CN116148471A - 肺动脉高压的生物标志物及其应用 - Google Patents

肺动脉高压的生物标志物及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN116148471A
CN116148471A CN202211355187.8A CN202211355187A CN116148471A CN 116148471 A CN116148471 A CN 116148471A CN 202211355187 A CN202211355187 A CN 202211355187A CN 116148471 A CN116148471 A CN 116148471A
Authority
CN
China
Prior art keywords
product
arterial hypertension
pulmonary arterial
pulmonary
biomarker
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202211355187.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN116148471B (zh
Inventor
李晓晖
蒋钰洁
李莹
郭莹帆
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Central South University
Original Assignee
Central South University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Central South University filed Critical Central South University
Priority to CN202211355187.8A priority Critical patent/CN116148471B/zh
Publication of CN116148471A publication Critical patent/CN116148471A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN116148471B publication Critical patent/CN116148471B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/13—Nucleic acids or derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y101/00—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1)
    • C12Y101/01—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1) with NAD+ or NADP+ as acceptor (1.1.1)
    • C12Y101/01022—UDP-glucose 6-dehydrogenase (1.1.1.22)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G01N33/5064—Endothelial cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5308—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for analytes not provided for elsewhere, e.g. nucleic acids, uric acid, worms, mites
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2503/00—Use of cells in diagnostics
    • C12N2503/02—Drug screening
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/902—Oxidoreductases (1.)
    • G01N2333/904—Oxidoreductases (1.) acting on CHOH groups as donors, e.g. glucose oxidase, lactate dehydrogenase (1.1)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2400/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving carbohydrates
    • G01N2400/10—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • G01N2400/38—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence, e.g. gluco- or galactomannans, e.g. Konjac gum, Locust bean gum, Guar gum
    • G01N2400/40—Glycosaminoglycans, i.e. GAG or mucopolysaccharides, e.g. chondroitin sulfate, dermatan sulfate, hyaluronic acid, heparin, heparan sulfate, and related sulfated polysaccharides
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G01N2500/10—Screening for compounds of potential therapeutic value involving cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/12—Pulmonary diseases
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/32—Cardiovascular disorders
    • G01N2800/321—Arterial hypertension
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Abstract

本发明公开了肺动脉高压的生物标志物及其应用。研究发现特发性肺动脉高压患者血浆，以及肺动脉高压大鼠血浆和肺组织中的UGDH含量显著增加，下游糖代谢物D‑GlcUA和LMW HA含量增加。肺动脉高压大鼠肺组织EndoMT指标上调，内皮细胞通透性增加，内皮细胞完整性破坏。沉默UGDH可明显改善肺动脉内皮细胞EndoMT，以及恢复内皮细胞完整性；而LMW HA孵育肺动脉内皮细胞可以逆转UGDH改善EndoMT的作用，这说明UGDH通过调节LMW HA的生成，促进肺动脉内皮细胞EndoMT，破坏内皮细胞的完整性，参与肺血管重构，加重肺动脉高压病理进程。

Description

肺动脉高压的生物标志物及其应用
技术领域
本发明涉及肺动脉高压的检测和治疗技术领域，尤其是涉及肺动脉高压的生物标志物及其应用。
背景技术
肺动脉高压(Pulmonary hypertension，PH)是一种罕见的以肺动脉压力进行性升高为特征的严重肺血管疾病，其病理特征是由于内皮功能发生障碍以及肺动脉平滑肌细胞和成纤维细胞不受控制地增殖而导致的肺小动脉重构，进而形成血管壁增厚形成阻塞，肺小动脉阻塞可导致肺动脉压力升高，严重时可使患者右心衰竭，呼吸急促和晕厥甚至死亡。
尽管目前肺动脉高压的治疗取得了一定进展，但主要是针对内皮素，前列环素和一氧化氮信号传导途径，这些药仅能在一定程度舒张血管，缓解疾病症状，并不能治愈疾病，亟待为肺动脉高压的预防和治疗提供新的靶点。
糖醛酸途径是糖酵解的分支旁路，通量虽小但不可或缺。糖醛酸途径的原料葡萄糖-6-磷酸来自于糖酵解的中间代谢产物，先异构转化为葡萄糖-1-磷酸，后者与UTP反应，转化为UDP-葡萄糖。UDP-葡萄糖再经UDP-葡萄糖脱氢酶(UGDH)催化，形成UDP-葡萄糖醛酸(UDP-GlcUA)。在透明质酸合成酶(HAS)的作用下，UDP-GlcUA释放UDP生成D-葡萄糖醛酸(D-GlcUA)，D-GlcUA聚合可生成透明质酸(HA)。HA的合成对UDP-糖浓度的变化敏感，两种UDP-糖(UDP-GlcUA，UDP-GlcNac)的含量与肿瘤HA水平密切相关。并且由于UDP-GlcUA对HAS的高亲和力，当缺乏UGDH会直接导致D-GlcUA合成不足，严重阻碍HA的形成。HA在肿瘤方面研究较多，是一种已知的恶性肿瘤启动子，在乳腺癌在内的多种肿瘤类型中HA水平升高，其积累与疾病的不良预后密切相关。HA通常在正常组织中以高分子量形式存在，在疾病状态下，由于HA酶(HYALs)的异常激活，高分子量HA(HMW HA,>1000kDa)降解为低分子量HA(LMW HA,10–250kDa)。LMW HA在肿瘤恶性进展期间的上皮间质转化中起着核心作用，在恶性肿瘤中检测到大量的HA片段(LMW HA)，其增加与肿瘤的侵袭性相关。
内皮-间充质转化(Endothelial-to-mesenchymal transition，EndoMT)是内皮细胞丧失内皮特性，获得间充质、肌成纤维细胞样特性表达的过程，是肺血管内皮的一种病理改变，参与肺动脉高压的血管重构。这两种细胞类型通过EndoMT转化在心血管疾病发展过程中相互转化，可导致内皮细胞通透性增加，破坏内皮细胞的完整性，参与肺血管重构，加重肺动脉高压病理进程。
发明内容
本发明旨在解决上述现有技术中存在的技术问题。为此，本发明提出肺动脉高压的生物标志物及其应用。研究发现特发性肺动脉高压患者血浆，以及肺动脉高压大鼠血浆和肺组织中的UGDH含量显著增加，下游糖代谢物D-GlcUA和LMW HA含量增加。肺动脉高压大鼠肺组织EndoMT指标上调，内皮细胞通透性增加，内皮细胞完整性破坏。沉默UGDH可以明显改善肺动脉内皮细胞EndoMT，以及恢复内皮细胞完整性；而LMW HA孵育肺动脉内皮细胞可以逆转UGDH改善EndoMT的作用，这说明UGDH通过调节LMW HA的生成，促进肺动脉内皮细胞EndoMT，破坏内皮细胞的完整性，参与肺血管重构，加重肺动脉高压病理进程。表明UGDH、D-GlcUA和LMW HA可作为肺动脉高压的标志物及治疗靶点。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明的第一方面，本发明提供了生物标志物或检测所述生物标志物的试剂的应用，所述生物标志物包括UDP-葡萄糖脱氢酶(UGDH)、D-葡萄糖醛酸(D-GlcUA)和低分子量透明质酸(LMW HA)中的至少一种；
所述应用包括i-vi中的至少一项：
i.在制备筛查肺动脉高压的产品中的应用；
ii.在制备评估肺动脉高压风险的产品中的应用；
iii.在制备诊断肺动脉高压的产品中的应用；
iv.在制备治疗肺动脉高压的产品中的应用；
v.在制备监测断肺动脉高压病程的产品中的应用；
vi.在制备分析肺动脉高压预后的产品中的应用。
根据本发明的一些实施例，所述生物标志物可单独使用，也可与其它生物标志物联合使用，包括：心脏功能相关生物标志物、内皮细胞相关生物标志物、炎性反应相关标志物、代谢相关生物标志物、细胞外基质相关生物标志物中的至少一种。
优选地，所述心脏功能相关生物标志物为心脏肌钙蛋白I(cTnI)、B型利钠肽(BNP)和氨基末端B型利钠肽(NT－proBNP)。
优选地，所述内皮细胞相关生物标志物包括内皮素-1(ET-1)、非对称二甲基精氨酸(ADMA)、一氧化氮(NO)中的至少一种。
优选地，所述炎性反应相关标志物包括肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、生长分化因子-15(GDF-15)、半乳糖凝集素-3(Gal-3)、骨桥蛋白(OPN)中的至少一种。
优选地，所述代谢相关生物标志物包括代谢组学相关标记和色氨酸代谢物中的至少一种。
优选地，所述细胞外基质相关生物标志物为晚期糖基化终产物受体。
上述心脏功能相关生物标志物、内皮细胞相关生物标志物、炎性反应相关标志物、代谢相关生物标志物、细胞外基质相关生物标志物均为现有技术报道的与肺动脉高压的临床早期诊断、疾病分型、严重程度判断等有关的指标。根据现有技术报道，肺动脉高压的病因复杂多样，可由多种心、肺或肺血管的病理改变导致。肺动脉高压是由肺血管收缩和重构引起肺血管阻力增加导致的预后不良的进展性疾病，内皮细胞损伤被认为是早期触发肺血管重构的因素之一，内皮细胞功能紊乱、肺动脉平滑肌细胞和成纤维细胞增殖不受控制，最终导致血管收缩、血栓形成、新生内膜形成、肌肉化和血管病变的发展。随着管腔尺寸的减小，肺血管阻力增加，导致右心室肥厚，最终导致右心室衰竭。将上述生物标志物与UGDH、D-GlcUA和LMW HA中的至少一种联合使用，将有利于肺动脉高压的临床早期诊断、判断疾病严重程度、精准治疗和预后评估。
根据本发明的一些实施例，所述UGDH如下a)或b)或c)或d)的蛋白质：
a)氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的蛋白质；
b)氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；
c)将序列如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质；
d)与序列如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列具有75％或75％以上的同源性且具有相同功能的蛋白质。
根据本发明的一些实施例，编码所述UGDH的核酸分子序列如SEQ ID NO.1所示。
根据本发明的一些实施例，所述用于治疗肺动脉高压的产品为降低UGDH、D-GlcUA或LMW HA中的至少一种的表达量的产品。
根据本发明的一些实施例，所述用于治疗肺动脉高压的产品为抑制内皮间充质转化的产品。
优选地，所述产品为抑制TGF-β1诱导的内皮间充质转化的产品。
根据本发明的一些实施例，所述内皮间充质转化的检测指标包括VE-cadherin、N-Cadherin、α-SMA、Snail。
优选地，所述产品为能够增加VE-cadherin表达量，并降低N-Cadherin、α-SMA、Snail表达量的产品。
根据本发明的一些实施例，所述用于治疗肺动脉高压的产品为降低内皮细胞通透性的产品。
优选地，所述产品为改善TGF-β1诱导的内皮细胞通透性增加的产品。
根据本发明的一些实施例，所述内皮细胞通透性的检测指标包括ZO-2、Occludin。
优选地，所述产品为能够增加内皮细胞ZO-2和Occludin表达量的产品。
根据本发明的一些实施例，所述内皮细胞为人肺动脉内皮细胞HPAECs。
根据本发明的一些实施例，所述试剂为用于检测所述生物标志物表达量的试剂。
根据本发明的一些实施例，所述试剂包括通过酶联免疫吸附试验、免疫荧光法、放射免疫测定法、免疫共沉淀法、免疫印迹法、高效液相色谱法、毛细管凝胶电泳法、近红外光谱法、质谱法、免疫化学发光法、胶体金免疫技术、荧光免疫层析技术、表面等离子共振技术、免疫-PCR技术或生物素-亲和素技术检测所述生物标志物表达量的试剂。
根据本发明的一些实施例，所述试剂包括但不限于引物、探针、基因芯片、ELISA试剂或Western blot试剂。
根据本发明的一些实施例，所述试剂检测的样本可以是来源于要检测肺动脉高压的对象的任何样本，只要可以在该样本中检测到UGDH、D-GlcUA或LMW HA。在本发明中，要检测肺动脉高压的对象可以是哺乳动物，包括人、非人灵长类、小鼠、大鼠、犬、猫、马和牛。所述样本包括血浆、血清、组织匀浆、细胞培养物上清中的至少一种。所述样本可以在不同时间点从要检测肺动脉高压的对象中获得，包括治疗前、治疗中和/或治疗后。
优选地，所述样本为血浆或组织匀浆。
更优选地，所述组织匀浆为肺组织匀浆。
本发明提供了检测来源于受试者的组织样本或血浆的方法，所述方法包括测定UGDH、D-GlcUA或LMW HA在来源于受试者的组织样本或血浆中的表达量，其中与正常对照组的UGDH、D-GlcUA或LMW HA的表达量相比，受试者的组织样本或血浆中UGDH、D-GlcUA或LMWHA的表达量的增加，指明受试者存在肺动脉高压或怀疑受试者存在肺动脉高压。
本发明的第二方面，提供一种药物、食品或试剂盒，所述药物、食品或试剂盒包括上述述的生物标志物，或其检测试剂、抑制剂；
所述药物、食品或试剂盒至少包括i-vi中的一种用途：
i.在制备筛查肺动脉高压的产品中的应用；
ii.在制备评估肺动脉高压风险的产品中的应用；
iii.在制备诊断肺动脉高压的产品中的应用；
iv.在制备治疗肺动脉高压的产品中的应用；
v.在制备监测断肺动脉高压病程的产品中的应用；
vi.在制备分析肺动脉高压预后的产品中的应用。
根据本发明的一些实施例，所述用于治疗肺动脉高压的产品为降低UGDH、D-GlcUA或LMW HA中的至少一种的表达量的产品。
根据本发明的一些实施例，所述用于治疗肺动脉高压的产品为抑制内皮间充质转化的产品。
优选地，所述产品为抑制TGF-β1诱导的内皮间充质转化的产品。
根据本发明的一些实施例，所述内皮间充质转化的检测指标包括VE-cadherin、N-Cadherin、α-SMA、Snail。
优选地，所述产品为能够增加VE-cadherin表达量，并降低N-Cadherin、α-SMA、Snail表达量的产品。
根据本发明的一些实施例，所述用于治疗肺动脉高压的产品为降低内皮细胞通透性的产品。
优选地，所述产品为改善TGF-β1诱导的内皮细胞通透性增加的产品。
根据本发明的一些实施例，所述内皮细胞通透性的检测指标包括ZO-2、Occludin。
优选地，所述产品为能够增加内皮细胞ZO-2和Occludin表达量的产品。
根据本发明的一些实施例，所述内皮细胞为人肺动脉内皮细胞HPAECs。
本发明所述的药物、食品或试剂盒还可包括和钙离子通道阻滞剂、前列环素类似物及前列环素受体激动剂、内皮素受体拮抗剂、磷酸二酯酶抑制剂、鸟苷酸环化酶激动剂中的至少一种。
具体的，所述钙离子通道阻滞剂包括硝苯地平、地尔硫卓、氨氯地平中的至少一种。所述前列环素类似物及前列环素受体激动剂包括依前列醇、伊洛前列素、曲前列尼尔、司来帕格中的至少一种。所述内皮素受体拮抗剂包括波生坦、安立生坦、马昔腾坦中的至少一种。所述磷酸二酯酶抑制剂包括西地那非、他达那非、伐地那非中的至少一种。所述鸟苷酸环化酶激动剂为利奥西呱。以上均为现有技术报道的用于治疗肺动脉高压的药物。由于肺高压的形成过程是一个多因素的病理生理过程，UGDH、D-GlcUA或LMW HA中的至少一种的表达量抑制剂可以与以上药物组合使用，采用不同作用机制的药物联合应用进行干预治疗，可以作为行而有效的新型治疗手段，将有利于精准治疗药物的开发。
根据本发明的一些实施例，所述的药物、食品或试剂盒包括UGDH编码基因的shRNA。
优选地，所述shRNA的核苷酸序列为5'-CTCGCTTGGGCGAGAGTAA-3'。
本发明的第三方面，提供了一种药物、食品或试剂盒的应用，所述应用包括i-vi中的至少一项：
i.在制备筛查肺动脉高压的产品中的应用；
ii.在制备评估肺动脉高压风险的产品中的应用；
iii.在制备诊断肺动脉高压的产品中的应用；
iv.在制备治疗肺动脉高压的产品中的应用；
v.在制备监测断肺动脉高压病程的产品中的应用；
vi.在制备分析肺动脉高压预后的产品中的应用；
所述药物、食品或试剂盒包括上述的生物标志物，或其检测试剂、抑制剂。
根据本发明的一些实施例，所述用于治疗肺动脉高压的产品为降低UGDH、D-GlcUA或LMW HA中的至少一种的表达量的产品。
根据本发明的一些实施例，所述用于治疗肺动脉高压的产品为抑制内皮间充质转化的产品。
优选地，所述产品为抑制TGF-β1诱导的内皮间充质转化的产品。
根据本发明的一些实施例，所述内皮间充质转化的检测指标包括VE-cadherin、N-Cadherin、α-SMA、Snail。
优选地，所述产品为能够增加VE-cadherin表达量，并降低N-Cadherin、α-SMA、Snail表达量的产品。
根据本发明的一些实施例，所述用于治疗肺动脉高压的产品为降低内皮细胞通透性的产品。
优选地，所述产品为改善TGF-β1诱导的内皮细胞通透性增加的产品。
根据本发明的一些实施例，所述内皮细胞通透性的检测指标包括ZO-2、Occludin。
优选地，所述产品为能够增加内皮细胞ZO-2和Occludin表达量的产品。
根据本发明的一些实施例，所述内皮细胞为人肺动脉内皮细胞HPAECs。
本发明所述的药物、食品或试剂盒还可包括如上所述的钙离子通道阻滞剂、前列环素类似物及前列环素受体激动剂、内皮素受体拮抗剂、磷酸二酯酶抑制剂、鸟苷酸环化酶激动剂中的至少一种。
根据本发明的一些实施例，所述药物、食品或试剂盒还包括UGDH编码基因的shRNA。
优选地，所述shRNA的核苷酸序列为5'-CTCGCTTGGGCGAGAGTAA-3'。
本发明的第四方面，提供了一种筛选药物、食品或试剂盒的方法，通过检测受试者与对照组体内的UGDH、D-GlcUA或LMW HA中的至少一种的表达量差异进行筛选。
有益效果：
本发明证明了糖醛酸途径关键限速酶UGDH可作为肺动脉高压的标志物及治疗靶点，故而提出了UGDH在制备检测肺动脉高压的产品中的应用以及沉默UGDH表达的试剂在制备治疗肺动脉高压的药品或食品中的应用。本发明通过代谢组学研究，发现特发性肺动脉高压(idiopathic pulmonary arterial hypertension，IPAH)患者血浆UGDH，D-GlcUA和LMW HA含量显著增加。对大鼠进行野百合碱(MCT)和低氧(Hyp)造模，建立大鼠肺动脉高压模型。发现MCT组和Hyp组大鼠血浆UGDH，D-GlcUA和LMW HA含量显著增加；同时，肺组织中UGDH蛋白显著增加，肺组织EndoMT指标上调。
在肺动脉高压的内皮细胞中存在类似肿瘤的代谢重编程，本发明通过沉默UGDH可以明显改善转化生长因子β1蛋白(TGF-β1)诱导的肺动脉内皮细胞EndoMT，显著降低细胞上清LMW HA的含量，而LMW HA孵育肺动脉内皮细胞可以逆转UGDH改善EndoMT的作用，这说明UGDH通过调节LMW HA的生成，促进肺动脉内皮细胞EndoMT，破坏内皮细胞的完整性，参与肺血管重构，加重肺动脉高压病理进程。
基于本发明的代谢研究，可以让肺动脉高压疾病的相关探索不仅局限于肺动脉的变化，而是扩展到整个机体的代谢研究，因此，本发明为研究治疗肺动脉高压的新型药品或食品开发提供了一个新的靶点。
本申请中术语：
术语“shRNA”是指具有茎-环结构的siRNA，其包含彼此互补的第一区和第二区，即有义链和反义链。区的互补程度和方向足以使该区之间发生碱基配对，所述第一区和第二区通过环区连接，所述环是由于环区内的核苷酸(或核苷酸类似物)之间缺乏碱基配对而形成的。shRNA的环区是介于有义和反义链之间的单链区，并且也可以称为“居间单链”。
本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1是本发明实施例1的IPAH患者血浆中UGDH，D-GlcUA和LMW HA的含量结果图；其中，A、B、C分别为UGDH、D-GlcUA、LMW HA的含量结果图；
图2是本发明实施例2的构建Hyp诱导肺动脉高压大鼠模型的结果图；其中，A为RVSP波形图；B为RVSP统计图；C为RV/(LV+S)统计图；D为肺组织HE染色；E为肺组织中UGDH的表达；F为肺组织中UGDH的表达统计图；
图3是本发明实施例2的构建MCT诱导肺动脉高压大鼠模型的结果图；其中，A为RVSP波形图；B为RVSP统计图；C为RV/(LV+S)统计图；D为肺组织HE染色；E为肺组织中UGDH的表达；F为肺组织中UGDH的表达统计图；
图4是本发明实施例3的肺动脉高压大鼠血浆中UGDH，D-GlcUA和LMW HA的含量检测结果图；其中，A、B、C分别为Hyp诱导肺动脉高压大鼠的血浆中UGDH，D-GlcUA和LMW HA的含量检测结果图；D、E、F分别为MCT诱导肺动脉高压大鼠的血浆中UGDH，D-GlcUA和LMW HA的含量检测结果图；
图5是本发明实施例4的Hyp诱导肺动脉高压大鼠的肺组织中EndoMT指标的检测结果图；其中，A为EndoMT指标的蛋白条带图；B、C、D、E分别为VE-cadherin、N-Cadherin、α-SMA、Snail的蛋白表达统计图；
图6是本发明实施例4的MCT诱导肺动脉高压大鼠的肺组织中EndoMT指标的检测结果图；其中，A为EndoMT指标的蛋白条带图；B、C、D、E分别为VE-cadherin、N-Cadherin、α-SMA、Snail的蛋白表达统计图；
图7是本发明实施例5的UGDH shRNA稳定转染获得UGDH敲低的人肺动脉内皮细胞；其中，A为荧光结果图；B为UGDH的蛋白条带图；C为UGDH的蛋白表达统计图；
图8是本发明实施例6的TGF-β1刺激下UGDH shRNA稳转细胞中EndoMT指标的检测结果图；其中，A为EndoMT指标的蛋白条带图；B、C、D、E分别为VE-cadherin、N-Cadherin、α-SMA、Snail的蛋白表达统计图；
图9是本发明实施例6的TGF-β1刺激下UGDH shRNA稳转细胞中VE-cadherin以及α-SMA的免疫荧光检测结果图；
图10是本发明实施例7的TGF-β1刺激下UGDH shRNA稳转细胞中ZO-2以及OCLN的检测结果图；其中，A为ZO-2以及OCLN的蛋白条带图；B、C分别为ZO-2以及OCLN的蛋白表达统计图；
图11是本发明实施例7的TGF-β1刺激下UGDH shRNA稳转细胞中ZO-2以及OCLN的免疫荧光检测结果图；
图12是本发明实施例8的TGF-β1刺激下UGDH shRNA稳转细胞中LMW HA的含量结果图；
图13是本发明实施例9的LMW HA孵育下UGDH shRNA稳转细胞中EndoMT指标的检测结果图；其中，A为EndoMT指标的蛋白条带图；B、C、D、E分别为VE-cadherin、N-Cadherin、Snail、α-SMA的蛋白表达统计图。
具体实施方式
以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明,均可从商业途径购买得到。
下述实施例中雄性健康Sprague-Dawley(SD)大鼠由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供。
本实验所用的是人肺动脉内皮细胞(HPAECs)，购买于Sciencell。
本实施例中的UDP-葡萄糖脱氢酶的基因编码序列为：ATGTTTGAAATTAAGAAGATCTGTTGCATCGGTGCAGGCTATGTTGGAGGACCCACATGTAGTGTCATTGCTCATATGTGTCCTGAAATCAGGGTAACGGTTGTTGATGTCAATGAATCAAGAATCAATGCGTGGAATTCTCCTACACTTCCTATTTATGAGCCAGGACTAAAAGAAGTGGTAGAATCCTGTCGAGGAAAAAATCTTTTTTTTTCTACCAATATTGATGATGCCATCAAAGAAGCTGATCTTGTATTTATTTCTGTGAATACTCCAACAAAAACCTATGGAATGGGGAAAGGCCGGGCAGCAGATCTGAAGTATATTGAAGCTTGTGCTAGACGCATTGTGCAAAACTCAAATGGGTACAAAATTGTGACTGAGAAAAGCACAGTTCCAGTGCGGGCAGCAGAAAGTATCCGTCGCATATTTGATGCAAACACAAAACCCAACTTGAATTTACAGGTGCTGTCCAACCCTGAGTTTCTGGCAGAGGGAACAGCCATCAAGGACCTAAAGAACCCAGACAGAGTACTGATTGGAGGGGATGAAACTCCAGAGGGCCAGAGAGCTGTGCAGGCCCTGTGTGCTGTATATGAGCACTGGGTTCCCAGAGAAAAGATCCTCACCACTAATACTTGGTCTTCAGAGCTTTCCAAACTGGCAGCAAATGCTTTTCTTGCCCAGAGAATAAGCAGCATTAACTCCATAAGTGCTCTGTGTGAAGCAACAGGAGCTGATGTAGAAGAGGTAGCAACAGCGATTGGAATGGACCAGAGAATTGGAAACAAGTTTCTAAAAGCCAGTGTTGGGTTTGGTGGGAGCTGTTTCCAAAAGGATGTTCTGAATTTGGTTTATCTCTGTGAGGCTCTGAATTTGCCAGAAGTAGCTCGTTATTGGCAGCAGGTCATAGACATGAATGACTACCAGAGGAGGAGGTTTGCTTCCCGGATCATAGATAGTCTGTTTAATACAGTAACTGATAAGAAGATAGCTATTTTGGGATTTGCATTCAAAAAGGACACTGGTGATACAAGAGAATCTTCTAGTATATATATTAGCAAATATTTGATGGATGAAGGTGCACATCTACATATATATGATCCAAAAGTACCTAGGGAACAAATAGTTGTGGATCTTTCTCATCCAGGTGTTTCAGAGGATGACCAAGTGTCCCGGCTCGTGACCATTTCCAAGGATCCATATGAAGCATGTGATGGTGCCCATGCTGTTGTTATTTGCACTGAGTGGGACATGTTTAAGGAATTGGATTATGAACGCATTCATAAAAAAATGCTAAAGCCAGCCTTTATCTTCGATGGACGGCGTGTCCTGGATGGGCTCCACAATGAACTACAAACCATTGGCTTCCAGATTGAAACAATTGGCAAAAAGGTGTCTTCAAAGAGAATTCCATATGCTCCTTCTGGTGAAATTCCGAAGTTTAGTCTTCAAGATCCACCTAACAAGAAACCTAAAGTGTAG(SEQ ID NO.1)。
本实施例中的UDP-葡萄糖脱氢酶的氨基酸序列为：
MFEIKKICCIGAGYVGGPTCSVIAHMCPEIRVTVVDVNESRINAWNSPTLPIYEPGLKEVVESCRGKNLFFSTNIDDAIKEADLVFISVNTPTKTYGMGKGRAADLKYIEACARRIVQNSNGYKIVTEKSTVPVRAAESIRRIFDANTKPNLNLQVLSNPEFLAEGTAIKDLKNPDRVLIGGDETPEGQRAVQALCAVYEHWVPREKILTTNTWSSELSKLAANAFLAQRISSINSISALCEATGADVEEVATAIGMDQRIGNKFLKASVGFGGSCFQKDVLNLVYLCEALNLPEVARYWQQVIDMNDYQRRRFASRIIDSLFNTVTDKKIAILGFAFKKDTGDTRESSSIYISKYLMDEGAHLHIYDPKVPREQIVVDLSHPGVSEDDQVSRLVTISKDPYEACDGAHAVVICTEWDMFKELDYERIHKKMLKPAFIFDGRRVLDGLHNELQTIGFQIETIGKKVSSKRIPYAPSGEIPKFSLQDPPNKKPKV(SEQ ID NO.2)。
利用统计学软件GraphPad Prism 5对数据进行分析。两组均数比较采用独立样本t检验，多组均数比较采用单因素ANOVE检验。所有数据均表示为平均值±标准误差。以下数据中,“*”、“#”表示具有统计学差异(P<0.05)，“**”、“##”表示具有显著统计学差异(P<0.01)。
实施例1、IPAH患者血浆样本中UGDH，D-GlcUA和LMW HA含量的检测一、实验步骤
1、IPAH患者血浆样本的收集
所有15例IPAH患者的血浆均在2016-2018年被采集，采集时均确诊为IPAH。医院为湖南省长沙市中南大学湘雅医院和湘雅二医院。使用EDTA抗凝管收集全血3～4mL，颠倒混匀后静置20～30min，3000rpm离心10min，收集上清于1.5mL EP管中。300μL每管分装后置-80℃保存，避免反复冻融。
2、健康对照者(Control)血浆样本的收集
所有15例健康对照者按照与IPAH患者年龄及性别相匹配(见表1)，血浆均收集于2017-2018年，无心血管疾病等重大代谢性疾病，肝肾功能正常。所有患者和健康志愿者均征得了知情同意，并且该研究得到中南大学伦理委员会的批准，并根据赫尔辛基宣言进行。使用EDTA抗凝管收集全血3～4mL，颠倒混匀后静置20～30min，3000rpm离心10min，收集上清于1.5mL EP管中。300μL每管分装后置-80℃保存，避免反复冻融。
表1 IPAH患者与健康对照者信息表
IPAH(n＝15) Control(n＝15)
年龄(y) 32.67±5.07 32.27±3.90
女性：男性 11：4(2.8：1) 11：4(2.8：1)
BMI(kg/m2) 20.97±3.45 21.73±1.91
平均肺动脉压(mmHg) 59.07±13.96 /
肺血管阻力(Woods units) 14.69±4.40 /
平均右心平压(mmHg) 13.67±4.88 /
右心室收缩压(mmHg) 88.27±24.76 /
右心室舒张压(mmHg) 8.40±6.85 /
NT-proBNP(pg/mL) 3360.64±3011.87 /
肌肌(μmol/L) 76.45±15.41 65.13±16.34
总总红素(μmol/L) 15.27±7.64 10.49±3.29
注：BMI全称为Body Mass Index，即身体质量指数。
3、超滤离心法提取LMW HA
取样品离心，离心转速为8000g，离心时间为10min。使用Amicon Ultra超滤离心管6000g离心30min，截留分子量为50kDa，即小于50kDa的LMW HA被超滤到离心管下方，用于后续检测。
4、ELISA试剂盒检测UGDH和LMW HA的浓度
(1)提前把要用到的试剂放到37℃烘箱中约30min，分别设空白孔、标准孔、待测样品孔；
(2)加样：向每孔中加入标准品稀释液50μL，待测样品孔中加入样品稀释液40μL，再加入待测样品10μL(样品最终稀释度为5倍)，将样品加于酶标板底部，尽量不要碰到孔壁，轻轻晃动混匀；
(3)温育：用封板膜封板后置37℃温育30min；
(4)洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液(将30×浓缩洗涤液用蒸馏水稀释成1×)，静置30秒后弃去，重复5次，拍干；
(5)加酶：除空白孔外，每孔加入酶标试剂50μL，用封板膜封板后置37℃温育30min；
(6)洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液(将30×浓缩洗涤液用蒸馏水稀释成1×)，静置30秒后弃去，重复5次，拍干；
(7)显色：每孔先加入50μL显色剂A，再加入50μL显色剂B，轻轻震荡混匀，37℃避光孵育显色15min；
(8)终止：每孔加终止液50μL，终止反应(此时蓝色立转黄色)；
(9)测定：以空白孔调零，450nm处检测吸光度(OD值)；在加入终止液后15min内进行检测。
5、超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法检测D-GlcUA浓度
样品加入内标工作液(内标为非诺贝特酸-D6)，振荡3min，18400g离心6min，取上清液加30％乙腈进行稀释，振荡30s，进样3μL分析。
色谱采用WatersAQUITY UPLC色谱柱(2.1×50mm，1.7μm)，流动相为乙酸铵水溶液-乙腈梯度洗脱，流速为0.2mL/min；柱温为40℃，自动进样器温度为12℃；进样量为3μL。
质谱采用电喷雾离子源(ESI)，电离模式为负离子源，多反应离子检测(MRM)模式。用UNIFI软件(版本号：1.9.4.0)采集并处理数据。
二、实验结果
结果如图1所示，IPAH患者的血浆中UGDH，D-GlcUA和LMW HA的含量均较Control组的显著增加。
实施例2、肺动脉高压动物模型的建立
一、实验步骤
1、实验分组和各组处理方式
雄性健康Sprague-Dawley(SD)大鼠(100-150g)由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供；湖南师范大学实验动物福利伦理委员会和动物管理委员会批准了本发明所有动物实验方案。适应性喂养大鼠一周后将其称重、编号和随机分组。
实验共设4组，每组10只大鼠：
(1)常氧组(21％O2)；
(2)低氧组(Hyp)：大鼠置于低氧舱(10％O2)中，4周成模；
(3)正常组：腹腔注射生理盐水；
(4)野百合碱组(Monocrotaline，MCT)，将MCT溶解于生理盐水中，腹腔注射，剂量为60mg/kg，3周成模。
以上大鼠在饲养期间其它所有饲养条件(饲料、饮水、温度、湿度、光照等)均保持一致。
2、血流动力学指标的检测
肺动脉高压大鼠造模后，1％戊巴比妥钠腹腔注射(50mg/kg)，将大鼠麻醉。固定在鼠板上，于颈部正中稍右部位切大约3cm的切口，用组织钳进行钝性分离，找到右颈静脉，用缝合线结扎远心端，近心端部分则用动脉夹夹住，弯镊提起颈静脉后用眼科剪在血管中部剪“V”型小口，将接有压力换能器的PE导管缓慢插入切口中，松开动脉夹，导管插入2-3cm左右可达到右心平，3.5-4cm左右即可达到右心室。调整插入的导管深度，直到出现稳定的心室波形，记录右心室收缩压(RVSP)，结果见图2(A和B)以及图3(A和B)。
3、组织样本收集及右心室重构指标检测
检测完RVSP后，采血，剪去心耳，用灭菌磷酸盐缓冲溶液(Phosphate buffersaline，PBS)经左右心室灌流，至心肺组织变白，依次分离取出心脏以及肺组织，将部分肺组织放于预冷的PBS中进行漂洗后放入冻存管中于液氮中保存，用于后续蛋白质的提取。用眼科剪和弯镊将右心室(RV)、左心室+室间隔(LV+S)分开，分别进行称重，计算RV/(LV+S)质量比。取右下肺将其放于4％多聚甲醛溶液中进行固定保存，固定保存后的组织用于后续血管形态学分析，结果见图2中的C图以及图3中的C图。
4、苏木素-伊红(HE)染色
用4％多聚甲醛溶液将肺组织样本固定24h，转移至0.02％的叠氮化钠溶液中继续固24h。按如下步骤进行HE染色。
(1)石蜡切片的制备
1)脱水：取出肺组织，用刀片修整组织块，进行相应编号后，依次如以下步骤进行脱水：固定液浸泡8-10h后，70％乙醇浸泡1h，80％乙醇1h，90％乙醇1h，95％乙醇1h，100％乙醇1h，最后置于异丁醇中过夜；之后正丁醇4h。将脱完水的肺组织浸入石蜡溶液中2h。
2)石蜡包埋：提前开机预热仪器至60℃，温度达到后将脱水的肺组织在石蜡溶液中用包埋框包埋，待石蜡液冷却后，取出蜡块放入4℃中保存。
3)切片：蜡块在石蜡切片机上切3μm的切片。
4)粘片：将切片于温水中铺平摊开，用多聚赖氨酸防脱载玻片将切片轻轻捞起，使其平铺于载玻片上，37℃烘烤24h，冷却后4℃保存备用。
(2)HE染色
1)脱蜡(通风橱中进行)：将切片放于烘箱中60℃烘烤2-3h，冷却至室温后进行脱蜡：二甲苯溶液浸泡30min后，进性梯度洗脱：100％乙醇溶液浸泡5min；100％乙醇溶液浸泡5min；95％乙醇溶液浸泡5min；70％乙醇溶液浸泡5min；PBS清洗5min，共3次。
2)用Mayer’s苏木素溶液染色15min；然后PBS冲洗5s，放进1％盐酸乙醇溶液30-60s，0.5％尹红乙醇溶液1～2min，75％乙醇溶液脱水30s，95％乙醇溶液脱水30s，100％乙醇溶液脱水2min，共2次。然后用电吹风吹干切片，滴加中性树胶后盖上盖玻片，轻轻压平，置于37℃烘箱中烘干，放于切片盒中保存。最后用Nikon显微镜进行拍照，观察血管重构状态。
HE的结果见图2中的D图以及图3中的D图。
5、Western Blot法
组织蛋白提取：取出冷冻的肺组织置于冰上，滤纸吸取多余的血水和冰水，用精密天平称取肺组织，用眼科剪剪碎后放入EP管中；每个EP管中加入RIPA裂解液300μL，小钢珠约3-4颗。研磨仪程序设定为60Hz，120s充分研磨。离心12000rpm，15min后轻轻吸取上清液，并另外吸取出约10μL的上清液，用于BCA检测。按蛋白样品：5×loading buffer＝4:1比例加入相应体积5×loading buffer，小心混匀。蛋白100℃加热变性10min，-80℃保存。
配胶。将配制好的SDS-PAGE胶放入电泳装置内，缓慢倒入电泳液，拔出梳子，将样品和蛋白marker上样于凝胶孔内。将电压调至80V，恒压跑胶，待到出现蛋白marker条带时，将电压调至120V。待样品跑至接近电泳底部时停止电泳。关闭电源，取出凝胶板。将PVDF膜裁好，按加样方向将膜切去一小角以示标记，提前用甲醇激活，连同转膜所需滤纸、海绵一并放入转膜液中。依次按厚海绵，厚滤纸，凝胶，PVDF膜，薄滤纸，薄海绵放置，准备转膜。将电流调至200mA，转膜2小时。转膜结束后，将PVDF膜在5％的脱脂牛奶中进行封闭，室温摇晃2h。封闭结束后，用PBST将PVDF膜上的封闭液清洗干净，裁剪所需要的目的条带。条带进行一抗4℃孵育过夜，PBST洗3次，每次5分钟。孵育二抗，2小时后，PBST洗3次，每次5分钟。最后加入等比例配好的显影液进行避光显影。用Image Lab软件对图像进行定量分析。
采用Western Blot检测UGDH蛋白表达，结果见图2(E和F)以及图3(E和F)。
二、实验结果
Hyp诱导和MCT诱导的肺动脉高压大鼠模型的构建结果如图2、3所示，结果表明模型构建成功。与常氧对照组相比，Hyp组大鼠RVSP显著升高(见图2中的A，B)，出现右心室肥厚(见图2中的C)，且肺组织HE结果显示，Hyp组肺血管明显增厚，管腔变窄(见图2中的D)。与Hyp组结果一致，与正常组相比，MCT组RVSP明显升高(见图3中的A，B)，右心指数显著上升(见图3中的C)，且肺血管也发生明显重构(见图3中的D)。结果表明，Hyp与MCT使大鼠RVSP增加，右心室肥厚，肺血管出现明显重构，成功构建肺动脉高压大鼠模型。除此之外，通过WB检测了Hyp诱导肺动脉高压大鼠模型和MCT诱导肺动脉高压大鼠模型肺组织中UGDH的蛋白水平；结果如图2(E、F)和图3(E、F)所示，两种方式构建的肺动脉高压大鼠模型中均出现UGDH蛋白水平显著上调。
在模型构建成功的前提下，进一步对肺动脉高压进行相关的代谢研究。
实施例3、肺动脉高压大鼠模型血浆中UGDH，D-GlcUA和LMW HA的含量检测
一、实验步骤
取实施例2中所述方法构建得Hyp诱导肺动脉高压大鼠模型和MCT诱导肺动脉高压大鼠模型的血浆样本，采用实施例1中“3、超滤离心法提取LMW HA”、“4、ELISA试剂盒检测UGDH和LMW HA的浓度”以及“5、UPLC-MS/MS法检测D-GlcUA浓度”项下的步骤检测UGDH，D-GlcUA和LMW HA的含量。
二、实验结果
结果如图4所示，Hyp组和MCT组大鼠血浆中UGDH，D-GlcUA和LMW HA含量显著增加。
实施例4、肺动脉高压大鼠模型肺组织中EndoMT指标的检测
一、实验步骤
取实施例2中所述方法构建得Hyp诱导肺动脉高压大鼠模型和MCT诱导肺动脉高压大鼠模型的肺组织样本，采用实施例2中“5、Western Blot法”项下的步骤检测EndoMT指标(VE-cadherin、N-Cadherin、α-SMA、Snail)的蛋白含量。
二、实验结果
如图5、6所示，Hyp组和MCT组大鼠的肺组织EndoMT指标显著上调。与各自对照组相比，Hyp组和MCT组大鼠肺组织内皮标记物VE-cadherin表达显著下降，间质化标记物N-Cadherin、α-SMA表达显著上升，且EndoMT转录因子Snail表达明显上调。
实施例5、重组慢病毒稳定转染获得UGDH敲低的人肺动脉内皮细胞
一、实验步骤
1、细胞培养与造模
本实验所用的是人肺动脉内皮细胞(HPAECs)。使用的培养基组成为：含1％双抗+20％FBS的F12培养基；培养条件为：37℃，5％ CO2。每天观察细胞的状态，2天左右传代一次，选用对数生长期的细胞进行后续实验。
调整细胞密度为2.0×105个/mL，2mL/孔接种到6孔板中，放到细胞培养箱中继续培养。待过夜，细胞贴壁后，TGF-β1(20ng/mL)处理HPAECs 24h，然后加入LMW HA (1μg/mL)孵育细胞48h，收样，进行后续检测。
2、慢病毒稳定转染(shRNA)
委托吉玛基因公司构建和纯化带有绿色荧光蛋白(GFP)标记的慢病毒(shRNAUGDH)和阴性对照慢病毒(shRNA NC)，所述shRNA的核苷酸序列为5'-CTCGCTTGGGCGAGAGTAA-3'(SEQ ID NO.3)。细胞种板24h后，细胞汇合度约为30％，弃去原来的培养基。六孔板用PBS洗三次，用完全培养基1:24稀释HitransG P感染增强液，加入病毒，配制成MOI＝10的慢病毒感染液，混匀。每孔加入1mL慢病毒感染液。感染72h后换成正常培养基，采用荧光拍照观察转染效率以及Western Blot检测是否成功沉默。
3、Western Blot法
细胞蛋白提取：弃去六孔板中旧有培养基，使用预冷的PBS每孔清洗三次。吸净孔内残余PBS后，每孔中央加入60μL裂解液，使之均匀铺满孔底，冰箱静置15min。静置完毕，用洁净的细胞刮刀刮擦破裂细胞，将裂解液转移入EP管，低温高速离心15min(4℃，12000rpm)。收集上清，以备后续蛋白浓度测定。按蛋白样品：5×loading buffer＝4:1比例加入相应体积5×loading buffer，小心混匀。蛋白100℃加热变性10min，-80℃保存。
配胶。将配制好的SDS-PAGE胶放入电泳装置内，缓慢倒入电泳液，拔出梳子，将样品和蛋白marker上样于凝胶孔内。将电压调至80V，恒压跑胶，待到出现蛋白marker条带时，将电压调至120V。待样品跑至接近电泳底部时停止电泳。关闭电源，取出凝胶板。将PVDF膜裁好，按加样方向将膜切去一小角以示标记，提前用甲醇激活，连同转膜所需滤纸、海绵一并放入转膜液中。依次按厚海绵，厚滤纸，凝胶，PVDF膜，薄滤纸，薄海绵放置，准备转膜。将电流调至200mA，转膜2小时。转膜结束后，将PVDF膜在5％的脱脂牛奶中进行封闭，室温摇晃2h。封闭结束后，用PBST将PVDF膜上的封闭液清洗干净，裁剪所需要的目的条带。条带进行一抗4℃孵育过夜，PBST洗3次，每次5分钟。孵育二抗，2小时后，PBST洗3次，每次5分钟。最后加入等比例配好的显影液进行避光显影。用Image Lab软件对图像进行定量分析。
采用Western Blot检测UGDH蛋白表达，结果见图7中的B图。
二、实验结果
图7的结果表明重组慢病毒稳定转染获得UGDH敲低的人肺动脉内皮细胞。
使用重组慢病毒稳转技术，获得UGDH敲低的人肺动脉内皮细胞，荧光结果显示，病毒转染率达到90％以上(见图7中的A)；WB结果显示，UGDH沉默组，UDGH蛋白表达显著低于NC组(图7中的B，C)，进一步证明敲低成功。
实施例6、TGF-β1刺激下UGDH shRNA稳转细胞中EndoMT指标的检测
一、实验步骤
1、Western Blot法
采用实施例5中“3、Western Blot法”项下的步骤检测EndoMT指标(VE-cadherin、N-Cadherin、α-SMA、Snail)的蛋白表达。结果见图8。
2、免疫荧光
(1)抗原修复：切片脱蜡后置于0.1mol/L PH6的枸橼酸修复液，微波炉中火加热至微沸，转用中低火维持。停止加热后自然冷却。PBS浸洗两次，2min/次。
(2)淬灭自发荧光：用组化笔圈住切片组织，圈内滴加自发荧光淬灭剂。5min后流水清洗。
(3)血清封闭：滴加封闭血清于圈中，封闭1h。
(4)抗体孵育：吸去封闭液，PBS清洗两次。在组织上滴加提前配制好的一抗，置湿盒中4℃孵育过夜。次日吸去一抗，PBS清洗三次，5min/次。擦净PBS，滴加荧光二抗，湿盒内避光孵育1h。
(5)细胞核染色：PBS清洗三次去除二抗，擦尽残余液体后滴加核染料DAPI，避光孵育15min。
(6)封片：PBS清洗两次，擦净。使用抗荧光淬灭封片剂封片，烘干后保存。
(7)镜检：切片置于荧光倒置显微镜下观察并拍照。
采用免疫荧光的步骤检测EndoMT指标(VE-cadherin、α-SMA)的荧光强度。结果见图9。
二、实验结果
如图8、9所示，沉默UGDH能显著改善TGF-β1诱导的肺动脉内皮细胞EndoMT。
使用TGF-β1处理肺动脉内皮细胞24小时，构建EndoMT模型。WB结果所示(图8)，TGF-β1刺激组内皮标记物VE-cadherin(见图8中的A，B)表达显著下降，间质化标记物N-Cadherin(见图8中的A，C)、α-SMA(见图8中的A，D)表达显著上升，且EndoMT转录因子Snail(见图8中的A，E)表达明显上调；同时，免疫荧光双染结果所示(图9)，TGF-β1刺激组VE-cadherin表达显著减少，α-SMA表达显著增加。WB与免疫荧光双染结果表明TGF-β1成功诱导肺动脉内皮细胞EndoMT，而沉默UGDH可以显著改善TGF-β1诱导的EndoMT(见图8，9)。
实施例7、TGF-β1刺激下UGDH shRNA稳转细胞中内皮细胞通透性的检测
一、实验步骤
1、Western Blot法
采用实施例5中“3、Western Blot法”项下的步骤检测ZO-2以及OCLN的蛋白表达。结果见图10。
2、免疫荧光
采用实施例6中“2、免疫荧光”项下的步骤检测ZO-2以及OCLN的荧光强度。结果见图11。
二、实验结果
如图10、11所示，沉默UGDH显著改善TGF-β1诱导的内皮细胞通透性增加。
TGF-β1成功诱导肺动脉内皮细胞EndoMT后，WB(图10)与免疫荧光双染(图11)结果显示内皮链接蛋白ZO-2和OCLN表达减少，内皮细胞通透性增加，而沉默UGDH可以显著改善TGF-β1诱导肺动脉内皮细胞EndoMT后导致的内皮细胞通透性增加。
实施例8、TGF-β1刺激下UGDH shRNA稳转细胞中LMW HA的含量检测
一、实验步骤
采用实施例1中“3、超滤离心法提取LMW HA”以及“4、ELISA试剂盒检测UGDH和LMWHA的浓度”项下的步骤检测LMW HA的含量。
二、实验步骤
结果如图12所示，沉默UGDH显著降低细胞上清LMW HA的含量。
TGF-β1成功诱导肺动脉内皮细胞EndoMT后，TGF-β1刺激组细胞上清LMW HA含量显著增加，而沉默UGDH可以显著降低TGF-β1刺激后细胞上清LMW HA的含量。
实施例9、LMW HA孵育下UGDH shRNA稳转细胞中EndoMT指标的检测
一、实验步骤
Western Blot法
采用实施例5中“3、Western Blot法”项下的步骤检测内皮间充质转化指标(VE-cadherin、N-Cadherin、α-SMA、Snail)的蛋白含量。结果见图13。
二、实验结果
如图13所示，LMW HA孵育能逆转UGDH对肺动脉内皮细胞EndoMT的作用。
WB结果表明，TGF-β1刺激组内皮标记物VE-cadherin(见图13中的A，B)表达显著下降，间质化标记物N-Cadherin(见图13中的A，C)、α-SMA(见图13中的A，E)表达显著上升，且EndoMT转录因子Snail(见图13中的A，D)表达明显上调，TGF-β1成功诱导肺动脉内皮细胞EndoMT，沉默UGDH可以显著改善TGF-β1诱导的EndoMT；而LMW HA孵育能逆转UGDH改善肺动脉内皮细胞EndoMT的作用。
综上，本发明涉及肺动脉高压标志物及治疗靶点的发现，该标志物与治疗靶点为糖酵解途径的关键限速酶UGDH以及重要的糖代谢物HA，本发明首次揭示了UGDH与肺动脉高压的相关性。
研究过程中分别采集了15例健康对照者和IPAH患者的血浆，所有15例健康对照者按照与IPAH患者年龄及性别相匹配。通过代谢组学研究，发现IPAH患者血浆UGDH，D-GlcUA和LMW HA含量显著增加。
其次，对大鼠进行MCT和Hyp造模，建立大鼠肺动脉高压模型。发现MCT组和Hyp组大鼠血浆UGDH，D-GlcUA和LMW HA含量显著增加；同时，肺组织UGDH蛋白显著增加，且肺组织EndoMT指标上调。
在细胞水平，TGF-β1成功诱导肺动脉内皮细胞EndoMT，且细胞上清LMW HA含量增加；沉默UGDH可以明显改善TGF-β1诱导的肺动脉内皮细胞EndoMT，显著降低细胞上清LMWHA的含量；而LMW HA孵育肺动脉内皮细胞可以逆转UGDH改善EndoMT的作用。以上结果说明UGDH通过调节LMW HA的生成，促进肺动脉内皮细胞EndoMT，破坏内皮细胞的完整性，参与肺血管重构，加重肺动脉高压病理进程。本发明为研究治疗肺动脉高压提供了标志物及可能的治疗靶点。
上面结合附图对本发明实施例作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

Claims (15)

1.生物标志物或检测所述生物标志物的试剂的应用，其特征在于，
所述生物标志物包括UDP-葡萄糖脱氢酶、D-葡萄糖醛酸和低分子量透明质酸中的至少一种；
所述应用包括i-vi中的至少一项：
i.在制备筛查肺动脉高压的产品中的应用；
ii.在制备评估肺动脉高压风险的产品中的应用；
iii.在制备诊断肺动脉高压的产品中的应用；
iv.在制备治疗肺动脉高压的产品中的应用；
v.在制备监测断肺动脉高压病程的产品中的应用；
vi.在制备分析肺动脉高压预后的产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述UDP-葡萄糖脱氢酶，是如下a)或b)或c)或d)的蛋白质：
a)氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的蛋白质；
b)氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；
c)将序列如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质；
d)与序列如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列具有75％或75％以上的同源性且具有相同功能的蛋白质。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，编码所述UDP-葡萄糖脱氢酶的核酸分子序列如SEQ ID NO.1所示。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述治疗肺动脉高压的产品包括：
降低UDP-葡萄糖脱氢酶、D-葡萄糖醛酸或低分子量透明质酸中的至少一种的表达量的产品；
和/或，抑制内皮间充质转化的产品；
和/或，降低内皮细胞通透性的产品。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂为用于检测所述生物标志物表达量的试剂；
优选地，所述试剂包括通过酶联免疫吸附试验、免疫荧光法、放射免疫测定法、免疫共沉淀法、免疫印迹法、高效液相色谱法、毛细管凝胶电泳法、近红外光谱法、质谱法、免疫化学发光法、胶体金免疫技术、荧光免疫层析技术、表面等离子共振技术、免疫-PCR技术或生物素-亲和素技术检测所述生物标志物表达量的试剂。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂检测的样本为血浆、血清、肺组织匀浆、细胞培养物上清中的至少一种。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，在受试者体内的UDP-葡萄糖脱氢酶、D-葡萄糖醛酸或低分子量透明质酸中的至少一种的表达量较正常对照组增加。
8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述生物标志物还包括心脏功能相关生物标志物、内皮细胞相关生物标志物、炎性反应相关标志物、代谢相关生物标志物、细胞外基质相关生物标志物中的至少一种。
9.一种药物、食品或试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～8中任一项所述的生物标志物，或其检测试剂、抑制剂；所述药物、食品或试剂盒至少包括i-vi中的一种用途：
i.在制备筛查肺动脉高压的产品中的应用；
ii.在制备评估肺动脉高压风险的产品中的应用；
iii.在制备诊断肺动脉高压的产品中的应用；
iv.在制备治疗肺动脉高压的产品中的应用；
v.在制备监测断肺动脉高压病程的产品中的应用；
vi.在制备分析肺动脉高压预后的产品中的应用。
10.根据权利要求9所述的药物、食品或试剂盒，其特征在于，所述用于治疗肺动脉高压的产品包括：
降低UDP-葡萄糖脱氢酶、D-葡萄糖醛酸或低分子量透明质酸中的至少一种的表达量的产品；
和/或，抑制内皮间充质转化的产品；
和/或，降低内皮细胞通透性的产品。
11.根据权利要求10所述的药物、食品或试剂盒，其特征在于，包括UDP-葡萄糖脱氢酶编码基因的shRNA；
优选地，所述shRNA的核苷酸序列为5'-CTCGCTTGGGCGAGAGTAA-3'。
12.一种药物、食品或试剂盒的应用，其特征在于，所述应用包括i-vi中的至少一项：
i.在制备筛查肺动脉高压的产品中的应用；
ii.在制备评估肺动脉高压风险的产品中的应用；
iii.在制备诊断肺动脉高压的产品中的应用；
iv.在制备治疗肺动脉高压的产品中的应用；
v.在制备监测断肺动脉高压病程的产品中的应用；
vi.在制备分析肺动脉高压预后的产品中的应用；
所述药物、食品或试剂盒包括权利要求1～8中任一项所述的生物标志物，或其检测试剂、抑制剂。
13.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述用于治疗肺动脉高压的产品包括：
降低UDP-葡萄糖脱氢酶、D-葡萄糖醛酸或低分子量透明质酸中的至少一种的表达量的产品；
和/或，抑制内皮间充质转化的产品；
和/或，降低内皮细胞通透性的产品。
14.根据权利要求13所述的应用，其特征在于，包括UDP-葡萄糖脱氢酶编码基因的shRNA；
优选地，所述shRNA的核苷酸序列为5'-CTCGCTTGGGCGAGAGTAA-3'。
15.一种筛选药物、食品或试剂盒的方法，其特征在于，通过检测受试者与对照组体内的UDP-葡萄糖脱氢酶、D-葡萄糖醛酸、低分子量透明质酸中的至少一种的表达量差异进行筛选。
CN202211355187.8A 2022-11-01 2022-11-01 肺动脉高压的生物标志物及其应用 Active CN116148471B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211355187.8A CN116148471B (zh) 2022-11-01 2022-11-01 肺动脉高压的生物标志物及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211355187.8A CN116148471B (zh) 2022-11-01 2022-11-01 肺动脉高压的生物标志物及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN116148471A true CN116148471A (zh) 2023-05-23
CN116148471B CN116148471B (zh) 2024-05-07

Family

ID=86358933

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211355187.8A Active CN116148471B (zh) 2022-11-01 2022-11-01 肺动脉高压的生物标志物及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116148471B (zh)

Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101232877A (zh) * 2005-04-21 2008-07-30 格伦·A·戈尔茨坦 治疗与氧化应激有关的疾病和病症的n-乙酰半胱氨酸酰胺（nac酰胺）
US20100099707A1 (en) * 2008-10-22 2010-04-22 Sam Amer & Co., Inc. Method for treating pulmonary arterial hypertension
CN101999002A (zh) * 2008-02-04 2011-03-30 彼帕科学公司 诊断和治疗parp-介导的疾病的方法
US20170088897A1 (en) * 2014-06-03 2017-03-30 Novartis Ag Pulmonary hypertension biomarker
CN106924739A (zh) * 2017-03-10 2017-07-07 上海交通大学医学院 Egfr抑制剂在制备治疗muc1阳性肿瘤药物中的应用
CN107569476A (zh) * 2017-09-13 2018-01-12 无锡市人民医院 含有乙酰紫草素的药物组合物及其在肺动脉高压药物中的应用
CN109266735A (zh) * 2018-06-15 2019-01-25 天津医科大学 Crth2作为肺动脉高压免疫治疗药物靶标及其应用
US20190192691A1 (en) * 2016-04-11 2019-06-27 Obsidian Therapeutics, Inc. Regulated biocircuit systems
CN111067895A (zh) * 2020-01-14 2020-04-28 广东医科大学 Ite在制备预防和/或治疗心肺循环系统疾病的药物中的应用
CN113209303A (zh) * 2021-05-18 2021-08-06 上海交通大学医学院 Wwp1通过溶酶体途径降解癌蛋白muc1抑制肿瘤及其应用
CN113712951A (zh) * 2021-08-05 2021-11-30 温州医科大学附属第二医院（温州医科大学附属育英儿童医院） 巨噬素1在制备治疗肺动脉高压的药物及其应用

Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101232877A (zh) * 2005-04-21 2008-07-30 格伦·A·戈尔茨坦 治疗与氧化应激有关的疾病和病症的n-乙酰半胱氨酸酰胺（nac酰胺）
CN101999002A (zh) * 2008-02-04 2011-03-30 彼帕科学公司 诊断和治疗parp-介导的疾病的方法
US20100099707A1 (en) * 2008-10-22 2010-04-22 Sam Amer & Co., Inc. Method for treating pulmonary arterial hypertension
US20170088897A1 (en) * 2014-06-03 2017-03-30 Novartis Ag Pulmonary hypertension biomarker
US20190192691A1 (en) * 2016-04-11 2019-06-27 Obsidian Therapeutics, Inc. Regulated biocircuit systems
CN106924739A (zh) * 2017-03-10 2017-07-07 上海交通大学医学院 Egfr抑制剂在制备治疗muc1阳性肿瘤药物中的应用
CN107569476A (zh) * 2017-09-13 2018-01-12 无锡市人民医院 含有乙酰紫草素的药物组合物及其在肺动脉高压药物中的应用
CN109266735A (zh) * 2018-06-15 2019-01-25 天津医科大学 Crth2作为肺动脉高压免疫治疗药物靶标及其应用
CN111067895A (zh) * 2020-01-14 2020-04-28 广东医科大学 Ite在制备预防和/或治疗心肺循环系统疾病的药物中的应用
CN113209303A (zh) * 2021-05-18 2021-08-06 上海交通大学医学院 Wwp1通过溶酶体途径降解癌蛋白muc1抑制肿瘤及其应用
CN113712951A (zh) * 2021-08-05 2021-11-30 温州医科大学附属第二医院（温州医科大学附属育英儿童医院） 巨噬素1在制备治疗肺动脉高压的药物及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WANG, X. ET AL.: "UDP-glucose accelerates SNAI1 mRNA decay and impairs lung cancer metastasis", NATURE, vol. 571, 31 December 2019 (2019-12-31) *
欧阳忠华: "基于质谱技术探讨血浆中糖醛酸途径代谢产物与肺动脉高压的相关性", CNKI硕士电子期刊, vol. 2024, no. 02, 15 February 2024 (2024-02-15) *

Also Published As

Publication number Publication date
CN116148471B (zh) 2024-05-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Zarjou et al. Dynamic signature of lymphangiogenesis during acute kidney injury and chronic kidney disease
CN113406326B (zh) 一种用于预测子痫前期的生物学标志物及其应用
WO2024017338A1 (zh) 用于rdaa阳性疾病的诊断和治疗的方法和试剂盒
WO2023231803A1 (zh) Cf48肾损伤生物标志物及在肾损伤治疗药物中的用途
Tang et al. Effect of interleukin-6 on myocardial regeneration in mice after cardiac injury
CN106620694A (zh) Cornulin作为靶点在制备防治银屑病的药物中的应用
CN102803968B (zh) 食道癌标志物
CN116148471B (zh) 肺动脉高压的生物标志物及其应用
CN108203734B (zh) Rhcg基因在制备治疗癌症药物及诊断性试剂盒中的应用
CN105560255A (zh) 黄柏内酯在制备治疗肺纤维化、慢性肺炎、慢性呼吸道疾病药物中的应用及其药物
CN112557664B (zh) Cryab在急性肾损伤检测中的应用及检测试剂盒
CN110694067A (zh) 一种抑制血管生成素样蛋白8的物质的应用
CN111214660B (zh) Pax4基因表达抑制剂在制备抑制纤维化的药物中的应用
KR102121410B1 (ko) 허혈성 질환의 예후 예측 방법
CN107648257A (zh) 氢气在用于制备治疗肾纤维化制剂中的用途
CN111647640A (zh) 一种快速精准实现慢性心力衰竭心功能病程分级的方法
CN114774547B (zh) 一种与人骨肉瘤相关的分子标记物usp13及其应用
CN113101368B (zh) Slc7a8在食管鳞癌辅助诊断、癌前预警和靶向治疗中的应用
WO2024017352A1 (zh) 用于rdaa阳性疾病的诊断和治疗的方法和试剂盒
WO2024017334A1 (zh) 用于rdaa阳性疾病的诊断和治疗的方法和试剂盒
CN117180402A (zh) Rarres1基因在制备治疗及诊断角质形成细胞异常增殖性疾病的产品中的应用
CN108333355B (zh) Klotho蛋白在制备诊断胃肠道间质瘤危险度的试剂中的用途
CN113663074A (zh) Cleaved caspase-3在胶质瘤放疗后再增殖及胶质瘤预后预测中的应用
CN116449024A (zh) Saa1作为生物标志物在预测或诊断急性肾损伤中的应用
WO2019237528A1 (zh) Ush1g基因在制备抗胃癌药物及其诊断试剂盒中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant