进行水相混合，得到水相混合液；将润肤剂和乳化剂进 行油相混合，得到油相混合液；
(2)将步骤(1)得到的水相混合液和油相混合液混合均质，得到均质液；
(3)向步骤(2)的均质液中与第一方面所述的修皮肤屏障修护复合物， 混合搅拌，得到所述肌底液。
优选地，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将保湿剂、增稠剂和水进行水相混合，得到水相混合液；将润肤剂和 乳化剂进行油相混合，得到油相混合液；
(2)将步骤(1)得到的水相混合液和油相混合液混合均质，得到均质液；
(3)向步骤(2)的均质液中加入第一方面所述的修皮肤屏障修护复合物、 抗氧化剂和中和剂，混合搅拌，得到所述肌底液。
优选地，步骤(1)中所述水相混合的温度为80-85℃，例如可以是80℃、 81℃、82℃、83℃、84℃、85℃等。
优选地，步骤(1)中所述水相混合的时间为5-10min，例如可以是5min、 6min、7min、8min、9min、10min等。
优选地，步骤(1)中所述油相混合的温度为78-80℃，例如可以是78℃、 78.5℃、79℃、79.5℃、80℃等。
优选地，步骤(1)中所述油相混合的时间为5-10min，例如可以是5min、 6min、7min、8min、9min、10min等。
优选地，步骤(2)中所述混合均质的温度为80-82℃，例如可以是80℃、 80.5℃、81℃、81.5℃、82℃等。
优选地，步骤(2)中所述混合均质的时间为5-10min，例如可以是5min、 6min、7min、8min、9min、10min等。
优选地，步骤(3)中所述混合搅拌的温度为40-50℃，例如可以是40℃、 42℃、44℃、46℃、48℃、50℃等。
优选地，步骤(3)中所述混合搅拌的时间为5-10min，例如可以是5min、 6min、7min、8min、9min、10min等。
优选地，所述肌底液的制备方法包括以下步骤：
(1)将保湿剂、增稠剂和水在80-85℃下搅拌混合5-10min，得到水相混 合液；将润肤剂和乳化剂在78-80℃下搅拌混合5-10min，得到油相混合液；
(2)将步骤(1)得到的水相混合液和油相混合液在80-82℃下混合均质5-10min，得到均质液
(3)向步骤(2)的均质液中加入第一方面所述的修皮肤屏障修护复合物、 抗氧化剂和中和剂，在40-50℃下混合搅拌5-10min，得到所述肌底液。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明所述皮肤屏障修护复合物通过三维强化肌肤屏障：微生物屏 障、角质屏障、免疫屏障，从而使皮肤健康稳定。通过强化皮肤的微生物屏障、 理化屏障和免疫屏障，将有害侵扰因素隔绝在皮肤之外，构筑完整健康的肌肤 防御线，从根本上解决各种皮肤问题。
(2)由所述皮肤屏障修护复合物制备得到的肌底液能够有效调节角质更 新，强化肌肤角质屏障，提升肌肤抵御力，并有效改善皮肤微生态环境，使常 驻菌群数量达到有益的均衡状态，令肌肤能够维持健康的代谢，达到理想的水 润、光泽、健康状态。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员 应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
下述实施例中提供的修复皮肤屏障的组合物均由下述制备方法得到：
制备例1
本制备例制备一种海茴香愈伤组织培养物，所述海茴香愈伤组织培养物滤 液的制备方法包括以下步骤：
(1)愈伤组织诱导培养：将海茴香外植体接种到琼脂培养基中进行愈伤组 织诱导培养，所述诱导培养的温度为20℃，所述诱导培养的时间为14天，得 到愈伤组织；
(2)愈伤组织颗粒悬浮培养：将步骤(1)得到的愈伤组织接种到MS培 养基中，在振荡培养箱中以100r/min转速进行震荡培养，所述震荡培养的温度 为20℃，所述震荡培养的时间为14天，得到增殖愈伤组织；
(3)愈伤组织扩大培养：将步骤(2)得到的增殖愈伤组织接种至无菌细 胞袋中进行扩大培养，所述扩大培养的温度为25℃，所述扩大培养的时间为24 天，得到所述海茴香愈伤组织培养物；
(4)分离：将步骤(3)得到的海茴香愈伤组织培养物通过100目的纱布 进行过滤，再在25℃下进行真空干燥，得到所述茴香愈伤组织培养物滤液。
制备例2
本制备例制备四氢甲基嘧啶羧酸，所述四氢甲基嘧啶羧酸的制备方法包括 以下步骤：
(A)沙漠嗜盐细菌的培养：将沙漠嗜盐细菌接种于SCDLP液体培养基中， 在振荡培养箱中以1000r/min的转速进行培养，所述培养的温度为20℃，所述 培养的时间为48h，得到沙漠嗜盐细菌菌体；
(B)渗透压冲击：将步骤(A)得到的沙漠嗜盐细菌菌体重悬于高渗透压 溶液(所述高渗透压溶液按质量百分比计包括：18％的蔗糖、0.1％的EDTA， 余量为水)中浸泡1h，过滤，得到沉淀沙漠嗜盐细菌菌体；
(C)电渗析：将步骤(B)得到的沙漠嗜盐细菌菌体通过电渗析处理，得 到四氢甲基嘧啶羧酸。
制备例3
本制备例制备一种水解红藻提取物，所述水解红藻提取物的制备方法包括 包括以下步骤：
(a)提取：将杜尔维利藻清洗，粉碎并过100-200目筛，得到红藻粉；向 红藻粉中加入水在70℃下进行一次提取，所述一次提取的时间为10h，所述水 和红藻粉的质量比为20:1，得到一次提取液，将一次提取液过滤后浓缩，再加 入体积比浓度为80％的乙醇水溶液进行二次提取，静置取沉淀，得红藻多糖粗 料；
(b)水解：将步骤(a)得到的红藻多糖粗料加水溶解后，加入30wt％的 过氧化氢水溶液，50℃下混合搅拌1h，得到水解红藻提取液；
(c)超滤：将步骤(b)得到的水解红藻提取液通过超滤膜处理浓缩脱盐， 所述超滤的时间30min，所述超滤的温度30℃，得到水解红藻提取物。
制备例4
本制备例提供一种修复皮肤屏障的组合物，所述修复皮肤屏障的组合物的 制备方法为：取制备例1的海茴香愈伤组织培养物滤液7份、制备例2的四氢 甲基嘧啶羧酸3份和制备例3的水解红藻提取物2份，在20℃下混合搅拌20 min，得到所述修复皮肤屏障的组合物。
实施例1
本实施例提供一种皮肤屏障修护复合物，所述皮肤屏障修护复合物按重量 份数计包括：修复皮肤屏障的组合物6份、羟基积雪草甙2份、葡萄叶提取物 3份、皱波角叉菜提取物3份、糖鞘脂类0.5份和糖脂0.5份。
实施例2
本实施例提供一种皮肤屏障修护复合物，所述皮肤屏障修护复合物按重量 份数计包括：修复皮肤屏障的组合物3份、羟基积雪草甙4份、葡萄叶提取物 3.5份、皱波角叉菜提取物3.5份、糖鞘脂类0.5份和糖脂0.5份。
实施例3
本实施例提供一种皮肤屏障修护复合物，所述皮肤屏障修护复合物按重量 份数计包括：修复皮肤屏障的组合物5份、羟基积雪草甙3份、葡萄叶提取物4份、皱波角叉菜提取物2份、糖鞘脂类0.6份和糖脂0.4份。
实施例4
本实施例提供一种皮肤屏障修护复合物，所述皮肤屏障修护复合物按重量 份数计包括：修复皮肤屏障的组合物10份、羟基积雪草甙1份、葡萄叶提取物 1份、皱波角叉菜提取物1份、糖鞘脂类1份和糖脂1份。
实施例5
本实施例提供一种皮肤屏障修护复合物，所述皮肤屏障修护复合物按重量 份数计包括：修复皮肤屏障的组合物1份、羟基积雪草甙5份、葡萄叶提取物 5份、皱波角叉菜提取物5份、糖鞘脂类0.1份和糖脂0.1份。
实施例6
本实施例提供一种皮肤屏障修护复合物，所述皮肤屏障修护复合物按重量 份数计包括：修复皮肤屏障的组合物0.5份、羟基积雪草甙3.1份、葡萄叶提取 物4.1份、皱波角叉菜提取物4.1份、糖鞘脂类1.6份和糖脂1.6份。
对比例1-6
对比例1-6提供皮肤屏障修护复合物，按重量份述计各对比例的配方如下 表1所示(如表中“3.2”代表该对应组分的含量为3.2重量份)：
表1
Figure BDA0002437053510000111
Figure BDA0002437053510000121
对比例7
本对比例提供一种皮肤屏障修护复合物，所述皮肤屏障修护复合物按重量 份数计包括：海茴香愈伤组织培养物滤液3份、四氢甲基嘧啶羧酸3份、羟基 积雪草甙2份、葡萄叶提取物3份、皱波角叉菜提取物3份、糖鞘脂类0.5份 和糖脂0.5份。
对比例8
本对比例提供一种皮肤屏障修护复合物，所述皮肤屏障修护复合物按重量 份数计包括：海茴香愈伤组织培养物滤液3份、水解红藻提取物3份、羟基积 雪草甙2份、葡萄叶提取物3份、皱波角叉菜提取物3份、糖鞘脂类0.5份和 糖脂0.5份。
对比例9
本对比例提供一种皮肤屏障修护复合物，所述皮肤屏障修护复合物按重量 份数计包括：四氢甲基嘧啶羧酸3份、水解红藻提取物3份、羟基积雪草甙2 份、葡萄叶提取物3份、皱波角叉菜提取物3份、糖鞘脂类0.5份和糖脂0.5份。
应用实施例1
本应用实施例提供一种肌底液，所述肌底液按质量百分含量计包括如下组 分：
Figure BDA0002437053510000131
Figure BDA0002437053510000141
所述肌底液的制备方法包括以下步骤：
(1)将保湿剂、增稠剂和水在85℃下搅拌混合5-10min，得到水相混合液； 将润肤剂和乳化剂在80℃下搅拌混合8min，得到油相混合液；
(2)将步骤(1)得到的水相混合液和油相混合液在82℃下混合均质8min， 得到均质液
(3)向步骤(2)的均质液中加入修皮肤屏障修护复合物、抗氧化剂和中 和剂，在45℃下混合搅拌8min，得到所述肌底液。
应用实施例2-6
与应用实施例1相比，将其中的实施例1制备的皮肤屏障修护复合物分别 替换为实施例2-6制备的皮肤屏障修护复合物，其余组分及含量同应用实施例1。
应用对比例1
与应用实施例1相比，不添加实施例1制备的皮肤屏障修护复合物，其余 组分及含量同应用实施例1。
应用对比例2-10
与应用实施例1相比，将其中的实施例1制备的皮肤屏障修护复合物分别 替换为对比例1-9制备的实施例1制备的皮肤屏障修护复合物，其余组分及含 量同应用实施例1。
试验例1
安全性能测试
对应用实施例1-6提供的肌底液和应用对比例1-10提供的肌底液进行安全 性能测试，方法如下：
(1)红细胞溶血实验
红细胞悬液的制备：选择健康家兔，心脏取血9mL，加入2％的草酸钾溶 液1mL，离心，弃去上清液，用20mmol/L的PBS溶液将沉淀物稀释至20mL， 4℃保存备用。选择样品用PBS溶液稀释至不同浓度，每个样品设置5个浓度 梯度。取10mL待测样品的稀释液，加入200μL上述红细胞悬液(控制样品终 浓度分别为5、10、20、50、100mg/mL)，以蒸馏水作为全溶血对照，PBS溶 液作为阴性对照，轻轻混匀，37℃下孵育30min，在2000r/min的转速下离心10min，取上清液，用分光光度计测试其在560nm处的吸光度(A560)，按如 下公式计算溶血率；
Figure BDA0002437053510000161
绘制溶血率-样品浓度标准曲线，计算50％红细胞发生溶血时的样品浓度 (HD50)。
(2)蛋白变性实验：
将样品用PBS溶液稀释至10g/L，取10mL待测样品的稀释液，加入200μL 上述红细胞悬液，以蒸馏水作为空白对照，1mg/mL十二烷基硫酸钠(SDS) 溶液作为阳性对照，轻轻混匀，37℃下孵育30min，在2000r/min的转速下离 心10min，取上清液，用分光光度计分别测试其在540nm和575nm处的吸光 度A540和A575，按照如下公式计算蛋白变性指数(DI)；
Figure BDA0002437053510000162
其中，R1＝空白对照组A575/空白对照组A540，R2＝实验组A575/实验组A540， R3＝阳性对照组A575/阳性对照组A540。
根据L/D值对待测样品的刺激性进行评价，其中L/D值为HD50/DI，红细 胞溶血实验刺激性分级标准如下表2所示：
表2
L/D 分级
>100 无刺激性
10<L/D≤100 微刺激性
1<L/D≤10 轻度刺激性
0.1<L/D≤1 中度刺激性
上述红细胞溶血实验和蛋白变性实验的测试结果如下表3所示：
表3
测试样品 HD<sub>50</sub>(mg/L) DI(％) L/D 评价
应用实施例1 45216 0.40 >100 无刺激性
应用实施例2 44598 0.41 >100 无刺激性
应用实施例3 45234 0.40 >100 无刺激性
应用实施例4 43346 0.41 >100 无刺激性
应用实施例5 44500 0.46 >100 无刺激性
应用实施例6 42850 0.47 >100 无刺激性
应用对比例1 36452 0.49 >100 无刺激性
应用对比例2 36072 0.55 >100 无刺激性
应用对比例3 36563 0.57 >100 无刺激性
应用对比例4 36215 0.58 >100 无刺激性
应用对比例5 36352 0.55 >100 无刺激性
应用对比例6 28975 0.55 >100 无刺激性
应用对比例7 37467 0.53 >100 无刺激性
应用对比例8 37435 0.52 >100 无刺激性
应用对比例9 37463 0.54 >100 无刺激性
应用对比例10 36722 0.57 >100 无刺激性
由安全性能测试可知，由上述试验结果可知，本发明应用实施例1-6所制 备的肌底液温和无刺激；本发明所制备的肌底液的50％红细胞发生溶血时的样 品浓度HD50在40000mg/L以上，大于应用对比例1-10制备的肌底液的HD50， 同时蛋白质变性指数DI均在0.50％以下，亦明显小于应用对比例1-10制备的 肌底液，说明本发明所述肌底液能够显著降低毒副作用和刺激性，更加安全可 靠。
试验例2
微生物屏障修护效果测试
通过皮肤微生态的恢复效果及金黄色葡萄球菌的抑制效果实验检测应用实 施例1-6提供的肌底液和应用对比例1-10提供的肌底液对微生物屏障修护效果。
实验原理：微生物活体数量的测定方法，常用平板培养计数法。它是通过 将样品制成均匀的一系列不同稀释度的稀释液，再取一定的稀释液接种，使其 均匀分布于培养皿中特定的培养基内，最后根据在平板上长出的菌落数计算出 每克(或每毫升)样品中的活菌数量。本测试中采用灭活的棉签在皮肤的固定区域 内进行皮肤菌落的采集，采集后将棉签浸泡于灭活的生理盐水中，震荡分散后 进行微生物活体数量的测定。
实验方法：
(1)实验中左右手臂内侧标记3×3cm2试验区域，同一手臂可以标记多个 区域，区域间隔1cm。测试产品和空白对照均随机分布在左右手臂上。
(2)选中16个区域，各个区域用灭菌的棉签蘸取少量生理盐水来回擦拭 50次后，将棉签浸泡至相同体积的生理盐水中，用漩涡振荡器进行震荡，将菌 分散到生理盐水中。该样品作为皮肤初始的菌落数，记为A0；其中金黄色葡萄 球菌的数量为B0。
(3)之后隔6小时、12小时分别用灭菌的棉签蘸取少量生理盐水来回擦 拭50次后，将棉签浸泡至相同体积的生理盐水中，用漩涡振荡器进行震荡，将 菌分散到生理盐水中。该样品作为皮肤菌落数的恢复值，记为A1，其中金黄色 葡萄球菌的数量为B1。
其中，皮肤的菌落的恢复率＝[(A0-A1)/A0]×100％；金黄色葡萄球菌的抑制 率＝[(B0-B1)/B0]×100％。
具体测试结果如表4所示：
表4
Figure BDA0002437053510000191
由表4的测试结果可知，本实施例1-6提供的肌底液在微生态被破坏后6 小时可以让皮肤的菌落数恢复至80％以上，12小时后皮肤的菌落数可以恢复到 菌落破坏之前的水平，同时本实施例1-6提供的肌底液对皮肤有害的金黄色葡 萄球菌的增殖还能起到抑制作用，6小时对皮肤表面的金黄色葡萄球菌的抑制 率即可维持80％以上，12小时后对金黄色葡萄球菌的抑制率基本保持不变，稳 定性极强。这充分说明本发明所述皮肤屏障修护复合物中各组分配伍合理，具 有协同增效的作用，来激活皮肤上的有益菌的生长，抑制致病菌的生长，从而 实现皮肤微生态的修复，所述肌底液有效改善皮肤微生态环境，使常驻菌群数 量达到有益的均衡状态，令肌肤能够维持健康的代谢，达到理想的水润、光泽、 健康状态。
试验例3
角质层屏障修护效果测试
通过皮肤板层小体修复检测应用实施例1-6提供的肌底液和应用对比例 1-10提供的肌底液对角质层屏障修护效果。
实验原理：当皮肤屏障受到急性破坏时，颗粒层细胞迅速分泌和形成前体 板层小体，导致短期内板层小体数量减少，抑制脂质转运，达到角质层脂质膜 的初步修复。之后，新生成的板层小体出现在颗粒层，并快速发挥作用直至渗 透性屏障功能恢复。
实验方法：实验招募20名无活动性皮肤病的志愿者，实验前，志愿者用清 水清洗双前臂，在18～22℃、相对湿度40～60％的环境中静坐30min。。选取志 愿者前臂屈侧17个部位，其中一个作为空白对照，每个部位为2cm×2cm大 小，进行胶带粘贴(胶带粘贴不仅减少角质层的角质细胞和细胞间脂质，还使 角质层变薄，使皮肤屏障出现机械性损伤)，每个部位粘贴15次，每次粘贴时 间、压力和撕去胶带的速度及方向均保持一致，记录此时板层小体数量L0。之 后在16个部位涂抹测试样品肌底液，在30min后，记录此时板层小体数量L1。其中，板层小体变化率＝[(L1-L0)/L0]×100％。
具体测试结果如表5所示：
表5
测试指标 板层小体变化率(％)
应用实施例1 29.5±0.7
应用实施例2 29.3±0.4
应用实施例3 29.7±0.6
应用实施例4 27.7±1.6
应用实施例5 28.0±1.5
应用实施例6 25.5±4.7
应用对比例1 6.8±3.3
应用对比例2 7.5±3.4
应用对比例3 12.5±1.5
应用对比例4 12.0±1.5
应用对比例5 12.3±1.6
应用对比例6 12.2±1.8
应用对比例7 10.2±2.7
应用对比例8 8.5±3.0
应用对比例9 8.7±2.5
应用对比例10 8.2±4.2
由上述测试数据可知，本发明的应用实施例1-6制备的肌底液较于应用对 比例1-10对皮肤角质层的屏障修复效果明显，促进了板层小体的增加，加快了 屏障的修复过程，板层小体变化率在20％以上。这充分说明本发明所述皮肤屏 障修护复合物中各组分配伍合理，具有协同增效的作用，促进了板层小体的增 加，促进角质层脂质转运，从而加快皮肤角质层屏障的修复过程。所述肌底液 能够有效调节角质更新，强化肌肤角质屏障，提升肌肤抵御力，
试验例4
成纤维细胞增殖活性测试
对上述应用实施例1-6提供的肌底液和应用对比例1-10提供的肌底液进行 成纤维细胞增殖活性测试：分别将上述应用实施例1-6提供的肌底液和应用对 比例1-10提供的肌底液先溶解于二甲基亚砜，用0.2mm无菌滤头过滤除菌， 再用DMEM培养液配制成含10％样品的培养基。用组织块培养法获得人皮肤成 纤维细胞，加入0.25％胰蛋白酶1mL进行消化，离心后加入DMEM培养液重 悬，计数并稀释至细胞浓度为1×105/mL，接种于96孔板中，每孔100mL。培 养48h，镜下观察细胞贴壁后，吸走孔中的培养基。于37℃、5％的CO2培养箱中静置培养24h、48h后每组各取4孔，每孔加入20mL MTT溶液后，于CO2培养箱中继续孵育4h，每孔加入150mL二甲基亚砜，置恒温摇床上低速振荡 10min后，在酶标仪上490nm处测定每孔的吸光值。(注：吸光值越高，说明 对促进细胞再生的作用越好，能够促进受伤组织的修复效果越好，免疫细胞可 以促进慢性伤口修复或皮肤再生。)
具体测试结果如表6所示：
表6
Figure BDA0002437053510000221
Figure BDA0002437053510000231
由上述测试数据可知，本发明的应用实施例1-6制备的肌底液较于应用对 比例1-10的吸光值高，说明由本发明皮肤屏障修护复合物制备得到的肌底液对 促进细胞再生的作用好，且随着时间的延长促进受伤组织的修复效果越好。这 充分说明本发明所述皮肤屏障修护复合物中各组分配伍合理，具有协同增效的 作用，对促进细胞再生的作用越好，能够促进受伤组织的修复效果越好，皮肤 的免疫力越好。
试验例5
皮肤水分含量及皮肤水分流失(TEWL)试验
对应用实施例1-6提供的肌底液和应用对比例1-10提供的肌底液进行皮肤 水分含量及皮肤水分流失测试：
测试仪器：德国CK公司多功能皮肤测试仪，探头型号Tewameter TM300，
测试原理：FICK菲克扩散定律：dm/dt＝D.A.dp/dx。通过两组温度、湿度 传感器测定近表皮直接测出经皮散发的水分量。TEWL值是皮肤屏障好坏的一 个重要标志，皮肤的TEWL值越低，说明皮肤的屏障功能越好，反之越差，皮 肤水分散失量的减少量越大，皮肤屏障修复的效果越好。
测试方法：选取干性肌肤人群80名，年龄在20-45岁，随机分成16组， 每组5名。受试部位前15天不能使用任何产品(化妆品、外用药品、内服保健 品)。试验前，要求受试者清洗颜面部并在清洗后2h进入气候控制室(22±1℃， 相对湿度50％)静坐20min以上，并保持放松状态。
试验中按随机表进行半边脸测试，选取志愿者的左右鼻唇沟部分进行皮肤 水分含量(％)及水分流失(TEWL)(％)测试，取3个值的平均值作为左右鼻 唇沟水分含量数据(d0)及鼻唇沟皮肤水分流失(TEWL)的数据(d0)。测试结束后， 志愿者需按要求使用，连续使用28天，并要求试验者在试验的第14天(d14)及 第28天(d28)进行回访。
具体测试结果如表7所示：
表7
Figure BDA0002437053510000241
Figure BDA0002437053510000251
由上述实验表明，本发明的应用实施例1-6制备的肌底液较于应用对比例 1-10对皮肤角质层的屏障修复效果明显，其能够明显的增加皮肤角质层水分含 量，减少皮肤对外的水分流失，具体表现为试验的第14天皮肤水分含量在20％ 以上，第28天皮肤水分含量在22％以上，第14天皮肤水分流失在-17％以下， 第28天皮肤水分流失在-27％以下。这充分说明本发明所述皮肤屏障修护复合物 中各组分配伍合理，具有协同增效的作用，增强内在细胞水循环、强化表层锁 水屏障，从对皮肤角质层的屏障修复角度达到提高皮肤屏障修复的功效结果。
试验例6
皮肤弹性修护试验
评价方法：采用德国CK公司皮肤弹性测试仪MPA580，选取应用实施例 1-6提供的肌底液和应用对比例1-10提供的肌底液，通过测量使用产品前后测 试皮肤表面产生一个负压将皮肤吸进一个特定测试探头内，皮肤被吸进测试探 头内的深度是通过一个非接触式的光学测试系统测得的。测试探头包括光的发 射器和接收器，光的比率同被吸入皮肤的深度成正比，然后通过MPA软件分析 来确定皮肤的弹性性能。无负压时皮肤的回弹量与有负压时的最大拉伸量之比， 比值越接近1，说明皮肤弹性越好。
选取干性肌肤人群80名，年龄在20-45岁，随机分成16组，每组5名。 受试部位前15天不能使用任何产品(化妆品、外用药品、内服保健品)。试验 前，要求受试者清洗颜面部并在清洗后2h进入气候控制室(22±1℃，相对湿 度50％)静坐20min以上，并保持放松状态。
试验方法：试验中按随机表进行半边脸测试，一致的志愿者和使用方法， 也是持续28天，期间与D0，D14，D28进行回访，于恒温恒湿环境静坐30min 后，进行VISIA图像拍摄及弹性的测试。再通过计算得出志愿者在不同时间间 隔点的平均弹性数据。
具体测试结果如表8所示。
表8
Figure BDA0002437053510000261
Figure BDA0002437053510000271
由上述实验表明，本发明的应用实施例1-6提供的肌底液较于应用对比例 1-10提供的肌底液对皮肤具有良好的修复效果，使用一段时间本发明所述的肌 底液就皮肤弹性均有明显提升，说明本发明所述皮肤屏障修护复合物通过三维 强化肌肤屏障：微生物屏障、角质屏障、免疫屏障，从而使皮肤健康稳定。从 而全面修复皮肤屏障。通过强化皮肤的微生物屏障、理化屏障和免疫屏障，从 而增强皮肤弹性，使身体肌肤的问题得到根本的改善。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的皮肤屏障修护复合物、 肌底液及其制备方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明 必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发 明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式 的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种皮肤屏障修护复合物，其特征在于，所述皮肤屏障修护复合物包括：修复皮肤屏障的组合物、羟基积雪草甙、葡萄叶提取物、皱波角叉菜提取物、糖鞘脂类和糖脂；
所述修复皮肤屏障的组合物包括：海茴香愈伤组织培养物滤液、四氢甲基嘧啶羧酸和水解红藻提取物。
2.根据权利要求1所述的皮肤屏障修护复合物，其特征在于，所述皮肤屏障修护复合物按重量份数计包括：修复皮肤屏障的组合物1-10份、羟基积雪草甙0.1-5份、葡萄叶提取物0.1-5份、皱波角叉菜提取物0.1-5份、糖鞘脂类0.1-1份和糖脂0.1-1份。
3.根据权利要求1或2所述的皮肤屏障修护复合物，其特征在于，所述海茴香愈伤组织培养物滤液、四氢甲基嘧啶羧酸和水解红藻提取物的质量比为(3-9):(2-5):(1-3)。
4.一种肌底液，其特征在于，所述肌底液包括如权利要求1-3中任一项所述的皮肤屏障修护复合物。
5.根据权利要求4所述的肌底液，其特征在于，所述肌底液按质量百分含量计包括：
1-10％权利要求1-3中任一项所述的皮肤屏障修护复合物、10-30％保湿剂、1-10％润肤剂和1-5％乳化剂，余量为水。
6.根据权利要求5所述的肌底液，其特征在于，所述保湿剂包括甘油、硅烷三醇、透明质酸、透明质酸钠、木糖醇、脱水木糖醇、木糖醇基葡糖苷、1,3-丙二醇、1,2-己二醇、丁二醇、甘油聚醚-26、PCA钠、赤藓醇或聚乙二醇-32中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述润肤剂包括聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷醇、霍霍巴籽油、双-二甘油多酰基己二酸酯-2、葡萄柚油、香叶天竺葵油、椰子油、塔希提栀子花提取物、生育酚、向日葵籽油或苦橙花油中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述乳化剂包括C20-22醇和/或C20-22醇磷酸酯。
7.根据权利要求5或6所述的肌底液，其特征在于，所述肌底液还包括0.1-1％的抗氧化剂；
优选地，所述抗氧化剂为对羟基苯乙酮；
优选地，所述肌底液还包括0.5-3％的增稠剂；
优选地，所述增稠剂包括聚丙烯酸酯交联聚合物-6、阿拉伯胶树胶、黄原胶或丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述肌底液还包括0.1-0.5％的中和剂；
优选地，所述中和剂为精氨酸。
8.根据权利要求5-7中任一项所述的肌底液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将保湿剂和水进行水相混合，得到水相混合液；将润肤剂和乳化剂进行油相混合，得到油相混合液；
(2)将步骤(1)得到的水相混合液和油相混合液混合均质，得到均质液；
(3)向步骤(2)的均质液中与权利要求1-3中任一项所述的修皮肤屏障修护复合物，混合搅拌，得到所述肌底液。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将保湿剂、增稠剂和水进行水相混合，得到水相混合液；将润肤剂和乳化剂进行油相混合，得到油相混合液；
(2)将步骤(1)得到的水相混合液和油相混合液混合均质，得到均质液；
(3)向步骤(2)的均质液中加入权利要求1-3中任一项所述的修皮肤屏障修护复合物、抗氧化剂和中和剂，混合搅拌，得到所述肌底液；
优选地，步骤(1)中所述水相混合的温度为80-85℃；
优选地，步骤(1)中所述水相混合的时间为5-10min；
优选地，步骤(1)中所述油相混合的温度为78-80℃；
优选地，步骤(1)中所述油相混合的时间为5-10min；
优选地，步骤(2)中所述混合均质的温度为80-82℃；
优选地，步骤(2)中所述混合均质的时间为5-10min；
优选地，步骤(3)中所述混合搅拌的温度为40-50℃；
优选地，步骤(3)中所述混合搅拌的时间为5-10min。
10.根据权利要求8或9所述的肌底液的制备方法，其特征在于，所述肌底液的制备方法包括以下步骤：
(1)将保湿剂、增稠剂和水在80-85℃下搅拌混合5-10min，得到水相混合液；将润肤剂和乳化剂在78-80℃下搅拌混合5-10min，得到油相混合液；
(2)将步骤(1)得到的水相混合液和油相混合液在80-82℃下混合均质5-10min，得到均质液；
(3)向步骤(2)的均质液中加入权利要求1-3中任一项所述的修皮肤屏障修护复合物、抗氧化剂和中和剂，在40-50℃下混合搅拌5-10min，得到所述肌底液。
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