CN116178501A - 靶向p53的多肽及其在制备用于治疗癌症的药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种靶向P53的多肽及其在制备用于治疗癌症的药物中的应用。其中，该多肽特异性结合P53突变体，且多肽选自如下任意一条或多条：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10等。本发明通过多肽芯片大规模筛选有潜力的多肽片段，再通过体内外筛选验证的手段，寻找到了具有抗癌活性的全新多肽化合物；这些多肽作为药物具有靶标专一、低毒及低副作用的优势，因而具有开发为抗癌药物的潜在应用价值。

Description

靶向P53的多肽及其在制备用于治疗癌症的药物中的应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体而言，涉及一种靶向P53的多肽及其在制备用于治疗癌症的药物中的应用。
背景技术
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，根据世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)发布的2020年全球最新癌症负担数据，2020年全球新发乳腺癌达到226万例，首次超过肺癌(221万例)成为全球第一大癌症。而中国是乳腺癌大国，2020年新发乳腺癌约42万例，并导致近12万人死亡。乳腺癌通常发生在乳房腺上皮组织，发病中以女性居多，男性乳癌占全部乳癌患者的0.5％到1％。乳腺癌的治疗方法包括外科手术切除、放射治疗、化学治疗和激素治疗等。近年来，分子靶向治疗作为乳腺癌治疗的一种新手段，在乳腺癌治疗中显示出一定的疗效，日益受到学术界的重视。分子靶向治疗是以肿瘤细胞中特有的基因片段为治疗位点，通过调节或阻断这些基因片段功能达到治疗疾病的目的。乳腺癌分子靶向治疗是指针对乳腺癌发生、发展有关的信号通路及其癌基因相关表达产物进行治疗。分子靶向药物通过阻断肿瘤细胞或相关细胞的信号转导，来控制细胞基因表达的改变，从而抑制或杀死肿瘤细胞。靶向治疗特异性强，效果显著，基本上不损伤正常组织，因此肿瘤靶向治疗是肿瘤治疗中最有前景的方案。
p53是一系列被称为肿瘤抑制蛋白(也称为p53蛋白或p53肿瘤蛋白)的同源异构蛋白的统称。p53是一种肿瘤抑制蛋白和转录因子，它可以对细胞应激或DNA损伤作出响应，激活多种转录靶标。p53可协调多种反应，包括细胞周期阻滞、DNA修复、代谢改变、抗氧化作用、抗血管生成作用、自噬、衰老和凋亡。p53蛋白能保持基因组的稳定性，避免或减少突变的发生，因此被称为基因组守护者。p53蛋白在避免癌症发生机制上扮演重要的角色，例如，细胞凋亡(apoptosis)、细胞衰老(cell senescence)、基因组稳定性(geneticstability)、抑制血管新生(angiogenesis)。TP53(编码p53的基因)突变是癌症中最常见的基因突变，在超过50％的肿瘤中丧失部分或全部功能。p53突变为肿瘤细胞提供了选择性优势，使其能够避开细胞周期检查点，避免凋亡和衰老，并在正常细胞无法增值的条件下增殖。突变后的p53蛋白可能丧失与DNA形成有效结合的能力，造成p21蛋白无法形成，无法发出停止细胞分裂的信号。因此，受损细胞将不受控制的进行细胞分裂，最终形成肿瘤。近年来，越来越多的研究将p53突变蛋白作为一个中药的抗癌靶点分子，进行药物开发；但仍旧缺乏通过对靶点突变的p53蛋白的功能进行恢复，从而达到抑制癌细胞生长的相关的药物报道。
多肽是由肽键连接的三个或三个以上氨基酸分子化合物。作为重要的生命物质之一，肽类物质广泛存在于生命体中调节体内各个系统器官和细胞的功能活动。近年来多肽类药物凭借其高靶向性、低免疫原性、高组织渗透性，及安全性等优点在抗肿瘤药物的研制中备受关注。2019年，全世界抗肿瘤多肽治疗的市场估值为86亿美元，并预期会在未来近十年保持稳定增长的趋势。多肽作为小分子化合物，可以有效的与p53突变蛋白结合，从而恢复p53蛋白的正常功能，抑制癌症的发生。因此，开发有效的、使P53突变蛋白恢复活性多肽药物，不仅能够促进肿瘤生长的研究，还具有非常重要的临床价值。
因此，开发以P53为抗癌靶点的具有潜在药用价值的多肽药物分子是抗肿瘤药物研制的一大热点问题。
发明内容
本发明旨在提供一种靶向P53的多肽及其在制备用于治疗癌症的药物中的应用，，以便为抗癌药物研制提供更多具有潜在药用价值的多肽药物分子。
为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种靶向P53突变体的多肽。该多肽特异性结合P53突变体，且多肽选自如下任意一条或多条：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQID NO：21及SEQ ID NO：22。
进一步地，P53突变体为选自如下至少一个位点突变的突变体：Y220C、R175H或R273H；优选地，多肽为修饰后的肽段；优选地，修饰为化学基团修饰或氨基酸修饰；优选地，化学基团修饰为PEG修饰、乙酰化修饰或酰胺化修饰中的任意一种或多种；优选地，PEG修饰为直链PEG修饰、具有单官能团的PEG修饰或者具有双官能团的PEG修饰；优选地，PEG修饰的位点选自多肽的N端、C端、Lys侧链和Cys侧链中的任意一个或多个；优选地，PEG修饰为分子量为500～40000的PEG修饰；优选地，多肽的N端和C端分别具有乙酰化修饰和酰胺化修饰；优选地，多肽的N端具有脂肪酸修饰，更优选为Myr修饰；优选地，氨基酸修饰为亲水性氨基酸修饰或半胱氨酸修饰；优选地，亲水性氨基酸修饰为在多肽的N端、C端或者NC两端添加1-4个亲水性氨基酸，更优选地，亲水性氨基酸为Glu、Lys、Ser或Gly；进一步优选地，1-4个亲水性氨基酸选自如下任意一种：Glu-Glu、Lys-Lys或Ser-Gly-Ser；优选地，半胱氨酸修饰为在多肽的如下任一位置添加半胱氨酸：N端、C端、NC两端或肽链中间；更优选地，在肽链中间添加半胱氨酸包括在肽链中间插入一个或多个半胱氨酸，或者一个或多个半胱氨酸以支链形式连接于肽链的中间。
根据本发明的另一个方面，提供一种多肽药物。该多肽药物包括上述任一种或多种多肽以及药学上可选的辅料。
进一步地，多肽药物为抗癌药物，优选为抗乳腺癌药物；优选地，多肽药物中多肽的浓度为0.1μM～100μM。
根据本发明的再一个方面，提供一种上述多肽在制备用于治疗个体肿瘤或癌症的药物中的应用，可选的，药物为多肽药物或联合药物。
进一步地，癌症包括如下任意一种或多种：乳腺癌、肺癌、鼻咽癌、喉癌、胃癌、肝癌、食道癌、肠癌、胰腺癌、胆囊癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、白血病、淋巴癌、血管瘤、骨癌、宫颈癌、子官癌、卵巢癌、脂肪癌、脑瘤、鳞癌、皮肤癌、甲状腺癌、唇癌、黑色素癌、舌癌、胸腺癌以及中枢神经系统癌症；优选地，中枢神经系统癌症为脑癌；优选的，应用包括通过多肽抑制人乳腺癌细胞增殖的功能。
根据本发明的又一方面，提供了一种检测P53突变体的试剂盒。该试剂盒包括上述任一种或多种多肽。
进一步地，多肽以多肽-蛋白偶联物的形式存在；优选地，多肽-蛋白偶联物中的蛋白选自如下任意一种：牛血清蛋白、卵清白蛋白、钥孔血蓝蛋白或酪蛋白；更优选，多肽通过连接序列与蛋白偶联形成多肽-蛋白偶联物，进一步优选地，连接序列为CGSG。
进一步地，多肽被包被于固相载体上；优选地，固相载体包括酶标板、膜载体或微球；优选地，膜载体包括硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜或尼龙膜；优选地，膜载体上还包被有阳性对照物，多肽和阳性对照物按检测顺序在膜载体上依次设置；优选地，试剂盒还包括如下至少之一：(1)酶标二抗，更优选酶标二抗为HRP标记的二抗；(2)胶体金结合垫，胶体金结合垫上包被有胶体金标记的抗原和阳性对照物的特异性结合物；(3)标记垫，标记垫上包被有荧光标记的微球，微球上负载有阳性对照物的特异性结合物；优选地，阳性对照物选自鼠免疫球蛋白、人免疫球蛋白、羊免疫球蛋白或兔免疫球蛋白，相应地，阳性对照物的特异性结合物选自抗鼠免疫球蛋白、抗人免疫球蛋白、抗羊免疫球蛋白或抗兔免疫球蛋白。
进一步地，试剂盒包括芯片，芯片上预置有多肽组成的多肽阵列。
本发明以P53突变蛋白作为抗癌药物的靶点蛋白，通过多肽芯片大规模筛选有潜力的多肽片段，再通过体内外筛选验证的手段，针对现有治疗手段中存在的技术问题，寻找到了具有抗癌活性的全新多肽化合物；这些多肽作为药物具有靶标专一、低毒及低副作用的优势，因而具有开发为抗癌药物的潜在应用价值。
附图说明
构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1a-图1g示出了本发明实施例中多肽合成HPLC检测结果图；
图2a-图2c示出了本发明实施例中抗癌多肽对MDA-MB-231细胞增殖效果MTT结果图；以及
图3a-图3c示出了本发明实施例中多肽对MDA-MB-231细胞增殖抑制作用效果图。
具体实施方式
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考附图并结合实施例来详细说明本发明。
术语解释：
多肽：本申请中指预测的或者筛选的能够与靶点P53突变体特异性结合的任意一条肽段。
多肽-载体蛋白偶联物：本申请中指一条多肽与载体蛋白偶联形成的偶联物，其中，一个载体蛋白可以偶联一条或多条多肽，多条多肽偶联时，多条多肽具有相同的氨基酸序列。根据具体偶联的多肽序列的理化性质的差异、具体载体蛋白的种类的不同以及偶联方法的不同，每个载体蛋白上所偶联的多肽的条数有所差异，本申请中优选2～50条，更优选为3～45条、5～40条、5～35条、5～30条、8～30条、10～30条、12～30条、15～30条；或者，更优选为6～36条、8～32条、10～28条、10～26条、10～24条、10～22条、10～20条、10～18条、10～16条及10～15条中的任意一种情况。
多肽芯片技术是基于多肽芯片的检测技术，其利用多肽芯片上的种类繁多的多肽与样本的接触，然后利用图像采集技术采集多肽芯片上各个特征信号(具体可表现为携带各个特征信号的荧光图像)，进而输出芯片中每个特征的信号强度，即多肽芯片检测结果数据。基于多肽芯片检测结果数据输出的样本检测信号，可实现对与多肽芯片上的多肽结合的样本中的待测物的分析，样本的分析等。
Motif：基序，在生物学中是一个基于数据的数学统计模型，典型的是一段序列(Sequence)，也可以是一个结构，是特定的组(group)的序列预测，例如，一个DNA序列可以定义为转录因子结合位点，也就是序列倾向于被转录因子结合。对蛋白质来说，序列基序(Sequence motif)可以被定义为蛋白质序列属于一个给定的蛋白质家族。一个简单的motif可以是，比如一个模式(pattern)，而这个模式被这个组(group)中的所有成员共享。
如背景技术所提到的，现有技术中急需开发针对不同靶点的抗癌多肽药物的问题，本发明选择以P53突变蛋白作为抗癌药物的靶点蛋白，通过多肽芯片大规模筛选有潜力的多肽片段，再通过体内外筛选验证的手段，快速的筛选出了具有抗癌活性的多肽药物。本发明所述的iCXOncP11a、iCXOncP12a、iCXOncP13a、iCXOncP15a、iCXOncP17a、iCXOncP18a、iCXOncP19a、iCXOncP22a、iCXOncP31a、iCXOncP32a、iCXOncP33a、iCXOncP34a、iCXOncP35a、iCXOncP36a、iCXOncP16a、iCXOncP20a、iCXOncP21a、iCXOncP23a、iCXOncP24a、iCXOncP25a、iCXOncP27a和iCXOncP29a二十二种多肽(序列信息见表1)，展现出显著的抑制乳腺癌细胞生长效果，其中以iCXOncP12a、iCXOncP22a、iCXOncP16a、iCXOncP20a、iCXOncP21a、iCXOncP29a效果最为显著，可作为后续药物研发新的活性化合物发现提供思路。同时我们提供的全新的抗癌多肽序列，可以作为后续药物研发的先导化合物。
基于上述研究结果，申请人提出了本申请的一系列技术方案。在一种典型的实施例中，提供了一种靶向P53的多肽，该多肽特异性结合P53突变体，且多肽选自如下任意一条或多条：RRGPARVSQVPKHL(SEQ ID NO：1)、RRWLPPFGVFS(SEQ ID NO：2)、RRNDYVLRLNKHS(SEQID NO：3)、RRYSRAPWSG(SEQ ID NO：4)、RRVEHENAFG(SEQ ID NO：5)、RRPNFPLAQSSD(SEQ IDNO：6)、RRFESKKRSG(SEQ ID NO：7)、RRYWYKNHLYHG(SEQ ID NO：8)、RRLLDAGPSEG(SEQ IDNO：9)、RREPAKSYWSQVE(SEQ ID NO：10)、RRPALGNRLWDAQVE(SEQ ID NO：11)、RRPNYLDQFADG(SEQ ID NO：12)、RRNHHQPADG(SEQ ID NO：13)、RRNAYGQVFD(SEQ ID NO：14)、RRFNFYRQVG(SEQ ID NO：15)、RRWRYYFWKED(SEQ ID NO：16)、RRGHEWPLDG(SEQ ID NO：17)、RNDEFAQKVS(SEQ ID NO：18)、RRFYQWKELED(SEQ ID NO：19)、RRHNVKWED(SEQ ID NO：20)、RRSRGGDG(SEQID NO：21)或RRSHPNAHED(SEQ ID NO：22)。
如上述，本发明以P53突变蛋白作为抗癌药物的靶点蛋白，通过多肽芯片大规模筛选有潜力的多肽片段，再通过体内外筛选验证的手段，针对现有治疗手段中存在的技术问题，寻找到了具有抗癌活性的全新多肽化合物；这些多肽作为药物具有靶标专一、低毒及低副作用的优势，因而具有开发为抗癌药物的潜在应用价值。上述多肽中，优选SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：22所示的化合物，该化合物的抗癌活性最高，比如，对抗乳腺癌的活性较其他多肽活性高。
上述P53突变体为任何能够导致其抑癌功能丧失的突变体，在本申请中，包括但不限于如下至少一个位点突变的突变体：Y220C、R175H或R273H。
多肽具有一个显著的结构优势，既可以在不影响原有功能性多肽片段的基础上，通过固相合成或生物合成，在多肽的一端或两端引入新的功能性化学修饰，获得多功能性。这种多功能性化学修饰具有受体/配体结合能力的pH敏感脂质体进入细胞的机制，会诱导肿瘤组织细胞主动内吞脂质体继而释放药物。常见的多肽修饰物按照修饰位点，可以分为四大类：C末端修饰(酰胺化、硫酸酯化等)、N末端修饰(乙酰化、脂肪酸化等)、中间残基修饰(与Ser-、Tyr-、Asn-、Thr-结合的糖基化修饰；与Ser-、Tyr-、Thr-结合的磷酸化修饰等)以及环化修饰。
因此，根据药物开发所需，上述多肽在研制时还可以根据需要进行各种修饰。在一种优选的实施例中，该多肽为修饰后的肽段；优选地，修饰为化学基团修饰或氨基酸修饰。
比如，为进一步提高某些肽段的亲和性，在一种优选的实施例中，上述化学基团修饰为PEG修饰；优选地，PEG修饰为直链PEG修饰、具有单官能团的PEG修饰或者具有双官能团的PEG修饰；优选地，PEG修饰的位点选自多肽的N端、C端、Lys侧链和Cys侧链中的任意一个或多个；优选地，PEG修饰为分子量为500～40000的PEG修饰；优选地，氨基酸修饰为亲水性氨基酸修饰或半胱氨酸修饰；优选地，亲水性氨基酸修饰为在多肽的N端、C端或者NC两端添加1-4个亲水性氨基酸，更优选地，亲水性氨基酸为Glu、Lys、Ser或Gly；进一步优选地，1-4个亲水性氨基酸选自如下任意一种：Glu-Glu、Lys-Lys或Ser-Gly-Ser。
由于化学合成的多肽往往携带游离的氨基和游离的羧基，而多肽的序列往往代表的是其所在的母本蛋白的序列，因而，为了使合成的蛋白与母本蛋白在序列和活性方面更接近，通常要对多肽的末端进行封闭，一般是对N端进行乙酰化和对C端进行酰胺化，这样修饰会减少多肽的总电荷，降低多肽的溶解度，进而也能够使多肽模拟其在母本蛋白中α氨基和羧基的原始状态。因此，在另一些实施例中，上述化学基团修饰为对多肽进行双端修饰，更优选地，对多肽的N端和C端分别进行乙酰化修饰及酰胺化修饰。
在某些实施例中，为了更好地实现对肽段的定向偶联，优选可以对多肽进行半胱氨酸修饰。具体地，包括但不限于在肽段的N端、C端或者NC两端添加，亦或者在多肽的肽链中间添加半胱氨酸。当在肽段的肽链中间添加半胱氨酸时，一个或多个半胱氨酸可以插入肽链中间(即插入两个氨基酸残基之间)，也可以将一个或多个半胱氨酸以支链形式连接于肽链的中间(即作为肽链中间的某个氨基酸的侧链)。
需要说明的是，上述多肽的修饰方法可以采用目前应用最为成熟且最为广泛的化学修饰方法，包括液相法和固相法。
在本申请第二种典型的实施例中，提供了一种多肽药物，多肽药物包括上述任一种多肽以及药学上可选的辅料。含有上述多肽分子的药物具有与P53突变体靶向结合能力高、抗癌活性高、低毒及低副作用的优势。
上述药学上可选的辅料，可以根据所欲制备的药物的剂型和/或给药方式、给药途径的不同，而有所不同，可以从现有药用辅料中合理选择。包括但不仅限于药学上可接受的载体、赋形剂或佐剂等辅料。而且，该多肽药物可以制成不同的剂型以适应多样化的给药途径，比特，给药途径包括口服给药、注射给药或经皮给药等。而药物的剂型包括胶囊、片剂、口服液、注射剂或透皮吸收剂等。
具体地，可以按照制药工业中已知的方法将本申请的药物制成片胶囊、片剂、口服液、注射剂或透皮吸收剂等。优选地，注射剂为静脉注射剂。在制备适于口服给药的胶囊剂、片剂、口服液时，可以使用蔗糖、乳糖、半乳糖、玉米淀粉、明胶、微晶纤维素、羧甲基纤维素等作为载体或赋形剂。另外，也可以使用制药工业中已知的方法和辅助成分将本申请的药物制成适于口服给药的溶液剂和悬浮剂。若制备适于胃肠道外途经给药的溶液剂和悬浮剂，可以使用蒸馏水、注射用水、等渗氯化钠或葡萄糖溶液，或者低浓度(例如1-100mm)磷酸盐缓冲液(PBS)作为载体或稀释剂。可以在这些胃肠道外给药的制剂中加入一种或多种其他辅助成分或添加剂，例如可使用抗坏血酸作为抗氧化剂，使用苯甲酸钠等作为防腐剂。在这些剂型的制剂中还可以含有其他的增溶剂、崩解剂、着色剂、分散剂或表面活性剂。
上述多肽药物由于具有抗癌活性，因而可以作为抗癌药物，优选为抗乳腺癌药物。上述多肽药物中，多肽的浓度根据剂型或给药方式的不同而有所不同。在一种优选的实施例中，多肽药物中多肽的浓度为0.1μM～100μM，在该浓度范围内均具有抗癌活性。更优选地，浓度为1μM～100μM，进一步优选为10μM～100μM。具体地，可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100μM。
在本申请第三种典型的实施方式中，提供了上述任一种多肽在制备用于治疗癌症的药物中的应用。由于P53是肿瘤抑制蛋白，在抑制癌症发生机制上具有重要作用。因而，本申请筛选到的能够特异性与P53突变体结合的多肽在一定程度上都是具有潜在的治疗癌症的药用开发价值的。尤其是抗乳腺癌的药用价值。该抗乳腺癌的药应用于抑制人乳腺癌细胞增殖的功能，从而达到抗乳腺癌的目的。
上述癌症包括但不仅限于如下任意一种或多种：乳腺癌、肺癌、鼻咽癌、喉癌、胃癌、食道癌、肠癌、胰腺癌、胆囊癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、白血病、淋巴癌、血管瘤、骨癌、宫颈癌、子官癌、卵巢癌、脂肪癌、脑瘤、鳞癌、皮肤癌、甲状腺癌、唇癌、黑色素癌、舌癌、胸腺癌以及中枢神经系统癌症；优选地，中枢神经系统癌症为脑癌。优选上述癌症为乳腺癌。
需要说明的是，上述治疗包括不同程度的抑制癌细胞增殖等效果，具体的抑制程度包括一种5％以上、10％以上、15％以上、20％以上、25％以上、30％以上、35％以上、40％以上、45％以上、50％以上、55％以上、60％以上、65％以上、70％以上、75％以上、80％以上、85％以上、90％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、99％以上、甚至100％的癌细胞的增殖。
在本申请第四种典型的实施方式中，提供了一种检测P53突变体的试剂盒，该试剂盒包括上述任一种多肽。由于上述多肽通过多肽芯片结合AI辅助筛选及实验验证了上述多肽具有特异性靶向结合P53突变体的能力，进而通过结合P53突变体而具有抗癌活性，尤其是SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：22或其具有修饰的序列中任一条所示的多肽抗乳腺癌细胞的活性。因此，利用包含上述多肽的试剂盒能够特异地准确地检测P53突变体的存在与否以及表达量高低。
由于多肽分子相对较小，为提高检测能力，可以将上述多肽制备成多肽-载体蛋白偶联物的形式进行检测。根据多肽-载体蛋白偶联物制备的需求，可以选择具体合适的载体蛋白来形成多肽-载体蛋白偶联物。在一些优选的实施例中，多肽以多肽-蛋白偶联物的形式存在。本申请中的载体蛋白包括但不仅限于BSA(牛血清蛋白)、OVA(卵清白蛋白)、KLH(钥孔血蓝蛋白)或CS(酪蛋白)。根据不同多肽的氨基酸序列组成，为了便于与载体蛋白偶联，需要通过连接序列(又叫连接子或linker)与载体蛋白偶联。本申请中，连接序列优选CGSG。
需要说明的是，上述多肽-载体蛋白偶联物是重组合成表达的蛋白。上述重组表达的多肽-载体蛋白偶联物，除可以检测P53突变蛋白外，基于蛋白的同源性，在较大程度上也可以用于检测与P53蛋白同源异构蛋白或不同突变位点的蛋白。
根据多肽氨基酸的理化性质、所用的载体蛋白的不同及偶联方式的不同，每个载体蛋白所能偶联上的多肽的条数也有所不同。从偶联的效率及对抗体识别结合能力综合考虑，优选每个载体蛋白偶联2～50条多肽，更优选为3～45条、5～40条、5～35条、5～30条、8～30条、10～30条、12～30条、15～30条；或者，更优选为6～36条、8～32条、10～28条、10～26条、10～24条、10～22条、10～20条、10～18条、10～16条及10～15条中的任意一种情况。
上述试剂盒，根据具体需要可以制备成多种不同类型的检测试剂盒。但从方便检测，便于判断检测结果的角度考虑，试剂盒中的多肽可以设置为预包被于固相载体上的形式。具体的预包被的固相载体根据需要合理设计。更优选，固相载体包括酶标板(多为聚苯乙烯材料的)、膜载体或微球；进一步优选地，膜载体包括硝酸纤维素膜(使用最广泛)、玻璃纤维素膜或尼龙膜，更进一步优选地，膜载体上还包被有阳性对照物，多肽-载体蛋白偶联物和阳性对照物按检测顺序在硝酸纤维素膜上依次设置。
根据试剂盒的具体检测方法的不同，试剂盒中具体的配套试剂也相应有所不同，但均可以根据已知试剂盒的配制方式进行组合配套试剂。优选地，上述试剂盒中还包括以下至少之一：(1)酶标二抗，更优选酶标二抗为HRP标记的二抗(对应于ELISA检测试剂盒)；(2)胶体金结合垫，胶体金结合垫上包被有胶体金标记的多肽-载体蛋白偶联物和阳性对照物的特异性结合物(对应于免疫胶体金检测试剂盒)；(3)标记垫，标记垫上包被有荧光标记的微球，微球上负载有阳性对照物的特异性结合物(对应于免疫荧光检测试剂盒)。
上述免疫胶体金检测试剂盒和免疫荧光检测试剂盒检测相对更方便，只需要建立阳性对照的C线和检测样本的T线即可。阳性对照的C线处预包被的阳性对照物，只要是能够随着待测样本的血清层析过程携带过来的带有检测标记的特异性结合物结合即可，对具体的阳性对照物的具体抗原或抗体并无特殊限定。优选地，上述阳性对照物选自鼠免疫球蛋白、人免疫球蛋白、羊免疫球蛋白或兔免疫球蛋白，相应地，阳性对照物的特异性结合物选自抗鼠免疫球蛋白、抗人免疫球蛋白、抗羊免疫球蛋白或抗兔免疫球蛋白。
上述抗鼠免疫球蛋白根据免疫的对象的不同，可以是羊抗鼠的免疫球蛋白或兔抗鼠的免疫球蛋白，或者是其他可免疫的动物抗鼠的免疫球蛋白。同样地，抗人免疫球蛋白、抗羊免疫球蛋白或抗兔免疫球蛋白也可以根据免疫动物的不同，是不同物种来源的抗免疫球蛋白。上述免疫球蛋白可以是IgM、IgG、IgA、IgD或IgE中的任意一种。这些抗免疫球蛋白抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体。
上述试剂盒中，根据所需要检测的样本数量的多少，所使用的酶标板的规格也有所不同，可以在12～384孔酶标板中合理选择。预包被的酶标板中，根据不同多肽-载体蛋白偶联物中的检测对象的不同，每个孔中对多肽-载体蛋白偶联物的包被量也有所差异。类似地，多肽-载体蛋白偶联物在膜载体上(比如，硝酸纤维素膜)的包被量也不同。比如，可以为0.8～8μg/cm，更优选为0.8～7μg/cm，0.8～6μg/cm、0.8～5μg/cm、0.8～4μg/cm、0.8～3μg/cm、0.8～2μg/cm、0.8～1.8μg/cm、0.8～1.7g、0.8～1.6μg/cm、0.8～1.5μg/cm、0.8～1.4μg/cm或0.8～1.2μg/cm。
在一些优选的实施例中，该试剂盒包括芯片，芯片上预置有多肽，其中多肽由上述多肽组成多肽阵列。将上述多肽设置在多肽芯片上进行检测，不仅能利用该多肽对P53突变体的靶向结合能力提高检测的特异性，而且能利用阵列形式提高检测的通量，因而适用于癌症的大规模筛查。
下面将结合具体的实施例来进一步说明本申请的有益效果。需要说明的是，本申请的实施例主要包括以下几部分：
本发明通过对候选的抗癌多肽在不同浓度下(0.1μM，1μM，10μM，100μM)对MDA-MB-231细胞(人乳腺癌细胞)体外抑制活性IC50值测定，确定了22种多肽的抗癌活性，即为所述抗乳腺癌iCXOncP11a、iCXOncP12a、iCXOncP13a、iCXOncP15a、iCXOncP17a、iCXOncP18a、iCXOncP19a、iCXOncP22a、iCXOncP31a、iCXOncP32a、iCXOncP33a、iCXOncP34a、iCXOncP35a、iCXOncP36a、iCXOncP16a、iCXOncP20a、iCXOncP21a、iCXOncP23a、iCXOncP24a、iCXOncP25a、iCXOncP27a和iCXOncP29a多肽。并且通过查证，根据目前公开的多肽库数据(NCBI多肽组)进行比对，我们发现本次申请的所有多肽为全新的序列。
具体实施方案：
(1)多肽芯片孵育筛选肽库。
(2)计算机docking。
(3)多肽候选序列的合成。
(4)各候选多肽生物学活性测定，基于对抗癌细胞的测定，检测多肽工作浓度，推测体外抑制活性IC50值。
(5)使用293T细胞验证各候选多肽的细胞毒性。
实施例1
多肽芯片筛选肽库
1)结合肽集合筛选
A，选择候选Y220C、R175H、R273H的突变P53蛋白并对其进行荧光标记(试剂盒：Alexa
Figure BDA0003381175210000091
555Protein Labeling Kit，A20174)，其中，上述P53突变蛋白的来源如表1所示。
表1三种P53突变蛋白的来源：
蛋白 公司 货号 规格
P53 mutant Y220C Cusabio公司 CSB-BP024077HU(M1) 0.5mg
P53mutant R175H Cusabio公司 CSB-BP024077HU(M2) 0.5mg
P53mutant R273H Cusabio公司 CSB-BP024077HU(M3) 0.5mg
B，对荧光标记后的P53突变蛋白进行高通量短多肽阵列芯片检测。
a，将荧光标记好的样品按照1:500、1:1000、1:5000、1:10000、1:50000、1：500000及1：5000000七个浓度梯度稀释，最终稀释浓度中位数在1：10000。
b，将芯片置于芯片水化用具中，加入超纯水没过芯片，在轨道摇床上55±5rpm/min，水化20min。然后用异丙醇喷洒芯片表面后将芯片放入离心机离心干燥。干燥好的芯片按照实验设计的位置组装成assay cassette。
c，将稀释好的样本按照90μL/孔加入组装好的芯片上，置于恒温振荡仪上振荡孵育1小时。
d，将assay cassette置于洗板机进行清洗。
e，将assay cassette中的芯片进行拆卸、清洗、干燥后组装进imaging cassette，放入Molecular Device公司的ImageXpress micro 4成像仪进行扫描成像。最终每个检测样本得到一张TIFF图片文件，即为原始数据。
C，按照结合信号强度对多肽集合中的多肽序列进行排序；按照预定数量选取排名靠前的多肽序列作为靶点蛋白的候选多肽。
2)抗体孵育筛选有效肽
A，使用上述P53突变蛋白对IST芯片过饱和孵育，使突变蛋白与芯片中的肽段相互结合。
B，抗体PAB1620(Merck货号：MABE339)会结合正常结构的P53，检测PAB1620的结合情况可以说明P53蛋白结构恢复的情况，因此，使用PAB1620进行高通量短多肽阵列芯片检测，筛选出能够恢复P53结构活性的肽段。
C，通过分析免疫指征技术检测后的信号数据，找出特异性信号稳定的特异性结合肽段。
D，与初筛的肽段序列进行匹配，最终得出能够稳定结合突变P53并使其恢复结构活性的肽段。
实施例2
计算机docking(把实施例1的候选肽集进行模拟结合，进行进一步的筛选与验证)。
1)提取受体蛋白坐标：4MZR PDB文件中包含了蛋白、配体和水分子；首先提取出蛋白的坐标。
2)加氢：晶体结构中通常缺少氢原子的坐标(因为氢原子电子少，且质子核对电子吸引能力弱，因此很难定位)。但是在docking过程中，氢原子尤其是极性氢原子对计算静电作用是必须的。因此需要给蛋白加上氢原子。
3)定义配体结合的3D搜索空间：如果结合位点未知，理论上可以定义一个长方体盒子包含整个蛋白或者随便一个特定区域。
4)准备参考配体
从4MZR PDB结构中提取参考配体的原子位置。
与蛋白结构类似，配体的结构也缺少氢原子，因而需要添加氢原子并且定义哪些键是可以旋转的以用于柔性docking。
5)准备docking配置文件，Docking配置文件包含了输入的受体(蛋白)、配体(化合物)和默认搜索参数的信息。
6)Docking D及使用PyMol可视化Docking结果。
7)根据结合力的强弱，结合专业知识挑选潜在的功能肽段进行合成，进一步功能验证肽段的活性。相关结果见表2。
表2
Figure BDA0003381175210000111
Figure BDA0003381175210000121
实施例3
多肽合成
委托吉尔生物合成候选肽段：末端进行myr修饰，详细信息见表3。
表3
Figure BDA0003381175210000122
Figure BDA0003381175210000131
其中，SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：14、SEQID NO：16及SEQ ID NO：22所示的多肽的合成的HPLC图谱如图1a至图1g所示。
实施例4
肽段生物学功能验证试验
一、化学品和试剂：Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM)购自Invitrogen(CA，USA)。胎牛血清(FBS)来自HyClone Laboratories，Inc(USA)。二甲基亚砜(DMSO)购自Sigma，MTT试剂盒购于生工生物(E606334-0500)。
二、MTT实验步骤：
1.试剂盒中所有管子在打开之前需要先离心。
2.MTT溶液的配制：用MTT Solvent(组分B)溶解MTT Reagent(组分A)，配制成5mg/ml的MTT溶液。配制后即可使用，或直接-20℃避光保存，也可以根据需要适当分装后-20℃避光保存。
3.每孔加入10μL MTT溶液，使每个孔中的MTT得终浓度为0.5mg/ml。
4.轻轻混匀后，5％CO2，37℃培养箱中孵育4小时。
5.小心吸取每个孔中的培养基已防止细胞单层破裂。
6.每孔加入100μL Formazan Solubilization Solution(组分C)。
7.将96孔板放在振荡器上轻轻震荡10分钟，直至在普通光学显微镜下观察发现甲臜全部溶解。
8.在酶标免疫检测仪570nm测定吸光度。
三、细胞培养：
1)将MDA-MB-231(来源：ATCC公司)人乳腺癌细胞细胞维持在含有10％胎牛血清(FBS)和1％青霉素和链霉素的Dulbecco's改良伊格尔培养基(DMEM)中，并且在温度37℃以及二氧化碳(CO2)含量5％的环境中培养。
2)体外检测多肽的生物活性。
釆用MTT(USE)检测法检测细胞增殖情况，先将MDA-MB-231细胞种植于96孔板中，每孔中含5×103个细胞，每孔含有10％FBS的l00μL DMEM，留空8个孔作为空白对照。孵育(37℃，5％CO2)过夜，使细胞贴壁。加入不同浓度(0.1μM，1μM，10μM，100μM)精确溶于DMSO的设计多肽，每孔加入含2％FBS的DMEM。孵育(37℃，5％CO2)48小时，使多肽生效。
每孔加入0.05％MTT溶液。孵育(37℃，5％CO2)3小时，使MTT代谢。弃去培养基，在100μL DMSO中重悬甲臜(MTT代谢产物)，将甲臜混入溶剂中。读取570nm处的光密度，记录结果。以浓度为横坐标，细胞活力为纵坐标绘制生长曲线，结果如图2a、图2b和图2c所示。
由图2a结果显示七种多肽均在不同程度上显示出抗癌活性，其中尤其以iCXOncP12a的抗癌活性最为显著，在浓度为10～100μM可有效抑制癌细胞生长，由此计算iCXOncP11a的IC50＝37.64μM，iCXOncP12a的IC50＝12.98μM，iCXOncP13a的IC50＝41.23μM，iCXOncP15a的IC50＝40.95μM，iCXOncP17a的IC50＝44.36μM，iCXOncP18a的IC50＝48.52μM，iCXOncP19a的IC50＝31.3μM，阳性对照多肽ReACp53的IC50＝52.96μM(阳性对照参考文献：Soragni A,Janzen DM,Johnson LM,Lindgren AG,Thai-Quynh Nguyen A,Tiourin E,Soriaga AB,Lu J,Jiang L,Faull KF,Pellegrini M,Memarzadeh S,Eisenberg DS.ADesigned Inhibitor of p53 Aggregation Rescues p53 Tumor Suppression inOvarian Carcinomas.Cancer Cell.2016Jan 11；29(1):90-103.)。
由图2b结果显示另外七种多肽均在不同程度上显示出抗癌活性，其中尤其以iCXOncP22a的抗癌活性最为显著，在浓度为10～100μM可有效抑制癌细胞生长，由此计算iCXOncP22a的IC50＝6.739μM，iCXOncP31a的IC50＝20.82μM，iCXOncP32a的IC50＝14.27μM，iCXOncP33a的IC50＝47.64μM，iCXOncP34a的IC50＝42.47μM，iCXOncP35a的IC50＝72.62μM，iCXOncP36a的IC50＝33.57μM，阳性对照多肽ReACp53的IC50＝52.96μM。
由图2c结果显示八种多肽均在不同程度上显示出抗癌活性，其中尤其以iCXOncP20a的抗癌活性最为显著，在浓度为10～100μM可有效抑制癌细胞生长，由此计算iCXOncP16a的IC50＝26.04μM，iCXOncP20a的IC50＝8.652μM，iCXOncP21a的IC50＝29.65μM，iCXOncP23a的IC50＝32.92μM，iCXOncP24a的IC50＝28.39μM，iCXOncP25a的IC50＝30.45μM，iCXOncP27a的IC50＝24.33μM，iCXOncP29a的IC50＝29.34μM，阳性对照多肽ReACp53的IC50＝52.96μM。
由此可以判断，本次申请保护的22种多肽均有一定的抗癌效果，且抗癌效果大多数都要好于阳性对照。后续可通过对上述多肽的研究，进一步确认上述多肽化合物的成药性。
上述IC50值计算方法：基于不同浓度下，多肽对肿瘤细胞的抑制率，绘制横坐标为多肽浓度、纵坐标为肿瘤细胞的抑制率的回归曲线，得出回归方程式与R值，并以50％抑制率为y值，计算IC50的值。
在另一实验中，通过采用不同浓度(1μM，10μM，100μM)的22种多肽处理乳腺癌细胞，结果如图3a、图3b和图3c所示，多肽处理后的癌细胞生长缓慢，且在100μM的处理下，癌细胞无存活。
实施例5
肽段细胞毒性检测
在不同浓度的多肽作用下，使用MTT检测肾上皮细胞293T(来源：ATCC公司)的细胞活力，并通过结果计算22种多肽对于293T细胞的LD50浓度。结果如下表4。根据LD50以及IC50的结果，iCXOncP12a、iCXOncP13a、iCXOncP18a、iCXOncP22a、iCXOncP36a、iCXOncP20a、iCXOncP21a、iCXOncP23a、iCXOncP24a、iCXOncP25a、iCXOncP29a的IC50均远小于LD50，相较于其他的肽段具有较高的药用开发价值。
表4
Figure BDA0003381175210000151
Figure BDA0003381175210000161
从以上的描述中，可以看出，本发明上述的实施例实现了如下技术效果：本发明选择以P53突变体作为抗癌药物的靶点蛋白，通过多肽芯片大规模筛选有潜力的多肽片段，再通过体内外筛选验证的手段，快速的筛选出了具有抗癌活性的多肽药物。本发明所述的iCXOncP11a、iCXOncP12a、iCXOncP13a、iCXOncP15a、iCXOncP17a、iCXOncP18a、iCXOncP19a、iCXOncP22a、iCXOncP31a、iCXOncP32a、iCXOncP33a、iCXOncP34a、iCXOncP35a、iCXOncP36a、iCXOncP16a、iCXOncP20a、iCXOncP21a、iCXOncP23a、iCXOncP24a、iCXOncP25a、iCXOncP27a和iCXOncP29a二十二种多肽(序列信息见表3)，展现出显著的抑制乳腺癌细胞生长效果，综合考虑各多肽的IC50值的大小、IC50与LD50的大小比较，以及显微镜下拍摄的多肽处理后的乳腺癌细胞存活情况(如表5所列)，以iCXOncP12a、iCXOncP22a、iCXOncP16a、iCXOncP20a、iCXOncP21a、iCXOncP29a效果最为显著。
表5
Figure BDA0003381175210000162
Figure BDA0003381175210000171
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 珠海碳云智能科技有限公司
<120> 靶向P53的多肽及其在制备用于治疗癌症的药物中的应用
<130> PN167666SZTY
<160> 22
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(14)
<223> 靶向P53的多肽
<400> 1
Arg Arg Gly Pro Ala Arg Val Ser Gln Val Pro Lys His Leu
1 5 10
<210> 2
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(11)
<223> 靶向P53的多肽
<400> 2
Arg Arg Trp Leu Pro Pro Phe Gly Val Phe Ser
1 5 10
<210> 3
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(13)
<223> 靶向P53的多肽
<400> 3
Arg Arg Asn Asp Tyr Val Leu Arg Leu Asn Lys His Ser
1 5 10
<210> 4
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(10)
<223> 靶向P53的多肽
<400> 4
Arg Arg Tyr Ser Arg Ala Pro Trp Ser Gly
1 5 10
<210> 5
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(10)
<223> 靶向P53的多肽
<400> 5
Arg Arg Val Glu His Glu Asn Ala Phe Gly
1 5 10
<210> 6
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(12)
<223> 靶向P53的多肽
<400> 6
Arg Arg Pro Asn Phe Pro Leu Ala Gln Ser Ser Asp
1 5 10
<210> 7
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(10)
<223> 靶向P53的多肽
<400> 7
Arg Arg Phe Glu Ser Lys Lys Arg Ser Gly
1 5 10
<210> 8
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(12)
<223> 靶向P53的多肽
<400> 8
Arg Arg Tyr Trp Tyr Lys Asn His Leu Tyr His Gly
1 5 10
<210> 9
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(9)
<223> 靶向P53的多肽
<400> 9
Arg Arg Leu Leu Asp Ala Gly Pro Ser Glu Gly
1 5 10
<210> 10
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(13)
<223> 靶向P53的多肽
<400> 10
Arg Arg Glu Pro Ala Lys Ser Tyr Trp Ser Gln Val Glu
1 5 10
<210> 11
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(15)
<223> 靶向P53的多肽
<400> 11
Arg Arg Pro Ala Leu Gly Asn Arg Leu Trp Asp Ala Gln Val Glu
1 5 10 15
<210> 12
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(12)
<223> 靶向P53的多肽
<400> 12
Arg Arg Pro Asn Tyr Leu Asp Gln Phe Ala Asp Gly
1 5 10
<210> 13
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(10)
<223> 靶向P53的多肽
<400> 13
Arg Arg Asn His His Gln Pro Ala Asp Gly
1 5 10
<210> 14
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(10)
<223> 靶向P53的多肽
<400> 14
Arg Arg Asn Ala Tyr Gly Gln Val Phe Asp
1 5 10
<210> 15
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(10)
<223> 靶向P53的多肽
<400> 15
Arg Arg Phe Asn Phe Tyr Arg Gln Val Gly
1 5 10
<210> 16
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(11)
<223> 靶向P53的多肽
<400> 16
Arg Arg Trp Arg Tyr Tyr Phe Trp Lys Glu Asp
1 5 10
<210> 17
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(10)
<223> 靶向P53的多肽
<400> 17
Arg Arg Gly His Glu Trp Pro Leu Asp Gly
1 5 10
<210> 18
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(10)
<223> 靶向P53的多肽
<400> 18
Arg Asn Asp Glu Phe Ala Gln Lys Val Ser
1 5 10
<210> 19
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(11)
<223> 靶向P53的多肽
<400> 19
Arg Arg Phe Tyr Gln Trp Lys Glu Leu Glu Asp
1 5 10
<210> 20
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(9)
<223> 靶向P53的多肽
<400> 20
Arg Arg His Asn Val Lys Trp Glu Asp
1 5
<210> 21
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(8)
<223> 靶向P53的多肽
<400> 21
Arg Arg Ser Arg Gly Gly Asp Gly
1 5
<210> 22
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(10)
<223> 靶向P53的多肽
<400> 22
Arg Arg Ser His Pro Asn Ala His Glu Asp
1 5 10

Claims (10)

1.一种靶向P53突变体的多肽，其特征在于，所述多肽特异性结合P53突变体，且所述多肽选自如下任意一条或多条：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ IDNO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ IDNO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21及SEQ ID NO：22。
2.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述P53突变体为选自如下至少一个位点突变的突变体：Y220C、R175H或R273H；
优选地，所述多肽为修饰后的肽段；
优选地，所述修饰为化学基团修饰或氨基酸修饰；
优选地，所述化学基团修饰为PEG修饰、乙酰化修饰或酰胺化修饰中的任意一种或多种；
优选地，所述PEG修饰为直链PEG修饰、具有单官能团的PEG修饰或者具有双官能团的PEG修饰；
优选地，所述PEG修饰的位点选自所述多肽的N端、C端、Lys侧链和Cys侧链中的任意一个或多个；
优选地，所述PEG修饰为分子量为500～40000的PEG修饰；
优选地，所述多肽的N端和C端分别具有所述乙酰化修饰和所述酰胺化修饰；
优选地，所述多肽的N端具有脂肪酸修饰，更优选为Myr修饰；
优选地，所述氨基酸修饰为亲水性氨基酸修饰或半胱氨酸修饰；
优选地，所述亲水性氨基酸修饰为在所述多肽的N端、C端或者NC两端添加1-4个亲水性氨基酸，更优选地，所述亲水性氨基酸为Glu、Lys、Ser或Gly；进一步优选地，所述1-4个亲水性氨基酸选自如下任意一种：Glu-Glu、Lys-Lys或Ser-Gly-Ser；
优选地，所述半胱氨酸修饰为在所述多肽的如下任一位置添加半胱氨酸：N端、C端、NC两端或肽链中间；
更优选地，在所述肽链中间添加半胱氨酸包括在所述肽链中间插入一个或多个半胱氨酸，或者一个或多个半胱氨酸以支链形式连接于所述肽链的中间。
3.一种多肽药物，其特征在于，所述多肽药物包括权利要求1或2所的多肽以及药学上可选的辅料。
4.根据权利要求3所述的药物，其特征在于，所述多肽药物为抗癌药物，优选为抗乳腺癌药物；
优选地，所述多肽药物中所述多肽的浓度为0.1μM～100μM。
5.权利要求1或2所的多肽在制备用于治疗个体肿瘤或癌症的药物中的应用，可选的，所述药物为多肽药物或联合药物。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述癌症包括如下任意一种或多种：乳腺癌、肺癌、鼻咽癌、喉癌、胃癌、肝癌、食道癌、肠癌、胰腺癌、胆囊癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、白血病、淋巴癌、血管瘤、骨癌、宫颈癌、子官癌、卵巢癌、脂肪癌、脑瘤、鳞癌、皮肤癌、甲状腺癌、唇癌、黑色素癌、舌癌、胸腺癌以及中枢神经系统癌症；
优选地，所述中枢神经系统癌症为脑癌；
优选的，所述应用包括通过所述多肽抑制人乳腺癌细胞增殖的功能。
7.一种检测P53突变体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括利要求1或2所述的多肽。
8.根据权利要求7的试剂盒，其特征在于，所述多肽以多肽-蛋白偶联物的形式存在；
优选地，所述多肽-蛋白偶联物中的蛋白选自如下任意一种：牛血清蛋白、卵清白蛋白、钥孔血蓝蛋白或酪蛋白；
更优选，所述多肽通过连接序列与所述蛋白偶联形成所述多肽-蛋白偶联物，进一步优选地，所述连接序列为CGSG。
9.根据权利要求7或8的试剂盒，其特征在于，所述多肽被包被于固相载体上；
优选地，所述固相载体包括酶标板、膜载体或微球；
优选地，所述膜载体包括硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜或尼龙膜；
优选地，所述膜载体上还包被有阳性对照物，所述多肽和所述阳性对照物按检测顺序在所述膜载体上依次设置；
优选地，所述试剂盒还包括如下至少之一：
(1)酶标二抗，更优选所述酶标二抗为HRP标记的二抗；
(2)胶体金结合垫，所述胶体金结合垫上包被有胶体金标记的抗原和所述阳性对照物的特异性结合物；
(3)标记垫，所述标记垫上包被有荧光标记的微球，所述微球上负载有所述阳性对照物的特异性结合物；
优选地，所述阳性对照物选自鼠免疫球蛋白、人免疫球蛋白、羊免疫球蛋白或兔免疫球蛋白，相应地，所述阳性对照物的特异性结合物选自抗鼠免疫球蛋白、抗人免疫球蛋白、抗羊免疫球蛋白或抗兔免疫球蛋白。
10.根据权利要求7的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括芯片，所述芯片上预置有所述多肽组成的多肽阵列。
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