CN116139108A - 一种脂质递送系统及其所构成的类病毒结构疫苗 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种脂质递送系统及其所构成的类病毒结构疫苗，提供了一种能够包裹SARS‑CoV‑2病毒特异抗原编码mRNA分子的脂质颗粒，该脂质颗粒包裹编码SARS‑CoV‑2病毒抗原的mRNA分子后，在特定的缓冲液条件下，可使SARS‑CoV‑2病毒S1抗原蛋白嵌入该脂质的囊膜结构表面，形成具有内部包裹编码抗原的mRNA分子、外膜呈现所需病毒抗原蛋白能力的类病毒结构的疫苗，该疫苗具有优于SARS‑CoV‑2病毒mRNA疫苗及多肽疫苗的特异性抗体诱导能力，并能维持更长高抗体水平，还能够对已经出现的不同变异株表现较好的免疫结合能力。

Description

一种脂质递送系统及其所构成的类病毒结构疫苗
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体的说，涉及一种脂质纳米颗粒、脂质递送系统及类病毒结构疫苗。
背景技术
在针对新近出现的新型冠状病毒（SARS-CoV-2）感染疾病所进行的疫苗开发中，一种新的、以特定脂质纳米递送系统（lipid nanoparticle, LNP）为载体的mRNA疫苗的应用成功，提示了脂质分子在特定物理化学条件下形成的囊状结构，具有能和细胞膜脂质结构相融合的特性，这因此提供了可使编码抗原的mRNA分子直接递送进入细胞并翻译为抗原蛋白的可能。这一技术的突破不仅在针对SARS-CoV-2病毒的疫苗研发中提供了一个新的思路，同时亦为其他形式的新SARS-CoV-2疫苗形式研究奠定了技术基础。
以脂质纳米颗粒（LNP）模式递送mRNA分子的过程，与SARS-CoV-2病毒自然感染细胞的过程有一定的相似性，二者的主要的差异在于SARS-CoV-2病毒通常以其包膜表面的特异性膜蛋白（spike protein, S蛋白）为介导，通过该蛋白与呼吸道细胞膜上特异蛋白受体（ACE2受体）的结合而使病毒的包膜与细胞膜接近并导致两种脂膜相互融合，从而使病毒基因（负链RNA）进入细胞而开始其感染过程。
目前基于脂质纳米颗粒的mRNA疫苗种类较多，但获得一种更优的，抗体维持时间更长的疫苗仍具有积极意义。
发明内容
针对不同包膜病毒的结构生物学研究亦表明，病毒在细胞内编码产生的糖蛋白，通常在合适的PH环境下，经内质体外泌至细胞膜上，在病毒核衣壳颗粒出膜时包裹上带有病毒外膜蛋白的细胞脂膜，最终形成完整的病毒颗粒。
本发明依据SARS-CoV-2病毒的结构生物学特性，以及mRNA递送系统的脂质颗粒的物理化学特征，设计研制了一种能够包裹SARS-CoV-2病毒特异抗原编码mRNA分子的脂质颗粒，利用国产的阳离子脂质分子((2-(2-羟基乙氧基)乙基)氮杂二烷基)双(己烷-6,1-二基)双(2-己基癸酸酯)和国产的PEG-脂质分子甲氧基聚乙二醇-N-十四烷基十四酰胺，与商品化的阳离子脂质DOTAP及磷脂分子DOPC依据特定配比，并在特定的缓冲液条件下制备出脂质颗粒，在该脂质颗粒包裹编码SARS-CoV-2病毒抗原的mRNA分子后，在特定的缓冲液条件下，可使SARS-CoV-2病毒S1抗原蛋白嵌入该脂质的囊膜结构表面，形成具有内部包裹编码抗原的mRNA分子、外膜呈现所需病毒抗原蛋白能力的类病毒结构的疫苗。分子生物学分析及其免疫学分析表明，该基于脂质纳米递送系统的类病毒结构疫苗具有优于SARS-CoV-2病毒mRNA疫苗及多肽疫苗的特异性抗体诱导能力，并能维持更长时间高抗体水平，该抗体还能够对已经出现的不同变异株表现较好的免疫结合能力。
为实现上述目的，本发明提供了一种基于脂质纳米结构颗粒、及包含该脂质纳米颗粒的递送系统，以及被该脂质包裹的mRNA分子及其脂膜表面结合有蛋白抗原分子的类病毒结构VLS疫苗的制备方法。
所述的脂质纳米颗粒包括：
阳离子脂质：((2-(2-羟基乙氧基)乙基)氮杂二烷基)双(己烷-6,1-二基)双(2-己基癸酸酯)（简称DHA-1）；
阳离子脂质：（2,3-二油酰基-丙基）-三甲基铵-氯盐（简称DOTAP）；
中性磷脂分子：1,2-二油酰基-SN-甘油-3-磷酸胆碱（简称DOPC）；
PEG化脂质分子：甲氧基聚乙二醇-N-十四烷基十四酰胺（简称mPEG-DTA-1-2K）。
其中，DHA-1和mPEG-DTA-1-2K为国产产品，生产厂家均为厦门赛诺邦格生物科技股份有限公司。
进一步的，DHA-1、DOTAP、DOPC和mPEG-DTA-1-2K的摩尔比为10-13：27-29：56-59：1.6-1.9。
所述的递送系统，包含上述的脂质纳米颗粒。
进一步的，所述递送系统的pH值为4.8-5.0。
进一步的，所述递送系统使用缓冲溶液，所述缓冲溶液含NaAc 10 mM、KCL 2.5 mM和 0.0001 % (w/v) 海藻糖。
所述的脂质系统在递送作为一种类病毒结构（VLS）疫苗的、包裹有mRNA分子，并在脂质颗粒表面结合有蛋白分子过程中的应用。
所述的类病毒结构疫苗，包括mRNA和上述的递送系统。
进一步的，所述的类病毒结构疫苗，递送脂质颗粒包裹mRNA，且在脂质颗粒表面结合有蛋白分子。
进一步的，所述的类病毒结构疫苗，包裹的mRNA为Omicron XBB.1株病毒编码S1蛋白基因，递送脂质颗粒表面结合的蛋白分子为Omicron BA.1株病毒编码并表达于CHO细胞的纯化的S1抗原。
所述的类病毒结构（VLS）疫苗的制备方法，包括以下步骤：
（1）将((2-(2-羟基乙氧基)乙基)氮杂二烷基)双(己烷-6,1-二基)双(2-己基癸酸酯)、（2,3-二油酰基-丙基）-三甲基铵-氯盐、DOPC和甲氧基聚乙二醇-N-十四烷基十四酰胺以10-13：27-29：56-59：1.6-1.9的摩尔比混合于无水乙醇中；同时用含NaAc 10mM，KCL2.5mM和海藻糖为0.0001%(w/v)的缓冲液稀释mRNA。
（2）用微流控技术包裹mRNA分子，形成脂质微球体系。
（3）以30倍体积的含NaAc 10 mM， KCL 2.5 mM和海藻糖为0.0001%(w/v)的缓冲液缓冲稀释步骤（2）的脂质微球体系，经100 Kda超滤膜超滤浓缩，得到氮磷摩尔比为4-6：1的包裹有mRNA分子的脂质体系。
（4）将所制备的包裹有mRNA分子的脂质体系，以500mM HAC调整溶液PH为4.8-5.0，，加入KCL至KCL的终浓度为2.5mM。
（5）将CHO细胞表达并纯化的S1抗原蛋白，配制于含有NaAc10mM, KCL2.5 mM,NaCl5mM和海藻糖为0.0001%(w/v)，PH为4.8-5.0的缓冲液中，，得到类病毒结构疫苗的蛋白制备液。
（6）将步骤（4）制备的体系与步骤（5）的蛋白体系混合，轻微振摇混合后，于40C旋转混合过夜，得到含有类病毒结构颗粒的体系，即类病毒结构（VLS）疫苗原液，根据剂量设定要求（具体为：mRNA/protein: 200-250ug/50-60ug）以含有NaAc10 mM, KCL2.5 mM,NaCl 5 mM和海藻糖为0.0001%(w/v)的缓冲液稀释至相应体积（具体体积根据生产批次的规模决定）。此为类病毒结构（VLS）疫苗使用液。
本发明的有益效果：
本发明的脂质纳米颗粒，能够包裹SARS-CoV-2病毒特异抗原编码mRNA分子(Omicron XBB.1株病毒编码S1蛋白基因)；并在包裹mRNA分子后，于特定的缓冲液条件下，可使SARS-CoV-2病毒S1抗原蛋白（Omicron BA.1株的S1蛋白）嵌入该脂质的囊膜结构表面，形成具有内部包裹编码抗原的mRNA分子、外膜呈现所需病毒抗原蛋白的类病毒结构（VLS）的疫苗；该疫苗具有优于SARS-CoV-2病毒mRNA疫苗及多肽疫苗的特异性抗体诱导能力，并能维持较长时间高抗体水平，形成的抗体还能够对已经出现的不同变异株表现较好的免疫结合能力，且具有较好的安全性。
此外，本发明所使用的((2-(2-羟基乙氧基)乙基)氮杂二烷基)双(己烷-6,1-二基)双(2-己基癸酸酯)阳离子脂质和PEG化脂质分子为国产化产品。
附图说明
图1是本发明的实施例1的VLS体系中的类病毒颗粒电镜对比图；
图2是本本发明的实施例1的VLS包裹抗原蛋白的Q-RT-PCR检测结果；
图3是本发明的实施例1的VLS体系包裹抗原蛋白的PAGE-银染结果；
图4是本发明的实施例1的VLS体系包裹抗原蛋白的WB检测结果；
图5是本发明的实施例1的VLS体系对细胞转染能力对比；
图6是本发明的实施例1的不同疫苗体系的免疫学特性对比；
图7是本发明的实施例1的不同疫苗体系在小鼠不同组织中病毒载量对比；
图8是本发明的实施例1免疫VLS实验性疫苗在组织器官中的分布；
图9 是本发明的实施例1VLS结构实验性疫苗注射动物后的局部组织的病理学变化；
备注：图1的A图为本发明的包裹有mRNA分子并在颗粒表面结合有抗原蛋白分子的VLS体系颗粒，B图为未装载蛋白，仅包裹mRNA分子的脂质颗粒；C图为未包裹mRNA分子亦未装载抗原蛋白的脂质颗粒空壳结构；
图3和图4中，M为marker，1为对照洗液（control），2为mRNA洗液（mRNA），3为VLS洗液（Sample），4为对照穿流液（control-supernate），5为mRNA穿流液（mRNA-supernate）；
图5中，左侧为包裹有编码EGFP蛋白mRNA分子，并在脂质颗粒表面结合有S1抗原蛋白的VLS转染所表达的免疫荧光对照，右侧为包裹有编码S1蛋白mRNA分子，并在脂质颗粒表面结合有S1抗原蛋白的VLS转染所表达的S抗原免疫印迹检测，其中M为marker；
图6中，上图为不同疫苗体系所产生的抗体效价对比，下图为不同疫苗体系所产生的中和抗体数量对比；
图9中，箭头为炎性细胞聚集处，标尺为100μm。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的说明，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例。基于本发明的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下多获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。
实施例1
一种脂质纳米颗粒，该纳米脂质颗粒包括四种成分，分别为：
国产化阳离子脂质((2-(2-羟基乙氧基)乙基)氮杂二烷基)双(己烷-6,1-二基)双(2-己基癸酸酯)（DHA-1），((2-(2-hydroxyethoxy)ethyl)azanediyl)bis(hexane-6,1-diyl) bis(2-hexyldecanoate)。
阳离子脂质：（2,3-二油酰基-丙基）-三甲基铵-氯盐（DOTAP）。
中性磷脂分子：1,2-二油酰基-SN-甘油-3-磷酸胆碱（DOPC）（1，2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine）。
国产化PEG化脂质分子：甲氧基聚乙二醇-N-十四烷基十四酰胺 （mPEG-DTA-1-2K）（Methoxypoly(ethylene glycol)-N-tetradecyltetradecanamide-2K）。
其中，DHA-1、DOTAP、DOPC与mPEG-DTA-1-2K的摩尔比为10-13：27-29：56-59：1.6-1.9。
实施例2
一种脂质递送系统及mRNA疫苗的制备方法
（1）将实施例1所述的DHA-1、DOTAP、DOPC与mPEG-DTA-1-2K以10-13：27-29：56-59：1.6-1.9的摩尔比混合于无水乙醇中；同时用含NaAc 10 mM，KCL2.5 mM和海藻糖为0.0001%(w/v)的缓冲液稀释mRNA。
（2）用微流控设备(NanoAssemblr
Figure SMS_1
IgniteTM Model)，以如下参数完成脂质微球体系的制备，具体为：FRR：1：3； TFR: 20ml/min； waste vol: 0.65 + 0.05 ml。
（3）将步骤（2）制备的已包裹mRNA分子的脂质微球体系，以30倍体积的含NaAc 10mM,KCL 2.5 mM 和海藻糖为0.0001%(w/v)的缓冲液缓冲稀释，经100 Kda超滤膜超滤浓缩，得到氮磷摩尔比为4-6：1的包裹有mRNA分子的脂质体系，即类病毒结构（VLS）疫苗包裹了mRNA分子的制备液。
（4）将所制备的包裹有mRNA分子的脂质体系，以500 mM HAC调整溶液PH为4.8-5.0，加入KCL至终浓度2.5mM， NaCl终浓度为 5mM。
（5）将表达于CHO细胞并经纯化的SARS-CoV-2病毒Omicron BA.1株的S1蛋白配制于含有NaAc10mM, KCL2.5 mM, NaCl2.5mM和海藻糖为0.0001%(w/v)，PH为4.8-5.0的缓冲液中，得到类病毒结构（VLS）疫苗的蛋白制备液。
（6）将步骤（4）制备的mRNA体系与步骤（5）的蛋白体系混合，室温轻微振摇混合30分钟，置于4°C旋转混合过夜，得到含有类病毒结构颗粒体系（简称VLS体系，VLS为virus-like-structure的简称），即类病毒结构疫苗原液。
实施例3
用上述方法将DHA-1、DOTAP、DOPC与mPEG-DTA-1-2K以10：27：59：1.6的摩尔比制备类病毒结构疫苗原液。
VLS体系的特性分析：
以往针对mRNA疫苗的LNP体系的分析主要包括了脂质纳米颗粒的多项物理化学参数，如粒径、表面电位和聚合物分散系数等。VLS体系亦以脂质颗粒为主要的载体，因此该载体在同时包裹/嵌入mRNA/蛋白分子的情况下，其物理化学特性呈现出相应的特征。脂质载体在不包裹mRNA分子，亦未嵌入蛋白的情况下，其粒径约为50-60nm (表1)。在经如实施例2所述的微流控技术过程包裹mRNA分子后，其粒径约为70-100nm之间，而在加载蛋白抗原后，其粒径上升至100-110nm之间。同时，表面电位亦有相应的改变，但变化范围仅在40-25mv之内，并随包裹mRNA和承载蛋白后呈下降趋势。对该脂质体系包裹mRNA分子的包封率检测，包封率为92-95%（如表1）。
表1 VLS体系的理化特征分析
Figure SMS_2
；
对于具有包膜的病毒所做的结构生物学观察资料表明，这一类病毒通常表现为相同的脂膜包裹了含有病毒基因DNA/RNA链的核衣壳结构，同时脂膜上通常存在有病毒的表面糖蛋白。本发明的VLS体系所呈现的，即为包裹mRNA分子的脂膜上嵌入相应抗原蛋白，这一特征首先表现在其结构的特殊性。通过电镜技术观察发现，本发明的VLS体系中，类病毒结构颗粒呈球状，表面具有冠状突起，明显有别于未装载蛋白、仅包裹mRNA分子和未包裹mRNA分子且未装载抗原蛋白的空壳结构（附图1）。
VLS体系包裹并装载抗原蛋白的特征验证：
为确证VLS体系包裹并装载抗原蛋白的特征，使用免疫共沉淀方法，以抗S抗原蛋白的特异性抗体结合VLS结构颗粒，再以吸附有金黄色葡萄球菌蛋白A的磁珠结合抗体，经孵育结合、洗涤，获得沉淀纯化的VLS，对纯化的VLS进行电泳银染检测（检测结果如附图3），以及转膜的WB分析，并对该抗S蛋白的特异性抗体捕获的VLS做针对S基因的特异性q-RT-PCR检测。结果表明：抗S蛋白的抗体所特异性捕获的VLS结构颗粒可在对该脂质颗粒包裹的S基因的q-RT-PCR检测证明了该颗粒包含有mRNA分子（附图2）。WB结果亦提示该颗粒中具有S抗原蛋白的存在（附图4）。这些结果不仅从形态上，亦从颗粒成分的组成上证明了该脂质颗粒做为一种包含mRNA分子和脂膜表面嵌入抗原蛋白的VLS结构。具体检测方法如下：将较高抗S1抗体滴度（GMT>1024000）的小鼠抗体加入制备好的VLS体系实验性疫苗、mRNA疫苗和空白递送体系中（1：100的体积比，其中小鼠抗体的体积为1）混合，4°C孵育过夜，然后每个样品中加入50ul经缓冲液（Tris-HCL:10mM; NaCl:20mM; KCl；2.5mM; NP-40:0.1%）处理的苏州海狸ProteinA/G磁珠，室温孵育30min；利用磁极吸附磁珠，洗涤缓冲液洗涤（Tris-HCL:10mM; NaCl:50mM; KCl；2.5mM; NP-40:0.1%）2-3次后进行洗脱。将磁珠分离后的溶液和洗脱后的溶液进行q-RT-PCR、检测S1 mRNA拷贝数及Western Blot和SDS-PAGE银染进行S1蛋白的定性检测。
VLS体系的转染能力及与细胞ACE2受体结合能力验证：
基于VLS结构的主要递送能力是基于具有细胞融合能力的脂质体，对VLS体系实验性疫苗的转染能力及与细胞ACE2受体结合能力验证，结果表明，以常规检测脂质体（商品化的lipofectine试剂）转染效果的293细胞， VLS体系实验性疫苗可以产生很好的转染效果（附图5）。同时，对通常脂质体转染效率较差的16HBE细胞，树突状细胞，VLS体系由于具有能够和这些细胞表面的ACE2受体的结合能力，故能表现较高的转染效率，其转染效率高于通常使用的lipofectine(附图5)。这不仅表现在使用荧光蛋白编码mRNA，亦表现在使用S1基因转染后以抗-S抗原的特异性抗体的WB检测结果上（附图5右图）。
VLS体系实验性疫苗的免疫学特性：
对VLS体系实验性疫苗的免疫学有效性使用Balb/c小鼠和ACE转基因小鼠进行:按照0天和21天的免疫模式通过肌肉注射的方式进行免疫Balb/C小鼠，初次免疫后的第21天和加强免疫后的第14天和28天，尾静脉采血分离血清，进行结合抗体和中和抗体的检测；加强免疫后的第28天，取脾脏分离小鼠淋巴细胞进行ELISPOT检测细胞免疫反应。
结合抗体：使用抗WT株、Beta株、Delta株、Omicron株的Elisa试剂盒平行检测。
中和抗体：使用抗WT株、Beta株、Delta株、Omicron株的假病毒中和抗体检测体系，以及真病毒Omicron株病毒用Vero细胞体系检测中和抗体。
结果表明：VLS体系实验性疫苗与同剂量的mRNA疫苗及多肽疫苗比较，在同样的免疫程序后（0，21天），呈现具有明显优势的结合抗体和中和抗体（附图6），且该抗体维持时间亦较mRNA疫苗及多肽疫苗有明显的延长。二免后三个月，在mRNA和多肽疫苗所诱导的抗体已大幅下降的情况下，本发明的VLS体系实验性疫苗所诱导产生的结合抗体仍然维持在106 -7以上效价（附图6），中和抗体在103左右（附图6）。更为重要的是，以VLS体系实验性疫苗免疫的ACE+/+小鼠在Omicron毒株攻击情况下，完全避免了病毒在其体内的增殖性感染（附图7），而mRNA疫苗和多肽疫苗尽管表现了对动物的保护性效果，但组织和器官的病毒载量检测提示，这些小鼠并未完全阻断病毒在体内的增殖性感染（附图7）。
上述实验结果证实了SARS-CoV-2 VLS体系实验性疫苗临床前分析和在动物实验中优于SARS-CoV-2的mRNA疫苗及多肽疫苗的免疫学效果。
VLS体系实验性疫苗的安全性观察：
作为完全使用国产脂质产品及自主配方的纳米递送系统，以及利用该递送系统构建的体系所制备的VLS体系实验性疫苗，在其免疫有效性的基础上，对其安全性评价是非常重要的。基于脂质递送系统的特点，在下述几个方面观察了该VLS体系实验性疫苗体系的安全性。
基于该VLS结构的囊膜表面嵌入装配了SARS-CoV-2病毒的S蛋白，其可以结合不同组织中具有ACE2受体细胞的背景，因此，利用具有ACE2受体的转基因小鼠，观察了包含有荧光蛋白基因mRNA以及脂膜表面嵌入了S1蛋白的VLS体系实验性疫苗免疫后在体内主要器官和组织中的分布。
结果表明，荧光蛋白主要表达于注射局部和周围的淋巴结组织中，在主要器官如心脏、肝脏、肺脏、肾脏、大脑和脊柱中均未见到荧光的出现（附图8，表2）。同时，使用包含有设计的S1基因mRNA以及脂膜表面嵌入了S1蛋白的VLS体系实验性疫苗免疫ACE2+/+小鼠后，对相关器官和组织的特异性q-RT-PCR检测结果也证明了这一点（表2）。
表2 免疫VLS实验性疫苗在组织器官中的分布
Figure SMS_3
；
根据目前已经使用的mRNA疫苗的临床观察表明，脂质递送系统导致的副反应通常为局部组织的炎性反应。因此，观察了VLS体系实验性疫苗注射后，动物体内的局部组织的组织病理学变化，尤其是局部的炎性反应。结果表明，该VLS体系实验性疫苗引起的轻度炎性反应和炎细胞的集聚程度与现行使用的mRNA疫苗相似（附图8）。
上述安全性观察结果表明，VLS体系实验性疫苗在目前的动物实验中是安全可靠的。
最后说明的是，以上优选实施例仅用于说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种脂质纳米颗粒，其特征在于，包括((2-(2-羟基乙氧基)乙基)氮杂二烷基)双(己烷-6,1-二基)双(2-己基癸酸酯)、（2,3-二油酰基-丙基）-三甲基铵-氯盐、DOPC和甲氧基聚乙二醇-N-十四烷基十四酰胺。
2.根据权利要求1所述的脂质纳米颗粒，其特征在于，((2-(2-羟基乙氧基)乙基)氮杂二烷基)双(己烷-6,1-二基)双(2-己基癸酸酯)、（2,3-二油酰基-丙基）-三甲基铵-氯盐、DOPC和甲氧基聚乙二醇-N-十四烷基十四酰胺的摩尔比为10-13: 27-29:56-59:1.6-1.9。
3.一种脂质递送系统，其特征在于，使用如权利要求1或2所述的脂质纳米颗粒。
4.如权利要求3所述的递送系统，其特征在于，所述递送系统使用缓冲溶液，所述缓冲溶液含NaAc 10mM，KCL 2.5mM和0.0001% (w/v)海藻糖。
5.如权利要求3或4所述的递送系统，其特征在于，所述递送系统的pH值为4.8-5.0。
6.一种类病毒结构疫苗，其特征在于，包括mRNA和如权利要求3至5任一项所述的递送系统。
7.如权利要求6所述的类病毒结构疫苗，其特征在于，递送脂质颗粒包裹mRNA，且在脂质颗粒表面结合有蛋白分子。
8.如权利要求7所述的类病毒结构疫苗，其特征在于，递送脂质颗粒包裹的mRNA为Omicron XBB.1株病毒编码S1蛋白基因，递送脂质颗粒表面结合的病毒蛋白为OmicronBA.1株病毒编码并表达于CHO细胞的纯化的S1抗原。
9.如权利要求6至8任一项所述的类病毒结构疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将((2-(2-羟基乙氧基)乙基)氮杂二烷基)双(己烷-6,1-二基)双(2-己基癸酸酯)、（2,3-二油酰基-丙基）-三甲基铵-氯盐、DOPC和甲氧基聚乙二醇-N-十四烷基十四酰胺以10-13：27-29：56-59：1.6-1.9的摩尔比混合于无水乙醇中；同时用含NaAc 10 mM，KCL2.5mM和海藻糖为0.0001%(w/v)的缓冲液稀释mRNA；
（2）用微流控技术包裹mRNA，形成脂质微球体系；
（3）将步骤（2）的脂质微球体系，以30倍体积的含NaAc 10mM, KCL 2.5mM和海藻糖为0.0001%(w/v)的缓冲液缓冲稀释，经100 Kda超滤膜超滤浓缩，得到氮磷摩尔比为4-6：1的包裹有mRNA分子的脂质体系；
（4）将包裹有mRNA分子的脂质体系，以500mM HAC调整溶液PH为4.8-5.0，加入KCL至终浓度2.5mM；
（5）将CHO细胞表达并纯化的S1抗原蛋白，配制于含有NaAc10mM,KCL2.5 mM,NaCl 5mM，海藻糖为0.0001%(w/v)，PH为4.8-5.0的缓冲液中，得到类病毒结构疫苗的蛋白制备液；
（6）将步骤（4）制备的体系与步骤（5）的体系混合，振摇混合后，于4℃旋转混合过夜，得到类病毒结构疫苗原液。
10.如权利要求6至8任一项所述的疫苗在制备预防新型冠状病毒及其变异株感染药物中的应用。
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Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112641935A (zh) * 2020-10-15 2021-04-13 百葵锐(天津)生物科技有限公司 一种含颗粒载体的亚单位疫苗及其应用
CN113402405A (zh) * 2021-04-08 2021-09-17 厦门赛诺邦格生物科技股份有限公司 一种阳离子脂质、含该阳离子脂质的脂质体、含该脂质体的核酸药物组合物及其制剂和应用
WO2022101469A1 (en) * 2020-11-16 2022-05-19 BioNTech SE Compositions and methods for stabilization of lipid nanoparticle mrna vaccines
CN114617980A (zh) * 2022-03-09 2022-06-14 广州国家实验室 可电离脂质纳米颗粒及其应用
CN114729373A (zh) * 2022-01-27 2022-07-08 深圳市瑞吉生物科技有限公司 一种新型冠状病毒mRNA疫苗及其制备方法与应用
WO2023283412A1 (en) * 2021-07-09 2023-01-12 Atossa Therapeutics, Inc. Compositions and methods to increase coronavirus immune response
CN115590836A (zh) * 2022-09-27 2023-01-13 浙江大学（Cn） 一种提高mRNA疫苗诱导免疫应答能力的脂质纳米颗粒及其应用
WO2023043933A1 (en) * 2021-09-15 2023-03-23 Verndari, Inc. Stabilized lipid nanoparticle mrna compositions and uses thereof
CN115843330A (zh) * 2020-04-22 2023-03-24 辉瑞公司 冠状病毒疫苗

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021142336A1 (en) * 2020-01-08 2021-07-15 Puretech Lyt, Inc. Vesicle compositions for oral delivery

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115843330A (zh) * 2020-04-22 2023-03-24 辉瑞公司 冠状病毒疫苗
CN112641935A (zh) * 2020-10-15 2021-04-13 百葵锐(天津)生物科技有限公司 一种含颗粒载体的亚单位疫苗及其应用
WO2022101469A1 (en) * 2020-11-16 2022-05-19 BioNTech SE Compositions and methods for stabilization of lipid nanoparticle mrna vaccines
CN113402405A (zh) * 2021-04-08 2021-09-17 厦门赛诺邦格生物科技股份有限公司 一种阳离子脂质、含该阳离子脂质的脂质体、含该脂质体的核酸药物组合物及其制剂和应用
CN115197079A (zh) * 2021-04-08 2022-10-18 厦门赛诺邦格生物科技股份有限公司 一种聚乙二醇化脂质及其修饰的脂质体、含该脂质体的药物组合物及其制剂和应用
WO2023283412A1 (en) * 2021-07-09 2023-01-12 Atossa Therapeutics, Inc. Compositions and methods to increase coronavirus immune response
WO2023043933A1 (en) * 2021-09-15 2023-03-23 Verndari, Inc. Stabilized lipid nanoparticle mrna compositions and uses thereof
CN114729373A (zh) * 2022-01-27 2022-07-08 深圳市瑞吉生物科技有限公司 一种新型冠状病毒mRNA疫苗及其制备方法与应用
CN114617980A (zh) * 2022-03-09 2022-06-14 广州国家实验室 可电离脂质纳米颗粒及其应用
CN115590836A (zh) * 2022-09-27 2023-01-13 浙江大学（Cn） 一种提高mRNA疫苗诱导免疫应答能力的脂质纳米颗粒及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YONG-QIANG DENG ET AL.: "Lipid nanoparticle-encapsulated mRNA antibody provides long-term protection against SARS-CoV-2 in mice and hamsters", CELL RESEARCH, vol. 32, no. 4, pages 375 - 382, XP037789509, DOI: 10.1038/s41422-022-00630-0 *
张秀奇: "PEG-脂质ALC-0159在大鼠体内的药代动力学研究", 中国优秀硕士学位论文全文数据库 (医药卫生科技辑), pages 079 - 376 *

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